雷帕霉素与环孢素a纳米口服微乳液制备方法
【专利摘要】本发明雷帕霉素与环孢素A纳米口服微乳液制备方法,具体步骤如下：步骤1.将表面活性剂与助表面活性剂按照质量比1-3:1-2混合均匀，混合均匀后与生物相容性的油、去离子水按照质量百分比为：29-35：24-29：35-39混合，轻轻摇晃即可制备得到直径为30纳米的水包油微乳液体系；步骤2.将克雷帕霉素或环孢素A或雷帕霉素+环孢素A固体溶解在步骤1制备得到的水包油微乳液体系中，在室温或37度温度下，以200-800转/分的转速下匀速混合2-24小时。本发明采用微乳液方法制备免疫抑制剂雷帕霉素、环孢素A及雷帕霉素与环孢素A组合纳米口服溶液，是新型纳米药物体系，具有高增溶能力、热力学稳定的优点。
【专利说明】雷帕霉素与环孢素A纳米口服微乳液制备方法【技术领域】
[0001]本发明属于免疫抑制剂纳米口服药物制备研究领域，特别涉及一种微乳液方法制备雷帕霉素、环孢素A、雷帕霉素+环孢素A组合纳米口服溶液的方法。
【背景技术】
[0002]雷帕霉素(Rapamycin)，是新型大环内酯的抗排斥药物，在生物体内的主要靶标蛋白是mTOR，是目前世界上最新的强效免疫抑制剂，临床上用于器官移植的抗排斥反应和治疗类风湿性关节炎、红斑狼疮等自身免疫性疾病的治疗。可能通过阻断IL-2启动的T细胞增殖而选择性抑制T细胞，用于抗移植排斥反应。通过与相应免疫嗜素RMBP结合抑制细胞周期GO期和Gl期，阻断Gl进入S期而发挥作用，其效应为:①抑制T和B细胞增殖；②抑制IL-l、IL-2、IL-6和IFN-Y诱导的淋巴细胞增殖；③抑制IgG和供者特异性抗体(细胞毒抗体)产生抑制单核细胞增殖。环孢素A由11个氨基酸组成的环状多肽组成，是一种选择性作用于T淋巴细胞的强效免疫抑制剂。通过与细胞内免疫嗜素亲环蛋白结合，抑制辅助性T细胞活化及对IL-2的反应性，主要用于预防移植术后的移植物抗宿主(GVH)反应，或治疗多种自身免疫病。临床上主要用于肝、肾以及心脏移植的抗排异反应，也可与肾上腺皮质激素同用，治疗免疫性疾病。雷帕霉素还具有抗肿瘤的作用，它通过与细胞内特异性亲和蛋白FKBP-12结合形成RAP-FKBP-12复合物并与其靶蛋白mTOR的FRB域结合，抑制mTOR的蛋 白激酶催化活性，使之对下游效应分子p70S6K、4EBPl/eIF4E等磷酸化的调节作用减弱或消失，阻断氨基酸等营养因子和多种生长因子转导的信号下传作用，从而抑制了翻译的开始；Rapamycin还能通过降低⑶K-cyclin复合物激酶的活性，使细胞周期阻滞在Gl期，从而发挥抗肿瘤的作用。我们采用微乳液方法制备免疫抑制剂纳米口服溶液体系为研究免疫抑制剂雷帕霉素、环孢素A纳米口服溶液配方及雷帕霉素与环孢素A组合纳米口服溶液体系的人体临床实验提供理论和实际指导依据。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种利用微乳液方法制备免疫抑制剂雷帕霉素、环孢素A纳米口服溶液及免疫抑制剂雷帕霉素+环孢素A组合纳米口服溶液体系的新方法，实现增加非水溶性免疫抑制剂的溶解度和渗透性并提高纳米口服溶液的稳定性，为免疫抑制剂药物的口服药物配方及组合药物配方的人体临床实验研究提供了新方法。非水溶性抗癌药物或免疫抑制剂等溶质被增溶在具有生物相容性的水包油微乳液纳米溶液体系，提高疏水性免疫抑制剂的溶解度并降低药物的副作用。
[0004]本发明的技术方案是:雷帕霉素与环孢素A纳米口服微乳液制备方法，具体包括以下步骤:
步骤1.先制备具有生物相容性的水包油纳米溶液体系:
将表面活性剂与助表面活性剂按照质量比1-3:1-2混合均匀，混合均匀后与生物相容性的油、去离子水按照质量百分比为:29-35:24-32:35-39混合，轻轻摇晃即可制备得到直径为30纳米的水包油微乳液体系；
步骤2.将一定量的克雷帕霉素或环孢素A或雷帕霉素+环孢素A固体溶解在步骤I制备得到的水包油微乳液体系中，在室温或37度温度下，以200-800转/分的转速下匀速混合2-24小时，抗癌药物组合纳米口服溶液体系。
[0005]取100微升的水包油包水乳液样品，通过色谱-质谱方法分析雷帕霉素、环孢素A的浓度，得到I毫升微乳液体系雷帕霉素、环孢素A的最大溶解度。
[0006]进一步，所述步骤2中还可以将抗癌类药物多烯紫杉醇疏水性抗癌药物与雷帕霉素与按照质量比1:2-3的比例配比，加入同时步骤I制备得到的水包油微乳液体系中，在室温或37度温度下，以200-800转/分的转速下匀速混合2-24小时，得到雷帕霉素或环孢素A或雷帕霉素+环孢素A纳米口服体系溶液。
[0007]进一步,所述生物相容性的油是食品级或医药级材料包括芝麻油、橄榄油或丙二
醇单辛酸酯；
进一步，所述表面活性剂主要是食品级非离子表面活性剂包括聚氧乙烯基山梨醇月桂酸酯(包括聚山梨醇酯 20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80)或蓖麻油聚氧乙烯醚。
[0008]进一步，所述助表面活性剂包括食品级材料聚氧乙烯和二氧二醇单乙烯醚。
[0009]所得到的雷帕霉素、环孢素A纳米口服溶液体系或雷帕霉素+环孢素A纳米溶液体系在14500转/分的转速下离心分离，没有固体沉淀析出，所制备的微乳液体系是热力学稳定体系，不但具有生物相容性、高增溶能力及增加药物渗透能力的特性，还能在模拟胃酸环境下(pH=1.2缓冲溶液)稳定并被稀释I到5倍。雷帕霉素、环孢素A纳米口服溶液或雷帕霉素+环孢素A组合纳米口服溶液体系在室温到40度温度范围内稳定并可保存二年不发生变化。
[0010]该微乳液制备方法与现有方法相比，具有高效、直接、快速、准确的优点，所制备的纳米口服溶液体系是热力学稳定体系能长期存放，质量稳定，浓度准确并可以批量生产。采用微乳液法，通过选择生物相容性的油、表面活性剂、助表面活性剂制备具有生物相容性的免疫抑制剂纳米口服溶液、组合纳米口服溶液体系。大副提高疏水性免疫抑制剂雷帕霉素、环孢素A的溶解度，并为研究水包油微乳液体系雷帕霉素、环孢素A纳米口服配方及雷帕霉素与环孢素A组合纳米口服溶液配方的研究开发提供新方法。
同现有技术相比，本发明具有如下有益结果:
1、本发明采用微乳液方法制备免疫抑制剂雷帕霉素、环孢素A及雷帕霉素与环孢素A组合纳米口服溶液，是新型纳米药物体系，具有高增溶能力、热力学稳定的优点。
[0011]2、本发明制备的微乳液体系可以同时增溶两种或以上疏水性免疫抑制剂、抗癌药物，所制备的免疫抑制剂雷帕霉素与环孢素A复合纳米口服溶液体系、多烯紫杉醇与雷帕霉素组合纳米口服溶液，具有协同作用，为免疫抑制剂组合配方及多种抗癌药物组合口服配方的研究提供新方法、实验与理论依据。
[0012]3、本发明采用微乳液体系所制备的生物相容性水包油(0/W)微乳液纳米体系，空白微乳液体系在浓度为100微克/毫升对HeLa、M28细胞经过24小时培养的细胞存活率超过90%，为研究免疫抑制剂、抗癌药物的纳米口服配方、组合口服纳米溶液及其人体临床提供科学依据。[0013]具体实施方法
下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
[0014]实施例1
将聚山梨醇酯20与二氧二醇单乙烯醚按照质量比2:1混合均匀，混合均匀后与丙二醇单辛酸酯、去离子水按照质量百分比为:35:30:35混合，轻轻摇晃即可制备得到直径为30纳米的水包油微乳液体系；
将10毫克免疫抑制剂剂环孢素A固体或10毫克雷帕霉素固体粉末溶解在I毫升微乳液纳米溶液中，在37度温度下，以200转/分的转速下匀速混合24小时，得到直径为30纳米口服溶液体系免疫抑制剂纳米口服溶液体系，通过生物体外释放实验和细胞存活实验，证明所制备的微乳液体系具有生物相容性，得到疏水性免疫抑制剂环孢素A纳米口服溶液体系。
[0015]实施例2
将聚山梨醇酯80与二氧二醇单乙烯醚按照质量比2:1混合均匀，混合均匀后与丙二醇单辛酸酯、去离子水按照质量百分比为:35:29:36混合，轻轻摇晃即可制备得到直径为30纳米的水包油微乳液体系；将5毫克雷帕霉素+5毫克环孢素A固体溶解于I毫升水包油微乳液体系中，在37度温度下，以600转/分的转速下匀速混合20小时，得到免疫抑制剂雷帕霉素+环孢素A组合纳米口服溶液体系，通过色谱-质谱方法分析纳米溶液中的药物浓度，通过生物体外释放实验和细胞存活实验，证明所制备的微乳液体系具有生物相容性，得到疏水性免疫抑制剂雷帕霉素+环孢素A组合纳米口服溶液体系。
[0016]实施例3
将蓖麻油聚氧乙烯醚与二氧二醇单乙烯醚按照质量比2:1混合均匀，混合均匀后与丙二醇单辛酸酯、去离子水按照质量百分比为:37:24:39混合，轻轻摇晃即可制备得到直径为30纳米的水包油微乳液体系；
制备生物相容性的水包油微乳液体系，将抗癌类药物(多烯紫杉醇等疏水性抗癌药物)与雷帕霉素按照质量比1:1到1: 3配比同时溶解在I毫升微乳液纳米溶液中，在室温或37度，以800转/分的转速下匀速混合12-24小时，得到抗癌药物+免疫抑制剂组合纳米口服溶液体系，通过生物体外释放实验、穿越上皮细胞和细胞存活实验，证明所制备的微乳液体系能增强药物的渗透能力并具有生物相容易性，多种药物联合体系具有协同作用，提高药物疗效并降低药物的副作用，实现对多种疏水性抗癌药物联合化学治疗体系提高抗癌药物的渗透能力及降低糖蛋白功能的双重目的。
【权利要求】
1.雷帕霉素与环孢素A纳米口服微乳液制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤: 步骤1.先制备具有生物相容性的水包油纳米溶液体系: 将表面活性剂与助表面活性剂按照质量比1-3:1-2混合均匀，再后与生物相容性的油、去离子水按照质量百分比为:29-35:24-32:35-39混合，轻轻摇晃即可制备得到直径为30纳米的水包油微乳液体系； 步骤2.将一定量的雷帕霉素或环孢素A或雷帕霉素+环孢素A固体溶解在步骤I制备得到的水包油微乳液体系中，在室温或37度温度下，以200-800转/分的转速下匀速混合2-24小时,得到雷帕霉素或环孢素A或雷帕霉素+环孢素A纳米口服体系溶液； 取100微升的水包油包水乳液样品，通过色谱-质谱方法分析雷帕霉素、环孢素A的浓度，得到I毫升微乳液体系纳米口服体系溶液的最大溶解度。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中还可以将抗癌类药物多烯紫杉醇疏水性抗癌药物与雷帕霉素与按照质量比1:2-3的比例配比，加入同时步骤I制备得到的水包油微乳液体系中，在室温或37度温度下，以200-800转/分的转速下匀速混合2-24小时,得到雷帕霉素或环孢素A或雷帕霉素+环孢素A抗癌药物组合纳米口服溶液体系溶液。
3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述生物相容性的油为食品级或医药极材料包括芝麻油、橄榄油和丙二醇单辛酸酯。
4.如权利要求1 或2所述的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂是非离子型为食品级表面活性剂包括聚氧乙烯基山梨醇月桂酸酯或蓖麻油聚氧乙烯醚。
5.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述助表面活性剂包括聚氧乙烯和二氧二醇单乙烯醚。
【文档编号】A61K31/436GK103933546SQ201410118664
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年3月27日 优先权日:2014年3月27日
【发明者】海明潭, 孔峰 申请人:北京科技大学