用于药物偶联物的含磺酰胺连接系统的制作方法

文档序号：12480435阅读：1627来源：国知局

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2013年12月27日提交的第61/921,242号美国临时专利申请和2014年9月17日提交的第62/051,899号美国临时专利申请的权益，所述申请的全部内容以引用方式并入本文。

背景

领域

本发明涉及用于从连接靶向部分释放有效负载的连接系统，和使用它们的方法。

相关领域描述

递送骨架在生物、化学和医疗领域中有许多用途。例如，将药物和其它药剂递送至靶细胞或组织来治疗癌症和其它疾病已经成为多年来大量研究的焦点。当前通过肠胃外施用至患者的大多数药剂并不是靶向的，这导致将药剂全身递送至身体的细胞和组织，这是不必要的，且通常是不期望的。这可能导致不良的药物副作用，且通常限制可施用的药物(例如，化疗剂(抗癌剂))的剂量。虽然口服施用药物被认为是方便且经济的施用模式，但一旦药物被吸收进系统循环中，其同样具有针对非靶细胞的相同问题，即非特异性毒性。其它并发问题涉及口服生物利用度和药物滞留在胃肠道中，从而导致胃肠道额外曝露至药物，且因此具有胃肠道毒性风险的问题。

因此，主要目标是开发将药剂特异性靶向细胞和组织的方法。此类治疗的益处包括避免不恰当地将此类药剂递送至其它细胞和组织的一般生理效应。使用抗体-药物偶联物以靶向递送细胞毒性或抗有丝分裂剂(例如，在治疗癌症时杀死或抑制肿瘤细胞的药物)可以允许将药物部分靶向递送至肿瘤，并在肿瘤细胞和肿瘤环境中累积。相比之下，全身施用未偶联药剂可能对正常细胞和试图被消除的肿瘤细胞造成不可接受的毒性水平。

将药物连接至抗体或其它靶向部分以形成能够释放游离药物的偶联物涉及到考虑多种因素，包括用于药物偶联的化学基团的性质和位置、药物释放机制(例如，通过可裂解键)、提供药物释放的结构元件(例如，酶识别序列和可裂解键)、和由药物释放产生的任何结构修饰。需要不会损害药物活性的偶联和特异性药物释放方法。在一些情况下，对于有效的偶联和药物递送，可能需要在目标药物中安装化学把手(chemical handle)。

在医疗领域中，需要可以在期望目标位置选择性释放强效的抗有丝分裂和细胞毒性化合物的药物偶联物。本公开满足这些需求且提供其它相关优势。

技术实现要素：

简单地说，本公开涉及包含连接至偶联物中靶向部分的有效负载化合物的组合物，以及其相关制造和使用方法。在一个实施方案中，本发明提供可以进行酶裂解且能够在酶裂解时从靶向部分释放有效负载化合物的偶联物。在一个实施方案中，靶向部分是抗体。在一个实施方案中，有效负载化合物是具有生物活性的化合物。在一个实施方案中，有效负载化合物是细胞毒性或细胞抑制药物。在一个实施方案中，有效负载是标记部分。

因此，在一个实施方案中，本发明提供具有以下结构的组合物：

[(P)-(L)]_m-(T)

(I)

其中(P)是有效负载化合物，(L)是连接子，(T)是靶向部分，且m是1至10的整数。在某些实施方案中，m为1。

在一个实施方案中，(P)通过(L)连接至(T)，如以下结构中所描绘：

其中：

R选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基、任选地被取代的杂芳基、-COR²⁷-、-CSR²⁷-、-OR²⁷-和-NHR²⁷-，其中每个R²⁷独立地为任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基，

P³为(P)或(P)的一部分，

L³为(L)或(L)的一部分，且

(T)为靶向部分。

在一个优选的实施方案中，R选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基。

如本文所公开，在本发明的一个实施方案中，可以合成含N-酰基磺酰胺的偶联物，使得N-酰基磺酰胺部分共价连接至化学基团，(R)，其包含与形成连接子(L)的一部分的氨基酸的羰基形成肽键(接合肽键(JPB))的氮原子。在一个实施方案中，JPB可以进行酶裂解。还可以使用与N-酰基磺酰胺类似的部分，诸如N-酰基氨基磺酰胺(sulfamamide)(由于(R)的性质)。

因此，在一些实施方案中，提供式(I)的化合物，其中(P)通过(L)连接至(T)，如以下结构中所描绘：

其中-L³-(T)具有以下结构：

其中P³是有效负载化合物(P)的剩余部分，且键合至R″的-NH-基团与式(III)中的(AA)¹形成本文中称为接合肽键(JPB)的肽键，

其中R″选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基、任选地被取代的杂芳基、-COR²⁷-、-CSR²⁷-、-OR²⁷-和-NHR²⁷-，其中每个R²⁷独立地为任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基，其中每个AA独立地为氨基酸，其中x是0至25的整数，其中(L’)是连接子(L)的剩余部分(如果有的话)，其中(T)是靶向部分。在一个实施方案中，(AA)¹-(AA)_X合在一起包含能够促进JPB的酶裂解的氨基酸序列。

在一个实施方案中，多个有效负载部分(P)连接至单个连接子部分(L)。

在一些实施方案中，式(XXVI)中的-R″-NH-选自由以下组成的组：

在一个实施方案中，式(I)的化合物裂解产生式(IV)的化合物：

其中P′对应于式(XXVI)中的P³。

在一个实施方案中，式(I)的化合物裂解产生式(XIX)化合物：

其中P′对应于式(XXVI)中的P³。

在一个实施方案中，JPB裂解产生式(V)的化合物：

其中P′对应于式(XXVI)中的P³。

在一个实施方案中，本发明提供一种制造具有结构(I)的组合物的方法。可利用众多合成途径和众多反应物产生具有结构(I)的组合物。例如，N-酰基磺酰胺部分和式(XXVI)的R基团可以存在于相同的反应物或不同的反应物中。N-酰基磺酰胺部分可以存在于单种反应物上，或者可以在偶联反应步骤中由两种反应物形成。JPB可以在反应物内完整存在，或者可以在偶联反应步骤中由两种反应物形成。JPB可以在还包含促进JPB酶裂解的氨基酸序列的单种反应物内完整存在，或者促进酶裂解的氨基酸序列可以在偶联反应步骤中通过多种反应物形成并与JPB合在一起。应当理解，与基团″R″组合时，式(I)、(II)、(III)、(XXI)和(XXVI)的化合物可与N-酰基磺酰胺类似(例如，氨基磺酰胺)。

在另一个实施方案中，提供一种药物组合物，其包含具有结构(I)的组合物、或其立体异构体、药学上可接受的盐或前药，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

在另一个实施方案中，提供了一种在治疗中使用具有结构(I)的组合物的方法。具体地说，本公开提供了一种治疗哺乳动物中的癌症的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的具有结构(I)的组合物或包含具有结构(I)的组合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。

在另一个实施方案中，本公开提供了一种抑制哺乳动物中的肿瘤生长的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的具有结构(I)的组合物或包含具有结构(I)的组合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。

在另一个实施方案中，本公开提供了一种使用具有结构(I)的组合物体外杀死癌细胞的方法。在另一个实施方案中，本公开提供了一种体内杀死哺乳动物中的癌细胞的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的具有结构(I)的组合物或包含具有结构(I)的组合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。

在参考以下详细描述后，本公开的这些和其它方面将显而易见。

附图简述

图1示出了化合物A对三种细胞系(HCC1954、NCI-N87和Jurkat)的细胞毒性数据图。

图2示出了化合物B对三种细胞系(HCC1954、NCI-N87和Jurkat)的细胞毒性数据图。

图3示出了化合物C对三种细胞系(HCC1954、NCI-N87和Jurkat)的细胞毒性数据图。

图4示出了化合物D对三种细胞系(HCC1954、NCI-N87和Jurkat)的细胞毒性数据图。

图5示出了化合物E对三种细胞系(HCC1954、NCI-N87和Jurkat)的细胞毒性数据图。

图6示出了化合物F对两种细胞系(HCC1954和NCI-N87)的细胞毒性数据图。

图7示出了化合物G对三种细胞系(HCC1954、NCI-N87和Jurkat)的细胞毒性数据图。

图8示出了化合物H对三种细胞系(HCC1954、NCI-N87和Jurkat)的细胞毒性数据图。

图9示出了化合物I对三种细胞系(HCC1954、NCI-N87和Jurkat)的细胞毒性数据图。

图10示出了化合物J对两种细胞系(HCC1954和NCI-N87)的细胞毒性数据图。

图11示出了化合物K对三种细胞系[HCC1954(人乳腺癌)、NCI-N87(人胃癌)和Jurkat(人T细胞白血病)]的细胞毒性数据图。

图12示出了接种NCI-N87肿瘤细胞并在第22天以12mg/kg单次IV注射媒介物、T-DM1、T化合物I或T化合物K处理的NSG小鼠的体重，n＝10。

图13示出了接种NCI-N87肿瘤细胞并在第22天以12mg/kg单次IV注射媒介物、T-DM1、T化合物I或T化合物K处理的NSG小鼠的肿瘤体积，n＝10。

图14示出了接种NCI-N87肿瘤细胞并在第22天以12mg/kg单次IV注射媒介物、T-DM1、T-I或T-K处理的NSG小鼠的存活率，n＝10。

图15示出了研究小鼠的体重，表示为接种NCI-N87细胞(用基质胶)并在第27天以1、3、7或12mg/kg单次IV注射媒介物、曲妥珠单抗(T)、T-DM1、T-化合物E处理的NSG小鼠相对于基线(第27天)的变化百分比。数据以平均值(+/-SEM)示出n＝6(Veh和T)，n＝7(T-DM13mg/kg)，且对于所有其它组而言n＝8。

图16示出了研究小鼠在单剂量的ADC、曲妥珠单抗或媒介物后的肿瘤体积。

图17示出第27天以1、3、7或12mg/kg单次IV注射媒介物、曲妥珠单抗(T)、T-DM1或T-化合物E处理的NSG小鼠中NCI N87肿瘤体积(用基质胶)的肿瘤复发(体积与处理日相比增加2倍)所需的时间。数据以平均值(+/SEM)示出n＝6(Veh和T)，n＝7(T-DM1 3mg/kg)，且n＝8。***P＜0.001

具体实施方式

在以下描述中，阐述了某些具体细节以便透彻地理解本公开的各个实施方案。然而，本领域技术人员将理解的是，可以不需要这些细节来实施本公开。

在本说明书和权利要求全文中，除非上下文另外要求，否则词语“包含(comprise)”以及其变型如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”在开放内含性意义上来说应被解释为“包括(但不限于)”。

贯穿本说明书对“一个实施方案”或“一实施方案”的提及意味着结合所述实施方案描述的特定特征、结构或特性包括在本公开的至少一个实施方案中。因此，在贯穿本说明书的各个地方出现短语“在一个实施方案中”或“在一实施方案中”不一定都指代同一实施方案。此外，特定特征、结构或特性可在一个或多个实施方案中以任何合适方式组合。

除非另外说明，否则如本文所使用的以下术语和短语欲具有以下含义。当本文使用商品名时，申请人旨在独立地包括商品名产品配方、通用名药和商品名产品的活性药物成分。

术语“抗体”在本文中以最广泛的含义使用且具体涵盖完整单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们展现出期望的生物活性即可。术语“抗体”是指全长免疫球蛋白分子或全长免疫球蛋白分子的功能活性部分，即，含免疫特异性地结合目标靶标的抗原或其一部分的抗原结合位点的分子。本文公开的免疫球蛋白可以是任何免疫球蛋白分子类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。免疫球蛋白可以源自任何物种。在一个方面，免疫球蛋白源自人、鼠或兔。在另一方面，抗体是免疫特异性地结合至靶抗原的多克隆抗体、单克隆单体、多特异性(例如，双特异性)抗体、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体、线性抗体、单链抗体、双抗体、大抗体、微抗体、Fv、Fab片段、F(ab′)片段、F(ab′)2片段、由Fab表达文库产生的片段、抗个体基因型(抗Id)抗体、CDR和以上任一种的表位结合片段。

如本文所使用的术语“单克隆抗体”是指从大体上同质的抗体群体获得的抗体，即，构成该群体的个别抗体是相同的，除可能少量存在的可能天然存在的突变以外。单克隆抗体包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中相应序列相同或同源，而所述链的剩余部分与源自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体以及此类抗体的片段中相应序列相同或同源(参见例如，美国专利号4,816,567；和Morrison等人，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.USA81：6851-6855)。单克隆抗体还包括人源化抗体，人源化抗体可以包含完整人恒定区和来自非人来源的CDR。

“完整”抗体是包含抗原结合可变区和轻链恒定结构域(CL)和重链恒定结构域、C_H1、C_H2和C_H3的抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如，人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。

完整抗体可以具有一种或多种“效应功能”，其是指可归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物活性。抗体效应功能的实例包括C1q结合；补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导型细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体；BCR)的下调等。在一些实施方案中，抗体缺乏效应功能。

“抗体片段”包括完整抗体的一部分，优选地包括其抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab′、F(ab′)₂和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子；大抗体；微抗体；和由抗体片段形成的多特异性抗体。

“分离的”抗体是已经被鉴定并从其天然环境的组分中分离和/或回收的抗体。其天然环境的污染物组分是将干扰抗体的诊断或治疗用途的物质，并且可以包括酶、激素和其它蛋白质或非蛋白质溶质。在一些实施方案中，抗体将纯化(1)至抗体的大于95重量％，如通过劳里法(Lowry method)测定，且最优选超过99重量％，(2)至足以通过使用转杯式测序仪(spinning cup sequenator)得到N-末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或(3)至均质，在还原或非还原条件下经SDS-PAGE，使用考马斯兰或优选银染色证实。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为抗体天然环境的至少一个组分将不存在。然而，通常，分离的抗体将通过至少一个纯化步骤制备。

“结合”目标抗原的抗体是能够以足够亲和力结合所述抗原，使得抗体可用于靶向表达所述抗原的细胞。

“天然序列”多肽是具有与源自自然界的多肽相同的氨基酸序列的多肽。此类天然序列多肽可以从自然界分离或者可以通过重组或合成方式产生。因此，天然序列多肽可以具有天然存在的人多肽、鼠多肽或来自任何其它哺乳动物物种的多肽的氨基酸序列。

如本文所使用的术语“氨基酸”或“残基”包括二十种天然存在的氨基酸中的任一种、天然存在的氨基酸中的任一种的D-形式、非天然存在的氨基酸和其衍生物、类似物和模拟物。任何氨基酸(包括天然存在的氨基酸)都可以从市场上购买或通过本领域中已知的方法合成。非天然存在的氨基酸的实例包括瓜氨酸(“Cit”)、正亮氨酸(″Nle”)、正缬氨酸(″Nva”)、β-丙氨酸、L-或D-萘丙氨酸、鸟氨酸(“Orn”)、高精氨酸(homoArg)和肽领域内熟知的其它氨基酸，包括M.Bodanzsky，“Principles of Peptide Synthesis，”第一和第二修订版，Springer-Verlag，New York，N.Y.，1984和1993年以及Stewart和Young，“Solid Phase Peptide Synthesis，”第二版，Pierce Chemical Co.，Rockford，Ill.，1984中描述的那些氨基酸，这两个文献以引用的方式并入本文中。常见氨基酸可由其全名、标准单字母符号或标准三字母符号来提及，例如：A、Ala、丙氨酸；C、Cys、半胱氨酸；D、Asp、天冬氨酸；E、Glu、谷氨酸；F、Phe、苯丙氨酸；G、Gly、甘氨酸；H、His、组氨酸；I、Ile、异亮氨酸；K、Lys、赖氨酸；L、Leu、亮氨酸；M、Met、甲硫氨酸；N、Asn、天冬酰胺；P、Pro、脯氨酸；Q、Gln、谷氨酰胺；R、Arg、精氨酸；S、Ser、丝氨酸；T、Thr、苏氨酸；V、Val、缬氨酸；W、Trp、色氨酸；X、Hyp、羟脯氨酸；Y、Tyr、酪氨酸。本文组合物中的任何和所有氨基酸都可以是天然存在的氨基酸、合成氨基酸和其衍生物或模拟物。当氨基酸残基包含一个或多个手性中心时，任何D、L、内消旋、苏型或赤型(视情况)外消旋物或其混合物都术语本发明范围内。术语“细胞内裂解”是指本发明组合物在细胞内的过程或反应。在一个实施方案中，将有效负载(P)连接至连接子(L)的接合肽键(JPB)断裂，从而从细胞内的靶向部分(T)释放有效负载(P)。如本文所公开，在一个实施方案中，释放的有效负载(P)可以是具有选自式(IV)和式(V)和式(XIX)的结构的化合物。本发明中还可以使用本领域中已知的其它连接子。例如，连接子可以是可酶裂解或化学裂解或不可裂解的。在一个实施方案中，有效负载可以通过(T)和/或(L)的降解或蛋白水解释放。

术语“细胞外裂解”是指本发明组合物在细胞外的过程或反应。在一个实施方案中，将有效负载(P)连接至连接子(L)的接合肽键(JPB)断裂，从而从细胞外的靶向部分(T)释放有效负载(P)。如本文所公开，在一个实施方案中，释放的有效负载(P)可以是具有选自式(IV)、(V)和(XIX)的结构的化合物。因此，在一个实施方案中，本发明提供具有以下结构的组合物：

[(P)-(L)]_m-(T)

(I)

其中(P)是有效负载化合物，(L)不存在或是连接子，(T)是靶向部分，且m是1至10的整数。在某些实施方案中，m为1。

在一个实施方案中，(P)通过(L)连接至(T)，如以下结构中所描绘：

其中：

P³为(P)或(P)的一部分；

L³为(L)或(L)的一部分；且

(T)为靶向部分。

在一个实施方案中，(P)-(L)具有以下结构(II)：

其中：

(P)是P³和裂解后结合至P³的N-酰基磺酰胺-R的任何部分；且

(L)是L³和裂解后结合至L³的N-酰基磺酰胺-R的任何部分。

在一个优选实施方案中，R选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基，或R不存在。

在一些实施方案中，存在R，且存在(L)，且(L)和(P)通过肽键连接。

在一些实施方案中，(L)和L³不存在，且(P)键合至(T)，且具有式(XXXI)的结构：

众多化合物都可以在本发明中用作(P)。特别受关注的包括抗生素、诊断剂(例如可检测标记)、抗炎剂、抗病毒剂、细胞毒性剂和抗癌药物。

本发明还提供可以进行酶裂解且能够在酶裂解时从靶向部分(T)释放有效负载化合物(P)的式(I)的化合物。在一些实施方案中，有效负载化合物是具有生物活性的化合物。在一些实施方案中，有效负载化合物是细胞毒性或细胞抑制药物。

如本文所公开，可以合成含N-酰基磺酰胺的可裂解偶联物，使得N-酰基磺酰胺部分共价连接至化学基团，(R)，其共价键合至与形成促进JPB酶裂解的氨基酸序列的一部分的氨基酸的羰基形成可酶裂解肽键(接合肽键(JPB))的氮原子。还可以使用与N-酰基磺酰胺类似的部分，诸如N-酰基氨基磺酰胺。

在一个实施方案中，本发明提供式I的化合物：

[(P)-(L)]_m-(T)

(I)

其中(P)是具有以下结构(XXX)的生物活性化合物：

在一个实施方案中，本发明提供式I的化合物：

[(P)-(L)]_m-(T)

(I)

其中(P)是生物活性化合物，(L)是连接子，(T)是靶向部分，且m是1至10的整数，其中(P)具有以下结构XX：

且其中(L)-(T)具有以下结构(III)：

其中P⁴是有效负载化合物(P)的剩余部分，且键合至式(II)中R的-NH-基团与式(III)中(AA)¹形成在本文中称为接合肽键(JPB)的肽键，其中JPB是可酶裂解的，其中R是选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基、任选地被取代的杂芳基、-COR²⁷-、-CSR²⁷-、-OR²⁷-和-NHR²⁷-，其中每个R²⁷独立地为任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基，其中每个AA独立地为氨基酸，其中x为0至25的整数，其中(L’)是连接子(L)的剩余部分(如果有的话)，其中(T)是靶向部分，且其中(AA)¹-(AA)_X一起包含能够促进JPB的酶裂解的氨基酸序列。

在某些实施方案中，m为1。

在一些实施方案中，R选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基。

在一个实施方案中，式XX的-R-NH-选自：

其中每个n独立地为0至10的整数。

在一个优选实施方案中，式XX的-R-NH-选自：

在一个实施方案中，裂解产生式(IV)的化合物：

其中P′对应于式XX中的P⁴。

在一个实施方案中，裂解产生式(XIX)的化合物：

其中P′对应于式XX中的P⁴。

在一个实施方案中，JPB裂解产生式(V)的化合物：

其中P′对应于式XX中的P⁴。

在本发明的一个实施方案中，(P)具有以下结构(VI)：

或其立体异构体、前药或药学上可接受的盐，且(L)-(T)具有以下结构(III)：

其中：

m是1至10的整数；

R₁选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基、-COR₂₄-、-CSR₂₄-、-OR₂₄-和-NHR₂₄-，其中每个R₂₄独立地为任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基；

R₂选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基；

R₃选自由H和C_1-6烷基组成的组；

R₄选自由H和C_1-6烷基组成的组；且

R₅选自由C_1-6烷基和-SH组成的组，且

其中键合至式(VI)中R₁的-NH-基团与式(III)中的(AA)¹形成接合肽键(JPB)，其中JPB是可以酶裂解的，其中每个AA独立地为氨基酸，其中x为0至25的整数，其中(L’)是连接子(L)的剩余部分(如果有的话)，其中(T)是靶向部分，且其中(AA)¹-(AA)x一起包含能够促进(JPB)的酶裂解的氨基酸序列。

在一个优选的实施方案中，R₃是H；

在一个优选的实施方案中，R₄是甲基。

在一个优选的实施方案中，m是1。

在一个实施方案中，R₁选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基。

在另一个实施方案中，每个任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基独立地任选被＝O、＝S、-OH、-OR₂₈、-O₂CR₂₈、-SH、-SR₂₈、-SOCR₂₈、-NH₂、-N₃、-NHR₂₈、-N(R₂₈)₂、-NHCOR₂₈、-NR₂₈COR₂₈、-I、-Br、-Cl、-F、-CN、-CO₂H、-CO₂R₂₈、-CHO、-COR₂₈、-CONH₂、-CONHR₂₈、-CON(R₂₈)₂、-COSH、-COSR₂₈、-NO₂、-SO₃H、-SOR₂₈或-SO₂R₂₈取代，其中每个R₂₈独立地为任选地被卤素、-OH或-SH取代的烷基。

在另一个实施方案中，每个任选地被取代的芳基和任选地被取代的杂芳基独立地选自由以下组成的组：任选地被取代的苯基、任选地被取代的萘基、任选地被取代的蒽基、任选地被取代的菲基、任选地被取代的呋喃基、任选地被取代的吡咯基、任选地被取代的苯硫基、任选地被取代的苯并呋喃基、任选地被取代的苯并苯硫基、任选地被取代的喹啉基、任选地被取代的异喹啉基、任选地被取代的咪唑基、任选地被取代的噻唑基、任选地被取代的噁唑基和任选地被取代的吡啶基。

在另一个实施方案中，R2选自以下结构(A)、(B)、(C)、(D)中的一个：

其中：

每个Q独立地选自CR₂₉或N；

每个Z独立地选自C(R₂₉)₂、NR₂₉、S或O；

每个R₂₉独立地选自由以下组成的组：H、-OH、-R₂₈、-OR₂₈、-O₂CR₂₈、-SH、-SR₂₈、-SOCR₂₈、-NH₂、-N₃、-NHR₂₈、-N(R₂₈)₂、-NHCOR₂₈、-NR₂₈COR₂₈、-R₂₈NH₂、-I、-Br、-Cl、-F、-CN、-CO₂H、-CO₂R₂₈、-CHO、-COR₂₈、-CONH₂、-CONHR₂₈、-CON(R₂₈)₂、-COSH、-COSR₂₈、-NO₂、-SO₃H、-SOR₂₈或-SO₂R₂₈，其中每个R₂₈独立地为任选地被卤素、-OH或-SH取代的烷基。

在另一个实施方案中，R₂选自由以下组成的组：

其中每个R₂₉独立地选自由以下组成的组：H、-OH、-R₂₈、-OR₂₈、-O₂CR₂₈、-SH、-SR₂₈、-SOCR₂₈、-NH₂、-N₃、-NHR₂₈、-N(R₂₈)₂、-NHCOR₂₈、-NR₂₈COR₂₈、-R₂₈NH₂、-I、-Br、-Cl、-F、-CN、-CO₂H、-CO₂R₂₈、-CHO、-COR₂₈、-CONH₂、-CONHR₂₈、-CON(R₂₈)₂、-COSH、-COSR₂₈、-NO₂、-SO₃H、-SOR₂₈或-SO₂R₂₈，其中每个R₂₈独立地为任选地被卤素、-OH或-SH取代的烷基。

在另一个实施方案中，R₂选自由以下组成的组：

在另一实施方案中，R₂是：

在另一个实施方案中，R₃、R₄和R₅各自为甲基。

在另一个实施方案中，R₃是H，R₄是甲基，且R₅是甲基。

应理解，结构(VI)化合物的任何实施方案(如上文所阐述)和本文针对结构(VI)化合物中R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₂₈或R₂₉基团所阐述的任何具体取代基(如本文所阐述)可以独立地与结构(VI)化合物的其它实施方案和/或取代基组合形成上文没有具体阐述的本公开的实施方案。此外，如果特定实施方案和/或权利要求中针对任何特定R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₂₈或R₂₉基团列出取代基列表，应理解，可从所述特定实施方案和/或权利要求缺失每个个别取代基，且剩余的取代基列表将视为在本公开的范围内。

在本发明的一个实施方案中，(P)具有以下结构(VIV)：

或其立体异构体、前药或药学上可接受的盐，且(L^a)-(T)具有以下结构(III)：

其中：

R₆和R₇独立地选自由以下组成的组：H和具有含1至10个碳原子的直链、支链或非芳族环状骨架的饱和或不饱和部分，且所述碳原子任选地被-OH、-I、-Br、-Cl、-F、-CN、-CO₂H、-CHO、-COSH或-NO₂取代；或R₇和R₁₀稠合并形成环；

R₈和R₉独立地选自由以下组成的组：H、R′、ArR′-或R₈和R₉连接形成环；

R₁₀选自由以下组成的组：H、R′、ArR′-和Ar；或R₁₀和R₇稠合并形成环；

R₁₁选自由以下组成的组：H、R′和ArR′-；

R₁₂和R₁₃独立地选自由以下组成的组：H、R′和ArR′-；

R₁₄是

且

R₁₅选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基、-COR₂₄-、-CSR₂₄-、-OR₂₄-和-NHR₂₄-，其中每个R₂₄独立地为任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基；

其中R′被定义为具有含1至10个碳原子、0至4个氮原子、0至4个氧原子和0至4个硫原子的直链、支链或非芳族环状骨架的饱和或不饱和部分，且所述碳原子任选地被以下基团取代：＝O、＝S、OH、-OR₁₆、-O₂CR₁₆、-SH、-SR₁₆、-SOCR₁₆、-NH₂、-NHR₁₆、-N(R₁₆)₂、-NHCOR₁₆、-NR₁₆COR₁₆、-I、-Br、-Cl、-F、-CN、-CO₂H、-CO₂R₁₆、-CHO、-COR₁₆、-CONH₂、-CONHR₁₆、-CON(R₁₆)₂、-COSH、-COSR₁₆、-NO₂、-SO₃H、-SOR₁₆、-SO₂R₁₆，其中R₁₆是直链、支链或环状的1至10个碳的饱和或不饱和烷基；

由连接R₈和R₉所形成的环是在R′定义内的三元至七元非芳族环状骨架，

Y被定义为选自由以下组成的组的部分：直链饱和或不饱和的1至6个碳的烷基，其任选地被R′、ArR′-或X取代；且

X被定义为选自由以下组成的组的部分：-OH、-OR′、＝O、＝S、-O₂CR′、-SH、-SR′、-SOCR′、-NH₂、-NHR′、-N(R′)₂、-NHCOR′、-NRCOR′、-I、-Br、-Cl、-F、-CN、-CO₂H、-CO₂R′、-CHO、-COR′、-CONH₂、-CONHR′、-CON(R′)₂、-COSH、-COSR′、-NO₂、-SO₃H、-SOR′和-SO₂R′；且

其中键合至式(XIV)中R₁₅的-NH-基团与式(III)中(AA)¹形成接合肽键(JPB)，其中JPB是可酶裂解的，其中每个AA独立地为氨基酸，其中x为0至25的整数，其中(L’)是连接子(L)的剩余部分(如果有的话)，其中(T)是靶向部分，且其中(AA)¹-(AA)x一起包含能够促进(JPB)的酶裂解的氨基酸序列。

在一个实施方案中，Ar是选自由苯基、萘基、蒽基、吡咯基所组成的组的芳族环。

在另一个实施方案中，每个任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基独立地任选被以下基团取代：＝O、＝S、-OH、-OR₂₈、-O₂CR₂₈、-SH、-SR₂₈、-SOCR₂₈、-NH₂、-N₃、-NHR₂₈、-N(R₂₈)₂、-NHCOR₂₈、-NR₂₈COR₂₈、-I、-Br、-Cl、-F、-CN、-CO₂H、-CO₂R₂₈、-CHO、-COR₂₈、-CONH₂、-CONHR₂₈、-CON(R₂₈)₂、-COSH、-COSR₂₈、-NO₂、-SO₃H、-SOR₂₈或-SO₂R₂₈，其中每个R₂₈独立地为任选地被卤素、-OH或-SH取代的烷基。

在另一个实施方案中，R₁₀选自以下结构(A)、(B)、(C)、(D)中的一个：

其中：

每个Q独立地选自CR₂₉或N；

每个Z独立地选自C(R₂₉)₂、NR₂₉、S或O；

在另一个实施方案中，R₁₀选自由以下组成的组：

在另一个实施方案中，R₁₀是：

在另一个实施方案中，R₆和R₇各自为甲基。

在另一个实施方案中，R₆是H，且R₇是甲基。

在一个实施方案中，R₁₂是支链C4烷基。

应理解，结构(XIV)化合物的任何实施方案(如上文所阐述)和本文针对结构(XIV)化合物中R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、R₁₅、R₁₆、R₂₈或R₂₉基团所阐述的任何具体取代基(如上文所阐述)可以独立地与结构(XIV)的化合物的其它实施方案和/或取代基组合形成上文没有具体阐述的本公开的实施方案。此外，如果特定实施方案和/或权利要求中针对任何特定R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、R₁₅、R₁₆、R₂₈或R₂₉列出取代基列表，应理解，可从所述特定实施方案和/或权利要求可缺失每个个别取代基，且剩余的取代基列表将视为在本公开的范围内。

在本发明的一个实施方案中，P具有以下结构(XV)：

或其立体异构体、前药或药学上可接受的盐；且(L)-(T)具有以下结构(III)：

其中：

R₁₇选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基、-COR₂₄-、-CSR₂₄-、-OR₂₄-和-NHR₂₄-，其中每个R₂₄独立地为任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基；

R₁₈选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基；

R₁₉选自由H和C_1-6烷基组成的组；

R₂₀选自由H和C_1-6烷基组成的组；

R₂₁和R₂₇独立地选自由H、C_1-6烷基和-SH组成的组，条件为R₂₁和R₂₇不能都是H；

R₂₂、R₂₃、R₂₄和R₂₅独立地选自由H和C_1-6烷基组成的组，R₂₂和R₂₃中的至少一个是H；或R₂₃和R₂₄形成双键，R₂₂是H，且R₂₅是H或C_1-6烷基；且

R₂₆选自由H和C_1-6烷基组成的组；且

其中键合至式(XV)中R₁₇的-NH-基团与式(III)中(AA)¹形成接合肽键(JPB)，其中JPB是可酶裂解的，其中每个AA独立地为氨基酸，其中x为0至25的整数，其中(L’)是连接子(L)的剩余部分(如果有的话)，其中(T)是靶向部分，且其中(AA)¹-(AA)x一起包含能够促进(JPB)的酶裂解的氨基酸序列。

在另一实施方案中，每个任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基独立地任选被以下基团取代：＝O、＝S、-OH、-OR₂₈、-O₂CR₂₈、-SH、-SR₂₈、-SOCR₂₈、-NH₂、-N₃、-NHR₂₈、-N(R₂₈)₂、-NHCOR₂₈、-NR₂₈COR₂₈、-I、-Br、-Cl、-F、-CN、-CO₂H、-CO₂R₂₈、-CHO、-COR₂₈、-CONH₂、-CONHR₂₈、-CON(R₂₈)₂、-COSH、-COSR₂₈、-NO₂、-SO₃H、-SOR₂₈或-SO₂R₂₈，其中每个R₂₈独立地为任选地被卤素、-OH或-SH取代的烷基。

在另一个实施方案中，R₁₈选自以下结构(A)、(B)、(C)、(D)中的一个：

其中：

每个Q独立地为CR₂₉或N；

每个Z独立地为C(R₂₉)₂、NR₂₉、S或O；

在另一个实施方案中，R₁₈选自由以下组成的组：

在另一个实施方案中，R₁₈是：

在另一实施方案中，R₁₉、R₂₀、R₂₁和R₂₇各自为甲基。

在另一个实施方案中，R₁₉是H，R₂₀是甲基，R₂₁是甲基，且R₂₇是甲基。

应理解，结构(XV)的化合物的任何实施方案(如上文所阐述)和本文针对结构(XV)化合物中R₁₇、R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂、R₂₃、R₂₄、R₂₅、R₂₆、R₂₇、R₂₈或R₂₉基团所阐述的任何具体取代基(如上文所阐述)可以独立地与结构(XV)化合物的其它实施方案和/或取代基组合形成上文没有具体阐述的本公开的实施方案。此外，如果特定实施方案和/或权利要求中针对任何特定R₁₇、R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂、R₂₃、R₂₄、R₂₅、R₂₆、R₂₇、R₂₈或R₂₉列出取代基列表，应理解，可从所述特定实施方案和/或权利要求缺失每个个别取代基，且剩余的取代基列表将视为在本公开的范围内。

在一个实施方案中，结构(VI)中的-R₁-NH-、结构(XIV)中的-R₁₅-NH-或结构(XV)中的-R₁₇-NH-选自：

其中每个n独立地为0-10的整数。

在一个优选实施方案中，结构(VI)中的-R₁-NH-、结构(XIV)中的-R₁₅-NH-或结构(XV)中的-R₁₇-NH-选自：

在本发明的一个实施方案中，(P)是式(XI)的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R¹选自：氨基-C₁-C₆烷基、氨基-芳基、氨基-C₃-C₇环烷基、氨基-杂环基、和杂环基，各自任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基硫基、羧基、甲酰胺、C₃-C₇环烷基、C₃-C₇环烷基-C₁-C₆烷基、胍基、卤基、C₁-C₆卤代烷基、杂环基、杂环基-C₁-C₆烷基、羟基和硫基；或

R¹是R^aR^bNCH(R^c)-；

R^a选自：H和C₁-C₆烷基；

R^b是C₁-C₆烷基；且

R^c是R^d-CH(CH₃)₂-；且

R^d选自：H、芳基、C₃-C₇环烷基和杂芳基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₄酰硫基、C₂-C₄烯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷基氨基、C₁-C₄烷氧基、氨基、氨基-C₁-C₄烷基、卤基、C₁-C₄卤代烷基、羟基、羟基-C₁-C₄烷基和硫基，其中C₂-C₄烯基、C₁-C₄烷基氨基和C₁-C₄烷氧基进一步任选地被一个选自C₁-C₄烷基芳基、羟基和硫基的取代基取代；或

R^b和R^c与和它们各自键合的原子一起形成杂环基二基。

R²选自：C₂-C₆烷基、芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₄-C₇环烷基、C₃-C₇环烷基-C₁-C₆烷基、杂芳基、杂芳基-C₁-C₆烷基和杂环基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基氨基、氨基、氨基-C₁-C₆烷基、氨基-芳基、氨基-C₃-C₇环烷基、芳基、甲酰胺、羧基、氰基、C₁-C₆卤代酰基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、卤基、羟基、硝基、硫基和硫代-C₁-C₆烷基；且

X是-C(O)NHCH(CH₂R³)-或X不存在；且

R³选自：芳基、杂芳基和C₃-C₇环烷基，它们各自任选地被一个选自氨基和羟基的取代基取代。

本发明还提供其中(P)是式XI、XIa、XIb、XIc、XId、XIe、XIf、XIg、XIh、XIi、XIj或XIk的化合物、或其药学上可接受的盐的实施方案。如果存在(L)，那么(P)共价地连接至(L)，或如果不存在(L)，那么(P)共价地连接至(T)。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIa的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：C₂-C₆烷基、芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₄-C₇环烷基、C₃-C₇环烷基-C₁-C₆烷基、杂芳基、杂芳基-C₁-C₆烷基和杂环基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基氨基、氨基、氨基-C₁-C₆烷基、氨基-芳基、氨基-C₃-C₇环烷基、芳基、甲酰胺、羧基、氰基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、卤基、羟基、硝基、硫基和硫代-C₁-C₆烷基；且

R⁴和R⁵各自独立地选自：H和C₁-C₆烷基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIa的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：4-氨基苄基、4-(氨基甲基)苄基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、苄基、3-巯基丙基、2-巯基乙基、4-(巯基甲基)苯基、对甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三异丙基苯基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟苄基、哌啶-1-基、邻甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)苄基、己-2-基、2-甲氧基乙基、环戊基甲基、环己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羟基苯基、4-(1-氨基环丙基)苄基、4-(1-氨基环丙基)苯基、2-甲基苄基、4-硝基苄基、4-氯苄基、苯乙基、4-溴苄基、4-氰基苄基、3-硝基苄基、4-叔丁基苄基、2-硝基苄基、4-硝基苯乙基、2-氯-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1＇-联苯]-4-基、4＇-氨基-[1，1＇-联苯]-4-基、4-氟苄基、3-(三氟甲基)苄基、3-(三氟甲氧基)苄基、3，4-二氯苄基、2-氰基苄基、3-氯苄基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基和4-氨基-3-(三氟甲基)苯基；且

R⁴和R⁵各自独立地选自：H和甲基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIb的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：C₂-C₆烷基、芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₄-C₇环烷基、C₃-C₇环烷基-C₁-C₆烷基、杂芳基、杂芳基-C₁-C₆烷基和杂环基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基氨基、氨基、氨基-C₁-C₆烷基、氨基-芳基、氨基-C₃-C₇环烷基、芳基、甲酰胺、羧基、氰基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、卤基、羟基、硝基、硫基和硫代-C₁-C₆烷基；

R³选自：芳基、杂芳基和C₃-C₇环烷基，它们各自任选地被一个选自氨基和羟基的取代基取代；且

R⁴和R⁵各自独立地选自：H和C₁-C₆烷基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIb的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R³选自：1H-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羟基苯基、5-羟基吡啶-2-基、环己基和苯基；且

R⁴和R⁵各自独立地选自：H和甲基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式的XIc化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：C₂-C₆烷基、芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₄-C₇环烷基、C₃-C₇环烷基-C₁-C₆烷基、杂芳基、杂芳基-C₁-C₆烷基和杂环基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基氨基、氨基、氨基-C₁-C₆烷基、氨基-芳基、氨基-C₃-C₇环烷基、芳基、甲酰胺、羧基、氰基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、卤基、羟基、硝基、硫基和硫代-C₁-C₆烷基；且

X是-C(O)NHCH(CH₂R³)-或X不存在；且

R³选自：芳基、杂芳基和C₃-C₇环烷基，它们各自任选地被一个选自氨基和羟基的取代基取代；且

R⁴和R⁵各自独立地选自：H和C₁-C₆烷基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIc的化合物：

或其药学上可接受的盐，

其中：

X是-C(O)NHCH(CH₂R³)-或X不存在；且

R³选自：1H-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羟基苯基、5-羟基吡啶-2-基、环己基和苯基；且

R⁴和R⁵各自独立地选自：H和甲基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XId的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：C₂-C₆烷基、芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₄-C₇环烷基、C₃-C₇环烷基-C₁-C₆烷基、杂芳基、杂芳基-C₁-C₆烷基和杂环基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基氨基、氨基、氨基-C₁-C₆烷基、氨基-芳基、氨基-C₃-C₇环烷基、芳基、甲酰胺、羧基、氰基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、卤基、羟基、硝基、硫基和硫代-C₁-C₆烷基；且

R⁴和R⁵各自独立地选自：H和C₁-C₆烷基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XId的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R⁴和R⁵各自独立地选自：H和甲基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIe的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：C₂-C₆烷基、芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₄-C₇环烷基、C₃-C₇环烷基-C₁-C₆烷基、杂芳基、杂芳基-C₁-C₆烷基和杂环基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基氨基、氨基、氨基-C₁-C₆烷基、氨基-芳基、氨基-C₃-C₇环烷基、芳基、甲酰胺、羧基、氰基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、卤基、羟基、硝基、硫基和硫代-C₁-C₆烷基；且

R³选自：芳基、杂芳基和C₃-C₇环烷基，它们各自任选地被一个选自氨基和羟基的取代基取代；且

R⁴和R⁵各自独立地选自：H和C₁-C₆烷基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIe的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：4-氨基苄基、4-(氨基甲基)苄基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、苄基、3-巯基丙基、2-巯基乙基、4-(巯基甲基)苯基、对甲苯基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三异丙基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、苯基、2-氟苄基、哌啶-1-基、邻甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)苄基、己-2-基、2-甲氧基乙基、环戊基甲基、环己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羟基苯基、4-(1-氨基环丙基)苄基、4-(1-氨基环丙基)苯基、2-甲基苄基、4-硝基苄基、4-氯苄基、苯乙基、4-溴苄基、4-氰基苄基、3-硝基苄基、4-叔丁基苄基、2-硝基苄基、4-硝基苯乙基、2-氯-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1＇-联苯]-4-基、4＇-氨基-[1，1＇-联苯]-4-基、4-氟苄基、3-(三氟甲基)苄基、3-(三氟甲氧基)苄基、3，4-二氯苄基、2-氰基苄基、3-氯苄基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基和4-氨基-3-(三氟甲基)苯基；且

R³选自：1H-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羟基苯基、5-羟基吡啶-2-基、环己基和苯基；且

R⁴和R⁵各自独立地选自：H和甲基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIf的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：C₂-C₆烷基、芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₄-C₇环烷基、C₃-C₇环烷基-C₁-C₆烷基、杂芳基、杂芳基-C₁-C₆烷基和杂环基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基氨基、氨基、氨基-C₁-C₆烷基、氨基-芳基、氨基-C₃-C₇环烷基、芳基、甲酰胺、羧基、氰基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、卤基、羟基、硝基、硫基和硫代-C₁-C₆烷基；且

X是-C(O)NHCH(CH₂R³)-或X不存在；且

R³选自：芳基、杂芳基和C₃-C₇环烷基，它们各自任选地被一个选自氨基和羟基的取代基取代。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIf的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：4-氨基苄基、4-(氨基甲基)苄基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基；且

X是-C(O)NHCH(CH₂R³)-或X不存在；且

R³选自：1H-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羟基苯基、5-羟基吡啶-2-基、环己基和苯基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIg的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：C₂-C₆烷基、芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₄-C₇环烷基、C₃-C₇环烷基-C₁-C₆烷基、杂芳基、杂芳基-C₁-C₆烷基和杂环基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基氨基、氨基、氨基-C₁-C₆烷基、氨基-芳基、氨基-C₃-C₇环烷基、芳基、甲酰胺、羧基、氰基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、卤基、羟基、硝基、硫基和硫代-C₁-C₆烷基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIg的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：4-氨基苄基、4-(氨基甲基)苄基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIh的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：C₂-C₆烷基、芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₄-C₇环烷基、C₃-C₇环烷基-C₁-C₆烷基、杂芳基、杂芳基-C₁-C₆烷基和杂环基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基氨基、氨基、氨基-C₁-C₆烷基、氨基-芳基、氨基-C₃-C₇环烷基、芳基、甲酰胺、羧基、氰基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、卤基、羟基、硝基、硫基和硫代-C₁-C₆烷基；且

R³选自：芳基、杂芳基和C₃-C₇环烷基，它们各自任选地被一个选自氨基和羟基的取代基取代。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIh的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：4-氨基苄基、4-(氨基甲基)苄基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基；且

R³选自：1H-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羟基苯基、5-羟基吡啶-2-基、环己基和苯基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIi的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：C₂-C₆烷基、芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₄-C₇环烷基、C₃-C₇环烷基-C₁-C₆烷基、杂芳基、杂芳基-C₁-C₆烷基和杂环基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基氨基、氨基、氨基-C₁-C₆烷基、氨基-芳基、氨基-C₃-C₇环烷基、芳基、甲酰胺、羧基、氰基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、卤基、羟基、硝基、硫基和硫代-C₁-C₆烷基。

X是-C(O)NHCH(CH₂R³)-或X不存在；且

R³选自：芳基、杂芳基和C₃-C₇环烷基，它们各自任选地被一个选自氨基和羟基的取代基取代。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIi的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

X是-C(O)NHCH(CH₂R³)-或X不存在；且

R³选自：1H-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羟基苯基、5-羟基吡啶-2-基、环己基和苯基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式Ij的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：C₂-C₆烷基、芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₄-C₇环烷基、C₃-C₇环烷基-C₁-C₆烷基、杂芳基、杂芳基-C₁-C₆烷基和杂环基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基氨基、氨基、氨基-C₁-C₆烷基、氨基-芳基、氨基-C₃-C₇环烷基、芳基、甲酰胺、羧基、氰基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、卤基、羟基、硝基、硫基和硫代-C₁-C₆烷基。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式Ij的化合物：

或其药学上可接受的盐，

其中：

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIk的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：C₂-C₆烷基、芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₄-C₇环烷基、C₃-C₇环烷基-C₁-C₆烷基、杂芳基、杂芳基-C₁-C₆烷基和杂环基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基氨基、氨基、氨基-C₁-C₆烷基、氨基-芳基、氨基-C₃-C₇环烷基、芳基、甲酰胺、羧基、氰基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、卤基、羟基、硝基、硫基和硫代-C₁-C₆烷基；且

R³选自：芳基、杂芳基和C₃-C₇环烷基，它们各自任选地被一个选自氨基和羟基的取代基取代。

在本发明的一个实施方案中，(P)是式XIk的化合物：

和其药学上可接受的盐，其中：

R³选自：1H-吲哚-3-基、4-氨基苯基、4-羟基苯基、5-羟基吡啶-2-基、环己基和苯基。

在一个实施方案中，式XI和XIa-XIk中任一个中的(-R²-)是(-R＂-NH-)，其中R＂选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基、任选地被取代的杂芳基、-COR²⁷-、-CSR²⁷-、-OR²⁷-和-NHR²⁷-，其中每个R²⁷独立地为任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基。

在一个实施方案中，(-R＂-NH-)连接至-(L)-(T)：

其中键合至R＂的-NH-基团与式(III)中的(AA)¹形成本文中称为接合肽键(JPB)的肽键。AA独立地为氨基酸，其中x是0至25的整数，其中(L’)任选地为连接子(L)的剩余部分，且(T)是靶向部分。在一个实施方案中，(AA)¹-(AA)_X合在一起包含促进JPB的裂解的氨基酸序列。

在一个实施方案中，靶向部分是抗体。因此，在一个实施方案中，提供含本文所述化合物或其药学上可接受的盐或前药的抗体-药物偶联物(ADC)。

在一个实施方案中，本发明提供一种制造式II的组合物的方法。

在另一个实施方案中，提供一种药物组合物，其包含式II的组合物、或其药学上可接受的盐、以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

在另一个实施方案中，提供了一种在治疗中使用式II的组合物的方法。具体地说，本公开提供了一种治疗哺乳动物中的癌症的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的式II的组合物或包含式II的组合物和药学上可接受的载体稀释剂或赋形剂的药物组合物。

在另一个实施方案中，本公开提供了一种抑制哺乳动物中的肿瘤生长的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的式II的组合物或包含式II的组合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。

在另一个实施方案中，本公开提供了一种使用式II的组合物体外杀死癌细胞的方法。在另一个实施方案中，本公开提供了一种体内杀死哺乳动物中的癌细胞的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的式II的组合物或包含式II的组合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。

在另一个实施方案中，本公开提供了一种增加患有癌症的哺乳动物的存活时间的方法，其包括向有需要的哺乳动物施用有效量的式II的组合物或包含式II的组合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。

在另一个实施方案中，本公开提供式II的组合物、或其药学上可接受的盐在制造用于治疗哺乳动物中的癌症的药物方面的用途。

在另一个实施方案中，本公开提供式II的组合物在制造用于抑制哺乳动物中的肿瘤生长的药物方面的用途。

在另一个实施方案中，本公开提供式II的组合物在制造用于增加患有癌症的哺乳动物的存活率的药物方面的用途。

在另一个实施方案中，本公开提供一种式II的组合物或一种包含式II的组合物的药物组合物，其用于通过疗法治疗人体或动物体的方法中。

在另一个实施方案中，本公开提供一种式II的组合物或一种包含式II的组合物的药物组合物，其用于治疗哺乳动物中的癌症。

在另一个实施方案中，本公开提供一种式II的组合物或一种包含式II的组合物的药物组合物，其用于抑制哺乳动物中的肿瘤生长。

在另一个实施方式中，本公开提供一种式II的组合物或一种包含式II的组合物的药物组合物，其用于增加患有癌症的哺乳动物的存活率。

在一个实施方案中，JPB裂解产生式(IV)的化合物或式(V)的化合物：

其中P′对应于式(II)中的P′。

“氨基”是指-NH₂取代基。

“氰基”是指-CN取代基。

“羟基”是指-OH取代基。

“亚氨基”是指＝NH取代基。

“硝基”是指-NO₂取代基。

“氧代”是指＝O取代基。

“硫醇”是指-SH取代基。

“硫基”是指＝S取代基。

“烷基”是指只由碳和氢原子组成的直链或支链烃链取代基，其是饱和或不饱和的(也就是含一或多个双键和/或三键)，具有一至二十五个碳原子(C₁-C₂₅烷基)，优选一至八个碳原子(C₁-C₈烷基)或一至六个碳原子(C₁-C₆烷基)，且其通过单键连接至分子的剩余部分，例如，甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1，1-二甲基乙基(叔丁基)、3-甲基己基、2-甲基己基、乙烯基、丙-1-烯基、丁-1-烯基、戊-1-烯基、戊-1，4-二烯基、乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。除非说明书中另外具体说明，否则烷基基团可以任选地被取代。

“亚烷基”或“亚烷基链”是指将分子的剩余部分连接至取代基基团且只由碳和氢组成的直链或支链二价烃链，其是饱和或不饱和(也就是包含一或多个双键和/或三键)，且具有一至二十五个碳原子，优选具有一至十二个碳原子，例如亚甲基、亚乙基、亚丙基、正亚丁基、亚乙烯基、亚丙烯基、正亚丁烯基、亚丙炔基、正亚丁炔基等。亚烷基链通过单键或双键连接至分子的剩余部分，并通过单键或双键连接至取代基基团。亚烷基链连接至分子的剩余部分和取代基基团的点可以通过链内一个碳或任两个碳。除非说明书中另外具体说明，否则亚烷基链可以任选地被取代。

“烷氧基”是指式-OR_a的取代基，其中R_a是如上文所定义的烷基取代基，其包含一至二十五个碳原子，优选一至十二个碳原子。除非说明书中另外具体说明，否则烷氧基基团可以任选地被取代。

“烷基氨基”是指式-NHR_a或-NR_aR_a的取代基，其中每个R_a独立地为如上文所定义的烷基取代基，其包含一至二十五个碳原子，优选一至十二个碳原子。除非说明书中另外具体说明，否则烷基氨基基团可以任选地被取代。

“硫代烷基”是指式-SR_a的取代基，其中R_a是如上文所定义的烷基取代基，其包含一至二十五个碳原子，优选一至十二个碳原子。除非说明书中另外具体说明，否则硫代烷基基团可以任选地被取代。

“芳基”是指含氢、6至18个碳原子和至少一个芳族环的烃环系统取代基。就本公开的目的而言，芳基取代基可以是单环、二环、三环或四环系统，其可以包括稠合或桥联环系统。芳基取代基包括(但不限于)衍生自以下的芳基取代基：苯并苊、苊烯、醋菲烯、蒽、甘菊环、苯、荧蒽、芴、不对称引达省、对称引达省、二氢化茚、茚、萘、非那烯、菲、七曜烯、芘和三亚苯。除非说明书中另外具体说明，否则术语“芳基”或前缀“芳”(诸如在“芳烷基”中)旨在包括任选地被取代的芳基取代基。

“芳烷基”是指式-R_b-R_c的取代基，其中R_b是如上文所定义的亚烷基链，且R_c是一或多个如上文所定义的芳基取代基，例如苄基、二苯基甲基等。除非说明书中另外具体说明，否则芳烷基基团可以任选地被取代。

“环烷基”或“碳环”是指只由碳和氢原子组成的稳定的非芳族单环或多环烃取代基，其可以包括稠合或桥联环系统，具有三至十五个碳原子，优选具有三至十个碳原子，且其是饱和或不饱和的且通过单键连接至分子的剩余部分。单环取代基包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。多环取代基包括例如金刚烷基、降冰片基、十氢化萘基、7，7-二甲基-二环[2.2.1]庚基等。除非说明书中另外具体说明，否则环烷基基团可以任选地被取代。

“环烷基烷基”是指式-R_bR_d的取代基，其中R_d是如上文所定义的亚烷基链，且R_g是如上文所定义的环烷基取代基。除非说明书中另外具体说明，否则环烷基烷基基团可以任选地被取代。

“稠合的”是指稠合至本公开的化合物中现有的环结构的本文所述的任何环结构。当稠合环是杂环基环或杂芳基环时，现有环结构上的任何碳原子(其成为稠合杂环基环或稠合杂芳基环的一部分)可以被氮原子置换。

“卤基”或“卤素”是指溴、氯、氟或碘。

“卤代烷基”是指被一或多个如上文所定义的卤基取代基取代的如上所定义的烷基取代基，例如，三氟甲基、二氟甲基、三氯甲基、2，2，2-三氯乙基、1，2-二氟乙基、3-溴-2-氟丙基、1，2-二溴乙基等。除非说明书中另外具体说明，否则卤代烷基基团可以任选地被取代。

“杂环基”或“杂环”是指由二至十二个碳原子和一至六个选自由氮、氧和硫所组成的组的杂原子组成的稳定3-至18-元非芳族环取代基。除非说明书中另外具体说明，否则杂环基取代基可以是单环、二环、三环或四环系统，其可以包括稠合或桥联环系统；且杂环基取代基中的氮、碳或硫原子可以任选地被氧化；氮原子可以任选地被季铵化；且杂环基取代基可以是部分或完全饱和。此类杂环基取代基的实例包括(但不限于)二氧戊环基、噻吩基[1，3]二噻烷基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑烷基、奎宁环基、噻唑烷基、四氢呋喃基、三噻烷基、四氢吡喃基、硫吗啉基、硫吗啉基、1-氧代-硫吗啉基和1，1-二氧代-硫吗啉基。除非说明书中另外具体说明，否则杂环基基团可以任选地被取代。

“N-杂环基”是指含至少一个氮且其中杂环基取代基连接至分子的剩余部分的点通过杂环基取代基中氮原子的如上文所定义的杂环基取代基。除非说明书中另外具体说明，否则N-杂环基基团可以任选地被取代。

“杂环基烷基”是指式-R_bR_e的取代基，其中R_b是如上文所定义的亚烷基链，且R_e是如上文所定义的杂环基取代基，且如果杂环基是含氮杂环基，那么杂环基可以在氮原子处连接至烷基取代基。除非说明书中另外具体说明，否则杂环基烷基基团可以任选地被取代。

“杂芳基”是指包含氢原子、一至十三个碳原子、一至六个选自由氮、氧和硫所组成的组的杂原子和至少一个芳族环的5-至14-元环系统取代基。就本公开的目的而言，杂芳基取代基可以是单环、二环、三环或四环系统，其可以包括稠合或桥联环系统；且杂芳基取代基中的氮、碳或硫原子可以任选地被氧化；氮原子可以任选地被季铵化。实例包括(但不限于)氮呯基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并吲哚基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并呋喃基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[b][1，4]二氧杂环庚烷基(dioxepinyl)、1，4-苯并二氧杂环己烷基、苯并萘并呋喃基、苯并噁唑基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并二噁英基、苯并吡喃基、苯并吡喃酮基、苯并呋喃基、苯并呋喃酮基、苯并噻吩基(苯并苯硫基)、苯并三唑基、苯并[4，6]咪唑并[1，2-a]吡啶基、咔唑基、噌啉基、二苯并呋喃基、二苯并苯硫基、呋喃基、呋喃酮基、异噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、异吲哚基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、异喹啉基、吲哚嗪基、异噁唑基、萘啶基、噁二唑基、2-氧代氮呯基、噁唑基、环氧乙烷基、1-氧化吡啶基、1-氧化嘧啶基、1-氧化吡嗪基、1-氧化哒嗪基、1-苯基-1H-吡咯基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡咯基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、喹啉基、奎宁环基、异喹啉基、四氢喹啉基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、三嗪基和苯硫基(也就是噻吩基)。除非说明书中另外具体说明，否则杂芳基基团可以任选地被取代。

“N-杂芳基”是指含至少一个氮且其中杂芳基取代基连接至分子的剩余部分的点通过杂芳基取代基中氮原子的如上文所定义的杂芳基取代基。除非说明书中另外具体说明，否则N-杂芳基基团可以任选地被取代。

“杂芳基烷基”是指式-R_bR_f的取代基，其中R_b是如上文所定义的亚烷基链，且R_f是如上文所定义的杂芳基取代基。除非说明书中另外具体说明，否则杂芳基烷基基团可以任选地被取代。

本文所使用的术语“被取代的”意指以上任一基团(即，烷基、亚烷基、烷氧基、烷基氨基、硫代烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、杂环基、N-杂环基、杂环基烷基、杂芳基、N-杂芳基和/或杂芳基烷基)的至少一个氢原子被非氢原子的键置换，所述非氢原子是诸如(但不限于)：卤素原子，诸如F、Cl、Br和I；诸如羟基基团、烷氧基基团和酯基的基团中的氧原子；诸如硫醇基团、硫代烷基基团、砜基、磺酰基基团和亚砜基的基团中的硫原子；诸如叠氮化物、胺、酰胺、烷胺、二烷胺、芳胺、烷基芳胺、二芳胺、N-氧化物、酰亚胺和烯胺的基团中的氮原子；诸如三烷基甲硅烷基基团、二烷基芳基甲硅烷基、烷基二芳基甲硅烷基基团和三芳基甲硅烷基基团的基团中的硅原子；和各种其它基团中的其它杂原子。“被取代的”也指以上任一基团的一个或多个氢原子被杂原子的高级键(例如，双键或三键)置换，所述杂原子是诸如氧代、羰基、羧基和酯基中的氧；和诸如亚胺、肟、腙和腈的基团中的氮。例如，“被取代的”包括以上任一基团的一或多个氢原子被以下基团置换：-NR_gR_h、-NR_gC(＝O)R_h、-NR_gC(＝O)NR_gR_h、-NR_gC(＝O)OR_h、-NR_gC(＝NR_g)NR_gR_h、-NR_gSO₂R_h、-OC(＝O)NR_gR_h、-OR_g、-SR_g、-SOR_g、-SO₂R_g、-OSO₂R_g、-SO₂OR_g、＝NSO₂R_g和-SO₂NR_gR_h。“被取代的”也指以上任一基团的一或多个氢原子被以下基团置换：-C(＝O)R_g、-C(＝O)OR_g、-C(＝O)NR_gR_h、-CH₂SO₂R_g、-CH₂SO₂NR_gR_h。在前文中，R_g和R_h是相同或不同的，且独立地为氢、烷基、烷氧基、烷基氨基、硫代烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、杂环基、N-杂环基、杂环基烷基、杂芳基、N-杂芳基和/或杂芳基烷基。“被取代的”另外指以上任一基团的一或多个氢原子被至氨基、氰基、羟基、亚氨基、硝基、氧代、硫代(thioxo)、卤基、烷基、烷氧基、烷基氨基、硫代烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、杂环基、N-杂环基、杂环基烷基、杂芳基、N-杂芳基和/或杂芳基烷基基团的键置换。此外，上述每个取代基也可以任选地被一或多个上述取代基取代。

如本文所使用，术语“保护基”是指本领域中已知在合成程序期间保护反应性基团(包括(但不限于)羟基和氨基基团)免受不希望的反应的不稳定化学部分。受保护基保护的羟基和氨基基团在本文中分别称为“受保护羟基基团”和“受保护氨基基团”。保护基通常选择性地和/或正交性地在反应期间用于在其它反应性位点保护位点，且随后可以被移除以使未保护基团保持不变或用于其它反应。本领域中已知的保护基通常描述在Greene和Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley&Sons，New York(1999)中。基团可以作为前体选择性地并入本公开的化合物中。例如，氨基基团可以作为叠氮基基团置于本公开的化合物中，叠氮基基团可以在合成的期望时间点时进行化学转化为氨基基团。通常，基团受到保护或作为对反应将具有惰性的前体存在，所述反应修饰母体分子的其它区域，以在合适时间转化为其最终基团。Agrawal等人，Protocols for Oligonucleotide Conjugates，Eds，Humana Press；New Jersey，1994；第26卷，第1-72页讨论了其它代表性保护基或前体基团。“羟基保护基”的实例包括(但不限于)叔丁基、叔丁氧基甲基、甲氧基甲基、四氢吡喃基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、p-氯苯基、2，4-二硝基苯基、苄基、2，6-二氯苄基、二苯基-甲基、p-硝基苄基、三苯基甲基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基-二苯基甲硅烷基(TBDPS)、三苯基甲硅烷基、苯甲酰甲酸酯、乙酸酯、氯代乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、特戊酸酯、苯甲酸酯、p-苯基苯甲酸酯、9-芴基甲基碳酸酯、甲磺酸酯和甲苯磺酸酯。“氨基保护基”的实例包括(但不限于)氨基己酸保护基，诸如2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基(Teoc)、1-甲基-1-(4-联苯基)-乙氧基羰基(Bpoc)、叔丁氧羰基(BOC)、烯丙氧基羰基(Alloc)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)和苄氧基羰基(Cbz)；酰胺保护基，诸如甲酰基、乙酰基、三卤代乙酰基、苯甲酰基和硝基苯基乙酰基；磺酰胺保护基，诸如2-硝基苯磺酰基；酰亚胺和环状酰亚胺保护基，诸如苯二甲酰亚氨基和二硫杂琥珀酰基。

“前药”意指可以在生理条件或通过溶剂分解转化为本公开的生理活性化合物的化合物。因此，术语“前药”是指药学上可接受的本公开化合物的代谢前体。当施用至有需要的受试者时，前药可以是无活性，但在体内转化为本公开的活性化合物。前药通常在体内迅速转化得到本公开的母体化合物，例如，通过在血液中水解。前药化合物通常在哺乳动物生物体中具有以下方面的优点：溶解性、组织相容性或延迟释放(参见，Bundgard，H.，Design of Prodrugs(1985)，第7-9、21-24页(Elsevier，Amsterdam))。Higuchi，T.等人，A.C.S.Symposium Series，第14卷和Bioreversible Carriers in Drug Design，Edward B.Roche编，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中提供关于前药的论述。

本公开化合物的前药可以通过修饰本公开化合物中存在的官能团而制备，修饰方式是这些修饰以常规操作或在体内裂解为本公开的母体化合物。前药包括这样的本公开的化合物，其中当将本公开的化合物的前药施用至哺乳动物受试者时，羟基、氨基或巯基基团键合至分别裂解形成游离羟基、游离氨基或游离巯基基团的任何基团。前药的实例包括(但不限于)本公开化合物中醇的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯或者胺官能团的酰胺衍生物等。

“药物-抗体比率”或“DAR”意指偶联至靶向部分(也就是抗体)的药物部分的数量。在某些实施方案中，[(P)-(L)]中有效负载(P)与连接子(L)的数量相同，且DAR由式I中的值“m”表示，且可以是1至10的整数。在其它实施方案中，连接子(L)是将超过一个有效负载(P)连接至单个靶向部分(T)的多功能单元。

本公开还旨在涵盖通过使一或多个原子被具有不同原子质量或质量数的原子置换进行同位素标记的结构(I)的所有药学上可接受的化合物。可并入所公开化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，诸如分别为²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F、³⁶Cl、¹²³I和¹²⁵I。这些被放射性标记的化合物可以用于通过表征(例如)作用位点或模式或者药学上重要的作用位点的结合亲和力帮助确定或测量化合物的有效性。结构(I)的某些被同位素标记的化合物(例如，那些包含放射性同位素的化合物)可以用于药物和/或基质组织分布研究。放射性同位素氚(即³H)和碳-14(即¹⁴C)鉴于其易于并入和现成的检测装置而尤其可用于此目的。

用较重的同位素(诸如氘，即²H)进行取代可以获得由较高的代谢稳定性所带来的某些治疗优点，例如增加体内半衰期或降低剂量需求，且因此在一些情况下可以是优选的。

用正电子发射同位素(诸如¹¹C、¹⁸F、¹⁵O和¹³N)取代可以用于正电子发射断层扫描(PET)研究中，以检查物质受体占用情况。结构(I)的同位素标记化合物通常可以通过本领域的技术人员已知的常规技术或与下文所阐述的制备和实施例中所述的那些类似的方法，使用合适的同位素标记试剂替代先前使用的未标记试剂进行制备。

本公开还旨在涵盖所公开化合物的体内代谢产物。此类产物可以由(例如)所施用化合物的氧化作用、还原作用、水解作用、酰胺化作用、酯化作用等产生，主要是由于酶促过程。因此，本公开包括通过以下方法产生的化合物，所述方法包括向哺乳动物施用本公开的化合物持续足以产生其代谢产物的时间段。此类产物通常通过以下方式鉴定：以可检测剂量向动物(诸如大鼠、小鼠、豚鼠、猴)或人施用本公开的放射性标记化合物，留出充足时间发生代谢，并从尿液、血液或其它生物样本中分离其转化产物。

“稳定的化合物”和“稳定的结构”意指足够稳健，能够从反应混合物分离至有用的纯度，并配制成有效治疗剂的化合物。

“哺乳动物”包括人和家养动物(诸如实验动物和家庭宠物(例如猫、狗、猪、牛、绵羊、山羊、马、兔))和非家养动物(诸如野生动物)等。

“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情形可以发生或不发生，且该描述包括其中所述事件或情形发生的例子和其中它没有发生的例子。例如，“任选地被取代的芳基”意指芳基取代基可以被取代或未被取代，且该描述包括被取代的芳基取代基和没有取代的芳基取代基。

“药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂”包括(但不限于)被美国食品药品管理局(United States Food and Drug Administration)批准可用于人或家养动物中的任何佐剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、风味增强剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。

“药学上可接受的盐”包括酸加成盐和碱加成盐。

“药学上可接受的酸加成盐”是指那些保留游离碱的生物有效性和性质的盐，其不是生物学上或其它方面不期望的，且其是用无机酸形成的，所述无机酸诸如(但不限于)盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；和用有机酸形成的，所述有机酸诸如(但不限于)乙酸、2，2-二氯乙酸、己二酸、海藻酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰胺基苯甲酸、樟脑酸、樟脑-10-磺酸、羊脂酸、己酸、辛酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、十二烷基硫酸、乙烷-1，2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、2-氧代-戊二酸、甘油磷酸、乙醇酸、马尿酸、异丁酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、黏酸、萘-1，5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、丙酸、焦谷氨酸、丙酮酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸、十一碳烯酸等。

“药学上可接受的碱加成盐”是指保留了游离酸的生物有效性和性质的那些盐，其不是生物学上或其它方面不期望的。这些盐是通过向游离酸添加无机碱或有机碱制备。衍生自无机碱的盐包括(但不限于)钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。优选的无机盐是铵盐、钠盐、钾盐、钙盐和镁盐。衍生自有机碱的盐包括(但不限于)以下物质的盐：伯胺、仲胺和叔胺、被取代的胺(包括天然发生的被取代的胺)、环胺和碱离子交换树脂，诸如氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、二乙醇胺、乙醇胺、二甲基乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因(procaine)、海巴明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、苯乙苄胺、苄星、乙二胺、葡糖胺、葡甲胺、可可碱、三乙醇胺、氨丁三醇、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。特别优选的有机碱是异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己基胺、胆碱和咖啡因。

通常，结晶产生本公开的化合物的溶剂化物。如本文所使用，术语“溶剂化物”是指含一或多个本公开的化合物分子与一或多个溶剂分子的聚集体。溶剂可以是水，在此情况下，溶剂化物可以是水合物。或者，溶剂可以是有机溶剂。因此，本公开的化合物可以作为水合物存在，包括一水合物、二水合物、半水合物、倍半水合物、三水合物、四水合物等以及对应溶剂化形式。本公开的化合物可以是真溶剂化物，而在其它情况下，本公开的化合物可以仅保留外来水或是水加一些外来溶剂的混合物。

“药物组合物”是指本公开化合物与通常为本领域所接受的介质的制剂，其用于向哺乳动物(例如，人)递送生物活性化合物。此类介质包括所有药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

本文中待治疗的疾病的非限制性实例包括良性和恶性肿瘤；白血病和淋巴恶性肿瘤，具体地说是乳腺癌、卵巢癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肺癌、肾癌、结肠癌、甲状腺癌、胰腺癌、前列腺癌或膀胱癌；神经元病、神经胶质病、星形胶质细胞病、下丘脑病和其它腺体疾病、巨噬细胞病、上皮病、基质病和囊胚腔病。

“有效量”或“治疗有效量”是指本公开的化合物在施用至哺乳动物(优选人)时足以实现哺乳动物(优选人)中癌症或肿瘤细胞的治疗(如下文所定义)的量。本公开化合物构成“治疗有效量”的量将根据化合物、病症和其严重性、施用方式和待治疗的哺乳动物的年龄而变化，但可以由一般技术人员考虑其自身知识和本公开，按照常规方式确定。

如本文所使用的“治疗”涵盖治疗患有受关注疾病或病症的哺乳动物(优选人)中的受关注的疾病或病症，且包括：

(i)预防哺乳动物中出现疾病或病症，尤其是，当此类动物易患所述病症但尚未诊断为患病；

(ii)抑制所述疾病或病症，即阻止其发展；

(iii)缓解所述疾病或病症，即导致所述疾病或病症消退；或

(iv)缓解由所述疾病或病症引起的症状，即缓解疼痛但没有解决潜在疾病或病症。

治疗有效量的药物可以减少癌细胞数量；减小肿瘤尺寸；抑制(即一定程度上减慢且优选阻止)癌细胞浸润周围器官；抑制(即，一定程度上减慢且优选阻止)肿瘤转移；一定程度上抑制肿瘤生长；和/或一定程度上缓解一或多种与所述癌症相关的症状。在药物可以阻止生长和/或杀死现有癌细胞的程度上，其可能具有细胞抑制性和/或细胞毒性。本发明化合物优选具有细胞毒性。就癌症治疗来说，可以(例如)通过评估疾病进展时间(TTP)和/或测定反应率(RR)来测量功效。

当涉及杀死癌细胞时提到时，药物的“有效量”是指足以产生杀死效应的药物量。

所涵盖的使用当前公开的化合物治疗的实体肿瘤包括(但不限于)：肉瘤、纤维肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、结肠直肠癌、肾癌、胰腺癌、骨癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、食管癌、胃癌(例如，胃肠道癌)、口腔癌、鼻癌、喉癌、鳞状细胞癌(例如，肺)、基底细胞癌、腺癌(例如，肺)、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、维尔姆斯瘤、子宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、小细胞肺癌、膀胱癌、肺癌、非小细胞肺癌、上皮癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、多形性细胞瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、皮肤癌、黑素瘤、成神经细胞瘤和眼癌。考虑使用当前公开的化合物治疗的血源性癌症包括(但不限于)：急性成淋巴细胞性白血病“ALL”、急性成淋巴细胞性B-细胞白血病、急性成淋巴细胞性T-细胞白血病、急性成髓细胞白血病“AML”、急性前髓细胞性白血病“APL”、急性单核母细胞白血病、急性红血球性白血病、急性成巨核细胞性白血病、急性骨髓单核细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、急性未分化性白血病、慢性髓细胞性白血病“CML”、慢性淋巴细胞性白血病“CLL”、毛细胞白血病和多发性骨髓瘤。所涵盖的使用当前公开的化合物治疗的急性和慢性白血病包括(但不限于)：成淋巴细胞性、骨髓性、淋巴细胞性和髓细胞性白血病。所涵盖的使用当前公开的化合物治疗的淋巴瘤包括(但不限于)：霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症、重链疾病和真性红细胞增多症。所涵盖的使用当前公开的化合物治疗的其它癌症包括(但不限于)：腹膜癌、肝细胞癌、肝细胞瘤、唾液腺癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、肛门癌、头颈癌、肾细胞癌、急性间变性大细胞癌和皮肤间变性大细胞癌。

癌症(包括(但不限于)肿瘤、转移或特征为不受控或非期望的细胞生长的其它疾病或病症)可以通过施用当前公开的化合物治疗或预防。

在其它实施方案中，提供用于治疗或预防癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本文公开的化合物与额外治疗方法的组合。在一个实施方案中，额外的治疗方法包括用化疗剂治疗。在一个实施方案中，化疗剂是尚未发现难以用其治疗癌症的化疗剂。在另一个实施方案中，化疗剂是已经发现难以用其治疗癌症的化疗剂。本发明化合物可以在化疗剂之前、之后或同时施用。

在一个实施方案中，额外治疗方法是放射治疗。本发明的化合物可在放射前、后或的同时施用。

本发明化合物还可以施用至已经经历或即将经历手术来治疗癌症的患者。

在一个具体实施方案中，本发明化合物与化疗剂或放射治疗同时施用。在另一个具体实施方案中，化疗剂或放射治疗在施用本发明的化合物之前或之后施用，在一个方面，是在施用本发明的化合物之前或之后的至少一个小时、五个小时、12个小时、一天、一周、一个月施用，在其它方面，是在施用本发明化合物之前或之后的几个月(例如，至多三个月)施用。

化疗剂可以在一系列时段内施用。可以施用本文所列或本领域内以其它方式已知的任一化疗剂或化疗剂的组合。就放射来说，根据待治疗的癌症类型，可以使用任何放射治疗方案。例如，但不作为限制，可以施用x-射线放射；具体地说，可以针对深肿瘤使用高能兆伏电压(放射超过1MeV能量)，且可以针对皮肤癌使用电子束和正电压中x射线放射。也可以施用发射放射性同位素(诸如镭、钴和其它元素的放射性同位素)的γ-射线。

此外，提供用本发明化合物治疗癌症的方法作为化疗或放射治疗的替代，其中化疗或放射治疗已被证实或可以证明对于所治疗的受试者毒性过甚，例如导致不可接受或不可忍受的副作用。此外，提供用本发明化合物治疗癌症的方法作为手术的替代，其中手术已被证实或可以证明对于所治疗的受试者是不可接受或不可忍受。

本发明化合物也可以以体外或离体方式使用，诸如用于治疗某些癌症，包括(但不限于)白血病和淋巴瘤，此类治疗涉及自体干细胞移植。这可能涉及多步骤过程，其中收集动物的自体造血干细胞，并清除所有癌细胞，然后通过施用有效剂量的本发明化合物，伴随或不伴随高剂量放射治疗根除动物剩余的骨髓细胞群体，并将干细胞移植物输回动物中。在某些实施方案中，有效剂量是高剂量。然后在骨髓恢复功能和动物康复的同时提供支持性护理。

用于治疗癌症的方法进一步包括向有需要的患者施用有效量的本发明化合物和作为抗癌剂的另一治疗剂。合适的抗癌剂包括(但不限于)氨甲喋呤、紫杉酚、L-天冬酰胺酶、巯嘌呤、硫鸟嘌呤、羟基脲、阿糖孢苷、环磷酰胺、异环磷酰胺、亚硝基脲、顺铂、卡铂、丝裂霉素、氮烯唑胺、丙卡巴肼、托扑替康、氮芥、癌得星、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、BCNU、伊立替康、喜树碱、博莱霉素、多柔比星、伊达比星、柔红霉素、放线菌素D、更生霉素、光辉霉素、米托蒽醌、天冬酰胺酶、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、紫杉醇和多西他赛。

化疗剂的其它实例包括烷基化剂，诸如噻替派和环磷酰胺；烷基磺酸酯，诸如白消安、苏消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮杂环丙烷，诸如苯并多巴、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替派；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三轻甲基蜜胺；TLK 286(TELCYTA^TM)；多聚乙酰(特别是布拉它辛和布拉它辛)；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚，)；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙碱；桦木酸；喜树碱(包括合成类似物托扑替康CPT-11(伊立替康，)、乙酰喜树碱、东莨菪亭和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素；海绵他汀；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷；念珠藻素(尤其是念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司他汀；倍癌霉素(包括合成类似物，KW-2189和CBl-TMl)；五加素；水鬼蕉碱(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵他汀；氮芥，诸如瘤可宁、萘氮芥、环磷酰胺、雌氮芥、异环磷酰胺、氮芥(mechlorethamine)、盐酸甲氧氮芥、美法伦、新恩比兴、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺和尿嘧啶氮芥；三嗪，诸如达卡巴嗪；亚硝基脲，诸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、环己亚硝脲、嘧啶亚硝脲和雷莫司汀；表鬼臼毒素，诸如依托泊苷、替尼泊苷、托扑替康、9-氨基喜树碱、喜树碱(camptothecin orcrisnatol)；二膦酸盐，诸如氯膦酸盐；抗生素，诸如烯二炔抗生素(例如，卡里奇霉素，特别是卡里奇霉素γI1和卡里奇霉素ωII(参见例如，Agnew，Chem.Intl.Ed.Engl.，33：183-186(1994))和蒽环类，诸如安那霉素、AD32、氨柔比星、柔红霉素、右丙亚胺、DX-52-1、表柔比星、GPX-100、伊达比星、KRN5500、美诺立尔、达内霉素(包括达内霉素A)、埃斯培拉霉素、新制癌菌素生色团和相关色蛋白烯二炔抗生素生色团、阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博莱霉素(例如，A2和B2)、放线菌素C、卡柔比星、洋红霉素、嗜癌素、色霉素、更生霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-1-正亮氨酸、多柔比星(包括吗啉基-多柔比星、氰基吗啉基-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星、脂质体多柔比星和脱氧多柔比星)、依索比星、麻西罗霉素、丝裂霉素(诸如丝裂霉素C)、麦考酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、紫菜霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他汀和佐柔比星；光动力治疗，诸如维替泊芬(BPD-MA)、酞菁染料、光敏剂Pc4和脱甲氧基-竹红菌素A(2BA-2-DMHA)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、蝶罗呤和曲美沙特；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯嘌呤、硫醚嘌呤和硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖孢苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷、二脱氧尿苷、脱氧氟尿苷、依诺他滨和氟尿苷；雄激素，诸如卡鲁睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷和睾内酯；抗肾上腺药物，诸如氨鲁米特、米托坦和曲洛司坦；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(甲酰四氢叶酸)；醋葡醛内酯；抗叶酸抗肿瘤剂，诸如LY231514培美曲塞、二氢叶酸还原酶抑制剂，诸如氨甲喋呤和曲美沙特；抗代谢物，诸如5-氟尿嘧啶(5-FU)和其前药，诸如UFT、S-1和卡培他滨、氟脲苷、去氧氟尿苷和雷替曲塞；和胸苷酸合成酶抑制剂和甘氨酰胺核苷酸甲酰转移酶抑制剂，诸如雷替曲塞(TDX)；二氢嘧啶脱氢酶抑制剂，诸如恩尿嘧啶；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；安吖啶；贝他布昔；比生群；伊达曲杀；地磷酰胺；地美可辛；地吖醌；艾福敏；依利醋铵；埃博霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登醇，诸如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇(mopidanmol)；根瘤菌剂(nitraerine)；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；多糖复合物(JHS Natural Products，Eugene，Oreg.)；丙亚胺；根霉素；西佐喃；螺旋锗；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2，2′，2″-三氯三乙胺；单端孢霉烯(特别是T-2毒素、疣疱菌素A、杆孢菌素A和蛇形菌素)；尿烷；长春地辛氮烯唑胺；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；胍血生；加西托星(gacytosine)；阿拉伯糖苷(″Ara-C″)；环磷酰胺；噻替派；紫杉烷和紫杉醇，例如紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)、ABRAXANE^TM紫杉醇的无聚氧乙烯蓖麻油白蛋白工程化纳米颗粒制剂(American Pharmaceutical Partners，Schaumberg，III.)和多西他赛(Rhone-Poulenc Rorer，Antony，France)；瘤可宁；吉西他滨6-硫鸟嘌呤；巯嘌呤；铂；铂类似物或铂类类似物，诸如顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春碱依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱长春花生物碱；长春瑞滨万珂；来那度胺；萨力多胺；IMiD3；洛伐他汀；戊脉安；毒胡萝卜素；1-甲基-4-苯基吡啶鎓；细胞周期抑制剂，诸如十字孢碱；诺安托；依达曲沙；道诺霉素；米托蒽醌；氨蝶呤；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；维生素D3类似物，诸如EB 1089、CB 1093和KH 1060；类视色素，诸如视黄酸；以上任一个的药学上可接受的盐、酸或衍生物；以及以上任两个或更多个的组合，诸如CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和强的松的组合疗法的缩写)，和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATIN^TM)与5-FU和甲酰四氢叶酸组合的治疗方案的缩写)。

用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素剂，诸如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括他莫昔芬)、雷洛昔芬、甲地孕酮(megastrol)、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬；抑制酶芳香酶的芳香酶抑制剂，芳香酶调节肾上腺中的雌激素生产，诸如4(5)-咪唑、氨鲁米特、乙酸甲地孕酮、依西美坦、福美司坦(formestanie)、法屈唑、伏氯唑、来曲唑和阿纳托唑；和抗雄激素，诸如氟他胺、比卡鲁胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮脯利特和戈舍瑞林；以及曲沙他滨(一种1，3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是那些抑制涉及细胞增殖异常的信号传导途径中基因表达的反义寡核苷酸，诸如PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗，诸如基因疗法疫苗，例如疫苗、疫苗和疫苗；rlL-2；拓扑异构酶1抑制剂；rmRH；和以上任一个的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

本公开的化合物或其药学上可接受的盐可包含一个或多个不对称中心，且因此可以产生对映体、非对映体和其它立体异构体形式，其可依据绝对立体化学将氨基酸定义为(R)-或(S)-或者(D)-或(L)-。本公开旨在包括所有这些可能的异构体，以及它们的外消旋形式和光学纯形式。光学活性(+)和(-)、(R)-和(S)-或(D)-和(L)-异构体可以通过使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术拆分，例如色谱法和分步结晶法。用于制备/分离个别对映体的常规技术包括从合适的光学纯前体进行手性合成或者利用(例如)手性高压液相色谱法(HPLC)对外消旋物(或者盐或衍生物的外消旋物)进行拆分。当本文所述化合物包含烯属双键或其它几何不对称中心时，且除非另外指出，否则所述化合物旨在包括E和Z两种几何异构体。同样，还希望包括所有互变异构形式。

“立体异构体”是指由通过相同键键合，但具有不同三维结构的相同原子组成的化合物，所述三维结构不能互换。本公开涵盖各种立体异构体和其混合物，且包括“对映体”，其是指分子互为不可重叠镜像的两种立体异构体。

“互变异构体”是指质子从分子的一个原子迁移至相同分子的另一原子。本公开包括所述任何化合物的互变异构体。

靶向部分(T)

本发明组合物的靶向部分(T)包括在其范围内的结合受体、抗原或与给定靶细胞群相关的其它接受部分或反应性地与它们缔合或复合的(T)的任何单元。靶向部分(T)是结合至力图靶向的细胞群体的部分、与其复合或与其反应的分子。靶向部分的实例包括能够结合至存在于受关注的细胞表面上的天然分子以及其片段和由此衍生的肽的化合物。此类靶向部分可以单独具有生物活性或不具有生物活性(例如，细胞因子，其具有生物活性)。靶向部分的实例包括抗体、细胞表面受体的配体、衍生自非人细胞的配体(包括细菌和病原体源性配体)。本领域内已知众多合适的靶向部分。例如，参见WO2013117705。

在一个方面，靶向部分(T)用于将有效负载化合物(P)(其可以是药物(D))递送至靶向部分(T)与其反应的特定细胞群体。此类靶向部分包括(但不限于)大分子量蛋白质，诸如全长抗体、抗体片段，较小分子量蛋白质，多肽或肽、凝集素、糖蛋白、细胞因子、非肽、维生素、营养物运输分子(諸如(但不限于)转铁蛋白)、或任何其它细胞结合分子或物质、其片段或由此衍生的肽或基于其的肽。

靶向部分(T)可以通过靶向部分(T)的杂原子形成到连接子(L)的键。可以存在于靶向部分(T)的杂原子包括硫(在一个实施方案中，来自(T)的巯基基团)、氧(在一个实施方案中，来自(T)的羟基基团)和氮(在一个实施方案中，来自(T)的伯氨基或仲氨基基团)。这些杂原子可以以其天然状态(例如天然抗体)存在于靶向部分(T)上，或可以(例如)通过化学修饰或重组方式引入靶向部分(T)。

在一个实施方案中，靶向部分(T)具有通过巯基基团的硫原子键合至连接子(L)的巯基基团。在另一实施方案中，靶向部分(T)具有一个或更多个可以经过化学修饰引入一或多个巯基基团的赖氨酸残基。靶向部分(T)通过巯基基团键合至连接子(L)。可以用于修饰赖氨酸的试剂包括(但不限于)N-琥珀酰亚胺基S-乙酰硫代乙酸酯(SATA)和2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐(Traut试剂)。在一个优选实施方案中，将多个(L)添加至(T)。

在另一实施方案中，(L)可以具有一个或更多个可以经过化学修饰以具有一或多个巯基基团的碳水化合物基团。靶向部分(T)通过巯基基团硫原子键合至连接子(L)。在另一个实施方案中，(T)可以具有一个或多个可以氧化提供醛基(--CHO)的碳水化合物基团(参见例如，Laguzza等人，1989，J.Med.Chem.32(3)：548-55)。对应的醛可以与连接子(L)一部分上的反应性位点形成键。可以与靶向部分(T)上的羰基基团反应的反应性位点包括(但不限于)肼和羟胺。用于修饰用于连接或缔合连接子(L)的蛋白质的其它方案描述于Coligan等人，Current Protocols in Protein Science，第2卷，John Wiley&Sons(2002)中，所述文献以引用的方式并入本文中。

靶向部分(T)可以包括(例如)蛋白质、多肽或肽，包括(但不限于)转铁蛋白、表皮生长因子(“EGF”)、铃蟾肽、胃泌激素、胃泌激素释放肽、血小板源生长因子、IL-2、IL-6、转化生长因子(“TGF”)(诸如TGF-α或TGF-β、牛痘病毒生长因子(“VGF”)、胰岛素和胰岛素样生长因子I和II、凝集素和来自低密度脂蛋白的脱辅基蛋白。

靶向部分(T)也可以包括抗体，诸如多克隆抗体或单克隆抗体。抗体可以针对特定的抗原决定簇，包括(例如)癌细胞抗原、病毒抗原、微生物抗原、蛋白质、肽、碳水化合物、化学物质、核酸或其片段。产生多克隆抗体的方法是本领域中已知的。受关注抗原的单克隆抗体(mAb)可以通过使用本领域中已知的任何技术制备。这些技术包括(但不限于)最初由Kohler和Milstein(1975，Nature 256，495-497)描述的杂交瘤技术、人B细胞杂交瘤技术(Kozbor等人，1983，Immunology Today 4：72)和EBV-杂交瘤技术(Cole等人，1985，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，Inc.，第77-96页)。选定的淋巴细胞抗体方法(SLAM)(Babcook，J.S.等人，A novel strategy for generating monoclonal antibodies from single，isolated lymphocytes producing antibodies of defined specificities.Proc Natl Acad Sci U S A，1996.93(15)：第7843-8页)和(McLean GR，Olsen OA，Watt IN，Rathanaswami P，Leslie KB，Babcook JS，Schrader JW.Recognition of human cytomegalovirus by human primary immunoglobulins identifies an innate foundation to an adaptive immune response；J Immunol.2005Apr 15；174(8)：4768-78)。此类抗体可以是任何的免疫球蛋白类型，包括IgG、IgM、IgE、IgA和IgD和其任何亚类。产生用于本发明中的mAb的杂交瘤可以在体外或体内培养。

单克隆抗体可以是(例如)人单克隆抗体、人源化单克隆抗体、抗体片段或嵌合抗体(例如，人-小鼠抗体)。人单克隆抗体可以通过本领域中已知的许多技术中的任一种制备(例如，Teng等人，1983，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80：7308-7312；Kozbor等人，1983，Immunology Today 4：72-79；和Olsson等人，1982，Meth.Enzymol.92：3-16；还可以参见Huse等人，1989，Science 246：1275-1281和McLean等人J Immunol.2005Apr 15；174(8)：4768-78)。

抗体也可以是双特异性抗体。制备双特异性抗体的方法是本领域中已知的。全长双特异性抗体的传统生产是基于两种免疫球蛋白重链-轻链对的共同表达，其中两种链具有不同特异性(参见例如，Milstein 等人，1983，Nature 305：537-539；国际公开号WO 93/08829，Traunecker等人，1991，EMBO J.10：3655-3659)。

根据一种不同的途径，使具有所需结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变结构域融合至免疫球蛋白恒定结构域序列。优选地，与包含铰链、C_H2和C_H3区的至少部分的免疫球蛋白重链恒定结构域进行融合。优选地，在至少一种融合物中存在包含轻链结合所必需的位点的第一重链恒定区(C_H1)。将具有编码免疫球蛋白重链融合物和在必要时免疫球蛋白轻链的序列的核酸插入不同的表达载体中，并共转染到合适的宿主生物体中。在用于构建的三种多肽链的比例不等时提供最佳产量的实施方案中，这为调整三种多肽片段的相互比例提供了灵活性。然而，在至少两种多肽链以相同比例表达导致高产量时或在该比例没有特定影响时，有可能将两种或所有三种多肽链的编码序列插入一个表达载体中。

例如，双特异性抗体可以具有一个臂上的具有第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链和另一个臂上的杂合免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)。由于免疫球蛋白轻链仅存在于半个双特异性分子中提供了便利的分离途径，因此这种不对称结构有利于将所需的双特异性化合物与不想要的免疫球蛋白链组合分开(国际公开号WO 94/04690)，所述文献以引用的方式整体并入本文。

就产生双特异性抗体的其它细节来说，参见例如Suresh等人，1986，Methods in Enzymology 121：210；Rodrigues等人，1993，J.Immunology 151：6954-6961；Carter等人，1992，Bio/Technology 10：163-167；Carter等人，1995，J.Hematotherapy 4：463-470；Merchant等人，1998，Nature Biotechnology 16：677-681。使用此类技术，可以制备用于治疗或预防本文所定义疾病的双特异性抗体。

双功能抗体还描述在欧洲专利公开号EPA 0 105 360中。如这个参考文献中所公开，杂合或双功能抗体可以通过生物方法得到，也就是通过细胞融合技术，或者通过化学方法得到，特别是使用交联剂或二硫键形成试剂，且可以包括完全抗体或其片段。获得此类杂合抗体的方法公开在(例如)国际公开WO 83/03679和欧洲专利公开号EPA 0 217 577中，两个参考文献以引用的方式并入本文中。

抗体还可以是免疫特异性地结合至靶抗原(例如，癌症抗原、病毒抗原、微生物抗原或结合至细胞或基质的其它抗体)的抗体的功能活性片段、衍生物或类似物。就此而言，“功能活性”意指所述片段、衍生物或类似物能够识别衍生出所述片段、衍生物或类似物的抗体所识别的相同抗原。具体地说，在一个示例性实施方案中，免疫球蛋白分子的个体基因型的抗原性可以通过缺失特异性识别抗原的CDR序列C末端的框架和CDR序列来加强。为确定哪种CDR序列结合抗原，可以在使用所述抗原的结合分析中，通过本领域内已知的任何结合方法(例如，BIAcore测定)，使用含CDR序列的合成肽(参见例如，Kabat等人，1991，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，National Institute of Health，Bethesda，Md.；Kabat等人，1980，J.Immunology 125(3)：961-969)。

其它可使用的抗体包括抗体片段，诸如(但不限于)F(ab′)₂片段、Fab片段、Fab′、Fv片段和抗体的重链和轻链二聚体或其任何最小片段，诸如Fv或单链抗体(SCA)(例如，如美国专利号4,946,778；Bird，1988，Science 242：423-42；Huston等人，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883；和Ward等人，1989，Nature 334：544-54中所述)。

还可以使用含人和非人部分的重组抗体，诸如嵌合抗体和人源化单克隆抗体，其可以使用标准重组DNA技术制造。(参见例如，美国专利号4,816,567；和美国专利号4,816,397)。人源化抗体是来自非人物种的抗体分子，其具有一个或多个来自非人物种的互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的框架区。(参见例如，美国专利号5,585,089)。嵌合和人源化单克隆抗体可以通过本领域中已知的重组DNA技术产生，例如使用以下文献中所述方法：国际公开号WO 87/02671；欧洲专利公开号0 184 187；欧洲专利公开号0 171 496；欧洲专利公开号0 173 494；国际公开号WO 86/01533；美国专利号4,816,567；欧洲专利公开号012 023；Berter等人，1988，Science 240：1041-1043；Liu等人，1987，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：3439-3443；Liu等人，1987，J.Immunol.139：3521-3526；Sun等人，1987，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：214-218；Nishimura等人，1987，Cancer.Res.47：999-1005；Wood等人，1985，Nature 314：446-449；Shaw等人，1988，J.Natl.Cancer Inst.80：1553-1559；Morrison，1985，Science 229：1202-1207；Oi等人，1986，BioTechniques 4：214；美国专利号5,225,539；Jones等人，1986，Nature 321：552-525；Verhoeyan等人，1988，Science 239：1534；和Beidler等人，1988，J.Immunol.141：4053-4060。

可以使用完全人抗体。人抗体可以(例如)使用不能表达内源性免疫球蛋白重链和轻链基因但可以表达人重链和轻链基因的转基因小鼠制备。以正常方式用选定抗原(例如，本发明的所有或部分多肽)使转基因小鼠免疫。可以使用常规杂交瘤技术获得针对抗原的单克隆抗体。转基因小鼠带有的人免疫球蛋白转基因在B细胞分化期间重排，且后续经历类别切换和体细胞突变。因此，使用此种技术，可能产生治疗上有用的的IgG、IgA、IgM和IgE抗体。关于这种用于产生人抗体的技术的综述，参见Lonberg和Huszar(1995，Int.Rev.Immunol.13：65-93)。关于这种用于产生人抗体和人单克隆抗体的技术和用于产生此类抗体的方案的详细论述，参见例如美国专利号5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；和5,545,806。

识别选定表位的人抗体也可以利用称为“导向选择”的技术产生。在这种方法中，使用选定的非人单克隆抗体(例如小鼠抗体)引导选择识别相同表位的完全人抗体。(参见例如，Jespers等人，1994，Biotechnology 12：899-903。)人抗体也可以使用本领域中已知的各种技术产生，包括噬菌体展示文库(参见，例如，Hoogenboom和Winter，1991，J.Mol.Biol.227：381；Marks等人，1991，J.Mol.Biol.222：581；Quan和Carter，2002，“The rise ofmonoclonal antibodies as therapeutics，”见于Anti-IgE and Allergic Disease，Jardieu，P.M.和Fick Jr.，R.B编，Marcel Dekker，New York，N.Y.，第20章，第427-469页)。

在其它实施方案中，抗体是抗体或其功能活性片段的融合蛋白。例如，抗体可以通过N-末端或C-末端的共价键(例如，肽键)融合至另一种并非所述抗体的蛋白质的氨基酸序列(或其一部分，诸如所述蛋白质的至少10、20或50个氨基酸的部分)。

抗体还包括经过修饰的类似物和衍生物，即，通过共价连接任何类型的分子，只要此类共价连接允许抗体保留其抗原结合免疫特异性。例如，但不作为限制，抗体的衍生物和类似物包括那些经过进一步修饰的抗体，所述修饰例如通过糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知保护/阻断基团衍生化、蛋白水解-裂解、连接至细胞抗体单元或其它蛋白质等实现。许多化学修饰中的任一种都可以通过已知技术进行，包括(但不限于)特异性化学裂解、乙酰化、甲酰化、在衣霉素存在下代谢合成等。此外，类似物或衍生物可以包含一或多个非天然氨基酸。

抗体的与Fc受体相互作用的氨基酸残基可以具有修饰(例如，替代、缺失或添加)。具体地说，抗体包括鉴定为在涉及抗Fc结构域与FcRn受体间的相互作用的氨基酸残基具有修饰的抗体(参见例如国际公开号WO 97/34631，所述文献以引用的方式整体并入本文)。对于靶抗原具有免疫特异性的抗体可以在市面上或其它来源获得或由本领域技术人员已知的任何方法(例如化学合成或重组表达技术)产生。编码对癌细胞抗原具有免疫特异性的核苷酸序列可以由(例如)GenBank数据库或类似数据库、文献出版物、或通过常规克隆和测序获得。

可用于治疗癌症的抗体实例包括(但不限于)人源化抗HER2单克隆抗体、(曲妥珠单抗；Genentech)；(利妥昔单抗；Genentech)，其是用于治疗患有非霍奇金氏淋巴瘤患者的嵌合抗CD20单克隆抗体；OvaRex(AltaRex Corporation，MA)，其是用于治疗卵巢癌的鼠抗体；Panorex(Glaxo Wellcome，NC)，其是用于治疗结肠直肠癌的鼠IgG2a抗体；西妥昔单抗爱必妥(Cetuximab Erbitux)(Imclone Systems Inc.，NY)，其是用于治疗表皮生长因子阳性癌症，如头颈癌的抗EGFR IgG嵌合抗体；钻胺素(Vitaxin)(MedImmune，Inc.，MD)，其是用于治疗肉瘤的人源化抗体；Campath I/H(Leukosite，MA)，其是用于治疗慢性淋巴细胞性白血病(CLL)的人源化IgG1抗体；Smart MI95(Protein Design Labs，Inc.，CA)，其是用于治疗急性骨髓性白血病(AML)的人源化抗CD33IgG抗体；LymphoCide(Immunomedics，Inc.，NJ)，其是用于治疗非霍奇金氏淋巴瘤的人源化抗CD22IgG抗体；Smart ID 10(Protein Design Labs，Inc.，CA)，其是用于治疗非霍奇金氏淋巴瘤的人源化抗HLA-DR抗体；Oncolym(Techniclone，Inc.，CA)，其是用于治疗非霍奇金氏淋巴瘤的经过放射性标记的抗HLA-Dr10抗体；Allomune(BioTransplant，CA)，其是用于治疗霍奇金氏病或非霍奇金氏淋巴瘤的人源化抗CD2mAb；阿瓦斯汀(Avastin)(Genentech，Inc.，CA)，其是用于治疗肺癌和结肠直肠癌的抗VEGF人源化抗体；依帕珠单抗(Epratuzamab)(Immunomedics，Inc.，NJ and Amgen，CA)，其是用于用于治疗非霍奇金氏淋巴瘤的抗CD22抗体；和CEAcide(Immunomedics，NJ)，其是用于治疗结肠直肠癌的人源化抗CEA抗体。

其它可用于治疗癌症的抗体包括(但不限于)针对以下抗原的抗体(括号中指示示例性癌症)：CA125(卵巢)、CA15-3(癌)、CA19-9(癌)、L6(癌)、Lewis Y(癌)、Lewis X(癌)、α-胎蛋白(癌)、CA 242(结肠直肠)、胎盘碱性磷酸酶(癌)、前列腺特异性膜抗原(前列腺)、前列腺酸性磷酸酶(前列腺)、表皮生长因子(癌)、MAGE-1(癌)、MAGE-2(癌)、MAGE-3(癌)、MAGE-4(癌)、抗转铁蛋白受体(癌)、p97(黑素瘤)、MUC1-KLH(乳腺癌)、CEA(结肠直肠)、gp100(黑素瘤)、MART1(黑素瘤)、前列腺特异性抗原(PSA)(前列腺)、IL-2受体(T-细胞白血病和淋巴瘤)、CD20(非霍奇金氏淋巴瘤)、CD52(白血病)、CD33(白血病)、CD22(淋巴瘤)、人绒毛膜促性腺激素(癌)、CD38(多发性骨髓瘤)、CD40(淋巴瘤)、黏液素(癌)、P21(癌)、MPG(黑素瘤)和Neu致癌基因产物(癌)。一些具体有用的抗体包括(但不限于)BR96mAb(Trail等人，1993，Science 261：212-215)、BR64(Trail等人，1997，Cancer Research 57：100-105)、针对CD40抗原的mAb，诸如S2C6mAb(Francisco等人，2000，CancerRes.60：3225-3231)和其嵌合和人源化变体、针对cD33抗原的mab；针对EphA2抗原的mab；针对CD70抗原的mAb，诸如1F6mAb和2F2mAb和其嵌合和人源化变体；针对CD30抗原的mAb，诸如AC10(Bowen等人，1993，J.Immunol.151：5896-5906；Wahl等人，2002，CancerRes.62(13)：3736-42)和其嵌合和人源化变体。许多其它结合肿瘤相关抗原的内化抗体都可以使用，且已经综述(参见例如，Franke等人，2000，Cancer Biother.Radiopharm.15：45976；Murray，2000，Semin.Oncol.27：6470；Breitling等人，Recombinant Antibodies，John Wiley，and Sons，New York，1998)。

抗体也可以是结合存在于靶细胞或靶细胞群体上的抗原的抗体。例如，跨膜多肽和其它标记物与一或多种正常细胞(例如，非癌细胞)相比可以特异性地表达在一或多种特定靶细胞(例如，癌细胞)的表面上。通常，与正常细胞表面上的那些标记相比，此类标记物通常在靶细胞表面上大量表达，或呈现较大免疫原性。鉴定此类细胞表面抗原多肽已经产生特异性靶向细胞以通过抗体疗法破坏的能力。因此，在一些实施方案中，抗体包括(但不限于)针对肿瘤相关抗原(TAA)的抗体。此类肿瘤相关抗原是本领域中已知的，且可以使用本领域中熟知的方法和信息制备用于产生抗体。

还参见EP2552957、WO/2012/116453、WO/2012/032080。还参见Zybody^TM，http：//www.zyngenia.com/technology.html。还参见仅含人重链的抗体技术，http：//www.crescendobiologics.com。还参见WO2010001251，基于酵母的人抗体基于酵母的平台http：//www.adimab.com/science-and-technology/technology-overview/，mAbLogix^TM平台http：//www.dna.com/technology，单克隆发现平台http：//www.igenica.com/technology/，WO2009/157771，EP2560993，WO2013004842，WO2012166560。

连接子部分(L)

本发明组合物另外包括连接子部分(L)。因为具有有效负载(P)，所以从本发明组装偶联物的角度表征连接子部分(L)。因此，如本文表征的连接子(L)没有必要但可以对应于用于合成偶联物的特定反应物。连接子(L)的组分可以由一些反应物贡献。

在一个实施方案中，连接子部分(L)是可以用于连接有效负载(P)和靶向部分(T)形成偶联化合物(T)-(L)-(P)的双官能团化合物。此类偶联物容许选择性地将药物递送至靶细胞(例如，肿瘤细胞)。在某些实施方案中，连接子部分包括二价取代基，诸如烷基二基、芳基二基、杂芳基二基、诸如-(CR₂)_nO(CR₂)_n-的部分、烷氧基的重复单元(例如，聚亚乙基氧基、PEG、聚亚甲基氧基)和烷基氨基的重复单元(例如，聚亚乙基氨基、Jeffamine^TM)；以及二酸酯和酰胺，包括琥珀酸酯、琥珀酰胺、二乙醇酸酯、丙二酸酯和己酰胺。本文所述化合物可以使用具有用于结合至有效负载和靶向部分的反应性位点的连接子部分来制备。

在一些实施例中，(L)具有反应性位点，其具有对存在于(T)上的亲核基团具有反应性的亲电子基团。(T)上的有用亲核基团包括(但不限于)巯基、羟基和氨基基团。(T)的亲和基团的杂原子对于(L)上的亲电子基团具有反应性，并形成至(L)的共价键。有用的亲电子基团包括(但不限于)马来酰亚胺和卤代乙酰胺基团。(T)上的亲核基团为连接至(L)提供方便位点。

在一些实施例中，(L)具有反应性位点，其具有对存在于靶向部分上的亲电子基团具有反应性的亲核基团。靶向部分上有用的亲电子基团包括(但不限于)醛和酮羰基。(L)的亲核基团的杂原子可以与靶向部分上的亲电子基团反应，并形成至靶向部分的共价键。(L)上的有用的亲核基团包括(但不限于)：酰肼、肟、氨基、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸酯和芳酰肼。靶向部分上的亲电子基团为连接至(L)提供方便位点。

羧酸官能团和氯甲酸酯官能团也是(L)的有用反应性位点，因为它们可以(例如)与P¹的氨基基团反应形成酰胺键。还可用作反应性位点的是(L)上的碳酸酯官能团，諸如(但不限于)碳酸对硝基苯酯，其可以(例如)与P¹的氨基基团反应形成氨基甲酸酯键。

应当理解，现有技术中教示的任何连接子部分和尤其那些教示用于药物递送情境中的连接子部分都可以用于本发明中。在不限制前面陈述范围的情况下，在一个实施方案中，(L)包括WO 2012/113847中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.8,288,352中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.5,028,697中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.5,006,652中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.5,094,849中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.5,053,394中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.5,122,368中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.5,387,578中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.5,547,667中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.5,622,929中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.5,708,146中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.6,468,522中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.6,103,236中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.6,638,509中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.6,214,345中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.6,759,509中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2007/103288中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2008/083312中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2003/068144中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2004/016801中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2009/134976中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2009/134952中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2009/134977中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2002/08180中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2004/043493中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2007/018431中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2003/026577中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2005/077090中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2005/082023中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2007/011968中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2007/038658中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2007/059404中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，L’包含WO 2006/110476中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2005/112919中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括WO 2008/103693中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.6,756,037中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.7,087,229中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.7,122,189中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.7,332,164中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.5,556,623中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.5,643,573中公开的连接子部分。在另一个实施方案中，(L)包括U.S.5,665,358中公开的连接子部分。也可以使用含自牺牲组分的连接子(L)。例如参见美国专利号6,214,345。自牺牲组分的实例是p-氨基苄基氨基甲酰基(PABC)。本发明中可以使用可商购获得的连接子。例如，可以使用可商购获得的可裂解连接子6-[3′(2-吡啶基二硫基)-丙酰胺基]己酸磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-LC-SPDP：Thermo Pierce目录号21650)和不可裂解的连接子4-[N-马来酰亚胺甲基]环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(SMCC：Thermo Pierce目录号22360)，如本文所显示。还可以参见WO2012171020、WO2010138719，可商购获得的连接子系列，例如来自Concortis http：//www.concortis.com/home。还可参见Kim等人，Bioconjugate Chemistry，21(8)：1513-1519AUG 2010。还可参见EP2326349。还可参见copper-free click chemistry linkers，Angew.Chem.Int.Ed.，2010，49，第9422-9425页，ChemBioChem，2011，12，第1309-1312页，http：//www.synaffix.com/technology/。

在一些实施方案中，(L)包含：SPDP、SMCC、vcPABC、MCvcPABC、MTvc、ADvc、马来酰亚胺、NHS、生物素、链霉亲和素、中性抗生物素蛋白、糖苷或其组合。

在一些实施方案中，(L)包含SPDP。

在一些实施方案中，(L)包含SMCC。

在一些实施方案中，(L)包含vcPABC。

在一些实施方案中，(L)包含MCvcPABC。

在一些实施方案中，(L)包含MTvc。

在一些实施方案中，(L)包含ADvc。

在一些实施方案中，(L)包含马来酰亚胺。

在一些实施方案中，(L)包含NHS。

在一些实施方案中，(L)包含生物素。

在一些实施方案中，(L)包含链霉亲和素。

在一些实施方案中，(L)包含中性抗生物素蛋白。

在一些实施方案中，(L)包含糖苷。

在一些实施方案中，(L)不存在。

在一个实施方案中，连接子(L)是将有效负载(P)连接至靶向部分(T)以形成偶联组合物[(P)-(L)]_m-(T)的双功能单元，其可以在(P)与(L)之间的接合肽键(JPB)处酶裂解以释放(P)。此类偶联物容许选择性地将有效负载(P)递送至靶细胞(例如，肿瘤细胞)。在另一个实施方案中，连接子(L)是将有效负载(P)连接至靶向部分(T)以形成偶联组合物[(P)-(L)]_m-(T)的双功能单元，其可以在(P)与(L)之间酶裂解以释放(P)。

某些连接子(L)能够结合至多个有效负载(P)和靶向部分(T)。因此，在某些实施方案中，连接子(L)是将超过一个有效负载(P)连接至单个靶向部分(T)以形成偶联物[(P)-(L)]_m-(T)的多功能单元。此外，有效负载(P)可以多聚体化，并结合至连接子(L)。因此，应当理解，在某些实施方案中，[(P)-(L)]包含的(P)数量大于(L)。在某些实施方案中，[(P)-(L)]中的有效负载(P)和连接子(L)具有相同数量。在式I的一个实施方案中，本发明提供具有式(Ia)结构的组合物：

[(P)_o-(L)]_m-(T)

(Ia)

其中o是1至1000的整数。在一个实施方案中，o是1至100的整数。在另一个实施方案中，o是1至50的整数。在另一个实施方案中，o是1至20的整数。在另一个实施方案中，o是1至10的整数。

在某些实施方案中，连接子(L)和靶向部分(T)一起具有以下结构(III)：

其中(AA)¹的羰基与结构(II)中键合至(R)的-NH-基团形成本文中称为接合肽键(JPB)的肽键，其中JPB是可以酶裂解的，其中每个AA独立地为氨基酸，其中x为0至25的整数，其中(L’)是连接子(L)的剩余部分(如果有的话)，其中(T)是靶向部分，且其中(AA)¹-(AA)_X包含能够促进JPB的酶裂解的氨基酸序列。

氨基酸单元(AA)¹-(AA)_X包含使接合肽键(JPB)裂解以从靶向部分(T)释放有效负载(P)的识别序列。可以使用任何能够提供此类酶裂解的序列。此类序列包括(但不限于)US 6,214,345中所述的适用序列。例如，本发明中可以使用本领域中已知直接使将PABC自牺牲单元直接连接至所述氨基酸序列的肽键直接裂解的氨基酸序列。其它可用于本发明中的氨基酸序列可以由技术人员通过实验轻易确定。在本发明的某些实施方案中，氨基酸单元(AA)¹-(AA)_X容许通过蛋白酶裂解(JPB)，从而促进有效负载(P)在暴露至此类蛋白酶时从偶联物释放。在本发明的某些实施方案中，这些酶包括细胞内蛋白酶，诸如溶酶体酶。在本发明的其它实施方案中，这些酶包括细胞外蛋白酶。

示例性氨基酸单元(AA)¹-(AA)_X包括(但不限于)二肽、三肽、四肽和/或五肽。示例性二肽包括：Val-Cit、Ala-Phe、Phe-Lys、Val-Ala、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys(Ac)或Me-Val-Cit。应注意，虽然肽和蛋白质的命名惯例是从N-末端到C-末端列出氨基酸序列，但JPB的构型使得(AA)¹是(AA)¹-(AA)_X氨基酸序列中的C-末端序列。因此，在一个其中促进JPB的酶裂解的氨基酸序列是缬氨酸-瓜氨酸的实施方案中，式(in)中的(AA)¹将是瓜氨酸，且瓜氨酸的羰基将与结构(II)中键合至(R)的-NH-基团形成JPB。在一些实施方案中，其它氨基酸通过缬氨酸的N-末端连接至缬氨酸-瓜氨酸，且因此(AA)_X的“x”是大于1的整数。

示例性三肽包括：Gly-Val-Cit、Pro-Pro-Pro、D-Ala-Phe-Lys、(D)-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg和Ala-Ala-Asn。为了说明和清楚起见，当三肽是(gly-val-cit)时，式(III)的(AA)¹是瓜氨酸。氨基酸单元可以包含天然存在的氨基酸残基以及次要氨基酸和非天然存在的氨基酸类似物如瓜氨酸。本发明包括使用D-氨基酸。氨基酸单元的选择性可以被设计和优化来用于通过特定酶(例如肿瘤相关蛋白酶、组织蛋白酶B、C和D或血纤维蛋白溶酶蛋白酶)进行酶裂解。

示例性四肽包括：Lys-Ser-Gly-Arg、Gly-Phe-Leu-Gly、Leu-Ser-Gly-Arg、Ala-Leu-Ala-Leu、Gly-Gly-Gly-Arg-Arg、Gly-Lys-Ala-Phe-Arg-Arg和HomoGly-Arg-Ser-Arg-Gly。

用于本发明连接子中的示例性氨基酸序列包括Phe-Lys、Val-Lys、Ala-Lys、Val-Cit、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Trp-Cit、Phe-Arg中的氨基酸序列。已经使用这些序列来释放多柔比星。参见例如，表1，Dubowchik，Firestone等人Bioconjugate Chem.2002，13，855-869和其中包含的参考文献。用于本发明连接子中的另一示例性氨基酸序列是Pro-Pro(参见例如，Gianolio等人Cancer Chemother Pharmacol 2012 70，439-449)。关于可用于本发明的氨基酸序列，还可以参见Firestone等人的US 6,214,345。关于可用于本发明的氨基酸序列(包括(但不限于)含非天然氨基酸的氨基酸序列)而言，还可以参见Miao等人的WO 2013/173392。还可以参见Dubowchik等人，Bioorganic&Med.Chem.Letters 8：3341-3346，1998。还可以参见Burke等人，Bioorganic&Med.Chem.Letters 19：2650-2653，2009。还可以参见Jeffrey等人，Bioorganic&Med.Chem.Letters 16：358-362，2006。技术人员将了解，可以在促进JPB的酶裂解的氨基酸序列的N末端侧的连接子(L)中包括其它氨基酸。

在一个实例中，JPB可以通过与疾病相关的蛋白酶裂解。在另一个实例中，JPB可以通过上调或一般与癌症相关的蛋白酶裂解。在另一个实施方案中，JPB可以通过由癌症相关细胞分泌的蛋白酶裂解。在另一个实例中，JPB可以通过上调或与具体癌症相关的酶裂解。

在本发明的某些实施方案中，连接子(L’)的剩余部分包括氨基酸单元、(AA)¹-(AA)_X与靶向部分(T)间的延伸部分(S)，如以下结构(VII)或(VIII)中所示：

其中(AA)¹的羰基与结构(II)中键合至(R)的-NH-基团形成本文中称为接合肽键(JPB)的肽键，其中JPB是可以酶裂解的，其中每个AA独立地为氨基酸，其中x为0至25的整数，其中L″是连接子(L’)的剩余部分(如果有的话)，其中(S)是延伸单元，其中(T)是靶向部分，且其中(AA)¹-(AA)_X包含能够促进JPB的酶裂解的氨基酸序列。

在本发明的特定实施方案中，这个延伸单元如US 7,964,566和US 6,214,345中所述。

有效负载部分(P)

因为具有连接子部分(L)，所以从本发明组装偶联物的角度描述有效负载(P)。因此，如本文表征的有效负载(P)没有必要但可以对应于用于合成偶联物的特定反应物。有效负载(P)的组分可以由一些反应物贡献。

可使用多种化合物来组装本发明偶联物的期望有效负载(P)组分。任何起到酰胺功能的化合物(如式(IV)中一样，或如含N-酰基磺酰胺-(R)-NH₂基团的化合物(如式(V)中一样))都可以使用本发明的偶联技术递送至靶细胞或组织。任何可用于(直接或在进行适当修饰后)产生式(IV)的酰胺或式(V)的N-酰基磺酰胺-(R)-NH₂化合物的前体化合物都可以用于本发明中。特别优选的是含酰胺的药物、具有活性酰胺衍生物的含羧酸的药物、含羧酸药物和具有式(V)的药物。用于产生式(I)偶联物的合成途径和特定反应物不具有限制性。作为有效负载(P)包括在生物活性化合物范围内的是可以在体内活化的前体。

在一个实施方案中，可以使用式(I)的偶联物来递送式(IV)或(V)的生物活性化合物。可以有利地通过本发明组合物递送至目标位置的合适有效负载化合物(P)包括(例如)抗生素、诊断剂(例如可检测标记)、抗炎剂、抗病毒剂、细胞毒性剂和抗癌药物。其它适宜的有效负载(P)包括本领域中已知的诊断剂，包括那些采用一或多种各种可检测标记的诊断剂。可检测标记可以是报道子(reporter)，诸如放射性同位素如¹²⁵I、酶、荧光试剂或基团如荧光素、四甲基罗丹明、菁染料、Alexa染料或BODIPY染料、化学发光试剂或基团、或电化学材料。可检测的标记也可以是如本领域中已知的特异性结合对的成员。其它合适的可检测标记对于技术人员来说将是显而易见的。

在一个实施方案中，式(IV)或(V)化合物示出细胞毒性或细胞抑制活性。本发明提供用于将式(IV)或(V)的生物活性化合物递送至受关注的细胞的组合物和方法。

在一个实施方案中，(P)是药物化合物(D)。在一个实施方案中，(D)是具有以下结构(XVIII)的化合物：

或其立体异构体、前药或药学上可接受的盐，其中：

R₁选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基、任选地被取代的杂芳基、-COR₂₄-、-CSR₂₄-、-OR₂₄-和-NHR₂₄-，其中每个R₂₄独立地为任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基；

R₃选自由H和C_1-6烷基组成的组；

R₄选自由H和C_1-6烷基组成的组；且

R₅选自由C_1-6烷基和-SH组成的组。

在另一个实施方案中，R₂选自以下结构(A)、(B)、(C)、(D)中的一个：

其中：

每个Q独立地为CR₂₉或N；

每个Z独立地为C(R₂₉)₂、NR₂₉、S或O；

在另一个实施方案中，R₂选自由以下组成的组：

在另一个实施方案中，R₂是：

在一个实施方案中，R₂选自由以下组成的组：

在另一个实施方案中，R₃、R₄和R₅各自为甲基。

在另一个实施方案中，R₃是H，R₄是甲基，且R₅是甲基。

应理解，结构(XVIII)的化合物的任何实施方案(如上文所阐述)和本文针对结构(XVIII)化合物中R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₂₈或R₂₉基团所阐述的任何具体取代基(如本文所阐述)可以独立地与结构(XVIII)化合物的其它实施方案和/或取代基组合形成上文没有具体阐述的本公开的实施方案。此外，如果特定实施方案和/或权利要求中针对任何特定R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₂₈或R₂₉基团列出取代基列表，应理解，可从所述特定实施方案和/或权利要求缺失每个个别取代基，且剩余的取代基列表将视为在本公开的范围内。

在另一个实施方案中，(D)是具有以下结构(XVI)的化合物：

或其立体异构体、前药或药学上可接受的盐，其中：

R₈和R₉独立地选自由以下组成的组：H、R′、ArR′-或R₈和R₉连接形成环；

R₁₀选自由以下组成的组：H、R′、ArR′-和Ar；

或者R₁₀和R₇稠合并形成环；

R₁₁选自由以下组成的组：H、R′和ArR′-；

R₁₂和R₁₃独立地选自由以下组成的组：H、R′和ArR′-；且

R₄₀是：

其中：

由连接R₈和R₉所形成的环是在R′定义内的三元至七元非芳族环状骨架，

Y被定义为选自由以下组成的组的部分：直链饱和或不饱和的1至6个碳的烷基，其任选地被R′、ArR′-或X取代；且

在一个实施方案中，R₁₅选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基。

在一个实施方案中，Ar是选自由苯基、萘基、蒽基、吡咯基所组成的组的芳族环。

在另一个实施方案中，R₁₀选自以下结构(A)、(B)、(C)、(D)中的一个：

其中：

每个Q独立地为CR₂₉或N；

每个Z独立地为C(R₂₉)₂、NR₂₉、S或O；

在另一个实施方案中，R₁₀选自由以下组成的组：

在另一个实施方案中，R₁₀是：

在另一个实施方案中，R₆和R₇各自为甲基。

在另一个实施方案中，R₆是H，且R₇是甲基。

在一个实施方案中，R₁₂是C4支链烷基。

应理解，结构(XVI)化合物的任何实施方案(如上文所阐述)和本文针对结构(XVI)的化合物中R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、R₁₅、R₁₆、R₂₈或R₂₉基团所阐述的任何具体取代基(如本文所阐述)可以独立地与结构(XVI)化合物的其它实施方案和/或取代基组合形成上文没有具体阐述的本公开的实施方案。此外，如果特定实施方案和/或权利要求中针对任何特定R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、R₁₅、R₁₆、R₂₈或R₂₉列出取代基的列表，应理解，可从所述特定实施方案和/或权利要求缺失每个个别取代基，且剩余的取代基列表将视为在本公开的范围内。

在一些实施方案中，(P)是式(XXV)的化合物的单价基团：

其中：

R⁵¹选自：芳基、C₃-C₇环烷基和杂芳基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₄酰硫基、C₂-C₄烯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷基氨基、C₁-C₄烷氧基、氨基、氨基-C₁-C₄烷基、卤基、C₁-C₄卤代烷基、羟基、羟基-C₁-C₄烷基和硫基，其中C₂-C₄烯基、C₁-C₄烷基氨基和C₁-C₄烷氧基进一步任选地被一个选自C₁-C₄烷基芳基、羟基和硫基的取代基取代；

R⁵²和R⁵³各自独立地选自：H和C₁-C₆烷基。

R⁵⁴选自由C_1-6烷基和硫基组成的组；且

R⁵⁵选自：C₁-C₆烷基、芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、杂芳基和杂环基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷氧基羰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基氨基、氨基、氨基-C₁-C₆烷基、氨基-芳基、氨基-C₃-C₇环烷基、芳基、甲酰胺、羧基、C₃-C₇环烷基、氰基、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆卤代烷氧基、卤基、羟基、硝基、硫基和硫代-C₁-C₆烷基；且

在一些实施方案中，R⁵¹选自：H、芳基、C₃-C₇环烷基和杂芳基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：C₁-C₄酰硫基、C₂-C₄烯基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷基氨基、C₁-C₄烷氧基、氨基、氨基-C₁-C₄烷基、卤基、C₁-C₄卤代烷基、羟基、羟基-C₁-C₄烷基和硫基，其中C₂-C₄烯基、C₁-C₄烷基氨基和C₁-C₄烷氧基进一步任选地被一个选自对甲苯基、羟基和硫基的取代基取代。

在一些实施方案中，R⁵¹选自：H、芳基、C₃-C₇环烷基和杂芳基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：(2-羟乙基)氨基、(2-巯基乙基)氨基、2-(乙酰硫基)乙氧基、2-氨基乙氧基、2-羟基乙氧基、2-巯基乙氧基、3-甲氧基、4-甲基苯乙烯基、氨基、氨基甲基、氯、氟、羟基、羟甲基、甲基、硫基、三氟甲基。

在一些实施方案中，R⁵¹选自：H、环己基、1H-吲哚-3-基、苯基和噻吩-2-基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：(2-羟乙基)氨基、(2-巯基乙基)氨基、2-(乙酰硫基)乙氧基、2-氨基乙氧基、2-羟基乙氧基、2-巯基乙氧基、3-甲氧基、4-甲基苯乙烯基、氨基、氨基甲基、氯、氟、羟基、羟甲基、甲基、硫基和三氟甲基。

在一些实施方案中，R⁵¹选自：H、1H-吲哚-3-基、1-甲基-1H-吲哚-3-基、2-甲氧基苯基、3-((2-羟乙基)氨基)苯基、3-((2-巯基乙基)氨基)苯基、3-(2-(乙酰硫基)乙氧基)苯基、3-(2-羟基乙氧基)苯基、3-(2-巯基乙氧基)苯基、3-(4-甲基苯乙烯基)苯基、3-(氨基甲基)苯基、3-(羟甲基)苯基、3-羟基苯基、3，5-二氟苯基、3，5-二甲基苯基、3-氨基苯基、3-氯苯基、3-巯基苯基、3-甲氧基苯基、3-三氟甲基苯基、4-((2-羟乙基)氨基)苯基、4-((2-巯基乙基)氨基)苯基、4-(2-(乙酰硫基)乙氧基)苯基、4-(2-氨基乙氧基)苯基、4-(2-羟基乙氧基)苯基、4-(2-巯基乙氧基)苯基、4-(氨基甲基)苯基、4-(羟甲基)苯基、4-氨基苯基、4-羟基苯基、4-巯基苯基、4-甲氧基苯基、环己基、噻吩-2-基、间甲苯基和苯基。

在一些实施方案中，R⁵¹选自：H、1H-吲哚-3-基、1-甲基-1H-吲哚-3-基、2-甲氧基苯基、3-((2-羟乙基)氨基)苯基、3-((2-巯基乙基)氨基)苯基、3-(2-羟基乙氧基)苯基、3-(2-巯基乙氧基)苯基、3，5-二氟苯基、3，5-二甲基苯基、3-氯苯基、3-巯基苯基、3-甲氧基苯基、3-三氟甲基苯基、4-((2-羟乙基)氨基)苯基、4-((2-巯基乙基)氨基)苯基、4-4-(2-羟基乙氧基)苯基、4-(2-巯基乙氧基)苯基、4-巯基苯基、4-甲氧基苯基、环己基、噻吩-2-基、间甲苯基和苯基。

在一些实施方案中，R⁵¹是苯基。

在一些实施方案中，R⁵²是H。

在一些实施方案中，R⁵²是甲基。

在一些实施方案中，R⁵³是甲基。

在一些实施方案中，R⁵⁴是甲基。

在一些实施方案中，R⁵⁵选自：C₁-C₆烷基、芳基、芳基-C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、杂芳基和杂环基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：1-氨基环丙基、4-氨基苯基、氨基、氨基甲基、溴、叔丁基、甲酰胺、羧基、氯、氰基、环戊基、乙基、氟、羟基、异丙基、甲氧基、甲基、硝基、苯基、吡啶-3-基、硫基、硫代甲基、三氟甲氧基和三氟甲基。

在一些实施方案中，R⁵⁵选自：5，6，7，8-四氢萘-1-基、苄基、环己基、乙基、己-2-基、甲基、萘-2-基、哌啶-1-基、苯基、丙基、吡啶-3-基和噻吩-2-基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：1-氨基环丙基、4-氨基苯基、氨基、氨基甲基、溴、叔丁基、甲酰胺、羧基、氯、氰基、环戊基、乙基、氟、羟基、异丙基、甲氧基、甲基、硝基、苯基、吡啶-3-基、硫基、硫代甲基、三氟甲氧基和三氟甲基。

在一些实施方案中，R⁵⁵选自：4-氨基苄基、4-(氨基甲基)苄基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基、苄基、3-巯基丙基、2-巯基乙基、4-(巯基甲基)苯基、对甲苯基、甲基、2，4，6-三甲基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、2，4，6-三异丙基、4-叔丁基苯基、4-氯苯基、3-氰基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、4-氨基羰基-2-硝基苯基、4-甲氧基苯基、4-氨基苯基、苯基、2-氟苄基、哌啶-1-基、邻甲苯基、4-溴苯基、萘-2-基、4-甲氧羰基苯基、2-(三氟甲基)苄基、己-2-基、2-甲氧基乙基、环戊基甲基、环己基、吡啶-3-基甲基、4-羧基苯基、3-氨基苯基、吡啶-3-基、噻吩-2-基、4-羟基苯基、4-(1-氨基环丙基)苄基、4-(1-氨基环丙基)苯基、2-甲基苄基、4-硝基苄基、4-氯苄基、苯乙基、4-溴苄基、4-氰基苄基、3-硝基苄基、4-叔丁基苄基、2-硝基苄基、4-硝基苯乙基、2-氯-3-甲氧羰基苯基、2-氨基苯基、[1，1′-联苯]-4-基、4′-氨基-[1，1′-联苯]-4-基、4-氟苄基、3-(三氟甲基)苄基、3-(三氟甲氧基)苄基、3，4-二氯苄基、2-氰基苄基、3-氯苄基、4-氨基-2-乙基苯基、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯基、4-氨基-2，3-二甲基苯基、4-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基、4-氨基-3-甲基苯基、4-氨基-3-氟苯基、4-氨基-3-乙基苯基和4-氨基-3-(三氟甲基)苯基。

在一些实施方案中，R⁵⁵选自：芳基和芳基-C₁-C₆烷基，它们各自任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：氨基和氨基-C₁-C₆烷基。

在一些实施方案中，R⁵⁵选自：4-氨基苄基、4-(氨基甲基)苄基、4-(氨基甲基)苯基、4-氨基苯基和苄基。

在一些实施方案中，R⁵⁵是4-氨基苄基。

在一些实施方案中，R⁵⁵是4-(氨基甲基)苄基。

在一些实施方案中，R⁵⁵是4-(氨基甲基)苯基。

在一些实施方案中，R⁵⁵是4-氨基苯基。

在一些实施方案中，R⁵⁵是苄基。

在一些实施方案中，P是国际申请号PCT/US 14/29463或美国系列号14/213,504中所公开的化合物的单价基团。

在另一个实施方案中，(D)具有以下结构(XVII)：

或其立体异构体、前药或药学上可接受的盐；其中：

R₁₉选自由H和C_1-6烷基组成的组；

R₂₀选自由H和C_1-6烷基组成的组；

R₂₁和R₂₇独立地选自由H、C_1-6烷基和-SH组成的组，条件为R₂₁和R₂₇不能都是H；

R₂₂、R₂₃、R₂₄和R₂₅独立地为H和C_1-6烷基，R₂₂和R₂₃中的至少一个是H；或R₂₃和R₂₄形成双键，R₂₂是H，且R₂₅是H或C_1-6烷基；且

R₂₆选自由H和C_1-6烷基组成的组。

在一个实施方案中，R₁₇选自由以下组成的组：任选地被取代的烷基、任选地被取代的烷基氨基、任选地被取代的环烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂环基和任选地被取代的杂芳基。

在另一个实施方案中，R₁₈选自以下结构(A)、(B)、(C)、(D)中的一个：

其中：

每个Q独立地为CR₂₉或N；

每个Z独立地为C(R₂₉)₂、NR₂₉、S或O；

在另一个实施方案中，R₁₈选自由以下组成的组：

在另一个实施方案中，R₁₈是：

在另一个实施方案中，R₁₉、R₂₀、R₂₁和R₂₇各自为甲基。

在另一个实施方案中，R₁₉是H，R₂₀是甲基，R₂₁是甲基，且R₂₇是甲基。

应理解，结构(XVII)的化合物的任何实施方案(如本文阐述)和本文针对结构(XVII)化合物中R₁₇、R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂、R₂₃、R₂₄、R₂₅、R₂₆、R₂₇、R₂₈或R₂₉基团所阐述的任何具体取代基(如上文阐述)可以独立地与结构(XVII)化合物的其它实施方案和/或取代基组合形成上文没有具体阐述的本公开的实施方案。此外，如果特定实施方案和/或权利要求中针对任何特定R₁₇、R₁₈、R₁₉、R₂₀、R₂₁、R₂₂、R₂₃、R₂₄、R₂₅、R₂₆、R₂₇、R₂₈或R₂₉基团列出取代基列表，应理解，可从所述特定实施方案和/或权利要求缺失每个个别取代基，且剩余的取代基列表将视为在本公开的范围内。

在一些实施方案中，(P)是细胞毒性化合物。

在一些实施方案中，(P)是微管干扰肽毒素。

在一些实施方案中，(P)是哈米特林(hemiasterlin)或其类似物。

在一些实施方案中，(P)是微管溶素(tubulysin)或其类似物。

在一些实施方案中，(P)是澳瑞他汀(auristatin)或其类似物。

在一些实施方案中，(P)是细胞毒性化合物，例如以下文献中公开的化合物：U.S.7,579,323；WO 2004/026293；U.S.8,129,407；US 2014/0227295；WO 2013/068874；US 2013/0095123；US 2013/0190243；WO 2014/126198；EP 2740493；WO 2014086942；WO 2013072813；WO 2012166559；WO 2012166560；WO 2012123423；WO 2011154359；WO 2006063707；WO 2003008378；WO 2002000263；US 2013/224,228；WO 2013/085925；WO 2014/009774；US 8,476,451；U.S.2011/0027274；或相关申请或专利、或Lundquist等人，Organic Letters，(3)，第781-783页，2001；Domling等人，Angew.Chem.Int.Ed.2006，45，7235-7239；Kaur等人，Biochem J.，(2006)，396：235-242；Steinmetz等人，Angew.Chem.Iht.Ed.2004，43，4888-4892；Khalil等人，ChemBioChem 2006，7，678-683；Peltier等人，J.AM.CHEM.SOC.2006，128，16018-16019。在一些实施方案中，细胞毒性化合物是来自石海红头属石海绵种(Lithoplocamia lithistoides)的聚酮化合物。来自石海红头属石海绵种的聚酮化合物的实例包括Martin等人，J.Am.Chem.Soc.2013，135，10164-10171中公开的那些。在一些实施方案中，来自石海红头属石海绵种的聚酮化合物选自：PM050489和PM060184。

在本发明的某些实施方案中，式(I)的偶联物通过使(T)与具有以下结构(XIII)的(P)-(L)前体偶联来制备：

(P)-(L)-(FG)

(XIII)，

其中FG是与靶向部分(T)的一或多个原子形成共价键的官能团。在本发明的其它实施方案中，FG与(T)的杂原子形成键。

在本发明的特定实施方案中，FG基团包括马来酰亚胺。如技术人员将了解，可以使用其它部分和键合技术，包括(但不限于)转谷氨酰胺酶序列、2-溴乙酰胺化学、糖基化化学等。参见例如WO2013173391、WO2013173392、WO2013173393和US 7,964,566中公开的连接化学。

就施用目的而言，本公开的化合物可以作为化学原料施用或可以配制成药物组合物。本本公开的药物组合物包含结构(I)的化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。结构(I)的化合物以有效治疗受关注的特定疾病或病症的量-也就是以足以治疗癌症或肿瘤细胞生长，且优选对患者具有可接受的毒性的量存在于组合物中。结构(I)的化合物的活性可以通过本领域的技术人员测定，例如，如下文实施例中所述。本领域的技术人员可以轻易确定合适的浓度和剂量。

以纯净形式或合适药物组合物施用本公开的化合物或其药学上可接受的盐可以通过任何公认的起到类似效用的药剂的施用模式进行。本公开的药物组合物可以通过合并本公开的化合物与合适的药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂来制备，且可以配制成呈固体、半固体、液体或气体形式的制剂，诸如片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、膏剂、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶、微球和气雾剂。施用此类药物组合物的典型途径包括(但不限于)口服、局部、经皮、吸入、肠胃外、舌下、颊部、直肠、阴道和鼻内。如本文所使用，术语肠胃外包括皮下注射、静脉内、肌肉内、胸骨内注射或输注技术。本公开的药物组合物经过配制，以容许其中所含活性成分在将组合物施用至患者时具有生物可利用性。将施用至受试者或患者的组合物采用一或多种剂量单位的形式，其中例如片剂可以是单个剂量单位，且呈气雾剂形式的本公开的化合物的容器可以容纳多个剂量单位。制备此类剂型的实际方法对本领域中技术人员而言是已知的或将是显而易见的；例如，参见Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第20版(Philadelphia College of Pharmacy and Science，2000)。在任何情况下，待施用的组合物将包含治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐，以用于按照本公开的教示治疗受关注的疾病或病症。

本公开的药物组合物可以呈固体或液体形式。在一个方面，载体是颗粒，以使得组合物是呈(例如)片剂或粉末形式。载体可以是液体，其中组合物是(例如)口服糖浆、可注射液体或气雾剂，其可以用于(例如)吸入施用。

当打算口服施用时，本公开的药物组合物通常是固体或液体形式，其中半固体、半液体、悬浮液和凝胶形式都包括在本文视为固体或液体的形式内。

作为口服施用的固体组合物，可以将药物组合物配制成粉剂、颗粒剂、压片、丸剂、胶囊、口香糖、糯米纸(wafer)或类似形式。此种固体组合物通常将包含一或多种惰性稀释剂或可食用载体。此外，可以存在以下的一种或多种：粘合剂，诸如羧甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素、西黄蓍胶或明胶；赋形剂，诸如淀粉、乳糖或糊精，崩解剂，诸如，海藻酸、海藻酸钠、Primogel、玉米淀粉等；润滑剂，诸如硬脂酸镁或Sterotex；助流剂，诸如胶体二氧化硅；甜味剂，诸如蔗糖或糖精；调味剂，诸如薄荷、水杨酸甲酯或橙香精；和着色剂。

当药物组合物呈胶囊形式如明胶胶囊时，其除上述类型的材料以外还可以包含液体载体，诸如聚乙二醇或油。

本公开的药物组合物可以呈液体形式，例如，酏剂、糖浆、溶液、乳液或悬浮液。所述液体可以口服施用或通过注射递送，这是作为两个实例。当意在口服施用时，本公开的药物组合物出本发明化合物以外通常还包含甜味剂、防腐剂、染料/着色剂和风味增强剂中的一种或多种。在意在通过注射施用的组合物中，可以包括表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、缓冲剂、稳定剂和等渗剂中的一种或多种。

无论是溶液、悬浮液或其它类似形式，本公开的液体药物组合物都可以包含以下佐剂中的一种或多种：无菌稀释剂，诸如注射用水、盐水溶液(优选为生理盐水、林格氏溶液、等渗氯化钠)、固定油(诸如合成的单甘油酯或二甘油酯，其可以充当溶剂或悬浮介质)、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它溶剂；抗菌剂，诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂，诸如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，和用于调节渗透压的试剂如氯化钠或右旋糖。肠胃外制剂可以封闭在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。生理盐水是优选的佐剂。可注射药物组合物优选是无菌的。

意在肠胃外或口服施用的本公开的液体药物组合物应当包含一定量本公开的化合物，使得将得到合适剂量。

本公开的药物组合物可以意在局部施用，在这种情况下，载体可以适当包括溶液、乳液、软膏或凝胶基质。例如，基质可以包括以下中的一种或多种：矿脂、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蜡、矿物油、稀释剂如水和醇、以及乳化剂和稳定剂。用于局部施用的药物组合物中可以存在增稠剂。如果意在经皮施用，组合物可以包括经皮贴剂或离子电渗疗法装置。

本公开的药物组合物可以用于直肠施用，呈(例如)栓剂的形式，其将在直肠中融化并释放出药物。用于直肠施用的组合物可以包含含油基质作为合适的无刺激赋形剂。此类基质包括(但不限于)羊毛脂、可可油和聚乙二醇。

本公开的药物组合物可以包括各种改变固体或液体剂量单位的物理形式的材料。例如，组合物可以包括在活性成分周围形成涂料外壳的材料。形成涂料外壳的材料通常具有惰性，且可以选自例如糖、虫胶和其它肠溶包衣剂。或者，可以将活性成分封入明胶胶囊中。

可以将本公开的药物组合物制成可以作为气雾剂施用的剂量单位。术语气雾剂是用于表示多种系统，范围从那些具有胶体性质的系统到由加压包装组成的系统。可以通过液化或压缩气体或者通过分配活性成分的合适泵系统进行递送。本公开的化合物的气雾剂可以以单相、双相或三相系统递送，以便递送活性成分。气雾剂的递送包括必要的容器、激活器、阀、子容器等，它们可以一起形成试剂盒。本领域的技术人员无需过度实验便可以确定优选的气雾剂。

本公开的药物组合物可以通过制药领域内熟知的方法制备。例如，意在通过注射施用的药物组合物可以通过将本公开的化合物与无菌蒸馏水合并形成溶液来进行制备。可以添加表面活性剂来促进形成均匀溶液或悬浮液。表面活性剂是与本公开的化合物进行非共价相互作用以促进化合物在水性递送系统中溶解或均匀悬浮的化合物。

本公开的化合物或其药学上可接受的盐以治疗有效量施用，该治疗有效量将根据多种因素而变化，包括：所使用的具体化合物的活性；化合物的代谢稳定性和作用长度；患者的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；施用的方式和次数；排泄速率；药物组合；具体病症或病状的严重性；以及经受治疗的受试者。

本公开的化合物或其药学上可接受的衍生物也可以在施用一或多种其它治疗剂的同时、之前或之后施用。此类组合治疗包括施用包含本公开的化合物和一或多种其它活性剂的单一药物剂量制剂以及施用在其自己独立药物剂量制剂中的本公开的化合物和每种活性剂。例如，本公开的化合物和其它活性剂可以在单一口服剂量组合物中一起施用给患者，或者每种药剂分不同口服剂量制剂施用。当使用独立剂量制剂时，本公开的化合物和一或多种其它活性剂可以基本上在相同时间(也就是同时)或在不同交错时间(也就是依序)施用；组合治疗应理解为包括所有这些方案。

应当理解，在本说明书中，所绘示化学式的取代基组合和/或变形都是可以的，只要这些贡献得到稳定化合物。

本领域的技术人员还应理解，在本文所述合成过程中，中间化合物的官能团可能需要受到合适保护基的保护。此类官能团包括羟基、氨基、巯基和羧酸。如上所述，羟基的合适保护基包括三烷基甲硅烷基或二芳基烷基甲硅烷基(例如，叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基或三甲基甲硅烷基)、四氢吡喃基、苄基等，且氨基、脒基和胍基的合适保护基包括叔丁氧基羰基、苄氧基羰基等。巯基的合适保护基包括-C(O)-R″(其中R″是烷基、芳基或芳基烷基)、对甲氧基苄基、三苯甲基等。羧酸的合适保护基包括烷基、芳基或芳基烷基酯。可以根据本领域的技术人员已知和如本文所述的标准技术添加或移除保护基。保护基的使用详细描述在Green，T.W.和P.G.M.Wutz，Protective Groups in Organic Synthesis(1999)，第3版，Wiley中。如本领域的技术人员将理解，保护基也可以是聚合物树脂，诸如王氏树脂(Wang resin)、Rink树脂或2-氯三苯甲基氯树脂。

本领域的技术人员还将了解，虽然本公开的化合物的受保护衍生物本身可以不具有药理活性，但可以将它们施用给哺乳动物，并随后在体内代谢形成具有生理活性的本公开的化合物。因此，此类衍生物可以表述为“前药”。本公开的化合物的所有前药都包括在本公开的范围内。

此外，以游离碱或酸形式存在的本公开的化合物可以通过用合适无机或有机碱或酸，通过使用本领域的技术人员已知的方法转化为其药学上可接受的盐。本公开的化合物的盐可以通过标准技术转化为其游离碱或酸。

以下实施例说明制备本公开的化合物(也就是结构(I)的化合物)的各种方法：

[(P)-(L)]_m-(T)

(I)

其中(P)是有效负载化合物，(L)是连接子，(T)是靶向部分，且m是1至10的整数。在某些实施方案中，m为1。

应当理解，本领域的技术人员能够通过类似方法或通过合并本领域的技术人员已知的其它方法制备这些化合物。还应理解，本领域的技术人员将能够以与下文所述类似的方式，通过使用合适起始组分并根据需要修改合成参数制备下文没有具体说明的其它结构(I)的化合物。一般来说，起始组分可以从以下来源获得，诸如Sigma Aldrich、Lancaster Synthesis，Inc.、Maybridge、Matrix Scientific、TCI和Fluorochem USA等，或者根据本领域的技术人员已知的来源合成(参见例如Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms，and Structure，第5版(Wiley，2000年12月))或者如本文所述进行制备。

提供以下实施例是为了说明目的，且不具限制性。

合成P-L的一般方法

方案1

方案1示出用于合成P-L复合物的一般方案的特定实施方案。在本发明的另一个实施方案中，在添加氨基酸(例如，AA₁-AA₂)之前从毒素(或药物)移除保护基(PG₁)。在本发明的某些实施方案中，锚定部分(Anchor)包括可以与靶向部分形成共价键的官能团。在本发明的其它实施方案中，锚定部分包括延伸部分(Stretcher)。

方案2

方案2示出P-L复合物的汇集合成的一般方案的特定实施方案，其中有效负载与AA序列间的JPB在安装延伸部分和锚定部分之前组装。使用这种合成方法来生成以下化合物：化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E、化合物F、化合物G、化合物H、化合物I、化合物J、化合物K、化合物KK、化合物N、化合物X、化合物Z、化合物AA、化合物BB、化合物CC和化合物DD。

方案3

方案3示出P-L复合物的汇集合成的一般方案的特定实施方案，其中JPB设立在有效负载与已经含延伸和锚定官能度的蛋白水解序列之间。使用这种合成方法来生成以下化合物：化合物L、化合物M、化合物O、化合物P、化合物Q、化合物R、化合物s、化合物T、化合物U、化合物V和化合物W。

在本发明的某些实施方案中，一般方案包括如下文论述的程序。如技术人员将理解，这些程序说明本发明的某些实施方案，且可以用本领域中已知是合适的替代溶剂、试剂和保护基实施。

实施例

一般程序1：4-苯胺基磺酰胺合成

向起始苯胺在CH₂Cl₂(0.1M)中的搅拌悬浮液或溶液添加三氟乙酸酐(1.1当量)。允许搅拌反应约1h，此时在减压下将其浓缩。将残余物溶解于CHCl₃中两次，并以定量产率浓缩得到期望的三氟乙酰苯胺，分析结果正如预期。

将三氟乙酰苯胺(约8mmol)溶解于CHCl₃(10mL)中。在搅拌下添加氯磺酸(3当量)。将所得溶液加热至70℃，持续1h，然后冷却至室温，此时在搅拌下添加亚硫酰氯(2当量)。重新将所得双相混合物加热至70℃，持续15分钟。然后用CHCl₃稀释反应混合物两次，并在真空中浓缩来移除过量酸。

将所得苯基氯磺酸溶解于1，4-二噁烷(约10mL)中，并在0℃下在剧烈搅拌下将所得溶液逐滴添加至浓氨水溶液(10mL)中。通过添加1M柠檬酸淬灭反应并调节至pH＝3。在大多数情况下，磺酰胺沉淀并直接从水相中滤出；在产物不沉淀的情况下，用乙酸乙酯(约100mL)稀释反应，转移至分液漏斗，并用盐水洗涤有机相，然后经MgSO₄干燥，并浓缩得到期望的被4-三氟乙酰苯胺取代的磺酰胺。

一般程序2：三氟乙酰胺安装

向胺在1，4-二噁烷中的搅拌悬浮液添加三氟乙酸酐(1.1当量)。反应混合物从悬浮液转变成溶液，再变回悬浮液。通过TLC和/或HPLC-MS监测反应进程的完成。起始材料一旦完全消耗，用己烷或二乙醚稀释反应，在布氏漏斗上过滤，并在减压下干燥所得固体，得到纯净三氟乙酰胺。

一般程序3：DCC/DMAP介导的N-酰基磺酰胺形成

向酸在二氯甲烷中的搅拌溶液添加磺酰胺的溶液(1.3当量，在二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或其混合物中，根据需要)。添加二环己基碳二亚胺(1.2当量)，随后添加N，N-二甲基氨基吡啶(1.2当量)。通过HPLC-MS监测反应过程(通常16h)，且可以通过添加二乙醚使副产物沉淀。通过过滤移除固体，并用1∶1二乙醚/二氯甲烷洗涤。浓缩合并的有机层，并通过硅胶色谱法纯化残余物以得到期望的N-酰基磺酰胺。

一般程序4-替代方案-酰基苯并三唑介导的N-酰基磺酰胺形成。

这个程序是从ARKIVOC 2004(xii)，14-22中所述的方法改编而来。

一般程序5：三氟乙酰胺皂化

向含三氟乙酰胺的构建体在1，4-二噁烷或甲醇中的溶液添加氢氧化锂(10当量)和水(10％v/v)。允许在室温下搅拌反应或任选地加热至50℃。通过HPLC-MS监测反应过程。完成时，在减压下移除挥发物，并用5％w/v柠檬酸水溶液或1M盐酸淬灭水层。用二氯甲烷或乙酸乙酯连续洗涤所得水溶液，并汇集有机相，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。反应产物“按原样”使用或根据需要通过硅胶色谱法纯化。

一般程序6：HATU介导的肽键形成

在0℃下向羧酸在最少量二氯甲烷或N，N-二甲基甲酰胺或其混合物中的搅拌溶液添加HATU(1.05-1.2当量)和N，N-二异丙胺(2-4当量)或2，4，6-可力丁(collidine)(2-4当量)。继续搅拌，持续短暂的诱导期(5-20分钟)，此时给反应加入胺在二氯甲烷中的溶液。让反应升温至室温并通过HPLC-MS监测进程。完成时，在减压下移除挥发物，并通过硅胶色谱法或反相HPLC纯化残余物质，提供纯度足够的酰胺。

一般程序7：EDCI/Cu(II)介导的肽键形成。

向羧酸在最少量30％N，N-二甲基甲酰胺中的二氯甲烷溶液中的搅拌溶液按顺序添加1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(0.95当量)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(1.0当量)、胺(0.33当量)和无水氯化铜(II)(1.0当量)，添加每种试剂之间有短暂停顿。继续在室温下搅拌，并通过HPLC-MS监测反应进程。完成时，在减压下移除挥发物，并通过硅胶色谱法或反相HPLC纯化残余物质，提供纯度足够的期望酰胺。

一般程序8：移除FMOC基团

将受Fmoc保护的化合物溶解于20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液。通过HPLC-MS监测反应过程。当完成时，在减压下移除所有挥发物，得到残余物，其通过硅胶色谱法纯化或直接用于下一步骤中。

一般程序9：使用NHS活化酯使胺N-酰化

向胺在最少量N，N-二甲基甲酰胺中的溶液添加含对应N-羟基琥珀酰亚胺的酯(1.5当量)。通过HPLC-MS监测反应进程(通常约16h)，此时在减压下移除所有挥发物。然后通过硅胶色谱法或反向HPLC纯化残余物，以得到期望的酰胺产物。

一般程序10：移除Boc基团

向受Boc保护的化合物在二氯甲烷中的溶液添加10％v/v三氟乙酸。通过HPLC-MS监测反应过程。反应完成时，在减压下移除所有挥发物。通过反向HPLC、硅胶色谱法或从冷甲醇/二氯甲烷/二乙醚的混合物沉淀出而纯化残余物质。

一般程序11：酯皂化。

向含酯的化合物在1，4-二噁烷或甲醇中的溶液添加氢氧化锂(10当量)和水(10％v/v)。允许在室温下搅拌反应或任选地加热至50℃。通过HPLC-MS监测反应过程。完成时，在减压下移除挥发物，必要时调节水层的pH，并用二氯甲烷或乙酸乙酯连续洗涤。汇集有机相，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。反应产物“按原样”使用或根据需要通过硅胶色谱法纯化。

常见反应物：

化合物1：Fmoc-Phe-Lys(Boc)-OH：(S)-2-((S)-2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)-3-苯基丙酰胺基)-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸；Fmoc-苯丙氨酸-赖氨酸(Boc)-OH

根据Walker等人，Bioorganic Med Chem Lett，2004，14，4323-4327制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.28(d，J＝7.7Hz，1H)，7.89(d，J＝7.6Hz，2H)，7.71-7.57(m，2H)，7.41(td，J＝7.6，3.8Hz，2H)，7.33(t，J＝7.5Hz，2H)，7.30-7.23(m，4H)，7.19(t，J＝7.3Hz，1H)，6.79(t，J＝5.6Hz，1H)，4.37-4.24(m，1H)，4.24-4.07(m，5H)，3.02(dd，J＝13.8，3.5Hz，1H)，2.95-2.83(m，2H)，2.83-2.71(m，1H)，1.82-1.68(m，1H)，1.68-1.51(m，1H)，1.46-1.22(m，13H)。C₃₅H₄₁N₃O₇的m/z计算值＝615.29。实测值[M+H]⁺＝616.27，[M-Boc+2H]⁺＝516.16。

化合物2：Fmoc-Val-Lys(Boc)-OH：(S)-2-((S)-2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-6-(叔丁氧羰基氨基)己酸

根据来自M.A.Walker等人Bio.Org.Med.Chem.Lett.2004，14，4323-4327的上述程序，从(S)-2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)-3-甲基丁酸2，5-二氧代吡咯烷-1-酯开始制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ8.28(d，J＝7.8Hz，1H)，7.82(d，J＝7.5Hz，2H)，7.69(t，J＝7.1Hz，2H)，7.41(t，J＝7.5Hz，2H)，7.33(td，J＝7.5，1.2Hz，2H)，7.20(d，J＝8.5Hz，1H)，4.49-4.36(m，3H)，4.26(t，J＝7.0Hz，1H)，3.97(t，J＝8.0Hz，1H)，3.05-2.97(m，2H)，2.08(dq，J＝13.3，6.6Hz，1H)，1.93-1.84(m，1H)，1.81-1.66(m，1H)，1.54-1.43(m，4H)，1.40(s，9H)，1.01(d，J＝6.8Hz，3H)，0.98(d，J＝6.8Hz，3H)。C₃₁H₄₁N₃O₇的m/z计算值＝567.3[M-Boc+H⁺]⁺实测值＝468.8。

化合物3：Boc-Val-Cit-OH：(S)-2-((S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酸。

根据US2010/0233190A1，利用匹配的光谱数据合成标题化合物。

化合物4：H-Val-Cit-OH：(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酸。

根据一般程序10从Boc-VC-OH制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.69(d，J＝7.4Hz，1H)，8.21-7.97(m，3H)，4.24(td，J＝8.2，4.9Hz，1H)，3.97(s，0H)，3.63(dd，J＝9.2，4.0Hz，1H)，2.98(t，J＝6.8Hz，2H)，2.60(s，1H)，2.10(h，J＝6.8Hz，1H)，1.85-1.69(m，1H)，1.61(dtd，J＝14.1，9.0，5.6Hz，1H)，1.45(dtd，J＝14.7，8.2，7.3，3.7Hz，2H)，0.97(dd，J＝6.9，5.0Hz，6H)。

化合物5：Fmoc-Ala(D)-Phe-Lys(Boc)-OH：(5R，8S，11S)-8-苄基-11-(4-(叔丁氧羰基氨基)丁基)-1-(9H-芴-9-基)-5-甲基-3，6，9-三氧代-2-氧杂-4，7，10-三氮杂十二烷-12-酸。

通过一般程序8，然后根据一般程序9用(R)-2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)丙酸2，5-二氧代吡咯烷-1-酯处理，从化合物1制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ12.57(s，1H)，8.20(d，J＝7.6Hz，1H)，8.12(d，J＝8.8Hz，1H)，7.89(d，J＝7.5Hz，2H)，7.71(t，J＝6.7Hz，2H)，7.48-7.37(m，3H)，7.33(t，J＝7.4Hz，2H)，7.30-7.13(m，5H)，6.77(t，J＝5.1Hz，1H)，4.59(td，J＝10.8，10.3，3.5Hz，1H)，4.33-4.10(m，4H)，4.02(q，J＝7.1Hz，1H)，3.10(dd，J＝13.8，2.8Hz，1H)，2.94-2.87(m，2H)，2.79-2.67(m，1H)，1.75-1.70(m，1H)，1.62(s，1H)，1.37(s，4H)，1.36(s，9H)，0.96(d，J＝7.1Hz，3H)。C₃₁H₄₁N₃O₇的m/z计算值＝686.3[M+Na⁺]⁺实测值＝709.9。

化合物6：Fmoc-Phe(D)-Phe-Lys-OH：(5R，8S，11S)-5，8-联苄基-11-(4-(叔丁氧羰基氨基)丁基)-1-(9H-芴-9-基)-3，6，9-三氧代-2-氧杂-4，7，10-三氮杂十二烷-12-酸。

通过应用一般程序8，然后根据一般程序9用(R)-2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)-3-苯基丙酸2，5-二氧代吡咯烷-1-酯处理，从化合物1制备标题合物。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ12.59(s，1H)，8.39(d，J＝8.7Hz，1H)，8.31(d，J＝7.6Hz，1H)，7.88(d，J＝7.5Hz，2H)，7.62(t，J＝8.2Hz，2H)，7.47(d，J＝8.7Hz，1H)，7.41(t，J＝7.1Hz，2H)，7.35-7.10(m，12H)，6.77(t，J＝5.7Hz，1H)，4.73-4.62(m，1H)，4.28-4.03(m，5H)，3.09(dd，J＝13.7，3.8Hz，1H)，2.93-2.87(m，2H)，2.74(dd，J＝13.7，10.4Hz，1H)，2.58(dd，J＝13.8，3.4Hz，1H)，2.48-2.35(m，1H)，1.84-1.68(m，1H)，1.68-1.55(m，1H)，1.40-1.33(m，13H)。C₃₁H₄₁N₃O₇的m/z计算值＝762.4[M+Na⁺]⁺实测值＝785.9。

化合物7：MC-NHS：6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸2，5-二氧代吡咯烷-1-酯。

向6-氨基己酸(10.0g，76.2mmol，1.0当量)在乙酸(75mL)中的搅拌溶液添加马来酸酐(7.85g，80.0mmol，1.05当量)。固体需要几分钟溶解，然后在约5min后，白色固体开始沉淀。一小时后，悬浮液稠化得到白色饼状物。将该材料舀到砂芯漏斗上，并用甲苯洗涤，并在真空中加热干燥，移除所有乙酸。

将中间物粉末溶解于甲苯(250mL)中，添加三乙胺(21.3mL，152mmol，2.0当量)，并用Dean-Stark分离器将混合物加热至回流。回流5h后，冷却混合物，并从烧瓶中剩余的粘性残余物倾倒出澄清甲苯层。在真空中移除甲苯，得到6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯的三乙胺盐。重新将盐溶解于甲苯中，并添加少量乙酸，然后浓缩。接下来，将混合物溶解于50％饱和碳酸氢钠中，并添加1M HCl，将pH调节为3，形成乳白色沉淀物。对此用EtOAc萃取三次，经硫酸钠干燥合并的有机物，过滤并在真空中浓缩得到纯净6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(3.08g，19％)。

在0℃下向6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(3.08g，14.6mmol，1.0当量)和N-羟基琥珀酰亚胺(1.76g，15.3mmol，1.05当量)在EtOAc(30mL)中的搅拌溶液添加二环己基碳二亚胺(3.16g，15.3mmol，1.05当量)。然后让反应升温至室温。20h后，过滤反应，并用EtOAc洗涤，并浓缩滤液。通过快速色谱法纯化残余物，得到呈透明油的标题化合物(2.16g，48％)，其缓慢地固化成蜡状白色固体。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ6.71(s，2H)，3.56(t，J＝7.2Hz，2H)，2.86(s，4H)，2.63(t，J＝7.4Hz，2H)，1.80(p，J＝7.4Hz，2H)，1.73-1.57(m，2H)，1.50-1.35(m，2H)。C₁₄H₁₆N₂O₆的m/z计算值＝308.10。[M+H]⁺实测值＝309.13。Rf＝0.28(50％EtOAc/Hex)。

化合物8：MT-OH：3-(2-(2-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸。

根据Warnecke，A.，Kratz，F.Bioconjugate Chemistry 2003，14，377-387制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ6.74(s，2H)，3.87-3.72(m，4H)，3.72-3.62(m，10H)，2.73-2.64(m，2H)。C₁₃H₂₉NO₇的m/z计算值＝301.12。[M+H]⁺实测值＝302.14。

化合物9：MT-NHS：3-(2-(2-(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸2，5-二氧代吡咯烷-1-酯。

在室温下用二环己基碳二亚胺(1.87g，9.06mmol，1.05当量)和N-羟基琥珀酰亚胺(1.04g，6.06mmol，1.05当量)在30mL 5∶1EtOAc/二噁烷中的溶液处理MT-OH(2.6g，8.6mmol，1.0当量)。36h后，过滤混合物，用EtOAc洗涤，并通过快速色谱法纯化残余物，得到呈透明油的标题化合物(309mg，9.0％)和起始材料(1.31g，回收50％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ6.72(s，2H)，3.87(t，J＝6.4Hz，2H)，3.74(t，J＝5.6Hz，2H)，3.70-3.58(m，10H)，2.93(t，J＝6.4Hz，2H)，2.86(s，4H)，1.32-1.19(m，2H)。C₁₇H₂₂N₂O₉的m/z计算值＝398.13。实测值[M+H]⁺＝399.15，[M+Na]⁺＝421.14。Rf＝0.59(10％(5％AcOH/MeOH)/10％Hex/CH₂Cl₂)。

化合物10：MT-Val-Cit-OH：(14R，17R)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷-18-酸。

从H-VC-OH(0.50g，1.287mmol))以及MT-NHS(0.512g，1.287mmol)和N，N-二-异丙基乙基胺(0.448mL，2当量)在二噁烷(0.50mL)中制备标题化合物。消耗完起始材料时(约16h，通过HPLC-MS评估)，在真空中浓缩反应，并通过制备级HPLC-MS纯化所得油。期望馏分冷冻干燥得到呈白色粉末的标题化合物(0.351g，63％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ6.76(s，2H)，4.54-4.59(m，1H)，4.33-4.38(m，J＝7.6Hz，1H)，3.85-3.70(m，5H)，3.60-3.68(m，10H)，3.18-3.22(m，2H)，2.55-2.62(m，2H)，2.10-2.18(m，1H)，1.90-2.05(m，1H)，1.72-1.85(m，1H)，1.54-1.65(m，2H)，0.98(t，J＝6.6Hz，6H)。

化合物11：Boc-HTI-286-OH：(6S，9S，12S，E)-9-叔丁基-12-异丙基-2，2，5，11，14-五甲基-4，7，10-三氧代-6-(2-苯基丙烷-2-基)-3-氧杂-5，8，11-三氮杂十五碳-13-烯-15-酸

根据Nieman等人J.Nat.Prod.2003，66，183-199制备标题化合物。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.57(d，J＝7.3Hz，2H)，7.48(t，J＝7.8Hz，2H)，7.38(t，J＝7.3Hz，1H)，6.80(dq，J＝9.8，1.6Hz，1H)，5.08(t，J＝10.2Hz，1H)，4.95(s，1H)，4.37(s，1H)，3.17(s，3H)，2.53(s，3H)，2.15-2.02(m，1H)，1.94(d，J＝1.5Hz，3H)，1.50(s，3H)，1.41(s，3H)，1.10(s，9H)，0.93(d，J＝6.6Hz，3H)，0.92(d，J＝6.6Hz，3H)。

C₃₂H₅₁N₃O₆的[M+H]⁺计算值574.38。实测值[M+Na]⁺586.42，[M+H]⁺574.46，[M-Boc+2H]⁺474.39。

化合物12：Fmoc-Val-Cit-OH：(S)-2-((S)-2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酸，Fmoc-缬氨酸-瓜氨酸-OH

根据Dubowchik等人，Bioconjugate Chem.，2002，13，855-869制备标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSC-d₆)δ12.56(s，1H)，8.21(d，J＝7.3Hz，1H)，7.90(d，J＝7.5Hz，2H)，7.76(t，J＝7.0Hz，2H)，7.49-7.39(m，3H)，7.38-7.23(m，2H)，5.96(t，J＝5.9Hz，1H)，5.40(s，2H)，4.34-4.09(m，4H)，3.93(dd，J＝9.1，7.1Hz，1H)，3.39(q，J＝7.0Hz，3H)，2.96(q，J＝6.5Hz，2H)，1.97(d，J＝6.9Hz，1H)，1.86-1.63(m，1H)，1.57(dtd，J＝13.9，9.0，5.4Hz，1H)，1.41(dhept，J＝13.2，6.9Hz，2H)，0.88(dd，J＝13.3，6.7Hz，6H)。C₂₆H₃₂N₄O₆[M+H]⁺计算值497.23。[M+H]⁺实测值497.19。

实施例1

化合物A：(S，E)-N-(4-(((S)-2-((S)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)甲基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物A-1：4-(叠氮基甲基)苯磺酰胺

向4-(溴甲基)苯磺酰胺(0.50g)在N，N-二甲基甲酰胺(1mL)中的搅拌溶液添加叠氮化钠(0.20g)。将悬浮液加热至50℃，持续3小时，此时在减压下移除溶剂。将残余物分配在乙酸乙酯与水之间。用盐水洗涤有机相，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩至干燥，以得到呈糖浆的标题化合物，其在静置后固化。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ8.06-7.91(m，2H)，7.58-7.44(m，2H)，4.96(s，2H)，4.48(s，2H)。

化合物A-2：4-(氨基甲基)苯磺酰胺

向配备有磁力搅拌器的圆底烧瓶中的4-(叠氮基甲基)苯磺酰胺(0.354g)在甲醇(10mL)中的溶液添加10％Pd/C(约0.05g)。在减压下排空烧瓶的气体，并充入氢气。这个排空和充入操作重复三次，此时使悬浮液搅拌过夜。在16h时，TLC分析指示起始材料完全消耗。用甲醇(40mL)稀释反应，添加并使混合物经烧结玻璃漏斗过滤。将所得溶液浓缩至干燥。¹H NMR表明这种材料在这个阶段足够干净，无需纯化便可以进一步使用。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ7.77(m，2H)，7.53(m，2H)，5.76(s，2H)，3.76(d，J＝11.9Hz，2H)。

化合物A-3：2，2，2-三氟-N-(4-氨磺酰基苄基)乙酰胺

根据一般程序2通过使4-(氨基甲基)苯磺酰胺与TFAA反应合成标题化合物，¹H NMR光谱被旋转异构体复杂化。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ7.91-7.75(m，2H)，7.55-7.31(m，4H)，4.72(m，2H)，4.47(d，J＝6.0Hz，1H)，3.18(s，2H)。

化合物A-4：(S)-1-((S)-1-(((S，E)-2，5-二甲基-6-氧代-6-(4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基亚磺酰胺基)己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸)叔丁酯

根据一般程序3从Boc-HTI-286-OH和化合物A-4合成标题化合物。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ8.11-7.99(m，2H)，7.50(dd，J＝18.3，7.9Hz，4H)，7.39-7.07(m，7H)，6.43(d，J＝9.0Hz，1H)，5.17(s，1H)，4.68(d，J＝8.9Hz，1H)，4.56(s，2H)，3.00(d，J＝33.9Hz，3H)，2.88(d，J＝7.6Hz，3H)，2.34(s，2H)，2.00(d，J＝13.6Hz，1H)，1.81(d，J＝6.4Hz，3H)，1.43(s，13H)，0.98-0.68(m，14H)。C₄₁H₅₈F₃N₅O₈S的[M+H]⁺计算值838.40；实测值[M+Na]⁺860.48；[M+H]⁺838.46；[M-Boc+2H]⁺738.33。

化合物A-5：(S，E)-N-(4-(氨基甲基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序5和10从(S)-1-((S)-1-(((S，E）-2，5-二甲基-6-氧代-6-(4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基亚磺酰胺基)己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ8.13(d，J＝8.3Hz，2H)，7.68(d，J＝8.4Hz，2H)，7.59-7.41(m，4H)，7.37(t，J＝7.3Hz，1H)，6.51(dd，J＝9.4，1.7Hz，1H)，5.01(t，J＝9.9Hz，1H)，4.37(s，1H)，4.24(s，2H)，3.17(s，3H)，2.51(s，3H)，2.12-1.96(m，1H)，1.84(d，J＝1.5Hz，3H)，1.47(s，3H)，1.37(s，3H)，1.07(s，9H)，0.91(m，6H)。C₃₄H₅₁N₅O₅S的[M+H]⁺计算值642.38；[M+H]⁺实测值642.40。

化合物A-6：(S)-1-((S)-1-(4-(N-((S，E)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰基)氨磺酰基)苄基氨基)-1-氧代-5-脲基戊烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯

根据一般程序6从(S，E)-N-(4-(氨基甲基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S）-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺和Fmoc-Val-Cit-OH合成，受到DIPEA和AcOH的轻微污染。材料“按原样”用于后续步骤中。

C₆₀H₈₁N₉O₁₀S的[M+H]⁺计算值1120.58；[M+H]⁺实测值1120.68。

化合物A-7：(S，E)-N-(4-(((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)甲基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

按照一般程序8从(S)-1-((S)-1-(4-(N-((S，E)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰基)氨磺酰基)苄基氨基)-1-氧代-5-脲基戊烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯开始合成标题化合物。

根据一般程序9，从化合物A-7和MC-NHS合成标题化合物，通过制备级HPLC纯化，并根据一般程序10去保护。

¹H NMR(600MHz，甲醇-d₄)δ7.89(d，J＝8.0Hz，2H)，7.53-7.47(m，2H)，7.39(t，J＝7.5Hz，4H)，7.28(t，J＝7.3Hz，1H)，6.82(s，2H)，6.67(d，J＝9.3Hz，1H)，5.03(t，J＝10.0Hz，1H)，4.51-4.35(m，3H)，4.18(d，J＝7.4Hz，1H)，3.65(s，1H)，3.50(t，J＝7.1Hz，2H)，3.31(s，3H)，3.20-3.01(m，5H)，2.35-2.18(m，5H)，2.08(dq，J＝13.9，6.9Hz，1H)，2.02-1.91(m，6H)，1.91-1.77(m，4H)，1.72(dtd，J＝14.0，9.3，5.2Hz，1H)，1.66-1.40(m，10H)，1.37(s，3H)，1.34-1.24(m，3H)，1.03(s，9H)，0.96(dd，J＝6.8，4.0Hz，6H)，0.91-0.86(m，3H)，0.84(d，J＝6.6Hz，3H)。

C₅₅H₈₂N₁₀O₁₁S的m/z[M+H]⁺计算值1091.59；[M+H]⁺实测值1091.67。

实施例2

化合物B：(S，E)-N-(4-(((R)-6-氨基-2-((R)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)己酰胺基)甲基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物B-1a：(S)-1-((S)-1-(((S，E)-6-(4-(氨基甲基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯

根据一般程序5从(S)-1-((S)-1-(((S，E)-2，5-二甲基-6-氧代-6-(4-((2，2，2-三氟乙酰胺基)甲基)苯基亚磺酰胺基)己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯化合物A-4制备标题化合物。

化合物B-1：

根据一般程序6从(S)-1-((S)-1-(((S，E)-6-(4-(氨基甲基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯和Fmoc-Phe-Lys(Boc)-OH制备标题化合物。

C₇₄H₉₈N₈O₁₃S的m/z计算值＝1338.70amu；实测值[M+H]⁺＝1339.86，[M+Na]⁺＝1361.88，[M+K]⁺＝1377.95，[M-Boc+2H]⁺＝1239.83，[M-2Boc+3H]⁺＝1139.72。

化合物B-2：

根据一般程序8从化合物B-1制备标题化合物。

C₅₉H₈₈N₈O₁₁S的m/z计算值＝1116.63amu；实测值[M+H]⁺＝1117.78，[M+Na]⁺＝1139.80，[M-Boc+2H]⁺＝1017.72，[M-2Boc+3H]⁺＝917.64。

化合物B-3：

根据一般程序9从化合物B-2和MC-NHS制备标题化合物。

C₆₉H₉₉N₉O₁₄S的m/z计算值＝1309.70amu；实测值[M+H]⁺＝1310.89，[M+Na]⁺＝1332.91，[M-Boc+2H]⁺＝1210.86，[M-2Boc+3H]⁺＝1110.77。

根据一般程序10从化合物B-3制备标题化合物。

C₅₉H₈₃N₉O₁₀S的m/z计算值＝1109.60amu；实测值[M+H]⁺＝1110.76，[M+Na]⁺＝1132.75，[(M+2H)/2]²⁺＝556.11。

实施例3

化合物C：(S，E)-N-(4-(((S)-2-((S)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)甲基)苄基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物C-1a：2，2，2-三氟-N-(4-(氨磺酰基甲基)苄基)乙酰胺

利用一般程序2从可商购获得的(4-(氨基甲基)苯基)甲磺酰胺和TFAA合成标题化合物。

¹H NMR(400MHz，丙酮-d₆)δ9.05(s，1H)，7.48-7.40(m，2H)，7.40-7.32(m，2H)，6.17(s，1H)，4.56(d，J＝6.1Hz，2H)，4.35(s，2H)。

化合物C-1：

根据一般程序3从Boc-HTI-286-OH和2，2，2-三氟-N-(4-(氨磺酰基甲基)苄基)乙酰胺化合物C-1a合成标题化合物。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.49(d，J＝7.7Hz，2H)，7.41-7.27(m，5H)，7.21(d，J＝8.0Hz，2H)，6.36(d，J＝9.4Hz，1H)，5.18(s，1H)，4.99(s，2H)，4.69(s，3H)，4.46(s，3H)，3.06-2.91(m，3H)，2.88(d，J＝4.7Hz，3H)，2.04(d，J＝1.8Hz，1H)，1.88(d，J＝13.5Hz，3H)，1.79-1.69(m，1H)，1.68-1.57(m，1H)，1.52(d，J＝8.2Hz，3H)，1.44(s，9H)，1.23-1.12(m，1H)，0.97(t，J＝7.4Hz，1H)，0.90(d，J＝6.0Hz，9H)，0.80(d，J＝6.8Hz，3H)。

C₄₂H₆₀F₃N₅O₈S的m/z计算值＝851.41amu；实测值[M+H]⁺＝852.47，[M+Na]⁺＝874.47，[M-Boc+2H]⁺＝752.38。

化合物C-2：

根据一般程序3从化合物C-1制备标题化合物。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.49(t，J＝8.0Hz，2H)，7.40-7.30(m，4H)，7.28(d，J＝7.9Hz，2H)，7.22(q，J＝7.9Hz，1H)，6.48(d，J＝9.4Hz，1H)，5.19(s，1H)，5.07-4.94(m，2H)，4.72(s，1H)，4.48(s，2H)，3.77(s，2H)，3.05-2.82(m，3H)，1.92-1.82(m，4H)，1.58-1.32(m，16H)，0.97-0.85(m，12H)，0.85-0.74(m，4H)。

C₄₀H₆₁N₅O₇S的m/z计算值＝755.43amu；实测值[M+H]⁺＝756.46，[M+Na]⁺＝778.48，[M-Boc+2H]⁺＝656.39。

化合物C-3：

根据一般程序6从化合物C-2和Fmoc-Val-Cit-OH制备标题化合物。

C₆₆H₉₁N₉O₁₂S的m/z计算值＝1233.65amu；实测值[M+H]⁺＝1234.82，[M+Na]⁺＝1256.80，[M-Boc+2H]⁺＝1134.73。

化合物C-4：

根据一般程序8从化合物C-3制备标题化合物。

C₅₁H₈₁N₉O₁₀S的m/z计算值＝1011.58amu；实测值[M+H]⁺＝1012.72，[M+Na]⁺＝1034.68，[M-Boc+2H]⁺＝912.66.

化合物C-5：

根据一般程序9从化合物C-4和MC-NHS制备标题化合物。

C₆₁H₉₂N₁₀O₁₃S的m/z计算值＝1204.66amu；实测值[M+H]⁺＝1205.84，[M+Na]⁺＝1227.82，[M-Boc+2H]⁺＝1105.75。

化合物C：(S，E)-N-(4-(((S)2-((S)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)甲基)苄基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序10从化合物C-5制备标题化合物。

C₅₆H₈₄N₁₀O₁₁S的m/z计算值＝1104.60amu；实测值[M+H]⁺＝1105.78，[M+Na]⁺＝1127.76，[(M+2H)/2]²⁺＝553.60。

实施例4

化合物D：(S，E)-N-(4-(((R)-6-氨基-2-((R)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)己酰胺基)甲基)苄基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物D-1：

根据一般程序6从化合物C-2和Fmoc-Phe-Lys(Boc)-OH制备标题化合物。

C₇₅H₁₀₀N₈O₁₃S的m/z计算值＝1352.71amu；实测值[M+H]⁺＝1353.96，[M+Na]⁺＝1375.83，[M-Boc+2H]⁺＝1253.78，[M-2Boc+H]⁺＝1153.70。

化合物D-2：

根据一般程序8从化合物D-1制备标题化合物。

C₆₀H₉₀N₈O₁₁S的m/z计算值＝1130.64amu；实测值[M+H]⁺＝1131.75，[M+Na]⁺＝1153.75，[M-Boc+2H]⁺＝1031.68，[M-2Boc+3H]⁺＝931.61。

化合物D-3：

根据一般程序9从化合物D-2和MC-NHS制备标题化合物。

C₇₀H₁₀₁N₉O₁₄S的m/z计算值＝1323.72amu；实测值[M+H]⁺＝1324.96，[M+Na]⁺＝1346.94，[M-Boc+2H]⁺＝1224.87，[M-2Boc+3H]⁺＝1124.79。

化合物D：(S，E)-N-(4-(((R)-6-氨基-2-((R)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)己酰胺基)甲基)苄基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序10从化合物D-3制备标题化合物。

C₆₀H₈₅N₉O₁₀S的m/z计算值＝1123.61amu；实测值[M+H]⁺＝1124.75，[M+Na]⁺＝1146.77，[(M+2H)/2]²⁺＝563.09。

实施例5

化合物E：(S，E)-N-(4-((R)-2-((R)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苄基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物E-1a：2，2，2-三氟-N-(4-(氨磺酰基甲基)苯基)乙酰胺

利用一般程序2从可商购获得的(4-氨基苯基)甲磺酰胺和TFAA合成标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.31(s，1H)，7.79-7.51(m，2H)，7.51-7.23(m，2H)，6.85(s，2H)，4.27(s，2H)。

化合物E-1：

根据一般程序3从Boc-HTI-286-OH和2，2，2-三氟-N-(4-(氨磺酰基甲基)苯基)乙酰胺化合物E-1a合成标题化合物。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ8.81(s，1H)，7.66-7.50(m，3H)，7.50-7.31(m，5H)，7.23(t，J＝7.7Hz，1H)，6.35(dd，J＝9.2，1.6Hz，1H)，6.22(d，J＝8.8Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.05-4.80(m，3H)，4.72-4.40(m，2H)，2.97-2.74(m，3H)，2.60(s，3H)，1.95(m，4H)，1.68-1.35(m，15H)，1.02-0.63(m，15H)。

C₄₁H₅₈F₃N₅O₈S的[M+H]⁺计算值838.40；实测值[M+Na]⁺860.48；[M+H]⁺838.52；[M-Boc+2H]⁺738.39。

化合物E-2：

根据一般程序5从化合物E-1制备标题化合物。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ7.63-7.39(m，2H)，7.35(t，J＝7.7Hz，2H)，7.22(t，J＝13Hz，1H)，7.16-7.03(m，2H)，6.73-6.54(m，2H)，6.36(dd，J＝9.2，1.6Hz，1H)，6.07(s，1H)，5.00(m，2H)，4.60(s，3H)，2.98-2.75(m，6H)，1.97-1.71(m，4H)，1.68-1.34(m，15H)，0.97-0.63(m，15H)。

C₃₉H₅₉N₅O₇S的[M+H]⁺计算值742.41；实测值[M+H]⁺742.47；[M-Boc+2H]⁺642.40。

化合物E-3：

根据一般程序6从化合物E-2和Fmoc-Val-Cit-OH制备标题化合物。

C₆₅H₈₉N₉O₁₂S的[M+H]⁺计算值1220.64；实测值[M+H]⁺1220.97；[M-Boc+2H]⁺1120.87。

化合物E-4：

根据一般程序8从化合物E-3制备标题化合物。

C₅₀H₇₉N₉O₁₀S计算值[M+Na]⁺998.57；实测值[M+H]⁺998.75；[M-Boc+H]⁺898.69。

化合物E-5：

根据一般程序9通过使化合物E-4和MC-NHS反应制备标题化合物。

C₆₀H₉₀N₁₀O₁₃S的[M+H]⁺计算值1191.64；实测值[M+H]⁺1191.74；[M-Boc+2H]⁺1091.67。

根据一般程序10从化合物E-5制备标题化合物。

C₅₅H₈₂N₁₀O₁₁S的[M+H]⁺计算值1091.59；[M+H]⁺实测值1091.67。

实施例6

化合物F：-(4-((14S，17S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)苄基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物F-1：

向化合物E-4(40.0mg，0.040mmol，1.0当量)在CH₂C]₂(0.5mL)中的搅拌溶液添加MT-OH(18.1mg，0.060mmol，1.5当量)。接下来，先后添加三乙胺(0.017mL，0.120mmol，3.0当量)和向山试剂(Mukiyama′s reagent)(15.4mg，0.060mmol，1.5当量)。3h后，添加大约一当量的酸、三乙胺和向山试剂，且又在30min后，HPLC指示消耗完起始材料化合物E-4。用0.25mL己烷稀释反应混合物，并直接加载到快速色谱法，得到呈透明黄色膜的标题化合物(29.3mg，57％)。

C₆₃H₉₆N₁₀O₁₆S的m/z计算值＝1280.67。实测值[M+H]⁺＝1281.94，[M+Na]⁺＝1303.91，[M-Boc+2H]⁺＝1181.86。R_f＝0.45(10％(5％AcOH/MeOH)/10％Hex/CH₂Cl₂)。

化合物F(S，E)-N-(4-((14S，17S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)苄基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序10从化合物F-1制备标题化合物。

C₅₈H₈₈N₁₀O₁₄S的m/z计算值＝1180.62。实测值[M+H]⁺＝1181.82，[(M+2H)/2]²⁺＝591.60。

实施例7

化合物G：(S，E)-N-(4-((R)-6-氨基-2-((R)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)己酰胺基)苄基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物G-1：

根据一般程序6从化合物E-2和Fmoc-Phe-Lys(Boc)-OH制备标题化合物。

C₇₄H₉₈N₈O₁₃S的m/z计算值＝1338.70amu；实测值[M+H]⁺＝1339.96，[M+Na]⁺＝1361.92，[M-Boc+2H]⁺＝1239.85，[M-2Boc+H]⁺＝1139.77。

化合物G-2：

根据一般程序8从化合物G-1制备标题化合物。

C₅₉H₈₈N₈O₁₁S的m/z计算值＝1116.63amu；实测值[M+H]⁺＝1117.78，[M+Na]⁺＝1139.80，[M-Boc+2H]⁺＝1017.72，[M-2Boc+H]⁺＝917.64。

化合物G-3：

根据一般程序9从化合物G-2和MC-NHS制备标题化合物。

C₆₉H₉₉N₉O₁₄S的m/z计算值＝1309.70amu；实测值[M+H]⁺＝1310.93，[M+Na]⁺＝1332.89，[M-Boc+2H]⁺＝1210.84，[M-2Boc+3H]⁺＝1110.76。

化合物G：(S，E)-N-(4-(((R)-6-氨基-2-((R)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)己酰胺基)苄基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序10从化合物G-3制备标题化合物。

C₅₉H₈₃N₉O₁₀S的m/z计算值＝1109.60amu；实测值[M+H]⁺＝1110.71，[M+Na]⁺＝1132.74，[(M+2H)/2]²⁺＝556.18。

实施例8

化合物H：(S，E)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物H-1a：2，2，2-三氟-N-(4-氨磺酰基苯基)乙酰胺

利用一般程序2从可商购获得的磺酰胺和TFAA以接近定量产率合成标题化合物。

化合物H-1b：(S)-1-((S)-1-(((S，E)-2，5-二甲基-6-氧代-6-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基亚磺酰胺基)己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯

向Boc-HTI-286-OH(0.400g，0.7mmol)和2，2，2-三氟-N-(4-氨磺酰基苯基)乙酰胺(0.244，1.3当量)在乙酸乙酯(10mL)中的搅拌溶液添加N，N-二环己基碳二亚胺(0.202g，1.4当量)和N，N-二甲基-4-氨基吡啶(0.119g，1.4当量)。继续搅拌过夜，此时用二乙醚(60mL)稀释反应，滤出固体，用二乙醚(30mL)洗涤，并浓缩滤液得到无色油。通过硅胶色谱法使用己烷中的5-50％EtOAc(含5％AcOH)在25gIsolera^TM柱上经过25倍柱体积纯化油。汇集含期望材料的级分并浓缩得到呈无色泡沫体的标题化合物(0.504g，86％)。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ8.14-8.03(m，2H)，7.98-7.83(m，3H)，7.47(d，J＝7.6Hz，2H)，7.32(d，J＝7.6，2H)，7.20(q，J＝7.4，6.2Hz，2H)，6.44(d，J＝9.1Hz，1H)，5.16(s，1H)，4.68(d，J＝9.0Hz，1H)，3.08-2.95(m，3H)，2.87(d，J＝6.4Hz，3H)，2.01(m，6H)，1.80(d，J＝11.7Hz，3H)，1.62(d，J＝6.4Hz，1H)，1.52-1.36(m，14H)，1.26(m，1H)，0.98-0.72(m，15H)。C₄₀H₅₆F₃N₅O₈S的m/z[M+H]⁺计算值824.38；实测值[M+Na]⁺846.43；[M+H]⁺824.40；[M-Boc+2H]⁺724.34。

化合物H-1c：(S)-1-((S)-1-(((S，E)-6-(4-氨基苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基胺基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯

根据一般程序5从化合物H-1b制备标题化合物。

化合物H-1：

根据一般程序6从(S)-1-((S)-1-(((S，E)-6-(4-氨基苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯和Fmoc-Val Cit-OH合成。

C₆₄H₈₇N₉O₁₂S的m/z[M+H]⁺计算值1206.62；实测值[M+Na]⁺1230.81；[M+H]⁺1206.73；[M-Boc+2H]⁺1106.63。

化合物H-2：(S)-1-((S)-1-(((S，E)-6-(4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯

根据一般程序8从化合物H-1制备标题化合物。

C₄₉H₇₇N₉O₁₀S的m/z[M+H]⁺计算值984.55；实测值[M+H]⁺984.63；[M-Boc+2H]⁺884.57。

化合物H-3：(S)-1-((S)-1-(((S，E)-6-(4-((S)2-((S)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基)6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯

根据一般程序9从(S)-1-((S)-1-(((S，E)-6-(4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯和MC-NHS制备标题化合物。

C₅₉H₈₈N₁₀O₁₃S的m/z[M+H]⁺计算值1177.63；实测值[M+Na]⁺1199.74；[M+H]⁺1177.85；[M-Boc+2H]⁺1077.68。

化合物H：(S，E)-N-(4-((S)2-((S)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序10从(S)-1-((S)-1-(((S，E)-6-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。

C₅₄H₈₀N₁₀O₁₁S的m/z[M+H]⁺计算值1077.63；[M+H]⁺实测值1077.68。

实施例9

化合物I：(S，E)-N-((4-((14S，17S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)苯基)磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物I-1：((S)-1-(((S)-1-(((S，E)-6-(4-((14S，17S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

C₆₂H₉₄N₁₀O₁₆S的m/z计算值＝1266.66。实测值[M+H]⁺＝1267.87[M+Na]⁺＝1289.86，[M-Boc+2H]⁺＝1167.82。R_f＝0.49(10％(5％AcOH/MeOH)/CH₂Cl₂)。

化合物I：(S，E)-N-(4-((14S，17S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序10从((S)-1-(((S)-1-(((S，E)-6-(4-((14S，17S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物I-1)制备标题化合物。

C₅₇H₈₆N₁₀O₁₄S的m/z计算值＝1166.60。实测值[M+H]⁺＝1167.67，[(M+2H)/2]²⁺＝584.57。

实施例10

化合物J：(S，E)-N-(4-(1-((R)-2-((R)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)环丙基)苄基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物J-1a：4-(三苯甲基硫甲基)苄腈

在N₂和0℃下将在THF(5mL)中的三苯甲基硫醇(1.48g，5.36mmol，1.05当量)逐滴添加至氢化钠(60％分散液，在矿物油中，214mg，5.36mmol，1.05当量)在THF(5mL)中的搅拌悬浮液。15min后，添加在THF(5mL)中的4-(溴甲基)苄腈(1.00g，5.10mmol，1.0当量)，并使反应变成室温。1h后，TLC指示起始材料完全转化。通过先后添加饱和氯化铵和一些dH₂O淬灭反应。用醚萃取混合物三次，用饱和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并浓缩得到粘性黄色油。通过快速色谱法纯化得到呈浅白色粉末的标题化合物(1.76g，88％)。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ7.52(d，J＝8.2Hz，2H)，7.47(d，7.1Hz，6H)，7.33(t，J＝7.5Hz，6H)，7.26(t，J＝7.2Hz，3H)，7.19(d，J＝8.2Hz，2H)，3.40(s，2H)。C₂₇H₂₁NS的m/z计算值＝391.14。[M+Na]⁺实测值＝414.13。R_f＝0.32(10％EtOAc/Hex)。

化合物J-1b：1-(4-(三苯甲基硫甲基)苯基)环丙胺

在N₂气氛下将4-(三苯甲基硫甲基)苄腈(1.47g，3.75mmol，1.0当量)溶解于40mL THF中，然后冷却至-78℃。向此溶液添加Ti(O-iPr)₄(1.21mL，4.13mmol，1.1当量)，然后在5min内逐滴添加乙基溴化镁(3M，2.75mL，8.26mmol，2.2当量)。移除干冰浴，使溶液达到室温。在室温下45min后，向目前颜色非常深的反应混合物添加BF₃·Et₂O(0.93mL，7.51mmol，2.0当量)。额外搅拌2.5h后，用5mL 2M HCl淬灭反应，随后用约15mL 2M NaOH将pH调整为强碱性。向混合物添加一些水，然后用75mL EtOAc萃取三次，用dH₂O洗涤一次，用饱和盐水洗涤一次，经硫酸钠干燥，并浓缩得到透明油。通过快速色谱法纯化材料，得到呈透明油的标题化合物(680mg，36％)。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ7.49(d，J＝7.8Hz，6H)，7.33(t，J＝7.7Hz，6H)，7.26(t，J＝7.2Hz，3H)，7.20(d，J＝8.2Hz，2H)，7.11(d，J＝8.2Hz，2H)，3.32(s，2H)，1.06(dd，J＝7.9，5.0Hz，2H)，0.95(dd，J＝7.9，4.7Hz，2H)。C₂₉H₂₇NS的m/z计算值＝421.19。[M+H]⁺实测值＝422.19。R_f＝0.21(50％EtOAc/Hex)。

化合物J-1c：2，2，2-三氟-N-(1-(4-(三苯甲基硫甲基)苯基)环丙基)乙酰胺

向1-(4-(三苯甲基硫甲基)苯基)环丙胺(680mg，1.61mmol，1.0当量)在CH₂Cl₂中的搅拌溶液添加三氟乙酸酐(0.448mL，3.22mmol，2.0当量)和三乙胺(0.45mL，3.22mmol，2.0当量)。两小时后，TLC和HPLC指示起始材料完全转化。通过添加3mL NaHCO₃淬灭反应，然后添加一些dH₂O，并用CH₂Cl₂萃取混合物三次。用饱和盐水洗涤合并的有机物，经硫酸钠干燥，并浓缩得到黄色泡沫，得到纯度足以转移到下一步骤的标题化合物(715mg，86％)。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ7.48(d，J＝7.7Hz，6H)，7.32(t，J＝7.6Hz，6H)，7.25(t，J＝7.2Hz，3H)，7.19(d，J＝8.2Hz，2H)，7.10(d，J＝8.3Hz，2H)，6.83(s，1H)，3.31(s，2H)，1.40-1.24(m，4H)。C₃₁H₂₆F₃NOS的m/z计算值＝517.17。[M+Na]⁺实测值＝540.25。R_f＝0.71(50％EtOAc/Hex)。

化合物J-1d：2，2，2-三氟-N-(1-(4-(巯基甲基)苯基)环丙基)乙酰胺

用2.5mL TFA处理在5mL CH₂Cl₂中的2，2，2-三氟-N-(1-(4-(三苯甲基硫甲基)苯基)环丙基)乙酰胺(715mg，1.38mmol，1.0当量)。1min后，添加TIPSH(0.42mL，2.1mmol，1.5当量)，使黄色变淡。30min后，TLC指示反应完全。浓缩混合物，然后与CH₂Cl₂共蒸发一次，并与甲苯共蒸发两次。通过快速色谱法纯化残余物，得到呈白色固体的标题化合物(261mg，69％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ7.35-7.23(m，4H)，6.87(s，1H)，3.74(d，J＝7.6Hz，2H)，1.77(t，.7＝7.6Hz，1H)，1.36(s，4H)。R_f＝0.47(20％EtOAc/Hex)。

化合物J-1e：2，2，2-三氟-N-(1-(4-(氨磺酰基甲基)苯基)环丙基)乙酰胺

向2，2，2-三氟-N-(1-(4-(巯基甲基)苯基)环丙基)乙酰胺(220mg，0.799mmol，1.0当量)在乙腈中的搅拌溶液添加dH₂O(0.029mL，1.6mmol，2.0当量)、四丁基氯化铵(110mg，0.40mmol，0.5当量)、N-氯琥珀酰亚胺(320mg，2.40mmol，3.0当量)。20分钟后，通过TLC看不到起始材料。90min后，添加浓NH₄OH(0.18mL，3.2mmol，4.0当量)。10分钟后，添加1mL NH₄Cl，并用EtOAc萃取混合物三次。用dH₂O洗涤合并的有机物两次，用饱和盐水洗涤一次，经硫酸钠干燥，并浓缩得到透明油。通过快速色谱法纯化残余物，得到呈白色固体的标题化合物(192mg，74％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.21(s，1H)，7.31(d，J＝8.2Hz，2H)，7.16(d，J＝8.3Hz，2H)，6.85(s，2H)，4.23(s，2H)，1.27(dt，J＝6.1，2.3Hz，4H)。R_f＝0.26(50％5EtOAc/Hex)。

化合物J-1：

根据一般程序3从2，2，2-三氟-N-(1-(4-(氨磺酰基甲基)苯基)环丙基)乙酰胺(化合物J-1e)和Boc-HTI-286-OH制备标题化合物。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ8.54(s，1H)，7.78(s，1H)，7.36(d，J＝7.1Hz，2H)，7.31-7.23(m，2H)，7.23-7.11(m，5H)，6.33(d，J＝9.3Hz，1H)，6.28-6.14(m，1H)，5.35(s，1H)，4.97(t，J＝10.3Hz，1H)，4.84(d，J＝13.7Hz，1H)，4.70-4.56(m，1H)，4.50(d，J＝8.9Hz，1H)，2.90(s，3H)，2.59(s，3H)，1.90(s，3H)，1.82-1.72(m，1H)，1.62-1.57(m，3H)，1.55(s，3H)，1.47(s，9H)，1.45-1.34(m，4H)，0.85(d，J＝6.5Hz，2H)，0.82-0.67(m，12H)。C₄₄H₆₂F₃N₅O₈S的m/z计算值＝877.43。[M+Na]⁺实测值＝900.67。R_f＝0.34(50％(2％AcOH/EtOAc)/Hex)。

化合物J-2：

根据一般程序5在MeOH/H₂O中，从化合物J-1制备标题化合物。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ7.62-7.48(m，4H)，7.35(t，J＝7.6Hz，2H)，7.31-7.12(m，3H)，6.51(d，J＝6.8Hz，1H)，6.36-6.18(m，1H)，5.29(s，1H)，5.00-4.86(m，1H)，4.67(s，2H)，4.60(d，J＝9.3Hz，1H)，3.07-2.73(m，6H)，2.02-1.84(m，4H)，1.68-1.51(m，6H)，1.47(s，9H)，1.45-1.38(m，2H)，1.16(s，2H)，0.89-0.81(m，12H)，0.80(d，J＝6.7Hz，3H)。C₄₂H₆₃N₅O₇S的m/z计算值＝781.44。[M+H]⁺实测值＝782.63。

化合物J-3：

根据一般程序6从化合物J-2和Fmoc-Val-Cit-OH制备标题化合物。

C₆₈H₉₃N₉O₁₂S的m/z计算值＝1259.67。实测值[M+H]⁺＝1261.11，[M+Na]⁺＝1283.06，[M-Boc+2H]⁺＝1160.97。R_f＝0.54(5％MeOH/(2％AcOH/EtOAc))。

化合物J-4：

根据一般程序8从化合物J-3制备标题化合物。

C₅₃H₈₃N₉O₁₀S的m/z计算值＝1037.60。实测值[M+H]⁺＝1038.90，[M-Boc+2H]⁺＝938.78。R_f约0.1(25％MeOH/CH₂Cl₂)。

化合物J-5：

根据一般程序9从化合物J-4和MC-NHS制备标题化合物。

C₆₃H₉₄N₁₀O₁₃S的m/z计算值＝1230.67。实测值[M+H]⁺＝1232.11，[M+Na]⁺＝1254.09，[M-Boc+2H]⁺＝1132.01。R_f＝0.44(10％(5％AcOH/MeOH)/CH₂Cl₂)。

根据一般程序10从化合物J-5制备标题化合物。

C₅₈H₈₆N₁₀O₁₁S的m/z计算值＝1130.62。实测值[M+H]⁺＝1131.95，[(M+2H)/2]²⁺＝566.69。

实施例11

化合物K：(S，E)-N-(4-(1-((R)-2-((R)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)环丙基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物K-1a：1-苯基环丙胺

如Bertus，P.，Szymoniak，J.J.Org.Chem.，2003，68，7133-7136中所述从苄腈(1.0mL，9.7mmol)制备得到270mg标题化合物(21％)。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ7.44-7.28(m，4H)，7.27-7.15(m，1H)，1.18-1.06(m，2H)，1.07-0.95(m，2H)。R_f＝0.28(5％(5％NH₄OH/MeOH)/CH₂Cl₂)。

化合物K-1b：2，2，2-三氟-N-(1-苯基环丙基)乙酰胺

向1-苯基环丙胺(270mg，2.03mmol，1.0当量)在二噁烷(5mL)中的搅拌溶液添加三氟乙酸酐(0.310mL，2.23mmol，1.1当量)。5min后，TLC指示起始材料完全转化。浓缩混合物，然后与CH₂Cl₂共蒸发一次，并与甲苯共蒸发一次，得到呈片状白色粉末的标题化合物(453mg，97％)。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ7.47-7.15(m，5H)，6.88(s，1H)，1.65(s，4H)。C₁₁H₁₀F₃NO的m/z计算值＝229.07。[M+H]⁺实测值＝230.14。R_f＝0.82(5％(5％NH₄OH/MeOH)/CH₂Cl₂)。

化合物K-1c：2，2，2-三氟-N-(1-(4-氨磺酰基苯基)环丙基)乙酰胺

在0℃下向搅拌过的氯磺酸(0.78mL，11.8mmol，6.0当量)分批添加固体2，2，2-三氟-N-(1-苯基环丙基)乙酰胺(450mg，1.96mmol，1.0当量)，保持低温。完成添加后，将混合物加热至50℃。1分钟后，停止放出气体，并使反应冷却。将混合物缓慢添加至有冰的烧杯，注意不要溅出。将留在冰中的固体滤出。在真空中干燥此固体，然后溶解于THF(4mL)中。添加浓NH₄OH(0.44mL，7.85mmol，4.0当量)，将溶液从绿色变成黑色。2min后，TLC指示磺酰氯中间物完全耗尽。添加2M HCl直到颜色变浅，然后用EtOAc萃取混合物三次，用饱和NaHCO₃洗涤一次，用饱和盐水洗涤一次，经硫酸钠干燥，并浓缩得到片状固体。通过快速色谱法纯化粗制材料，得到呈白色固体的标题化合物(235mg，39％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.28(s，1H)，7.76(d，J＝8.5Hz，2H)，7.32(d，J＝8.1Hz，2H)，7.31(s，2H)，1.42-1.35(m，2H)，1.35-1.27(m，2H)。C₁₁H₁₁F₃N₂O₃S的m/z计算值＝308.04。[M+H]⁺实测值＝309.07。R_f＝0.27(50％EtOAc/Hex)。

化合物K-1d：(S)-1-((S)-1-(((S，E)-2，5-二甲基-6-氧代-6-(4-(1-(2，2，2-三氟乙酰胺基)环丙基)苯基亚磺酰胺基)己4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯

根据一般程序3从2，2，2-三氟-N-(1-(4-氨磺酰基苯基)环丙基)乙酰胺(化合物K-1c)和Boc-HTI-286-OH制备标题化合物。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ8.51(s，1H)，8.08(d，J＝8.6Hz，2H)，7.42-7.32(m，2H)，7.32-7.23(m，2H)，7.23-7.10(m，3H)，6.46(d，J＝9.0Hz，1H)，6.17-6.08(m，1H)，5.29(s，1H)，4.97-4.76(m，1H)，4.56(d，J＝8.8Hz，1H)，2.90(d，J＝10.4Hz，6H)，2.01-1.79(m，4H)，1.62(s，3H)，1.53(s，3H)，1.49(s，4H)，1.46(s，9H)，0.86(t，J＝6.95Hz，3H)，0.81(d，J＝6.8Hz，3H)，0.77(s，9H)。C₄₃H₆₀F₃N₅O₈S的m/z计算值＝863.41。实测值[M+H]⁺＝864.56，[M+Na]⁺＝886.52，[M-Boc+2H]⁺＝764.44。R_f＝0.34(50％(2％AcOH/EtOAc)/Hex)。

化合物K-1e：(S)-1-((S)-1-(((S，E)-6-(4-(1-氨基环丙基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯

根据一般程序5在二噁烷中从化合物(S)-1-((S)-1-(((S，E)-2，5-二甲基-6-氧代-6-(4-(1-(2，2，2-三氟乙酰胺基)环丙基)苯基亚磺酰胺基)己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.97(d，J＝8.5Hz，2H)，7.52(d，J＝8.5Hz，2H)，7.51-7.43(m，2H)，7.32(t，J＝7.5Hz，2H)，7.20(t，J＝8.4Hz，1H)，6.55(d，J＝9.0Hz，1H)，5.17(s，1H)，5.03-4.94(m，1H)，4.70(d，J＝9.0Hz，1H)，2.94(s，3H)，2.88(s，3H)，1.94-1.89(m，1H)，1.80(s，3H)，1.53(s，3H)，1.51(s，3H)，1.43(s，9H)，1.40-1.37(m，2H)，1.36-1.32(m，2H)，0.87(d，J＝6.0Hz，12H)，0.82-0.76(m，3H)。C₄₁H₆₁N₅O₇S的m/z计算值＝767.43。实测值[M+H]⁺＝768.51[M-Boc+2H]⁺＝668.38。R_f＝0.32(10％EtOAc/Hex)。

化合物K-1：

根据一般程序6从(S)-1-((S)-1-(((S，E)-6-(4-(1-氨基环丙基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯和Fmoc-Val-Cit-OH制备标题化合物。

C₆₇H₉₁N₉O₁₂S的m/z计算值＝1245.65。实测值[M+H]⁺＝1246.89，[M+Na]⁺＝1268.88，[M-Boc+2H]⁺＝1146.82，R_f＝0.52(5％MeOH/(2％AcOH/EtOAc))。

化合物K-2：(S)-1-((S)-1-(((S，E)-6-(4-(1-((R)2-((R)2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)环丙基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯

根据一般程序8从化合物K-1制备标题化合物。

C₅₂H₈₁N₉O₁₀S的m/z计算值＝1023.58。实测值[M+H]⁺＝1024.72，[M-15 Boc+2H]⁺＝924.66。

化合物K-3：1-((S)-1-(((S，E)-6-(4-(1-((R)-2-((R)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)环丙基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸酯

根据一般程序9从(S)-1-((S)-1-(((S，E)-6-(4-(1-((R)-2-((R)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)环丙基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代-3-苯基丁烷-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯和MC-NHS制备标题化合物。

C₆₂H₉₂N₁₀O₁₃S的m/z计算值＝1216.66。实测值[M+H]⁺＝1217.89，[M+Na]⁺＝1239.94，[M-Boc+2H]⁺＝1117.82。R_f＝0.39(10％(5％AcOH/MeOH)/CH₂Cl₂)。

化合物K：(S，E)-N-(4-(1-((R)-2-((R)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)环丙基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序10从化合物K-3制备标题化合物。C₅₇H₈₄N₁₀O₁₁S的m/z计算值＝1116.60。实测值[M+H)⁺＝1117.77，[(M+2H)/2]²⁺＝559.56。

实施例12

化合物KK：(S，E)-N-(4-(1-((14S，17S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)环丙基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物KK-1：(S，E)-N-(4-(1-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)(环丙基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序10从化合物K-2合成标题化合物。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.97-7.90(m，2H)，7.59-7.51(m，2H)，7.47(dd，J＝8.5，6.9Hz，2H)，7.44-7.34(m，3H)，6.46(dd，J＝9.4，1.7Hz，1H)，5.02(t，J＝10.0Hz，1H)，4.93(s，1H)，4.43(dd，J＝8.6，5.8Hz，1H)，4.35(s，1H)，3.71(d，J＝5.7Hz，1H)，3.23-3.09(m，5H)，2.51(s，3H)，2.22(dt，J＝13.4，6.7Hz，1H)，2.04(q，J＝8.8，7.8Hz，1H)，1.89-1.68(m，4H)，1.58(dq，J＝14.5，8.7，8.3Hz，2H)，1.48(s，4H)，1.36(d，J＝14.3Hz，5H)，1.15-0.99(m，16H)，0.90(dd，J＝6.6，3.4Hz，6H)。C₄₇H₇₃N₉O₈S的m/z计算值＝923.53。[M+H]⁺实测值＝924.8。

化合物KK：(S，E)-N-(4-(1-((14S，17S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)环丙基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基2-((S)-3-甲基2-(甲基胺基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序9从KK-1和MT-NHS合成标题化合物，然后通过制备级HPLC-MS纯化。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.99-7.91(m，2H)，7.60-7.52(m，2H)，7.48(t，J＝7.7Hz，2H)，7.44-7.31(m，3H)，6.84(s，2H)，6.45(dd，J＝9.3，1.7Hz，1H)，5.00(t，J＝10.0Hz，1H)，4.94(s，1H)，4.35(d，J＝5.3Hz，2H)，4.21(d，J＝6.9Hz，1H)，3.81-3.67(m，4H)，3.67-3.54(m，10H)，3.25-3.05(m，5H)，2.64-2.47(m，5H)，2.20-1.99(m，2H)，1.85(d，J＝1.3Hz，4H)，1.73(dq，J＝9.5，4.5Hz，1H)，1.66-1.28(m，11H)，1.12-0.94(m，16H)，0.90(dd，J＝6.6，4.9Hz，6H)。C₆₀H₉₀N₁₀O₁₄S的m/z计算值＝1206.64。[M+H]⁺实测值＝1207.9。

实施例13

化合物L：(R)-N-((2S，3S)-1-(((S，E)-6-(4-((14S，17S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代E-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊烷-2-基)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺

化合物L-1：(S，E)-4-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)-2，5-二甲基己-2-烯酸乙酯，Boc-ICD-OEt

从(S，E)-2，5-二甲基-4-(甲基氨基)己-2-烯酸乙酯(根据US 7,579,323 B1合成)和Boc-异亮氨酸-OH并利用一般程序6合成标题化合物。提供用TFA处理以移除Boc基团，并在光谱中拆分旋转异构体的样品的NMR。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ6.68(dd，J＝9.5，1.8Hz，1H)，5.33(s，0H)，4.97(t，J＝9.9Hz，1H)，4.36(d，J＝4.1Hz，1H)，4.25(q，J＝7.1Hz，2H)，3.56(s，1H)，2.96(s，3H)，2.07-1.83(m，5H)，1.53(s，1H)，1.34(t，J＝7.1Hz，3H)，1.12(d，J＝7.0Hz，3H)，1.00-0.83(m，9H)。

化合物L-2：(S，E)-4-((2S，3R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-N，3-二甲基戊酰基)-2，5-二甲基己-2-烯酸

使用一般程序11从Boc-ICD-OEt生成标题化合物。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ6.79(dd，J＝9.3，1.7Hz，1H)，5.28(d，J＝9.7Hz，1H)，5.11(dd，J＝10.6，9.2Hz，1H)，4.46-4.34(m，1H)，3.01(s，3H)，1.94(s，J＝1.5Hz，4H)，1.77-1.54(m，2H)，1.44(s，9H)，1.14(dt，J＝15.8，8.0Hz，1H)，0.97-0.81(m，12H)。

化合物L-3：(S，E)-4-((2S，3S)-N，3-二甲基2-((R)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)戊酰基)-2，5-二甲基己-2-烯酸

根据一般程序10从化合物L-1合成标题化合物，并利用一般程序6使释放的胺与D-(N-甲基)-哌啶酸反应。最后，利用一般程序11释放C-末端羧酸酯，然后通过制备级HPLC纯化。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ6.77(dd，J＝9.5，1.4Hz，1H)，5.04(t，J＝10.1Hz，1H)，4.65-4.56(m，1H)，3.79-3.69(m，1H)，3.54-3.45(m，1H)，3.12(s，3H)，3.10-3.06(m，1H)，2.76(s，3H)，2.21-2.10(m，1H)，2.08-2.00(m，1H)，2.01-1.92(m，2H)，1.90(d，J＝1.5Hz，3H)，1.88-1.72(m，3H)，1.69-1.52(m，2H)，1.31-1.16(m，1H)，0.98-0.86(m，12H)。C₂₂H₃₉N₃O₄的m/z计算值＝409.29[M+H]⁺实测值＝410.91。

化合物L-4：(S，E)-4-((2S，3S)-2-氨基-N，3-二甲基戊酰基)-2，5-二甲基-N-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基磺酰基)己-2-烯酰胺

根据一般程序11从化合物L-2制备标题化合物，然后根据一般程序2用2，2，2-三氟-N-(4-氨磺酰基苯基)乙酰胺生成N-酰基磺酰胺，然后进行一般程序10。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ8.00-7.85(m，2H)，7.76(d，J＝8.8Hz，2H)，6.39(dd，J＝9.2，1.8Hz，1H)，4.45-4.30(m，1H)，4.14(d，J＝4.1Hz，1H)，2.82(s，3H)，2.08-1.91(m，1H)，1.67(s，J＝1.5Hz，3H)，1.41-1.35(m，J＝13.3，7.6，3.2Hz，1H)，1.10-0.88(m，4H)，0.77(ddd，J＝17.2，9.0，5.4Hz，9H)。

化合物L-5：(R)-N-((2S，3S)-1-(((S，E)-2，5-二甲基-6-氧代-6-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基亚磺酰胺基)己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊烷-2-基)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺

根据一般程序6从化合物L-4和N-甲基-D-哌啶酸制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.97(d，2H)，7.77(d，2H)，7.67(d，J＝8.6Hz，OH)，6.60(d，J＝9.2Hz，1H)，4.96(t，J＝9.9Hz，1H)，4.61(d，J＝8.8Hz，1H)，3.75(hept，J＝6.6Hz，1H)，3.19-3.10(m，1H)，3.06(s，3H)，2.45(s，2H)，2.39(s，3H)，2.01-1.88(m，3H)，1.84(d，J＝1.4Hz，3H)，1.78-1.54(m，5H)，1.25-1.13(m，1H)，0.92(s，1H)，0.91-0.86(m，8H)，0.83(d，J＝6.6Hz，3H)。C₃₀H₄₄F₃N₅O₆S的m/z计算值＝659.30[M+H]⁺实测值＝660.88。

化合物L-6：(R)-N-((2S，3S)-1-(((S，E)-6-(4-氨基苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊烷-2-基)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺

根据一般程序5从化合物L-5制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.72(d，2H)，6.69(d，2H)，6.42(dd，J＝9.2，1.7Hz，1H)，4.61-4.55(m，1H)，3.72(dd，J＝12.2，3.2Hz，1H)，3.52-3.44(m，1H)，3.37(s，3H)，3.12(s，3H)，3.09-3.03(m，1H)，2.71(s，3H)，2.20-1.92(m，3H)，1.84(d，J＝1.4Hz，3H)，1.80-1.72(m，2H)，1.67-1.53(m，2H)，1.29-1.16(m，1H)，0.96-0.85(m，12H)。C₂₈H₄₅N₅O₅S的m/z计算值＝563.31[M+H]⁺实测值＝564.93。

化合物L：(R)-N-((2S，3S)-1-(((S，E)-6-(4-((14S，7S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊烷-2-基)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺

根据一般程序7从化合物L-6和MT-Val-Cit-OH制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ8.00(d，2H)，7.88(d，2H)，6.83(s，2H)，6.46(dd，J＝9.1，1.6Hz，1H)，4.57(d，J＝8.3Hz，1H)，4.55-4.52(m，1H)，4.22(d，J＝6.9Hz，1H)，3.80-3.73(m，3H)，3.73-3.66(m，2H)，3.66-3.60(m，2H)，3.58(d，J＝2.2Hz，8H)，3.52-3.43(m，1H)，3.26-3.19(m，1H)，3.17-3.13(m，2H)，3.12(s，4H)，2.71(s，3H)，2.61-2.55(m，2H)，2.21-2.01(m，3H)，2.00-1.88(m，3H)，1.83(d，J＝1.4Hz，3H)，1.81-1.71(m，4H)，1.68-1.52(m，4H)，1.29-1.14(m，1H)，1.01(t，J＝6.8Hz，6H)，0.94-0.86(m，12H)。C₅₂H₈₂N₁₀O₁₄S的m/z计算值＝1102.57[M+H]⁺实测值＝1104.22

实施例14

化合物M：(R)-N-((S)-1-(((S，E)-6-(4-((14S，17S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺

化合物M-1：(S，E)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((R)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酸

根据一般程序6和11从(S，E)-4-((S)-2-氨基-N，3，3-三甲基丁酰胺基)-2，5-二甲基己-2-烯酸乙酯(根据US 7,579,323 B1合成)和D-N-甲基-哌啶酸制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ6.60(dd，J＝9.4，1.7Hz，1H)，5.04(t，J＝10.0Hz，1H)，4.77(s，1H)，4.62(s，1H)，3.30-3.23(m，1H)，3.10(s，3H)，2.68(t，J＝12.2Hz，1H)，2.52(s，3H)，2.04(s，1H)，2.02-1.93(m，2H)，1.90(d，J＝1.4Hz，3H)，1.88-1.79(m，1H)，1.77-1.62(m，2H)，1.56-1.43(m，1H)，1.04(s，9H)，0.92(d，J＝6.6Hz，3H)，0.85(d，J＝6.6Hz，3H)。C₂₂H₃₉N₃O₄的m/z计算值＝409.29[M+H]⁺实测值＝410.92。

化合物M-2：(R)-N-((S)-1-(((S，E)-2，5-二甲基-6-氧代-6-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基亚磺酰胺基)己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺

利用一般程序3从化合物M-1和2，2，2-三氟-N-(4-氨磺酰基苯基)乙酰胺制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ8.08(d，J＝8.8Hz，2H)，7.92(d，J＝8.9Hz，2H)，6.47(d，J＝9.0Hz，1H)，5.01-4.92(m，1H)，4.70(s，1H)，3.82(d，J＝12.3Hz，1H)，3.53-3.43(m，1H)，3.13(s，3H)，2.72(s，3H)，2.22-1.90(m，4H)，1.85(d，J＝1.4Hz，5H)，1.60(m，1H)，1.40-1.22(m，4H)，1.03(s，9H)，0.89(dd，J＝17.1，6.5Hz，6H)。C₃₀H₄₄F₃N₅O₆S的m/z计算值＝659.76[M+H]⁺实测值＝660.95。

化合物M-3：(R)-N-((S)-1-(((S，E)-6-(4-氨基苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺

根据一般程序5从化合物M-2制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.76-7.66(m，2H)，6.74-6.64(m，2H)，6.42(dd，J＝8.9，1.7Hz，1H)，4.94(m，1H)，4.70(s，1H)，3.82(dd，J＝12.2，3.1Hz，1H)，3.54-3.42(m，1H)，3.13(s，4H)，2.70(s，3H)，2.16(d，J＝14.6Hz，1H)，2.11-2.01(m，1H)，1.96(d，J＝12.9Hz，2H)，1.89-1.51(m，6H)，1.03(s，9H)，0.89(dd，J＝16.3，6.5Hz，6H)。C₂₈H₄₅N₅O₅S的m/z计算值＝563.31[M+H]⁺实测值＝564.93。

化合物M：(R)-N-((S)-1-(((S，E)-6-(4-((14S，7S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1-甲基哌啶-2-甲酰胺

根据一般程序7从化合物M-3和MT-Val-Cit-OH制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ8.00(d，J＝8.9Hz，2H)，7.88(d，J＝8.7Hz，2H)，6.83(s，2H)，6.46(d，J＝9.1Hz，1H)，4.96-4.91(m，1H)，4.72-4.68(m，1H)，4.58-4.51(m，1H)，4.22(t，J＝7.2Hz，1H)，3.83-3.73(m，3H)，3.72-3.67(m，2H)，3.65-3.61(m，2H)，3.61-3.55(m，8H)，3.52-3.46(m，1H)，3.27-3.19(m，1H)，3.13(s，3H)，3.09-3.03(m，1H)，2.69(s，3H)，2.58(t，J＝6.0Hz，2H)，2.19-2.01(m，4H)，2.00-1.90(m，3H)，1.84(d，J＝1.4Hz，3H)，1.83-1.72(m，3H)，1.61(d，J＝9.0Hz，3H)，1.03(s，11H)，1.00(d，J＝6.8Hz，4H)，0.91(d，J＝6.5Hz，3H)，0.87(d，J＝6.6Hz，3H)。C₅₂H₈₂N₁₀O₁₄S的m/z计算值＝1102.57[M+H]⁺实测值＝1104.30。

实施例15

化合物N：(R)-N-((S)-1-(((S，E)-6-(4-((14S，17S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)苯基亚磺酰胺基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1-异丙基哌啶-2-甲酰胺

化合物N-1：(R)-N-((S)-1-(((S，E)-2，5-二甲基-6-氧代-6-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基亚磺酰胺基)己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1-异丙基哌啶-2-甲酰胺

利用一般程序3从(S，E)-4-((S)-2-((R)-1-异丙基哌啶-2-甲酰胺基)-N，3，3-三甲基丁酰胺基)-2，5-二甲基己-2-烯酸(根据US2012/0309938 A1制备)和2，2，2-三氟-N-(4-氨磺酰基苯基)乙酰胺制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ8.00(d，J＝8.8Hz，2H)，7.83(d，J＝8.8Hz，2H)，6.56(d，J＝9.1Hz，1H)，4.69(s，1H)，4.12(dd，J＝11.6，3.3Hz，1H)，3.95(hept，J＝6.2Hz，1H)，3.54-3.41(m，2H)，3.37(s，3H)，3.08(s，3H)，3.04-2.89(m，1H)，2.13(dd，J＝17.2，6.4Hz，1H)，2.00-1.88(m，4H)，1.84(d，J＝1.5Hz，4H)，1.71-1.52(m，1H)，1.29(dd，J＝28.0，6.7Hz，8H)，1.17(d，J＝6.1Hz，6H)，1.01(s，10H)，0.86(dd，J＝28.2，6.5Hz，7H)。C₃₂H₄₈F₃N₅O₆S的m/z计算值＝687.33[M+H]⁺实测值＝688.9。

化合物N-2：(R)-N-((S)-1-(((S，E)-6-(4-氨基苯基亚磺酰基)-2，5-二甲基-6-氧代己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1-异丙基哌啶-2-甲酰胺

根据一般程序5从化合物N-1制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.75-7.62(m，2H)，6.74-6.62(m，2H)，6.59-6.35(m，1H)，4.70(s，1H)，4.09(dd，J＝11.7，3.3Hz，1H)，3.52-3.38(m，2H)，3.10(s，3H)，3.02-2.87(m，1H)，2.12(d，J＝11.9Hz，1H)，2.06-1.73(m，11H)，1.70-1.50(m，1H)，1.28(dd，J＝28.8，6.7Hz，6H)，1.02(s，9H)，0.87(dd，J＝27.7，6.5Hz，6H)。C₃₀H₄₉N₅O₅S的m/z计算值＝591.35[M+H]⁺实测值＝593.0。

化合物N-3：(S)-1-((S)-1-(4-(N-((S，E)-4-((S)-2-((R)-1-异丙基哌啶-2-甲酰胺基)-N，3，3-三甲基丁酰胺基)-2，5-二甲基己-2-烯酰基)氨磺酰基)苯基氨基)-1-氧代-5-脲基戊烷-2-基氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸叔丁酯

根据一般程序7从化合物N-2和Boc-Val-Cit-OH合成标题化合物。C₄₆H₇7N₉O₁₀S的m/z计算值＝947.55[M+H]⁺实测值＝949.2。

根据一般程序10和9从化合物N-3和MT-NHS合成标题化合物，并通过制备级HPLC-MS纯化。

C₅₄H₈₆N₁₀O₁₄S的m/z计算值＝1130.60[M+H]⁺实测值＝1132.5。

实施例16

化合物O：

(R)-N-(4-(N-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5R)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)氨磺酰基)苯基)-2-((S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12-氧代-3，6，9-三氧杂-13-氮杂十五烷酰胺基)-5-脲基戊酰胺。

化合物O-1：(S)-1-(((3R，4S，5R)-3-甲氧基-1-((S)-2-((1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基亚磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸叔丁酯

根据一般程序3从可商购获得的Boc-Val-dip-Dap-OH(0.08g，0.14mmol)和2，2，2-三氟-N-(4-氨磺酰基苯基)乙酰胺(0.045g，1.2当量)，使用二环己基碳二亚胺(0.0347g，1.2当量)、N，N-二甲基-4-氨基吡啶(0.0205g，1.2当量)在CH₂Cl₂/DMF(2mL，10∶1，v/v)中合成标题化合物。通过硅胶色谱法使用己烷中的10-45％EtOAc(含2％AcOH)经过10倍柱体积分离标题化合物(0.112g，98％)。C₃₇H₅₈F₃N₅O₁₀S的m/z计算值＝821.39[M+H]⁺实测值＝823.04。

化合物O-2：(S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N-((3R，4S，5R)-3-甲氧基-1-((S)-2-((1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基亚磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚-4-基)-N，3-二甲基丁酰胺。

如下制备标题化合物，根据一般程序10，用三氟乙酸处理化合物O-1(0.111g，0.133mmol)，随后在CH₂Cl₂中用HATU(0.076g，1.5当量)和N，N-二-异丙基乙基胺(0.093mL，4当量)激活N，N-二甲基缬氨酸(0.029g，0.20mmol，1.5当量)，并引入上文根据一般程序6生成的TFA盐。将粗反应浓缩至干燥，溶解于最少量CH₂Cl₂中，并通过硅胶色谱法(3-20％MeOH/CH₂Cl₂，经过10倍柱体积，25g柱)纯化得到呈无色油的标题化合物(0.108g，97％)。C₃₉H₆₃F₃N₆O₉S的m/z计算值＝848.43[M+H]⁺实测值850.11。

化合物O-3：(S)-N-((3R，4S，5R)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-(4-氨基苯基亚磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺。

在室温下根据一般程序5从化合物O-2(0.114g，0.13mmol)和氢氧化锂(0.671mL，1M，5当量)在二噁烷(5.0mL)中经过16h制备标题化合物。用饱和NH₄Cl将溶液pH调整为7，在减压下浓缩得到乳白色悬浮液并反复萃取(3x20mL，EtOAc)。汇集有机相，经MgSO₄干燥，过滤，浓缩，且无需进一步纯化就可以使用(0.097g，96％)。C₃₇H₆₄N₆O₈S的m/z计算值＝752.45[M+H]⁺实测值754.16。

化合物O：(R)-N-(4-(N-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5R)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)氨磺酰基)苯基)-2-((S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12-氧代-3，6，9-三氧杂-13-氮杂十五烷酰胺基)-5-脲基戊酰胺。

用一般程序7从MT-VAL-CIT-OH(0.0394g，0.071mmol，2当量)和化合物O-3(0.030g，0.035mmol)与EDCI(0.0115g，2.1当量)、羟基苯并三唑(0.0101g，2.1当量)和氯化铜(II)(0.010g，2.1当量)在二氯甲烷/DMF的混合物(7∶1v/v)中合成标题化合物。在反应完成时，浓缩反应，并用TMEDA的甲醇溶液处理，然后在真空中浓缩。将蓝色残余物溶解于甲醇中，并在使含产物级分冷冻干燥后通过制备级HPLC-MS纯化得到呈松软白色吸湿固体的标题化合物(4.65mg)。C₆₁H₁₀₁N₁₁O₁₇S的m/z计算值＝1291.71[M+H]⁺实测值1292.89。

实施例17

化合物P：

(S)-N-(4-((N-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5R)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)氨磺酰基)甲基)苯基)-2-((S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12-氧代-3，6，9-三氧杂-13-氮杂十五烷酰胺基)-5-脲基戊酰胺。

化合物P-1：(S)-1-(((3R，4S，5R)-3-甲氧基-1-((S)-2-((1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)甲基亚磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基）-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸叔丁酯。

通过一般程序3从可商购获得的Boc-Val-Dil-Dap-OH和2，2，2-三氟-N-(4-(氨磺酰基甲基)苯基)乙酰胺制备标题化合物。C₃₈H₆₀F₃N₅O₁₀S的m/z计算值＝835.40[M+HI]⁺实测值＝836.7。

化合物P-2：(S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N-((3R，4S，5R)-3-甲氧基-1-((S)-2-((1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-((4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基)甲基亚磺酰胺基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚-4-基)-N，3-二甲基丁酰胺

根据一般程序6从化合物P-1和N，N-二甲基缬氨酸制备标题化合物。C₄₀H₆₅F₃N₆O₉S的m/z计算值＝862.45[M+H]⁺实测值＝863.2。

化合物P-3：(S)-N-((3R，4S，5R)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((4-氨基苯基)甲基亚磺酰胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺

根据一般程序5从化合物P-2制备标题化合物。C₃₈H₆₆N₆O₈S的m/z计算值＝766.47[M-C₇H₈O₂S+H]⁺实测值＝599.0(甲基化醌裂解且损失磺酸4-氨基苄酯)。

化合物P：(S)-N-(4-((N-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5R)-4((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)氨磺酰基)甲基)苯基)-2-((S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12-氧代-3，6，9-三氧杂-13-氮杂十五烷酰胺基)-5-脲基戊酰胺。

利用一般程序5从MT-VAL-CIT-OH和化合物P-3合成标题化合物并通过制备级HPLC色谱法纯化。C₆₁H₁₀₁N₁₁O₁₇S的m/z计算值＝1305.73[M+H]⁺实测值＝1306.9。

实施例18

化合物Q：

(S)-N-(4-(N-((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，SR)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰基)氨磺酰基)苯基)-2-((S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12-氧代-3，6，9-三氧杂-13-氮杂十五烷酰胺基)-5-脲基戊酰胺

化合物Q-1：(S)-2-氨基-3-苯基-N-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基磺酰基)丙酰胺

根据一般程序3和10从Boc-苯丙氨酸和2，2，2-三氟-N-(4-氨磺酰基苯基)乙酰胺制备。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.42(s，1H)，7.84(d，J＝8.7Hz，2H)，7.73-7.64(m，1H)，7.69(d，J＝8.7Hz，2H)，7.24-7.14(m，3H)，7.13-7.06(m，2H)，3.65-3.60(m，1H)，3.06(dd，J＝14.2，5.1Hz，1H)，2.91(dd，J＝14.1，7.1Hz，1H)。C₁₇H₁₆F₃N₃O₄5的m/z计算值＝415.08[M+H]⁺实测值＝416.5。

化合物Q-2：(S)-1-(((3R，4S，5R)-3-甲氧基-1-((S)-2-((1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-((S)-1-氧代-3-苯基-1-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基亚磺酰胺基)丙烷-2-基氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸叔丁酯。

利用一般程序6从可商购获得的Boc-Val-dip-Dap-OH(0.07g)和化合物Q-1合成标题化合物。C₄₆H₆₇F₃N₆O₁₁S的m/z计算值＝968.45[M+Na]⁺实测值＝992.1。

化合物Q-3：(S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N-((3R，4S，SR)-3-甲氧基-1-((S)-2-((1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-((S)-1-氧代-3-苯基-1-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基亚磺酰胺基)丙烷-2-基氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚-4-基)-N，3-二甲基丁酰胺。

使用一般程序10和6从化合物Q-2(110mg)和N，N-二甲基缬氨酸制备标题化合物。C₄₈H₇₂F₃N₇O₁₀S的m/z计算值＝995.50[M+H]⁺实测值997.3。

化合物Q-4：(S)-N-((3R，4S，5R)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((S)-1-(4-氨基苯基亚磺酰胺基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺。

用一般程序5从化合物Q-3(100mg)制备标题化合物。C₄₆H₇₃N₇O₉S的m/z计算值＝899.52[M+H]⁺实测值901.3。

化合物Q：(S)-N-(4-(N-((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5R)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰基)氨磺酰基)苯基)-2-((S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯1-基)-14-异丙基-12-氧代-3，6，9-三氧杂-13-氮杂十五烷酰胺基)-5-脲基戊酰胺

使用一般程序7从化合物Q-4(25mg)和MT-Val-Cit-OH(63mg)制备标题化合物。C₇₀H₁₁₀N₁₂O₁₈S的m/z计算值＝1438.8amu；实测值[M+H]⁺＝1440.2，[(M+2H)/2]²⁺＝720.5

实施例19

化合物R：

(S)-N-(4-(N-((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5R)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰基)氨磺酰基)甲基苯基)-2-((S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12-氧代-3，6，9-三氧杂-13-氮杂十五烷酰胺基)-5-脲基戊酰胺

化合物R-1：(S)-2-氨基-3-苯基-N-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苄基磺酰基)丙酰胺

根据一般程序4和10从Boc-苯丙氨酸和2，2，2-三氟-N-(4-氨磺酰基苯基)乙酰胺制备。(S)-氨基甲酸叔丁基1-氧代-3-苯基-1-(苯基甲基亚磺酰胺基)丙烷-2-基酯¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ7.76-7.71(m，2H)，7.58(d，J＝8.4Hz，2H)，7.36-7.21(m，8H)，4.34(d，J＝13.1Hz，1H)，4.30(d，J＝13.1Hz，1H)，3.62(dd，J＝8.2，4.6Hz，1H)，3.21-3.09(m，1H)，2.89(dd，J＝14.3，8.3Hz，1H)。C₁₈H₁₈F₃N₃O₄S的m/z计算值＝429.10[M+H]⁺实测值＝430.7。

化合物R-2：(S)-1-(((3R，4S，5R)-3-甲氧基-1-((S)-2-((1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-((S)-1-氧代-3-苯基-1-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基甲基亚磺酰胺基)丙烷-2-基氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸叔丁酯

根据一般程序6从可商购获得的Boc-Val-Dil-Dap-OH和化合物R-1制备标题化合物。C₄₇H₆₉F₃N₆O₁₁S的m/z计算值＝982.47[M+Na]⁺实测值＝1006.2。

化合物R-3：(S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N-(93R，4S，5R)-3-甲氧基-1-((S)-2-((1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-((S)-1-氧代-3-苯基-1-(4-(2，2，2-三氟乙酰胺基)苯基甲基亚磺酰胺基)丙烷-2-基氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚-4-基)-N，3-二甲基丁酰胺。

根据一般程序10和6从化合物R-2和N，N-二甲基缬氨酸制备标题化合物。C₄₉H₇₄F₃N₇O₁₀S的m/z计算值＝1009.52[M+H]⁺实测值＝1011.0。

化合物R-4：(S)-N-((3R，4S，5R)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((S)-1-(4-氨基苯基甲基亚磺酰胺基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺。

根据一般程序5从化合物R-3制备所述化合物。C₄₇H₇₅N₇O₉5的m/z计算值＝913.53[M-C₇H₈O₂S+Na]⁺实测值＝768.1(甲基化醌裂解且损失磺酸4-氨基苄酯)。

化合物R：(S)-N-(4-(N-((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰基)氨磺酰基)甲基苯基)-2-((S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯1-基)-14-异丙基-12-氧代-3，6，9-三氧杂-13-氮杂十五烷酰胺基)-5-脲基戊酰胺

根据一般程序7从化合物R-4和MT-Val-Cit-OH制备所述化合物，随后通过制备级HPLC纯化。C₇₁H₁₁₂N₁₂O₁₈S的m/z计算值＝1452.8[M+H⁺]⁺实测值＝1454.6。

实施例20

化合物S：(S，E)-N-(4-((14R，17R)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)-2，3-二甲基苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物S-1：N-(2，3-二甲基-4-氨磺酰基苯基)-2，2，2-三氟乙酰胺

根据一般程序1从2，3-二甲基苯胺合成。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.25(s，1H)，7.79(d，J＝8.5Hz，1H)，7.48(s，2H)，7.29(d，J＝8.5Hz，1H)，2.55(s，3H)，2.14(s，3H)。

化合物S-2：(S，E)-N-(4-氨基-2，3-二甲基苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

用一般程序3、5和10从Boc-HTI-286-OH和化合物S-1合成。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.75(d，J＝8.8Hz，1H)，7.55(d，J＝7.9Hz，2H)，7.47(t，J＝1.1Hz，2H)，7.37(t，J＝6.9Hz，1H)，6.63(d，J＝8.8Hz，1H)，6.46(d，J＝9.7Hz，1H)，5.00(t，J＝10.0Hz，1H)，4.93(s，1H)，4.32(s，1H)，3.17(s，3H)，2.54(s，3H)，2.49(s，3H)，2.09(s，3H)，2.08-2.02(m，1H)，1.87(d，J＝1.4Hz，3H)，1.47(s，3H)，1.37(s，3H)，1.07(s，9H)，0.92(dd，J＝6.8，6.5Hz，6H)。

C₃₅H₅₃N₅O₅S的m/z计算值＝655.38[M+H]⁺实测值＝656.4。

根据一般程序9从化合物S-2和MT-NHS合成。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ8.01(dd，J＝11.0，8.2Hz，2H)，7.60-7.51(m，2H)，7.47(dd，J＝8.5，6.8Hz，3H)，7.41-7.31(m，1H)，6.83(s，2H)，6.50(dd，J＝9.5，1.8Hz，1H)，5.01(t，J＝10.0Hz，1H)，4.93(t，J＝4.1Hz，1H)，4.60(m，1H)，4.36(s，1H)，4.30-4.17(m，1H)，3.80-3.67(m，4H)，3.64(td，J＝5.5，1.2Hz，2H)，3.60(d，J＝3.2Hz，7H)，3.29-3.13(m，5H)，2.67-2.46(m，9H)，2.24(s，3H)，2.20-1.92(m，4H)，1.93-1.75(m，3H)，1.65(dp，J＝16.0，7.8Hz，2H)，1.43(d，J＝38.9Hz，6H)，1.14-0.96(m，16H)，0.92(t，J＝6.8Hz，6H)。

C₅₉H₉₀N₁₀O₁₄S的m/z计算值＝1194.64实测值[M+H]⁺1195.51；[(M+2H)/2]⁺599.09

实施例21

化合物T：(S，E)-N-(4-((14R，17R)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)-5，6，7，8-四氢萘-1-基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物T-1：2，2，2-三氟-N-(4-氨磺酰基-5，6，7，8-四氢萘-1-基)乙酰胺

根据一般程序1从5，6，7，8-四氢萘-1-胺合成。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.04(s，1H)，7.79(d，J＝8.4Hz，1H)，7.46(s，2H)，7.30(d，J＝8.4Hz，1H)，3.14(s，1H)，2.77(d，J＝15.4Hz，1H)，2.72-2.57(m，4H)，1.73(p，J＝3.3Hz，4H)。

化合物T-2：(S，E)-N-(4-氨基-5，6，7，8-四氢萘-1-基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S）-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

用一般程序3、5和10从Boc-HTI-286-OH和化合物T-1合成。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.74(d，J＝8.7Hz，1H)，7.55(d，J＝7.9Hz，2H)，7.48(t，J＝7.6Hz，2H)，7.38(t，J＝7.2Hz，1H)，6.60(d，J＝8.7Hz，1H)，6.46(d，J＝9.2Hz，1H)，5.00(t，J＝10.0Hz，1H)，4.95-4.91(m，1H)，4.36(s，1H)，3.17(s，3H)，3.10-3.05(m，2H)，2.51(s，3H)，2.46(t，J＝6.5Hz，2H)，2.10-2.02(m，1H)，1.88(s，3H)，1.87-1.75(m，4H)，1.47(s，3H)，1.38(s，3H)，1.07(s，9H)，0.92(dd，J＝7.1Hz，6H)。

C₃₇H₅₅N₅O₅S的m/z计算值＝681.39[M+H]⁺实测值＝682.4。

根据一般程序9从化合物T-2和MT-NHS合成。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.98(d，J＝8.7Hz，1H)，7.62(d，J＝8.7Hz，1H)，7.59-7.51(m，2H)，7.47(dd，J＝8.5，6.8Hz，2H)，7.42-7.30(m，1H)，6.83(s，2H)，6.50(dd，J＝9.5，1.8Hz，1H)，5.01(t，J＝10.0Hz，1H)，4.93(t，J＝4.1Hz，1H)，4.62(td，J＝8.1，7.5，5.0Hz，1H)，4.37(s，1H)，4.29-4.18(m，1H)，3.75(t，J＝6.0Hz，2H)，3.72-3.67(m，2H)，3.64(td，J＝5.9，1.5Hz，2H)，3.29-3.08(m，7H)，2.74(d，J＝6.0Hz，2H)，2.62-2.46(m，5H)，2.20-1.94(m，4H)，1.91-1.75(m，7H)，1.70-1.58(m，2H)，1.48(s，3H)，1.38(s，3H)，1.07(s，9H)，1.00(dd，J＝6.8，3.4Hz，6H)，0.92(t，J＝6.6Hz，6H)。

C₆₁H₉₂N₁₀O₁₄S的m/z计算值＝1220.65，实测值[M+H]⁺1221.48；[(M+2H)/2]⁺611.39

实施例22

化合物U：(S，E)-N-(4-((14R，17R)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)-3-氟苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物U-1：2，2，2-三氟-N-(2-氟-4-氨磺酰基苯基)乙酰胺

根据一般程序1从2-氟苯胺合成。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.58(s，1H)，7.85-7.66(m，3H)，7.56(s，2H)。

化合物U-2：(S，E)-N-(4-氨基-3-氟苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

用一般程序3、5和10从Boc-HTI-286-OH和化合物U-1合成。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.62-7.55(m，3H)，7.54(s，1H)，7.48(t，J＝7.7Hz，2H)，7.37(t，J＝13Hz，1H)，6.85(t，J＝8.6Hz，1H)，6.45(d，J＝9.3Hz，1H)，4.98(t，J＝9.9Hz，1H)，4.92(s，1H)，4.34(s，1H)，3.16(s，3H)，2.50(s，3H)，2.12-2.00(m，1H)，1.88(d，J＝1.4Hz，3H)，1.46(s，3H)，1.37(s，3H)，1.07(s，9H)，0.91(dd，J＝6.8Hz，6H)。

C₃₃H₄₈FN₅O₅S的m/z计算值＝645.34[M+H]⁺＝646.4

根据一般程序9从化合物U-2和MT-NHS合成。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ8.42-8.28(m，1H)，7.91-7.77(m，2H)，7.58-7.51(m，2H)，7.47(t，J＝7.8Hz，2H)，7.42-7.32(m，1H)，6.84(s，2H)，6.50(dd，J＝9.3，1.8Hz，1H)，5.02-4.90(m，2H)，4.67(td，J＝7.9，7.2，4.8Hz，1H)，4.35(s，1H)，4.26(t，J＝7.5Hz，1H)，3.76(t，J＝6.1Hz，2H)，3.70(td，J＝5.5，1.2Hz，2H)，3.67-3.53(m，10H)，3.28-3.06(m，5H)，2.61-2.47(m，5H)，2.19-2.01(m，2H)，2.01-1.71(m，4H)，1.61(dt，J＝15.2，7.1Hz，2H)，1.46(s，3H)，1.36(s，3H)，1.13-0.95(m，16H)，0.91(dd，J＝6.6，4.9Hz，6H)。

C₅₇H₈₅FN₁₀O₁₄S的m/z计算值＝1184.60，实测值[M+H]⁺1185.47；[(M+2H)/2]⁺593.41

实施例23

化合物V：(S，E)-N-(4-((14R，17R)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)-2-乙基苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物V-1：N-(3-乙基-4-氨磺酰基苯基)-2，2，2-三氟乙酰胺

根据一般程序1从3-乙基苯胺合成。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.48(s，1H)，7.89(d，J＝8.5Hz，1H)，7.75-7.63(m，2H)，7.45(s，2H)，3.02(q，J＝7.5Hz，2H)，1.24(t，J＝7.4Hz，3H)。

化合物V-2：(S，E)-N-(4-氨基-2-乙基苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

使用一般程序3、5和10从Boc-HTI-286-OH和化合物V-1合成。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.79(d，J＝8.7Hz，1H)，7.55(d，J＝7.9Hz，2H)，7.48(t，J＝7.6Hz，2H)，7.37(t，J＝7.4Hz，1H)，6.57(d，J＝2.3Hz，1H)，6.54(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，6.46(d，J＝9.4Hz，1H)，5.01(t，J＝10.0Hz，1H)，4.92(s，1H)，4.34(s，1H)，3.16(s，3H)，2.99-2.90(m，2H)，2.50(s，3H)，2.11-2.00(m，1H)，1.87(d，J＝1.4Hz，3H)，1.47(s，3H)，1.38(s，3H)，1.22(t，J＝7.5Hz，3H)，1.06(s，9H)，0.91(dd，J＝6.6Hz，6H)。

C₃₅H₅₃N₅O₅S的m/z计算值＝655.38[M+H]⁺＝656.4。

根据一般程序9从化合物V-2和MT-NHS合成。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ8.04(d，J＝8.8Hz，1H)，7.77(d，J＝2.2Hz，1H)，7.67(dd，J＝8.8，2.2Hz，1H)，7.54(d，J＝7.6Hz，2H)，7.46(t，J＝7.7Hz，2H)，7.36(t，J＝7.3Hz，1H)，6.83(s，2H)，6.51(dd，J＝9.5，1.9Hz，1H)，5.01(t，J＝10.0Hz，1H)，4.92(d，J＝8.4Hz，2H)，4.60-4.47(m，1H)，4.37(s，1H)，4.23(d，J＝6.9Hz，1H)，3.82-3.72(m，2H)，3.69(dd，J＝6.0，4.5Hz，2H)，3.66-3.52(m，10H)，3.28-3.10(m，5H)，3.06(q，J＝7.4Hz，2H)，2.58(t，J＝6.0Hz，2H)，2.52(s，3H)，2.20-1.90(m，3H)，1.87(s，3H)，1.84-1.72(m，1H)，1.64-1.55(m，2H)，1.47(s，3H)，1.37(s，3H)，1.26(t，J＝7.5Hz，3H)，1.10-0.96(m，15H)，0.91(dd，J＝6.6，4.0Hz，6H)。

C₅₉H₉₀N₁₀O₁₄S的m/z计算值＝1194.64实测值[M+H]⁺1195.57；[(M+2H)/2]⁺599.12

实施例24

化合物W：(S，E)-N-(4-((14R，17R)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)-3-乙基苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物W-1：N-(2-乙基-4-氨磺酰基苯基)-2，2，2-三氟乙酰胺

根据一般程序1从2-乙基苯胺合成。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.21(s，1H)，7.80(d，J＝2.1Hz，1H)，7.72(dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，7.48(d，J＝8.3Hz，1H)，7.41(s，2H)，2.64(q，J＝7.6Hz，2H)，1.16(t，J＝7.5Hz，3H)。

化合物W-2：(S，E)-N-(4-氨基-3-乙基苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

使用一般程序3、5和10从Boc-HTI-286-OH和化合物W-1合成。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.66(d，J＝2.3Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.6，2.3Hz，1H)，7.55(d，J＝7.6Hz，2H)，7.48(t，J＝7.7Hz，2H)，7.37(t，J＝7.3Hz，1H)，6.71(d，J＝8.5Hz，1H)，6.43(dd，J＝9.3，1.7Hz，1H)，4.96(t，J＝9.9Hz，1H)，4.92(s，1H)，4.35(s，1H)，3.16(s，3H)，2.54(dd，J＝7.4，2.2Hz，2H)，2.51(s，3H)，2.12-1.99(m，1H)，1.87(d，J＝1.4Hz，3H)，1.46(s，3H)，1.36(s，3H)，1.27(t，J＝7.5Hz，3H)，1.07(s，9H)，0.91(dd，J＝6.4Hz，6H)

C₃₅H₅₃N₅O₅S的m/z计算值＝655.38[M+H]⁺＝656.5。

根据一般程序9从化合物W-2和MT-NHS合成。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.97(d，J＝2.3Hz，1H)，7.87(dd，J＝8.5，2.3Hz，1H)，7.77(d，J＝8.5Hz，1H)，7.59-7.51(m，2H)，7.51-7.42(m，2H)，7.41-7.34(m，1H)，6.84(s，2H)，6.48(dd，J＝9.4，1.8Hz，1H)，4.98(t，J＝9.9Hz，1H)，4.92(d，J＝8.4Hz，1H)，4.64(td，J＝8.4，7.6，3.7Hz，1H)，4.36(s，1H)，4.25(d，J＝7.0Hz，1H)，3.82-3.67(m，4H)，3.67-3.53(m，10H)，3.29-3.09(m，5H)，2.77(q，J＝7.5Hz，2H)，2.62-2.46(m，5H)，2.20-1.95(m，4H)，1.91-1.74(m，4H)，1.72-1.60(m，2H)，1.47(s，3H)，1.37(s，3H)，1.27(t，J＝7.5Hz，3H)，1.12-0.95(m，16H)，0.91(dd，J＝6.6，4.6Hz，6H)。

C₅₉H₉₀N₁₀O₁₄S的m/z计算值＝1194.64，实测值[M+H]⁺1195.54；[(M+2H)/2]⁺599.09

实施例25

化合物X：(S)-N-(4-(N-((S，E)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰基)氨磺酰基)苯基)-1-((S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-甲基-12-氧代-3，6，9-三氧杂-13-氮杂十五烷)吡咯烷-2-甲酰胺

根据一般步骤7从化合物H-1c和Boc-Ala-Pro-OH合成，随后根据一般步骤10移除Boc，并根据一般步骤9安装MT-NHS，然后通过制备级HPLC纯化。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.99(d，J＝8.9Hz，2H)，7.81(d，J＝8.5Hz，2H)，7.55(d，J＝7.5Hz，2H)，7.48(t，J＝7.7Hz，2H)，7.38(t，J＝7.3Hz，1H)，6.84(s，2H)，6.54-6.42(m，1H)，5.07-4.95(m，2H)，4.67(t，J＝6.8Hz，1H)，4.57(dd，J＝8.4，4.6Hz，1H)，4.35(s，1H)，3.95-3.83(m，1H)，3.80-3.66(m，5H)，3.61(dd，J＝18.6，4.6Hz，10H)，3.16(s，3H)，2.58-2.42(m，5H)，2.36(d，J＝18.0Hz，1H)，2.23-1.98(m，4H)，1.86(d，J＝1.4Hz，3H)，1.46(s，3H)，1.43-1.31(m，6H)，1.07(s，10H)，0.91(t，J＝6.3Hz，6H)。

C₅₉H₉₀N₁₀O₁₄S的m/z计算值＝1078.54，实测值[M+H]⁺1079.48；[(M+2H)/2]⁺540.27

实施例26

化合物Z：(S，E)-N-(4-((14S，17S)-17-(4-氨基丁基)-14-苄基-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12，15-二氧代-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序7从化合物H-1c和Fmoc-Phe-Lys(Boc)-OH制备标题化合物，随后根据一般步骤8移除Fmoc，根据一般程序9用MT-NHS酰化，并根据一般程序10去保护，然后通过制备级HPLC纯化。C₆₁H₈7N₉O₁₃S的m/z计算值＝1185.6，实测值[M+H⁺]⁺＝1186.6，且[(M+2H⁺)/2]²⁺＝593.9。

实施例27

化合物AA：(S，E)-N-(4-((14S，17S)-17-(4-氨基丁基)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序7从化合物H-1c和Fmoc-Val-Lys(Boc)-OH制备标题化合物，随后根据一般步骤8移除Fmoc，根据一般程序9用MT-NHS酰化，并根据一般程序10去保护，然后通过制备级HPLC纯化。C₅₇H₈₇N₉O₁₃S的m/z计算值＝1137.6，实测值[M+H⁺]⁺＝1138.5，且[(M+2H⁺)/2]²⁺＝569.8。

实施例28

化合物BB：(S，E)-N-(4-((2S，5S，8R)-2-(4-氨基丁基)-5-苄基-21-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-8-甲基-4，7，10-三氧代-13，16，19-三氧杂-3，6，9-三氮杂二十一烷酰胺基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序7从化合物H-1c和Fmoc-Ala-Phe(D)-Lys(Boc)-OH制备标题化合物。然后使通过快速色谱法纯化的最终材料接受一般程序8，以移除Fmoc保护基，随后根据一般程序9用MT-NHS处理，并根据一般程序10去保护，然后通过制备级HPLC纯化。C₆₄H₉₂N₁₀O₁₄S的m/z计算值＝1256.7，实测值[M+H⁺]⁺＝1258.3，且[(M+2H⁺)/2]²⁺＝630.2。

实施例29

化合物CC：(S，E)-N-(4-((2S，5S，8R)-2-(4-氨基丁基)-5，8-联苄基-21-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-4，7，10-三氧代-13，16，19-三氧杂-3，6，9-三氮杂二十一烷酰胺基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序7从化合物H-1c和Fmoc-Phe-Phe(D)-Lys(Boc)-OH合成标题化合物，通过一般程序8移除Fmoc，根据一般程序9与MT-NHS反应，并根据一般程序10去保护，随后进行制备级HPLC纯化。C₆₉H₉₄N₁₀O₁₄S的m/z计算值＝1332.7，实测值[M+H⁺]⁺＝1334.3，且[(M+2H⁺)/2]²⁺＝668.2。

实施例30

化合物DD：(S，E)-N-(2-((14S，17S)-1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-异丙基-12，15-二氧代-17-(3-脲基丙基)-3，6，9-三氧杂-13，16-二氮杂十八烷酰胺基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

化合物DD-1：2，2，2-三氟-N-(2-氨磺酰基苯基)乙酰胺

根据一般程序2从2-氨基苯磺酰胺制得标题化合物。

化合物DD-2：(S，E)-N-(2-氨基苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序3和5从化合物D-1和Boc-HTI-286-OH制备标题化合物。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ7.75(dd，J＝8.2，1.5Hz，1H)，7.55(d，J＝7.8Hz，2H)，7.48(t，J＝7.7Hz，2H)，7.38(t，J＝7.4Hz，1H)，7.33-7.27(m，1H)，6.81(d，J＝8.2Hz，1H)，6.69(t，J＝7.5Hz，1H)，6.49(dd，J＝9.1，1.5Hz，1H)，4.97(t，J＝10.1Hz，1H)，4.92(s，1H)，4.35(s，1H)，3.17(s，3H)，2.51(s，3H)，2.07(m，1H)，1.88(d，J＝1.4Hz，3H)，1.46(s，3H)，1.36(s，3H)，1.06(s，9H)，0.92(t，J＝6.8Hz，6H)。

C₃₃H₄₉N₅O₅S m/z计算值＝627.35amu；实测值[M+H]⁺＝628.36，[M+Na]⁺＝650.37，[(M+2H)/2]²⁺＝314.76

化合物DD-3：

根据一般程序7从化合物DD-2和Boc-Val-Cit-OH合成标题化合物。C₅₄H₈₅N₉O₁₂S的m/z计算值＝1083.60amu；实测值[M+H]⁺＝1084.8，[M+Na]⁺＝1106.7。

化合物DD-4：(S，E)-N-(2-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苯基磺酰基)-2，5-二甲基-4-((S)-N，3，3-三甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)-3-苯基丁酰胺基)丁酰胺基)己-2-烯酰胺

根据一般程序10从化合物DD-3生成标题化合物。C₄₄H₆₉N₉O₈S的m/z计算值＝883.50amu；实测值[M+H]⁺＝884.6，[M+Na]⁺＝906.6，[(M+2H)/2]²⁺＝442.8。

根据一般程序9从化合物DD-4和MT-NHS生成标题化合物，然后通过制备级HPLC-MS纯化。¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ8.16(d，J＝8.3Hz，1H)，7.95(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.50(d，J＝7.9Hz，2H)，7.42(dt，J＝15.5，7.8Hz，3H)，7.29(t，J＝7.3Hz，1H)，7.19(t，J＝7.5Hz，1H)，6.85(s，2H)，6.62(d，J＝9.3Hz，1H)，4.66(s，1H)，4.61(dd，J＝9.1，4.5Hz，1H)，4.37(d，J＝6.9Hz，1H)，3.76(dd，J＝7.5，5.7Hz，2H)，3.73-3.67(m，2H)，3.67-3.56(m，10H)，3.29-3.13(m，4H)，3.11(s，3H)，2.70(s，6H)，2.65-2.49(m，2H)，2.22(s，3H)，2.11(d，J＝7.5Hz，2H)，2.00(dt，J＝17.2，6.2Hz，2H)，1.86(d，J＝1.4Hz，3H)，1.66(dt，J＝14.5，7.8Hz，2H)，1.01(d，J＝13.3Hz，15H)，0.87(dd，J＝21.4，6.6Hz，6H)。

C₅₇H₈₆N₁₀O₁₄S m/z计算值＝1166.60amu；实测值[M+H]⁺＝1167.8，[M+Na]⁺＝1189.9，[(M+2H)/2]²⁺＝584.4。

生物测定

生物实施例1

基于曲妥珠单抗的ADC的选择性体外细胞毒性杀死HER2阳性细胞的测定：

每种制备的偶联物都证实了相对于HER2阴性Jurkat细胞，选择性杀死HER2阳性细胞系(诸如NCI-N87或HCC1954)。就表1来说，汇总了通过将曲妥珠单抗偶联至化合物A-DD形成的ADC在针对人胃癌细胞系NCI-N87和/或人乳腺癌细胞系HCC1954和人T细胞白血病细胞系Jurkat测试时的细胞毒性活性。

简单地说，从ATCC获得细胞并如所提供的产品卡中所述培养。以25000个细胞/mL(2500个细胞/孔)将细胞接种在Costar 3904黑壁平底96-孔板中。在37℃和5％CO₂气氛下培育粘附细胞系细胞一个晚上，让细胞贴附在微量滴定板表面，而悬浮(Jurkat)细胞是在即将使用前接种。以五倍期望最终浓度将ADC直接稀释于适宜的细胞生长培养基中。然后这些ADC在八个步骤内以1∶3滴定。每个微量滴定板上包括一个不存在测试物的对照(只有生长培养基)，一式六份。一式三份地将制备的化合物/ADC滴定液添加(25uL/孔)至HCC1954和/或NCI-N87细胞和Jurkat细胞。在37℃/5％CO₂下培育这些细胞和滴定液三个晚上(Jurkat)和3或5个晚上(HCC1954/NCI-N87)。培育后，利用试剂，通过向每个分析孔添加30uL制备的测定细胞存活率。这些混合物在黑暗中培育至少二十分钟，然后利用微板光度计(500ms积分时间)测量发射的光。利用上述只有生长培养基的对照将收集的相对光单位(RLU)转化为细胞毒性％(细胞毒性％＝1-[孔RLU/只有培养基的对照的RLU的平均值])。绘制数据(细胞毒性％相对于ADC的浓度(log10[nM]))，并通过非线性回归法，使用GraphPad Prism软件5.02版分析得到EC₅₀估计值。

表1

nd-未确定

＊除非有所指出，否则未观察到对Jurkat细胞系有细胞毒性。

组织蛋白酶B连接子裂解测定

测定通过偶联曲妥珠单抗制备的ADC对通过组织蛋白酶B(Sigma C8286)裂解并释放毒素的敏感性。使用Zeba 40KDa MWCO 离心柱交换ADC的缓冲液为25mM NaOAc、1mM EDTA(pH 5.0)。ADC浓度在1与3mg/mL之间(利用由曲妥珠单抗生成的标准曲线，通过BCA测定估算)。在典型实验中，用组织蛋白酶B(约5ug在10uL 20mM DTT、10mM EDTA、8mM NaOAc中)或不含酶的缓冲液处理每种ADC的等分试样(50uL；100ug)，并在37℃下培育反应。两小时后，使溶液通过Pall NanoSep 30KDa MWCO离心旋转过滤器过滤，并通过液相色谱-质谱法分析滤液(适当稀释后)，以鉴定因为组织蛋白酶B作用从ADC释放的小分子。在Waters Acquity H Class UPLC上用Acquity UPLC BEH C18柱(1.7μM，2.1×50mm)进行RP-LCMS来分析游离药物。使用MicroMass Q-TOF Premier进行高分辨率质谱检测，扫描范围为100至3000m/z。如下实施色谱法：以98％至40％A的线性梯度在5.5分钟内以0.3ml/min(A：0.1％甲酸的H₂O溶液，B：0.1％甲酸的ACN溶液)，然后冲洗，并重新平衡至初始状态。用MassLynx 4.1进行数据收集和分析。裂解测定的定性结果示于表1中。

在那些测试的偶联物中，通过组蛋白酶B体外释放以下物质：mAb-化合物A；mAb-化合物C；mAb-化合物D；mAb-化合物I；mAb-化合物N；mAb-化合物O；mAb-化合物P；mAb-化合物Q；mAb-化合物R；mAb-化合物S；mAb-化合物T；mAb-化合物U；mAb-化合物V；mAb-化合物W；mAb-化合物Z；mAb-化合物BB。

生物实施例2

毒素在NCI-N87荷瘤小鼠中的功效研究

给雌性NOD/SCIDγ(NSG)小鼠(Jackson Laboratories)的背部皮下植入NCI-N87肿瘤细胞系。NCI-N87人胃癌细胞源自在细胞毒素治疗前所取的胃的分化良好的癌的肝转移。肿瘤作为异种移植物在无胸腺裸鼠中传代三次，然后建立细胞系。

在25天时间内建立肿瘤，并根据肿瘤体积将测试受试者分组(表2)，使得每组(n＝10)的肿瘤体积分布相等(平均体积＞170mm³)。

以研究分组表中所示剂量静脉内施用一次测试物(在第22天)。用注射后临床观察记录(PICOR)表敏锐地评估动物健康。每周一、三和五测量体重(图12)和肿瘤体积(图13)。动物继续留在研究中，直到肿瘤尺寸达到800mm³，或因为达到人道终点需要实施安乐死。

表2：生物实施例2研究分组。

所评估的ADC有效减小肿瘤体积并延迟肿瘤再生。与媒介物相比时，所有受试ADC都显著增加肿瘤复发所需天数(图14)。T-化合物I与T-DM1相比时显著增加存活率，但与T-化合物K相比时无明显差异。T-化合物K与T-DM1相比时显著增加存活率，但与T-化合物I相比时无明显差异。

生物实施例3

毒素在NCI-N87荷瘤小鼠中的功效研究

在25天时间内建立肿瘤，并根据肿瘤体积将测试受试者分组(表3)，使得每组(n＝6-8)的肿瘤体积分布相等(平均体积＞150mm³)。

以表3中研究分组中所示剂量静脉内施用一次测试物(在第27天)。用注射后临床观察记录(PICOR)表敏锐地评估动物健康。每周一、三和五测量体重(图15)和肿瘤体积(图16)。动物继续留在研究中，直到肿瘤尺寸达到800mm³，或因为达到人道终点需要实施安乐死。

表3：生物实施例3研究分组

T＝曲妥珠单抗

评估的ADC有效减小肿瘤体积并延迟肿瘤再生。在单次IV剂量后的NCI-N87荷瘤NSG小鼠中，T-化合物E在3mg/kg剂量下对复发所需时间具有显著影响，且在7mg/kg剂量下对存活率具有显著影响(未显示)。ADC剂量和效果之间存在直接关系。在NCI-N87荷瘤NSG小鼠中，增加ADC剂量对复发所需时间和存活率具有最显著影响。对于所有ADC，最高剂量12mg/kg使肿瘤体积、肿瘤复发所需时间和存活率的降幅最大。研究小鼠对所有治疗的耐受性良好。

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