菜蓟滴定提取物及其用途的制作方法

本发明涉及与一种以上的化疗或抗炎药物组合的菜蓟滴定提取物、菜蓟提取物的滴定馏分或所述提取物与一种以上的所述滴定馏分的滴定混合物或所述馏分的混合物，以及包含它们的组合物和试剂盒，用于预防和/或治疗以stat3转录因子的组成型激活为特征的病理状态。
背景技术：
：近几十年来，许多文献中的证据表明属于stat家族的转录因子在多种病症中，如促进肿瘤的炎性病症和肿瘤本身中的基础作用。stat蛋白是细胞质转录因子，其磷酸化/激活(由于jak或janus激酶蛋白家族的作用而导致的在丝氨酸和/或酪氨酸的特异性残基上的)决定了两种stat单体的二聚化、二聚体在细胞核中的易位、与stat特异性靶基因的dna的元件结合以及基因转录的诱导。stat因子家族由七个成员(由基因stat1、stat2、stat3、stat4、stat5a、stat5b和stat6编码的)组成，具有包括在分化、增殖、发育、凋亡和细胞炎症上作用的各种生物学功能。由这些基因编码的蛋白质的一个特征是具有双重作用，更具体地是细胞质中的信号和细胞核中转录因子的转导作用。特别地，stat3和较少程度的stat5的组成型激活已经在各种瘤形成中与一些细胞内通路的失调关联，包括参与肿瘤存活和肿瘤细胞增殖而且在肿瘤本身的血管生成和转移过程中的那些通路。yuh.等人于2009年发表在nature的综述(naturereviewscancer9,798-809：2009)中报道了stat3的持续激活诱导促进癌症并调节对炎症和肿瘤微环境至关重要的基因的炎症。由stat3激活的基因示出在上述工作的表1和表2中，并且还描述了一些stat3激活的抑制剂存在于天然物质，如姜黄素、白藜芦醇、肉盘菌内酯(galiellalactone)和靛玉红中，但是这些物质发挥作用的机制仍未知。在任何情况下，该工作表明stat3的调节是治疗癌症的新的、更有效和非常有利的方法，其报道了stat3基因在各种肿瘤模型中的消融导致抑制肿瘤生长。stat3的组成型激活已经报道于包括乳腺癌、前列腺癌、头颈部鳞状细胞癌、多发性骨髓瘤、淋巴瘤和白血病、脑肿瘤、结肠癌、尤文氏肉瘤(ewing’ssarcoma)、胃癌、食管癌、卵巢癌、鼻咽癌和胰腺癌的大量肿瘤中(下表1)。对于许多类型的癌症，stat3激活的高水平已经与预后不良相关联。stat3的激活阻断凋亡且增加细胞增殖和细胞存活，从而促进血管生成和转移以及抑制抗肿瘤免疫应答。其中stat3组成型激活的肿瘤细胞系需要stat3(一种被定义为“依赖致癌基因”的表型)的连续激活(johnstonpa和grandisrg，molinterv；11(1)；18-26：2011)。恶性胸膜间皮瘤(mpm)是一种源自胸腔间皮细胞的侵袭性肿瘤。尽管化疗(通常如果采用了培美曲塞后)改善了患有不能手术的mpm的患者的生存时间，但全球生存时间平均值仅仅12个月。最近报道了mpm的潜在分子治疗靶标是由mpm患者的胸膜液中存在的高水平il-6激活的白细胞介素-6信号通路(il-6)/jak/stat3。il-6与其受体的结合导致引发jak激活的受体中的构象变化，该构象变化反过来又引发stat3转录因子的二聚化，并且stat3二聚体在细胞核中易位，从而确定引发各种靶基因的转录激活。这种通路是造血作用、免疫应答和肿瘤形成发生的关键。此外，还已经证明jak/stat3系统的功能障碍参与癌症的发展。此外，文献中已经广泛描述了stat3在肿瘤发展和进展中发挥的作用。已经在血液肿瘤(多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤)和实体瘤(黑素瘤、卵巢癌、前列腺癌和肾细胞癌，胰腺癌，肺癌，乳腺癌和脑癌)两者中观察到stat3的组成型激活。为了更深入，取自turksonj和jover，oncogene；19(56)；6613-26：2000的下表3表明与stat3的异常激活直接相关的许多肿瘤。特别地，这种异常激活似乎是由转化酪氨酸激酶(如v-src、v-ros、v-fps、etk/bmx和lck)的作用或者由细胞因子的自分泌或旁分泌释放诱导的异常信号所引起的。stat3的组成型激活导致编码凋亡抑制剂(例如bcl-xl，mcl-1)、细胞周期调节剂(例如细胞周期蛋白d1/d2，cmyc)和血管生成诱导物(例如vegf：血管内皮生长因子)的基因表达更多。近期，最近已经证明，除了在肿瘤发生中起关键作用，该转录因子的组成型激活赋予对由化疗剂诱导的死亡以抵抗力(aggarwalb.b.等人，ann.n.y.acad.sci.1091；151-69:2006)。各种临床研究已经证明，在体内，实体瘤在具有低o2水平的环境中生长和发育，使得肿瘤本身对细胞死亡的信号不敏感，并且对放疗和化疗治疗具有抗性；另一方面，缺氧促进血管生成、增殖和转移能力。在这种情况下肿瘤的侵袭性似乎与由缺氧和stat3的过度激活两者所导致的hif-1α的因子的激活和稳定有关。为此，非常需要基于靶向因子stat3的抗癌疗法(niug.等人，molcancerres，6(7)；1099-105：2008)。如下所示，表1取自aggarwalb.b.等人.2006的工作，并显示了表达组成型活性stat3的肿瘤、stat3的激活剂、由stat3调节的基因和stat3抑制剂的列表表1关键：stat，信号转导及转录激活因子；cll，慢性淋巴细胞白血病；cml，慢性粒细胞白血病；aml，急性骨髓性白血病；scchn，头颈部鳞状细胞癌，htlv，人t细胞淋巴细胞病毒；ebv，爱泼斯坦-巴尔病毒；奈非那韦(nelfinavir)，hiv-1蛋白酶抑制剂；r115777，法尼酰转移酶抑制剂(farnesyltransferaseinhibitor)；ag490和吡哆醇，酪氨酸激酶抑制剂；pias，激活stat3蛋白抑制剂；gq-odn，g四重寡核苷酸；socs，细胞因子信号转导抑制因子；grim，与类视黄醇-ifn诱导的死亡相关的基因；egcg，表没食子儿茶素-3-没食子酸酯；ssi，stat诱导的stat抑制剂；ptpεc，蛋白酪氨酸磷酸酶εc；dn，显性失活；ekb-569，egf-r抑制剂；dif-1，分化诱导因子-1；jab，含sh2结构域的蛋白；il，白细胞介素；tnf，肿瘤坏死因子；mda，黑素瘤分化抗原；mcp，单核细胞趋化蛋白；gcsf，粒细胞集落刺激因子；lif，白血病抑制因子；osm，抑瘤素m；ifn，干扰素；mip，巨噬细胞炎症蛋白；rantes，激活后调节，正常t细胞表达和分泌；egf，表皮生长因子；lps，脂多糖；vegf，血管内皮生长因子；mmp，基质金属蛋白酶；htert，人端粒逆转录酶；slf，青灰因子(steelfactor)，hcv，丙型肝炎病毒表2取自johnstonpa和grandisrg2011，并将stat3与许多肿瘤相关联，证实了stat3有效地成为抗癌疗法感兴趣的靶标。表2取自turksonj和jover2000的表3表明与stat3的异常激活直接相关的许多肿瘤。表3特别是，关于stat3，在许多出版物中已经证明了以下内容：1)stat3在许多人类癌细胞，如多发性骨髓瘤、淋巴瘤、白血病、肺癌、前列腺癌、头颈部鳞状细胞癌和其它肿瘤类型中通常具有组成型活性(磷酸化的)。2)stat3被生长因子(例如egf、tgf-α、il-6、il-10、il-23、il-21、il-11、hgf)，激酶癌基因(例如src)激活。3)stat3介导增殖基因(例如c-myc，细胞周期蛋白d1)、凋亡抑制基因(例如bcl-xl和生存素)、细胞因子编码基因和促进血管发生的基因(例如vegf)的表达，当激活时，增加细胞增殖和血管发生并且抑制凋亡。4)stat3的激活还与化学耐药性和放射抗性现象相关。5)stat3的持续激活在各种人类癌症中增加增殖、存活、血管发生和转移并抑制抗肿瘤免疫。还知道在某些器官或某些部位的慢性炎症促进恶性转化，stat3对导致癌症的炎症的外在和内在通路至关重要，事实上已知stat3指导与慢性炎症有关的恶性特征。由于stat3在肿瘤发生中的关键作用，stat3的抑制剂在预防和治疗癌症方面具有巨大潜力。也许stat3激活的最著名抑制剂之一是ag490，其抑制jak2的激活。其它的stat3抑制剂包括小肽、寡核苷酸和小分子。一些作者已经确定了阻断stat3的磷酸化/激活的肽，而stat3的磷酸化/激活是介导与dna结合以及基因调节和细胞转化的活性的机制。阻断stat3的各种小分子包括pgj2、铂复合物、乙醇、水杨酸钠、视黄酸、阿替莫德、ps-341和他汀类。已经鉴定出许多植物多酚具有抑制stat3激活的能力。这些包括姜黄素、白藜芦醇、葫芦素、靛玉红、白皮杉醇、欧苷菊、夫拉平度、厚朴酚和表没食子儿茶素-3-没食子酸酯。并不完全清楚这些分子成功抑制stat3激活的方式。例如，姜黄素已经证明了对均参与stat3激活的jak2、src、erb2和egfr的抑制作用，同时还下调了由stat3调节其表达的bcl-xl、细胞周期蛋白d1、vegf和tnf的表达(aggarwalb.b.等人ann.n.y.acad.sci.1091；151-69:2006)。因此存在多种策略和多种机制，使得可以介入stat3的信号传导级联：抑制stat3的磷酸化/激活，抑制涉及stat3的分子间相互作用，抑制stat3的核输入/输出，抑制由stat3介导的转录。除了已经提及的抑制stat3的化疗剂之外，还存在其它的化疗剂(西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼等)，已经报道了其的不同效果：适度的功效、抗性的发展、骨髓抑制、肠胃水平的毒性和各种不良事件，包括心血管毒性(见表4)。取自johnstonpa和grandisrg2011的下表4报道了用于stat3信号的治疗干预的策略和结果。表4通过在直接参与肿瘤进展的细胞亚群中以更特异性的方式抑制特异性靶分子的化合物作为靶向治疗的治疗代表了治疗癌症的新视角。控制细胞增殖和死亡的分子，如用于生长因子的受体酪氨酸激酶(rtk)是这种治疗方法的最佳目标之一。靶向治疗的时代开始于对抗her2的单克隆抗体(用于治疗转移性乳腺癌)的曲妥珠单抗以及慢性粒细胞白血病中的bcr-abl抑制剂，伊马替尼(imatibin)的批准。尽管对这些治疗的疗效有初步的积极性，但是医生必须立即地面对复发的问题，因为那些患有癌症的患者几乎总是对药物产生抵抗力，往往是由于其它通路的激活。由于肿瘤的特征是通常不受调节的更多机制和更多基因靶点，因此采用作为癌症治疗的标准的组合疗法是有利的，因为这样做产生一种提高应答和耐受性以及降低抗性的合理策略。目前，对于旨在通过使用较低的药物剂量而最大化地提高功效，最小化全身毒性的抗肿瘤药物的组合的兴趣日益增加。因此，鉴于越来越多的测试结论是stat3磷酸化的抑制，通过以药理学的方式阻断包括src和jak的分子上游而可以减少肿瘤的形成，也导致降低必需剂量的化疗药物的可能性，因而药理学上安全和有效的治疗剂，如可以阻断stat3的组成型或诱导型激活的天然来源的分子，在治疗癌症上具有潜在的功效。此外，由于stat3的激活也与对化疗和放疗的抵抗力相关，所以这种激活的抑制剂对于限制这种抵抗性以及优化化疗和放疗的作用也是非常有意义的。技术实现要素：本发明的作者已经证明，朝鲜蓟(菜蓟)的提取物能够选择性调节、基本上抑制蛋白stat3的磷酸化，从而防止作为转录因子在细胞内的后续作用。如将在本申请的实验部分中看到的，本发明的作者在许多实验和多种细胞系中已经证明，本文所述的提取物是stat3激活(磷酸化)的有效抑制剂，并且因此-证明对肿瘤细胞系有效的细胞毒作用，-能够抑制肿瘤细胞的再生，从而作为细胞抑制剂，-诱导肿瘤细胞凋亡-与许多化疗剂一起具有附加的和协同的效应，因此与单独使用化疗剂或单独使用提取物治疗相比，导致肿瘤细胞的活力(生存力)降低-对恶性胸膜间皮瘤细胞和未转化的间皮细胞以差异方式起作用。本发明的作者还描述了该提取物的特征，滴定其的一些组分，并且分离出了菜蓟提取物的不同馏分且以相同组分对它们进行滴定；以便一方面能够鉴定出具有与在已报道的实验中使用的菜蓟提取物的滴定值相似的滴定值的各个馏分，还能够将其中的不同馏分混合或者将其与所述提取物混合从而获得最终化合物，其具有与在实施例和附图中报道的提取物的滴定值相似的滴定值，以便能够提供适应于临床用途的标准制剂。从这些提取物对stat3因子的作用的观点来看，本发明的作者也通过实验证明，菜蓟提取物能够阻止stat3与dna的结合，从而防止通常被磷酸化的stat3激活的基因的表达改变。换言之，所述提取物已被证明能够调节、基本上抑制磷酸化形式的蛋白stat3，从而防止细胞内所述蛋白质作为转录因子的连续作用。特别地，本公开的发明人已经证明，菜蓟提取物能够抑制stat3组成型或异常激活，并诱导mpm肿瘤细胞培养物中凋亡的再激活。此外，本发明的作者还已经证明，在mpm肿瘤细胞培养物的实验中菜蓟提取物抑制伤口愈合，实际上是防止肿瘤细胞的侵袭。此外，本发明的作者还通过小鼠肿瘤细胞的植入实验证明了本发明的提取物针对于mpm细胞在体内发挥抗肿瘤作用。因此，本发明的第一主题是菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，其用于在预防和/或治疗以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤病理状态中使用，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％，其中提取物、馏分或混合物与一种以上的具有抗肿瘤和/或抗炎活性的活性化合物联合使用。本发明的第二主题是一种组合物，该组合物包含与一种以上的具有抗肿瘤活性的药剂以及载体和/或稀释剂和/或辅料联合的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，或由上述组成，其用于在预防和/或治疗以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤病理状态中使用，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％。本发明的第三目的是一种试剂盒，该试剂盒用于将菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物以及一种以上的具有抗炎和/或抗肿瘤活性的化合物(抗炎和/或抗肿瘤化合物)合并给药或序贯给药，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％，该试剂盒包含以上定义的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物的一个以上的等分试样，或包含作为活性药物成分的以上定义的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物的组合物的一个以上的等分试样，以及化疗剂或化疗剂与合适的药学上可接受的载体的混合物的一个以上的单独等分试样，用于在预防和/或治疗以与化疗剂关联的stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤病理状态中使用。本发明的第四主题是用于预防和/或治疗以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤病理状态的治疗方法，包括将治疗活性量的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，或者以上定义的药物组合物给药至需要其的个体的步骤，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％。为了本说明的目的，术语菜蓟(cynarascolymus)对应于刺菜蓟亚种朝鲜蓟(cynaracardunculussubsp.scolymus)，并且可以在说明书和权利要求书的任何一点上相互替代。为了本说明的目的，术语“包括(comprising)”可以在说明书和权利要求书的任何一点上被术语“由...组成(consistingof)”替代。附图说明注意：在本附图中，常用缩写abo-1表示菜蓟种提取物。图1：抑制stat3、p-stat3(y705)磷酸化图1a从以100μg/ml的菜蓟提取物处理24小时的msto211h获得的细胞裂解物的蛋白质印迹分析。与对照肌动蛋白相比进行定量。图1b对于msto211h细胞使用蛋白质印迹获得的数据的条形图。p-stat3(磷酸化的stat3)示出为黑色，stat3示出为灰色。该图示出了与对照相比，提取物抑制p-stat3的形成。图2：在p-stat3行中用25-50-75μg/ml的菜蓟提取物处理的msto211h细胞的细胞裂解物的蛋白质印迹分析，下图是肌动蛋白对照。该图示出了提取物抑制stat3磷酸化，并且该抑制是剂量依赖性的。图3：用不同剂量的菜蓟提取物对人恶性胸膜间皮瘤细胞系的克隆形成测定(条件参见实验部分)图表3a.对人间皮瘤细胞系msto211h进行的测定图表3b.对人间皮瘤细胞系nci-h28进行的测定图表3c.对人间皮瘤细胞系mpp-89进行的测定图表3d.对人间皮瘤细胞系nci-h2052进行的测定图4：本发明的提取物以剂量依赖的方式独立于其同种型地影响3种不同炎性肿瘤细胞系(hct116，mda-mb-231edu145)形成集落的能力。图表4a.对结肠肿瘤细胞系hct116进行的测定图表4b.对前列腺肿瘤细胞系du145进行的测定图表4c.对乳腺肿瘤细胞系mda-mb-231进行的测定图5：使用atplite测定(条件参见实验部分)对恶性胸膜间皮瘤细胞系(msto211h，mpp-89，nci-h28)测定细胞活力。该测定示出了，在多种间皮瘤细胞系中，本发明的菜蓟提取物以剂量依赖的方式抑制细胞活力。图6：将图5的三种活力曲线相比于用菜蓟提取物处理正常间皮瘤细胞(hmc)的增殖曲线的比较(图6amsto211h，图6b-mmp-89，图6cnci-h28)。恶性间皮瘤细胞系(mpm)与hmc相比，清楚地示出了菜蓟提取物的抗增殖作用。图7对用不同浓度的朝鲜蓟提取物(50-600μg/ml)处理多个处理时间(24和48小时)的融合性前列腺癌细胞系du145测定的细胞活力，并显示提取物的菜蓟苦素含量。细胞融合增加组成型激活的stat3的水平，使得细胞本身在很大程度上抵抗死亡。使用wst-1测定(wst-1测试，条件参见实验部分)分析活力。该图示出了提取物以时间依赖性和剂量依赖性的方式抑制活力。利用0至600μg/ml的提取物剂量以及同时以μg/ml和μm表示的不同浓度提取物(100、200、300、400、500、600μg/ml)的各个含量的菜蓟苦素，正方形示出了24小时内的趋势，且圆圈示出了48小时的趋势。高水平激活stat3的细胞：获得的结果表明，提取物在24小时以ec50＝380μg/ml以及在48小时以ec50＝100μg/ml抑制细胞活力。图8.对用不同浓度的菜蓟苦素(0-70μm)处理各种处理时间(24或48小时)的融合性前列腺癌细胞系du145测定的细胞活力。融合增加组成型激活的stat3的水平，使得细胞在很大程度上抵抗死亡。使用wst-1测定(wst-1测试，条件参见实验部分)分析活力。该图示出了，菜蓟苦素以时间依赖性和剂量依赖性的方式抑制细胞活力。利用不同浓度的10、20、30、40、50、60μm的菜蓟苦素，正方形示出了24小时的趋势，三角形示出了48小时的趋势。所提供的数据示出了，菜蓟苦素不如朝鲜蓟提取物有效。该图示出了菜蓟苦素以时间依赖性和剂量依赖性的方式抑制细胞活力和增殖远不如朝鲜蓟提取物有效(参见图8作为比较)。例如：为了具有等于约90％的活力降低的效果，当冻干的提取物中含有菜蓟苦素时，与0.94-2.82μm相比需要用50μm处理48小时。图9.在非融合性细胞系du145中测定细胞活力，因此用不同浓度的朝鲜蓟提取物处理低水平的组成型激活的stat3并持续不同处理时间(24-48-72小时)。使用wst-1测定(测试wst-1，条件参见实验部分)分析活力。圆圈表示用50μg/ml的菜蓟处理，正方形表示用100μg/ml的菜蓟处理，三角形表示用200μg/ml的菜蓟处理。该图示出了细胞系du145的细胞活力如何被200μg/ml的菜蓟高度损害。得到的结果表明，200μg/ml的提取物在24小时时抑制细胞活力达60％。可以看出，与图8相比，对于具有高水平的stat3激活的细胞的实验，本实验的ec50显著降低(在24小时时约为200μg/mlvs380μg/ml)，因此显示出本发明提取物对具有低水平的stat3激活的细胞(非融合)的更强的功效。因此，这样的实验证实，其中stat3有活性的细胞具有更高程度的恶性。stat3磷酸化的抑制是细胞活力降低的主要机制。图10：在用朝鲜蓟提取物与培美曲塞(pmtx)联合对间皮瘤细胞系mpm处理(图10amsto211h和图10bnci-h2052)以及对转化的间皮瘤细胞(图10chmc)测定的细胞活力(atplite测定)。pmtx的处理对mpm细胞具有细胞毒性，并且对非肿瘤细胞具有高毒性。用本发明提取物+pmtx对细胞共同处理对于mpm细胞系的细胞活力具有显著作用，同时降低未转化细胞(hcm)中由培美曲塞引起的死亡率。因此，很明显，本发明的朝鲜蓟提取物仅使得肿瘤细胞对培美曲塞敏感。图11在用朝鲜蓟提取物与各种化疗剂联合对人前列腺肿瘤细胞系du145进行处理后的细胞活力测定wst-1：多柔比星，紫杉醇，顺铂(条件参见实验部分)。使用wst-1测定(测试wst-1，条件参见实验部分)分析活力。图11示出了用两种不同剂量的朝鲜蓟提取物(100和200μg/ml)，仅用10μg/ml的顺铂以及用朝鲜蓟提取物(100和200μg/ml)与10μg/ml的顺铂联合处理24小时后的细胞活力。图11b示出了用两种不同剂量的朝鲜蓟提取物(100和200μg/ml)，用1μg/ml的多柔比星，以及用两种不同剂量的朝鲜蓟提取物(100和200μg/ml)与1μg/ml的多柔比星联合对人类癌细胞du145处理24小时后的细胞活力。图11c示出了用两种不同剂量的朝鲜蓟提取物(100和200μg/ml)，用300nm的紫杉醇，以及用朝鲜蓟提取物(100和200μg/ml)与300nm的紫杉醇联合对人类癌细胞du145处理24小时后的细胞活力。在所有实验中，形成本发明基础的提取物增强了三种化疗剂的细胞毒性，在顺铂的情况下其效力更好。图12.用朝鲜蓟提取物和顺铂联合处理人类癌细胞du145后测定的细胞活力(条件参见实验部分)。该图示出了在不同浓度的朝鲜蓟提取物和固定浓度的15μg/ml顺铂下用朝鲜蓟提取物(黑色)、顺铂(浅灰色)和朝鲜蓟+顺铂(白色)的处理之间的比较。菜蓟苦素的相对浓度如图所示。形成本发明基础的提取物增强顺铂的细胞毒性，在200μg/ml的剂量下效果更好。图13.用朝鲜蓟提取物和多柔比星联合处理人类癌细胞du145后的活力测定(条件参见实验部分)。该图示出了在不同浓度的朝鲜蓟提取物和固定浓度的2μg/ml多柔比星下用朝鲜蓟提取物(黑色)、多柔比星(浅灰色)和朝鲜蓟+多柔比星(白色)的处理之间的比较。菜蓟苦素的相对浓度与图13中报道的相同。形成本发明基础的提取物增强多柔比星的细胞毒性，以200μg/ml的剂量效果更好。图14.用菜蓟苦素和顺铂联合处理人类癌细胞du145后的活力测定(条件参见实验部分)。该图示出了在不同浓度的菜蓟苦素和固定浓度的15μg/ml顺铂下用菜蓟苦素(黑色)、顺铂(浅灰色)和菜蓟苦素+顺铂(白色)的处理之间的比较。看起来是，为了获得细胞活力降低到20％以下的效果，需要菜蓟苦素的摩尔浓度比存在于朝鲜蓟提取物中的菜蓟苦素摩尔浓度高出四十倍(参见图12)。图15用菜蓟苦素和多柔比星联合处理人类癌细胞du145后的活力测定(条件参见实验部分)。该图示出了在不同浓度的菜蓟苦素和固定浓度的2μg/ml多柔比星下用菜蓟苦素(黑色)、多柔比星(浅灰色)和菜蓟苦素+多柔比星(白色)的处理之间的比较。看起来是，为了获得细胞活力降低到20％以下的效果，需要菜蓟苦素的摩尔浓度比存在于朝鲜蓟提取物中的菜蓟苦素的摩尔浓度约高出二十五倍(参见图13)。图16：人间皮瘤细胞系msto221h的伤口愈合的测定(条件参见实验部分)。图表16a示出了仅用载体(溶剂(vehicle))和用浓度为6μg/ml的产物在对照板中36小时的伤口愈合，而图片16b示出了关于在指示的时间用本发明的提取物以及用载体处理的伤口闭合(细胞的定量数％)功效的条形图。图17：菜蓟提取物调节du145细胞中的stat3通路：特别地，该图示出了提取物抑制du145细胞中stat3的组成型激活，并且还抑制stat3与dna结合。17a)蛋白质印迹：在菜蓟提取物(200μg/ml)处理2-4小时后，该菜蓟提取物抑制stat3的磷酸化，而不改变蛋白质的表达。17b)emsa：在菜蓟提取物(200μg/ml)对du145细胞系处理2-4小时后，该菜蓟提取物抑制stat3与dna结合(图17b)。图18：菜蓟提取物调节karpas细胞中的stat3的通路：特别地，该图示出了提取物抑制karpas细胞中stat3的组成型激活，并且还抑制stat3与dna结合。18a)蛋白质印迹：在菜蓟提取物(200μg/ml)处理2-4小时后，该菜蓟提取物抑制stat3的磷酸化，而不改变karpas细胞系中的蛋白质的表达。18b)emsa：在菜蓟提取物(200μg/ml)对karpas细胞系处理2-4小时后，该菜蓟提取物抑制stat3与dna结合。所用的菜蓟提取物含有0.181％的菜蓟苦素，因此200μg/ml提取物含有1.2μm菜蓟苦素。图19：菜蓟苦素调节du145细胞中的stat3的通路。菜蓟苦素以ec50＝25μm(25μm菜蓟苦素＝约0.74μg/ml)抑制du145细胞中的stat3的磷酸化及其与dna结合的能力两者蛋白质印迹：25μm的菜蓟苦素抑制du145细胞中的stat3的磷酸化(图19a)emsa：25μm的菜蓟苦素抑制du145细胞中的stat3与dna的结合(图19b)图20：菜蓟苦素调节karpas细胞中的stat3的通路。菜蓟苦素以ec50＝25μm(25μm菜蓟苦素＝约0.74μg/ml)抑制karpas细胞中的stat3的磷酸化及其与dna结合的能力两者蛋白质印迹：菜蓟苦素(25μm)抑制du145细胞中的stat3的磷酸化(图19a)emsa：菜蓟苦素抑制(25μm)du145细胞中的stat3与dna的结合(图19b)。图21：评价菜蓟提取物对细胞周期的影响(facs方法)。在处理48小时(图21a)和处理72小时(图21b)后，提取物通过增加亚g1期的细胞％来诱导mpm细胞(msto211h)的死亡。图22评价凋亡诱导的测定(western方法)。如通过细胞系msto211h中的parp以及caspases3和7的裂解形式的一些凋亡标记物的水平升高所证实的，本发明的提取物以100μg/ml的剂量诱导凋亡。图23通过测量膜联蛋白v的水平来评价凋亡诱导的测定。如通过膜联蛋白v以时间依赖性和剂量依赖性方式的着色所确定的，本发明的提取物诱导细胞系msto211h中的凋亡。图24用不同浓度的菜蓟苦素处理后，分析gsh的细胞内浓度(条件参见实验部分)：三角形12.5μm，正方形25μm，菱形50μm。菜蓟苦素决定了gsh的细胞内浓度以时间依赖性和剂量依赖性降低。图25测定stat3的谷胱甘肽化(条件参见实验部分)。菜蓟苦素决定了stat3的谷胱甘肽化。泳道1.对照，泳道2gsh1mm，泳道3二酰胺0.5mm，泳道4gssg，泳道5菜蓟苦素12μm，泳道6菜蓟苦素25μm。本实验中获得的数据表明，菜蓟苦素降低了gsh的细胞内浓度(图26)，氧化还原态的变化诱导stat3的谷胱甘肽化，阻止其磷酸化(图27)。通过用谷胱甘肽乙烯酯预处理，恢复了gsh的生理值，逆转了菜蓟苦素抑制stat3磷酸化的能力。图26和27涉及在6-7周龄的雌性cd1裸鼠(mpm肿瘤植入)中进行的朝鲜蓟提取物对细胞系msto211h抗肿瘤活性的评价图26：朝鲜蓟对mpm细胞系植入的影响用朝鲜蓟对msto211h预处理24小时。然后，将它们接种在cd1裸鼠中。用朝鲜蓟提取物进行的预处理影响了肿瘤的植入，并且对肿瘤体积诱导了显著的统计学差异(p＝0.01)。图27：朝鲜蓟提取物对mpm细胞移植的作用。用日益增长量的朝鲜蓟提取物将具有msto异种移植物的cd1小鼠处理3周。观察到朝鲜蓟提取物的治疗剂量依赖性作用。培美曲塞(pmtx)以已知的治疗浓度用作为阳性对照。该图示出了与已知治疗浓度的培美曲塞相比本发明提取物的功效*p<0.01。图28：在恶性胸膜间皮瘤细胞系上利用atplite测定的三种活力曲线的比较(图28a和28bmsto211h，图28c和28dmmp-89)。在图表a和c中，用多种菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分混合物进行测定，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的提取物或馏分混合物(混合物(mix))的9重量％至15重量％，绿原酸占以干燥形式的提取物或馏分混合物的3.5重量％至5.5重量％，并且菜蓟苦素占以干燥形式的提取物或馏分混合物的0.2重量％至3重量％。在图表b和d中，用也报道在图a和c中的滴定提取物进行测定，馏分3、4和5如下所述。显然地，馏分3和4至少与如上所述滴定的整个提取物或混合物一样有效，而单独馏分5没有任何效果。图29：对在常氧和慢性缺氧下培养的mda-mb231细胞进行处理，用不同浓度的多柔比星处理24小时。获得的数据表明，相对于在常氧下培养的亲本细胞，chr-mda-mb231细胞的耐药性更强。图30：用根据本发明的滴定提取物进行处理。用以100mg/ml的浓度溶解于50％etoh中的不同浓度的根据本发明的滴定提取物处理在常氧和慢性缺氧下培养的mda-mb231细胞24小时。所得结果表明，提取物以剂量依赖性方式抑制细胞活力(ec50＝300μg/ml)。图31：用根据本发明的滴定提取物和多柔比星进行处理。为了使细胞对化学治疗敏感的目的，用增加剂量的本发明提取物与0.25μg/ml多柔比星联合处理chr-mda-mb231细胞，并如以下实验部分所示的用台盼蓝评价细胞活力。对于这种类型的实验，使用了能够在被检查的细胞中诱导20％死亡率的多柔比星的量。具体实施方式因此，本申请涉及以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物与一种以上的抗肿瘤或抗炎药物联合用于在预防和/或治疗以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤病理状态中使用，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％，或者其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至48重量％，绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至21重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至10重量％。在以上提及的具体实施方式中，本申请涉及以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物与一种以上的抗肿瘤或抗炎药物联合用于在预防和/或治疗以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤病理状态中使用，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的9重量％至15重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至5.5重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至3重量％，或者其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至35重量％，绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至15重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至8重量％。如以上指出的，异常或组成型激活似乎由该因子的异常或组成型磷酸化形成，在血液和组织中都产生炎性和/或致瘤作用。在下面的描述中，在权利要求书和附图中，术语“stat3”表示信号和stat3转录激活的转导因子(信号转导及转录活化因子3)。通常，在参考基因的情况下，则使用大写斜体字母，而蛋白质以非斜体大写字母表示。从文献中已经知道，通过致癌和环境途径，炎症和肿瘤紧密相关，并且stat3因子(信号转导和转录激活因子3)的磷酸化导致其激活和核的位移，其作用为大量细胞因子、趋化因子和其它与炎症相关的调节因子的转录激活因子，从而促进癌症。因此，stat3激活的抑制剂是对所有的存在stat3因子的组成型激活的那些病理具有预防和/或治疗作用的因子。用于本发明的目的的朝鲜蓟或菜蓟是指属于菜蓟属(菜蓟种(cynaraspp.))，特别是刺菜蓟亚种朝鲜蓟的植物。为了实施本发明的目的，提取物可以是干燥的或新鲜的叶和/或花头或其混合物的提取物。术语“花头”表示由植物产生的花的花头，例如朝鲜蓟本身(通常用作食物的部分)。提取物可以是流体提取物，或者通过已知的干燥技术冻干或干燥的提取物。提取物可以通过用以下溶剂提取得到：水、乙醇、甲醇、丙酮或异丙醇，在每种情况下都是以纯的形式或以彼此的混合物。醇可以是甲醇、乙醇、异丙醇、优选为乙醇。可以采用纯形式的乙醇或按以下百分比使用：96％、90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、5％、1％采用乙醇与水的混合物。在本发明的非限制性实施方式中，用于提取的溶剂可以是由乙醇和水以50:50的比例形成的混合物。可以通过水醇提取来制备流体提取物，其相对于1:2至1:100的药物/溶剂，优选以1:10的比例将朝鲜蓟叶渗透/消解。提取的持续时间是本领域技术人员通常使用的持续时间，并且可以是例如至少1小时至约8小时。提取温度通常受到控制，并且可以优选为例如约50℃的温度。可以通过冻干或干燥进行从水醇提取物蒸发醇以及随后干燥含水浓缩物，以提供冻干的提取物或干提取物。这样的提取物的制备是本领域技术人员通常已知的，并且不需要在本公开中进行特别详细地描述。为了实现本发明的目的，可以使用根据常规技术制备的以上所指出中的任何提取物。特别地，为了本发明的目的，提取物也可以被以上所述的菜蓟提取物的馏分或馏分混合物或者菜蓟提取物和一种以上的提取物馏分的混合物代替，只要满足上述公开的滴定标准即可。考虑到可以由气候条件、环境条件产生的，由栽培场地和/或栽培技术的差异产生的，或者甚至由栽培植物的不同品种产生的植物提取物的变异性，因此对于临床使用，重要的是标准化产品以及确定标准化参数，使得能够提供具有定义特征的产品。因此，本发明的作者描述了在实验中使用的提取物，例如，如附图和实验方案中所报道的提取物的特征，以便确定能够将在临床实践中使用的最终产物标准化的参数。然后针对一些活性组分对所使用的提取物进行滴定，并且还用各种技术进行分馏，以便能够获得滴定为相同组分或可滴定为相同组分的提取物馏分，因此可以使用各个馏分或将两种以上的所述馏分混合以便获得落入以上指示的参数内的最终产物。在干燥样品上，例如干燥、脱水或冻干(冷冻干燥)的样品上进行参数的滴定。根据本发明，总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％或9至15重量％，例如约8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％。在此指示“约”还表示从8到16的非整数，例如，如8.1；8.2；8.3；等等，多达16，均包括在本发明中。在优选的实施方式中，总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的11重量％至13重量％，例如，如约11％、12％、13％以及包括在11至13之间的非整数。根据本发明，总绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，或3.5重量％至5.5重量％或4.5重量％至5.5重量％，例如，如约4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9、5.0％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％。根据本发明，总菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％或0.2重量％至3重量％。由于菜蓟苦素倾向于降解，因此初始菜蓟苦素含量(即，刚刚发生提取或分馏时)优选为2至3％的范围。在任何情况下，当从提取或从分馏起将提取物、馏分或馏分的混合物存储在+4℃至+40℃的温度范围，优选在25℃时，提取物、馏分或馏分混合物在从提取起的+36个月时达到等于至少0.2％的菜蓟苦素含量是可接受的。本发明还涉及菜蓟提取物的馏分，其中该馏分的每一种组分的重量百分(百分数)约是以上报道的两倍，从而以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的馏分中，总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至48重量％或25重量％至35重量％，绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至21重量％或11重量％至15重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至10重量％或1重量％至8重量％。该馏分适用于组合物和试剂盒的所有用途和实施方式，以及针对以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的该提取物、该馏分和馏分混合物的描述中所指出的治疗方法，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％或9重量％至15重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％或3.5重量％至5.5重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％或0.2至3重量％。根据本发明，可以通过以下指出的多种方法获得菜蓟提取物的多种馏分。一旦获得馏分，则以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定，然后可以由本说明书中公开的最佳滴度进行选择，可以单独地使用馏分，或者使用具有如上所定义的三种滴定组分中的每一种的浓度(按重量计)的馏分混合物。作为示例，可以通过按照以下列出的多种方法和步骤获得多种馏分：1.将菜蓟的干燥叶和/或花头分馏，在35至45℃的温度下与96°的乙醇接触4至10小时。从叶和/或花头中分离醇部分，并使其进行过滤从而消除植物残留物。收集澄清的醇溶液。2.用水，优选软化水进一步地提取植物残留物，收集水性组分，也将该水性组分过滤从而除去残留的植物部分。收集澄清的水性溶液。3.将收集的澄清(醇和水)溶液混合，得到40°至60°范围内的醇溶液(在本发明中，相对于醇，符号°表示醇等级)，并进行沉淀和离心，回收上清液进行过滤。4.收集移除上清液后得到的沉淀，其对应于提取物的第一馏分，该第一馏分可以通过例如冷冻干燥进行干燥，并且滴定。平均来说，在所获得的第一馏分中，总咖啡酰奎宁酸占干提取物馏分的总重量的约2-3％，绿原酸占干提取物馏分的总重量的约0.2-0.6％，以及菜蓟苦素占干提取物馏分的总重量的约0.1-0.3％。5.将在以上第3点中所述的经受沉淀和离心的40°-50°水醇馏分的上清液在真空下浓缩，除去醇，从而使馏分成为醇0°。将得到的浓缩水溶液进行沉淀和离心，并将浓缩水溶液的上清液过滤以澄清。6.收集移除上清液后得到的沉淀，其对应于提取物的第二馏分，该第二馏分可以通过例如冷冻干燥进行干燥，并且滴定。平均来说，在所获得的第二馏分中，总咖啡酰奎宁酸占干提取物馏分的总重量的约1-2.5％，绿原酸占干提取物馏分的总重量的约0.05-0.1％，以及菜蓟苦素占干提取物馏分的总重量的约0.3-0.5％。7.从在第5点中离心和进行过滤后的上清液获得的滤液是浓缩后(例如，在真空下)的水溶液，然后进行干燥，例如通过冷冻干燥，其对应于第三馏分。平均来说，在所获得的第三馏分中，总咖啡酰奎宁酸占干提取物馏分的总重量的约12-14％，绿原酸占干提取物馏分的总重量的约5-7％，以及菜蓟苦素占干提取物馏分的总重量的约2.5-3.5％。8.可替换地，从在第5点中离心和进行过滤后的上清液获得的滤液是在高孔隙率吸附树脂上经过吸附的水溶液。9.然后回收树脂吸附的馏分，浓缩并干燥，例如通过冷冻干燥，并且对应于第四馏分。平均来说，在所获得的第四馏分中，总咖啡酰奎宁酸占干提取物馏分的总重量的约29-32％，绿原酸占干提取物馏分的总重量的约13-15％，以及菜蓟苦素占干提取物馏分的总重量的约3-4.5％。10.对未吸附在树脂上的馏分进行干燥，例如通过冷冻干燥，并对应于第五馏分。平均来说，在所获得的第四馏分中，总咖啡酰奎宁酸占干提取物馏分的总重量的约0.5-0.7％，绿原酸占干提取物馏分的总重量的约0.1-0.2％，以及菜蓟苦素占干提取物馏分的总重量的约0.04-0.06％。根据本发明，步骤8可以在树脂柱或树脂床上进行，该树脂柱或树脂床能够吸附芳族物质或富含高度不饱和部分或富含烷基或环烷基基团的物质，并能够洗脱不相关物质，如许多极性非芳族物质。用合适的溶剂(如，例如乙醇或水醇溶剂)解吸吸附的树脂，用于其它用途。合适的层析树脂可以是例如苯乙烯-二乙烯基苯共聚物的高孔隙率吸附树脂，如，例如amberlitexad-2、serdolitpad-ii、adstq318。特别地，树脂将是能够吸附芳族和/或非极性物质的树脂，如，例如疏水性吸附树脂，该树脂由直径为0.2mm-0.8mm的微球组成，其均匀系数为≤1.5，由不含活性基团的苯乙烯和dvb的聚合而获得，将其表征为具有相对于孔体积的等于约1.3ml/g的参数的高度多孔的物理结构，使得能够吸附和选择性洗脱有机物质，优选芳族性质。下表列出了在所报道的实验中使用的菜蓟提取物(abo-1)以及根据以上报道的方法获得的其馏分(因此，第一、第二、第三、第四和第五馏分)中获得的精准滴定值数据。因此，作为实例，馏分混合物可以是由约12％的馏分1、约6％的馏分2、约82％的馏分3组成的混合物，或是由约12％的馏分1、约6％的馏分2、约55％的馏分4和约27％的馏分5组成的混合物。通过滴定得到的馏分，本领域技术人员将确定地知晓如何重新组成馏分混合物或者补充特别缺乏药物活性成分的提取物，以获得具有以上所示的最佳滴定值的化合物。如从图28中报道的数据明显看出的，馏分3和4本身都是有用的。在本发明中，[意大利语]术语“活性药物成分(activepharmaceuticalingredient)”等同于英文术语“活性药物成分(activepharmaceuticalingredient)”(api)。术语“活性药物成分”也可以被术语“活性成分”(或“活性成分(activeprinciple)”)代替，这是指具有药理学活性的一组分子。为了本发明的目的，作为本发明的“活性药物成分”是指：a.菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素进行滴定，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％和16重量％或9重量％至15重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％或3.5重量％至5.5重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％或0.2至3重量％(包括上述详细的实施方式)。b.以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物的馏分，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至48重量％或25重量％至35重量％，绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至21重量％或11重量％至15重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至10重量％或重量％至8重量％。根据本发明，如以上详情和权利要求书中描述的，以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物或其馏分或其馏分混合物可以作为活性药物成分使用，用于预防和/或治疗以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的疾病。这些疾病可以是例如并如文献中记载的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤类型的疾病。为了本发明的目的，以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的病理状态可以由病毒感染(如文献中所记载的)，如被幽门螺杆菌(hpylori)感染、被乙型肝炎(hepatitisb)病毒感染、被hpv(人乳头状瘤病毒)感染、被爱泼斯坦-巴尔病毒(epstein-barrvirus)感染(如yu等人2009报道的)引起。如已经提及的，因此术语“stat3”表示在人类中由stat3基因编码的人类转录因子“信号转导和转录激活因子3”。本发明涉及在本说明书(例如下文)中详细定义的人类的病理状态，其中在任何情况下该基因被组成型或异常激活。存在stat3的组成型或异常激活的肿瘤前病理状态可以是肿瘤消融后的病理状态，从而肿瘤前在此意义上表示肿瘤可以重新形成，或者可以是如文献中报道的其中从炎症转移为获得细胞部分的恶性特征的病理状态。根据本发明，肿瘤病理状态可以是以现有技术报道的stat3的组成型或异常激活为特征的任何肿瘤，例如：前列腺癌、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、黑素瘤、卵巢癌、乳腺癌、肾细胞癌、胰腺癌、肺癌、脑肿瘤、红白血病、头颈部鳞状细胞癌、结肠癌、间皮瘤(其旨在是指恶性胸膜间皮瘤或mpm)。更具体地说，所述脑肿瘤可以是例如胶质瘤、脑膜瘤、成神经管细胞瘤，所述淋巴瘤可以是塞扎里综合征(sezarysyndrome)、ebv相关的伯基特淋巴瘤、松鼠猴属hsv依赖性淋巴瘤、皮肤t细胞相关淋巴瘤；所述白血病可能是htlv-i依赖性白血病、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、急性骨髓性白血病(aml)、巨核细胞白血病、大颗粒淋巴细胞白血病(lgl)。根据本发明的非限制性实例，以上定义的菜蓟种提取物可以用于预防和/或治疗以上表1所列的stat3的组成型或异常激活为特征的病理状态之一。根据本发明的术语“组成型激活”或“异常激活”应被理解为在归因于与stat3相关的文献(例如参考文献中列出)中的这些术语的含义的意义内，或者是通常不存在于健康细胞中的这种因子的持续激活。在由本发明的活性药物成分所示的抑制stat3的激活和活性中存在特异性，用于治疗对不抑制stat3的化疗剂治疗有抵抗性的肿瘤病症。不抑制stat3的化疗剂的非限制性实例的代表是用于间皮瘤的化疗药物，该间皮瘤是具有组成型激活的pstat3和高度抗药性的肿瘤。通常使用的药剂实例的代表是为胸苷酸合酶的抑制剂的培美曲塞；为二氢叶酸还原酶的竞争性和可逆抑制剂的氨甲蝶呤；通过在嘧啶核苷酸的生物合成途径中作为假底物而抑制dna合成的吉西他滨；为结合至微管蛋白单体而抑制微管形成的抗生素药物的长春瑞滨；通过在dna中形成丝间和丝内交联而能够干扰与dna结合的细胞周期的所有阶段的药剂的顺铂。从其中已知stat3组成型激活的肿瘤细胞系获得的下文和附图中显示的实验数据，也表明如本说明书中所公开的滴定的菜蓟提取物或其馏分或其馏分混合物，有利地与一种以上的抗肿瘤药物联合，从而增加，还以协同的方式增加药物本身的抗肿瘤功效。因此，如本文所述和所要求保护的菜蓟提取物或其馏分或其馏分混合物将与一种以上的具有抗肿瘤活性的化合物和/或一种以上的具有抗炎作用的化合物联合用于预防和/或治疗以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤病理状态。根据一个实施方式，具有抗肿瘤活性的化合物可以是化疗剂，并且可以选自包括顺铂、多柔比星、培美曲塞、甲氨蝶呤、长春瑞滨、吉西他滨和紫杉醇的组。本发明还包括使用根据本说明书所公开的滴定的菜蓟提取物的提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物与一种以上的化疗剂联合，用于预防和/或治疗以stat3的组成型或异常激活为特征的肿瘤或肿瘤前病理状态。特别地，将以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定根据本发明的提取物、馏分或混合物，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物(混合物(mix))的8重量％至16重量％或9重量％至15重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％或3.5重量％至5.5重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％或0.2重量％至3重量％，或者该馏分将是一种其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至48重量％或25重量％至35重量％、绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至21重量％或11重量％至15重量％以及所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至10重量％或1重量％至8重量％的馏分。上面提供的总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素的滴定值范围的详细描述也适用于这种具体实施方式。与一种以上的化疗剂的联合可以是合并或序贯的联合，或者可以同时(单次给予或分开给予)或在几分钟的时间内给予本发明的活性药物成分和化疗剂，或者可以在一天以内或治疗处理期内以彼此分开超过几分钟的方式序贯地或在不同的时间给予本发明的活性药物成分和化疗剂。由治疗医生根据患者的性别、年龄、疾病状态、体重和病史来确定给药方案。如上所述，单独地和以联合的方式两者，该治疗可以是预防性的，例如在如上述那些的已知具有可能的肿瘤发生作用的感染的情况下，或者在肿瘤消融的情况下，从而防止所述肿瘤重新形成。可以将本发明的活性药物成分配制成可用于与上述相同目的的组合物。因此，本发明还涉及一种组合物，其包含作为活性药物成分的如以上所述和要求保护的以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物、其馏分或其馏分的混合物或所述提取物与一种以上的其所述馏分的混合物，一种以上的抗肿瘤剂和/或一种以上的抗炎剂，和载体和/或稀释剂和/或辅料，该组合物用于在预防和/或治疗以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤病理状态中使用。该组合物可以例如含有作为唯一活性成分的以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物、菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物以及一种以上的抗肿瘤剂和/或一种以上的抗炎剂，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％或9重量％至15重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％或3.5重量％至5.5重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％或0.2重量％至3重量％。可替换地，组合物可以包含作为唯一活性成分的菜蓟提取物的馏分以及一种以上的抗肿瘤剂和/或一种以上的抗炎剂，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至48重量％或25重量％至35重量％，绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至21重量％或11重量％至25重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至10重量％或1重量％至8重量％。此外，组合物可以包含适合用于所选制剂类型的辅料。本领域技术人员将能够容易地确定最佳制剂。组合物可以包含以冻干、干燥或流体形式的本文定义的本发明的源自朝鲜蓟的活性药物成分。如已经指出的，根据上述的方法，可以通过提取无论是新鲜或是干燥的朝鲜蓟的叶或朝鲜蓟的花头或上述部分的混合物，获得提取物及其馏分。根据本发明，如以上定义的组合物可用于预防和/或治疗以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的病症。这些疾病可以是，例如且如文献中记载的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤疾病。可以使用本发明组合物的各种病理状态的定义与以上关于本发明提取物的治疗用途所规定的相同。为了本发明的目的，组合物可以治疗以上已经定义的以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的病理状态、以stat3的组成型或异常激活为特征的如以上已经定义的肿瘤病理状态和在本说明书的范围内已经预先描述的存在stat3的组成型或异常激活的肿瘤前病理状态。仅作为示例，可以将组合物制成硬明胶胶囊的形式，并含有以冻干形式的如上定义的30％至60％的源自朝鲜蓟活性成分以及70％至40％的合适的药理学惰性辅料(例如，微晶纤维素)。胶囊可以是例如最终重量为300-500mg的胶囊。由于本文所述的活性化合物可以是以冻干、干燥或流体的形式，所以本领域技术人员可以容易地制备适于用于所选用途的药物组合物。根据非限制性实例，本发明，本文定义的组合物可用于预防和/或治疗由以上表1中列出的stat3的组成型或异常激活为特征的任何一种病理状态。因此，本发明还涉及一种组合物，该组合物包含除本发明的活性药物成分之外的一种以上的具有抗肿瘤活性的化合物(抗肿瘤化合物)和/或具有抗炎活性的化合物(抗炎化合物)，用于在预防和/或治疗以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤类型的病理状况中使用。根据一个实施方式，这类具有抗肿瘤活性的化合物(抗肿瘤化合物)可以是选自例如包括顺铂、多柔比星、培美曲塞、甲氨蝶呤、长春瑞滨、吉西他滨和紫杉醇的组的化疗剂。这些药物可以以标准剂量使用，或者以相对于化疗中通常使用的减少的剂量使用。为了还能够使治疗适应每名患者的个体需要的目的，可以由治疗医生以单位剂量或以可剂量的方式配制本发明的组合物。因此，本发明设想使用包含作为唯一活性药物成分的本发明的活性药物成分的组合物，可选地与一种以上的具有抗肿瘤活性的另外的活性药物成分和/或一种以上的具有抗炎活性的另外的活性药物成分联合，用于预防和/或治疗以stat3的组成型或异常激活为特征的肿瘤和/或炎性和/或肿瘤前病理状态。这类另外的活性成分可以是例如化疗化合物，并且病理状态可以是肿瘤前或肿瘤病理状态。与一种以上的化疗剂的联合可以是合并或序贯的联合，或者可以同时(单次给予或分开给予)或在几分钟的时间内给予本发明的活性药物成分和化疗剂，或者可以在一天以内或治疗处理期内以彼此分开几分钟的方式序贯地或在不同的时间给予本发明的活性药物成分和化疗剂。由治疗医生根据患者的性别、年龄、疾病状态、体重和病史来确定给药方案。所描述的治疗可以是预防性的，例如在已知具有可能的肿瘤发生作用的感染如以上指出的那些的情况下，或者在肿瘤消融的情况下，从而防止所述肿瘤重新形成。在如上所述的组合物(由本发明的活性药物成分和至少一种药学上可接受的辅料或佐剂组成，可选地与一种以上的抗肿瘤剂和/或一种以上的抗炎剂联合)中，至少一种药学上可接受的辅料或佐剂可以选自技术性用于普通药物或化妆品实践或食品工业中的辅料或佐剂。使用的辅料可以属于稀释剂、增溶剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、表面活性剂、滑爽剂和抗粘附剂的类别。如果需要，组合物还可以含有通常用于药学、化妆品和食品工业中的调味剂、着色剂和防腐剂。组合物可以是由本领域技术人员所认为适合于制备旨在用于口服给药(例如粉末、颗粒、硬或软明胶的胶囊、片剂、糖浆、滴剂、溶液和口服乳剂)，吸入(例如气溶胶、液体和粉末喷雾剂)，局部给药(凝胶、软膏、乳剂、糊剂、泡沫、用于局部应用的无水固体形式和贴剂)以及根据目前使用的和本领域技术人员已知的技术以肠胃外方式(例如皮下使用、肌内使用、静脉内使用或皮内使用)的制剂的任何制剂。在所有制剂中，通过基于药物实践中通常使用的物质以选择待使用的物质来确定技术性辅料或佐剂的使用。在基于与或不与具有抗肿瘤活性的药剂联合的活性药物成分而制备制剂中，本领域技术人员可以使用根据现有技术认为有用的任何辅料以获得适合用于在治疗使用的稳定制剂。作为示例，在稀释剂类别中，可以使用固体制剂形式的稀释剂，如糖、多元醇(例如乳糖、甘露糖醇、山梨糖醇)，纤维素，无机酸的盐(例如磷酸氢钙)，有机酸的盐(包括以钠盐、钾盐和钙盐形式的柠檬酸盐、碳酸盐和碳酸氢盐滴定剂)，或者以液体形式的稀释剂，如水，用于口服的食用油(向日葵油、橄榄油、玉米油、甜杏仁油、坚果油)或用于局部制剂的食用油(荷荷芭油，短链、中链或长链的甘油三酸酯)，多元醇(甘油、丙二醇、己二醇)。在崩解剂的类别中，可以使用例如天然或改性淀粉(玉米淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉)，交联羧甲基纤维素钠、乙醇酸钠淀粉，交联聚维酮；可以使用的可能的粘合剂包括橡胶类型的天然产物(瓜尔胶、黄原胶、阿拉伯树胶)，蔗糖和合成产物(包括聚乙烯吡咯烷酮和纤维素的半合成衍生物)。使用硬脂酸及其盐，包括镁盐、乙二醇的聚合物、甘油三酯和天然或合成蜡作为润滑剂已被证明是有效的。表面活性剂用于使形成本发明基础的包含在制剂中的一种以上的活性成分更加与水可溶或用水更易洗涤，这些活性成分单独地起作用或由一种以上的稀释剂携带。例如，可以举出脱水山梨糖醇酯、脱水山梨糖醇聚氧乙烯酯、蔗糖酯和月桂基硫酸钠。滑爽剂可以选自例如胶体二氧化硅、沉淀二氧化硅，而可使用的抗粘附剂包括例如滑石或淀粉。在可注射制剂的制备中，可以选择允许活性物质有效溶解或分散的那些辅料。举例来说，出于获得适合于通过注射给药的ph和渗透压的目的，可以与水一起采用其它水溶性载体如多元醇和有机或无机酸的盐。在特定情况下，可以使用非水溶性载体，如油或通常被批准用于注射用途的合成物质。本领域技术人员可以使用他已知的普通制备方案来制备所有制剂。仅通过举例的方式，胶囊中的制剂可以方便地通过预先研磨本发明的活性药物成分，在普通混合器中将所获得的粉末与一种以上的所选择的抗肿瘤剂和辅料一起混合以制备该制剂，该辅料例如选自以上提及的或在市场上可获得的且批准用于口服使用的那些中的稀释剂、崩解剂、润滑剂和滑爽剂。在片剂的情况下，可能需要利用预先溶解在水中的或引入至混合物中的粘合剂对部分或全部混合物造粒，并使用水作为根据现有技术的造粒方法的佐剂。可以对颗粒干燥、筛分并与其它粉末进一步混合，以获得适合于获得根据本领域技术人员已知的片剂的混合物。在肠胃外使用的情况下，组合物还可以被提供有根据具体操作要求方便地进行混溶的分开容器中的活性成分。为了促进本文所述的组合物使用的目的，这些可以以含有本发明的活性药物成分以及可选的一种以上的抗肿瘤剂和/或一种以上的抗炎剂的单位剂量的形式存在，该单位剂量有效用于以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的特定病理状况的预防和/或治疗用途。本发明还涉及用于将本发明的活性药物成分和一种以上的具有抗肿瘤活性的化合物和/或一种以上的具有抗炎活性的化合物合并给药或序贯给药的试剂盒，该试剂盒用于在预防和/或治疗以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤病理状况中使用，所述试剂盒包含如本说明书中定义的本发明的活性药物成分的一个以上的等分试样，以及一种以上的具有抗肿瘤活性的化合物的一个以上的等分试样和/或一种以上的具有抗炎活性的化合物的一个以上的等分试样。可替换地，试剂盒可以包含含有作为唯一活性药物成分的如本说明书中定义的本发明的活性药物成分的组合物的一个以上的等分试样和一种以上的具有抗肿瘤活性的化合物的一个以上的等分试样和/或一种以上的具有抗炎活性的化合物的一个以上的等分试样。如上所述，这些化合物可以是选自例如包括顺铂、多柔比星、培美曲塞、甲氨蝶呤、长春瑞滨、吉西他滨和紫杉醇的组的化疗剂。可以用本发明的试剂盒或组合物治疗或预防的病症是已经在上述中指出的病理状态，以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的病理状态，其可以由例如病毒感染(如文献中所记载的)，包括被幽门螺杆菌(hpylori)感染、被乙型肝炎(hepatitisb)病毒感染、被hpv(人乳头状瘤病毒)感染、被爱泼斯坦-巴尔病毒(epstein-barrvirus)感染(如yu等人2009报道的)引起，或可以由现有技术报道的以stat3的组成型或异常激活为特征的任何肿瘤表示的肿瘤病理状态。这类肿瘤的非限制性实例包括：前列腺癌、多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、黑素瘤、卵巢癌、乳腺癌、肾细胞癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、红白血病、头颈部鳞状细胞癌、结肠癌、间皮瘤。更具体地，所述脑肿瘤可以是例如胶质瘤、脑膜瘤、成神经管细胞瘤，所述淋巴瘤可以是塞扎里综合征、ebv相关的伯基特淋巴瘤、松鼠猴属hsv依赖性淋巴瘤、皮肤t细胞相关淋巴瘤；所述白血病可能是htlv-i依赖性白血病、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、急性骨髓性白血病(aml)、巨核细胞白血病、大颗粒淋巴细胞白血病(lgl)。存在stat3的组成型或异常激活的肿瘤前病理状态可以是肿瘤消融后的病理状态，从而肿瘤前在此意义上表示肿瘤可以重新形成，或者可以是如文献报道的其中从炎症转移为获得细胞部分的恶性特征的病理状态。最后，本说明书还涉及用于预防和/或治疗以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤病理状况的治疗方法，包括将治疗活性量的本发明的活性药物成分或包含作为唯一活性药物成分的本发明的活性药物成分，可选地与一种以上的抗肿瘤和/或抗炎化合物联合的药物组合物给予至需要其的个体的步骤。形成本发明基础的方法可以通过以下实施：向表现出以stat3转录因子的组成型或异常激活为特征的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤病理状况的受试者给予治疗有效剂量的本文所定义的活性药物成分，可选地与一种以上的抗肿瘤或抗炎药物联合；或通过给予治疗有效剂量的本文定义的组合物，可选地还包含一种以上的抗肿瘤和/或抗炎药物，或通过利用本文定义的试剂盒给予提取物和一种以上的抗肿瘤和/或抗炎药物。可以根据医生选择的给药方案合并或序贯地进行如上所述的给药。已经报道了许多证实了根据本发明提取物的功效的实验数据。在本发明的特定实施方式中，根据本发明的病症不包括间皮瘤(特别是恶性胸膜间皮瘤)。使用的细胞系-l428人类淋巴瘤细胞系。可获得自dsmzacc197-具有组成型激活stat3的karpas-299人类淋巴瘤细胞系。可获得自cellbankaustralia#6072604人类t细胞淋巴瘤细胞系，于1986年由具有非霍奇金淋巴瘤细胞的25岁的人类外周血建立的，目前被归类为淋巴母细胞淋巴瘤细胞系。karpas299表达在酪氨酸705和丝氨酸727中磷酸化的stat3。-msto211h人肺二相间皮瘤细胞系，具有组成型激活的stat3。可获得自atcc#clr-2081。由62岁的未曾进行过任何治疗的患有间皮瘤(二相恶性肿瘤)的人的胸膜溢出建立的人类间皮瘤细胞系。细胞系msto211h表达高水平的pstat3)。(tsao等人.inhibitionofc-srcexpressionandactivationinmalignantpleuralmesotheliomatissuesleadstoapoptosis,cellcyclearrest,anddecreasedmigrationandinvasion.molcancerther2007；6:1962-1972.)-du145人癌细胞系，可获得自atcc#htb-81与具有高转移潜力的pc3细胞相比，细胞系du145是具有适度转移潜能的人前列腺癌细胞系。du145细胞对激素不敏感，且不表达psa(前列腺特异性抗原)。细胞系du145以组成型方式表达pstat3。-hct116人结肠癌细胞系。可获得自atcc#ccl-247。-mda-mb-231人乳腺癌细胞系。可获得自atcc#htb-26。于1973年从患者建立的乳腺癌细胞系mda-mb-231，呈上皮样形态，且表现型地呈梭形细胞。在体外，细胞系mda-mb-231表达高水平的pstat3(berishaj等人.stat3istyrosine-phosphorylatedthroughtheinterleukin-6/glycoprotein130/januskinasepathwayinbreastcancer.breastcancerresearch2007,9:r32)。-ncl-h2052人类间皮瘤细胞系。该细胞系表达pstat3(tsao等人.inhibitionofc-srcexpressionandactivationinmalignantpleuralmesotheliomatissuesleadstoapoptosis,cellcyclearrest,anddecreasedmigrationandinvasion.molcancerther2007；6:1962-1972.)可获得自atcc#clr-5915-nci-h28人类第4期间皮瘤细胞系。可获得自atcc#crl-5820-mpp-89人类间皮瘤细胞系。可获得自cabri，接入号iclchtl00012以下实施例示出了本发明的菜蓟提取物如何能够：以剂量依赖的方式降低间皮瘤细胞(msto211h，mpp-89，nci-h2052，nci-h28)的活力，而对未转化的间皮细胞(hmc)作用不强烈；降低在相同细胞系的克隆生存测定中形成集落的能力，诱导在凋亡测定中的恶性间皮瘤细胞mm的细胞死亡；抑制在伤口愈合测定中的mm细胞的迁移和增殖；用化疗剂如培美曲塞连续处理使mm细胞敏化；诱导mm细胞中的dna损伤，而不诱导hmc细胞中的dna损伤；降低msto细胞对用提取物预处理的细胞肿瘤移植的能力；对msto异种移植的处理具有剂量依赖性作用。实施例1.通过蛋白质印迹分析stat3的磷酸化。结果报告在图1-3。1.1.细胞裂解和蛋白质印迹。在用蛋白酶和磷酸酶的抑制剂(5mmpmsf，3mmnaf，1mmdtt，1mmnavo4)补充的裂解缓冲液np40(50mmtris-hclph7.4，150mmnacl，1％np-40，1mmegta，1mmedta)中将细胞在冰上裂解30分钟。通过在8％聚丙烯酰胺凝胶上的变性电泳(sds-page)将等量的蛋白质总提取物(30μg)分解，并用2小时转移至硝酸纤维素膜上。用溶解在tbs-吐温_200.05％中的5％奶汁溶液对膜封闭1小时，并与特异性一抗孵育。使用以下一抗：抗β肌动蛋白(a-2228，sigma)、抗-pstat3(tyr-705)(sc8059，santacruz)和抗-stat3(sc7179，santacruz)。二抗被过氧化物酶缀合(santacruz)并且使用ecl试剂(amersham，gehealthcare，piscataway，nj，usa)用于化学发光。1.2.用菜蓟提取物处理mpm和正常商业性间皮细胞(hmc)的细胞系。从atcc(rockville，md)获得mpm(msto-211h，nci-h28，nci-h2052，mpp89)的细胞系，而从tebu-bio(法国)获得hmc(人间皮细胞)的细胞系。所有细胞系在37℃和5％co2下在特定培养基中单层生长。将朝鲜蓟提取物方便地溶解在水溶液中，可注射溶液和乙醇的比例为1:1，初始浓度为30mg/ml。为了测试抗肿瘤性质，如图所示，然后使用多种浓度和多个时间，将产物直接加入多种细胞系的培养基中。1.3.结果图1至图2所示的结果示出了与未用提取物处理的对照相比，测定的提取物如何抑制stat3磷酸化。图1和图2示出了从根据本说明书用菜蓟提取物处理的msto211h细胞获得的数据。图1示出了仅用载体处理的对照以及100μg/ml菜蓟提取物的培养基处理24小时的数据(肌动蛋白对照)，并且图2示出了用不同浓度的菜蓟提取物(25μg/ml，50μg/ml，75μg/ml)处理细胞24小时的数据。对于图1，示出了仅用载体处理的对照以及100μg/ml菜蓟提取物的培养基处理24小时的数据(肌动蛋白对照)。2.菜蓟提取物和菜蓟苦素抑制du145细胞和karpas细胞中的stat3的组成型激活：从图17-20可以看出，菜蓟提取物和菜蓟苦素均对du145细胞和karpas细胞中的stat3起作用。含有0.181％菜蓟苦素的200μg/ml提取物含有1.2μm的菜蓟苦素。这些图表明，用25μm菜蓟苦素观察到的效果与用200μg/ml提取物观察到的效果相同，其中菜蓟苦素的滴定度等于0.181％，也就是说含有1.2μm的菜蓟苦素。由于使用剂量的提取物含有1.2mm的菜蓟苦素，所获得的数据表明，提取物比菜蓟苦素更有效。3.测定恶性胸膜间皮瘤(mpm)细胞的克隆生成将mpm细胞(msto211h，nci-h28；mpp-89；nci-h2052)以每孔200个细胞接种，并以多种生长浓度的根据本说明书的菜蓟提取物(对照仅含有载体；12.5μg/ml；25μg/ml；50μg/ml；100μg/ml，200μg/ml)进行处理。每个点在6孔多孔中一式两份。15-21天后用结晶紫对形成的集落染色。克隆形成试验(colonyformationassay)，也称为克隆生成试验(clonogenicassay)是用于评价抗肿瘤化合物对肿瘤细胞从单细胞形成集落的能力的功效的技术。认为一个集落是一组起源自单个细胞的50个以上的细胞(克隆)。图3a-3d中所示的实验结果示出了本发明提取物以剂量依赖的方式抑制所测定的所有mpm细胞系中的集落形成的剂量依赖性能力。还对hct116结肠癌细胞、du145前列腺癌细胞和mda-mb-231乳腺癌细胞进行了相同的测定。在这种情况下，图4a、b、e和c所示的数据示出了本发明提取物以剂量依赖的方式抑制集落形成的功效。4.atplitetm细胞活力测定根据生产商的说明书，利用atplitetm测定(perkinelmer)评价暴露于多种浓度的本发明提取物之后的各种细胞系的活力。在指出的情况下，术语“载体”是指以与用于处理的相同体积使用的浓度为1:1的可注射溶液和乙醇的水溶液。atplitetm是基于萤火虫(photinuspyralis)萤光素酶的活性监测三磷酸腺苷(atp)水平的系统。该发光测定是对用包含在培养基中的可能物质进行处理的所培养的哺乳动物细胞的增殖进行定量评价的比色、荧光和放射性同位素测试的替代。事实上，atp的监测是用于评价广泛范围的药物、生物反应的调节剂和生物化合物的细胞生长抑制和抗增殖作用。atplitetm测试系统基于加入atp荧光素酶和d-荧光素的反应产生的光。发射的光在一定限度内与atp浓度成比例。细胞中atp的量与细胞活力相关。在用各种浓度的根据本发明的提取物(对照仅具有载体；12.5μg/ml；25μg/ml；50μg/ml；100μg/ml，200μg/ml)处理后，测定各种类型的mpm细胞系(msto211h，mpp89，nci-h28)和hmc细胞(由有意愿的捐献者提供的未转化的间皮细胞)的细胞活力。图5中的示出了测定结果的图表明，提取物能够以剂量依赖的方式显著降低细胞活力。还对未转化的间皮细胞(hmc)测试了细胞活力的影响，通过该测试证实了与肿瘤细胞系相比，形成本发明基础的提取物具有更低的细胞毒性(图6a-6c)。5.wst测定细胞活力和增殖，比较本发明提取物与菜蓟苦素的细胞毒性功效。使用wst试验(wst＝水溶性四唑盐)测定细胞毒性，该wst试验利用线粒体脱氢酶从黄色wst分子(四唑盐)分离四唑环的能力以产生橙色甲臜盐。使用分光光度法测量用待测试物质处理细胞后产生的甲臜量，并且所产生的甲臜量与活细胞的数量成正比。相对于mtt，wst-1和特别是wst-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺基苯基)-2h-四唑)是有利的，因为它们与作为电子介体的pms结合以产生水溶性甲臜后而降低了细胞外的。最终，wst测定：(1)可以直接读取(与需要增溶期的mtt相反)，(2)并给出比mtt更有效的信号，和(3)降低对细胞的毒性(与mtt对比，mtt产生在细胞内积累的不溶性甲臜)。进行以下wst测定：5.1用50、100和200μg/ml的菜蓟提取物在24-48-72小时处，对细胞系du145进行wst-1测定，如图9所示5.2用0-100-200-300-400-500-600μg/ml的菜蓟提取物(菜蓟苦素＝1.361％)在24和48小时处对细胞系du145进行wst-1测定，其以时间依赖性和剂量依赖性的方式抑制du145细胞的活力。显示该测定的图7还显示了浓度为100μg/ml；200μg/ml；300μg/ml；400μg/ml；500μg/ml；600μg/ml的测定提取物中以μg/ml和μm两者表示的菜蓟苦素的含量(分别包含0.47μm；0.94μm；1.41μm；1.88μm；2.35μm和2.82μm的菜蓟苦素)。5.3用0-10-20-30-40-50-60μm的菜蓟苦素在24和48小时处对细胞系du145进行wst-1测定，其以剂量依赖性和时间依赖性的方式抑制du145细胞的活力。结果如图8所示。通过比较图7和图8可以看出，所测定的提取物的效率比菜蓟苦素高出超过40倍。6.测定用化疗剂共同处理的细胞活力采用细胞系msto211h和nci-h2052以评价菜蓟提取物+抗肿瘤药物联合的作用。根据制造商的说明书，使用atplitetm测定(perkinelmer)进行图10所示的测定。以用于处理的相同体积使用浓度为1:1的可注射溶液和乙醇的水溶液。药剂：根据生产商的说明书进行稀释的培美曲塞(alimta，lilly)。6.1利用atplitetm测定菜蓟种提取物和培美曲塞的联合图10示出了用培美曲塞、培美曲塞与菜蓟种提取物联合处理72小时后的msto211h的活力曲线；图a示出了用非细胞毒性剂量(6μg/ml)的提取物和培美曲塞对msto211h细胞的处理，而图b示出了用非细胞毒性剂量(6μg/ml)的提取物和培美曲塞(多种浓度)对nci-h2052细胞的处理，以及图c示出了用非细胞毒性剂量(6μg/ml)的提取物和培美曲塞(多种浓度)对未转化的hmc细胞的处理。测定化合物的浓度绘制在横坐标上，而以百分比表示的细胞活力绘制在纵坐标上。图10a和b示出了用提取物处理如何使肿瘤细胞系敏感于培美曲塞的处理。在双重处理的曲线中，很明显的是，仅10μm培美曲塞的浓度足以降低测试细胞系的细胞活力。令人有趣发现的是，在非肿瘤细胞系中，针对于培美曲塞，提取物具有保护作用。6.2评价用wst-1测定的细胞活力用不同剂量的菜蓟苦素代替提取物平行地进行测定，比较提取物和菜蓟苦素的功效。图11示出了，通过仅用载体(对照)、用两种不同浓度的菜蓟提取物(abo-1)、仅用药物(顺铂(图a)、多柔比星(图b)和紫杉醇(图c))和用两种不同浓度的菜蓟提取物(abo-1)与药物联合孵育du145细胞而获得的数据。在图11示出的实验中使用的提取物具有含量为0.181％的菜蓟苦素。因此，该图示出了具有100和200μg/ml提取物的菜蓟苦素的浓度分别等于0.18和0.36μg/ml的菜蓟苦素。图12示出了浓度逐渐增长的菜蓟提取物(菜蓟苦素＝1.361％)与15μg/ml固定浓度的顺铂之间的联合，并且图13示出了菜蓟提取物(菜蓟苦素＝1.361％)与2μg/ml固定浓度的多柔比星之间的联合。该图还显示了仅用提取物(黑色)或仅用药物(白色)处理的值。图14和15类似于图12和13，示出了用菜蓟苦素代替本发明的提取物进行的相同实验的结果，并示出了提取物显著地比菜蓟苦素更有效。因而图14示出了浓度逐渐增长的菜蓟苦素与15μg/ml固定浓度的顺铂之间的联合，并且图15示出了菜蓟苦素与2μg/ml固定浓度的多柔比星之间的联合。该图还示出了仅用菜蓟苦素(黑色)和仅药物(白色)处理的值。7.伤口愈合测定伤口愈合测定(图16a-b)是简单、便宜的且是用于研究体外定向细胞迁移而开发的最初方法之一。该方法模拟体内伤口愈合过程中的细胞迁移。基本步骤包括在细胞单层中产生“伤口”，然后通过在封闭“伤口”所需的细胞迁移期间的开始和以规则的间隔时捕获图像来监测“伤口”的特定区域。将经过培养具有95％融合度的msto211h细胞接种在6孔板中，用10微升无菌移液管穿刺来制成“伤口”(或切口)，以除去细胞。在受伤后在指定时间产生数字显微照片。最后的条形图示出了在指定时间用载体或abo1处理的切口(细胞的定量数％)的封闭效果。8.评价诱导凋亡的测定参见图(22-23)8.1蛋白质印迹使用与第1.1点中所述的相同技术，使用以下一抗：抗β肌动蛋白(a-2228，sigma)、抗-caspase-3(31a1067，alexis)、抗-caspase-7(#9492，cellsignaling)和抗-parp(#9542s，cellsignaling)。8.2facs分析和pi染色以及pi/膜联蛋白v染色分析为了确定本发明提取物对细胞周期的影响，进行了facs分析。为了用碘化丙啶(pi)染色，将细胞以104个细胞/ml的密度接种在6孔板中。24小时后，用指定浓度的本发明提取物以不同的时间间隔处理肿瘤细胞。将细胞收集在悬浮液中，在pbs中洗涤附着的细胞，用冷冻乙醇(70％v/v)固定并储存在-20℃。为了分析，将细胞在pbs1×中洗涤并悬浮于pbs1z、pi(25mg/ml)和rnasea(200mg/ml)的溶液中。对于pi/膜联蛋白v双重染色，收集经过处理的细胞并重悬于结合缓冲液(hepesph7.4，cacl22.5mm，nacl140mm)中。用膜联蛋白vfitc和pi(5mg/ml)(invitrogen)将等分试样的细胞孵育15分钟。在所有的facs分析中，对每个样品分析了105个事件。在guavaeasycyte8ht(millipore)流式细胞仪上进行流式细胞术分析。从图23可以看出，如通过膜联蛋白v染色确定的，本发明的提取物以时间依赖性和剂量依赖性方式诱导msto211h细胞的凋亡。9.测定谷胱甘肽由还原和氧化的谷胱甘肽之间的比例的变化引起的细胞氧化还原状态的变化决定了stat3的谷胱甘肽化，阻止其在酪氨酸中的磷酸化，并因此导致其激活(butturinie等人.plosone.2011；6(5):e20174.)。9.1gsh的细胞内分析。通过比色法评价gsh的细胞内浓度。用二硫硝基苯(dtnb)处理通过10％三氯乙酸脱蛋白的细胞提取物，并且通过分析412nm处的吸光度评价与gsh反应后释放的tnb的量。9.2stat3的谷胱甘肽化通过用抗-stat3抗体将蛋白质细胞提取物孵育过夜来使stat3免疫沉淀。通过sds-page在非还原条件下分离获得的蛋白质，并转移到pvdf膜上。使用抗-gsh抗体识别谷胱甘肽化的stat3。图24和25所示的数据证实了，菜蓟苦素降低gsh的细胞内浓度(图24)，并且氧化还原状态的变化诱导stat3谷胱甘肽化，从而阻止其磷酸化(图25)。通过用谷胱甘肽乙烯酯预处理而恢复的gsh的生理值，逆转了菜蓟苦素抑制stat3磷酸化的能力。10.移植用本发明的提取物处理或未处理的肿瘤细胞第一次植入实验的描述。用50μg/ml浓度的朝鲜蓟将msto211h细胞处理24小时。收集pbs/matrigel(bdbiosciences)中的2×106个细胞的悬浮液并接种在4周龄的雌性裸鼠的右髋。每周监测肿瘤体积两次，一直到第21天。处死小鼠并且移除肿块。11.将肿瘤细胞移植至小鼠中并用菜蓟和培美曲塞处理(图27)第二次植入实验的描述。在细胞植入前，将其扩增，并根据其活力和污染进行评价，即将其计数并以20×106/ml的浓度重新悬浮于pbs中。将基质胶(matrigel)加入到悬浮液中以获得终浓度为10×106细胞/ml的pbsmatrigel1/1。将msto细胞接种在48只小鼠的皮下。当肿瘤达到60mm3的平均体积时，将小鼠分成8组，每组6只动物接受不同的处理。两组在三周的时间内以饮用水一周7天地接受朝鲜蓟；其它组在3周的时间内一周5天地腹膜内接受培美曲塞。以下表5的方式列出了这些组：sc＝皮下治疗(treatm.)＝治疗(treatment)给药(administrat.)＝给药(administration)ip＝腹膜内os＝口服随着出现肿瘤发展(即肿瘤达到60mm3时)，用abo1和培美曲塞开始处理，如下给药：腹膜内连续5天剂量为100mg/kg，88ml/小鼠的培美曲塞，浓度为25、50和75微克/ml的朝鲜蓟提取物饮用水，并在3周时间内隔天进行测量。每天监测小鼠以评价任何病症；每周监测体重两次。实验结束时(接种后42天)，收集肿瘤块并固定在10％福尔马林中(24小时后转移至70％乙醇)。使用三丰卡尺(mitutoyocaliper)每周测量肿瘤直径两次。12.产生缺氧模型近年来的科学文献描述了肿瘤微环境与肿瘤本身的发展和进展的相关性。在血管发育不足和异常之后，大多数实体瘤存在比正常组织低的氧水平，从而形成缺氧区域，其诱导与更多转移表型相关的适应性变化以及对治疗更强的抗性。在这种情况下，缺氧诱导的转录因子(hif-1)介导细胞应答于应激，并控制参与糖酵解调节、葡萄糖转运、细胞存活和增殖、血管生成和转移的许多基因的表达。肿瘤中hif-1活性的增加源自两个伴随因素：hif-1α的较高表达，蛋白质的调节亚基，并且stat3的组成型激活导致gsh/gssg系统的失调，导致gsh增加，而这导致肿瘤细胞更高的存活率以及其对化疗剂更强的抗性。在肿瘤环境中改变的各种代谢和信号转导通路中，选出了两个主要靶点，以控制缺氧诱导的适应性事件并诱导细胞死亡：hif-1α和gsh/gssg系统。作者证明，菜蓟提取物是stat3的强大抑制剂，诱导凋亡，并且使一些肿瘤细胞系对某些化疗药物更敏感。通过使用ruskin培养箱在缺氧条件下培养一些源自多种人类肿瘤的细胞系，在培养箱中吹入具有不同百分比的气体(o2、co2和n)的混合物。产生两种缺氧模型：-急性缺氧o2<2％长达48小时-慢性缺氧o2<2％持续长时间。12.1细胞培养在37℃下5％co2气氛中，将人乳腺癌细胞系t47-d和mda-mb231、人结直肠腺癌细胞系ht-29、人前列腺癌细胞系du145、人宫颈癌细胞系hela、人肝癌细胞系hepg2(atcc，美国菌种保藏中心)培养于dmem(biowhittaker，cambrexbioscience，belgium)中。将培养基与10％牛胎血清(fbs，biowhittaker，cambrexbioscience，belgium)、100ui/ml青霉素、100mg/ml链霉素和40mg/ml庆大霉素整合。为了建立慢性缺氧模型，使用多组分气体培养箱(multigasincubator)(ruskinnc300，ruskinntechnologyltd.，bridgend，unitedkingdom)，在用n平衡的5％co2和1％o2气氛中，将上述细胞系培养在含有10％fbs的dmem中。选择通过每个细胞通路存活的细胞，并用复氧和缺氧循环培养至少3个月且长达6个月。12.2细胞活力wst-1基于由线粒体脱氢酶将四唑盐4-[3-(4-碘苯基)-2-(4-硝基苯基)-2h-5-四唑]-1,3-苯二磺酸盐wst-1(rochemolecularbiochemicalsindianapolis，in)裂解成甲臜，通过比色测定测量细胞活力(生存力)。台盼蓝/countess使用countess全自动细胞计数仪(lifetechnologiestm)，用0.4％台盼蓝排除试验评价细胞活力。12.3增殖试验cfse增殖试验通过染料稀释度用于监测不同代的增殖细胞。cfse是进入细胞并与蛋白质上的氨基基团结合的细胞膜可渗透荧光分子，使染料需要长期保持在细胞内。通过连续的细胞分裂，每个子细胞接收约一半的亲本荧光。通过流式细胞术分析细胞群体荧光强度允许确定从标记起细胞或群体已经进展的代数。每一代细胞在流式细胞仪直方图上显示为不同的峰。用pbs洗涤细胞两次，离心，然后重悬于0.1％的pbs/bsa中，将细胞密度调节至1×106。将浓度为10μm的染料加入到细胞悬浮液中，并将全部在37℃下孵育10分钟，防止光照。在冰上孵育5分钟后，用0.1％pbs/bsa洗涤细胞三次以除去残留在溶液中的游离染料，重悬于培养基中，以100,000个细胞的(经过染色的)等分试样分布于多孔板中。在24、48和72小时后，收集细胞并用装配有488nm激发源的facs进行分析。12.4细胞周期分析通过对脱氧核糖核酸(dna)含量进行单变量分析，获得细胞周期分析。在24、48和72小时收集细胞，并用(细胞可渗透的)荧光染料vibrantorange染色，该染料与双链dna结合后发射与dna质量成比例的荧光信号。使用流式细胞仪测量各个细胞的荧光强度。通过使用该方法，可以制备频率分布直方图或dna频率直方图，以便显示细胞周期g1/g0、s和g2/m阶段。12.5定量l-乳酸、丙酮酸酯和葡萄糖根据l-乳酸测定(meganzyme)和葡萄糖比色测定(cayman)程序，在进行特异性酶反应后通过分光光度计，在缺氧和常氧细胞两者的上清液中定量l-乳酸、丙酮酸酯和葡萄糖。12.6蛋白质印迹分析将细胞在4℃下在含有420mmnacl、1mmedta、1mmegta、1％nonidet-p40(np-40)、20％甘油、蛋白酶抑制剂混合物(gehealthcare,amershamplace,unitedkingdom)和磷酸酶抑制剂混合物的ph7,4的20mmhepes中均匀化。将细胞裂解物的等分试样上样(每个泳道40μg的总蛋白)至7.5％sds-聚丙烯酰胺凝胶上。在100v下用含有0.25mtrishcl(ph8,3)、1.92m甘氨酸和1％sds的电泳缓冲液进行电泳。将分离的蛋白质在pvdf膜(immobilonp，millipore，bedford，ma)上进行电印迹，并在4℃下与适当的抗体一起孵育过夜。冲洗后，用过氧化物酶缀合的抗兔或抗小鼠igg抗体(cellsignalingtechnology)和化学发光检测系统(kitimmun-startmwesternctm，bio-rad，hercules，ca)将膜显影。使用chemidocxrs成像系统(bio-rad)检测并定量经受印迹的蛋白质。12.7急性缺氧在37℃下在ruskincabinet中，将下表中所示的细胞系在含有三种不同o2浓度(0.5％、1％和2％)的气氛下培养24或48小时，并且用基于活细胞中存在的线粒体脱氢酶的四唑盐还原的wst-1比色测定和台盼蓝联合分析细胞活力，以由countess/invitrogen计数。细胞系t-47d人乳腺癌mda-mb231人乳腺癌hela人宫颈肿瘤hepg2人肝癌du-145人前列腺癌ht-29人结肠癌12.8慢性缺氧为了重新形成存在于实体肿瘤内部的慢性缺氧状态，在37℃、1％o2气氛下在ruskincabinet中将以上表中所示的所有细胞系培养数月。每三天更换培养基以消除死细胞，大约每10-15天将细胞置于常氧条件下的培养箱中培养24小时。在所有分析的细胞中，只有mda-mb231细胞系适应于缺氧环境并存活下来。适用于慢性缺氧的mda-mb231细胞系被称为chr-mda-mb231(慢性缺氧抗性)。这些细胞生长缓慢，几个月后形成完全不同的形态。为了更好地突出这一变化，用细胞膜特异性的cell-mask染料处理细胞，并用共聚焦显微镜拍照。与亲代细胞相比，chr-mda-mb231细胞具有更梭形的形状。分析代谢和细胞增殖。chr-mda-mb231能量代谢的分析表明，与在常氧下培养的细胞相比，这些细胞不消耗葡萄糖并产生稀少的丙酮酸酯，而产生的乳酸浓度保持不变。这些结果表明，慢性缺氧细胞chr-mda-mb231的代谢大大减缓。然后用cfse(一种荧光团，在每个细胞分裂时其分布到子细胞中使子细胞荧光减半)处理chr-mda-mb231细胞，从而允许监测细胞分裂的次数。获得的结果表明细胞增殖非常缓慢。最后，细胞周期的细胞荧光学研究证明这些细胞在细胞周期的g0/g1期是静止的。此外，这些细胞不会因为失巢凋亡而死亡，而是形成肿瘤球体，这是癌症干细胞的典型特征。总之，这里报道的慢性缺氧细胞模型提供了在体内长期存活于肿瘤中、逃避治疗、并且在环境变化之后可发生转移和复发的休眠细胞的典型特征。在一些工作中，它们也被确定为癌症干细胞。13.本发明的滴定提取物在缺氧条件下诱导肿瘤细胞对化疗剂敏感所创建的模型似乎适用于与经典化疗剂联合使用的植物提取物的研究。然后用多柔比星、用植物提取物或它们的联合处理细胞，并按附加的材料和方法中所描述的，通过台盼蓝/countessinvitrogen进行细胞活力分析。进行以下处理：13.1用多柔比星处理用不同浓度的治疗乳腺癌的选择性药物，多柔比星，将在常氧和慢性缺氧条件下培养的mda-mb231细胞处理24小时。获得的数据表明，与常氧培养下的亲本相比，chr-mda-mb231细胞对药物更具有抗性。mda-mb231ec50＝0.25μg/ml和chmdamb231ec50＝1μg/ml(图29)。13.2用根据本发明的滴定提取物处理用以100mg/ml的浓度溶解于50％etoh中的不同浓度的根据本发明的滴定提取物处理在常氧和慢性缺氧条件下培养的mda-mb231细胞24小时。获得的结果表明所用提取物以剂量依赖的方式抑制细胞活力(图30)(ec50＝300μg/ml)。13.3用根据本发明的滴定提取物和多柔比星处理为了使细胞对化疗处理敏感，如图31所示的用增加剂量的根据本发明的滴定提取物与0.25μg/ml多柔比星联合处理chmda-mb231细胞，并如下所示的用台盼蓝评价细胞活力。对于这种类型的实验，使用了能够在检查的细胞中诱导20％死亡率的多柔比星量。结果表明，提取物使细胞对多柔比星的处理敏感。14.测定菜蓟中的绿原酸和菜蓟苦素样品制备：称重0.25g的冻干提取物(0.5g的被研磨的叶子)，并用50ml的75％meoh/0.1％hcooh在超声下提取15分钟，防止光照。离心并倾析于100ml容量瓶中。在相同的条件下对残留物重复进行第二次提取。离心并倾析于同一100ml容量瓶中。在20℃下用相同的提取溶剂使重新结合的有机提取液至一体积。用0.45μm的醋酸纤维素过滤器进行过滤，并将滤液注入uhplc或hplc系统。色谱条件(uhplc)：柱：poroshell120ec-c18,3×100mm2.7μm+在线过滤器4.6mm，0.2μm过滤器；柱温：30℃±0.8℃检测器：二极管阵列检测器绿原酸：波长＝325nm—带宽4。菜蓟苦素：波长＝212nm—带宽4。流速：0.43ml/min。注射量：5μl流动相：a＝h2o/0.1％hcooh，b＝ch3cn/0.1％hcooh。洗脱条件：标准品制备：标准品：菜蓟苦素—溶解溶剂：用于hplc的meoh。工作浓度：0.00404至0.064624mg/ml。储存条件：工作溶液储存于-20℃，避光保存。标准品：绿原酸—溶解溶剂：用于hplc的50％meoh。工作浓度：0.02548至0.10192mg/ml。储存条件：工作溶液储存在+4℃，避光保存。色谱条件(hplc法)：色谱柱：lunac18150×4.6mm5μm柱温：30℃±0.8℃检测器：二极管阵列检测器绿原酸：波长＝325nm—带宽4。参考(ref.off)波长：波长＝212nm—带宽4。参考流速：0.5ml/min。注射体积：10μl流动相：a＝h2o/0.1％hcooh，b＝ch3cn/0.1％hcooh洗脱条件：计算：用下式计算固体产物中绿原酸含量的百分含量：其中：ac＝样品中与绿原酸相关的峰面积；ast＝标准品中与绿原酸相关的峰面积；conc.st＝标准品中绿原酸以mg/ml计的浓度；v＝以ml计的提取物的总体积；p＝以克计的样品重量f＝稀释因子。用相同公式计算固体产物中菜蓟苦素的含量百分比。15.测定菜蓟中表示为绿原酸的总咖啡酰奎宁酸。样品制备：精确称重0.30g±0.015g冻干的提取物样品(如果是研磨的叶子，则为0.50g)。加入40ml超纯h2o，置于95℃±2℃的温度下进行磁力搅拌。一旦达到沸腾温度后，通过棉花过滤于50ml离心管中。加入2ml的饱和醋酸铅溶液至(仍然温热的)溶液中。冷却，离心并弃去上清液。向残留物中加入5ml超纯h2o，并搅拌离心管。再次离心并弃去上清液。用70ml稀释的乙酸(用超纯h2o使11.4ml成为100ml)提取残余物，并在缓慢搅拌下加热至沸腾。通过棉花过滤仍然温热的溶液，加入2ml(200ml/l)硫酸溶液。离心并将澄清溶液倾析至100ml容量瓶中。向残留物中加入5ml稀释的乙酸。离心并将澄清溶液倾析于同一100ml的烧瓶中。在室温下，用稀释的乙酸使其体积为100ml。测试溶液：取1ml溶液。利用容量瓶，用甲醇定容至25ml，搅拌。参考溶液：取1ml乙酸。利用容量瓶，用甲醇定容至25ml，搅拌。分光光度计读数：使用参考溶液作为空白，测量325nm处的测试溶液吸光度。a1％,1cm的定义(如欧洲药典ed8.0,2.2.25中所定义)＝置于1cm长小室中的以浓度为10g/升溶解的参考物在特定波长下的吸光系数。假设值在325nm处的绿原酸的a1％,1cm为485，那么用下式计算以绿原酸表示的咖啡酰奎宁酸的百分比：计算：其中：a＝样品在325nm处的吸光度。ve＝提取物的终体积。vf＝稀释的终体积。p＝以克计的样品重量。vp＝用于最终稀释的样品体积。a1％,1cm＝485(在325nm波长处的绿原酸的a1％,1cm)。参考文献-aggarwalb.b.等人targetingsignal-transducer-and-activator-of-transcription-3forpreventionandtherapyofcancer:moderntargetbutancientsolution.ann.n.y.acad.sci.1091；151-69:2006.-berishaj.等人stat3istyrosine-phosphorylatedthroughtheinterleukin-6/glycoprotein130/januskinasepathwayinbreastcancer.breastcancerresearch2007,9:r32.-johnstonpaegrandisrg,stat3signaling:anticancerstrategiesandchallenges.molinterv；11(1)；18-26:2011.-niug.等人signaltransducerandactivatoroftranscription3isrequiredforhypoxia-induciblefactor-1alpharnaexpressioninbothtumorcellsandtumor-associatedmyeloidcells.molcancerres,6(7)；1099-105:2008.-tsao等人inhibitionofc-srcexpressionandactivationinmalignantpleuralmesotheliomatissuesleadstoapoptosis,cellcyclearrest,anddecreasedmigrationandinvasion.molcancerther2007；6:1962-1972.-turksonj.jover.“statproteins:novelmoleculartargetsforcancerdrugdiscovery”oncogene.2000dec27；19(56):6613-26.-yu.h.等人“statsincancerinflammationandimmunity:aleadingroleforstat3”naturereviewscancer9,798-809(november2009)当前第1页12