相关申请案
本申请要求2014年11月26日提交的美国临时申请号62/084,769的权益。以上申请的整个教导以引用方式并入本文。
本发明主要涉及可用作fxr/tgr5调节剂的化合物和药物组合物。具体地，本发明涉及胆汁酸衍生物和它们的制备和使用方法。
发明背景
类法尼醇x受体(farnesoidxreceptor,fxr)为最初从大鼠肝cdna文库鉴定与昆虫蜕皮激素受体最紧密相关的孤儿核受体(bm.forman等,cell,1995,81(5),687-693)。fxr为配体活化转录因子的核受体家族成员，该核受体家族包括用于类固醇、类视色素、以及甲状腺激素的受体(dj.mangelsdorf等,cell,1995,83(6),841-850)。fxr的相关生理学配体为胆汁酸类(d.parks等,science,1999,284(5418),1362-1365)。最有效的一个为鹅去氧胆酸(cdca)，其调节参与胆汁酸动态平衡的数个基因的表达。法尼醇和衍生物(合在一起称为类法尼醇)最初被描述为在高浓度时活化大鼠直系同源物，但是它们不活化人或小鼠受体。fxr在肝脏中表达，遍布整个胃肠道，包括食道、胃、十二指肠、小肠、结肠、卵巢、肾上腺和肾。除了控制细胞内基因表达之外，fxr看起来还通过上调细胞因子成纤维细胞生长因子的表达而参与了旁分泌和内分泌信号转导(j.holt等,genesdev.,2003,17(13),1581-1591；t.inagaki等,cellmetab.,2005,2(4),217-225)。
起fxr调节剂作用的小分子化合物在以下出版物中已有公开：wo2000/037077、wo2003/015771、wo2004/048349、wo2007/076260、wo2007/092751、wo2007/140174、wo2007/140183、wo2008/051942、wo2008/157270、wo2009/005998、wo2009/012125、wo2008/025539、wo2008/025540、wo2011/020615、以及wo2013/007387。
其他的小分子fxr调节剂最近已有综述(r.c.buijsman等curr.med.chem.2005,12,1017-1075)。
tgr5受体为g蛋白偶联受体，其已被鉴定为应答胆汁酸类(ba)的细胞表面受体。tgr5的一级结构及其应答胆汁酸类已被发现在人、牛、兔、大鼠和小鼠之间的tgr5中是高度保守的，由此提示tgr5具有重要的生理学功能。已发现tgr5不仅在淋巴组织、还在其他组织中广泛分布。已在胎盘、脾和单核细胞/巨噬细胞中检测到高浓度的tgr5mrna。胆汁酸类已显示出诱导tgr5融合蛋白从细胞膜到细胞质的内化(kawamata等,j.bio.chem.,2003,278,9435)。已发现tgr5与takeda等,febslett.2002,520,97-101报道的hgpcr19相同。
tgr5还与camp的细胞内积聚相关，其在各种细胞类型中广泛表达。这种膜受体在巨噬细胞中的活化降低促炎细胞因子生成，(kawamata,y.等,j.biol.chem.2003,278,9435-9440)，而在脂肪细胞和单核细胞中ba对tgr5的刺激则增强能量消耗(watanabe,m.等nature.2006,439,484-489)。该后一作用涉及对2型碘甲状腺原氨酸脱碘酶(d2)的camp依赖性诱导，该酶通过局部地将t4转化为t3而导致增加的甲状腺激素活性。与tgr5在控制能量代谢中的角色一致，雌性tgr5敲除小鼠当以高脂肪饮食挑战时显示了随体重增加显著的脂肪积累，表明tgr5缺乏降低能量消耗并引起肥胖(maruyama,t.,等,j.endocrinol.2006,191,197-205)。另外，并且与tgr5参与能量动态平衡一致，膜受体的胆汁酸活化也有报道促进鼠科肠内分泌细胞系中胰高血糖素样肽1(glp-1)的产生(katsuma,s.,biochem.biophys.res.commun.,2005,329,386-390)。基于全部上述观察结果，tgr5为治疗诸如肥胖、糖尿病和代谢综合征的疾病的引人注目的靶标。
除了使用tgr5激动剂治疗和防止代谢性疾病之外，调节tgr5调节剂的化合物也可用于治疗其他疾病，例如中枢神经疾病以及炎性疾病(wo01/77325和wo02/84286)。tgr5调节剂也提供了调节胆汁酸和胆固醇动态平衡、脂肪酸吸收、以及蛋白质和碳水化合物消化的方法。
有需要开发fxr和/或tgr5调节剂用于治疗和防止疾病。
发明概述
本发明涉及调节fxr和/或tgr活性的化合物以及将这些化合物用于治疗疾病的方法。
在一个方面，本发明提供了由式ia表示的化合物或者其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物、水合物或其组合：
其中：
r1选自：
其中，
ra为氢、被取代的或未被取代的c3-c8-环烷基或被取代的或未被取代的c1-c8烷基；
rb选自由以下组成的组：
1)卤素；
2)羟基；
3)被取代的或未被取代的-c1-c8烷基；
4)被取代的或未被取代的-c2-c8烯基；
5)被取代的或未被取代的-c2-c8炔基；
6)被取代的或未被取代的-c3-c8环烷基；
7)被取代的或未被取代的芳基；
8)被取代的或未被取代的烷基芳基；
9)被取代的或未被取代的杂环烷基；
10)被取代的或未被取代的杂芳基；
11)被取代的或未被取代的烷基杂芳基；以及
12)–nr10r11；其中r10和r11各自独立地选自氢、被取代的或未被取代的-c1-c8烷基、被取代的或未被取代的-c2-c8烯基、被取代的或未被取代的-c2-c8炔基、被取代的或未被取代的-c3-c8环烷基，或者r10和r11与它们所连接的氮原子合起来形成杂环。
r2选自由以下组成的组：
1)氢；
2)被取代的或未被取代的-c1-c8烷基；
3)被取代的或未被取代的-c2-c8烯基；
4)被取代的或未被取代的-c2-c8炔基；
5)被取代的或未被取代的烷基芳基；以及
6)被取代的或未被取代的芳基。
在某些实施方案中，r2为氢或甲基。
m为0、1、2或3；在某些实施方案中，m为0、1或2。
r3为氢、羟基、-oso3h、-oso3-、-oac、-opo3h2或–opo32-；在某些实施方案中，r3为氢或羟基。
r4为氢、卤素、cn、n3、羟基、-oso3h、-oso3-、-oac、-opo3h2、–opo32-、-sr2或–nhr12，其中r12为氢；被取代的或未被取代的-c1-c8烷基；被取代的或未被取代的-c2-c8烯基；被取代的或未被取代的-c2-c8炔基；被取代的或未被取代的烷基芳基；或被取代的或未被取代的芳基；在某些实施方案中，r4为氢。
或者，r3和r4与它们所连接的碳原子合起来形成–ch＝ch-、环烷基环或杂环烷基环，例如但不限于环丙基、或环氧化物。
r5和r6独立地选自氢或羟基保护基团，例如但不限于乙酰基、三甲基甲硅烷基、或苄基；在某些实施方案中，r5和r6均为氢。
r7选自由以下组成的组：
1)氢；
2)卤素；
3)被取代的或未被取代的-c1-c8烷基；
4)被取代的或未被取代的-c2-c8烯基；
5)被取代的或未被取代的-c2-c8炔基；以及
6)被取代的或未被取代的-c3-c8环烷基。
在某些实施方案中，r7为c1-c4-烷基，优选乙基。
在另一个方面，本发明提供了由式ib表示的化合物或者其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物、水合物或其组合：
其中：
r1选自：
其中，
ra为氢、被取代的或未被取代的c3-c8-环烷基或被取代的或未被取代的c1-c8烷基；
rb选自由以下组成的组：
1)氢
2)卤素；
3)羟基；
4)被取代的或未被取代的-c1-c8烷基；
5)被取代的或未被取代的-c2-c8烯基；
6)被取代的或未被取代的-c2-c8炔基；
7)被取代的或未被取代的-c3-c8环烷基；
8)被取代的或未被取代的芳基；
9)被取代的或未被取代的烷基芳基；
10)被取代的或未被取代的杂环烷基；
11)被取代的或未被取代的杂芳基；
12)被取代的或未被取代的烷基杂芳基；以及
13)–nr10r11；其中r10和r11各自独立地选自氢、被取代的或未被取代的-c1-c8烷基、被取代的或未被取代的-c2-c8烯基、被取代的或未被取代的-c2-c8炔基、被取代的或未被取代的-c3-c8环烷基，或者r10和r11与它们所连接的氮原子合起来形成杂环。
r2选自由以下组成的组：
1)氢；
2)被取代的或未被取代的-c1-c8烷基；
3)被取代的或未被取代的-c2-c8烯基；
4)被取代的或未被取代的-c2-c8炔基；
5)被取代的或未被取代的烷基芳基；以及
6)被取代的或未被取代的芳基。
在某些实施方案中，r2为氢或甲基。
m为0、1、2或3；在某些实施方案中，m为0、1或2。
r3为氢、羟基、-oso3h、-oso3-、-oac、-opo3h2或–opo32-；在某些实施方案中，r3为氢或羟基。
r4为氢、卤素、cn、n3、羟基、-oso3h、-oso3-、-oac、-opo3h2、–opo32-、-sr2或–nhr12，其中r12为氢；被取代的或未被取代的-c1-c8烷基；被取代的或未被取代的-c2-c8烯基；被取代的或未被取代的-c2-c8炔基；被取代的或未被取代的烷基芳基；或被取代的或未被取代的芳基；在某些实施方案中，r4为氢。
或者，r3和r4与它们所连接的碳原子合起来形成–ch＝ch-、环烷基环或杂环烷基环，例如但不限于环丙基、或环氧化物。
r5和r6独立地选自氢或羟基保护基团，例如但不限于乙酰基、三甲基甲硅烷基、或苄基；在某些实施方案中，r5和r6均为氢。
r7选自由以下组成的组：
1)氢；
2)卤素；
3)被取代的或未被取代的-c1-c8烷基；
4)被取代的或未被取代的-c2-c8烯基；
5)被取代的或未被取代的-c2-c8炔基；以及
6)被取代的或未被取代的-c3-c8环烷基。
在某些实施方案中，r7为c1-c4-烷基，优选乙基。
r8和r9独立地选自氢；被取代的或未被取代的-c1-c8烷基；被取代的或未被取代的-c2-c8烯基；被取代的或未被取代的-c2-c8炔基；被取代的或未被取代的烷基芳基；或被取代的或未被取代的芳基；在某些实施方案中，r8和r9均为氢。
在另一实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含治疗有效量的本发明的化合物或化合物组合，药学上可接受的盐形式、立体异构体、溶剂化物、水合物或其组合，连同药学上可接受的载体或赋形剂。
在另一实施方案中，本发明提供了防止或治疗fxr介导的疾病或病状的方法。该方法包括以治疗有效量的式(ia)或式(ib)的化合物给药。本发明还提供式(ia)或式(ib)的化合物用于制备用于防止或治疗fxr介导的疾病或病状的药物的用途。
在又一实施方案中，本发明提供了防止或治疗tgr5介导的疾病或病状的方法。该方法包括以治疗有效量的式(ia)或式(ib)的化合物给药。本发明还提供式(ia)或式(ib)的化合物用于制备用于防止或治疗tgr5介导的疾病或病状的药物的用途。
在某些实施方案中，涉及tgr5受体调节的疾病选自代谢疾病、炎性疾病、肝脏疾病、自身免疫疾病、心脏疾病、肾脏疾病、癌症、以及胃肠疾病。
发明详述
本发明的第一实施方案为上文描述的由式ia或ib表示的化合物或者其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、酯或前药。
在本发明的某些实施方案中，r2为氢或甲基；m为0、1或2。
r3为氢或羟基；r4为氢；r5为氢；r6为氢；r7为乙基；r8为氢并且r9为氢。
在本发明的某些实施方案中，ra为氢、c4-c6-环烷基、苯基-c1-c4-烷基或c1-c4-烷基，优选苄基、c1-c3-烷基或c4-c6-环烷基。
在本发明的某些实施方案中，式ia中的r1选自由以下组成的组
在本发明的某些实施方案中，式ib中的r1选自由以下组成的组
在其中r1为
在本发明的化合物的某些实施方案中，r1为–s(o)2nrarb，其中ra和rb均为氢。
在本发明的化合物的某些实施方案中，rb为c1-c4-烷基、卤化的c1-c4-烷基、c1-c4-烯基、苯基-c1-c4-烷基、被取代的或未被取代的c3-c6-环烷基、c1-c6-环烷基-c1-c4-烷基、被取代的或未被取代的苯基或卤素。
在本发明的化合物的某些实施方案中，rb为甲基、乙基、异丙基、丁基、叔丁基、丙基、苄基、乙烯基、烯丙基、cf3、
在本发明的化合物的某些实施方案中，rb选自下表中示出的基团：
在某些实施方案中，本发明的化合物具有在式(ia’)和式(ib’)中指出的立体化学。
本发明的第二实施方案为由式(iia)或(iib)表示的化合物或者其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、酯或前药。
其中r1、r2、r3、r4、r7、r8、r9和m如之前所定义。
本发明的第三实施方案为由式(iii-a)或(iii-b)表示的化合物或者其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、酯或前药。
其中，r1、r2、r3、r7和m如之前所定义。
式(iii-a)和式(iii-b)的示例性结构可由但不限于式(iii-1～iii-18)表示，其中r1、r7和m如之前所定义：
本发明的第四实施方案是由式(iv-a)或(iv-b)表示的化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、酯或前药：
其中r1和m如之前所定义。
本发明的代表性化合物包括但不限于按照式(iv-a)的以下化合物，其中为表1中的每个化合物指出了r1和m。
表1
本发明的代表性化合物包括但不限于按照式(iv-b)的以下化合物，其中为表2中的每个实施例指出了r1和m。
表2
本发明的第五实施方案提供了由式(v-a)或(v-b)表示的化合物或者药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、酯或其前药。
其中r1和m如之前所定义。
本发明的代表性化合物包括但不限于按照式(v-a)的以下化合物，其中为表3中的每个化合物指出了r1和m。
表3
本发明的代表性化合物包括但不限于按照式(v-b)的以下化合物，其中为表4中的每个化合物指出了r1和m。
表4
本发明的第六实施方案提供了由式(vi-a)或(vi-b)表示的化合物或者药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、酯或其前药：
其中r1和m如之前所定义。
本发明的代表性化合物包括但不限于按照式(vi-a)的以下化合物，其中为表5中的每个化合物指出了r1和m。
表5
本发明的代表性化合物包括但不限于按照式(vi-b)的以下化合物，其中为表6中的每个化合物指出了r1和m。
表6
在某些实施方案中，本发明提供了防止或治疗fxr介导的疾病或病状的方法。该方法包括以治疗有效量的本发明化合物给药。本发明还提供本发明的化合物用于制备用于防止或治疗fxr介导的疾病或病状的药物的用途。
在某些实施方案中，该fxr介导的疾病或病状为心血管疾病、动脉粥样硬化、动脉硬化、高胆固醇血症、或高脂血症慢性肝病、胃肠疾病、肾脏疾病、代谢疾病、癌症(即结直肠癌)、或者神经适应症如中风。
在某些实施方案中，该慢性肝病为原发性胆汁性肝硬化(pbc)、脑腱黄瘤病(ctx)、原发性硬化性胆管炎(psc)、药物导致的胆汁淤积、妊娠肝内胆汁淤积、胃肠外营养相关性胆汁淤积(pnac)、细菌过度生长或败血症相关胆汁淤积、自身免疫性肝炎、慢性病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝移植相关移植物抗宿主病、活体供体肝移植再生、先天性肝纤维化、胆总管结石、肉芽肿性肝病、肝内或肝外恶性肿瘤、干燥综合征(sjogren’ssyndrome)、结节病(sarcoidosis)、威尔逊病(wilson’sdisease)、高雪氏病(gaucher’sdisease)、血色素沉着症、或α1-抗胰蛋白酶缺乏症。在某些实施方案中，该胃肠疾病为炎性肠病(ibd)(包括克罗恩病和溃疡性结肠炎)、肠易激综合征(ibs)、细菌过度生长、吸收不良、放射后结肠炎、或微观结肠炎。
在某些实施方案中，该肾脏疾病为糖尿病肾病、局灶性节段性肾小球硬化症(fsgs)、高血压肾硬化症、慢性肾小球肾炎、慢性移植性肾小球病、慢性间质性肾炎、或多囊肾病。
在某些实施方案中，该心血管疾病为动脉粥样硬化、动脉硬化、血脂异常、高胆固醇血症、或高甘油三酯血症。
在某些实施方案中，该代谢疾病为胰岛素抵抗、i型和ii型糖尿病、或肥胖症。
在又一实施方案中，本发明提供了本发明的化合物或药物组合物在制备用于治疗或防止个体中涉及调节tgr5受体的疾病的药物中的用途。本发明包括通过以本发明的化合物或药物组合物给药来在个体中治疗或防止涉及调节tgr5受体的疾病的方法。
在某些实施方案中，涉及tgr5受体调节的疾病选自代谢疾病、炎性疾病、肝脏疾病、自身免疫疾病、心脏疾病、肾脏疾病、癌症、以及胃肠疾病。
在一个方面，该疾病为选自过敏、骨关节炎、阑尾炎、支气管哮喘、胰腺炎、过敏性皮疹、以及牛皮癣的炎性疾病。本发明包括治疗或防止选自过敏、骨关节炎、阑尾炎、支气管哮喘、胰腺炎、过敏性皮疹、以及牛皮癣的炎性疾病的方法。
在一个方面，该疾病为选自类风湿性关节炎、多发性硬化、以及i型糖尿病的自身免疫性疾病。本发明包括治疗或防止选自类风湿性关节炎、多发性硬化、以及i型糖尿病的自身免疫性疾病的方法。
在一个方面，该疾病为选自炎性肠病(克罗恩病，溃疡性结肠炎)、短肠综合征(辐射后结肠炎)、微观结肠炎、肠易激综合征(吸收不良)、以及细菌过度生长的胃肠疾病。本发明包括治疗或防止选自炎性肠病(克罗恩病，溃疡性结肠炎)、短肠综合征(辐射后结肠炎)、微观结肠炎、肠易激综合征(吸收不良)、以及细菌过度生长的胃肠疾病的方法。
在一个方面，该疾病为选自糖尿病肾病、慢性肾衰竭、高血压肾硬化症、慢性肾小球肾炎、慢性移植性肾小球病、慢性间质性肾炎、以及多囊肾病的肾脏疾病。本发明包括治疗或防止选自糖尿病肾病、慢性肾衰竭、高血压肾硬化症、慢性肾小球肾炎、慢性移植性肾小球病、慢性间质性肾炎、以及多囊肾病的肾脏疾病的方法。
在一个方面，本发明提供了应用，其中该疾病为选自结直肠癌、肝癌、肝细胞癌、胆管癌、肾癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、以及胰岛瘤的癌症。本发明包括治疗或防止选自结直肠癌、肝癌、肝细胞癌、胆管癌、肾癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、以及胰岛瘤的癌症的方法。
在一个方面，所述化合物相对于tgr5激活剂为选择性fxr激动剂。
在一个方面，所述化合物相对于fxr激活剂为选择性tgr5激动剂。
在一个方面，所述化合物相对于fxr和tgr5二者为双重激动剂。
本发明的又一其他方面为采用本文描述的任意合成手段来制备本文描述的任意化合物的方法。
定义
以下列出的为用于描述本发明的各个术语的定义。这些定义适用于遍及本说明书和权利要求书中所使用的术语，除非在特定情况下单独地或作为较大组的一部分而另有限制。
用在本文时，术语“烷基”指饱和的单价直链或支链碳氢基团。优选烷基基团包括c1-c6烷基和c1-c8烷基基团。c1-c6烷基基团的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基基团；c1-c8烷基基团的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基、庚基和辛基基团。
用在本文时，术语“烯基”表示通过除去单个氢原子从碳氢部分衍生的单价基团，其中该碳氢部分具有至少一个碳-碳双键。优选烯基基团包括c2-c6烯基和c2-c8烯基基团。烯基基团包括但不限于例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-1-基、庚烯基、辛烯基等等。
用在本文时，术语“炔基”表示通过除去单个氢原子从碳氢部分衍生的单价基团，其中该碳氢部分具有至少一个碳-碳三键。优选炔基基团包括c2-c6炔基和c2-c8炔基基团。代表性炔基基团包括但不限于例如，乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基、庚炔基、辛炔基、等等。
术语“碳环”指含有0个杂原子环原子的饱和的(例如，“环烷基”)、部分饱和的(例如，“环烯基”或“环炔基”)或完全不饱和的(例如，“芳基”)环系统。“环原子”或“环成员”为结合一起形成一个或多个环的原子。当碳环基团在所描绘的化学结构中为连接两个其他元素(如式ia中的z)的二价部分时，该碳环基团可以通过任何两个可取代的环原子连接到该两个其他元素。c4-c6碳环具有4至6个环原子。
用在本文时，术语“环烷基”指通过除去单个氢原子而从单环或多环饱和碳环化合物衍生的单价基团。优选环烷基基团包括c3-c8环烷基和c3-c12环烷基基团。c3-c8-环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊基和环辛基；c3-c12-环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[2.2.1]庚基、以及双环[2.2.2]辛基。
用在本文时，术语“环烯基”表示通过除去单个氢原子而从具有至少一个碳-碳双键的单环或多环碳环化合物衍生的单价基团。优选环烯基基团包括c3-c8环烯基和c3-c12环烯基基团。c3-c8-环烯基的实例包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基等；c3-c12-环烯基的实例包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基等。
用在本文时，术语“芳基”指具有一个或两个芳香环的单环或双环碳环系统，包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基、茚满基、茚基等。
用在本文时，术语“芳基烷基”指连接至芳基环的c1-c3烷基或c1-c6烷基残基。实例包括但不限于苄基、苯乙基等。
用在本文时，术语“杂芳基”指具有5至10个环原子(其中至少一个环原子选自s、o和n)的单环、双环、或三环芳香基团或环；其中包含在环中的任何n或s可以任选地被氧化。优选杂芳基基团为单环或双环的。杂芳基基团包括但不限于吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、喹喔啉基等。
用在本文时，术语“杂芳基烷基”指连接至杂芳基环的c1-c3烷基或c1-c6烷基残基。实例包括但不限于吡啶基甲基、嘧啶基乙基等。
用在本文时，术语“被取代的”指以取代基独立替换其上的1个、2个、或3个或更多个氢原子，所述取代基包括但不限于氘、-f、-cl、-br、-i、-oh、被保护的羟基、-no2、-cn、-nh2、n3、被保护的氨基、烷氧基、硫代烷氧基、氧代、-卤代-c1-c12-烷基、-卤代-c2-c12-烯基、-卤代-c2-c12-炔基、-卤代-c3-c12-环烷基、-nh-c1-c12-烷基、-nh-c2-c12-烯基、-nh-c2-c12-炔基、-nh-c3-c12-环烷基、-nh-芳基、-nh-杂芳基、-nh-杂环烷基、-二烷基氨基、-二芳基氨基、-二杂芳基氨基、-o-c1-c12-烷基、-o-c2-c12-烯基、-o-c2-c12-炔基、-o-c3-c12-环烷基、-o-芳基、-o-杂芳基、-o-杂环烷基、-c(o)-c1-c12-烷基、-c(o)-c2-c12-烯基、-c(o)-c2-c12-炔基、-c(o)-c3-c12-环烷基、-c(o)-芳基、-c(o)-杂芳基、-c(o)-杂环烷基、-conh2、-conh-c1-c12-烷基、-conh-c2-c12-烯基、-conh-c2-c12-炔基、-conh-c3-c12-环烷基、-conh-芳基、-conh-杂芳基、-conh-杂环烷基、-oco2-c1-c12-烷基、-oco2-c2-c12-烯基、-oco2-c2-c12-炔基、-oco2-c3-c12-环烷基、-oco2-芳基、-oco2-杂芳基、-oco2-杂环烷基、-oconh2、-oconh-c1-c12-烷基、-oconh-c2-c12-烯基、-oconh-c2-c12-炔基、-oconh-c3-c12-环烷基、-oconh-芳基、-oconh-杂芳基、-oconh-杂环烷基、-nhc(o)-c1-c12-烷基、-nhc(o)-c2-c12-烯基、-nhc(o)-c2-c12-炔基、-nhc(o)-c3-c12-环烷基、-nhc(o)-芳基、-nhc(o)-杂芳基、-nhc(o)-杂环烷基、-nhco2-c1-c12-烷基、-nhco2-c2-c12-烯基、-nhco2-c2-c12-炔基、-nhco2-c3-c12-环烷基、-nhco2-芳基、-nhco2-杂芳基、-nhco2-杂环烷基、-nhc(o)nh2、-nhc(o)nh-c1-c12-烷基、-nhc(o)nh-c2-c12-烯基、-nhc(o)nh-c2-c12-炔基、-nhc(o)nh-c3-c12-环烷基、-nhc(o)nh-芳基、-nhc(o)nh-杂芳基、-nhc(o)nh-杂环烷基、nhc(s)nh2、-nhc(s)nh-c1-c12-烷基、-nhc(s)nh-c2-c12-烯基、-nhc(s)nh-c2-c12-炔基、-nhc(s)nh-c3-c12-环烷基、-nhc(s)nh-芳基、-nhc(s)nh-杂芳基、-nhc(s)nh-杂环烷基、-nhc(nh)nh2、-nhc(nh)nh-c1-c12-烷基、-nhc(nh)nh-c2-c12-烯基、-nhc(nh)nh-c2-c12-炔基、-nhc(nh)nh-c3-c12-环烷基、-nhc(nh)nh-芳基、-nhc(nh)nh-杂芳基、-nhc(nh)nh-杂环烷基、-nhc(nh)-c1-c12-烷基、-nhc(nh)-c2-c12-烯基、-nhc(nh)-c2-c12-炔基、-nhc(nh)-c3-c12-环烷基、-nhc(nh)-芳基、-nhc(nh)-杂芳基、-nhc(nh)-杂环烷基、-c(nh)nh-c1-c12-烷基、-c(nh)nh-c2-c12-烯基、-c(nh)nh-c2-c12-炔基、-c(nh)nh-c3-c12-环烷基、-c(nh)nh-芳基、-c(nh)nh-杂芳基、-c(nh)nh-杂环烷基、-s(o)-c1-c12-烷基、-s(o)-c2-c12-烯基、-s(o)-c2-c12-炔基、-s(o)-c3-c12-环烷基、-s(o)-芳基、-s(o)-杂芳基、-s(o)-杂环烷基-so2nh2、-so2nh-c1-c12-烷基、-so2nh-c2-c12-烯基、-so2nh-c2-c12-炔基、-so2nh-c3-c12-环烷基、-so2nh-芳基、-so2nh-杂芳基、-so2nh-杂环烷基、-nhso2-c1-c12-烷基、-nhso2-c2-c12-烯基、-nhso2-c2-c12-炔基、-nhso2-c3-c12-环烷基、-nhso2-芳基、-nhso2-杂芳基、-nhso2-杂环烷基、-ch2nh2、-ch2so2ch3、-芳基、-芳基烷基、-杂芳基、-杂芳基烷基、-杂环烷基、-c3-c12-环烷基、多烷氧基烷基、多烷氧基、-甲氧基甲氧基、-甲氧基乙氧基、-sh、-s-c1-c12-烷基、-s-c2-c12-烯基、-s-c2-c12-炔基、-s-c3-c12-环烷基、-s-芳基、-s-杂芳基、-s-杂环烷基、甲硫基甲基、或者–l’–r’、其中l’为c1-c6亚烷基、c2-c6亚烯基或c2-c6亚炔基、r’为芳基、杂芳基、杂环、c3-c12环烷基或c3-c12环烯基。应理解，芳基、杂芳基、烷基等可被进一步取代。在一些情况下，在被取代部分的每个取代基额外任选地被一个或多个基团取代，每个基团独立地选自-f、-cl、-br、-i、-oh、-no2、-cn、或-nh2。
根据本发明，本文描述的任何芳基、被取代的芳基、杂芳基和被取代的杂芳基可为任何芳族基团。芳族基团可为被取代的或未被取代的。
应当理解，本文描述的任何烷基、烯基、炔基、环烷基和环烯基部分还可为脂族基团、脂环基团或杂环基团。“脂族基团”为可以含有碳原子、氢原子、卤素原子、氧、氮、或其他原子的任何组合的非芳族部分，并且任选地含有一个或多个单位的不饱和例如双键和/或三键。脂族基团可以为直链的、支链的或环状的，优选含有约1至约24个碳原子，更典型地为约1至约12个碳原子。除了脂族碳氢基团之外，脂族基团包括例如多烷氧基烷基，例如聚乙二醇、聚胺，以及聚亚胺。这些脂族基团还可以进一步被取代。应当理解，脂族基团可以用于替换本文描述的烷基、烯基、炔基、亚烷基、亚烯基、以及亚炔基。
用在本文时，术语“脂环烃”指通过除去单个氢原子而从单环或多环饱和碳环化合物衍生的单价基团。实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[2.2.1]庚基、以及双环[2.2.2]辛基。这些脂环烃基团还可以进一步被取代。
术语“杂环烷基”和“杂环烃”可互换使用，指非芳香性3-、4-、5-、6-或7元环或双环或三环基团稠合系统，其中：(i)每个环含有独立地选自氧、硫和氮的1至3个杂原子，(ii)每个5元环具有0至1个双键并且每个6元环具有0至2个双键，(iii)氮和硫杂原子可以任选地被氧化，(iv)氮杂原子可以任选地被季铵化，(v)任何上述环可以稠合至苯环，以及(vi)剩余的环原子为碳原子，它们可以任选地被氧取代。代表性的杂环烷基基团包括但不限于[1,3]二氧戊环、吡咯烷基，吡唑啉基，吡唑烷基，咪唑啉基，咪唑烷基，哌啶基，哌嗪基，噁唑烷基，异噁唑烷基，吗啉基，噻唑烷基，异噻唑烷基，喹喔啉基，哒嗪酮基和四氢呋喃基。这些杂环基团可以进一步被取代以产生被取代的杂环烃。
在本发明的各个实施方案中，显而易见的是，被取代的或未被取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基烷基、杂芳基烷基、以及杂环烷基旨在为单价或二价的。因此，亚烷基，亚烯基、和亚炔基、亚环烷基、亚环烯基、亚环炔基、芳基亚烷基、杂芳基亚烷基和亚杂环烷基基团应包括在上述定义中，并且适用于以适当的价态提供本文的结构式。
用在本文时，术语“羟基活化基团”指不稳定的化学部分，在本领域中已知其活化羟基基团，使得在其诸如取代或消除反应的合成过程中离去。羟基活化基团的实例包括但不限于甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、三氟甲磺酸盐、对硝基苯甲酸盐、膦酸盐等。
用在本文时，术语“活化的羟基”指被如上所定义的羟基活化基团(例如，包括甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、三氟甲磺酸盐、对硝基苯甲酸盐、膦酸盐)活化的羟基基团。
用在本文时，术语“被保护的羟基”指被如上所定义的羟基保护基团(包括苯甲酰基、乙酰基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、甲氧基甲基基团)保护的羟基基团。
用在本文时，术语“羟基保护基团”指不稳定的化学部分，在本领域中已知其在合成过程中保护羟基基团免于不希望的反应。在所述合成过程后，如上文所描述的羟基保护基团可以被选择性地去除。本领域中已知的羟基保护基团在t.h.greene和p.g.m.wuts,protectivegroupsinorganicsynthesis,第3版,johnwiley&sons,newyork(1999)中有大体上的描述。羟基保护基团的实例包括苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧羰基、甲氧基羰基、叔丁氧基羰基、异丙氧基羰基、二苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、2-呋喃氧基羰基、烯丙氧基羰基、乙酰基、甲酰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、甲基、叔丁基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、苄基、对甲氧基苄基二苯基甲基、三苯基甲基(三苯甲基)、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲硫基甲基、苄氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三异丙基硅基等。优选用于本发明的羟基保护基团为乙酰基(ac或-c(o)ch3)、苯甲酰基(bz或-c(o)c6h5)、以及三甲基甲硅烷基(tms或-si(ch3)3)。
用在本文时，术语“卤代”和“卤素”指选自氟、氯、溴和碘的原子。
药学上可接受的盐还可通过以适当的碱让母体化合物去质子化来制备，从而形成母体化合物的阴离子共轭碱。在这些盐中抗衡离子为阳离子。适当的阳离子包括铵和金属阳离子，例如碱金属阳离子，包括li+、na+、k+和cs+，以及碱土金属阳离子，例如mg2+和ca2+。
本文描述的化合物含有一个或多个不对称中心，因此产生对映异构体、非对映异构体、以及其他立体异构体形式，它们可以按照绝对立体化学来定义，如(r)-或(s)-，或者如用于氨基酸的(d)-或(l)-。本发明旨在包括所有这些可能的异构体，以及它们的外消旋和光学纯形式。光学异构体可以通过上述过程、或者通过拆分外消旋混合物从它们各自的光学活性前体制备。该差分可在拆分剂存在下通过色谱或者通过重复结晶或通过这些技术的某种结合来进行，这些对本领域技术人员是已知的。关于拆分的其他细节可在jacques等,enantiomers,racemates,andresolutions(johnwiley&sons,1981)中找到。当本文描述的化合物含有烯属双键或其他几何不对称中心时，除非另有指明，所述化合物旨在包括e和z几何异构体。同样地，所有的互变异构体也应包括在内。本文中出现的任何碳-碳双键的构型是仅出于方便而选择的，并非意在指定特定构型，除非上下文是这样说明的；因此本文随意描绘为反式的碳-碳双键可以为顺式、反式、或者两者以任意比例的混合物。
用在本文时术语“受试者”指哺乳动物。因此受试者例如指狗、猫、马、牛、猪、豚鼠等。优选受试者为人。当受试者为人时，该受试者在本文可以指患者。
用在本文时，术语“药学上可接受的盐”指通过本发明的方法形成的化合物的那些盐，其在合理的医学判断的范围内，适合用于与人类和低等动物的组织接触，没有不适当的毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理的利益/风险比相称。药学上可接受的盐在本领域是公知的。
berge等在j.pharmaceuticalsciences,66:1-19(1977).中详细描述了药学上可接受的盐。所述盐可以在本发明化合物最后的分离和纯化期间就地(insitu)制备，或者通过让游离碱官能团与适当的有机酸反应分开制备。药学上可接受的盐的实例包括但不限于无毒酸加成盐，例如与无机酸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸或与有机酸如乙酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸，或者通过使用本领域中采用的其他方法如离子交换形成的氨基的盐。其他药学上可接受的盐包括但不限于己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。其他药学上可接受的盐包括在适当时使用抗衡离子如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、具有1至6个碳原子的烷基、磺酸盐和芳基磺酸盐形成的无毒的铵、季铵和胺阳离子。
用在本文时，术语“氨基保护基团”指不稳定的化学部分，在本领域中已知其在合成过程中保护氨基基团免于不希望的反应。在所述合成过程后，如上文所描述的氨基保护基团可以被选择性地去除。本领域中已知的氨基保护基团在t.h.greene和p.g.m.wuts,protectivegroupsinorganicsynthesis,第3版,johnwiley&sons,newyork(1999)中有大体上的描述。氨基保护基团的实例包括但不限于叔丁氧基羰基、9-芴甲氧羰基、苄氧羰基等。
用在本文时，术语“药学上可接受的酯”指通过本发明的方法形成的化合物的酯，其在体内水解，并且包括在人体内容易分解以便离开母体化合物或其盐的那些酯。适合的酯基团包括例如衍生自药学上可接受的脂族羧酸，特别是烷酸、烯酸、环烷酸和烷基二酸的那些，其中每个烷基或烯基部分有利地具有不超过6个碳原子。具体酯的实例包括但不限于甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和乙基琥珀酸酯。
用在本文时，术语“药学上可接受的前药”指通过本发明的方法形成的化合物的那些前药，其在合理的医学判断的范围内，适合用于与人类和低等动物的组织接触，没有不适当的毒性、刺激、过敏反应等，与合理的利益/风险比相称，以及对于它们的预期用途有效，并且还指本发明化合物的两性离子形式，如果可能的话。用在本文时，“前药”指这样的化合物，其可在体内通过代谢手段(例如，通过水解)转化以提供本发明的结构式表示的任何化合物。各种形式的前药在本领域中是已知的，例如，如在bundgaard,(编辑),designofprodrugs,elsevier(1985)；widder等(编辑),methodsinenzymology,第4卷,academicpress(1985)；krogsgaard-larsen等,(编辑)."designandapplicationofprodrugs,textbookofdrugdesignanddevelopment,第5章,113-191(1991)；bundgaard等,journalofdrugdeliverreviews,8:1-38(1992)；bundgaard,j.ofpharmaceuticalsciences,77:285etseq.(1988)；higuchi和stella(编辑)prodrugsasnoveldrugdeliverysystems,americanchemicalsociety(1975)；以及bernardtesta&joachimmayer,“hydrolysisindrugandprodrugmetabolism:chemistry,biochemistryandenzymology,”johnwileyandsons,ltd.(2002)中所讨论的。
用在本文时，术语“治疗”意味着缓解、减轻、减少、消除、调节或改善，即导致疾病状态或病状消退。治疗还可包括抑制，即阻止现有疾病状态或病状的发展、缓解或改善，即引起现有疾病状态或病状的消退，例如当疾病状态或病状可能已经存在时。
用在本文时，术语“防止”指完全或几乎完全停止疾病状态或病状发生在患者或受试者中，特别是当患者或受试者易于患有或有风险获得这种疾病状态或病状。
另外，本发明的化合物，例如所述化合物的盐，可以以水合的或非水合的(无水的)形式存在，或者作为与其他溶剂分子的溶剂化物存在。水合物的非限制性实例包括一水合物、二水合物等。溶剂化物的非限制性实例包括乙醇溶剂化物、丙酮溶剂化物等。
“溶剂化物”指含有化学计量的或非化学计量量的溶剂的溶剂加成形式。一些化合物倾向于在结晶固态中捕获固定摩尔比的溶剂分子，从而形成溶剂化物。如果该溶剂为水，则所形成的溶剂化物为水合物，当该溶剂为醇时，所形成的溶剂化物为醇化物。通过一个或多个分子的水与底物之一的组合形成水合物，其中水保持其作为h2o的分子状态，这种组合能够形成一种或多种水合物。
用在本文时，术语“类似物”是指在结构上类似于另一种但在组成上略有不同的化学化合物(如用不同元素的原子替换一个原子或在特定官能团存在下，或由另一官能团替代一个官能团)。因此，类似物为这样的化合物，其在功能和外观上与参照化合物类似或者有可比性。
用在本文时，术语“非质子溶剂”指对质子活性为相对惰性的，即不作为质子供体。实例包括但不限于碳氢化合物，例如己烷和甲苯，卤代碳氢化合物，例如二氯甲烷、氯乙烯、氯仿等，杂环化合物，例如四氢呋喃和n-甲基吡咯烷酮，以及醚类，例如二甲醚、双甲氧基甲基醚。这些溶剂对本领域技术人员是公知的，对于特定化合物和反应条件，各种溶剂或其混合物可以是优选的，这取决于诸如溶剂溶解性、试剂反应性以及优选的温度范围等的因素。对非质子溶剂的其他讨论可以在有机化学教科书或者在专门的专著中找到，例如：organicsolventsphysicalpropertiesandmethodsofpurification,第四版,johna.riddick等编辑，第二卷，于techniquesofchemistryseries,johnwiley&sons,ny,1986中。
用在本文时，术语“给质子有机溶剂”或“质子溶剂”指倾向于提供质子的溶剂，例如醇，例如甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇等。这些溶剂对本领域技术人员是公知的，对于特定化合物和反应条件，各种溶剂或其混合物可以是优选的，这取决于诸如溶剂溶解性、试剂反应性以及优选的温度范围等的因素。对给质子溶剂的其他讨论可以在有机化学教科书或者在专门的专著中找到，例如：organicsolventsphysicalpropertiesandmethodsofpurification,第四版,johna.riddick等编辑，第二卷，于techniquesofchemistryseries,johnwiley&sons,ny,1986中。
本发明预想的取代基和变量的组合仅为导致形成稳定化合物的那些。用在本文时，术语“稳定”指这样的化合物，其具有足以允许生产的稳定性，并且其在足够的时间期间保持完整性以致可用于本文详述的目的(例如，向受试者治疗性或预防性给药)。
所合成的化合物可从反应混合物分离，并进一步通过诸如柱色谱、高压液相色谱、或重结晶的方法纯化。另外，各个合成步骤可以按替代性顺序或次序进行，以得到所希望的化合物。此外，本文描述的溶剂、温度、反应条件等仅是出于阐述目的，反应条件的改动可产生期望的本发明的桥接大环产物。可用于合成本文描述的化合物的合成化学转化和保护基团方法(保护和脱保护)例如包括如以下文献中所描述的那些：r.larock，comprehensiveorganictransformations,vch出版社(1989)；t.w.greene和p.g.m.wuts，protectivegroupsinorganicsynthesis，第2版，johnwiley和sons(1991)；l.fieser和m.fieser，fieserandfieser'sreagentsfororganicsynthesis，johnwiley和sons(1994)；以及l.paquette编，encyclopediaofreagentsfororganicsynthesis，johnwileyandsons(1995)。
本发明的化合物可以通过本文描述的合成手段附加各种官能团进行修饰，来增强选择性生物学性能。这些修饰包括增加进入给定的生物系统(例如，血液、淋巴系统、中枢神经系统)的生物渗透性、增加口服生物利用度、增加溶解度以允许通过注射给药、改变代谢以及改变排泄速率的那些。
药物组合物
本发明的药物组合物包括与一种或多种药学上可接受的载体一起配制的治疗有效量的本发明化合物。用在本文时，术语“药学上可接受的载体”指任何类型的无毒、惰性固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封材料或配制助剂。可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例为糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油类，如花生油、棉籽油；红花油；芝麻油；橄榄油；玉米油和大豆油；二醇类；如丙二醇；酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏(ringer’s)溶液；乙醇，和磷酸盐缓冲溶液，以及其他无毒相容性润滑剂，如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂，防腐剂和抗氧化剂也可以根据制剂师的判断而存在于组合物中。本发明的药物组合物可以口服、经直肠、胃肠外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过粉剂、软膏剂或滴剂)、口腔或作为口服或鼻用喷雾剂而施用给人或其他动物。
本发明的药物组合物可以通过口服、胃肠外、通过吸入喷雾剂、局部、经直肠、经鼻、口腔、阴道或经由植入的储库给药，优选通过口服施用或通过注射施用。本发明的药物组合物可以含有任何常规的药学上可接受的无毒载体、辅药或介质。在一些情况下，制剂的ph值可以用药学上可接受的酸、碱或缓冲剂来调节，以便增强所配制的化合物或其递送形式的稳定性。用在本文的术语胃肠外包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内和颅内注射或输注技术。
用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型还可以含有本领域中常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉籽、花生、玉米、胚芽、橄榄、蓖麻和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨聚糖脂肪酸酯，及其混合物。除了惰性稀释剂之外，口服组合物还可以包括辅药，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
可以根据已知技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制可注射制备物，例如无菌可注射水性或油性混悬剂。无菌可注射制备物还可以是胃肠外可接受的无毒稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、混悬剂或乳剂，例如作为1,3-丁二醇中的溶液。在可以采用的可接受介质和溶剂中有水、林格氏溶液、u.s.p.以及等渗氯化钠溶液。此外，传统上将无菌不挥发油类用作溶剂或混悬媒介。为此目的，可采用任何温和的不挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，将诸如油酸的脂肪酸用在可注射剂的制备中。
可注射制剂可以例如通过细菌保留过滤器过滤灭菌，或通过将可在使用前溶解或分散在无菌水或其他无菌可注射媒介中的无菌固体组合物形式的灭菌剂掺入来灭菌。
为了延长药物的效果，通常需要减慢来自皮下或肌内注射的药物的吸收。这可以通过使用具有不良水溶性的结晶或无定形材料的液体混悬剂来实现。于是，药物的吸收速率取决于其溶解速率，这又可能取决于晶体尺寸和晶型。作为选择，对胃肠外施用的药物形式的延迟吸收是通过将药物溶解或混悬在油介质中来实现。可注射储库(depot)形式是通过在诸如聚交酯-聚乙交酯的可生物降解聚合物中形成药物的微胶囊基质来制备。取决于药物与聚合物的比例和所采用的特定聚合物的特性，可以控制药物释放的速率。其他可生物降解聚合物的实例包括聚原酸酯和聚酸酐。储库可注射制剂还可以通过将药物捕集在与身体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备。
用于直肠或阴道施用的组合物优选栓剂，其可以通过将本发明的化合物与适合的非刺激性赋形剂或载体(如椰子油、聚乙二醇或栓剂蜡)混合来制备，这些赋形剂或载体在环境温度下为固体但在体温下为液体，因此在直肠或阴道腔中熔化并释放活性化合物。
用于口服施用的固体剂型包括胶囊剂、片剂、小丸、粉剂、以及颗粒剂。在这些固体剂型中，让活性化合物与以下物质混合：至少一种药学上可接受的惰性赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或：a)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、以及硅酸；b)粘合剂，如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；c)保湿剂，如甘油；d)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂，如石蜡；f)吸收促进剂，如季铵化合物；g)润湿剂，例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸附剂，如高岭土和膨润土吸收剂以及i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠，及其混合物。对于胶囊剂、片剂和小丸的情况，剂型还可以包括缓冲剂。
相似类型的固体组合物也可以在软和硬填充的明胶胶囊中用作填充剂，其使用诸如乳糖(lactose)或乳糖(milksugar)的赋形剂以及高分子量聚乙二醇类等。
活性化合物也可以呈含一种或多种上述赋形剂的微胶囊形式。片剂、糖衣丸、胶囊剂、小丸以及颗粒剂的固体剂型可以被制备成具有包衣或外壳，如肠溶衣、释放控制包衣以及药物配制领域中众所周知的其他包衣。在这些固体剂型中，活性化合物可以与诸如蔗糖、乳糖或淀粉的至少一种惰性稀释剂混合。如通常做法，这样的剂型还可以包括除惰性稀释剂以外的其他物质，例如压片润滑剂和其他压片助剂如硬脂酸镁和微晶纤维素。对于胶囊、片剂和小丸的情况，剂型还可以包括缓冲剂。它们可以任选地含有乳浊剂，并且还可以是这样的组合物，即它们仅在或优先在肠道的某些部分任选地以延迟方式释放活性成分。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物和蜡。
用于本发明化合物的局部或透皮施用的剂型包括软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、溶液剂、喷雾剂、吸入剂或贴剂。活性化合物与药学上可接受的载体和可能需要的任何所需防腐剂或缓冲剂在无菌条件下混合。眼用制剂、耳滴剂、眼软膏剂、粉剂和溶液剂也被认为在本发明的范围内。
除了本发明的活性化合物之外，软膏剂、糊剂、乳膏剂和凝胶剂还可以含有赋形剂，如动物和植物脂肪、油类、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅树脂、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌或者它们的混合物。
除了本发明的活性化合物之外，粉剂和喷雾剂还可以含有赋形剂，如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末，或者这些物质的混合物。喷雾剂可以另外含有通常的推进剂，如氟氯烃类。
透皮贴剂具有向身体提供化合物的控制递送的附加优点。可以通过在适当媒介中溶解或分散该化合物来制备这些剂型。还可以将吸收增强剂用于增强化合物的跨皮肤流动。可以通过提供速率控制膜或通过将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制该速率。
除非另有说明，否则用在本文中的所有技术和科学术语都与本领域普通技术人员通常已知的含义一致。本文提到的所有出版物、专利、已公开的专利申请以及其他的参考文献都以全文引用的方式并入在此。
缩写
用在随后的对设计方案和实例的描述中的缩写如下：
acn用于乙腈；
bme用于2-巯基乙醇；
bop用于苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐；
bzcl用于苯甲酰氯；
cdi用于羰基二咪唑；
cod用于环辛二烯；
dabco用于1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷
dast用于二乙基氨基三氟化硫；
dabcyl用于6-(n-4'-羧基-4-(二甲基氨基)偶氮苯)-氨基己基-1-o-(2-氰乙基)-(n,n-二异丙基)-亚磷酰胺；
dbu用于1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯；
dcc用于n,n'-二环己基碳二亚胺；
dcm用于二氯甲烷；
diad用于偶氮二甲酸二异丙酯；
dibal-h用于二异丁基氢化铝；
dipea用于二异丙基乙胺；
dmap用于n,n-二甲基氨基吡啶；
dme用于乙二醇二甲醚；
dmem用于dulbecco改良的eagles培养基；
dmf用于n,n-二甲基甲酰胺；
dmso用于二甲亚砜；
dsc用于n,n'-二琥珀酰亚胺基碳酸酯；
duphos用于
edans用于5-(2-氨基-乙基氨基)-萘-1-磺酸；
edci或edc用于1-(3-二乙基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；
etoac用于乙酸乙酯；
etoh用于乙醇；
hatu用于o(7-偶氮苯并三氮唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯；
hcl用于盐酸；
hoveyda’scat.用于二氯(邻异丙氧基苯基亚甲基)(三环己基膦)钌(ii)；
in用于铟；
khmds为双(三甲基甲硅烷基)氨基钾；
ms用于甲磺酰基；
nmm用于n-4-甲基吗啉；
nmi用于n-甲基咪唑；
nmo用于n-4-甲基吗啉-n-氧化物；
pybrop用于三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐；
ph用于苯基；
rcm用于关环复分解反应；
rt用于逆转录；
rt-pcr用于逆转录聚合酶链式反应；
tbme用于叔丁基甲基醚；
tea用于三乙胺；
tf2o用于三氟甲磺酸酐；
tfa用于三氟乙酸；
thf用于四氢呋喃；
tlc用于薄层色谱；
(tms)2nh用于六甲基二硅烷；
tmsotf用于三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯；
tbs用于叔丁基二甲基甲硅烷基；
tms用于三甲基甲硅烷基；
tpap用于四丙基过钌酸铵；
tpp或pph3用于三苯基膦；
trcl用于三苯甲基氯；
dmtrcl用于4,4'-二甲氧基三苯甲基氯；
tboc或boc用于叔丁氧基羰基；
xantphos用于4,5-双-二苯基膦基-9,9-二甲基-9h-呫吨；以及zhan1b用于
合成方法
结合以下的阐释可以制备本发明化合物的方法的合成方案，本发明的化合物和方法将可得到更好地理解，它们仅作为说明而无意限制本发明的范围。对所公开的实施方案的各种改动和修饰对于本领域技术人员而言将是显而易见的，并且包括但不限于与本发明的化学结构、取代基、衍生物和/或方法相关的那些改动和修饰可以在不脱离本发明的精神和所附权利要求书的范围情况下进行。
如方案1中所显示的，从式(1-1)化合物制备式(1-3)化合物的新胆汁酸类似物，其中r2、m、ra和r7如之前所定义。因此，采用适当的偶联条件将式(1-1)化合物与式(1-2)的羟胺化合物偶联，产生式(1-3)的化合物。偶联试剂可选自但不限于dcc、edc、cdi、二异丙基碳二亚胺、bop-cl、pybop、pyaop、tffh和hatu。适合的碱包括但不限于三乙胺、二异丙基乙胺、dbu、n-甲基吗啉和dmap。该偶联反应在诸如但不限于ch2cl2、dmf或thf的非质子溶剂中进行。反应温度可从0℃变化至约50℃。
方案1
方案2阐释了从式(1-1)的化合物制备式(2-4)的化合物，其中r2、m、r9、ra和r7如之前所定义。因此，采用适当的偶联条件将式(1-1)的化合物与式(2-1)的氨基酯化合物偶联，产生式(2-2)的化合物。偶联试剂可选自但不限于dcc、edc、cdi、二异丙基碳二亚胺、bop-cl、pybop、pyaop、tffh和hatu。适合的碱包括但不限于三乙胺、二异丙基乙胺、dbu、n-甲基吗啉和dmap。该偶联反应在诸如但不限于ch2cl2、dmf或thf的非质子溶剂中进行。反应温度可从0℃变化至约50℃。然后，式(2-2)的化合物的甲酯的水解产生式(2-3)的化合物。用于水解的试剂可以是但不限于lioh、naoh和koh。溶剂可以是但不限于thf、meoh、etoh、二噁烷、水或以上的混合物。反应温度可从0℃变化至约80℃。式(2-3)的化合物与式(1-2)的化合物的进一步偶联得到式(2-4)的化合物。
方案2
方案3阐释了从式(1-1)的化合物制备式(3-2)的化合物，其中r2、m和r7如之前所定义。因此，采用适当的偶联条件将式(1-1)的化合物与式(3-1)的氨基腈化合物偶联，产生式(3-2)的化合物。偶联试剂可选自但不限于dcc、edc、cdi、二异丙基碳二亚胺、bop-cl、pybop、pyaop、tffh和hatu。适合的碱包括但不限于三乙胺、二异丙基乙胺、dbu、n-甲基吗啉和dmap。该偶联反应在诸如但不限于ch2cl2、dmf或thf的非质子溶剂中进行。反应温度可从0℃变化至约50℃。
方案3
如方案4中所示的，从式(1-1)的化合物制备式(4-5)的化合物的新胆汁酸类似物，其中r2、m和r7如之前所定义。采用适当的偶联条件将式(1-1)的化合物与氨偶联，产生式(4-2)的化合物。氨源可选自但不限于碳酸铵、氢氧化铵和碳酸氢铵。偶联试剂可选自但不限于dcc、edc、cdi、二异丙基碳二亚胺、bop-cl、pybop、pyaop、tffh和hatu。适合的碱包括但不限于三乙胺、二异丙基乙胺、dbu、n-甲基吗啉和dmap。该偶联反应在诸如但不限于ch2cl2、dmf或thf的非质子溶剂中进行。反应温度可从0℃变化至约50℃。用脱水条件处理式(4-2)的化合物，产生式(4-3)的化合物。试剂可选自但不限于socl2、p2o5、三聚氰氯和伯吉斯(burgess)试剂。该脱水反应在诸如但不限于ch2cl2、dmf或thf的非质子溶剂中进行。反应温度可从0℃变化至约100℃。
用羟胺处理式(4-3)的化合物，产生式(4-4)的化合物。试剂也可以是具有有机或无机碱的羟胺盐。方案4
适合的碱包括但不限于lioh、naoh、koh、三乙胺、二异丙基乙胺、dbu、n-甲基吗啉和dmap。该脱水反应在诸如但不限于meoh、etoh、ipr-oh、h2o、ch2cl2、dmf、dmso或thf的溶剂中进行。反应温度可从0℃变化至约100℃。
用光气或光气替代品和碱处理式(4-4)的化合物，产生式(4-5)的化合物。试剂可选自但不限于光气、双光气、三光气、羰基二咪唑和二琥珀酰亚胺基碳酸酯。适合的碱包括但不限于三乙胺、二异丙基乙胺、dbu、n-甲基吗啉和dmap。该反应在诸如但不限于ch2cl2、dmf、dmso或thf的非质子溶剂中进行。反应温度可从0℃变化至约100℃。
如方案5中所示的，从式(4-4)的化合物制备式(5-2)的化合物的新胆汁酸类似物，其中r2、m和r7如之前所定义。用硫光气或硫光气替代品和碱处理式(4-4)的化合物，产生式(5-2)的化合物。试剂可选自但不限于硫光气和二(1h-咪唑-1-基)甲硫酮。适合的碱包括但不限于三乙胺、二异丙基乙胺、dbu、n-甲基吗啉和dmap。该反应在诸如但不限于ch2cl2、dmf、dmso或thf的非质子溶剂中进行。反应温度可从0℃变化至约100℃。
方案5
如方案6中所示的，从式(5-2)的化合物制备式(6-2)的化合物的新胆汁酸类似物，其中r2、m和r7如之前所定义。在酸性条件下重排式(5-2)的化合物，产生式(6-2)的化合物。酸可选自但不限于bf3·oet2、tmsotf、yb(otf)3、sc(otf)3、h2so4、hcl、hbr和hclo4。该重排反应在诸如但不限于ch2cl2、dmf、dmso或thf的溶剂中进行。反应温度可从0℃变化至约100℃。
方案6
如方案7中所显示的，从式(7-1)的化合物制备式(7-7)化合物的新胆汁酸类似物，其中r7、r2、ra和m如之前所定义，p1和p2为羟基保护基团。因此，以p1和p2基团保护式(7-1)的化合物的两个羟基基团。p1和p2可相同或不同。p1和p2可为任何羟基保护基团，例如但不限于ac、bz、氯乙酰基、tes、tbs、mom和bn。对保护羟基基团的方法、试剂和条件的更详细讨论在文献中有描述，例如由t.w.greene和p.g.m.wuts在“protectivegroupsinorganicsynthesis”第三版,johnwiley&son,inc.,1999中描述的。
方案7
然后，使用合适的还原试剂将式(7-2)的羟基保护的化合物还原成伯醇化合物(7-3)，所述还原试剂可选自但不限于dibal-h、nabh4、libh4和lialh4。使用合适的碱与酰化试剂或使用合适的卤化条件将式(7-3)的醇化合物转化成式(7-4)的化合物，其中x为离去基团，诸如oms、ots、otf或卤素(cl、br、i)，所述碱包括但不限于三乙胺、二异丙基乙胺、dbu、n-甲基吗啉和dmap，所述酰化试剂诸如为mscl、ms2o、tscl和tf2o，所述卤化条件可选自但不限于ph3p/cbr4、ph3p/i2和ph3p/br2。在升高温度下用式(7-5)的亚磷酸三酯(trialkylphosphite)处理化合物(7-4)得到式(7-6)的磷酸酯化合物。式(7-6)的磷酸酯化合物中的ra基团可在酸性条件(tmsbr/dcm)下移除或在碱性条件(naoh/meoh)下部分移除。式(7-6)的化合物的p1和p2的羟基保护基团的脱保护得到式(7-7)的化合物。更有效地，ra基团和羟基保护基团p1/p2可在相同的时间在合适的条件下移除。对羟基保护基团脱保护的方法、试剂和条件的更详细讨论在文献中有描述，例如由t.w.greene和p.g.m.wuts在“protectivegroupsinorganicsynthesis”第三版,johnwiley&son,inc.,1999中描述的。
方案8阐释了制备胆汁酸的一些其他羧酸电子等排物，诸如式(10-1)的化合物、式(10-2)的化合物和式(10-3)的化合物。r7、r2和m如之前所定义。
方案8
实施例
结合以下的实施例，本发明的化合物和方法将可得到更好地理解，它们仅作为说明而无意限制本发明的范围。对所公开的实施方案的各种改动和修饰对于本领域技术人员而言将是显而易见的，并且包括但不限于与本发明的化学结构、取代基、衍生物、制剂和/或方法相关的那些改动和修饰可以在不脱离本发明的精神和所附权利要求书的范围情况下进行。
实施例1：
首先将胆汁酸类似物(1-1,0.3mmol)、hatu(0.3mmol)和dipea(2.4mmol)溶解在dmf(5ml)中。将溶液在室温下搅拌10min，然后添加甲基羟胺。将所得的混合物在室温下搅拌2h(通过tlc和lc/ms监测)，然后用盐水和1nhcl淬灭,再用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱用己烷/丙酮(100/0至60/40，10min)纯化，以79％的产率得到实施例1的化合物。
实施例2至4采用与示例制备中相同的操作来制备。ms数据在表7中指出。
表7
实施例5：
将胆汁酸类似物(6-ecdca,0.15mmol)溶解在dcm(2ml)/dmf(0.5ml)中。向溶液中按顺序添加dmap(0.3mmol)、edci(0.3mmol)和氨腈(0.45mmol)。将混合物在室温下搅拌2h(反应通过tlc和lc/ms监测)。将混合物用盐水淬灭,再用乙酸乙酯(2×)萃取。将合并的有机层用1nhcl和饱和nacl洗涤，在na2so4上干燥，并浓缩。将残余物通过硅胶色谱用己烷/丙酮(100/0至50/50，10min)纯化，得到实施例5的化合物。
实施例6
步骤6-1：
将式(6-1)的试6-ecdca甲酯化合物(j.med.chem.2014,57,937-954)(0.23mmol,100mg)溶解在dcm(2ml)中并冷却到0℃。向0℃下的溶液添加dipea(0.69mmol,89mg)和氯甲基甲酯(0.5mmol,40mg)。将所得的溶液在0℃至室温下搅拌，直到tlc指示反应完成。将反应通过饱和nahco3淬灭并用dcm萃取。将合并的有机层用1mhcl洗涤，在na2so4上干燥，并真空浓缩。通过sio2色谱纯化残余物得到式(6-2)的化合物。
步骤6-2：
将式(6-2)的酯化合物(100mg,0.19mmol)溶解在thf(2ml)中。向0℃下的溶液添加无水meoh(0.29mmol)和libh4溶液(2m于thf中，0.15ml，0.3mmol)。将混合物在0℃下搅拌8h，或直到tlc指示反应完成。将反应用1mnaoh淬灭，升至室温，并用etoac萃取。将合并的有机层用水洗涤，在na2so4上干燥，并真空浓缩。通过sio2色谱纯化残余物得到式(6-3)的化合物。
步骤6-3
将式(6-3)的醇化合物(100mg,0.20mmol)溶解在dcm(2ml)中。向0℃下的溶液添加三苯基膦(0.20mmol,52mg)和四溴甲烷(0.20mmol,66mg)。将所得的混合物在0℃下搅拌40min，然后真空浓缩。通过sio2色谱纯化残余物得到式(6-4)的化合物。
步骤6-4：
将式(6-4)的溴化物化合物(100mg,0.18mmol)溶解在亚磷酸三甲酯(0.5ml)中。将混合物在130℃加热4h并冷却到室温。通过c18色谱纯化残余物得到式(6-5)的化合物。
步骤6-5：
将式(6-5)的磷酸酯化合物(100mg,0.17mmol)溶解在1mnaoh的meoh溶液(1.7ml)中。将混合物在室温下搅拌14h。真空移除meoh，然后将残余物溶解在hcl/二噁烷溶液(4m,2ml)中。将所得的混合物在室温下搅拌2h，或直到lc/ms指示反应完成。移除溶剂并通过c18色谱纯化残余物得到实施例6。
实施例8：
步骤8-1：
在0℃和n2下将memcl(3.7ml,30mmol)加到(8-1)(4.35g,10mmol)(j.med.chem.2014,57,937-954)和dipea(10.3ml,60mmol)在dcm(100ml)中的搅拌溶液中。使所得的反应混合物升至室温并搅拌过夜，然后用水(50ml)和1nhcl(50ml)淬灭。将有机层在无水硫酸钠上干燥、过滤并浓缩，得到6.5g粗产物(8-2)，其直接用于下一步。lc-ms观测的2m+nh4＝1062.83(计算值1062.81)。
步骤8-2：
首先将上述粗产物(8-2)(4.18g,8.0mmol)在0℃和n2下溶解在thf(30ml)中，添加无水meoh(1.28ml,32mmol)，然后缓慢添加libh4(697mg,32mmol)。将混合物在0℃下搅拌6h，tlc和lc-ms分析表明原料部分转化，然后添加更多的libh4(348mg,16mmol)。使混合物升至室温并搅拌过夜，用1mnaoh水溶液(20ml)淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱用己烷/丙酮(100/0至60/40，10min)纯化，得到呈白色泡沫的醇产物(8-3)(3.2g，基于86％的转化率，产率为94％)。lc-ms观测的2m+nh4＝1006.83(计算值1006.83)。
步骤8-3：
向室温和n2下(8-3)(870mg,1.76mmol)在thf(10ml)中的搅拌溶液添加2-硝基苯基硒氰酸酯(800mg,3.52mmol)，然后添加pbu3(0.87ml,3.52mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h，然后浓缩。将残余物通过硅胶色谱用己烷/etoac(100/0至60/40，10min)纯化，得到呈黄色油的产物(8-4)(1.14g，产率95％)。
步骤8-4：
向室温下(8-4)(1.14g,1.68mmol)在thf(20ml)中的搅拌溶液缓慢添加h2o2(30％于h2o中，3.8ml，33.6mmol)。使反应混合物升至室温并搅拌20h，用h2o/盐水(1/1)淬灭，并用etoac萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并浓缩。将dcm加到残余物中，并将固体通过过滤而移除且用dcm洗涤。浓缩滤液。将残余物通过硅胶色谱用己烷/etoac(100/0至70/30，10min)纯化，得到呈浅黄色油的产物(8-5)(701mg，产率87％)。
步骤8-5：
将室温下(8-5)(28mg,0.06mmol)在thf(2ml)中的溶液用hcl(37％,0.1ml)处理。将反应混合物在室温下搅拌2h，用饱和nahco3淬灭，并用etoac萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱用己烷/etoac(100/0至60/40，10min)纯化，得到呈白色泡沫的产物(8-6)(20mg，产率87％)。lc-ms观测的2m+1＝777.68(计算值777.66)。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ5.77(1h,m),4.90(2h,d,j＝11.5hz),3.71(1h,s),3.40(1h,brs),0.90(6h,brs),0.67(3h,s)。
步骤8-6：
将室温下(8-6)(58mg,0.15mmol)和2,6-二氟-4-碘苯酚(58mg,0.23mmol)在dmf(1.5ml)中溶液用n2脱气10min，添加et3n(43μl)和pd(oac)2(4mg)，再脱气10min。将反应混合物加热到80℃并搅拌过夜，冷却到室温，用3％柠檬酸和盐水(1/1)淬灭，并用etoac萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱用己烷/etoac(100/0至50/50，10min)纯化，得到呈白色固体的实施例8(64mg，产率83％)。lc-ms观测的m+hco2h-1＝561.34(计算值561.37)。
实施例9：
首先将pd/c(10％,10mg)加到实施例8(38mg,0.07mmol)在meoh/etoac(1/1,2ml)中的溶液中。首先将混合物用n2脱气15min，然后在h2下搅拌16h，通过硅藻土过滤，然后将固体用meoh和etoac洗涤。浓缩滤液并干燥，得到呈白色固体的实施例9(35mg，产率92％)。lc-ms观测的m-1＝517.35(计算值517.36)。
实施例10：
步骤10-1：
向6α-乙基鹅去氧胆酸(6.5g,15.5mmol)在meoh(130ml)中的溶液添加硫酸(98％,0.13ml)。将溶液在23℃下搅拌24h，并真空浓缩。使用0–30％的丙酮/己烷在硅胶(105g)上纯化残余物，得到化合物10-1(6.6g，产率98％)。
步骤10-2：
向化合物10-1(6.39g,14.7mmol)在dmf(30ml)中的溶液添加咪唑(2.20g,32.3mmol)和tbscl(2.33g,15.5mmol)。将混合物在23℃下搅拌20h，用ph7缓冲液淬灭，并用mtbe萃取。将有机层用饱和nacl溶液洗涤，在na2so4上干燥，并真空浓缩。使用0–50％的etoac/己烷在硅胶(105g)上纯化残余物，得到化合物10-2(7.59g，产率94％)。
步骤10-3：
向10-2(7.59g,13.85mmol)在thf中的溶液滴加libh4(2.0m于thf中，41.6mmol，20.8ml)和无水meoh(1.7ml,41.6mmol)。将混合物在23℃下搅拌15h，用水(100ml)缓慢淬灭，并用etoac萃取。将水层用1mhcl酸化至ph5并用etoac(2x)萃取。合并有机层，用1mhcl溶液、饱和nacl洗涤，在na2so4上干燥，并真空浓缩。使用0–30％的etoac/己烷在硅胶(105g)上纯化残余物，以90％产率得到化合物10-3(6.5g)。
步骤10-4：
向10-3(200mg,0.38mmol)在甲苯(3ml)中的溶液添加pph3(259mg,0.99mmol)和咪唑(129mg,1.9mmol)。将混合物在室温下搅拌5min，然后添加碘(193mg,1.52mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1.5h，用na2s2o3溶液淬灭，并用dcm(2x)萃取。合并有机层，在na2so4上干燥，并真空浓缩。使用0–20％etoac/己烷在12g二氧化硅上纯化残余物，得到240mg10-4(包含pph3)。
步骤10-5：
将以上产物10-4溶解在meoh(15ml)中并用37％hcl(0.03ml)处理。将溶液在室温下搅拌15min，并真空浓缩。使用0–50％的etoac/己烷在12g二氧化硅上纯化残余物，以84％产率(2步)得到10-5(165mg)。[2m+1]+,1033.50。
步骤10-6：
在密封管中，将10-5(165mg,0.32mmol)溶解在etoh/thf/h2o(2ml/1ml/2ml)中。向溶液添加na2so3(807mg,6.4mmol)。将管密封，并在100℃下加热5h，冷却到室温，并用水稀释。将混合物上样到34gc18二氧化硅上，并用10–30％mecn/h2o洗脱。得到呈钠盐的实施例6(166mg)。[m+nh4]+,488.34。
实施例11：
采用与实施例10的合成相同的方案由已知的酸11-1制备实施例11。
实施例12：
步骤12-1：
向-78℃下10-2(7.13g,12.98mmol)在thf(40ml)中的溶液经10min滴加nahmds在thf中的溶液(1.0m,27.3ml)。将混合物在-78℃下搅拌1.5h，并滴加phsebr(3.68g,15.6mmol)在thf(10ml)中的溶液。将混合物在-78℃下搅拌2.5h并在室温下搅拌30min。将反应在0℃下用饱和nh4cl溶液淬灭，并用etoac(2x)萃取。将合并的有机层用饱和nacl溶液洗涤，并真空浓缩。将残余物溶解在etoac(35ml)中，冷却到0℃，并用30％h2o2(7ml)处理。将所得的混合物用力搅拌40min，用etoac稀释，并用饱和nahco3溶液和饱和nacl溶液洗涤。浓缩有机层，使用0-20％丙酮/己烷在120g二氧化硅上纯化，以77％的产率得到12-1(5.46g)。
步骤12-1：
向0℃下12-1(2.0g,3.66mmol)在dcm(12ml)中的溶液添加1-甲基咪唑(0.58ml,7.32mmol)和tmscl(0.7ml,5.49mmol)。将混合物在0℃下搅拌2.5h，用5％nahco3淬灭，并用dcm萃取。将有机层在na2so4上干燥，并真空浓缩。使用0-10％的etoac/己烷在50g二氧化硅上纯化残余物，以93％产率得到12-2(2.1g)。
步骤12-2：
将12-2(500mg,0.81mmol)在dcm(20ml)中的溶液冷却到-78℃。使臭氧(3psi)流过反应物持续1min或直到反应物变蓝。将溶液用pph3(276mg)淬灭，在室温下搅拌16h，并真空浓缩。使用0–20％的etoac/己烷在25g二氧化硅上纯化残余物，得到12-3(313mg)。
步骤12-3：
向-78℃下磺酰胺a(195mg,0.58mmol)在thf(3ml)中的溶液滴加lihmds溶液(1.0m于thf中，1.16ml)。将溶液在-78℃下搅拌30min，然后添加氯磷酸二乙酯(0.084ml,0.58mmol)。将混合物在-78℃下搅拌1h20min，然后滴加12-3在thf(3ml)中的溶液。将反应物在-78℃下搅拌2h，在0℃下搅拌2h，并在室温下搅拌30min。将反应用饱和nh4cl淬灭，并用etoac(3x)萃取。将合并的有机层在na2so4上干燥，并真空浓缩。使用0–20％的etoac/己烷在35g二氧化硅上纯化残余物，以29％产率(2步)得到12-4(209mg)。
步骤12-4：
向12-4(50mg,0.057mmol)在乙醇(5ml)中的溶液添加氢氧化钯碳(10mg)。将混合物在氢气(120psi)下在室温搅拌15h。将反应物用etoac(10ml)稀释，通过2.5gsio2塞过滤，并浓缩。将粗产物在sio2柱上用0-50％etoac/己烷纯化，得到实施例12(40.5mg)。(2m+nh4,1410)。
实施例13
步骤13-1：
向0℃下实施例12(33mg,0.047mmol)在ch2cl2(0.54ml)中的溶液滴加三氟乙酸(0.183ml,2.371mmol)。将混合物在0℃下搅拌4h，并真空浓缩。使用0-50％丙酮/己烷在sio2上纯化残余物，以58％的产率得到13-1(18.4mg)。[m+hcooh-1]-,716.41。
步骤13-2：
向0℃下13-1(18mg,0.027mmol)在ch2cl2(0.3ml)中的溶液滴加三氟乙酸(0.103ml,1.34mmol)。将混合物在0℃下搅拌2h，升至室温并搅拌3h，然后真空浓缩。将粗产物溶解在meoh/etoac(5:1,1ml)中并添加k2co3(37mg,0.268mmol)。将混合物在室温下搅拌2h，过滤并浓缩。使用0–50的丙酮/己烷在硅胶上纯化残余物，得到实施例13(5.4mg)。[m+hcooh-1]-,500.30。
实施例化合物14至29使用上文所用的类似操作而制备。ms数据在表8中指出。
表8
测定
人fxr(nr1h4)测定
确定配体介导的gal4启动子驱动的转录来定量配体结合介导的fxr活化。从indigobioscience购买fxr报告基因测定试剂盒(目录号：ib00601)来确定由enanta开发的可诱导fxr活化的化合物的效力和功效。该报告基因测定系统的主要应用是定量人fxr的功能活性。该测定利用非人哺乳动物细胞，即经工程化以表达人nr1h4蛋白(也称作fxr)的cho(中国仓鼠卵巢)细胞。报告基因系统还掺入了编码甲虫荧光素酶的cdna，该荧光素酶催化底物并产生光子发射。采用读板光度计(plate-readingluminometer)envision来定量反应的发光强度。报告细胞包括在功能上连接至fxr响应性启动子的荧光素酶报告基因。因此，在经处理的报告细胞中定量荧光素酶的变化为fxr活性的变化提供了敏感的替代测量。通过xlfit确定ec50和功效(归一化至设为100％的cdca)。该测定与制造商的说明书一致。简言之，该测定在白色96孔板中进行，采用100ul的终体积，其中含有细胞以及不同剂量的化合物。从-80℃保存取出报告细胞。通过将10ml体积的37℃细胞复苏培养基转移进冷冻细胞管中来进行冷冻细胞的快速融化。再次盖上报告细胞管并立即将其置于37℃水浴中5至10分钟。从水浴取出报告细胞混悬液管。用70％酒精拭子清洁管的外表面，然后将其转移进细胞培养罩。将90μl的细胞混悬液分配进96孔测定板的每个孔中。将板转移进37℃培养箱中，让细胞粘附至孔的底部。在稀释板(dp)中稀释化合物，并施用至测定板(ap)的细胞。样品的dmso含量保持在0.2％。在测量荧光素酶活性之前，将细胞再孵育22小时。在准备定量fxr活性之前30分钟，从冰箱取出检测底物和检测缓冲液，并将它们置于弱光区域中，使得它们可以平衡至室温。移除板的盖子，通过将其弹入适合的废液容器而弃去所有的培养基内容物。将翻转的板轻放在干净的吸收性纸巾上，以去除残留的水滴。细胞仍将紧紧地粘附在孔底。向测定板的每个孔添加100μl的荧光素酶检测试剂。在添加ldr后让测定板在室温静置至少5分钟。在读取第一个测定孔之前，将仪器(envision)设置为进行单次5秒的“板震动”。读板时间可以为每孔0.5秒(500msec)。通过xlfit确定ec50和功效(归一化至设为100％的cdca)。
体外人tgr5(gpbar1)活性测定
本发明的化合物对tgr5受体的效力和功效采用体外测定来评估，其采用来自discoverx的表达试剂盒(camphuntertmexpressgpbar1cho-k1gpcr测定；目录号：95-0049e2cp2s)gpbar1(g蛋白偶联的胆汁酸受体1)编码g蛋白偶联受体(gpcr)超家族的成员)进行。配体结合后的gpbar1活化启动一系列第二信使级联，导致细胞应答。以胆汁酸处理表达gpbar1的cho细胞导致细胞内camp的产生和受体内化。使用基于酶片段互补(efc)的竞争性免疫测定，通过测量活细胞中环腺苷一磷酸(环amp或camp)的水平，来确定化合物对gpbar1活化的效力和功效。
简言之，将细胞接种进白色96孔微板中，在测试前将其置于加湿培养箱内37℃,5％co2中18至24小时。第二天，根据制造商说明书进行恰当的camphunterexpress计划(protocol)。以期望的储备浓度将激动剂化合物溶解在dmso中，并在细胞测定缓冲液中制备3倍系列的激动剂化合物稀释液。每个稀释的浓度应制备为4x最终筛选浓度(即15μl化合物+45μl细胞测定缓冲液/camp抗体试剂)。对于每个稀释，溶剂的最终浓度应保持恒定。转移15μl稀释的化合物到测定板，并将板在37℃孵育30分钟。在激动剂孵育后，向适当的孔添加60μl的工作camp检测试剂/camp溶液混合物(camp裂解缓冲液，底物试剂1，camp溶液d)。在室温(23℃)孵育1小时，避光。向适当的孔添加60μl的camp溶液a。在室温(23℃)孵育3小时，避光。在envision标准的发光读板仪上读取样品。计算对数转化后的平均ec50。
为了评估实施例化合物以及参照化合物的fxr激动效力，在人fxr(nr1h4)测定中确定效力范围，如以下表9中所列出的。将功效归一化至设为100％的cdca。(a＝ec50<0.1μm；b＝0.1
表9
虽然已参照本发明的优选实施方案具体示出和描述了本发明，但是本领域技术人员应理解，在不脱离所附权利要求书所涵盖的本发明的范围的情况下，可以对形式和细节进行各种改变。