含米铂的溶液及应用、米铂冻干粉针剂及制备方法和应用与流程

本发明属于药物
技术领域：
，具体涉及一种含米铂的溶液及应用、米铂冻干粉针剂及制备方法和应用。
背景技术：
：化学名称：(SP-4-2)-[(1R,2R)-1,2环己二氨-N,N′]二(十四酸-O)合铂；分子式：C34H68N2O4Pt·H2O；分子量：782.01；结构式：米铂为白色至微黄色结晶性粉末，脂溶性铂类金属络合物；本品在氯仿，二氯甲烷中溶解，在乙醇中微溶，在甲醇中极微溶解，在水、乙腈中几乎不溶。米铂是由日本住友制药株式会所研制开发的铂类抗癌药，冻干粉针剂规格为70mg/支，在治疗肝癌、恶性淋巴瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌及表面膀眺癌方面效果显著。米铂冻干粉针剂制备方法可参见中国专利CN02818527.7，该专利中米铂冻干粉针剂制备技术，是使米铂溶解在叔丁醇中，并调节溶液的含水量。虽然制得的产品混悬在婴粟子油的脂肪酸乙脂的碘加成物(碘化油注射液)中后较稳定而且易于临床操作，但是本品在生产时，为了防止在配制米铂及过滤灌装过程中由于环境温度低发生溶液凝固或局部凝固(叔丁醇熔点为25.5℃)，整个过滤灌装过程中需要通过特殊的保温装置才能保证叔丁醇不凝结，生产正常进行，此种生法生产不仅成本提高，而且操作人员在无菌环境下工作困难较大。由于米铂在叔丁醇中溶解度较小，冻干溶液配制浓度为4mg/mL,市售米铂冻干粉规格为70mg/支，药物溶液体积约为17.5mL，冻干溶液体积较大，制备工艺时间较长，耗能多，单位生产时间长，增加了生产成本。米铂冻干粉针剂制备方法可参见中国专利申请号20110201119.1，该专利申请中米铂冻干粉针剂制备技术，是使米铂溶解在叔丁醇与乙醇混合溶液中，降低药物溶液的熔点，但同样米铂在叔丁醇与乙醇混合溶液中溶解度较小，冻干溶液配制浓度为3.93mg/mL,市售米铂冻干粉规格为70mg/支，药物溶液体积约为17.8mL，冻干溶液体积较大，制备工艺时间较长，耗能多，单位生产时间长，增加了生产成本。技术实现要素：本发明所解决的现有技术的问题是：现有的米铂冻干粉针剂在溶剂中的溶解度较小，冻干粉在使用时冻干溶液体积较大，制备工艺时间较长，耗能多，生产成本较高。本发明的目的是克服现有技术的不足之处，提供一种含米铂的溶液及应用、米铂冻干粉针剂及制备方法和应用。具体而言，第一方面本发明提供了一种含有米铂的溶液，其含有米铂，叔丁醇和正丁醇。第二方面，本发明提供了含有叔丁醇和正丁醇的混合溶剂在米铂冻干粉针剂领域中的应用。第三方面，本发明提供了一种米铂冻干粉针剂，所述的米铂冻干粉针剂通过将米铂溶液冻干得到，所述米铂溶液溶于含有叔丁醇和正丁醇的混合溶剂。优选的，所述混合溶剂中正丁醇和叔丁醇的体积比为(1：99)～(10：90)。优选的，所述混合溶剂中正丁醇和叔丁醇的体积比为(2:98)～(5:95)。更优选的，所述混合溶剂中正丁醇和叔丁醇的体积比为3:97。优选的，米铂在混合溶剂中的浓度为3mg/mL～50mg/mL，优选的，米铂在混合溶剂中的浓度为5mg/mL～30mg/mL。更优选的，米铂在混合溶剂中的浓度为10mg/ml。优选的，米铂的纯度大于99％。优选的，所述米铂冻干粉针剂的粒径为5～25μm。更优选的，所述米铂冻干粉针剂的粒径为5～15μm。第四方面，本发明提供了一种米铂冻干粉针剂的制备方法，将米铂与含有叔丁醇和正丁醇的混合溶剂混合均匀，冻干得到米铂冻干粉针剂。优选的，所述混合溶剂中正丁醇和叔丁醇的体积比为(1：99)～(10：90)。优选的，所述混合溶剂中正丁醇和叔丁醇的体积比为(2:98)～(5:95)。更优选的，所述混合溶剂中正丁醇和叔丁醇的体积比为3:97。优选的，米铂在混合溶剂中的浓度为3mg/mL～50mg/mL。优选的，米铂在混合溶剂中的浓度为5mg/mL～30mg/mL。更优选的，米铂在混合溶剂中的浓度为10mg/ml。优选的，米铂的纯度为大于99％。优选的，混合时的温度为40-70℃。优选的，冻干时的温度区间为-40℃～40℃。优选的，冻干时的温度区间包括：-40℃～-35℃冻干5～15h，-30℃～-20℃冻干20～30h，30℃～40℃冻干10～20h。第五方面，本发明提供了以上任一项所述的米铂冻干粉针剂在制备治疗癌症药物领域中的应用，优选的，以上任一项所述的米铂冻干粉针剂在制备治疗肝细胞癌药物领域中的应用。本发明所取得的有益效果为：(1)本发明的米铂冻干粉针剂中，配制过程中使用正丁醇与叔丁醇混合溶剂可以提高米铂溶解度，减少米铂冻干溶液体积，降低生产时间及耗能；同时冻干成品中心粒径分布为上5～25μm,混悬在罂粟籽碘化油中后24小时内沉降系数及黏度均无明显变化，即所生产的样品临床使用时较稳定。(2)本发明制备工艺简便，方便可行，可以用于工业化大生产，同时使生产成本降低，可以产生可观的经济和社会效益。通过该方法制备的米铂冻干粉针剂可以用于与肝细胞癌相关的肿瘤的治疗，在紧急情况时能提供足够应对措施的医疗设施和对癌症化疗以及针对肝癌细胞的局部疗法。附图说明图1为日本市售(大日本住友公司)米铂制剂(Miripla)电镜图。图2为本发明实施例二制备得到的米铂冻干制剂电镜图。具体实施方式如上所述，本发明为了解决现有的米铂冻干粉针剂在溶剂中的溶解度较小造成生产成本较高的问题，提供了一种米铂冻干粉针剂及其制备方法。具体来说，本发明提供了一种米铂冻干粉针剂，所述的米铂冻干粉针剂通过将含米铂、叔丁醇和正丁醇的混合溶剂冻干得到。其中在本发明的一种优选实施方式中，所述叔丁醇和所述正丁醇的体积比为(95～98):(2～5)。本发明的米铂冻干粉针剂中，配制过程中使用正丁醇可以降低米铂粉针剂对生产环境的温度要求，保证米铂溶液在生产过程中于室温环境下不发生凝固或局部凝固；采用本发明的方法制备的米铂冻干粉针剂冻干成品中心粒径分布为上5～25μm，混悬在罂粟籽碘化油中后24小时内沉降系数及黏度均无明显变化，即所生产的样品临床使用时较稳定。本发明的米铂冻干粉针剂的制备方法，其制备过程为:量取处方量的叔丁醇与正丁醇，加入至配料罐中，搅拌均匀后将溶液温度控制在40-70℃，再称取处方量的米铂，在保持温度下搅拌或超声使之溶解均匀，检查合格后，在无菌条件下，用0.22μm的有机微孔滤膜过滤至澄明，按米铂计算所得装量灌装于西林瓶中，半塞上丁基橡胶塞，装盘，送入冻干机，关闭箱门，开启冻丁机进行冻干，之后压塞、出箱，用铝塑组合盖轧口，经质检合格后包装，即得。下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。但是这些实施例仅为本发明的代表举例而已，不应理解为本发明实施的限定范围。此外，凡是对本发明配方、生产工艺步骤的简单替换或变化，均属于本发明的保护范围。本发明组合物中所用的原料均为本领域技术人员常用的原料。表1本发明实施例和对比例所用的试剂及原料信息表2本发明实施例和对比例所用的设备的信息其中，本发明对米铂冻干工艺的研究的原料米铂可以自己制备合成，按照现有技术已经公开的合成路线进行合成，也可以通过购买市售的高纯度的米铂作为原料。其中，在本发明的一种优选实施方式中，米铂采用如下工艺进行合成：米铂合成工艺路线：合成工艺路线为：第一步四氯铂酸亚钾，碘化钾和左旋-(1R,2R)-环己二胺，制得中间体(1R；2R)-(-)-1，2环己二胺-二碘合铂(Ⅱ)，第二步，豆蔻酸钠和硝酸银反应制得另一中间体侧链，即按照式(Ⅱ)进行反应；第三步，两个中间体侧链再对接、精制得到终产品，即按照式(Ⅲ)进行反应，然后通过将制得的成品反复精制结晶得到纯度为99.5％的米铂原料，备用。这样的工艺与原研报道的合成路线最接近，也有利于本品生产的工业化。实施例一有机溶剂的筛选由于米铂难溶于水，在有机溶剂的溶解度又因为溶剂的不同而不同，因此，若能提高米铂在有机溶剂中的溶解度，将会减少米铂冻干溶液使用时的体积，同时，减少米铂冻干粉针剂在冻干时的溶剂含量，降低生产时间及耗能，简化工艺。实施例一通过测定米铂在不同温度下不同溶剂中的溶解度，筛选出能够显著提高米铂在溶剂中的溶解度的有机溶剂。其中，溶解性能测定试验如下：将称取一定量的米铂原料药置于一定量的溶剂中，转移至恒温水浴中磁力搅拌，每10分钟观察溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒，即为完全溶解。1.(1)有机溶剂的选择取一定量的米铂分别溶于正丁醇、叔丁醇、含1％正丁醇的叔丁醇溶液(体积比，以下同)、含5％乙醇的叔丁醇溶液、含1％乙腈的叔丁醇溶液、含1％丙酮的叔丁醇溶液、含1％氯仿的叔丁醇溶液、以及含1％DMSO的叔丁醇溶液中，分别测定35℃条件下，米铂在不同的溶剂中的溶解度，测定结果见表3。表3不同溶剂中米铂的溶解度有机溶剂浓度正丁醇11.88mg/mL叔丁醇4.00mg/mL1％正丁醇的叔丁醇溶液4.35mg/mL1％乙醇的叔丁醇溶液4.04mg/mL3％乙醇的叔丁醇溶液3.77mg/mL5％乙醇的叔丁醇溶液3.62mg/mL1％乙腈的叔丁醇溶液4.17mg/mL1％氯仿的叔丁醇溶液4.92mg/mL1％丙酮的叔丁醇溶液4.12mg/mL1％DMSO的叔丁醇溶液4.17mg/mL从表3可以看出，35℃条件下，米铂在正丁醇的溶解度要远高于在叔丁醇中的溶解度。但是，由于正丁醇的熔点为-90℃左右，单纯的采用正丁醇作为溶剂，不能用于米铂的冻干粉针剂的制备。因此，发明人又继续考察了米铂在不同比例的其他溶剂(包括正丁醇、不同比例的乙醇、乙腈、丙酮、氯仿、DMSO)的叔丁醇溶液中的溶解度。从表3的实验结果可以看出，米铂在1％正丁醇的叔丁醇溶液中的溶解度要显著高于在1％乙醇的叔丁醇溶液、3％乙醇的叔丁醇溶液或5％乙醇的叔丁醇溶液中的溶解度。虽然在1％乙腈的叔丁醇溶液、1％氯仿的叔丁醇溶液中的溶解度与在1％正丁醇的叔丁醇的溶液中的溶解度相当甚至更高，但是由于乙腈、氯仿均属于第二类有机溶剂，即虽然无基因毒性但是有动物致癌性的溶剂，因此也不考虑优先选用。(2)有机溶剂的选择为了进一步考虑温度对于米铂在不同溶剂中的溶解度的影响，选取了不同的溶剂，考察了米铂在45℃或60℃或以上条件下，在不同溶剂中的溶解度。实验发现在45℃条件下，米铂在不同溶液中溶解度变化不大，增溶效果不明显。二氯甲烷、丙酮的沸点均小于60℃，因此，不考虑将二氯甲烷或者丙酮作为溶剂，考察60℃条件下，米铂在二氯甲烷或者丙酮中的溶解度。而DMSO对血管及肝肾有较大的毒性，所以也不选用。而当把温度提高到高于60℃，一是有机溶剂挥发速度加快，不易控制；二是生产商控制60℃以上成本较高。因此，最终实验考察了60℃条件下，米铂在正丁醇、叔丁醇、无水乙醇、无水甲醇或乙酸乙酯中的溶解度。取一定量的米铂分别溶于正丁醇、叔丁醇、无水乙醇、无水甲醇和乙酸乙酯中，分别测定在60℃条件下，米铂在不同的溶剂中的溶解度，测定结果见表4。表4不同溶剂中米铂的溶解度溶剂浓度正丁醇＞40mg/ml叔丁醇＞24mg/ml＜25mg/ml无水乙醇＜15mg/ml无水甲醇＜15mg/ml乙酸乙酯＜15mg/ml从表4可以看出，60℃条件下，米铂在正丁醇或叔丁醇中的溶解度要显著大于在无水乙醇、无水甲醇或者乙酸乙酯中的溶解度。而且将表3和表4中的数据对比不难发现，温度从35℃升高到60℃，米铂在正丁醇中的溶解度由11.88mg/ml提高到>40mg/ml；在叔丁醇中的溶解度由4.00mg/ml提高到24～25mg/ml之间。可见，提高溶解时的温度，可以提高米铂在溶剂中的溶解度。2.对不同比例正丁醇的叔丁醇溶液对米铂溶解度的考察分别于60℃条件下，测定米铂在1％正丁醇的叔丁醇溶液、2％正丁醇的叔丁醇溶液、3％正丁醇的叔丁醇溶液、4％正丁醇的叔丁醇溶液、5％正丁醇的叔丁醇溶液、和10％正丁醇的叔丁醇溶液中的溶解度。测定结果见表5。表5含不同比例正丁醇的叔丁醇溶液中米铂的溶解度结果从表5可以看出，无论是正丁醇在叔丁醇溶液中的比例从1％还是到10％，其溶解度均在19mg/mL以上，相同温度下，3％正丁醇的叔丁醇溶液对米铂的溶解性能最好，溶解度最大。3.对不同温度下3％正丁醇的叔丁醇溶液对米铂溶解度的考察分别于40℃、50℃、60℃条件下，测定米铂在3％正丁醇的叔丁醇溶液中的溶解度。表6不用加热温度下米铂的溶解度结果加热温度浓度60℃25mg/ml50℃＜15mg/ml40℃＜15mg/ml从表6可以看出，在60℃条件下，米铂在含3％正丁醇的叔丁醇溶液中的溶解度为25mg/ml，远大于在40℃或者在50℃米铂在相同溶液中的溶解度。因此，3％正丁醇的叔丁醇溶液在60℃时对米铂的溶解性能最好，溶解度最大。4.对60℃时不同浓度的3％正丁醇的叔丁醇溶液析出速度的考察分别在60℃条件下，将不同质量的米铂分别加入3％正丁醇的叔丁醇溶液中，配制10mg/mL、12mg/mL、14mg/mL、16mg/mL、20mg/ml的米铂溶液，待完全溶解后，迅速转入25℃水浴中，观察并计时。表7不同浓度的米铂析出时限析出时限可以用来不同浓度的米铂在溶剂中的稳定性。从表7可以看出，将米铂溶液从60℃条件中转移到25℃条件下，米铂的浓度越低，溶液的析出速度越慢。米铂浓度为10mg/mL时，析出时限为25min。从以上各个实验，包括有机溶剂的筛选，不同比例正丁醇的叔丁醇溶液对米铂溶解度的考察，不同温度下3％正丁醇的叔丁醇溶液对米铂溶解度的考察，60℃时不同浓度的3％正丁醇的叔丁醇溶液析出速度的考察等，不难看出，综合来说，米铂在含1-10％正丁醇的叔丁醇的溶液中的溶解度最好，而以3％正丁醇的叔丁醇的溶液中的溶解度最佳。而且，米铂的浓度为10mg/ml时，析出时限最长，稳定性最佳。实施例二冻干粉针剂的制备60℃水浴加热下，配制浓度为10mg/mL米铂溶液，冻干溶剂为(正丁醇/叔丁醇：体积比为3/97)，在无菌条件下，用0.22μm的有机微孔滤膜过滤至澄明，按米铂计算所得装量灌装于西林瓶中，半塞上丁基橡胶塞，装盘，送入冻干机，关闭箱门，开启冻丁机进行冻干，冻干机初始温度为-40℃中，每个冻干瓶样品浓度10mg/mL，含水0.8mg/mL，体积为7mL。其中，冻干参数设定见表8：表8冻干参数冻干后进行压塞、出箱，用铝塑组合盖轧口，即得冻干粉针剂。实施例三分别对实施例二制得的冻干粉针剂的含量，粒径，沉降系数等进行表征。其中，测定方法分别如下：(1)含量检测方法及仪器用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:乙腈(70：30)为流动相；检测波长为210nm，流速为每分钟1.0ml，样品室温度为5℃，柱温为30℃。理论板数按米铂计算不低于3000。取本品适量，精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取10uL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取米铂对照品适量(纯度99.5％)，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。测定结果如下：每瓶米铂冻干制剂平均含量为70.1mg。(2)残留溶剂检测方法：取本品约25mg，精密称定，置顶空瓶中，精密加入二甲基亚砜5ml，密封(顶空加热过程中溶解)，作为供试品溶液，取正丁醇/叔丁醇适量，精密称定，用二甲基亚砜定量稀释制成每1ml中约含有5μg的溶液，精密量取5ml，置顶空瓶中，密封，作为对照溶液。照残留溶剂测定法(中国药典2010版二部附录ⅧP第二法)测定，用6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱为色谱柱；起始温度为50℃，维持10分钟，再以每分钟30℃的速率升温至200℃，维持5分钟；进样口温度为200℃；检测器温度为250℃；流速为2.0ml/min；顶空瓶平衡温度为90℃，平衡时间为30分钟。经过检测，未在冻干粉针剂中检测到正丁醇和叔丁醇，说明本发明方法制备的冻干粉针剂溶剂去除干净，未有残留。(3)粒径检测方法及仪器取本品约7mg，加入1ml肉豆范酸异丙酯作为分散介质，超声1分钟使分散，作为供试品混悬液。向进样器中加入100ml肉豆范酸异丙酯，再加入供试品混悬液，设置遮光度界限为5％～12％，搅拌速度为2000转/分钟，照粒度测定法(中国药典2010年版第二部附录ⅪE第三法)用马尔文2000粒径测定仪检测样品粒径分布。表9本发明米铂冻干粉针剂的粒径测定数值表10米铂原研药的粒径测定数值从表9和表10的粒径测定数据可以看出，本发明制备得到的米铂冻干粉针剂相比较于原研药(大日本住友公司市售的米铂制剂)，粒径大小相差不大。本发明制备得到的米铂冻干粉针剂表现出良好的粒径性能。(4)沉降系数检测鉴于米铂在临床用药时通常将米铂冻干粉混悬于罂粟籽碘化油注射液中，形成混悬溶液，在体内也是以混悬形式存在，因此考察了其沉降系数。检测方法为：取本品1支，精密加入罂粟籽碘化油3.5m1，振摇使混匀，转移至西林瓶中，室温静置3小时，吸取上层、下层溶液各250μl，分别置于10m1量瓶中，加入无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(上层、下层供试品溶液各平行制备2份)。取米铂对照品适量(纯度99.5％)，精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为米铂定位溶液。按照含量测定方法，精密量取米铂定位溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，运行时间为60分钟。按下面的公示进行计算：上层溶液与下层溶液米铂峰面积的比值＝(A上1+A上2)/(A下1+A下2)A上1、A上2：上层溶液中米铂的峰面积；A下1、A下2：下层溶液中米铂的峰面积。测定的沉降系数的平均值为9.83。测定结果表明，本发明制备得到的米铂冻干粉针剂的沉降系数远远大于0.90，制备得到的混悬液的稳定性好。(5)电镜测定分别将实施例二制备的米铂冻干粉针剂以及日本市售的米铂制剂利用扫描电子显微镜(SEM)测定溶液的粒径分布。测定结果见附图1和附图2。从图1和图2可以看出，相比较于日本市售的米铂制剂，本发明制备得到的米铂冻干粉剂其粒径分布更加均一。本发明制备达到的米铂冻干粉剂，其表面膨松多孔，中心粒径分布为5～25μm，而且大部分在5～15μm之间。通过以上实施例不难看出，控制冻干粉针剂的温度为60℃，叔丁醇与正丁醇的体积比为3:97时，米铂冻干粉针剂的测定效果最好。综上所述，米铂在1-10％的正丁醇的叔丁醇的溶剂中，10-15mg/ml浓度下，控制温度为40-70℃条件下，制备得到的米铂冻干粉针剂各项指标良好。根据本发明所筛选的溶剂以及考察的各项指标，在生产实践中，称取处方量的叔丁醇与正丁醇，加入至配料罐中，搅拌均匀后将溶液温度控制在40-70℃，再称取处方量的米铂，在保持温度下搅拌或超声使之溶解均匀，检查合格后，在无菌条件下，用0.22μm的有机微孔滤膜过滤至澄明，按米铂计算所得装量灌装于西林瓶中，半塞上丁基橡胶塞，装盘，送入冻干机，关闭箱门，开启冻丁机进行冻干，之后压塞、出箱，用铝塑组合盖轧口，经质检合格后包装，即得米铂冻干粉针剂。以上所述仅为本发明较佳实施例，并不用于局限本发明，凡在本发明的精神和原则之内所做的修改、等同替换和改进等，均需要包含在发明的保护范围之内。当前第1页1 2 3