一种环糊精装载吲哚螺吡咯衍生物的制备方法及其作为抗肿瘤药物的应用与流程

本发明属于肿瘤治疗药物制备技术领域。特别涉及一类以六氢螺[吲哚啉-3,3'-吡咯里嗪]-2-酮为母核的吲哚螺吡咯衍生物，经环糊精装载后，在体外、体内模型中均可以抑制肝癌细胞的增殖、促进其凋亡。

背景技术：

随着医疗技术的发展，部分肿瘤(霍奇金淋巴瘤、人绒毛膜癌等)已经得到良好的救治，但大部分恶性肿瘤的治疗仍然是世界性的难题。由于不断对肿瘤发生发展机制的深入探讨和理解，治疗药物也从特异性低、毒副作用大逐渐向靶标性强、副作用低的方向发展，自此掀起了对恶性肿瘤的分子靶向药物研究的热潮。如多激酶抑制剂索拉非尼等分子靶向药物应用于临床。因此，继续开发分子靶向药物，将对肿瘤患者的治疗及预后具有重要的意义。

采用一锅法合成的以六氢螺[吲哚啉-3,3'-吡咯里嗪]-2-酮为母核的一类新型吲哚螺吡咯衍生物，经高通量筛选提示mdm2为其作用靶点之一，通过mdm2-p53负反馈循环，抑制mdm2，上调p53，激活p53信号通路，促进肿瘤细胞凋亡。这已得到前期实验的证实。但由于此化合物具有水溶性差、溶剂dmso毒性大等缺点，使得该化合物仅局限于体外模型的研究应用。

环糊精是由6-8个葡萄糖(命名为α、β、γ环糊精)经c1与c4键共价链接的环状多糖。它包含疏水的内环、和亲水的外环，能将不溶性小分子化合物嵌合到内环，增加其溶解性、稳定性，同时，它亲水性表面也有利于增加膜通透性。因此，是常用的食品、药物添加剂。2-羟丙基-β-环糊精，2-羟丙基-γ-环糊精，磺丁基-β-环糊精是几种近年发展的衍生物，与母体相比，其水溶性更好、毒性更低，已被美国药品食品管理局(fda)批准为增溶剂用于药物递送。

技术实现要素：

本发明提供一类以六氢螺[吲哚啉-3,3'-吡咯里嗪]-2-酮为母核的吲哚螺吡咯衍生物，经环糊精装载后，将其作为一种新的抗肿瘤药物。

本发明所述的环糊精装载吲哚螺吡咯衍生物的制备方法为：用双蒸水配制浓度为300-600mg/ml的环糊精溶液，然后逐滴加入盐酸，调节ph至0.5-3；再加入吲哚螺吡咯衍生物，超声震荡溶解，吲哚螺吡咯衍生物与环糊精的质量比为1:300-1:1200；最后加碱液调节溶液ph值到7.0，获得澄清透明药液。

所述的吲哚螺吡咯衍生物为以六氢螺[吲哚啉-3,3'-吡咯里嗪]-2-酮为母核的吲哚螺吡咯衍生物。具体为1'-(2-氯苯基)-2'-(2-吡啶甲酰基)-1',2',5',6',7',7a'-六氢螺[吲哚啉-3,3'-吡咯里嗪]-2-酮

(1'-(2-chlorophenyl)-2'-picolinoyl-1',2',5',6',7',7a'-hexahydrospiro[indoline-3,3'-pyrrolizin]-2-one，命名为cphsp)，结构式如下：

所述的环糊精为α、β、γ环糊精及其任衍生物中的任意一种或几种。具体为2-羟丙基-β-环糊精、2-羟丙基-γ-环糊精、磺丁基-β-环糊精、hd-β-环糊精、rm-β-环糊精、sbe-β-环糊精、hd-γ-环糊精中的一种或几种。

所述的rm-β-环糊精的结构式如下：

所述的sbe-β-环糊精的结构式如下：

所述的hd-γ-环糊精的结构式如下：

所述的碱液为naoh或nahco3溶液。

将上述制备的环糊精装载吲哚螺吡咯衍生物作为抗肿瘤药物的应用。

将上述制备的环糊精装载吲哚螺吡咯衍生物通过cck-8法检测，结果显示其对肝癌细胞系的增殖有抑制作用。随着吲哚螺吡咯衍生物剂量的增加，对肝癌细胞系的抑制增殖作用也越明显，表现出剂量依赖性。

建立裸小鼠皮下hepg2移植瘤模型，将上述制备的环糊精装载吲哚螺吡咯衍生物采用3种途经(灌胃口服)给药，检测其体内抗肿瘤活性情况，结果显示其在体内可抑制肿瘤组织生长。

吲哚螺吡咯衍生物分子结构中含有多个氮原子，可以在酸性条件下溶于水，如果直接将溶液ph值再调至中性后，化合物会重新析出；本发明通过调变ph值，使其先溶于酸，然后用环糊精装载，使化合物嵌合入环糊精分子筛孔中，这样即使将溶液ph值改变为中性，也不会有沉淀析出，从而增强其溶解性，将难溶于水的吲哚螺吡咯衍生物装载到环糊精，有效克服了药物的溶解度差的问题；重要的是，在小鼠肿瘤模型上，环糊精装载的以六氢螺[吲哚啉-3,3'-吡咯里嗪]-2-酮为母核的吲哚螺吡咯衍生物表现了明确的抗肿瘤效果，而且几乎没有毒性。与现有技术相比，本发明制备的环糊精装载吲哚螺吡咯衍生物具有溶解度好、抑制肿瘤细胞增殖效果明显、毒副作用低等优点。其治疗的肿瘤类型包括但不限于：肝癌、肾癌、皮肤癌、鼻咽癌、胃肠癌等。

附图说明

图1：cphsp抑制肝癌细胞系hepg2、huh7细胞增殖的剂量效果图。

图2：实施例1制备的2-羟丙基-β-环糊精装载cphsp抑制肝癌细胞系hepg2增值的效果图。

图3：对比例1制备的2-羟丙基-β-环糊精与cphsp的悬浊液的抑制肝癌细胞系hepg2增值的效果图，结果显示没有明显的抗癌效果。

具体实施方式

实施例1

称取600mg的2-羟丙基-β-环糊精溶于1ml双蒸水中；然后逐滴加入浓盐酸，调节ph至2；再加入1mg的cphsp，超声震荡溶解；最后加入碱液(naoh溶液，浓度为40％m/v)调节溶液ph值到7.0，获得澄清透明的2-羟丙基-β-环糊精装载cphsp药液。

将上述制备的2-羟丙基-β-环糊精装载cphsp进行抗癌效果测试：

建立皮下嫁接hepg2肝癌细胞的裸鼠肝癌模型，在肿瘤达到50-100mm直径时，随机分为溶剂对照组和治疗组。治疗组灌胃2-羟丙基-β-环糊精装载cphsp，50mg/kg，溶剂对照组给予30g/kg的2-羟丙基-β-环糊溶液，每两天一次，持续3周。治疗两周后，治疗组肿瘤体积明显小于对照组，说明2-羟丙基-β-环糊精装载cphsp能明显抑制肝癌肿瘤的生长。

对比例1

称取600mg的2-羟丙基-β-环糊精溶于1ml双蒸水中；再加入1mg的cphsp，超声震荡混匀，得到悬浊液。

将上述制备的2-羟丙基-β-环糊精与cphsp的悬浊液进行抗癌效果测试：

建立皮下嫁接hepg2肝癌细胞的裸鼠肝癌模型，在肿瘤达到50-100mm直径时，随机分为溶剂对照组，低剂量治疗组和高剂量治疗组。低剂量治疗组和高剂量治疗组分别灌胃配制的悬浊液，50mg/kg，100mg/kg，溶剂对照组给予30g/kg的2-羟丙基-β-环糊溶液，每两天一次，持续3周。治疗3周后，50mg/kg灌胃治疗组裸小鼠皮下肿瘤生长与对照组相比，变化不大；100mg/kg灌胃治疗组皮下肿瘤生长速度相对减慢，但没有显著差异。