本发明属医药领域，具体涉及到噻吩衍生物在制备人或动物提高免疫药物、抗病毒药物及抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
：人或动物若免疫力低下，最直接的表现就是容易生病，严重的甚至患上癌症，原因在于免疫力低，免疫系统就不能正常发挥保护作用，在此情况下，极易招致细菌、病毒、真菌等感染。病毒是一种非细胞形态的微生物，在自然界广泛分布，人、动物、植物、真菌和细菌内均有病毒寄生。有资料显示，引起人类感染的病原体中，75％是病毒。病毒性传染病有的可以引起世界性大流行，如流行性感冒；有的病后出现后遗症，如小儿麻痹症；有的传染性强，病死率高，如天花、艾滋病。病毒感染与人类肿瘤、免疫缺陷以及胎儿畸形、老年痴呆等均有密切关系，对人类、各种动物健康影响极大。目前尚未发现治疗病毒的特殊药物。据中国医学科学院肿瘤医院统计，2015年中国有约429.2万例新发肿瘤病例和281.4万例死亡病例，相当于平均每天12000人新患癌症，7500死于癌症。肺癌是发病率和死亡率最高的肿瘤。胃癌、食管癌和肝癌是紧随其后的我国发病率和死亡率较高的常见肿瘤。开发有效的肿瘤治疗药物是当务之急。但抗病毒药物很难进入宿主细胞内将病毒抑制或杀死，抗肿瘤药物的选择性差、毒性大，且易产生耐药性。通过提高机体自身免疫力来抗病毒感染、抗肿瘤是很好的研究方向。目前未见能提高人体或动物免疫力的理想药物。技术实现要素：本发明的目的在于弥补现有技术的不足，提供一种小分子噻吩衍生物在制备提高人或动物免疫、抗病毒、抗肿瘤药物中的应用。本发明涉及的噻吩衍生物的结构式如下：其中n＝0-4可以为：2-噻吩甲酸、2-噻吩乙酸、3-(2-噻吩)丙酸、4-(2-噻吩)丁酸、5-(2-噻吩)戊酸，优选：2-噻吩乙酸。本发明通过动物体内实验，在实际应用中发现上述通式衍生物具有提高细胞免疫能力和抗病毒能力，尤其是可以作为抗流感药物、抗猪瘟病毒感染药物、抗猪圆环病毒感染药物及抗肝癌药物、抗胃癌药物及抗肺癌药物。本发明创新点及优点：所述噻吩衍生物以提高人体、动物免疫力为机理，实验结果表明本发明噻吩衍生物比目前临床上常用的5-氟尿嘧啶和环磷酰胺抑瘤效果好，与5-氟尿嘧啶和环磷酰胺相比差异十分显著(p<0.01),淋巴细胞转化活性好，而且选择性强，对于流感、猪瘟病毒、猪圆环病毒ii型感染疗效卓越，优于广谱抗病毒药利巴韦林。在抗人体或动物病毒感染及抗肿瘤方面有广泛的应用前景。具体实施方式为了更好地理解本发明的实质，下面以2-噻吩乙酸为代表进行药理实验、临床试验，说明其在制药领域中的新用途。实施例12-噻吩乙酸对淋巴细胞转化活性的影响1.材料43日龄健康aa肉鸡，市场采购。实验所用rpmi-1640培养基和sds为gilcobrl公司产品；cona、mtt为sigma公司产品，2-噻吩乙酸由鹤壁泰德生化科技有限公司提供，纯度99.5％。2.实验方法无菌心脏采鸡外周血，肝素抗凝，无菌percoll细胞分层液分离淋巴细胞。将制备好的淋巴细胞加入96孔细胞培养板，每孔50μl，然后加入50μl待测药物以及不同浓度的cona，每个处理3个重复孔，置41℃，体积百分比5％co2条件下培养72小时。3.测定方法每孔加入mtt10μl，继续培养4小时后加入质量百分含量20％sds90μl，12小时后，用318-mc酶标仪测定od572nm值。结果见表1。表12-噻吩乙酸对淋巴细胞转化的影响组别药物浓度平均值转化率阴性组00.582100％阳性组1(cona)0.16μg/ml0.596102％阳性组2(cona)20μg/ml0.721124％本发明药物组0.16μg/ml0.691119％刀豆蛋白a(cona)是一种糖类结合蛋白质，具有强力的有丝分裂作用，有较好的促淋巴细胞转化反应的作用。上述实验结果表明，在0.16μg/ml相同浓度下，2-噻吩乙酸对淋巴细胞有显著的促进作用(p＜0.05)，而cona测没有，只有浓度高出2-噻吩乙酸125倍时才与0.16μg/ml的2-噻吩乙酸作用相当。可以证实用本发明衍生物能很好地提高动物免疫力。实施例22-噻吩乙酸的抗流感病毒感染作用1、材料2-噻吩乙酸、利巴韦林均由鹤壁泰德生化科技有限公司提供。甲1型流感病毒fm1鼠肺适应株由中国科学院病毒研究所提供，经小鼠增强毒力后，于鸡胚囊腔传代2次，并测定其半数致死量ld50。nih小鼠由河南省医学实验动物中心提供。实验数据以均数±标准差(x^-±s)表示，组间比较采用t检验。2、实验方法实验前取毒种用无菌生理盐水稀释成每0.05ml含8个ld50，放冰水中保存。nih小鼠，体重13-15g，雌雄各半，共分成4组，每组16只，即对照组、利巴韦林组(两个剂量组)、2-噻吩乙酸组。在乙醚轻度麻醉下，流感病毒液滴鼻感染，每鼠4滴，约0.05ml。给药组均于感染的当天按剂量灌胃给药，对照组给予等体积的蒸馏水，每日一次，连用3天，观察15天。结果见表2。表22-噻吩乙酸对甲1型流感病毒fm1株感染小鼠死亡率的影响组别剂量动物数死亡数平均存活时间(大)存活率(％)对照组-16148.1512.50利巴韦林1组2mg/kg16148.9412.50利巴韦林2组70mg/kg16911.5643.752-噻吩乙酸组2mg/kg16015*100**注：与利巴韦林2组比较*p＜0.05，**p＜0.01利巴韦林是人类临床上常用的广谱抗病毒药物，本实验证明，利巴韦林2mg/kg体重的剂量对小鼠流感没有保护作用，只有70mg/kg体重时才有一定的保护作用，而2-噻吩乙酸2mg/kg体重的剂量则有100％的保护率。另外，实验证实，2-噻吩乙酸按40mg/kg体重的剂量给10只小鼠灌胃，观察14天没见小鼠死亡及及毒性反应。实施例3对猪瘟病的临床疗效实验自2008年以来，发明人共治疗猪瘟患猪(猪瘟病毒感染)156头。1、病例选择选择不食，体温在40℃以上，粪便干燥，用利巴韦林、抗生素治疗无效，病程3天以上，经兽医诊断为猪瘟病且无明显并发症者。2、临床症状初期少食，叫声嘶哑，体温在40.6℃-41.5℃，呈稽留热，精神欠佳，肌肉震颤，喜饮水，粪便干燥，呈球状，有的带血，后期泻稀，舌苔黄腻，结膜充血，鼻盘干燥。随着病情的发展，精神沉郁，背毛桔燥，有的在耳部、四肢下部及腹部出现淤血性紫斑。四肢及全身肌肉较硬，行走摇摆打颤，用利巴韦林、阿莫西林、磺胺类药物及退烧药治疗皆不见效，部分因机体衰竭而死亡，耐过者则长期发育不良而成僵猪。3、体重与发病的关系在156例中，20kg以下的20例，20-50kg的104例，50-75kg的30例、75kg以上2例。由此可见仔猪与架子猪发病率较高，大猪较少。4、疗效判定标准治愈：连续服药1-2个疗程(一个疗程3天)体温降至正常范围，食欲增加，粪便复常，且不出现反复。好转：连续服药1-2个疗程，体温下降，但仍不在正常范围，有食欲或食欲增加，粪便基本正常，停药后病情不在恶化。无效：连续服1-2个疗程后，体温、食欲、粪便的症状变化微小，或病情加重者。5、治疗方法按每公斤体重0.15mg-0.3mg的剂量口服2-噻吩乙酸，可将2-噻吩乙酸溶于水灌服，也可拌料口服，同时给予退烧药，治疗3天为一疗程。6、治疗效果共治疗患猪156头，治愈140头，占89.74％；好转13头，占8.3％；无效3头，占1.92％。有效率为98.04％，治疗过程未发现毒副作用。本实验说明，对于广谱抗病毒药利巴韦林效果不好或无效的猪瘟病毒感染，用2-噻吩乙酸十分敏感。实施例4对猪圆环病毒ii型感染的治疗作用1、一般资料2009年6月，河南省周口市多个猪场60-80日龄保育猪出现不同程度的采食量下降，生长迟缓现象，一些猪表现呼吸困难、腹泻、贫血、发热或皮肤疹斑。剖检病死猪，可见肺脏肿胀，质地坚硬，淋巴结显著肿大、出血，胃肠、肝脏不同程度病变，曾用利巴韦林、阿莫西林、磺胺嘧啶治疗未见疗效。2、治疗经临床诊断，血清学检查确诊为猪圆环病毒ii型感染的患猪72头，按每公斤体重0.15mg-0.2mg剂量的2-噻吩乙酸灌服(制成水溶液)或拌料饲喂，同时给予阿莫西林口服，预防继发性细菌感染，连续服用，3天为一疗程。3、疗效判定标准治愈：用药1-2疗程后，呼吸平稳，粪便、精神、采食、皮肤颜色均恢复正常。好转：用药后症状明显减轻，呼吸、粪便、精神、采食好转。无效：用药后症状不减轻，甚至加重或死亡。4、治疗效果治愈63头，治愈率为87.5％；好转6头，好转率为8.3％；无效3头，无效率4.2％。总有效率为95.8％。治疗期间未发现毒副作用。实验证明，对广谱抗病毒药利巴韦林无效的猪圆环病毒ii型感染用2-噻吩乙酸治疗，效果十分显著。实施例5对h22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用1、材料雌性balb/c小鼠，由河南省医学实验动物中心提供，5-氟尿嘧啶、2-噻吩乙酸由鹤壁泰德生化科技有限公司提供。小鼠肝癌(h22)瘤株由河南大学药学院提供。2.造模取腹腔接种9-10天、生长良好的肝癌h22小鼠，颈椎脱臼处死后，腹部消毒，在无菌条件下，抽取淡黄色的腹水，置无菌容器中。经计数活细胞，活细胞在95％以上，加入无菌生理盐水，调整浓度至1×107个/ml的瘤细胞悬液，于小鼠右前腋下皮下接种0.2ml，接种瘤细胞前用质量百分含量75％乙醇消毒接种部位的皮肤，共接种30只小鼠。3.小鼠分组和给药将30只腋下接种h22肝癌细胞48小时后的小鼠，按体质量随机分为模型组、5-氟尿嘧啶组、2-噻吩乙酸组，每组10只。模型组每日以生理盐水灌胃，每天1次；5-氟尿嘧啶组每公斤体重腹腔注射10mg，每天1次；2-噻吩乙酸组每公斤体重灌胃1.8mg，每天1次，共给药7天，处死小鼠，解剖取出瘤块，计算抑瘤率。抑瘤率＝(模型组小鼠瘤块平均重量-治疗组小鼠瘤块平均重量)/模型组小鼠瘤块平均重量×100％。结果见表3。表32-噻吩乙酸对荷瘤增长的抑制作用组别剂量(mg/kg)平均瘤重量抑瘤率(％)模型组00.98±0.24-5-氟尿嘧啶组100.56±0.21422-噻吩乙酸组1.80.10±0.1689.85-氟尿嘧啶是常用的抗肿瘤药物，其抑瘤率远不如2-噻吩乙酸，两组比较p＜0.01。实施例6对肺癌荷瘤小鼠的抗肿瘤作用1、材料环酰胺市购(ctx，国药准字h12021006)；c57小鼠由湖南斯莱克实验动物有限公司提供，荷lewis肺癌小鼠由中国科学院上海医药工业研究院提供。2、分组与造模荷lewis肺癌小鼠处死后置于超净工作台，腋部去毛，质量百分含量75％乙醇消毒，剪开皮肤取出肿瘤块，用生理盐水冲洗，剪碎碾磨加生理盐水做成细胞悬液，过滤液置离心管中，500rpm离心10分钟后，弃上清液，用生理盐水重复洗涤2次，弃上清液，最后用生理盐水制成细胞悬液，调整肺癌细胞浓度为2×107/ml，成活率＞95％，以0.2ml/只接种于c57小鼠右前腋下，制成实验动物模型。将接种lewis肺癌的c57小鼠随机分为3组，模型组、ctx组、2-噻吩乙酸组，每组10只。3、给药模型组采用同体积的生理盐水灌胃，ctx组腹腔注射，2-噻吩乙酸组用2-噻吩乙酸水溶液灌胃。小鼠接种肿瘤细胞第二天开始给药，共7天。给药结束，脱颈椎处死小鼠，分离肿瘤瘤体，称重，计算抑瘤率(方法同实施例5)。结果见表4。表42-噻吩乙酸对肺癌荷瘤小鼠的治疗作用组别剂量(mg/kg))平均癌重(g)抑瘤率(％)模型组00.712±0.611-ctx组150.518±0.22127.252-噻吩乙酸组1.80.102±0.14885.67ctx是目前临床上常用的抗瘤药物。本实验表明，2-噻吩乙酸的疗效比ctx显著优越，两者比较有极显著差异，p＜0.01。实施例7噻吩衍生物对荷mfc胃癌小鼠的影响1、材料小鼠mfc前胃癌细胞株购自河南省医学科学院。spf级雄性615小鼠70只，体质量(20±2)g，购自河南省医学实验动物中心。5-氟尿嘧啶，2-噻吩甲酸、2-噻吩乙酸，3-(2-噻吩)丙酸、4-(2-噻吩)丁酸、5-(2-噻吩)戊酸均由鹤壁泰德生化科技有限公司提供。2、分组与造模用质量百分含量10％胎牛血清的rpmi-1640培养基，在37℃，体积百分比5％co2，饱和湿度条件下传代培养，最终将细胞悬液稀释为5×106/ml的浓度备用。将70只615小鼠按0.2ml在右前肢腋窝处皮下接种以造模，造模后随机分为模型组、2-噻吩甲酸组、2-噻吩乙酸组、3-(2-噻吩)丙酸组、4-(2-噻吩)丁酸组、5-(2-噻吩)戊酸组、5-氟尿嘧啶组，每组10只。3、给药模型组灌胃给予同体积的蒸馏水，5-氟尿嘧啶组按10mg/kg体重剂量腹腔注射给药，其余各组的药物均制备成水溶液(可用氢氧化钠助溶)，灌胃给药，剂量均为1.8mg/kg。各组在造模后第2天给药，每天1次，共给药7天。给药结束，脱颈椎处死小鼠，分离肿瘤，称重，计算抑瘤率。抑瘤率计算方法同实例5。结果见表5表5噻吩衍生物对荷胃癌小鼠的肿瘤抑制率以上实验结果表明各种噻吩衍生物均比5-氟尿嘧啶抑瘤效果好，与5-氟尿嘧啶组相比，p<0.01。当前第1页12