本发明涉及医药，尤其涉及一种核仁素抑制剂及用于诱导神经干细胞分化的用途。
背景技术：
：核仁素(nucleolin，又称c23)是目前发现的271种核仁蛋白质中含量最多的一种，约占核仁蛋白质总量的10％。核仁素是一种穿梭蛋白，也是一种dna/rna结合蛋白，在不同类型的细胞，它可能存在于不同部位。有研究显示，nucleolin可调控胚胎干细胞和神经干细胞的增殖、分化与凋亡(沉默核仁素可诱导大鼠神经干细胞的分化，南方医科大学学报)。人参皂苷rz1是从蒸制三七中分离得到的一种稀有人参皂苷，其与同样从蒸制三七中分离得到的另外两种稀有人参皂苷rk1、rg5为同分异构体(化学结构式如下)。已有研究发现这三种稀有人参皂苷具有多种药理作用，而且这三种稀有人参皂苷虽然结构非常相似(仅仅为双键位置不同或双键两端的基团顺反式不同)，但是药理作用差异较大。目前尚未见人参皂苷rz1对核仁素表达影响的报道，更未见其用于促进神经干细胞分化的报道。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种核仁素抑制剂及用于诱导神经干细胞分化的用途。为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：人参皂苷rz1在制备抑制神经干细胞的核仁素表达水平的药物中的应用。一种用于抑制神经干细胞的核仁素表达水平的药物组合物，包含所述的人参皂苷rz1，还包含药学上可以接受的载体，制成药学上可以接受的剂型。优选地，所述药学上可以接受的载体包括一种或多种固体、半固体或液体辅料等。优选地，所述药学上可以接受的剂型包括注射剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂等。人参皂苷rz1在制备促进神经干细胞分化的药物中的应用。一种用于促进神经干细胞分化的药物组合物，包含所述的人参皂苷rz1，还包含药学上可以接受的载体，制成药学上可以接受的剂型。优选地，所述药学上可以接受的载体包括一种或多种固体、半固体或液体辅料等。优选地，所述药学上可以接受的剂型包括注射剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂等。本发明的优点：本发明发现人参皂苷rz1可以抑制神经干细胞的核仁素表达水平，进而可以促进神经干细胞分化，因此，人参皂苷rz1可以用于制备抑制神经干细胞的核仁素表达水平的药物和促进神经干细胞分化的药物。附图说明图1是各组细胞中核仁素、map-2和gfap的相对表达水平比较。具体实施方式一、实验方法1、神经干细胞(nsc)培养取孕16d的wistar大鼠，脱臼处死，无菌取出胚胎。置于冰冷的无菌0.01mol/l磷酸盐缓冲液(pbs，ph值7.4)内，取出胚胎大脑皮质，放入预冷dmem/f12培养基中，剔除脑膜及大血管。将皮质剪碎约1mm3大小，加入dmem/f12培养基，用1ml移液器反复吹打，使液体呈均匀悬浊状，75μm筛网过滤，800r/min离心5min，弃上清液，用含2％b27、20μg/legf、20μg/lbfgf的dmem/f12培养基重悬，以5×108/l种植于75cm2培养瓶悬浮培养。每2～3d换液1次，6～8d后收集神经球，用吸管轻柔吹打，机械分散神经球，使之呈单细胞悬液，进行传代。用荧光免疫细胞化学法nestin染色鉴定，阳性细胞胞浆着橙黄色。结果神经球均nestin阳性，胞浆着橙黄色；单个干细胞为圆形或椭圆形，有较短的突起，细胞核为绿色。实验用稳定生长的第2代悬浮神经球。2、分组给药培养诱导分化收集增殖的nsc克隆球稍加吹打，并接种于置有预先包被0.01％多聚赖氨酸的盖玻片的6孔培养板中，使悬浮的神经球贴壁2h后，更换为5％fbs+2％b27的dmem/f12培养液，诱导nsc分化，随机分为4组：人参皂苷rz1组：培养液中还添加10μm人参皂苷rz1；人参皂苷rk1组：培养液中还添加10μm人参皂苷rk1；人参皂苷rg5组：培养液中还添加10μm人参皂苷rg5；溶剂对照组：培养液中还添加等体积溶剂。各组在饱和湿度、37℃、5％co2培养箱培养，每天换液1次，14d后终止培养。3、rt-pcr法测定各组细胞中核仁素、map-2和gfap相对表达水平收集各组细胞，提取细胞总rna，测定rna含量和纯度，然后进行反转录(反转录试剂盒购于美国promega公司)。20μl的反转录体系为：1μgrna添加1μloligodt，配相应体积的无rna酶水，70℃变性5min后置于4℃，然后加入5×primebuffer4μl，mgcl22.4μl，dntp(2.5mmol·l-1)4μl，rnasin(20u)0.5μl，rtase1μl，3.1μl无rna酶水。反转录条件：37℃反应15min，85℃加热5min灭活反转录酶，然后置于4℃。反转录的cdna产物进行pcr反应，反应条件为：94℃变性5min；然后经94℃变性30s，55℃退火30秒，72℃延伸1min，进行30个循环，再72℃延伸5min。1％琼脂糖电泳检测pcr产物。引物序列具体如下：核仁素上游引物序列：5'-ccacttgtccgcttcacac-3'核仁素下游引物序列：5'-accaggagttgctaccaatg-3'map-2上游引物序列：5'-tgaacttccgagagcatgca-3'map-2下游引物序列：5'-ggcgactgtgtgatgatctca-3'gfap上游引物序列：5'-tgccggcttcaaagagactcg-3'gfap下游引物序列：5'-ctgcagttggcggcgatagtc-3'β-actin上游引物序列：5'-tctacaatgagctgcgtgtg-3'β-actin下游引物序列：5'-ggtcaggatcttcatgaggt-3'各mrna含量用相对表达量表示：相对表达量＝目标mrna/β-actinmrna。二、实验结果1、人参皂苷rz1对神经干细胞的核仁素表达水平的影响如表1和图1所示，与溶剂对照组相比，人参皂苷rz1组神经干细胞的核仁素表达水平显著下调，具有显著性差异(p＜0.05)；而人参皂苷rk1组、人参皂苷rg5组神经干细胞的核仁素表达水平与溶剂对照组相比无显著性差异(p＞0.05)。该实验结果证明，人参皂苷rz1可以显著抑制核仁素在神经干细胞中的表达，而其两个结构非常相似的同分异构体rk1、rg5不具有这种作用，人参皂苷rz1为神经干细胞中核仁素的表达抑制剂。2、人参皂苷rz1对神经干细胞分化水平的影响如表1和图1所示，与溶剂对照组相比，人参皂苷rz1组神经干细胞的map-2和gfap表达水平显著升高，具有显著性差异(p＜0.05)；而人参皂苷rk1组、人参皂苷rg5组神经干细胞的map-2和gfap表达水平与溶剂对照组相比无显著性差异(p＞0.05)。已知map-2为神经元细胞的特异性标志物，gfap为星形胶质细胞的特异性标志物，因此，该实验结果可以证明，人参皂苷rz1可以显著促进神经干细胞向神经元和星形胶质细胞分化，而其两个结构非常相似的同分异构体rk1、rg5不具有这种作用，人参皂苷rz1为促进神经干细胞向神经元和星形胶质细胞分化的有效诱导剂。表1各组细胞中核仁素(c23)、map-2和gfap的相对表达量组别c23/β-actinmap-2/β-actingfap/β-actin溶剂对照组1.240.890.83人参皂苷rz1组0.462.872.68人参皂苷rk1组1.170.910.86人参皂苷rg5组1.190.940.83上述实施例证明，人参皂苷rz1可以抑制神经干细胞的核仁素表达水平，进而可以促进神经干细胞分化，因此，人参皂苷rz1可以用于制备抑制神经干细胞的核仁素表达水平的药物和促进神经干细胞分化的药物。本领域技术人员应当知道，上述具体实施方式仅用于解释本发明，本发明的保护范围并不局限于上述具体实施方式。当前第1页12