一种紫杉醇和邻苯基酞嗪酮类BTK抑制剂联合用药物组合物及其应用的制作方法

文档序号:17156609发布日期:2019-03-20 00:05阅读:147来源:国知局

本发明属于医药化学领域,涉及酞嗪酮类btk抑制剂及其应用,具体涉及酞嗪酮类btk抑制剂、其制备方法、含有该类化合物的药物组合物、以及其在治疗布鲁顿酪氨酸激酶相关疾病中的用途。



背景技术:

布鲁顿氨酸激酶(bruton'styrosinekinase,btk)属于tec家族的成员。它由独特的n-端结构域即ph(pleckstrinhomology)结构域、th(techomology)同源区、sh3(srchomology3)结构域、sh2(srchomology2)结构域和催化结构域,也称sh1/tk(srchomologyl/tyrosinekinase)结构域或者激酶结构域组成(akinleyeetal:ibrutinibandnovelbtkinhibitorsinclinicaldevelopment.journalofhematology&oncology2013,6:59)。在b淋巴细胞正常发育过程中,btk基因不同蛋白区域的正确表达在b细胞的功能及多种转导途径中具有关键性作用。

基于btk信号传导通路开发小分子靶向药物为b细胞类肿瘤如白血病、发性骨髓瘤及b细胞类免疫疾病的治疗提供一条全新的途径。btk在自身免疫疾病中的作用的证据已经由btk-缺失型小鼠和btk-充足型小鼠模型试验提供(killp,etal:bruton'styrosinekinasemediatedsignalingenhancesleukemogenesisinamousemodelforchroniclymphocyticleukemia.amjbloodres2013,3(1):71-83.)。在慢性淋巴细胞白血病(cll)小鼠模型中,btk-缺失型小鼠完全废止慢性淋巴细胞白血病,btk过度表达会加速白血病发病,增加死亡率。

目前已知btk抑制剂的选择性不理想,除了抑制btk,还抑制其他多种激酶(如etk,egf,blk,fgr,hck,yes,brk和jak3等),从而产生较多的副作用;同时,btk结合位点发生突变后往往会导致耐药性的产生。因此临床上需要更多的btk抑制剂,用于治疗肿瘤等疾病,同时可以克服此类不良事件。



技术实现要素:

本发明提供以下技术方案:

第一方面,本发明提供的一种紫杉醇和邻苯基酞嗪酮类btk抑制剂联合用药物组合物,包含活性成分和药学上可接受的辅料,所述的活性成分由紫杉醇和式(i)所示的btk抑制剂组成,所述活性成分中紫杉醇和式(i)所示的btk抑制剂的摩尔比为(0.14-0.20):1;其中,所述btk抑制剂,其化学式如式(i)所示,

其中,所述btk抑制剂的制备方法,包括如下步骤:

步骤a:式(7)的化合物取代反应得式(8)的化合物,式(8)的化合物与肼反应得到式(4)的化合物;

步骤b:式(1)的化合物与式(2)的化合物缩合得到式(3)的化合物;

步骤c:式(3)的化合物与式(4)的化合物反应得到式(5)的化合物;

步骤d:式(5)的化合物脱去保护基得到式(6)的化合物;

步骤e:式(6)的化合物与取代的烯酰氯反应得到通式i的化合物,反应路线如下:

优选地,步骤a中,

取二甲氧基甲基苯于反应瓶中,加入四氢呋喃溶解,60℃、氮气保护下,加入s-buli,将反应液在-60℃下搅拌反应;取干冰于反应瓶中,加入四氢呋喃,加入n-buli,氮气保护下搅拌,再加入-60℃下搅拌反应后的反应液,继续搅拌,停止反应,加入水,用浓盐酸调节ph至2,分离有机相,水相用乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,重结晶得到式(8)的化合物;

称取式(8)的化合物、乙酸、肼于反应瓶中,加入异丙醇,氮气保护下,100℃回流反应,停止反应,加入乙酸乙酯、水,萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥,悬干,柱层析纯化得式(4)的化合物。

优选地,步骤b中,取5-氨基-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯和dipea于反应瓶中,加入二氯甲烷,室温搅拌下缓慢滴加氯甲酸邻氯苯酯,滴毕,室温下继续搅拌,停止反应,浓缩反应混合物,加入乙酸乙酯,稀盐酸水溶液和饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩,即得式(3)的化合物。

优选地,步骤c中,取式(4)的化合物、式(3)的化合物于反应瓶中,加入dmf,55℃下反应过夜,停止反应,加入水、二氯甲烷,萃取,分离有机相,水相继续用二氯甲烷萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥,柱层析纯化得式(5)的化合物。

优选地,步骤d中,取式(5)的化合物于反应瓶中,加入三氟乙酸,室温下搅拌,减压浓缩至干,加入乙酸乙酯,依次用磷酸氢二钠水溶液和饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩得式(6)的化合物。

优选地,步骤e中,取式(6)的化合物于反应瓶中,加入二氯甲烷100ml溶解,0℃下加入diea,搅拌后,继续在0℃下滴加1-氯丙烯酰氯,滴毕,室温搅拌,停止反应,加水,二氯甲烷萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥,柱层析纯化得式(i)的化合物。

本发明还提供了一种邻苯基酞嗪酮类btk抑制剂联合用药物组合物,包含活性成分和药学上可接受的辅料,所述的活性成分由紫杉醇、来那度胺、式(i)所示的btk抑制剂组成,所述活性成分中紫杉醇、来那度胺、式(i)所示的btk抑制剂的摩尔比为(0.14-0.20):(0.08-0.12):1。

可以将本发明的药物组合物与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂,以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括,但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制剂可以通过任何途径施用,例如通过输注或推注,通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型,具体而言,包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备,且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。

该药物组合物可以在制备预防和/或治疗与布鲁顿酪氨酸激酶相关的疾病药物中的应用,包括向布鲁顿酪氨酸激酶过度表达的肿瘤疾病患者施用本发明通式(i)的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药或者包含本发明通式(i)的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药的药物组合物,以有效抑制布鲁顿酪氨酸激酶过度表达,阻止病程进展。

具体实施方式

实施例12h-酞嗪-1-酮的制备

步骤1:称取二甲氧基甲基苯(500mmol)于反应瓶中,加入四氢呋喃(800ml)溶解,60℃、氮气保护下,加入s-buli(565mmol),将反应液在-60℃下搅拌1h。

步骤2:称取干冰(50mmol)于反应瓶中,加入四氢呋喃(200ml),加入n-buli(5ml),氮气保护下搅拌2h后,加入步骤1的混合物,继续搅拌30min,停止反应,加入水1000ml,用浓盐酸调节ph至2,分离有机相,水相用乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,重结晶得到2-二甲氧基甲基苯甲酸。

步骤3:称取步骤2所得物(400mmol)、乙酸(93mmol)、肼(600mmol)于反应瓶中,加入异丙醇300ml,氮气保护下,100℃回流反应2h,停止反应,加入乙酸乙酯300ml,水500ml,萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥,悬干,柱层析纯化得标题化合物。

esi–ms:[m+h]+m/z147。

实施例2(3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯-5-基)-氨基甲酸邻氯苯酯的制备

称取5-氨基-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯(50mmol)和dipea(100mmol)于反应瓶中,加入二氯甲烷300ml,室温搅拌下缓慢滴加和氯甲酸邻氯苯酯(51mmol),滴毕,室温下继续搅拌1h,停止反应,浓缩反应混合物,加入乙酸乙酯70ml,稀盐酸水溶液(0.2-0.3n)和饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩得(3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯-5-基)-氨基甲酸对氯苯酯,直接用于下一步,esi–ms:[m+h]+m/z403。

实施例3(3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯-5-基)-氨基甲酸-2-(2h)-酞嗪-1-酮基苯酯的制备

称取2h-酞嗪-1-酮(150mmol)、(3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯-5-基)-氨基甲酸邻氯苯酯(195mmol)于反应瓶中,加入dmf100ml,55℃下反应过夜,停止反应,加入水100ml,二氯甲烷200ml,萃取,分离有机相,水相继续用二氯甲烷萃取(3*50ml),合并有机相,无水硫酸钠干燥,柱层析纯化得标题化合物。

esi–ms:[m+h]+m/z513。

实施例4[1-氯-2(1h)-丙烯酰基-3,4-二氢异喹啉-5-基]-氨基甲酸-2-[(2h)-酞嗪-1-酮基]苯酯的制备

称取(3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯-5-基)-氨基甲酸-2-[(2h)-酞嗪-1-酮基]苯酯(50mmol)于反应瓶中,加入三氟乙酸20ml,室温下搅拌1h,减压浓缩至干,加入乙酸乙酯80ml,依次用1.5m磷酸氢二钠水溶液和饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,减压浓缩得中间体(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)氨基甲酸-2-(2h)-酞嗪-1-酮基苯酯,直接投下一步。

称取中间体(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)氨基甲酸-2-(2h)-酞嗪-1-酮基苯酯(20mmol)于反应瓶中,加入二氯甲烷100ml溶解,0℃下加入diea(40mmol),搅拌30min后,继续在0℃下滴加1-氯丙烯酰氯(20mmol),滴毕,室温搅拌3h,停止反应,加水100ml,二氯甲烷萃取(3*50ml),合并有机相,无水硫酸钠干燥,柱层析纯化得标题化合物。

1hnmr(600mhz,cdcl3)(δ,ppm):9.50(s,1h),8.25~8.23(m,1h),8.10(s,1h),8.05~8.04(m,1h),7.79~7.77(m,3h),7.70~7.69(m,1h),7.24~7.20(m,5h),6.85~6.81(m,1h),4.23(s,2h),3.61~3.59(m,2h),3.13~3.11(m,2h).

esi–ms:[m+h]+m/z501。

实验例1本发明的化合物体外激酶活性评价

以上实施例制备的本发明的化合物,每个化合物用dmso稀释至10mm后,依次稀释至1um、100nm、10nm、1nm、0.1nm、0.01nm。

取每个浓度的化合物溶液10μl至96孔板中,加入90μl1×激酶缓冲液(50mmhepes,ph7.5,0.0015%brij-35,10mmmgcl2,2mmdtt,临用前配制);同时设立dmso对照组和无酶活对照组,均仅含10μldmso和90μl1×激酶缓冲液。各组在室温下混匀10min,然后分别转移5μl至384孔板中;将激酶btk溶于1×激酶缓冲液,配制成2.5×激酶溶液,然后转移10μl2.5×激酶溶液至上述含各浓度化合物的384孔板中;dmso对照组加入10μl2.5×激酶溶液;无酶活对照组加入10μl不含激酶的1×激酶缓冲液。室温下孵育10min;将fam标记的多肽和atp溶于1×激酶缓冲液,配制成2.5×底物溶液,然后转移10μl2.5×底物溶液至上述384孔板中,28℃孵育1hr;各孔中加入25μl(100mmhepes,ph7.5,0.015%brij-35,0.2%coatingreagent#3,50mmedta临用前配制),终止液终止反应;置于labchipezreader上读取转化率数据,并计算抑制率i%,计算公式为i%=(max-conversion)/(max-min)×100,其中max为dmso对照组的转化率,min为无酶活对照组的转化率,conversion为化合物处理组的转化率,数据经xlfit处理,拟合得ic50。ic50值表示与未加化合物处理组相比,化合物抑制50%酶活力时对应的化合物浓度。ic50结果见表1。

表1

实验例2本发明的化合物体外romas细胞活性评价

取处于指数生长期状态良好的raji细胞一瓶,收集细胞,低速台式离心机,1500转/min,离心3min。弃上清,用移液器加入5ml完全培养基进行细胞重悬。使用细胞计数仪计数,完全培养基进行稀释,调整细胞密度至5×104个/ml。使用排枪接种于96孔板上,100μl/孔,置恒温co2培养箱中培养24小时。使用纳升加样仪进行化合物加样,72小时后,加cck-8,10μl/孔,2小时后envision酶标仪450nm处检测其吸光值,计算抑制率,并计算ic50,结果见表2.

表2

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