本发明属于医药化学领域，涉及酞嗪酮类btk抑制剂及其应用，具体涉及酞嗪酮类btk抑制剂、其制备方法、含有该类化合物的药物组合物、以及其在治疗布鲁顿酪氨酸激酶相关疾病中的用途。
背景技术：
布鲁顿氨酸激酶(bruton'styrosinekinase，btk)属于tec家族的成员。它由独特的n-端结构域即ph(pleckstrinhomology)结构域、th(techomology)同源区、sh3(srchomology3)结构域、sh2(srchomology2)结构域和催化结构域，也称sh1/tk(srchomologyl/tyrosinekinase)结构域或者激酶结构域组成(akinleyeetal：ibrutinibandnovelbtkinhibitorsinclinicaldevelopment.journalofhematology&oncology2013，6：59)。在b淋巴细胞正常发育过程中，btk基因不同蛋白区域的正确表达在b细胞的功能及多种转导途径中具有关键性作用。
基于btk信号传导通路开发小分子靶向药物为b细胞类肿瘤如白血病、发性骨髓瘤及b细胞类免疫疾病的治疗提供一条全新的途径。btk在自身免疫疾病中的作用的证据已经由btk-缺失型小鼠和btk-充足型小鼠模型试验提供(killp，etal：bruton'styrosinekinasemediatedsignalingenhancesleukemogenesisinamousemodelforchroniclymphocyticleukemia.amjbloodres2013，3(1)：71-83.)。在慢性淋巴细胞白血病(cll)小鼠模型中，btk-缺失型小鼠完全废止慢性淋巴细胞白血病，btk过度表达会加速白血病发病，增加死亡率。
目前已知btk抑制剂的选择性不理想，除了抑制btk，还抑制其他多种激酶(如etk，egf，blk，fgr，hck，yes，brk和jak3等)，从而产生较多的副作用；同时，btk结合位点发生突变后往往会导致耐药性的产生。因此临床上需要更多的btk抑制剂，用于治疗肿瘤等疾病，同时可以克服此类不良事件。
技术实现要素：
本发明提供以下技术方案：
第一方面，本发明提供的一种紫杉醇和邻苯基酞嗪酮类btk抑制剂联合用药物组合物，包含活性成分和药学上可接受的辅料，所述的活性成分由紫杉醇和式(i)所示的btk抑制剂组成，所述活性成分中紫杉醇和式(i)所示的btk抑制剂的摩尔比为(0.14-0.20)：1；其中，所述btk抑制剂，其化学式如式(i)所示，
其中，所述btk抑制剂的制备方法，包括如下步骤：
步骤a：式(7)的化合物取代反应得式(8)的化合物，式(8)的化合物与肼反应得到式(4)的化合物；
步骤b：式(1)的化合物与式(2)的化合物缩合得到式(3)的化合物；
步骤c：式(3)的化合物与式(4)的化合物反应得到式(5)的化合物；
步骤d：式(5)的化合物脱去保护基得到式(6)的化合物；
步骤e：式(6)的化合物与取代的烯酰氯反应得到通式i的化合物，反应路线如下：
优选地，步骤a中，
取二甲氧基甲基苯于反应瓶中，加入四氢呋喃溶解，60℃、氮气保护下，加入s-buli，将反应液在-60℃下搅拌反应；取干冰于反应瓶中，加入四氢呋喃，加入n-buli，氮气保护下搅拌，再加入-60℃下搅拌反应后的反应液，继续搅拌，停止反应，加入水，用浓盐酸调节ph至2，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，重结晶得到式(8)的化合物；
称取式(8)的化合物、乙酸、肼于反应瓶中，加入异丙醇，氮气保护下，100℃回流反应，停止反应，加入乙酸乙酯、水，萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，悬干，柱层析纯化得式(4)的化合物。
优选地，步骤b中，取5-氨基-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯和dipea于反应瓶中，加入二氯甲烷，室温搅拌下缓慢滴加氯甲酸邻氯苯酯，滴毕，室温下继续搅拌，停止反应，浓缩反应混合物，加入乙酸乙酯，稀盐酸水溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，即得式(3)的化合物。
优选地，步骤c中，取式(4)的化合物、式(3)的化合物于反应瓶中，加入dmf，55℃下反应过夜，停止反应，加入水、二氯甲烷，萃取，分离有机相，水相继续用二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得式(5)的化合物。
优选地，步骤d中，取式(5)的化合物于反应瓶中，加入三氟乙酸，室温下搅拌，减压浓缩至干，加入乙酸乙酯，依次用磷酸氢二钠水溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得式(6)的化合物。
优选地，步骤e中，取式(6)的化合物于反应瓶中，加入二氯甲烷100ml溶解，0℃下加入diea，搅拌后，继续在0℃下滴加1-氯丙烯酰氯，滴毕，室温搅拌，停止反应，加水，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得式(i)的化合物。
本发明还提供了一种邻苯基酞嗪酮类btk抑制剂联合用药物组合物，包含活性成分和药学上可接受的辅料，所述的活性成分由紫杉醇、来那度胺、式(i)所示的btk抑制剂组成，所述活性成分中紫杉醇、来那度胺、式(i)所示的btk抑制剂的摩尔比为(0.14-0.20)：(0.08-0.12)：1。
可以将本发明的药物组合物与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。
该药物组合物可以在制备预防和/或治疗与布鲁顿酪氨酸激酶相关的疾病药物中的应用，包括向布鲁顿酪氨酸激酶过度表达的肿瘤疾病患者施用本发明通式(i)的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药或者包含本发明通式(i)的化合物或其药学可接受的盐、异构体、溶剂合物、结晶或前药的药物组合物，以有效抑制布鲁顿酪氨酸激酶过度表达，阻止病程进展。
具体实施方式
实施例12h-酞嗪-1-酮的制备
步骤1：称取二甲氧基甲基苯(500mmol)于反应瓶中，加入四氢呋喃(800ml)溶解，60℃、氮气保护下，加入s-buli(565mmol)，将反应液在-60℃下搅拌1h。
步骤2：称取干冰(50mmol)于反应瓶中，加入四氢呋喃(200ml)，加入n-buli(5ml)，氮气保护下搅拌2h后，加入步骤1的混合物，继续搅拌30min，停止反应，加入水1000ml，用浓盐酸调节ph至2，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，重结晶得到2-二甲氧基甲基苯甲酸。
步骤3：称取步骤2所得物(400mmol)、乙酸(93mmol)、肼(600mmol)于反应瓶中，加入异丙醇300ml，氮气保护下，100℃回流反应2h，停止反应，加入乙酸乙酯300ml，水500ml，萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，悬干，柱层析纯化得标题化合物。
esi–ms:[m+h]+m/z147。
实施例2(3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯-5-基)-氨基甲酸邻氯苯酯的制备
称取5-氨基-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯(50mmol)和dipea(100mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷300ml，室温搅拌下缓慢滴加和氯甲酸邻氯苯酯(51mmol)，滴毕，室温下继续搅拌1h，停止反应，浓缩反应混合物，加入乙酸乙酯70ml，稀盐酸水溶液(0.2-0.3n)和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得(3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯-5-基)-氨基甲酸对氯苯酯，直接用于下一步，esi–ms:[m+h]+m/z403。
实施例3(3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯-5-基)-氨基甲酸-2-(2h)-酞嗪-1-酮基苯酯的制备
称取2h-酞嗪-1-酮(150mmol)、(3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯-5-基)-氨基甲酸邻氯苯酯(195mmol)于反应瓶中，加入dmf100ml，55℃下反应过夜，停止反应，加入水100ml，二氯甲烷200ml，萃取，分离有机相，水相继续用二氯甲烷萃取(3*50ml)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得标题化合物。
esi–ms:[m+h]+m/z513。
实施例4[1-氯-2(1h)-丙烯酰基-3,4-二氢异喹啉-5-基]-氨基甲酸-2-[(2h)-酞嗪-1-酮基]苯酯的制备
称取(3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯-5-基)-氨基甲酸-2-[(2h)-酞嗪-1-酮基]苯酯(50mmol)于反应瓶中，加入三氟乙酸20ml，室温下搅拌1h，减压浓缩至干，加入乙酸乙酯80ml，依次用1.5m磷酸氢二钠水溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得中间体(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)氨基甲酸-2-(2h)-酞嗪-1-酮基苯酯，直接投下一步。
称取中间体(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)氨基甲酸-2-(2h)-酞嗪-1-酮基苯酯(20mmol)于反应瓶中，加入二氯甲烷100ml溶解，0℃下加入diea(40mmol)，搅拌30min后，继续在0℃下滴加1-氯丙烯酰氯(20mmol)，滴毕，室温搅拌3h，停止反应，加水100ml，二氯甲烷萃取(3*50ml)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得标题化合物。
1hnmr(600mhz,cdcl3)(δ,ppm):9.50(s,1h),8.25～8.23(m,1h),8.10(s,1h),8.05～8.04(m,1h),7.79～7.77(m,3h),7.70～7.69(m,1h),7.24～7.20(m,5h),6.85～6.81(m,1h),4.23(s,2h),3.61～3.59(m,2h),3.13～3.11(m,2h).
esi–ms:[m+h]+m/z501。
实验例1本发明的化合物体外激酶活性评价
以上实施例制备的本发明的化合物，每个化合物用dmso稀释至10mm后，依次稀释至1um、100nm、10nm、1nm、0.1nm、0.01nm。
取每个浓度的化合物溶液10μl至96孔板中，加入90μl1×激酶缓冲液(50mmhepes,ph7.5,0.0015％brij-35,10mmmgcl2,2mmdtt，临用前配制)；同时设立dmso对照组和无酶活对照组，均仅含10μldmso和90μl1×激酶缓冲液。各组在室温下混匀10min，然后分别转移5μl至384孔板中；将激酶btk溶于1×激酶缓冲液，配制成2.5×激酶溶液，然后转移10μl2.5×激酶溶液至上述含各浓度化合物的384孔板中；dmso对照组加入10μl2.5×激酶溶液；无酶活对照组加入10μl不含激酶的1×激酶缓冲液。室温下孵育10min；将fam标记的多肽和atp溶于1×激酶缓冲液，配制成2.5×底物溶液，然后转移10μl2.5×底物溶液至上述384孔板中，28℃孵育1hr；各孔中加入25μl(100mmhepes,ph7.5,0.015％brij-35,0.2％coatingreagent#3，50mmedta临用前配制)，终止液终止反应；置于labchipezreader上读取转化率数据，并计算抑制率i％，计算公式为i％＝(max-conversion)/(max-min)×100，其中max为dmso对照组的转化率，min为无酶活对照组的转化率，conversion为化合物处理组的转化率，数据经xlfit处理，拟合得ic50。ic50值表示与未加化合物处理组相比，化合物抑制50％酶活力时对应的化合物浓度。ic50结果见表1。
表1
实验例2本发明的化合物体外romas细胞活性评价
取处于指数生长期状态良好的raji细胞一瓶，收集细胞，低速台式离心机，1500转/min，离心3min。弃上清，用移液器加入5ml完全培养基进行细胞重悬。使用细胞计数仪计数，完全培养基进行稀释，调整细胞密度至5×104个/ml。使用排枪接种于96孔板上，100μl/孔，置恒温co2培养箱中培养24小时。使用纳升加样仪进行化合物加样，72小时后，加cck-8，10μl/孔，2小时后envision酶标仪450nm处检测其吸光值，计算抑制率，并计算ic50，结果见表2.
表2