专利名称：4-氨基-17β-(环丙氧基)雄-4-烯-3-酮，4-氨基-17β-(环丙氨基)雄-4-烯-3-酮及相关化 ...的制作方法
类固醇C17，20裂解酶将具有2个碳侧链的类固醇中的17—20碳—碳键在17β—碳位置裂解，得到形成睾酮、5α—二氢睾酮和雌激素(主要是雌酮和雌二醇)的重要前体分子。因此抑制这种酶的化合物可以用于抑制所述前体的形成，从而适用于治疗各种雄激素和雌激素疾病。引入这种酶抑制剂的治疗不限于前体的分子的起源，例如目前已知的各种器官摘除技术。例如，睾丸切除术会有放地减少性腺雄激素，而对肾上腺雄激素的产生没有显著影响。此外，与那些不仅仅影响具体症状、还引起必需长期依赖替代疗法的永久性内分泌缺损的广谱疗法不同的是，这种酶治疗法更多地集中在直接激素失调有关的治疗方面，据信所述的直接激素失调可对疾病产生应答。
还知道某些类型的乳腺癌是雌激素依赖性的。还使用肾上腺切除术、卵巢切除术和垂体切除术以及使肿瘤消退的非手术技术。已经表明给患有晚期乳腺癌的患者施用雌激素生物合成酶抑制剂显著降低了血浆雌二醇的含量，并且改善了疗效，至少相当于肾上腺切除术的疗效。(Jean Van Wauve and Paul A.J.Janssen，Journal ofMedicinal Chemistry，32，102231—2239)。
产生于肾上腺实质上皮中的前列腺癌或者肿瘤组织疾病是男性中最常见的一种恶性肿瘤，并且是所有恶性癌中癌症死亡率最高的一种。已知患有转移前列腺癌的患者对激素疗法有阳性应答。据Cookson和Sarosdy报道，雄激素切除的阳性有益应答在所有的受试患者中高达60％—80％。(Cookson和Sarosdy，M.F.，South Med.J871—6)。
尤其是，C17，20裂解酶抑制剂适用于治疗下列疾病激素依赖性前列腺癌、前列腺增生、男性化、由21—羟化酶缺乏引起的先天性肾上腺增生、多毛症、激素依赖性乳腺癌、与C17，20裂解酶活性升高有关的多囊卵巢综合症以及其它肿瘤组织疾病如子宫内膜癌、肝细胞癌和肾上腺癌。
存在于哺乳动物组织包括皮肤、雄性生殖器和前列腺中的类固醇5α—还原酶将睾酮(17β—羟基—雄—4—烯—3—酮)催化转化为二氢睾酮或DHT(17β—羟基—5α—雄—3—酮)，后者也称作双氢睾酮。DHF是比睾酮更有效的雄激素，并且可以在某些组织(特别是个导生长的)中用作目的器官效应物(effecter)。DHT可以通过5α—还原酶的作用在某些组织中形成。在雄激素依赖性疾病如良性前列腺增生和前列腺癌、包括激素依赖性癌的治疗中，非常需要DHF抑制剂。
睾酮自身转化为DHT可能与各种前列腺疾病有关，特别是当DHT含量过高时。例如皮肤中DHT含量高与痤疮(例如普通痤疮)的发病机理有关。
既能抑制C17，20裂解酶又能抑制5α—还原酶的药物不仅仅抑制DHT产生，还抑制睾酮形成。在主要雄激素甾类激素的抑制作用中，这些化合物加强了在雄激素疗法中的应用。
本发明涉及4—氨基—17—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮、4—氨基—17—(环丙氨基)雄—4—烯—3—酮和相关化合物以及这些化合物通过抑制C17—20裂解酶和/或5α—还原酶治疗疾病的用途，所述疾病包括雄激素和雌激素介导的疾病，例如良性前列腺增生、雌激素依赖性乳腺癌和雄激素介导的前列腺癌。特别是，本发明涉及通式如下的一组化合物及其可药用的盐 其中A是O或NH，每个R独立地选自氢和C1—C4低级烷基；每个X独立地选自氢、卤素和甲基；并且虚线是指可有可无的双键。优选的化合物是那些其中R和X是氢的化合物。
本文所用术语“C1—C4低级烷基”是指1—4个碳原子的直链或支链烃基。例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基和叔丁基等。
本文所用术语“可药用的盐”是本领域专业人员容易确定的，它是指对患者没有明显的毒性作用并且具有所需的药物加工和制剂特性的酸加成盐。这些盐可以是无机的或有机的，并且可以是水合的或者基本无水的。形成合适的盐的无机酸的实例包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸和金属盐如正磷酸一氢钠和硫酸氢钾。形成合适的盐的有机酸的实例包括一、二和三羧酸。这些酸的说明性实例是例如乙酸、羟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、苯甲酸、羟基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水杨酸、2—苯氧基苯甲酸和磺酸如甲磺酸和2—经基乙磺酸。
由下式的适合的4，5—环氧化合物开始制备本发明化合物 其中R、X和虚线如上所定义。为了得到在6一位不含双键的本发化合物，在催化量的硫酸存在下、在惰性溶剂如二甲基亚砜中，将所述4，5—环氧化合物与叠氮化钠反应。在约60℃加热反应混合物，得到相应的4—叠氮基—4—烯。然后在含水惰性溶剂中将该叠氮基化合物与三苯膦一起加热，得到所需的氨基化合物。含水四氢呋喃是适用于该反应的一个例子。
为了得到本发明的4—氨基—4，6—二烯化合物，在惰性溶剂如二甲基亚砜中，将上述环氧化合物与叠氮化钠反应。反应在催化量的强酸如硫酸存在下、加热至100℃进行。不需分离任何中间体，但是显然环氧化物首先开环得到4—叠氮基—4—烯。在所用的反应条件下，叠氮化物失去氮，形成putative azirine，此化合物开环得到所需的4—氨基—4，6—二烯。
通过用30％过氧化氢水溶液将适合的相应4—烯碱催化环氧化，得到上述用作原料的4，5—环氧化合物。对于那些在1—位含有双键的的化合物来说，更便于在形成环氧化物之后引入不饱和作用。因此，例如用二氯二氰基苯醌处理4，5—环氧3—酮，得到相应的A1环氧化合物。上述获得的环氧产物一般是α—和β—环氧化物的混合物，β—环氧化物是主要的产物。总之，按照前面所述的方法，将环氧化物与叠氮化钠反应，得到所需的4—氨基产物。
或者，通过将适合的4—硝基，4—烯甾族化合物还原成所需的4—氨基类固醇，可以得到本发明的化合物。4—硝基—4—烯化合物可以通过下述方法得到在适合的条件下、在足以产生热力二烯醇酸盐的条件下将适合的类固醇与强碱反应，然后用任何适合的硝化剂如硝酸异丙酯进行硝化。然后采用任何已知的方法例如化学或催化方法使4—硝基化合物还原，得到所需的4—氨基—4—烯类固醇。
本发明化合物适于用作类固醇C17—20裂解酶和5α—还原酶抑制剂，因此可以抑制肾上腺类固醇包括睾酮的形成。因此，它们适用于治疗各种肾上腺依赖性疾病。作为C17—20裂解酶抑制剂，它们还适用于治疗各种雌激素依赖性疾病。因此，本发明还包括治疗雄激素和/或雌激素依赖性疾病的方法，该方法包括给患有这种疾病的患者施用酶抑制有效量的本发明化合物。在本文中所述的患者是指温血动物，包括人、灵长目、狗、牛、猫、马、绵羊、小鼠、大鼠和猪。
尤其是，作为雄激素抑制剂，本发明化合物适用于治疗前列腺癌包括雄激素依赖性前列腺癌、男性化、雄激素脱发、皮脂溢和妇女多毛症。由于本发明化合物还是5α—还原酶抑制剂，它们尤其适用于治疗二氢睾酮(DHT)介导的疾病，例如良性前列腺增生、雄激素脱发、皮脂溢、妇女多毛症、多囊卵巢综合征和痤疮包括普通痤疮。
由于本发明化合物能够抑制类固醇C17，20裂解酶(该裂解酶是雌激素生物合成途径中的一种成分)，因此它们可以抑制雌激素的生物合成。结果，本发明化合物可以用作抗生育剂以防止雌性排卵或者植入，并且减少雄性的交配行为，其中芳构化是这种行为必需的。由于本发明化合物可以降低循环雌激素水平，它们可以有效地防止生物活性雌激素影响内分泌肿瘤。此外，由于本发明化合物可以降低能够内源性合成雌激素的肿瘤中雌激素的生物合成，因此本发明化合物能够使乳腺癌包括转移瘤减轻。再者，本发明化合物适用于治疗卵巢瘤、子宫瘤和胰腺癌以及例如乳溢、McCume—Albright综合征、良性乳腺癌和子宫内膜异位等疾病。作为C17，20裂解酶抑制剂，该化合物还适用于治疗其它肿瘤组织疾病如子宫内膜癌、肝细胞癌和肾上腺癌。
采用类固醇C17，20裂解酶的微粒体制剂，由人体或实验动物实验确定本发明化合物作为类固醇C17，20裂解酶抑制剂的活性。由治疗睾丸切除术获得用于上述目的的人体实验。具体地，从人、cynomolgus猴、狗、大鼠或无胸腺裸鼠睾丸组织分离微粒体。将实验化合物溶于二甲基亚砜中，并用0.05M磷酸钾缓冲液稀释，得到所需浓度的实验化合物。用于人、猴和狗裂解酶分析的磷酸钾缓冲液的pH为7.4，用于大鼠和无胸腺裸鼠裂解酶分析的磷酸钾缓冲液的pH为7.2。每个分析在0.2ml总体积中还包括1mM NADPH、5mM葡糖—6—磷酸、1IU/ml葡糖—6—磷酸脱氢酶(NADPH再生系统)和微粒体蛋白。对照分析含有包括二甲基亚砜在内的所有成分，但是不含有实验化合物。双份进行所有分析。微粒测定时间依赖性的C17，20裂解酶失活，将实验化合物与20—60μg/ml微粒体蛋白、缓冲液和上述NADPH再生系统于34℃培养0—40分钟。然后取出各等份样品(180μl)，并通过下述方法进行酶活性分析将其加入氚标记的类固醇底物和未标记的类固醇底物中，使总的分析体积达到200μl，然后在34℃培养6分钟。为了测定实验化合物的可逆抑制作用，通过加入底物引发反应。用于人、猴和狗裂解酶的放射标记底物是11.2Ci/mmole、每一分析0.2μCi总体活性的[7—3H]—17α—羟基孕烯醇酮。加入未标记的17α—羟基孕烯醇酮使人和猴酶的总浓度达到1.0μM或0.3μM，使狗酶的总浓度达到0.08μM。对于人、猴和狗裂解酶来说，17α—羟基孕烯醇酮的Km值分别为0.30μM、0.11μM和0.06μM。用于啮齿动物酶的放射标记底物是[1，2—3H]—17α—羟基孕酮(40—57Ci/mmole、每一分析0.2μCi总体活性)。加入未标记的17α—羟基孕酮使大鼠酶(Km＝0.1μM)的总浓度达到0.1μM，使无胸腺裸鼠酶分析的总浓度达到0.03μM(Km＝0.03μM)。总的分析体积是200μl。全部分析在34℃培养6分钟。通过加入5ml氯仿∶甲醇(2∶1)终止每一反应。此时还加入代表底物和产物的载体类固醇和0.8ml水。用于人、猴和狗裂解酶分析的载体类固醇是17α—羟基孕烯醇酮、去氢表雄酮和雄烯二醇。用于啮齿动物裂解酶分析的载体类固醇是17α—羟基孕酮、雄烯二酮和睾酮。采用Moore和Wilson的方法(Methods in Enzymol.，eds.O′Malley，B.W.和Hardman，J.G.36，1975，第466—474页)萃取类固醇，用氮气蒸发含有类固醇的有机相，残余物溶于18％四氢呋喃(v/v)的己烷溶液中，在Si60(5um)柱(250×4mm)上、用在己烷中的18—22％四氢呋喃(v/v)梯度洗脱，经HPLC分离类固醇。用Radiomatic Model HS Flo—One检测仪测量类固醇峰的放射性。
每一培养物的酶活性由底物转化为产物的百分数计算，所得结果以对照的抑制百分数表示。通过在合适的计算机程序中将这些数据设置为两个参数的等式，测定IC50值。通过Kitz—Wilson印迹图解分析，测定时间依赖性抑制剂的Ki和Kinact。在上述方法中，当使用人裂解酶对本发明化合物进行实验时，得到下列结果
表1人，狗，大鼠和裸鼠裂解酶的酶抑制作用
注14—氨基—17β—(环丙氧基)—雄—4，6—二烯—3—酮24—氨基—17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮使用cynomolgus猴C17，20裂解酶得到的4—氨基—17β—环丙氧基—雄—4—烯—3—酮的Ki为286nm，Kinact为0.0007秒-1。类似地，4—氨基—17β—环丙氧基—雄—4，6—二烯—3—酮的Ki为339nm，Kinact为0.0009秒-1。
采用由实验前列腺组织得到的5α—还原酶的微粒体制剂，测定本发明化合物作为类固醇5α—还原酶抑制剂的活性。具体来说，从cynomolgus猴前列腺组织中分离微粒体。在使用该样品前测定微粒体制剂的蛋白浓度。cynomolgus猴前列腺5α—还原酶活性的每一分析含有0.1M磷酸钾—柠檬酸钠缓冲液(K—Na缓冲液，1∶1，pH5.6)、0.1％牛血清白蛋白(w/v)、1.0mM EDTA钠盐、7—96μg微粒体蛋白、1.0mM NADPH、5.0mM葡糖—6—磷酸、1IU/ml葡糖—6—磷酸脱氢酶、[1，2—3H]—睾酮(0.15μCi)、未标记的睾酮以达到所需的底物浓度、和抑制剂，该抑制剂溶解于二甲基亚砜(DMSO)中、然后用K—Na缓冲液稀释以使最终分析浓度达到0.1％(v/v)DMSO。在对照分析中使用不含抑制剂的同样的缓冲液和DMSO。由含有除酶以外的所有成分的分析测定基底放射性。该分析进行两份。通过加入睾酮引发反应，并在Dubnoff振摇培养器中于25℃培养20分钟。在加入睾酮的同时加入有抑制作用的实验化合物。分析总体积为100μl。
加入5ml氯仿—甲醇(2∶1)和0.9ml水终止5α—还原酶的反应。以各自2.5μg睾酮、二氢睾酮和3，17—雄烷二醇的形式加入载体类固醇。然后按照Moore和Wilson的方法(Methods in Enzy-mology，O′Malley，B.W.和Hardman，J.G.eds.，36，1975，第466—474页)萃取类固醇代谢物。用氮气蒸发含有类固醇的有机相，残余物溶于3％(v/v)异丙醇的己烷溶液中。在LiCrosorbDIOL衍生的硅胶柱(10μm；4×250mm)上、用在己烷中的3—7.5％异丙醇梯度洗脱、然后用75％(v/v)异丙醇的己烷溶液洗脱，经正相HPLC分离类固醇。用PackardRadiomatic Model HS Flo—One检测仪测量类固醇峰的放射性。用6种浓度的抑制剂得到IC50值，用4种浓度的抑制剂测定Ki值。将这些试验数据设置为合适的两参数计算机模式，以测定IC50值和Ki值。
在这些条件下该分析与30分钟的时间成线性。为了测定IC50值，使用Km水平的单一浓度睾酮。睾酮浓度在0.5Km至8Km的范围内变化，以测定抑制机理和Ki值。在多重试验中测定的睾酮Km值对于cynomolgus 5α—还原酶来说为0.025μM—0.091μM。
采用对上述cynomolgus猴5α—还原酶所用的方法，得到4—氨基—17β—环丙氧基—雄—4—烯—3—酮的IC50值为7.4nM，Ki值为7.8±0.7nm。类似地，4—氨基—17β—环丙氧基—雄—4，6—二烯—3—酮的1C50值为2.8nM。
本发明化合物作为治疗前列腺癌的治疗剂的实用性通过HoebnW.等(Prostrate 195—104(1980)；和Van Steenbrugge，J.J.等(Urology 131812—817(1984)所述的体内肿瘤模型得到证实。在此模型中，人前列腺肿瘤异种移植物在无胸腺小鼠中生长。肿瘤可连续移植、对雄激素应答、缓慢生长(即20—30天肿瘤体积达到2倍)，并且适当分化人前列腺癌。在18天的半衰期切除雄激素后，这些肿瘤消退(van Weerden，W.M.等，Prostate 23149—164(1993))。
上述雄激素依赖性人前列腺癌的肿瘤模型用于评估每日口服30)—100mg/kg/天剂量的4—氨基—17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮进行治疗后对前列腺肿瘤生长的抑制作用(见表2)。进行两个对照组试验，其中一组仅给予赋形剂，另一组切除双侧生殖器。使用计数测径器每星期测量肿瘤体积，用下列公式计算V(cm3)＝d1×(d2)2/2，其中d1是长度，d2是宽度。将0周时赋形剂对照组的平均肿瘤体积设为100％，肿瘤体积的相对百分变化以此为基础。
表2人前列腺肿瘤生长的抑制作用
—肿瘤体积(mm3)—与开始计时时的赋形剂对照相比的相对百分肿瘤体积时间(周
在表2中，生殖器切除对照组小鼠产生了PC—82前列腺肿瘤的雄激素依赖性，而在每日口服4—氨基—17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮进行治疗后这些小鼠延长了对人前列腺肿瘤生长的抑制作用。结果表明，4—氨基—17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮降低了人前列腺肿瘤的雄激素依赖性生长。
在对上述各种雄激素和雌激素依赖性疾病的治疗中，本发明化合物可以给接受治疗患者口服施用，以达到所需的具体疗效。本发明化合物还可以以药物制剂形式施用，并且还可以引入持续释放装置中。本文所用术语“有效抑制量”是指其中酶抑制作用足以有效地治疗患者的量。所施用的化合物的准确用量可以在很宽的范围内变化，这主要取决于患者所患肿瘤的类型和大小。例如，根据接受治疗的患者和所治疗疾病的严重程度，所施用化合物的有效抑制量可以在每天每公斤体重约0.625—200mg、优选每天每公斤体重约0.5—100mg的范围内变化。口服单位剂量可以含有，例如，10—500mg本发明化合物。或者本发明化合物可以经非肠道途径施用，例如静脉、腹膜内、肌内、皮下(包括植入物)给药以及将活性成分和/或组合物直接注射到组织或肿瘤部位。
在本发明方法的实施中，优选将活性成分引入含有药物载体和约5％至约90％(重量)环丙基类固醇的组合物中。术语“可药用载体”是指适用于配制给动物内服的药物活性化合物的药用赋形剂，并且在使用条件下它们是基本无毒的和不致敏的。该组合物可以按照制备适合的释放载体的已知技术进行制备，其中可以含有已知适用于制备具体类型所需组合物的合适赋形剂。例如，片剂、锭剂、胶囊、粉末、气雾剂、水悬浮液或油悬浮液、糖浆、酏剂和注射用溶液可以是适合的释放载体。合适的药物载体和制剂技术可参见标准教科书，例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack PublishingCompany，Easton，Pennsylvania，该书引入本文作为参考。
对于口服施用，该化合物可以配制成固体或液体制剂，例如胶囊、丸剂、片剂、锭剂、粉末、溶液、悬浮液或乳液。固体单位剂型可以是胶囊，它可以是含有活性化合物和载体的例如润滑剂和惰性填充剂如乳糖、蔗糖和玉米淀粉的普通明胶胶囊。在一种实施方案中，本发明活性化合物可以用常规的片剂基质如乳糖、蔗糖和玉米淀粉与粘结剂如阿拉伯胶、玉米淀粉、藻酸和润滑剂如硬脂酸或硬脂酸镁结合压片。
对于非肠道施用，该化合物可以以在生理可接受的稀释剂和药物载体中的化合物的溶液或悬浮液的可注射剂量形式施用，所述药物载体可以是无菌液体，例如含有或者不含有表面活性剂和其它可药用赋形剂的油包水液体。可用于该制剂中的油的典型实例是矿物油、动物油、植物油或合成油。例如，可以提及的是花生油、豆油和矿物油。通常，水、盐水、含水葡萄糖和相关的糖溶液、乙醇和二元醇如丙二醇或聚乙二醇是优选的液体载体，特别是用于可注射溶液的液体载体。
该化合物可以以皮肤膏药、积存注射或者植入制剂形式施用，可以将其配制成持续释放活性成分的形式。可以将活性成分压成小丸或者小圆柱体，并植入皮下或肌肉内，作为积存注射物或植入物。植入物可以使用惰性材料，例如可生物降解聚合物和合成硅酮，例如Dow Corning Corp.制造的Silastic硅酮橡胶。有关合适的药物载体和制剂技术的详细资料可参见标准教科书，例如Remington′s Phar-maceutical Sciences。
下列实施例用于说明本发明化合物的制备，而不是从任何方面限制本发明。
实施例14—叠氮基—17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮在水浴中，将在甲醇(80ml)和二氯甲烷(60ml)中的17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮(10.9g，33.4mM)的溶液冷却至15℃，向其中加入30％过氧化氢(8.2ml)，然后加入氢氧化钠(0.58g)水(3.8ml)溶液。在室温4小时后，除去多数溶剂，残余物用水(300ml)稀释，用二氯甲烷(1 l)萃取。分离有机层，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，所得液体经闪式色谱(SiO2，甲苯-5％乙酸乙酯)纯化，得到α和β—环氧化物的混合物(5.6g，48.7％)。
IR 1724cm-1；MS(CI)m/z 345(100％，M+＋1)；1H NMR(CDCl3)0.38-0.60(4H，m，2×环丙基CH2)，0.77(主峰)＋0.78(3H，prs，C18-Me′s)，1.15(s，C19-Me)，2.97(主峰)＋3.04(1H，prs，C、-H′s)，3.25-3.33(1H，m，OCH)，3.45(1H，dd，C17a-H).
向剧烈搅拌着的上述环氧化物(3.6g，10.4mM)在二甲基亚砜(DMSO)(80ml)中的混合物中加入叠氮化钠(11g，169mM)，然后加入浓硫酸(0.74ml)。在60℃搅拌90分针后，将反应混合物冷却至室温，倒入冷却水中。过滤收集固体，用水洗涤并干燥，得到黄色固体。粗产物经闪式色谱(SiO2，甲苯-20％己烷)纯化，得到4—叠氮基—17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮(1.56g，42.7％)。熔点1103.5—105.5℃(Me2CO水溶液)。
IR 2116，1674，1592cm-1；MS(CI)m/z370(3％，M+＋1)，342(50％，M+＋1－N2)，284(100％，M+＋1－N2-C3H6O)；1H-NMR(CDCl3)0.38-0.60(4H，m－2×环丙基(CH2′s)，0.79(3H，s，C18-Me)，1.18(s，C19-Me)，3.02(1H，dq，C6-H)，3.25-3.33(1H，m，OCR)，3.43(1H，t，C17a-H)；13C NMR(CDCl3)88.83，128.46，155.09，193.22.
实施例24—氨基—17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮将搅拌着的4—叠氮基—17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮(1.32g，3.57mM)、三苯膦(1.14g，4.97mM)、四氢呋喃(25ml)和水(8ml)的溶液加热回流15小时。将反应物冷却至室温，蒸发除去多数溶剂。残余物溶于二氯甲烷，上SiO2柱，进行闪式色谱(甲苯-10％乙酸乙酯)，得到4—氨基—17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮(0.53g，43.1％)，mp 85-88℃.IR 3446，3363，1672，1584cm-1；MS(CI)m/z 344(100％，M+＋1)，1H NMR(CDCl3)，0.38-0.61(4H，m，2×环丙基(CH2′s)，0.74(s，C18-Me)，1.15(s，C19-Me)，3.25-3.33(m，OCH)，3.44(t＋brs，C17α－H＋NH2)，13C NMR(CDCl3)，88.95，132.87，138.90，194.33.该化合物结构如下 实施例34—氨基—17β—(环丙氧基)—雄—4，6—二烯—3—酮向加热至60℃、并且剧烈搅拌着的如实施例1第一段所述方法制备的环氧化物(2.4g，5.92mM)在DMSO(50ml)中的混合物中加入叠氮化钠(6.2g，95.5mM)，然后加入浓硫酸(0.42ml)。使反应温度升至100℃。在此温度保持60分钟后，将反应物冷却至室温，倒入冷却水(500ml)中。过滤收集所得沉淀，用水洗涤，干燥，经闪式色谱(SiO2，甲苯-5％至20％乙酸乙酯)纯化，得到4—氨基—17β—(环丙氧基)—雄—4，6—二烯—3—酮(1.7g，84.0％)。
IR3454，3358，1670，1640，1592cm-2；Ms(CI)m/z 342(70％，M++1)，284(100％，M+＋1－C3H6O)；1H NMR(CDCl3)0.38-0.64(4H，m，2×环丙基CH2′s)，0.84(3H，s，C18-Me)，1.06(3H，s，C19-Me)，3.0-3.9(brs，NH2)，3.25-3.35(m，OCH)，3.48(t，C17a-H)，5.95(1H)，dd)，6.30(1H，dd)；13CNMR 88.66，121.90，132.15，132.75，135.69，194.37.该化合物结构如下 实施例44—氨基—17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮采用实施例1的方法，将17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮(9.70g，29.5mM)、叔丁醇钾(7.0g，62.4mM)和硝酸异丙酯(2.99ml)反应，得到17β—环丙氧基—4—硝基雄—4—烯—3—酮，熔点137—38℃(甲醇)。
IR(CHCl3)，1695，1622(m)，1535，1373cm-1MS(CI)374(100％，M＋10，316(20％，M＋1－c－C3H5-O)1H-NMR(CDCl3)0.38-0.61(4H，m)，0.80(3H，s，C18-Me)，1.29(s，C19-Me)，3.25-3.33(1H，m，环丙基-CHO)，3.44(1H，t，C17-H).该化合物结构如下 如下制备用于上述硝化作用的原料用Jones试剂(20ml)处理预先冷却至-3℃的17β—环丙氧基—雄—5—烯—3β—醇(19.36g，58.9mM)的丙酮(1.9l)溶液。用甲醇分解过量的试剂。过滤除去固体。浓缩滤液，得到油状物，该油状物在硅胶上经闪式色谱纯化，得到17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮(11.0g，57％)。
用于上述氧化作用的原料(17β—环丙氧基—雄—5—烯—3β—醇)可以按照Angelastro和Blohm的US4,966,897所述方法进行制备。
4—硝基化合物可以按照下列方法化学还原
用锌粉(1.0g)处理17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮(1.0g，2.71mM)(上述制备的或者通过其它已知技术制备的)的乙酸(10ml)溶液。在室温剧烈搅拌该混合物1.5小时。过滤除去锌盐，用乙酸乙酯洗涤。将合并的滤液与洗液合并，浓缩，得到黄色固体，然后将此黄色固体再溶解于乙酸乙酯中，用1M盐酸(150ml)萃取3次。合并的酸提取液用氢氧化钠(pH14)中和，用乙醚萃取。然后用硫酸钠干燥合并的有机层，浓缩，得到4—氨基—17—环丙氧基雄—4—烯—3—酮(0.59g)，熔点100—102℃(甲醇水溶液)。
IR 3354，1662，1620，1581cm-1MS(CI)344(100％，M＋1)1H-NMR 0.37-0.61(4H，m)，0.79(3H，s，C18-Me)，1.16(s，C19-Me)，3.25-3.33(m，环丙基-CHO)，3.44(t，C17-H).
该化合物结构如下 或者，4—硝基化合物可以按照下列方法催化还原用Lindlar′s催化剂处理17β—环丙氧基—4—硝基雄—4—烯—3—酮(4.36g，11.6mM)的无水乙醇(125ml)溶液，然后用喹啉(80μl)处理。在氢气氛和1个大气压下搅拌该混合物约117小时。反应混合物经顶端装有炭的硅藻土过滤，用无水乙醇洗涤固体。浓缩合并的滤液和洗液，得到棕色液体(3.7g)，将其溶于二氯甲烷中，装入用己烷∶乙酸乙酯(20∶80)制备的硅胶柱顶部，经闪式色谱纯化，取得200ml馏分，用己烷∶乙酸乙酯(20∶80)洗脱。
合并含有产物的馏分，并浓缩，放置得到淡黄色玻璃状物质(2.3g)。该结晶溶于甲醇中，经棉花过滤。滴加水至开始结晶，然后将此结晶置于冰箱中过夜(12—18小时)。过滤收集结晶，用冷却的甲醇水溶液洗涤、再用水洗涤，然后真空干燥，得到4—氨基—17β—(环丙氧基)—雄—4—烯—3—酮，为淡黄色固体(1.97g)。
IR(KBr)ν3458，3372，1674，1622(m)，1585cm-1.
C22H33NO2的分析计算值C76.92；H9.68；N4.08.实测值C76.86；H10.04；N4.08.
1H-NMR(CDCl3)δ0.38-0.61(4H，m，2×CH2)，0.79(3H，s，C18-Me)，1.15(s，C19-Me)，3.27＋3.44＋ca.3.4(4H，环丙基-H，C17-H，NH2，m＋t，vbr.).
13C-NMR(CDCl3)δ88.96，132.92，138.74，194.30.
UV(EtOH)λ294(ε7570，1g.ε3.879)MS/CI 344(100％，M+1)，286(30％，M＋1-C3H5OH)实施例54—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮盐酸盐将4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮溶于乙酸乙酯(20ml)中，用在二恶烷(约2ml)中的4M盐酸处理。在旋转蒸发器中除去溶剂。用乙酸乙酯研制所得固体，得到胶凝物质，在蒸气浴中加热至固体分离。将混合物冷却至室温，用大约等量的己烷稀释。过滤固体，用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗涤，并干燥，得到标题化合物。
IR(KBr)ν2675，1662，1641cm-1.
Ms(CI)344(100％，M＋1)，286(30％，M＋1，环丙基-OH)1H-NMR(CDCl3)0.38-0.61(4H，m，2×CH2)，0.79(3H，s，C18-Me)，1.25(s，C19-Me)，3.24(1E，m，环丙基-H)，3.42(1H，t，C17)，9.74(2H，v.br.，NH·HCl).
C22H34ClNO2的分析计算值C69.54，H9.02，N3.69；实测值C69.06，H8.89，N3.94.
实施例617β—环丙氨基—4—氨基孕—4—烯—3—酮将17β—环丙氨基—4—烯—3—酮(4.61g，14.07mmol)和叔丁醇钾(4.74g，42.22mmol，3摩尔当量)在叔丁醇(60ml)中的溶液加热回流1小时。溶液一开始回流即加入所有硝酸异丙酯(1.43ml，14.07mmol，1摩尔当量)。反应物缓缓冷却至室温，然后向反应混合物中加入冰醋酸(20ml)和二氯甲烷(20ml)。将反应物在室温放置过夜。过滤反应混合物，用二氯甲烷洗涤滤饼至白色。再用二氯甲烷(200ml)稀释滤液，然后用半饱和浓度的氯化钠水溶液(200ml)洗涤，然后用由等份的1/2饱和氯化钠水溶液和饱和碳酸氢钠水溶液组成的溶液(200ml)洗涤。用硫酸镁干燥有机层，并真空浓缩，在硅胶柱上经闪式色谱(19∶1，二氯甲烷∶甲醇)纯化，得到17β—环丙氨基—4—硝基雄—4—烯—3—酮，为黄色固体泡沫。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ0.75(s，3H，C18-Me)；1.30(s，3H，C18-Me)ppm.
13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ6.46，7.20，11.70，27.64，20.79，23.54，27.07，29.62，29.68，30.84，33.03，34.06，35.11，37.54，39.116，42.40，52.37，53.75，68.84，146.66，160.73，187.47ppm.
IR(KBr)3435，2944，2870，1695，1533，1371，1013，766cm-1.
MS(EI)372(M+).该化合物结构如下 将通过上述方法制备的17β—环丙氨基—4—硝基雄—4—烯—3—酮(670mg，1.80mmol)溶于无水乙醇(11ml)，用Lindlar催化剂(5.95Pd＋5.4％Pb)(268mg)处理，然后用喹啉(3μl)处理。在氢气氛和大气压(约760mm/Hg)下剧烈搅拌该溶液18小时。过滤反应混合物，用乙醇(100ml)和二氯甲烷(100ml)洗涤。真空除去溶剂，产物在硅胶上经色谱(47∶3，二氯甲烷∶甲醇)纯化，得到黄色油状物，将其结晶得到淡黄色固体。熔点149—150℃(Et2O)。
IR(KBr)3474，3366，2945，1616，1577，1441，1369，1170，1011cm-1MS(CI/CH4)[M+＋H]3431H-NMR(33MHz，CDCl3)δ0.73(s，3H，C18-Me)，1.15(s，3H，C19-Me)，2.66(t，J＝9.3Hz，1H，C17-H)
13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ6.464，7.185，11.289，20.803，23.682，24.757，29.683，29.753，30.914，32.860，34.899，35.307，37.904，42.453，52.910，54.549，69.014，132.938，138.860，194.343.该化合物结构如下
权利要求
1.下式化合物及其可药用的盐 其中A是O或NH，每个R独立地选自氢和C1—C4低级烷基；每个X独立地选自氢、卤素和甲基；并且虚线是指可有可无的双键。
2.权利要求1的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮。
3.权利要求1的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4，6—二烯—3—酮。
4.权利要求1的化合物是4—氨基—17β—(环丙氨基)雄—4—烯—3—酮。
5.下式化合物的制备方法 其中A是O或NH，每个R独立地选自氢和C1—C4低级烷基；每个X独立地选自氢、卤素和甲基；并且虚线是指可有可无的双键，该方法包括在催化量的强酸存在下、在惰性溶剂中，将下式的环氧化物与叠氮化钠反应其中R、X和虚线如上所定义，和 (a)当6，7—位不饱和时，接着在约60℃加热，得到相应的4—叠氮基—4—烯，然后在含水惰性溶剂中与三苯膦一起加热，得到4—氨基化合物；或者(b)当在6—位存在双键时，接着在100℃加热，得到4，6—二烯。
6.权利要求5的方法，用于制备4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮，该方法包括在60℃将4，5—环氧—17β—(环丙氧基)雄—3—酮与叠氮化钠反应，然后与三苯膦和水反应。
7.权利要求5的方法，用于制备4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4，6—二烯—3—酮，该方法包括在100℃将4，5—环氧—17β—(环丙氧基)雄—3—酮与叠氮化钠反应。
8.具有C17—20裂解酶和5α—还原酶抑制活性的单位剂型药物组合物，该组合物含有药物载体和下式化合物及其可药用的盐 其中A是O或NH，每个R独立地选自氢和C1—C4低级烷基；每个X独立地选自氢、卤素和甲基；并且虚线是指可有可无的双键。
9.权利要求8的药物组合物，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮。
10.权利要求8的药物组合物，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4，6—二烯—3—酮。
11.权利要求8的药物组合物，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氨基)雄—4—烯—3—酮。
12.抑制C17—20裂解酶的方法，该方法包括给需要治疗的患者施用抑制有效量的下式化合物及其可药用的盐 其中A是O或NH，每个R独立地选自氢和C1—C4低级烷基；每个X独立地选自氢、卤素和甲基；并且虚线是指可有可无的双键。
13.权利要求12的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮。
14.权利要求12的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4，6—二烯—3—酮。
15.权利要求12的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氨基)雄—4—烯—3—酮。
16.抑制5α—还原酶的方法，该方法包括给需要治疗的患者施用抑制有效量的下式化合物及其可药用的盐 其中A是O或NH，每个R独立地选自氢和C1—C4低级烷基；每个X独立地选自氢、卤素和甲基；并且虚线是指可有可无的双键。
17.权利要求16的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮。
18.权利要求16的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4，6—二烯—3—酮。
19.权利要求16的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氨基)雄—4—烯—3—酮。
20.治疗雄激素依赖性疾病的方法，该方法包括给需要治疗的患者施用抑制有效量的下式化合物及其可药用的盐 其中A是O或NH，每个R独立地选自氢和C1—C4低级烷基；每个X独立地选自氢、卤素和甲基；并且虚线是指可有可无的双键。
21.权利要求20的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮。
22.权利要求20的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4，6—二烯—3—酮。
23.权利要求20的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氨基)雄—4—烯—3—酮。
24.治疗雌激素引起所或者雌激素刺激的疾病的方法，该方法包括给需要治疗的患者施用抑制有效量的下式化合物及其可药用的盐 其中A是O或NH，每个R独立地选自氢和C1—C4低级烷基；每个X独立地选自氢、卤素和甲基；并且虚线是指可有可无的双键。
25.权利要求24的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮。
26.权利要求24的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4，6—二烯—3—酮。
27.权利要求24的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氨基)雄—4—烯—3—酮。
28.治疗DHT介导的疾病的方法，该方法包括给需要治疗的患者施用抑制有效量的下式化合物及其可药用的盐 其中A是O或NH，每个R独立地选自氢和C1—C4低级烷基；每个×独立地选自氢、卤素和甲基；并且虚线是指可有可无的双键。
29.权利要求28的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮。
30.权利要求28的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4，6—二烯—3—酮。
31.权利要求28的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氨基)雄—4—烯—3—酮。
32.治疗良性前列腺增生的方法，该方法包括给需要治疗的患者施用抑制有效量的下式化合物及其可药用的盐 其中A是O或NH，每个R独立地选自氢和C1—C4低级烷基；每个X独立地选自氢、卤素和甲基；并且虚线是指可有可无的双键。
33.权利要求32的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮。
34.权利要求32的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4，6—二烯—3—酮。
35.权利要求32的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮。
36.治疗乳腺癌的方法，该方法包括给需要治疗的患者施用抑制有效量的下式化合物及其可药用的盐 其中A是O或NH，每个R独立地选自氢和C1—C4低级烷基；每个X独立地选自氢、卤素和甲基；并且虚线是指可有可无的双键。
37.权利要求36的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮。
38.权利要求36的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氨基)雄—4—烯—3—酮。
39.治疗前列腺癌的方法，该方法包括给需要治疗的患者施用抑制有效量的下式化合物及其可药用的盐 其中A是O或NH，每个R独立地选自氢和C1—C4低级烷基；每个X独立地选自氢、卤素和甲基；并且虚线是指可有可无的双键。
40.权利要求43的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氧基)雄—4—烯—3—酮。
41.权利要求43的方法，其中的化合物是4—氨基—17β—(环丙氨基)雄—4—烯—3—酮。
全文摘要
本发明涉及4-氨基-11-(环丙氧基)雄-4-烯-3-酮、4-氨基-17-(环丙氨基)雄-4-烯-3-酮和相关化合物，它们的合成方法，具有C
文档编号A61K31/565GK1124490SQ94192228
公开日1996年6月12日 申请日期1994年5月6日 优先权日1993年5月25日
发明者P·M·维特拉伯, C·A·加特斯, M·R·阿格拉斯洛, J·O·约翰斯顿, T·T·坎拉恩 申请人:默里尔多药物公司