专利名称：多糖配合物，其大颗粒和制备药盒，制备方法，及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种放射性脱乙酰壳多糖配合物，其大颗粒和制备放射性脱乙酰壳多糖配合物的药盒，其制备方法，及其放射治疗的应用。
尤其是，本发明涉及由放射性核素标记的脱乙酰壳多糖产生的放射性脱乙酰壳多糖和由脱乙酰壳多糖配合物制成颗粒产生的放射性脱乙酰壳多糖大颗粒，以及供制备放射性脱乙酰壳多糖配合物用的药盒。
本发明涉及通过放射性核素溶液与脱乙酰壳多糖溶液反应制备放射性脱乙酰壳多糖配合物的方法，和通过将碱溶液加到放射性脱乙酰壳多糖配合物中制备放射性脱乙酰壳多糖大颗粒的方法。
另外，本发明涉及放射性脱乙酰壳多糖配合物及其大颗粒用于内部放射治疗，该法是由直接向该损害处施药的放射性物质发出的放射线治疗损害的。
有两种放射性治疗法，一种是外部放射治疗法，该法是用从体外发射的放射线治疗损害，而另一种是内部放射治疗法损害，该法是用从体内施用的放射性物质放出的放射线治疗损害。
至今外部放射治疗法已被广泛使用，但该法能引起政党组织和器官受照射而伤害的难题，因为为了达到损害处必须使用强的放射线。
因此，研究了内部放射治疗法，直接向损害处施用放射性物质使损害得到照射。
在内部疗法中，因放射线是在损害处发出的，所以可以使用效能弱的放射性物质，因此只有损害处被照时而保护其它器官免于照射。
近来，内部放射疗法由于其优良的效果已被广泛使用。
通过内部放射疗法治疗的有代表性疾病是癌和类风湿性关节炎。
治疗癌或类风湿性关节炎的方法基本上可分可药物治疗、手术治疗和放射性治疗。但是药物和放射性治疗已广泛流行。据报道仅有5％的肝癌可经手术治疗法处理，所以可以认为手术治疗并非经常被使用。
在口服或静脉注射抗癌药物的情况下，必须施用大量的药物，因为命名药物到整个体内是通过血液流动，所以仅有很小一部分积聚在损害处，结果产生副作用。
近来放性性疗法，尤其是内部放射性疗法治疗癌和关节炎，已被广泛采用。
例如，基于肝细胞癌细胞经肝动脉摄取营养物和正常肝细胞通过肝静脉摄取营养物的事实的肝动脉法，是把标记放射性核素的放射性物质直接注射到肝动脉代替静脉注射以抑制肝细胞癌细胞摄取营养物并在肝细胞癌细胞中积累更多的放射性物质。
内部放射疗法也可用于类风湿性关节炎以及囊状癌如肝细胞瘤、脑肿瘤、乳腺瘤、孵巢瘤等。
在治疗类风湿性关节炎中，手术滑膜切除术或放射滑膜切除术都可使用。放射滑膜切除术是一种似乎可替代手术滑膜切除术的技术，而且它是一种易于消除滑膜炎症区的方法，该方法通过直接注射标记有发射β的放射性核素的放射性物质进行β-辐射。放射滑膜切除术具有操作简单且无手术后并发症的优点。
在通过由损害处放射性物质发射的放射线治疗癌或关节炎中，向损害给药的放射性物质应仅保留于损害处而不会从该损害处渗流。
假若给药于损害的放射性物质从损害处渗流，那么放射性物质将通过血液流动扩散至全身，积累在其它组织尤其是骨髓中，以致产生致命的伤害。
在内部放射疗法中，施用的放射性物质应保留在损害处，为达此目的，使放射性核素与载体一起使用。
理想载体的条件是载体在体内和体外与放射性核素均具有高亲合力，这种载体能均匀地分布于损害中，在损害处能被吸收而不会引起炎症，其半衰期长于放射性核素，并且放射性核素衰变后，该载体能被分解和排泄。
为了开发理想的放射性物质，也提出了一些技术。
首先，有报道涉及由悬浮135I于高粘度碘油中所获得的延迟释放放射性物质。
然而，悬浮于碘油中的135I没有得到广泛地使用，因为与β-射线一起还发射较高能量的γ-放射线，因而引起对其它器官或组织的损伤，并且侵入肝动脉的碘油中的135I积累，尤其大量积集于肺部中。
其次，开发出了胶体Y90(钇90)或Au-198(金198)。
在这种情况下，存在一个问题是正常的组织受伤害，因为当粒经太小而不能保留在损害处时，使放射性物质渗流出损害处。另外，它们发射半衰期较长的高能γ-射线[Fellinger et al.，Weinz Inn.Med，33，351(1952)]。
据报道树脂[Turner et al.，Nucl.Mod，Comm.15，B45(1994)]、陶瓷、和玻璃珠可作载体使用[Andrews et al，J.Nu-cl.Med，35，1637(1994)]。
由于它们是降解的，它们不渗流，但他们存在一个问题是它们在放射性核素衰变后不能被排泄出体外。
已开发出165Dy-FHMA(165镝铁氢氧化物大颗粒)，含于氢氧化铁大颗粒中的165镝粒子(Harling et al，Nucl.Sci andEng，110，344(1992))，但存在制备工序复杂且铁在体内累积的问题。
近来，还开发出165Dy-HMA(氢氧化镝大颗粒)，不含铁的165镝粒子(Mclaren et al.，Eur.J.Nucl.Med.，16，62)(1990))。
但在使用165Dy-HMA时有限制，因为165Dy-HMA是由中子在核反应器中照射稳定的164Dy产生的。也就是说，对于远离核反应器的医院使用它来说，其半衰期太短。
还开发出在具有碱金属的硅酸盐珠中含153Sm、165Dy、166Ho、90Y的粒子(USP 5011797)。在由聚-L-乳酸、聚乙烯醇、乙酰基内酯和氯仿的混合物获取的大小为1-15μm的165Ho微粒粒子后，在核反应器中用中子照射生产166Ho[J.Nu-cl.Med，33，398(1992)]。但存在着一个问题，即聚合物在核反应器内中子照射过程中会分解，因而使制备方法复杂化。
另外，研制出了可生物降解和生物相溶的153Sm-羟磷灰石的粒子。
然而存在的问题是当它们用于病人时不能均匀地分布到损害处而是保留在注射器内，因为它们是以颗粒态存在的，不是以溶液态存在的。
正如由上述情况所了解的，就内部放射疗法而言给药于损害的放射性物质不会从损害处渗流。
为了把给药的放射性物质从损害处的渗流降至最低，首先研制胶体物质如198Au，然后是大颗粒；从来都没有使用过溶液。
但就损害中的均匀分布而言，分布的次序是溶液＞胶体＞粒子，且溶液是最好的。
换言之，在使用粒子时，粒子不能均匀地分布；所以疗效不好；假若在某个区域内使更多的粒子分布，照射过的将会过剩，若在另一区域由分布较少的粒子，辐射量将低于有效的放射量。
作为照射的需要量根据疾病是有差别的，所以为了达到需要量应控制粒子的大小。
例如，治疗肝细胞瘤的最佳尺寸是15-40μm，而治疗类风湿性关节炎为1-5μm。但困难在于生产具有最佳尺寸的粒子时，工作人员有可能被照射的危险，所以复杂化的方法不能使用。
而且在把粒子注入病人后，仍有些粒子保留下来。
尽管如上所述在使用粒子时我们看到了许多难题，但是还是使用粒子，从来不用溶液，因为在内部放射疗法中最重要的一点是施用的放射性物质不能从损害处渗流。
作为深入研究的结果，本发明的发明人通过发明放射性脱乙酰壳多糖配合物解决了粒子的难题和溶液的难题。
放射性乙酰壳多糖配合物是一种新型的内部放射治疗剂；它在酸性PH下以溶液状态存在，在人体的PH中以凝胶态存在。
也就是说，它在酸中是以溶液的状态存在着，抵消了粒子问题，施用于损害后，以凝胶态存在而不会渗流出损害处。
放射性脱乙酰壳多糖配合物是一种天然的生物相溶和生物降解的产物，衰变后能被排泄。
另外，可以证明本发明的放射性脱乙酰壳多糖配合物可以像至今使用的粒子状使用。
另外，本发明的放射性脱乙酰壳多糖配合物可以药盒形式使用，其中预先分别制备的放射性核素溶液和冻干的脱乙酰壳多糖在用于病人前进行混合。
本发明的目的是提供一种新型的放射性脱乙酰壳多糖配合物，放射性脱乙酰壳多糖配合物大颗粒以及一种用于制备放射性脱乙酰壳多糖配合物的药盒，制备其方法以及用于内部放射治疗。
下文将详细地对本发明进行说明。
I.放射性脱乙酰壳多糖配合物供内部放射疗法使用的放射性物质被保留在损害处，且衰变后被排泄。
为达此目的，放射性核素与载体一起使用。在这种情况下，放射性核素与载体的亲合力及其尺寸是重要的。
在本发明中，具有优良生物相溶性和生物可溶解性的脱乙酰壳多糖可作为放射性核素的载体使用。
通过水解龙虾、蟹、虾和蚝等壳体富有的壳多糖，β(1-4)键N-乙酰基葡糖胺的聚糖可以很容易地获得脱乙酰壳多糖。
脱乙酰壳多糖，一种通过壳多糖的乙酰胺脱乙酰获得的2-脱氧-2-氨基-D-葡萄糖的聚合物，与重金属形成螯合物，因此据报道脱乙酰壳多糖能作为去除重金属的试剂(USP5,336,415)和延迟释放药物的试剂使用。
如此的特性归结于脱乙酰壳多糖的游离胺，它可与金属离子形成螯合物而且脱乙酰壳多糖的键合亲合力高于壳多糖的键合亲合力。
称为食用无毒产品的脱乙酰壳多糖可作为生物降解的缝合丝使用，因为它可生物降解，并且它能作为人造肾膜和灼烧皮肤保护膜使用，因为它具有抗溃疡活性和抗肿瘤活性[Kubota et al.，Chem.Sac.Jpn，66，1807(1993)]。
脱乙酰壳多糖最重要的特性是在酸性PH下以溶液形式存在，而在较高PH下变成凝胶和粒子。
在本发明中，依靠利用上面提到的特性研制放射性脱乙酰壳多糖配合物溶液和放射性脱乙酰壳多糖配合物大颗粒。
脱乙酰壳多糖的分子量，可以用于本发明的是100,000-1,000,000。
优选脱乙酰壳多糖的分子量是200,000-800,000。
脱乙酰壳多糖最好的分子量是300,000-500,000。
按通过水解壳多糖所获得的2-脱氧-2-氨基葡萄糖单位和2-脱氧-2-乙酰氨基葡萄糖单位的比值，脱乙酰壳多糖的分子量可在数千到数百万间变化。
分子量越高，粘度越大。
能用于本发明的脱乙酰壳多糖包括脱乙酰壳多糖的衍生物，如S衍生物和P衍生物。
能用于本发明的放射性核素可包含任何能用于治疗人疾病的放射性核素，包括β-射线辐射源。本发明的放射性核素可含有β射线源、γ-射线源，或能辐射β-射线以及γ-射线的放射性核素。
优选放射性核素是β-射线源，如198Au、90Y、186Re、32P、169Er、166Ho、153Sm、165Dy，这些可按治疗的目的进行选择。198Au还辐射高能γ-射线以及β-射线，并具有2.7天较长的半衰期。32P和90Y辐射β-射线，没有γ-射线并只有较长的半衰期。
165Dy、166Ho、153Sm和169Er最适于内部放射疗法，因为它们除发射低能的γ-射线外还发射高能β-射线，借此施用于体内的放射性核素很容易被检测。
II.放射性脱乙酰壳多糖配合物的制备在本发明中，放射性脱乙酰壳多糖配合物，一种新型的内部放射治疗剂，可通过脱乙酰壳多糖标记以放射性核素来制备。
下文中将详细地描述放射性脱乙酰壳多糖配合物的制备。
通过把放射性核素溶液加到脱乙酰壳多糖溶液中制备放射性脱乙酰壳多糖配合物。
通过把脱乙酰壳多糖溶于酸性溶液中很容易地制备出脱乙酰壳多糖溶液，因为脱乙酰壳多糖在酸性环境中是可溶的而在碱性环境中不溶。
从本技术领域的一般技术人员熟知的酸中选择优选的酸，包括羧酸，如乙酸或甲酸。
因为可用于本发明的放射性核素在水中是可溶的，所以可使用可溶性放射性核素硝酸盐或氯化物如165Dy(No3)3、166Ho(No3)3、165DyCl3或166HoCl3。
如上所述，放射性核素溶液可通过溶解放射性核素制成，该放射性核素是通过在核反应器中用中子照射稳定核素如164Dy和165Ho的氧化物或硝酸盐制备出来的。把HCl加到放射性氧化物中以转变成放射性氯化物，然后将所得到的放射性氯化物溶于水中。
放射性脱乙酰壳多糖溶液是通过所述放射性核素和通过脱乙酰壳多糖溶于酸中制成的脱乙酰壳多糖溶液相互混合制备的。
与由放射性同位素制成的大颗粒的已知方法相比，这种新方法具有保护工作人员免受辐射作用和防止由于中子辐射使载体分解的优点。
在下面，将说明影响制备脱乙酰壳多糖配合物的因素，如反应混合物的PH、反应时间、脱乙酰壳多糖的浓度、放射性核素的浓度，以及脱乙酸壳多糖的粘度。
在实验中，166Ho用作放射性核素并采用硅酸进行快速(Instant)薄层色谱法(ITLC)(ITLC-SA)。当展开溶液是MeOH∶H2O∶乙酸(49∶49∶2)时，对铁的Rf值为0.8-1.0，而对Ho-脱乙酰壳多糖配合物的Rf值为0.2-0.4。
<实验1>166Ho-脱乙酰壳多糖配合物形成的反应混合物的PH进行本次实验是为了寻找脱乙酰壳多糖与放射性核素螯合时的优化PH。
脱乙酰壳多糖溶液是通过在4ml 1％的乙酸中溶解30mg的脱乙酰壳多糖制成的。为了把脱乙酰壳多糖溶液的PH分别调至1.47、2.00、2.78、3.53、4.03、5.00和6.00，加入0.5N HCl或0.5N NaOH。往脱乙酰壳多糖的溶液中加0.1ml 10％的166Ho(NO3)3·5H2O，搅拌并维持30分钟。
表1
如表1所示，放射性核素的标记率取决于标记脱乙酰壳多糖溶液的pH。
在pH2.5-3.5时，标记率超过99％，pH2.5以下或pH3.5以上时为20-30％，此时钬几乎保持原态而不形成螯合物。
pH大于6.0时可使脱乙酰壳多糖溶液变成凝胶。
因此，形成螯合物的优选pH是2.0-4.0。更好的pH是2.5-3.5。
<实验2>166Ho-脱乙酰壳多糖配合物形成的反应时间把0.1ml(3.74mg)的10％166Ho(NO3)·5H2O加到pH已调节至3.0的脱乙酰壳多糖溶液中(30mg/4ml)再搅拌。在5、10、20、30、60分钟时取样，重测定标记率。
表2
如表2所示，在10分钟时标记率大于95％，这一点意味着脱乙酰壳多糖配合物的形成在10分钟后几乎已经完成。
已说明脱乙酰壳多糖—螯合物的形成常数是很高的，因此可以通过使放射性核素溶液与脱乙酰壳多糖溶液反应10分钟形成脱乙酰壳多糖配合物。
<实验3>对于166Ho-脱乙酰壳多糖配合物形成脱乙酰壳多糖的浓度分别制备已调节至pH3的浓度的4mg/4ml、10mg/4ml、20mg/4ml、25mg/4ml、25mg/4ml和35mg/4ml的脱乙酰壳多糖溶液。
脱乙酰壳多糖溶液中加0.1ml的10％166Ho(NO3)3·5H2O，搅拌并维持30分钟。
表3
如表3所示，当4ml 1％乙酸中含有35％mg脱乙酰壳多糖时，标记率大于99％。
当所含脱乙酰壳多糖少于25mg时，标记率是很低的。
因此，为了能形成具有3.74mg钬的Ho-脱乙酰壳多糖配合物，必须制备浓度在0.75％以上的脱乙酰壳多糖溶液。
<实验4>对于Ho-脱乙酰壳多糖配合物形成钬的量。
往脱乙酰壳多糖溶液(35mg/4mg)加各种浓度的166Ho(NO3)3·5H2O(所含钬量3.74mg、7.48mg、11.22mg、14.96mg、22.44mg、29.92mg)，搅拌且保持30分钟。
表4
如表4所示，当钬的加入量为7.48mg时，标记率大于99％。当钬的加入量为11.22mg时，存在大量未反应的钬。当脱乙酰壳多糖对钬的比值低于3.6∶1时，按脱乙酰壳多糖体，形成放射性脱乙酰壳多糖配合物的能力大于98％。
因此，应形成Ho-脱乙酰壳多糖配合物而言，脱乙酰壳多糖对钬的优选比值为1-4∶1，更好的是3.4∶1。
<实验5>脱乙酰壳多糖形成166Ho脱乙酰壳多糖配合物的粘度制备各种粘度4cps、50ps、100cps、150cps和170cps的pH乙调节到3.0的脱乙酰壳多糖溶液，往脱乙酰壳多糖溶液加0.1ml10％166Ho(NO3)3·5H2O，搅拌和维持30分钟。
表5<
>如表5所示，当脱乙酰壳多糖的粘度低于100cps时，钬几乎保持接近未标记状态。优选脱乙酰壳多糖的粘度为100-200cps，更好的是130-170cps。
由于粘度越高，分子量越大，所以可以说配合物的形成取决于分子量。
<实验6>166Ho-脱乙酰壳多糖配合形成的稳定剂当把166Ho(NO3)3·5H2O(50mCi)在没有稳定剂的情况下加至脱乙酰壳多糖溶液时，该溶液变稀，并且有70％以上的所含钬被分离呈游离钬。
当明胶用作稳定剂时，溶液颜色变成黄色且大部分的钬被分离。
当用40mg的抗坏血酸时，配合物可稳定8小时以上。(放射化学纯度在99％以上)测量使用抗坏血酸量分别是10mg，15mg，20mg，25mg，30mg，35mg和40mg的溶液稳定性，并且当加入30mg抗坏血酸时放射化学纯度大于99％。
2，5-二羟苯甲酸，明胶和抗坏血酸，可用作脱乙酰壳多糖的稳定剂。
抗坏血酸优选量对于166Ho(NO3)3·5H2O为10-30mg，更好的使用量加15mg。
制备放射性脱乙酰壳多糖配合物溶液可通过下列步骤1)通过在核反应器中用中子照射稳定核素如164Dy和165Ho制备活性放射性核素；2)通过把放射性核素溶解在水中制备放射性核素溶液；3)制备脱乙酰壳多糖溶液；和4)混合放射性核素溶液和脱乙酰壳多糖溶液。
如果把放射性脱乙酰壳多糖溶液注入人体，它就会变成凝胶的形式，这种形式不会从损害处渗流，而且淀积的放射性脱乙酰壳多糖可通过照射的辐射作用治疗损害。
III.制备供制备放射性脱乙酰壳多糖配合物药盒用的药盒把放射性脱乙酰壳多糖配合物制成药盒，该药盒含有放射性核素，溶液和脱乙酰壳多糖溶液。
制备出脱乙酰壳多糖溶液和放射性核素溶液后可任意用于患者。只是在引入身体前才将它们混合，而且放射性脱乙酰壳多糖配合物在10分钟内可以形成。
脱乙酰壳多糖溶液经冻干，它可含有任何常规添加剂如pH调节剂，等渗剂(例如氯化钠)和防腐剂(例如苄醇)。
抗坏血酸可用作稳定剂。
供制备放射性脱乙酰壳多糖配合物用的药盒按如下步骤制备1)制备脱乙酰壳多糖溶液然后冻干；2)制备放射性核素溶液然后把1)和2)用于病人，3)把冻干过的脱乙酰壳多糖溶解于蒸馏水中再加入放射性核素溶液，4分钟后，可用于人体。
<实验7>制备166Ho-脱乙酰壳多糖配合物用的药盒稳定性。
每隔一个月测量一次按本说明制备的药盒中的放射性脱乙酰壳多糖配合物的标记率，持续一年，均在99％以上。
IV.制备放射性脱乙酰壳多糖配合物的大颗粒放射性脱乙酰壳多糖配合物可以大颗粒的形式和溶液的形式使用。大颗粒可通过用蒸馏水稀释脱乙酰壳多糖配合物溶液然后加碱，溶液来制备。大颗粒在pH9-10时沉淀。
在这种方法中，如果脱乙酰壳多糖配合物溶液被碱性化而不用蒸馏水稀释，则该溶液形成大块，以而使获取细粒子困难。
用碱使镧系(lanthane series)化合物形成氢氧化物，但由于脱乙酰壳多糖溶液与镧系放射性核素的形成常数大于镧系氢氧化物，所以脱乙酰壳多糖配合物在碱的溶液中是非常稳定的。
因此，当把脱乙酰壳多糖配合物溶液碱化时，形成大颗粒而且它们很稳定。优选碱是NaOH。
大颗粒的优选尺寸是1-50μm.
放射性大颗粒优选尺寸可依疾病变化，类风湿性关节炎为1-5μm肝癌为10-40μm。
用下列实施例举例说明本发明有实效的和目前最佳的实施方案。
然而，可以理解到本技术领域的熟练人员，在考虑本发明的公开内容时，可在本发明的精神和范围内作出变更和改进。
<实施例1>制备166Ho-脱乙酰壳多糖配合物1).制备166Ho(NO3)3·5H2O溶液。
把200mg166Ho(NO3)3·5H2O置于聚乙烯皿中。在核反应器中用10×1013n/cm2·sec的热中子照射10分钟，然后溶于2吨水中。
2).制备脱乙酰壳多糖溶液把300mg的乙酰壳多糖(分子量约500000；水解约85％)溶解在40ml％的乙酸中。
通过把0.1ml所述166Ho(NO3)3·5H2O加到所述脱乙酰壳多糖溶液中，充分混合再于室温下搅拌，制成166Ho-脱乙酰壳多糖配合物溶液，30分钟后，通ITLC-SA[MeOH(49)H2O(49)HAc(2)]测标记率。标记率超过99％。
<实施例2>制备153Sm、165Dy、169Er-脱乙酰壳多糖配合物测定该混合物的放射化学纯度且纯度在99％以上。
<实施例3>制备供制备166Ho-脱乙酰壳多糖配合物用的药盒把40mg的脱乙酰壳多糖和30mg抗坏血酸溶解在中4rnl的1％乙酸中。
用0.5N HCl把溶液的pH调节至pH为3.0，以消毒态过滤并冻干。
使冻干的脱乙酰壳多糖溶液保持在4℃。
为了用于患者，放射性脱乙酰壳多糖配合物通过溶解、冻干脱乙酸壳多糖于蒸馏水中再加入放射性核素溶液来制备。
<实施例4>制备脱乙酰壳多糖配合物大颗粒把通过按实施例1所述使3.74mg166Ho和35mg脱乙酰壳多糖反应制备的166Ho-脱乙酰壳多糖配合物溶液用5体积的水稀释。
剧烈地搅拌，滴加2N NaOH以使沉淀完全(pH9-10)。
使所得到的悬浮液以声波处理5分钟。
通过在240×g下离心3分钟使沉淀与上清液分离，再把得到脱乙酰壳多糖大颗粒悬浮于4ml的盐水溶液中。
将悬浮物分送到10ml的小瓶内，密封后用高压消毒蒸锅消毒，在121℃下持续30分钟。
大颗粒的粒子通过在起波处理洗涤器中的再处理可均匀地被分散。
测量粒子的尺寸，平均粒径约25μm。
测定放射性脱乙酰壳多糖配合物及其大颗粒的体外稳定性和体内稳定性并描述于下文中。
<实施例5>检验166Ho-脱乙酰壳多糖配合物和大颗粒的体外稳定性使含2mCi166Ho的166Ho-脱乙酰壳多糖配合物和大颗粒在室温和37℃下保存在各小瓶内25天。
按每次的时间间隔IILC-SA[MeOH(49)H2O(49)乙酸(2)]测定放射化学活性(参见表6，7)。
按实施例4的描述制备的大颗粒按每次的时间间隔用0.9％NaCl(5ml)洗涤。
测量剩于大颗粒中和滤液中的放射活性(参照表8)。
表6室温下稳定性的检验
表7在37℃下稳定性的检验
正如表6和7所示，在Rf为0.2-0.4时，166Ho脱乙酰壳多糖配合物几近100％的放射性被保留，而在Rf＝0.9-1.0时，游离166Ho的放射性是很小的，可持续25天。
结果表明脱乙酰壳多糖大颗粒的体外稳定性在室温或37℃下是极佳的。
表8.通过洗涤检验稳定性
正如表8所示，当166Ho-脱乙酰壳多糖大颗粒用盐水溶液洗涤时，大颗粒不溶或不变成胶体状。几乎100％的放射化学活性保留在沉淀中，如上考虑，脱乙酰壳多糖的游离胺与166Ho结合的是如此牢固以形成很稳定的螯合物。
<实施例6>检验166Ho-脱乙酰壳多糖配合物和大颗的体内稳定性把按实施例1制备的166Ho-脱乙酰壳多糖配合物溶液的pH调节到5.5，然后经0.2μm膜式滤器过滤再消毒。把0.5ml(400μCi)的166Ho-脱乙酰壳多糖配合物溶液通过关节内注射引入正常兔子膝关关节中。
在合适的时间间隔后，使用γ-射线至在注射后立即将留在膝关节内的放射性与总放射性作一对比。
将按实施例4制备的大颗粒悬浮于盐水溶液中，再于121℃下在高压消毒蒸锅内消毒30分钟。
将这种悬浮液的0.1ml等份试样注射到所述膝关节中。
表9.正常兔子的膝关节中留有的放射性脱乙酰壳多糖配合物及其大颗粒的％
正如表9所示，在注射后(排除166Ho的物理降低)分别在2小时(99.9％)、6小时(99.9％)、24小时(99.8％)和48小时(99.7％)时，放射性差不多都保留在关节孔中。
可以证实放射性脱乙酰壳多糖配合物和大颗粒没有渗流出损害处。
按上述考虑，166Ho-脱乙酰壳多糖配合物和大颗于体内和体外都是很稳定的。与钬形成螯合物的脱乙酰壳多糖是一种可生物降解和生物相溶的物质，在合适期限内吸收保留于关节联接处(articulate)，之后降解并在衰变后缓慢排泄。
也就是说，脱乙酰壳多糖的游离胺与放射性核素形成螯合物的脱乙酰壳多糖是一种理想的内部放射治疗剂，该治疗剂能治疗体内的损害并能排泄出体外。
放射性脱乙酰壳多糖配合物作为内部放射治疗剂的效果在下文将要描述。
<实施例7>放射性脱乙酰壳多糖配合物的临床实验1)放射滑膜切除术对按ACR(American College of Rheumatology)标准选择36名患者进行内部放射治疗。
将放射性脱乙酰壳多糖配合物注射到膝关节。
放射性脱乙酰壳多糖物的注射量取决于个人，但平均为15-20mCi。
平均观察时间与50.4周。
有44％的患者结果是极好的，32％是良好的，不好的有24％，因而有76％的患者得到了治愈。
2)治疗肝癌患有1-3cm大小肝癌的45名患者，按癌的大小用10-20mCi的放射性脱乙酰壳多糖配合物治疗。有90-95％的患者显示良好的结果，在超声诱导下对癌组织直接注射。
按上述考虑，放射性脱乙酰壳多糖配合物和大颗粒对治疗各种癌症和类风湿性关节炎均有良好的效果。
在166Ho、放射性脱乙酰壳多糖配合物和大颗粒的情况下，按照疾病的种类和损害的大小，一次可引入5-150mCi的药量。用注射器可把脱乙酰壳多糖配合物的溶液直接给药于损害。脱乙酰壳多糖配合物大颗粒溶解于水、盐水溶液或乙醇后即可给药。
放射性脱乙酰壳多糖配合物及其大颗粒可通过向损害处直按给药，内部放射治疗，类风湿性关节炎、肝癌、脑癌、乳腺癌、卵巢癌等疾病。
权利要求
1.放射性脱乙酰壳多糖配合物，其特征在于所述脱乙酰壳多糖用放射性核素标记。
2.按权利标要求1的放射性脱乙酰壳多糖配位物，其中放射性核素放射高能β射线和低能γ-射线的治疗射线。
3.按权利要求2的放射性脱乙酰壳多糖配合物，其中放射性核素选自包含153Sm、165Dy，166Ho、和169Er的组中。
4.按权利要求1的放射性脱乙酰壳多糖配合物，其中脱乙酰壳多糖的分子量为100000-1000000。
5.按权利要求1的放射性脱乙酰壳多糖配合物，其中放射性脱乙酰壳多糖配合物在酸情况下是可溶的，而在生理pH是凝胶。
6.制备放射性脱乙酰壳多糖配合物的方法，其特征在于1)把稳定核素通过在核反应器中用中子照射转化成放射性核素，2)把所得到的放射性核素溶解在蒸馏水中形成放射性核素溶液，3)把脱乙酰壳多粒解在蒸馏水中形成脱乙酰壳多糖溶液，4)把放射性核素溶液加到脱乙酰壳多糖溶液中形成放射性脱乙酰壳多糖配合物。
7.按权利要求6制备放射性脱乙酰壳多糖配合物的方法，其中稳定核素可选自164Dy(NO3)3、164Dy2O3、165Ho(NO3)3和165Ho2O3。
8.按权利要求6制备放射性脱乙酰壳多糖配合物的方法，其中脱乙酰壳多糖溶液的pH为2-4。
9.按权利要求8制备放射性脱乙酰壳多糖配合物的方法，其中脱乙酰壳多糖溶液是乙酸溶液。
10.按权利要求6制备放射性脱乙酰壳多糖配合物的方法，其中放射性核素和脱乙酰壳多糖的分子量比值为1∶1-4。
11.按权利要求6制备放射性脱乙酰壳多糖配合物的方法，其中脱乙酰壳多糖溶液的粘度是100-200cps。
12.放射性大颗粒，其特征在于把权利要求1的放射性脱乙酰壳多糖配合物制成粒子。
13.按权利要求12的放射性大颗粒，其中粒子的尺寸是1-5μm。
14.制备放射性大颗粒的方法，其特征在于1)稳定核素通过在核反应器内用中子照射转化成放射性核素，2)把所得到的放射性核素溶解在蒸馏水中形成放射性核素溶液，3)把脱乙酰壳多糖溶解于蒸馏水中形成脱乙酰壳多糖溶液，4)把放射性核素溶液加到脱乙酰壳多糖溶液中形成放射性脱乙酰壳多糖配合物溶液，5)把碱溶液加到放射性脱乙酰壳多糖配合物溶液中形成放射性脱乙酰壳多糖大颗粒。
15.制备放射性脱乙酰壳多糖配合物用的药盒，其特征在于该药盒含放射性核素溶液和冻干的脱乙酰壳多糖。
16.按权利要求15用于的制备放射性脱乙酰壳多糖配合物的药盒，其中冻干的脱乙酰壳多糖是通过冻干含抗坏血酸的脱乙酰壳多糖溶液制备的。
17.使用放射性脱乙酰壳多糖配合物及其大颗粒作内部放射治疗剂。
18.按权利要求17用作内部放射治疗剂，其中疾病是类风湿性关节炎或囊状癌，如肝癌、脑癌、乳腺癌或卵巢癌。
全文摘要
本发明涉及由放射性核素标记的脱乙酰壳多糖，一种生物相溶和生物降解的天然聚合物，形成的放射性脱乙酰壳多糖配合物，由脱乙酰壳多糖配合物制成颗粒形成的放射性脱乙酰壳多糖大颗粒，和供制备放射性脱乙酰壳多糖配合物用的药盒，其制备方法，及其用于内部放射治疗剂。放射性脱乙酰壳多糖配合物及其大颗粒可用于内部放射疗法，通过直接给药于损害处治疗类风湿性关节炎或囊状癌如肝癌、脑癌、腺乳癌、卵巢癌等。
文档编号A61K51/02GK1139116SQ96103508
公开日1997年1月1日 申请日期1996年3月11日 优先权日1995年3月10日
发明者朴敬培, 金荣美, 金载禄 申请人:韩国原子力研究所