二丁酰环磷腺苷钙在制备治疗脊髓损伤的药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物化学领域，具体涉及二丁酰环磷腺苷钙在制备治疗脊髓损伤的药 物中的应用。
【背景技术】
[0002] 脊髓损伤是一种致残率高，愈后差的疾病，发病率为每年10. 4~83. 0/100万，并 有逐渐上升的趋势。脊髓损伤导致组织中部分或者全部的神经细胞、神经胶质细胞等死亡， 同时组织中的神经传导纤维发生断裂、脱髓鞘等，从而造成了脊髓神经功能的缺失。脊髓损 伤不仅可以导致损伤平面以下感觉、运动功能的障碍活丧失，还可能导致多个器官功能的 障碍，如呼吸系统、循环系统、泌尿系统和消化系统等。由于其造成劳动力的丧失、长时间的 康复治疗、占用大量的医疗资源以及昂贵的医疗费用，给个人、家庭以及全社会带来巨大的 负担。虽然手术治疗和药物治疗（如糖皮质激素）在不同程度上使受损的脊髓得到了恢复 和再生的空间，但仍不可避免的造成了病人瘫痪乃至死亡的严重后果。
[0003] 环磷腺苷是核苷酸的衍生物，近年的研宄表明，环磷腺苷在脊髓损伤恢复中具有 重要作用。脊髓损伤后的功能恢复主要受限于损伤轴突的再生能力。轴突再生失败是由 于轴突自身生长能力丧失造成，细胞外环境中的髓鞘磷脂抑制物等也能诱导轴突生长锥塌 陷、抑制轴突再生，星形胶质细胞形成的胶质瘢痕成为轴突延伸的物理屏障。更为关键的 是，脊髓损伤会导致神经元的变性、坏死或严重萎缩，减少了神经元的数量。因而，促进轴突 再生和神经元存活能改善中枢神经系统损伤后的修复。成年生物神经元之所以丧失再生能 力，重要原因之一是细胞内环磷腺苷水平下降。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是针对脊髓损伤疾病，提供一种二丁酰环磷腺苷钙的 药物新用途。本发明的发明人通过反复实验研宄发现，二丁酰环磷腺苷钙能够明显提高脊 髓损伤大鼠的行为学功能恢复、增加神经元环磷腺苷浓度、促进轴突生长，尤其是钙离子与 二丁酰环磷腺苷有协同作用，与单独使用二丁酰环磷腺苷相比，二丁酰环磷腺苷钙的药效 更加突出。
[0005] 本发明提供了二丁酰环磷腺苷钙在制备治疗脊髓损伤的药物中的应用。
[0006] 本领域技术人员均知晓，本发明的二丁酰环磷腺苷钙较佳地包括 C18H23N5O8P?l/2Ca和C18H23N5O8P?l/2Ca? 2. 3H20,本发明优选C18H23N5O8P?l/2Ca? 2. 3H20。
[0007] 其中，所述的脊髓损伤较佳地包括神经元细胞变性、坏死和轴突退变。
[0008] 其中，所述的二丁酰环磷腺苷钙的给药剂量较佳地为0.6~1.0mg/kg体重/日。 [0009] 其中，所述的二丁酰环磷腺苷钙的给药方式为静脉注射、或肌肉注射。
[0010] 其中，所述的药物较佳地是以有效量的二丁酰环磷腺苷钙为活性成分，加上药学 上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药物制剂。
[0011] 其中，所述的药物制剂较佳地是冻干粉针或注射剂，最佳地是冻干粉针。
[0012] 在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实 例。
[0013] 本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0014] 本发明的积极进步效果在于：本发明研宄发现二丁酰环磷腺苷钙可用于中枢神经 系统功能损伤的修复，如脊髓损伤的修复。在大鼠脊髓损伤后BBB检测功能恢复、神经元环 磷腺苷浓度、神经元修复三个方面，二丁酰环磷腺苷钙的功能都显著超过二丁酰环磷腺苷。 二丁酰环磷腺苷钙不仅能够抑制磷酸二酯酶、防止环磷腺苷的降解，还能通过钙离子激活 腺苷酸环化酶、增加环磷腺苷的合成。因而二丁酰环磷腺苷钙具有更加强大的活化环磷腺 苷信号途径的能力，是优良的促进脊髓损伤恢复的药物。
【附图说明】
[0015] 图1为脊髓损伤后大鼠的BBB评分变化曲线图。
[0016] 图2为脊髓损伤后大鼠的脊髓中cAMP含量变化曲线图。
[0017] 图3为脊髓损伤后大鼠的神经元数目变化图。
【具体实施方式】
[0018] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商 品说明书选择。
[0019] 实验材料和方法
[0020] 清洁SD雄性大鼠，体重200-220g，购于上海实验动物中心，分为四组、每组30只 (其中又分为〇、7、14天组各10只），分别为A组：阴性对照组（无脊髓损伤造模处理），B 组：生理盐水组（脊髓损伤造模后即肌注等量生理盐水），C组：注射二丁酰环磷腺苷组（即 脊髓损伤造模后即肌注二丁酰环磷腺苷〇. 16mg/日，以市售的20mg二丁酰环磷腺苷为活性 成分溶于2ml生理盐水中配制成溶液），D组：注射二丁酰环磷腺苷钙组（即脊髓损伤造模 后即肌注二丁酰环磷腺苷钙0. 16mg/日，以20mgC18H23N5O8P?l/2Ca? 2. 3H20为活性成分溶 于2ml生理盐水中配制成溶液）。
[0021] 二丁酰环磷腺苷钙来自上海上药第一生化药业有限公司（批次1306021)
[0022] 脊髓中度损伤大鼠模型一一双侧椎板去除术（T8)
[0023] (1)大鼠腹腔注射1%戊巴比妥（50mg/kg)充分麻醉后，俯卧，背部以TlO(椎体） 为中心剌毛备皮；
[0024] (2)暴露T8椎板，背侧中线30-40mm纵行切口，切开皮肤及皮下组织，暴露T6-11 节椎板；
[0025] (3)剪开T9两侧上关节突，并将T8两侧椎弓根剪断，使T8椎板与椎骨分离，移除 T8椎板，清创后清洗暴露硬脊膜包裹下的脊髓。
[0026] 脊髓夹伤
[0027] (1)用间隙0. 5mm镊子自脊髓两侧向内匀速闭合并保持闭合状态20秒；
[0028] (2)造模成功后，分层缝合肌肉和皮肤。
[0029] 实施例IBBB检测功能恢复实验
[0030] 将动物至于表面光滑，四周封闭的开放环境中，自由运动4分钟，用录像机进行摄 像。通过评估大鼠躯干，尾巴，后肢的运动情况来评分。根据BBB评分标准21分，分早中晚 三期：
[0031] 0分：无可见后肢运动
[0032] 1分：一或两个关节轻微运动，通常为髋和/或膝关节
[0033] 2分：一个关节广泛活动或一个关节广泛活动且有另一关节轻微活动
[0034] 3分：两个关节广泛活动
[0035] 4分：后肢全部三个关节可轻微活动
[0036] 5分：两个关节轻微活动，第三个关节可广泛活动
[0037] 6分：两个关节广泛活动，第三个关节可轻微活动
[0038] 7分：后肢全部三个关节可广泛活动
[0039] 8分：非承重情况下可以爪掌面着地
[0040] 9分：间或爪掌面承重支撑或爪背面承重移动，无爪掌面支撑移动 [0041] 10分：偶见爪掌面承重移动；无前后肢协调动作
[0042] 11分：可较多的见到掌面承重移动，但无前后肢协调动作
[0043] 12分：可较多的见到掌面承重移动，偶见前后肢协调动作
[0044] 13分：常见掌面承重移动，可常见前后肢协调动作
[0045] 14分：有持续性掌面承重移动和前后肢协调动作；或出现常见的掌面移动，持续 型前后肢协调动作，偶有爪背侧移动
[0046] 15分：持续性掌面移动和持续性前后肢协调动作，前肢前进过程中无或欧有抓 地；初接触时主动爪位置与身体平行
[0047] 16分：步态中可见持续性掌面移动和持续性前后肢协调动作，前肢前进过程中常 见爪抓地；初接触时主动爪位置与身体平行，负重转移后旋转。
[0048] 17分：步态中可见持续性掌面移动和持续性前后肢协调动作，前肢前进过程中常 见爪抓地；初接触时和负重转移后主动爪位置均与身体平行。
[0049] 18分：步态中可见持续性掌面移动和持续性前后肢协调动作，前肢前进过程中可 持续性爪抓地；初接触时主动爪位置均与身体平行，负重转移后旋转。
[0050] 19分：步态中可见持续性掌面移动和持续性前后肢协调动作，前肢前进过程中可 持续性爪抓地；初接触时和负重转移后主动爪位置均与身体平行。尾巴有时或总是下垂。
[0051] 20分：持续性掌面移动，持续性协调步态，足趾持续抓地，初接触时和负重转移后 主动爪位置均与身体平行，躯干不稳定，尾巴持续翘起。
[0052] 21分：持续性掌面移动，持续性协调步态，足趾持续抓地，活动过程中主动爪位置 始终与身体平行，躯干持续稳定，尾巴持续翘起。
[00531
[0054] 图1为脊髓损伤后大鼠的BBB评分变化曲线图。取0天、7天、14天三个时间点进 行观察。从图中可见，B、C、D组损伤（SCI)O天时大鼠后肢完全瘫痪（0分）。7天后，C组 (11. 1±0. 8)恢复显著高于B组（9. 8±0. 7)，D组（12. 5±0. 6)恢复显著高于C组；p〈0. 05， 有显著差异。14天后，C组（15. 6±0. 6)恢复显著高