温搅拌0. 5h，析出乳白色固体；滤出固体用甲醇重结晶， 得杂质C。
[0046] 其中杂质D按如下合成路线发生如下反应：
[0047]
[0048]取7H-茶碱9. 0g(50.0 mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺80mL，搅拌状态下依次加入 溴乙醛缩二乙醇9. 0mL(60mmol)，粉末状无水碳酸钾20. 7g(150mmol)，逐渐升温至120°C， 反应5h，TLC监测无原料剩余，冷却后抽滤，滤液减压蒸出DMF，向浓缩后的反应液中加入无 水乙醇30mL，室温搅拌0. 5h，析出乳白色固体，抽滤后用甲醇重结晶得杂质D。
[0049]其中杂质E的合成方法为：
[0050]
[0051] 取7H-茶碱4. 0g(22. 2mmol)溶于N, N-二甲基甲酰胺30mL，搅拌状态下依次加入 无水碳酸钾6. 2g(44. 8mmol)，溴乙酸甲醋2. 8mL(30.0 mmol)，逐渐升温至30°C，反应3h，TLC 监测无原料剩余，抽滤除去无机盐，向滤液中加入水50mL，用乙酸乙醋萃取（30mLX 4)，合 并有机层，蒸馏水洗有机层3次，干燥，浓缩得白色固体3. 0g ;白色固体溶于40mL甲醇，加 入氢氧化钠水溶液（1. 9g/10mL)，45°C下反应lh，冰水浴下用盐酸甲醇调节pH至3-4,析出 大量白色固体，搅拌〇. 5h，抽滤，干燥得杂质E。
[0052] 其中杂质A按如下合成路线发生如下反应：
[0053]
[0054] 取有关物质B 4. 0g(18. Ommol)，加入30mL甲醇，冰水浴下缓慢加入硼氢化钠 1. lg (29. Ommol)，加料完毕，逐渐升至室温反应2h，TLC监测无原料剩余，冰水浴下用2M盐 酸调节pH为3-4,再用饱和碳酸钠溶液调节pH至8-9,减压蒸除甲醇，用水-乙酸乙酯萃取， 合并有机层，干燥，浓缩得乳白色固体，乙醇重结晶，得杂质A(下文又称杂质F)。
[0055] 其中杂质G按如下合成路线发生如下反应：
[0056]
[0057] 取7H-茶碱4. 0g(22. 2mmol)溶于N, N-二甲基甲酰胺30mL，搅拌状态下依次加 入无水碳酸钾6. 2g(44. 8mmol)，再加入溴乙酸乙醋2. 8mL(30.0 mmol)，逐渐升温至50°C， 反应4h，TLC监测无原料剩余，抽滤除去无机盐，向滤液中加入水50mL，用乙酸乙醋萃取 (30mLX 4)，合并有机层，用蒸馏水洗有机层3次，干燥，浓缩得杂质G。
[0058] 本发明的有益效果在于：提供了一种耐用性好、操作简便快捷、系统适用性高的利 用高效液相色谱法可以有效控制多索茶碱注射液的有关物质的方法。经过方法学考察实 验，在专属性、重现性、稳定性、精密度等方面均符合要求，创造性的提出了至少含有茶碱、 茶碱乙醇、茶碱乙醛在内的三种对照品用于有关物质的测定，同时又提供了杂质A"、杂质 B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质G、杂质咖啡因、三甲基黄嘌呤、杂质C'、杂质D'、杂质E'、杂质 2和茶碱乙酸等用于多索茶碱有关物质测定的杂质对照品，可以控制由于不同合成路线、制 剂制备过程和贮存过程带来的有关物质。本发明还提供了分离和合成包括杂质A、杂质A"、 杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质G等在内用于多索茶碱注射液有关物质测定的对照品的 合成方法。特别指出的的是，本发明的测定方法也适用于以氯化钠作为渗透压调节剂的多 索茶碱注射液，详细实验见试验例3。
【附图说明】
[0059] 图1.茶碱乙醛氢谱谱图； 图2.茶碱乙醛碳谱谱图； 图3.茶碱乙醛质谱谱图； 图4. Impurity F氢谱谱图； 图5. Impurity F碳谱谱图； 图6. Impurity F质谱谱图。 下面通过试验例，进一步说明本发明的方法：
[0060] 试验例1方法学考察实验
[0061] 1、色谱条件
[0062] 仪器：安捷伦1100高效液相色谱仪
[0063] 色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（大连依利特Hypersil0DS2 5ym 4. 6x250mm)
[0064] 流动相：乙睛一磷酸盐缓冲液（pH5. 8) (12:88)
[0065] 检测器：DAD检测器
[0066] 2、专属性
[0067] 通过筛查多索茶碱原料和多索茶碱注射液有关物质的检测结果可知，多索茶碱注 射液的杂质有三个：除了原料中引入有关物质茶碱与杂质X(暂定），在茶碱峰前，产生了一 个新的未知杂质 杂质Y(暂定）。
[0068] 根据分析杂质可能产生的来源，共制备了除茶碱以外的七个，分别为：A"、B、C、D、 E、F、G〇
[0069] 2. 1杂质定位：取多索茶碱注射液（批号：121019)，精密量取5ml，置100ml量瓶 中，用水稀释至刻度，摇匀；精密吸取10 y 1注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0070] 取茶碱和七个杂质，精密称取10mg，分别置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，再精密 量取lml置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。精密吸取10 y 1注入液相色谱仪，记录色 谱图，多索茶碱、茶碱及七个杂质的保留时间、最大吸收波长结果见表一：
[0071] 表一：多索茶碱与杂质保留时间表
[0072]
[0073] 2. 2杂质确定
[0074] 根据多索茶碱原料及注射液中有关物质现状及杂质对照品的比较分析，可以明确 多索茶碱注射液中的三个杂质：茶碱、X、Y，茶碱为杂质对照品中的杂质H;杂质X为杂质对 照品中的杂质F ;杂质Y为杂质对照品中的杂质B。杂质确认后，将三个杂质根据保留时间 的先后顺序依次代码为：茶碱、杂质A(杂质概况及结构确证中的杂质F)、杂质B(杂质概况 及结构确证中的杂质B)。
[0075] 2. 2溶剂：精密吸取水10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，与供试品溶液（批号： 120915)色谱图相比较，溶剂对三个杂质及主成分峰无干扰。
[0076] 2. 3辅料：配制0. 9%氯化钠溶液，精密吸取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，与 供试品溶液（批号：120915)色谱图相比较，辅料对三种杂质及主成分峰无干扰。
[0077] 2. 4杂质代码：杂质确认后，将三个杂质根据保留时间的先后顺序依次代码为：茶 碱、杂质A(杂质概况及结构确证中的杂质F)、杂质B(杂质概况及结构确证中的杂质B)。
[0078] 3、杂质纯度检测：
[0079] 3. 1茶碱（供含量测定用）：批号：100121-199903,由中国药品生物制品检定所提 供，纯度为100%。
[0080] 3. 2杂质A、B:取取杂质A、杂质B的色谱图，按峰面积归一化法计算，杂质A为 99. 45%，杂质 B :97. 18%。
[0081] 取杂质A与杂质B分别检测水分、炽灼残渣，溶剂残留，结果见表二：
[0082] 表二：杂质检测结果数据表
[0083]
[0084]杂质 A 纯度：99. 45-0. 11-0. 02-0. 02 = 99. 30%，
[0085]杂质 B 纯度：97. 18-0. 23-0. 02-0. 03 = 96. 91 %。
[0086] 4、定量限与检测限
[0087] 取茶碱、杂质A、杂质B的贮备液，在分别用水稀释后，分别精密吸取10 y 1注入液 相色谱仪，记录色谱图，最低检测限与定量限如下：
[0088]茶碱：最低检测限为：11.51mg/50mlxl/10xl/50xl/10xl0x100 0 = 0? 4604ng，信噪 比为3:1 ;定量限为：0. 4604 y g/ml。
[0089]杂质 A :最低检测限为：11.91mgx99. 30 % /50mlxl/10xl/50xl/10xl0x100 0 = 0. 4732ng，信噪比为 1:1 ;定量限为：0. 4732 μg/ml。
[0090]杂质 B :最低检测限为：11. 07mgx96. 91%/50mlxl/10xl/50xl/10xl0xl000= 0.4292ng，信噪比为2:1;定量限为：0.4292yg/ml。
[0091] 5、线性关系
[0092] 取茶碱、杂质A、杂质B的备用液，精密量取5ml，分别置50ml量瓶中，用水稀释至 刻度，摇匀，作为线性浓度贮备液；每次分别量取〇. 2ml、0. 5ml、lml、l. 5ml、2ml、2. 5ml，置 同一 25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；分别精密吸取10 y 1注入液相色谱仪，记录峰面 积，结果见表三：
[0093] 表三：三个杂质线性关系数据表
[0094]
[0096] 以浓度对峰面积进行线性回归，得线性方程：
[0097]茶碱：A = 54. 227C-0. 0125 R2= 0? 9996 r = 0? 9998
[0098]杂质 A : A = 36. 403C+0. 5764 R2= 0? 9990 r = 0? 9995
[0099]杂质 B : A = 32. 394C+0. 2567 R2= 0? 9992 r = 0? 9996
[0100] 线性试验结果表明：茶碱在0. 1842yg/ml~2. 302yg/ml，杂质A在0. 1893yg/ ml~2. 366yg/ml，杂质B在0? 1717yg/ml~2. 146yg/ml之间均具有良好的线性关系。
[0101] 6、精密度试验
[0102] 取线性关系项下浓度2样品，精密吸取10ul注入液相色谱仪，连续进样6次，记录 峰面积，见表四：
[0103] 表四：杂质精密度试验数据表
[0104]
[0105] 7、稳定性试验
[0106] 取精密度样品分别在0h、2h、4h、8h、12h、24h精密吸取10ul注入液相色谱仪，记录 峰面积，结果见表五：
[0107] 表五、杂质溶液稳定性试验结果数据表
[0108]
[0109] 试验结果表明：样品溶液在8小时较稳定。
[0110] 8、重复性试验
[0111] 因原料与注射液中茶碱与杂质A的峰面积均低于定量限，在重复性试验中取多索 茶碱注射液（批号：120915)，精密量取5ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；共制 备5份样品，每份分别精密吸取10 y 1注入液相色谱仪，记录色谱峰面积，按外标法计算杂 质限量，结果见表六：
[0112] 表六：杂质