Og 磷酸盐缓冲液 补充至全量 冻干保护剂 6g ① 分别称取卵磷脂、胆固醇，用氯仿或乙醚中的一种或两种溶解； ② 称取盐酸头孢噻呋，用甲醇溶解，制成澄清溶液； ③ 将步骤①和步骤②得到的两种溶液混合，混合均匀后置于梨形烧瓶中，减压旋转蒸 发至梨形烧瓶内壁形成一层均匀薄膜； ④ 将聚乙二醇2000,溶于磷酸盐缓冲溶液中，然后倒入梨形烧瓶中，缓慢振摇至膜全部 洗下为止，得脂质体混悬液，置超声仪中超声至半透明溶液，0. 45 μ m滤膜过滤，装于试剂瓶 中，密闭，低温保存，即得盐酸头孢噻呋脂质体。
[0039] ⑤冻干：取步骤④中得到的脂质体混悬液，加入冻干保护剂，混匀，分装与西林瓶 中，冷冻后放入冷冻干燥机中常规冻干条件下冻干。即得载有盐酸头孢噻呋的脂质体冻干 剂。
[0040] 试验一脂质体的质量评价试验 1材料与仪器 高效液相色谱仪；旋转蒸发仪；纳米粒径测定仪Zetasizer ;数显恒温水浴锅； 超声波提取器；电子天平。对羟基苯甲酸乙酯，盐酸头孢噻呋，甲醇、乙腈和四氢呋喃为 色谱纯；其他试剂均为分析纯。
[0041] 2方法与结果 2. 1外观及再分散性观察 观察盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂的外观；结果盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂呈淡黄色疏 松状，表面紧实光滑。加入0.01m〇l/L PBS (pH 6. 5) 10ml，轻轻振摇，观察其再分散性；结 果加入PBS轻轻振摇，30s内可分散为均匀的淡黄色混悬液，表明该脂质体冻干剂再分散性 良好。
[0042] 2.2溶液的制备 取对羟基苯甲酸乙酯适量，加0. 05mol/L醋酸铵溶液制成每1ml中含50 μ g的溶液，摇 匀，即得内标溶液。精密称取盐酸头孢噻呋对照品l〇mg，至IOml容量瓶中，，加二甲基甲酰 胺-正丁醇（I : 1)溶液Iml，用50%的乙腈溶液稀释至刻度，精密量取Iml，，精密加入内标 溶液l〇ml，摇匀，即得对照品溶液。
[0043] 2.3色谱条件 用C18色谱柱，以为醋酸盐缓冲液(取乙酸按3. 95g，加10%四丁基氢氧化按溶液54ml， 加水至700ml，用冰醋酸调pH值至6. 6~6. 8)_甲醇-四氢呋喃（700:200:110)为流动相， 检测波长254nm，进样量20 μ 1。结果表明：盐酸头孢噻呋的峰形良好。供试品中盐酸头孢 噻呋不受干扰。
[0044] 2. 4包封率的测定 精密量取脂质体混悬液2ml，置离心管中，4°C，120000r/min离心10min，精密量取离 心后上清液Iml和脂质体溶液lml，分别置25ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀。分别精 密量取Iml，置IOml容量瓶中，加二甲基甲酰胺-正丁醇（I : 1)溶液Iml，用50%的乙腈溶液 稀释至刻度，精密量取lml，精密加入对强加本甲酸乙酯内标溶液10ml，摇匀，进样20 μ 1， 高效液相色谱法测定峰面积。求得药物含量，按以下公式计算包封率：包封率=(1-游离 药物含量/系统中的药物总量)X 100%。根据工艺条件制得的脂质体微粒形态完整，盐酸头 孢噻呋的包封率为90%。
[0045] 2. 5 粒径 取PBS复溶后的脂质体冻干剂，用Zetasizer测定仪测定粒径与分散系数。结果盐酸 头孢噻呋脂质体的有效粒径为190. 2 ±3. 9nm，分散系数为0. 214。
[0046] 2.6稳定性 盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂样品密封后，于4°C放置0、1、2、3、6、9、12个月，外观无变 化，粒径和包封率无明显变化，表明盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂在4°C条件下稳定性良好， 见表1。
[0047] 表1盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂稳定性观察 3结论
质量评价试验证明：本发明的盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂包封率在90%左右，粒径为 190. 2 ± 3. 9nm，将其于4°C放置12个月，稳定性良好，保存期长。本脂质体经冷冻干燥，解决 了液态脂质体稳定性差的问题，大大延长了脂质体药物的保质期，运输及实际应用方便，具 有良好的市场开发前景。
[0048] 试验二脂质体冻干剂疗效试验 1材料与方法 1. 1试验药物 盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂(上述实施制得的成品)，盐酸头孢噻呋注射液规格 100mL: 5g，混悬液，青霉素钾，链霉素。
[0049] 1. 2试验动物 本试验在谋农业生态园进行，试验选择自然感染呼吸道疾病，病症为呼吸加快、咳嗽、 呈犬坐样腹式呼吸，鼻流水样活粘液性分泌物、精神沉郁、逐渐减食、消瘦的断奶仔猪80 头。
[0050] 实验分为4组，每组20头仔猪：组1为阴性对照组；组2为阳性对照组；组3为盐 酸头孢噻呋注射液给药组，组4为实施例2的脂质体冻干剂给药组。
[0051] 2试验方法 阳性对照组按青霉素钾30000U/kg体重，链霉素按15000IU/kg体重，肌肉注射，每天 2-3次，连用4天。实验组3按盐酸头孢噻呋注射液5mg/kg体重，肌肉注射，每日1次，连用 4天。实验组4按实施案例2的脂质体冻干剂按盐酸头孢噻呋计5mg/kg体重，肌肉注射，每 日1次，连用4天。阴性对照组按阳性对照组注射量算，肌肉注射相同体积的生理盐水，每 日1次，连用4天。
[0052] 3疗效判定标准(见表2) 表2呼吸道系统疾病疗效评价标准
4试验结果与分析 4个试验组猪呼吸道疾病的试验结果进行比较，见表3。
[0053] 表3各试验组治疗猪呼吸道疾病的疗效比较
从表2可以看出，第4组采用上述实施案例2的样品治疗效果最好，用药4天，治愈率 为85%，好转率为15%，无效率为0 ;第3组盐酸头孢噻呋注射液，用药4天，治愈率为75%，好 转率为25%。试验组4的治疗效果较试验组3高，即盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂较盐酸头孢 噻呋注射液的治疗效果好。而组2青霉素钾、硫酸链霉素组的治愈率为40%，低于组3和组 4〇
[0054] 5 结论 脂质体膜的结构类似与生物膜，在机体内生物降解，其选择性高、靶向性强从而具有增 强药物的亲细胞性及在体液中的溶解性，减少药物剂量，减少毒副作用等特点。药物被包埋 在脂质体中缓慢释放，因而延长了药物的作用时间，起到长效的作用。由疗效实验结果可 知：同等治疗剂量下，本发明制备的盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂对猪呼吸道疾病的治疗效 果优于盐酸头孢噻呋混悬液，对猪呼吸道疾病的治愈率高，疗效确切。脂质体是一种理想的 药物载体，盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂发挥脂质体药物的优势，具有广阔的市场前景。
[0055] 尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以 理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换 和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
【主权项】
1. 一种盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂，其特征在于：所述的盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂 的原料的重量份组成如下： 盐酸头孢噻呋 3~10份 卵磷脂 15~100份 胆固醇 15~100份 聚乙烯醇2000 4. 5~13. 5份。2. 如权利要求1所述的盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂，其特征在于：所述的盐酸头孢噻 呋脂质体冻干剂的原料的重量份组成如下： 盐酸头孢噻呋 4份 卵磷脂 20份 胆固醇 20份 聚乙烯醇2000 5份。3. 如权利要求1所述的盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂，其特征在于：所述的盐酸头孢噻 呋脂质体冻干剂的原料的重量份组成如下： 盐酸头孢噻呋 6. 5份 卵磷脂 45. 5份 胆固醇 23份 聚乙烯醇2000 6份。4. 如权利要求1所述的盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂，其特征在于：所述的盐酸头孢噻 呋脂质体冻干剂的原料的重量份组成如下： 盐酸头孢噻呋 8份 卵磷脂 40份 胆固醇 40份 聚乙烯醇2000 10份。5. -种制备如权利要求1~4任一项所述的盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂的方法，其特征 在于：所述方法的具体步骤如下： 脂质体的制备： 分别将卵磷脂、胆固醇用氯仿或乙醚中的一种或两种溶解，将盐酸头孢噻呋用甲醇溶 解，将两种溶液混合，混合均匀后置于梨形烧瓶中，减压旋转蒸发至梨形烧瓶内壁形成一层 均匀薄膜，将聚乙二醇2000,溶于pH 7. 0的磷酸盐缓冲溶液中，然后倒入烧瓶中，缓慢振摇 至膜全部洗下为止，得脂质体混悬液，置超声仪中超声至半透明溶液，0. 45 y m滤膜过滤，装 于试剂瓶中，密闭，低温保存，即得盐酸头孢噻呋脂质体； 冻干： 步骤（1)中得到的脂质体混悬液，加入冻干保护剂，混匀，分装与西林瓶中，冷冻后放入 冷冻干燥机中冻干，即得载有盐酸头孢噻呋的脂质体冻干剂。6. 如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤（2)中，所述的冻干保护剂为葡萄 糖、海藻糖和甘露醇中的一种或几种，加入量与盐酸头孢噻呋的重量比为3~6 :3~10。7. 如权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤（2)中，所述的冻干保护剂的加入 量与盐酸头孢噻呋的重量比为4 :4。8. 如权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤（2)中，所述的冻干保护剂的加入 量与盐酸头孢噻呋的重量比为5 :6. 5。9. 如权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤（2)中，所述的冻干保护剂的加入 量与盐酸头孢噻呋的重量比为4 :8。
【专利摘要】本发明公开了一种盐酸头孢噻呋脂质体冻干剂及其制备方法，重量份组成如下：盐酸头孢噻呋3～10份、卵磷脂15～100份、胆固醇15～100份、聚乙烯醇2000 4.5～13.5份。将盐酸头孢噻呋、卵磷脂和胆固醇溶解，混合，真空干燥后，加聚乙二醇2000磷酸盐缓冲溶液制成脂质体混悬液。往混悬液中加入冻干保护剂，混匀，分装于西林瓶中，放入冷冻干燥机干燥，得到载有盐酸头孢噻呋脂质体的冻干剂。该脂质体包封率好，脂质体冻干剂经过长期稳定考察，稳定性良好；复溶后在液体介质中分散性好、性状稳定。通过临床疗效试验证明与混悬剂相比，此脂质体冻干剂给药体内循环时间延长，对细菌感染引起的猪呼吸道的疗效确切。
【IPC分类】A61K9/19, A61K9/127, A61K47/32, A61K31/546, A61P31/04
【公开号】CN104983695
【申请号】CN201510419267
【发明人】唐进波, 毛娉婷, 肖欣戈, 熊俊芳
【申请人】江西博莱大药厂有限公司
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年7月17日