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【主权项】
1. 一种用于制备免疫原性裂解物的方法，该方法包括以下步骤： i)提供来自至少两种不同细胞系的同种异体间皮瘤肿瘤细胞；ii)诱导肿瘤细胞的坏死或凋亡； iii)裂解坏死或凋亡的肿瘤细胞，以获得裂解物。2. 根据权利要求1所述的方法，其中，至少一种肿瘤细胞系来自具有如下免疫结构的 肿瘤组织样本： -每mm2多于500个CD3 +细胞； -每mm2多于200个⑶45RO+细胞； -每mm2少于50个FoxP3 +细胞；和 -每mm2少于1000个CD206 +细胞。3. 根据权利要求1或2所述的方法，其中，至少两种肿瘤细胞系来自具有如下免疫结构 的肿瘤组织样本： -每mm2多于500个CD3 +细胞； -每mm2多于200个⑶45RO+细胞； -每mm2少于50个FoxP3 +细胞；和 -每mm2少于1000个CD206 +细胞。4. 根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所述间皮瘤肿瘤细胞的免疫原性 在诱导坏死或凋亡之前被增强。5. 根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所述间皮瘤肿瘤细胞的免疫原性 通过以下方式被增强： 将细胞在41. 2°C或更高的温度下孵育1-120分钟，优选20-50分钟，最优选约30分钟， 和/或通过将细胞暴露于氧化修饰，和/或将细胞暴露于组蛋白脱乙酰酶抑制剂，和/或将 细胞暴露于DNA甲基转移酶抑制剂。6. 根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所述间皮瘤肿瘤细胞来自人。7. 根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所提供的间皮瘤肿瘤细胞包括来 自至少三种，优选至少五种肿瘤细胞系的细胞，所述肿瘤细胞系优选为间皮瘤肿瘤细胞系。8. 根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所用的同种异体间皮瘤肿瘤细胞 选自如下细胞系中的两种或多种： Thorr01 (保藏号DSMACC3191)，Thorr02 (保藏号DSMACC3192)，Thorr03 (保藏 号DSMACC3193)，Thorr04 (保藏号DSMACC3194)，Thorr05 (保藏号DSMACC3195)，Thorr 〇6(保藏号DSMACC3196)。9. 根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，通过将细胞循环冻融以诱导所述 同种异体间皮瘤肿瘤细胞的坏死。10. 根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，通过将细胞置于至少15kJ/m2的 紫外线（UV)-B-辐射以诱导所述同种异体间皮瘤肿瘤细胞的凋亡。11. 根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，将间皮瘤肿瘤细胞裂解后，将所 得到的裂解物进行至少50Gy，优选至少IOOGy的辐射并离心。12. 根据权利要求1-11中的任意一项所述的方法获得的裂解物。13. 负载有权利要求12所述的裂解物的树突状细胞。14. 根据权利要求13所述的树突状细胞，其中，所述树突状细胞是自体的或同种异体 的，优选地，所述树突状细胞是自体的。15. 根据权利要求13或14所述的树突状细胞，其中，所述树突状细胞是未成熟的或成 熟的，优选地，所述树突状细胞是未成熟的。16. 根据权利要求13-15中的任意一项所述的树突状细胞，其中，所述树突状细胞来自 人。17. 根据权利要求13-16中的任意一项所述的树突状细胞，其中，相对于每当量的树突 状细胞，所述树突状细胞负载有至少〇. 1当量的肿瘤细胞，优选至少〇. 2当量的肿瘤细胞， 更优选至少〇. 5当量的肿瘤细胞，最优选至少1当量的肿瘤细胞。18. 含有根据权利要求12所述的裂解物或根据权利要求13-17中的任意一项所述的树 突状细胞以及药学上可接受的载体的药物组合物。19. 根据权利要求18所述的药物组合物，其中，所述组合物含有佐剂。20. 根据权利要求19所述的药物组合物，其中，所述佐剂为热休克蛋白、卡介苗（BCG)、 含有CpG-ODN序列的细菌非甲基化DNA、脱毒佐剂或蒙泰耐德油佐剂。21. -种用于治疗或预防间皮瘤的药物组合物的制备方法，该方法包括以下步骤： i)提供来自至少两种不同细胞系的同种异体间皮瘤肿瘤细胞，并制备它们的裂解 物； ii) 提供树突状细胞； iii) 用肿瘤细胞的裂解物负载树突状细胞，并提供药学上可接受的载体。22. 根据权利要求21所述的方法，其中，至少一种肿瘤细胞系来自具有如下免疫结构 的肿瘤组织样本： -每mm2多于500个CD3 +细胞； -每mm2多于200个⑶45R0 +细胞； -每mm2少于50个FoxP3 +细胞；和 -每mm2少于1000个CD206 +细胞。23. 根据权利要求21或22所述的方法，其中，至少两种肿瘤细胞系来自具有如下免疫 结构的肿瘤组织样本： -每mm2多于500个CD3 +细胞； -每mm2多于200个⑶45R0 +细胞； -每mm2少于50个FoxP3 +细胞；和 -每mm2少于1000个CD206 +细胞。24. 根据权利要求20-23中任意一项所述的方法，其中，使用根据权利要求12所述的裂 解物负载树突状细胞。25. 根据权利要求20-24中任意一项所述的方法，其中，所述树突状细胞是自体的或同 种异体的，优选地，所述树突状细胞是自体的。26. 根据权利要求20-25中任意一项所述的方法，其中，当用所述裂解物负载所述树突 状细胞时，所述树突状细胞是未成熟的。27. 根据权利要求20-26中任意一项所述的方法，其中，佐剂被加入到所述组合物中。28. 根据权利要求20-27中的任意一项所述的方法获得的药物组合物。29. 根据权利要求12的裂解物，其在治疗间皮瘤中的应用。30. 根据权利要求29所述的裂解物，其中，将所述裂解物与治疗有效量的氮芥烷基化 剂、亚硝基脲、烷基磺酸盐、替莫唑胺CTemodal?)或cox-2抑制剂，优选与氮芥烷基化剂， 如环磷酰胺（EndoxamS))、苯丁酸氮芥（Leukeran? )、氮芥（Mustardgen1? )、乌拉莫 司汀、美法仑（Alkeran?）或异环磷酰胺结合给药至患者。31. 根据权利要求29或30所述的裂解物，其中，在给药所述裂解物之前，所述患者接受 手术和/或化疗治疗。32. 根据权利要求13-17中的任意一项所述的树突状细胞在治疗间皮瘤中的应用。33. 根据权利要求32所述的树突状细胞的应用，其中，将所述树突状细胞与治疗有 效量的氮芥烷基化剂、亚硝基脲、烷基磺酸盐、替莫唑胺（Temodal? )或C0X-2抑制 剂，优选与氮芥烷基化剂，如环磷酰胺（EiKtexan義)、苯丁酸氮芥CLeukemn_)、氮芥 (Mustardgen?)、乌拉莫司汀、美法仑（Alkeran?)或异环磷酰胺结合给药至患者。34. 根据权利要求32或33所述的树突状细胞的应用，其中，在给药所述树突状细胞之 前，所述患者接受手术和/或化疗治疗。35. 根据权利要求32-34中任意一项所述的树突状细胞的应用，其中，给药至患者的树 突状细胞的剂量包括每次接种IXIO3到IX10 个细胞，优选IX105至IX109个树突状细 胞，最优选IXIO6到IX108个树突状细胞。36. 根据权利要求32-35中任意一项所述的树突状细胞的应用，其中，相对于每当量的 树突状细胞，所述树突状细胞负载有至少〇.1当量的肿瘤细胞，优选至少〇.2当量的肿瘤细 胞，更优选至少〇. 5当量的肿瘤细胞，最优选至少1当量的肿瘤细胞。37. 根据权利要求32-36中任意一项所述的树突状细胞的应用，其中，患者被接种至少 一次，优选至少两次，更优选至少三次，并且最优选至少五次根据权利要求31的剂型。38. 根据权利要求18-20和28中的任意一项所述的药物组合物在预防或治疗间皮瘤中 的应用。39. 根据权利要求38所述的药物组合物的应用，其中，将所述组合物与治疗有效 量的氮芥烷基化剂、亚硝基脲、烷基磺酸盐、替莫唑胺（Temodal?)或C0X-2抑制剂， 优选与氮芥烷基化剂，如环磷酰胺（Endoxan⑧）、苯丁酸氮芥（Leukeran?)、氮芥 (Mustardgen?)、乌拉莫司汀、美法仑（Alkeran?)或异环磷酰胺结合给药至患者。40. 根据权利要求38或39所述的药物组合物的应用，其中，在给药所述组合物之前，所 述患者接受化疗治疗。41. 根据权利要求38-40中的任意一项所述的药物组合物的应用，其中，给药至患者的 所述组合物的剂量包括每次接种IXIO3到IX10 个树突状细胞，优选IX105至IX109个 树突状细胞，最优选IXIO6到IX108个树突状细胞。42. 根据权利要求38-41中的任意一项所述的药物组合物的应用，其中，相对于每当量 的树突状细胞，所述树突状细胞负载有至少〇.1当量的肿瘤细胞，优选至少〇.2当量的肿瘤 细胞，更优选至少〇. 5当量的肿瘤细胞，最优选至少1当量的肿瘤细胞。43. 根据权利要求38-42中的任意一项所述的药物组合物的应用，其中，患者被接种至 少一次，优选至少两次，更优选至少三次，并且最优选至少五次根据权利要求42的剂型。44. 以下细胞系中的一种间皮瘤肿瘤细胞：Thorr01(保藏号DSMACC3191)，Thorr 02 (保藏号DSMACC3192)，Thorr03 (保藏号DSMACC3193)，Thorr04 (保藏号DSM ACC3194)，Thorr05 (保藏号DSMACC3195)，Thorr06 (保藏号DSMACC3196)。
【专利摘要】本发明涉及从间皮瘤肿瘤细胞制备免疫裂解物的方法，该裂解物和负载该裂解物的树突状细胞，本发明进一步涉及含有该裂解物或树突状细胞的药物组合物，裂解物的用途，所述负载的树突状细胞或所述药物组合物在预防或治疗间皮瘤中的用途。DSM ACC319120121212
【IPC分类】A61K39/00, A61P35/00, C12N5/0784
【公开号】CN105050617
【申请号】CN201380073970
【发明人】J·P·J·J·海格曼斯, J·G·J·V·阿尔特斯
【申请人】阿姆弗拉公司
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2013年12月20日
【公告号】CA2896994A1, EP2938354A1, US20150352200, WO2014102220A1