真空干燥。 将反应产物再次溶于适量N，N-二甲基甲酰胺，透析、冻干，得到交联的白藜芦醇纳米粒子。
[0189] 实施例50
[0190] 称取0.7g的聚乙二醇单甲醚甲基丙烯酸酯（数均分子量为8000g/mol)，0.40g实 施例2制得的白藜芦醇三甲基丙烯酸酯和0. 29g的1，8-辛二硫醇，溶解于50mL干燥的二 氯甲烷中，加入溶解于5ml二氯甲烷的IOmg的1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯，室温下搅拌 48小时后，利用过量的乙醚/甲醇（2/lv/v)沉降，再利用无水乙醚洗涤两次，抽真空干燥。 将反应产物再次溶于适量N，N-二甲基甲酰胺，透析、冻干，得到交联的白藜芦醇纳米粒子。
[0191] 实施例51
[0192] 称取0.7g的聚乙二醇单甲醚甲基丙烯酸酯（数均分子量为2000g/mol)，0.81g实 施例2制得的白藜芦醇三甲基丙烯酸酯和0. 62g的1，9-壬二硫醇，溶解于50mL干燥的二 氯甲烷中，加入溶解于5ml二氯甲烷的IOmg的1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯，室温下搅拌 48小时后，利用过量的乙醚/甲醇（2/lv/v)沉降，再利用无水乙醚洗涤两次，抽真空干燥。 将反应产物再次溶于适量N，N-二甲基甲酰胺，透析、冻干，得到交联的白藜芦醇纳米粒子。
[0193] 实施例52
[0194] 称取0. 7g的聚乙二醇单甲醚甲基丙烯酸酯（数均分子量为5000g/mol)，0. 32g实 施例2制得的白藜芦醇三甲基丙烯酸酯和0. 25g的1，9-壬二硫醇，溶解于50mL干燥的二 氯甲烷中，加入溶解于5ml二氯甲烷的IOmg的1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯，室温下搅拌 48小时后，利用过量的乙醚/甲醇（2/lv/v)沉降，再利用无水乙醚洗涤两次，抽真空干燥。 将反应产物再次溶于适量N，N-二甲基甲酰胺，透析、冻干，得到交联的白藜芦醇纳米粒子。
[0195] 实施例53
[0196] 称取0.7g的聚乙二醇单甲醚甲基丙烯酸酯（数均分子量为8000g/mol)，0.40g实 施例2制得的白藜芦醇三甲基丙烯酸酯和0. 31g的1，9-壬二硫醇，溶解于50mL干燥的二 氯甲烷中，加入溶解于5ml二氯甲烷的IOmg的1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯，室温下搅拌 48小时后，利用过量的乙醚/甲醇（2/lv/v)沉降，再利用无水乙醚洗涤两次，抽真空干燥。 将反应产物再次溶于适量N，N-二甲基甲酰胺，透析、冻干，得到交联的白藜芦醇纳米粒子。
[0197] 实施例54
[0198] 称取0.7g的聚乙二醇单甲醚甲基丙烯酸酯（数均分子量为2000g/mol)，0.81g实 施例2制得的白藜芦醇三甲基丙烯酸酯和0. 66g的1，10-癸二硫醇，溶解于50mL干燥的二 氯甲烷中，加入溶解于5ml二氯甲烷的IOmg的1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯，室温下搅拌 48小时后，利用过量的乙醚/甲醇（2/lv/v)沉降，再利用无水乙醚洗涤两次，抽真空干燥。 将反应产物再次溶于适量N，N-二甲基甲酰胺，透析、冻干，得到交联的白藜芦醇纳米粒子。
[0199] 实施例55
[0200] 称取0. 7g的聚乙二醇单甲醚甲基丙烯酸酯（数均分子量为5000g/mol)，0. 32g实 施例2制得的白藜芦醇三甲基丙烯酸酯和0. 26g的1，10-癸二硫醇，溶解于50mL干燥的二 氯甲烷中，加入溶解于5ml二氯甲烷的IOmg的1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯，室温下搅拌 48小时后，利用过量的乙醚/甲醇（2/lv/v)沉降，再利用无水乙醚洗涤两次，抽真空干燥。 将反应产物再次溶于适量N，N-二甲基甲酰胺，透析、冻干，得到交联的白藜芦醇纳米粒子。
[0201] 实施例56
[0202] 称取0.7g的聚乙二醇单甲醚甲基丙烯酸酯（数均分子量为8000g/mol)，0.40g实 施例2制得的白藜芦醇三甲基丙烯酸酯和0. 33g的1，6-己二硫醇，溶解于50mL干燥的二 氯甲烷中，加入溶解于5ml二氯甲烷的IOmg的1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯，室温下搅拌 48小时后，利用过量的乙醚/甲醇（2/lv/v)沉降，再利用无水乙醚洗涤两次，抽真空干燥。 将反应产物再次溶于适量N，N-二甲基甲酰胺，透析、冻干，得到交联的白藜芦醇纳米粒子。
[0203] 实施例57白藜芦醇纳米颗粒溶液的制备
[0204] 将1.0 g实施例16制得的交联的白藜芦醇纳米粒子与IOml去离子水混合，搅拌 2h，将溶液移至透析袋，用去离子水透析24h，定容，得到白藜芦醇纳米颗粒溶液。
[0205] 利用动态光散射测量该白藜芦醇纳米粒子的粒径，测量仪器为Wyatt DAWN EOS准 弹性光散射仪，光源为垂直偏振的氦-氖激光器，散射角固定在90°，测量结果如图5所示， 图5为本发明实施例16制备得到的白藜芦醇纳米粒子的动态光散射图。通过图5可以看 出，该纳米粒子粒径为104. 6±8. lnm。透射电镜（TEM)结果见图6,图6为本发明实施例16 制备得到的白藜芦醇纳米粒子的透射电子显微镜镜照片，进一步证明了，所得纳米粒子为 球形结构，具有比较均一的粒径，且粒径大小在IOOnm左右。
[0206] 实施例58白藜芦醇纳米颗粒溶液的制备
[0207] 将1.0 g实施例43制得的交联的白藜芦醇纳米粒子与IOml去离子水混合，搅拌 2h，将溶液移至透析袋，用去离子水透析24h，定容，得到白藜芦醇纳米粒子。
[0208] 利用动态光散射测量该白藜芦醇纳米粒子的粒径，测量仪器为Wyatt DAWN EOS准 弹性光散射仪，光源为垂直偏振的氦-氖激光器，散射角固定在90°。结果表明，该纳米粒 子粒径为112±9. 3nm。
[0209] 实施例59白藜芦醇纳米颗粒药效测试
[0210] 将MCF-7细胞培养于RPMI 1640培养基（GIBCO)，加入IOwt %胎牛血清（Life Technologies)、0· 03wt% L-谷氛酸、100.0 U/mL 青霉素和 100. 0 μ g/mL 链霉素（sigma)，在 37°C，5% CO2的气氛中培养。细胞以5X10 3个细胞/孔的密度种于96-孔培养板，每孔加 入180以1^01^1培养基（含有1(^丨％胎牛血清、501]/1^青霉素和501]/1^链霉素），在37°(：， 5% CO2的气氛中培养24h。移去培养基，每孔加入200 μ L DMEM完全培养基，然后加入不同 浓度的实施例16制得的白藜芦醇纳米颗粒，在37°C，5% CO2的气氛中继续培养72h，用MTT 法测试。利用Bio-Rad 680酶标仪测量每个孔在490nm处的吸收值。细胞存活率按以下公 式计算：细胞存活率（％) = (48&115)16/4〇〇111：1'〇1)\100%，其中，48&115)16和4〇〇111：1'〇1分 别是指样品孔和空白对照孔（加入PBS)的吸收值。
[0211] 结果参见图7,图7为实施例16制备得到的白藜芦醇纳米颗粒的药物浓度和细胞 存活率的关系图。通过图7可以看出，细胞存活率随着药物浓度的上升而下降，而且白藜芦 醇纳米颗粒具有更优于白藜芦醇原料药的药效。本结果进一步表明，本发明提供的水溶性 的白藜芦醇纳米颗粒能够增强白藜芦醇药效。
[0212] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种白藜芦醇纳米颗粒，由聚乙二醇单甲醚衍生物、白藜芦醇衍生物和二硫醇单体 经交联反应得到； 其中，所述聚乙二醇单甲醚衍生物具有式（I)结构：式（I)中，&选自氢或甲基；20彡m彡500 ; 所述白藜芦醇衍生物具有式（II)结构：式（II)中，私选自氢或甲基； 所述二硫醇单体具有式（III)结构：式（III)中，n为2~10的整数。2. 根据权利要求1所述的白藜芦醇纳米颗粒，其特征在于，所述纳米颗粒的粒径为 30nm~200nm。3. -种白藜芦醇纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤： 在有机碱作用下，聚乙二醇单甲醚衍生物、白藜芦醇衍生物和二硫醇单体在有机溶剂 中发生交联反应，得到白芦藜醇纳米颗粒； 其中，所述聚乙二醇单甲醚衍生物具有式（I)结构：式⑴中，&选自氢或甲基；20彡m彡500 ; 所述白藜芦醇衍生物具有式（II)结构：式（n)中，私选自氢或甲基； 所述二硫醇单体具有式（in)结构：式（III)中，n为2~10的整数。4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述有机碱选自1，8-二氮杂二环 十一碳-7-烯、三乙胺和正丙胺中的一种或多种。5. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂选自二氯甲烷、N，N-二 甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮或四氢呋喃。6. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇单甲醚衍生物和白藜 芦醇衍生物的摩尔比为1:5~100 ; 所述二硫醇单体的摩尔数为所述白藜芦醇衍生物中双键基团和所述聚乙二醇单甲醚 衍生物中双键基团的总摩尔数的0. 5~0. 6倍。7. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述交联反应的温度为15~50°C， 所述交联反应的时间为12h~98h。8. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述白藜芦醇衍生物按照以下方法 制备： 白藜芦醇和丙烯酰氯或甲基丙烯酰氯在有机溶剂和缚酸剂作用下进行反应，得到白藜 芦醇衍生物。9. 根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为四氢呋喃，所述缚酸 剂为无水碳酸钾。10. 根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述反应的温度为0~25°C，所述 反应的时间为48h。
【专利摘要】本发明提供了一种白藜芦醇纳米颗粒，由具有式(I)结构的聚乙二醇单甲醚衍生物、具有式(II)结构的白藜芦醇衍生物和具有式(III)结构的二硫醇单体经交联反应得到。本发明还提供了一种白藜芦醇纳米颗粒的制备方法。本发明以聚乙二醇单甲醚衍生物、白藜芦醇衍生物和二硫醇单体为原料发生反应，形成交联网状结构的纳米粒子，其不仅具有良好的水溶性，且能够提高白藜芦醇分子的稳定性。实验结果表明，本发明制备得到的白藜芦醇纳米粒子具有良好的水溶性，且对细胞的杀伤效果优于白藜芦醇原药。
【IPC分类】C08G65/00, A61K47/48, A61P35/00, A61K31/05
【公开号】CN105126116
【申请号】CN201510603039
【发明人】肖春生, 陈新, 丁建勋, 庄秀丽, 陈学思
【申请人】中国科学院长春应用化学研究所
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年9月21日