一种中药组合物、含该中药组合物的制剂及其制备和应用_3

文档序号:9441989阅读:来源:国知局
验用动物由四川省中医药科学院SPF实验动物中心 提供。以下试验例,除特别说明,试验数据用X± s表示,各给药组与对照组间的比较采用t 检验,用《中国医学百科全书.医学统计学》统计软件包(第三版)PEMS3. 1分析软件进行数 据分析。
[0044] 以下试验例,试验用栓剂:独一味栓剂,I. 6g/粒,每粒含生药2. 5g,常温、密闭、遮 光、干燥保存;空白栓剂为:乳白色栓剂,1.6g/粒,每粒含生药0g,常温、密闭、遮光、干燥保 存。
[0045] ⑴独一味栓剂对二甲苯致小鼠耳廓炎症肿胀的影响: ①试验材料: 动物:KM远交系小白鼠,SPF级,全雄,体重18±2g,共60只。
[0046] 受试物:独一味栓剂,空白栓剂。
[0047] 阳性对照药:醋酸泼尼松片(强的松),5mg/片,浙江仙琚制药股份有限公司生产, 批号:080901。
[0048] 西黄嗜胶:England 进口分装,500g/ 瓶,批号:91-01-08。
[0049] 造模剂:二甲苯,500ml/瓶,成都市科龙化工试剂厂,批号:20051103。
[0050] 实验仪器:BSlIOS电子天平(d=0. lmg),北京赛多利斯天平有限公司,6. 5mm打孔 器。
[0051] ②试验方法: 将全雄60只雄性小鼠随机分为5组,二甲苯模型对照组(空白栓剂24 y l/10g)、独一味 栓剂高剂量组(4g生药/kg)、独一味栓剂中剂量组(2 g生药/kg)、独一味栓剂低剂量组(1 g生药/kg)、阳性药醋酸泼尼松组(50mg/kg)。模型组右耳部涂抹空白栓粒熔融的溶液,受 试药组分别于右耳部涂抹不同剂量的独一味栓粒熔融的药液,连续5天。阳性药,醋酸泼尼 松组于实验第4日、5日分别灌胃给药1次,0.1ml/10g (0.5mg/ml)。
[0052] 致炎实验当日,醋酸泼尼松组口服给药,受试药组右耳部涂抹相应剂量独一味栓 粒熔融的药液,模型组右耳部涂抹空白栓粒熔融的溶液,给药后60min,温水擦去右耳上残 留的药液,然后各组小鼠右耳廓两面均匀涂抹二甲苯,每只20 y 1,15分钟后脱颈椎处死小 鼠,沿耳廓边缘剪下左、右两耳,6. 5mm打孔器打下耳片称重,用右耳片重量减去左耳片重 量,即得到肿胀度,并计算耳肿胀抑制率。
[0053] ③试验结果(参见表1): 表1独一味栓剂对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(X土 SD)
注:与模型组比较,〈〇? 01,***P〈〇. 001。
[0054] 与模型组比较,独一味栓剂高、中、低剂量组左右耳重量差显著减少(P〈0. 01, P〈〇. 05),肿胀抑制率分别为51. 4%、45. 5%、30. 2% ;醋酸泼尼松组左右耳重量差极显著减少 (P〈0. 001),肿胀抑制率分别为54. 5%。
[0055] ⑵独一味栓剂对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响: ①试验材料:动物:KM远交系小白鼠,SPF级,全雄,体重18 ± 2g,共60只。
[0056] 受试物:独一味栓剂,空白栓剂。
[0057] 阳性对照药:阿斯匹林,白色晶状体,大同长兴制药有限责任公司生产,国药准字 HI4020657,批号:0704004,生产日期:2007年4月7日,有效期致2010年3月。
[0058] 造模剂:冰乙酸,500ml/瓶,成都市长联化工试剂有限公司,批号:20050301。
[0059] 脱毛剂:硫化钠,分析纯,500g/瓶,成都市化学试剂厂生产,批号:980923。
[0060] 指示剂:依文斯蓝,EvansBlue,Sigma试剂,批号:2062425。
[0061] 实验仪器:分光光度计(日本岛津uv-730);离心机(北京医用离心厂,LDZ4-0. 8)。
[0062] ②试验方法: 将腹部脱毛后的全雄小鼠随机分为5组,醋酸模型组(空白栓剂24 y L/10g)、独一味栓 剂高剂量组(4g生药/kg)、独一味栓剂中剂量组(2g生药/kg)、独一味栓剂低剂量组(Ig生 药/kg)、阳性药阿斯匹林组(300mg/kg)。每组12只。受试药组分别腹部涂抹不同剂量的 独一味栓粒熔融后的药液,然后用纱布覆盖,外用保鲜膜包裹后胶布固定。模型组腹部涂抹 空白栓粒熔融后的溶液,后续处理方式同给药组,每日1次,连续5天。阳性药阿斯匹林口 服给药,〇? lml/10g(30mg/ml),每日1次,连续5天。
[0063] 醋酸法致炎模型的制备及给药方案:实验前小鼠禁食不禁水16h,准确称量小鼠 空腹体重。阳性药阿斯匹林口服60min后、各受试药组腹部敷药60min后,尾静脉注射2% 依文斯蓝生理盐水溶液0. lml/10g,然后立即腹腔注射0. 75%醋酸0. 2ml/只,20min后,断 头放血处死小鼠,注射器向小鼠腹腔注射生理盐水5ml/只,轻揉腹部几下,打开腹腔,收集 腹腔洗涤液于试管中,离心5min(1000rpm),以生理盐水调零,在uv-730分光光度计590nm 处测定吸光度。计算各给药组对伊文思兰渗出量的抑制率。
[0064] ③试验结果(参见表2 ): 表2独一味栓剂对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响(X土S)
独一味栓剂高、中、低剂量组对醋酸炎症模型小鼠的腹腔伊文斯蓝渗出的抑制率分别 为21. 8%、19. 9%、8. 4%,其中高剂量组4g生药/kg,其腹腔洗液OD值与模型组比较显著减小 (P〈0. 05),中、低剂量组腹腔洗液OD值也较模型组减少,但p >0. 05,无统计学差异。
[0065] 独一味栓剂具有抑制醋酸炎症模型小鼠的腹腔伊文斯蓝渗出作用,但剂量依赖关 系不明显。
[0066] ⑶独一味栓剂对大鼠角叉菜胶足肿胀的影响: ①试验材料: 动物:SD大鼠,SPF级,全雄,体重250~300g,共60只。
[0067] 受试物:独一味栓剂,空白栓剂。
[0068] 阳性对照药:醋酸泼尼松片,5mg/片,浙江仙琚制药股份有限公司,批号:080801。
[0069] 西黄嗜胶:England 进口分装,500g/瓶,批号:91-01-08。
[0070] 造模剂:CARRAGEENAN(角叉菜),25g/ 瓶,SIGMA,批号:46H0910。
[0071] 实验仪器:PV-200足跖容积测量仪,成都泰盟科技有限公司。EB-3200D电子天平 (d=0.01g),日本 SHIMADZU。New classic 电子天平,MS204S(d=0. lmg),梅特勒一托利多仪 器(上海)有限公司。
[0072] ②试验方法: 将60只全雄大鼠按体重随机分为5组:角叉菜模型组、独一味栓剂高剂量组(4g生药 /只)、独一味栓剂中剂量组(2g生药/只)、独一味栓剂低剂量组(Ig生药/只)、阳性对照 醋酸泼尼松组(l〇mg/kg)。受试药组分别于右足跖(包括趾蹼之间)涂抹不同剂量的独一味 栓粒熔融后的药液,模型组则涂抹空白栓粒熔融后的溶液,然后用敷料将足包裹固定上。每 日1次,连续5天,阳性对照组大鼠于实验第1日、3日、5日,灌胃给予醋酸泼尼松lml/lOOg (lmg/ml) 1次,共给药3次。
[0073] 角叉菜法致炎模型的制备及抗炎实验当日给药方案:阳性对照组灌胃给予醋酸泼 尼松、受试药组右足跖部涂抹独一味栓剂、模型组右足跖部涂抹空白栓剂,30min后,各组大 鼠依次右后足跖皮下注射1%角叉菜溶液0.1 ml/只造模,用专用足跖容积测量仪测量造模 后lh、2h、3h、4h、5h、6h致炎大鼠肿胀右后足跖容积。
[0074] 用以下公式计算各鼠足跖肿胀度,各给药组肿胀抑制率。
[0075] ③试验结果(参见表3、表4): 表3独一味栓剂对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响(X土S)
注:与模型组比较,* P〈〇? 05, #p〈0? 01,〈0? 001。
[0076] 表4独一味栓剂对角叉菜胶致大鼠足肿胀抑制率的影响
各组动物lh、2h、3h足跖肿胀率呈上升趋势;4h、5h、6h足跖肿胀率呈下降趋势。与模 型组比较,独一味栓剂高剂量组2h、3h、4h、5h足跖肿胀率显著降低,抑制率分别为19. 70 %、16. 93 %、17. 39 %、23. 72 %;中剂量组3h、4h足跖肿胀率显著降低,抑制率分别为16. 79 %、16. 32% ;低剂量组足跖肿胀率有降低趋势,无统计学差异;醋酸泼尼松组2h、3
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