、甘松300、钩藤300、千金子35、薄荷脑0. 6、结页 草 0· 75。
[0040] 制备方法：
[0041] a、分别按上述配方比例称取原料：蜘蛛香、石菖蒲、牵牛子、甘松、钩藤、千金子、薄 荷脑、缴草；
[0042]b、缬草粉碎成粗粉，用60%乙醇作溶剂进行渗漉，收集渗漉液；
[0043]c、蜘蛛香总重量的3/5重量份、石菖蒲、甘松提取挥发油，药材残渣与钩藤混合， 加水煎煮1-2次，每次1-2小时，滤过，合并滤液；
[0044]d、牵牛子、千金子粉碎成粗粉，用70%乙醇作溶剂进行渗漉，收集渗漉液并与上述 水煎液合并，减压浓缩至相对密度为1. 26-1. 30的浸膏；
[0045] e、蜘蛛香总重量的2/5重量份粉碎成细粉与上述浸膏混合均匀。
[0046] 将上述浸膏干燥并粉碎成细粉，用缬草渗漉液与70% -75 %的乙醇制粒干燥，加 入薄荷脑及上述挥发油，混匀，压制成片。
[0047] 实施例二盐酸美金刚对秀丽隐杆线虫CL4176的作用
[0048] 1.生物材料
[0049] (1)秀刚隐杆线虫CL4176购自Caenorhabditis Genetics Center;为转基因品 系，在25°C温度诱导下肌肉特异性表达人类Α β，Α β在肌肉组织聚集，最终导致线虫麻痹， 本实施例采用秀丽线虫品系CL4176作为筛选抗阿尔茨海默病药物的病理模型。
[0050] (2)大肠杆菌0Ρ50(尿啼啶渗漏突变株），购自Caenorhabditis Genetics Center，作为秀丽隐杆线虫的食物。
[0051] 2.试剂
[0052] (1)盐酸美金刚（MEM)，化学名称：1_氨基_3,5_二甲基金刚烷胺盐酸盐，分子式： C12H21N·Η(：1，购自百灵威科技，CAS:41100-52-1 ;盐酸美金刚为非竞争性NMDA受体拮抗剂， 用于治疗中重度至重度阿尔茨海默型痴呆，文献报道美金刚（2. 16mg/ml)能够显著抑制转 基因线虫株系CL4176麻痹表型，本实施例将其作为阳性药物。
[0053] ⑵固体NGM(Nematode Growth Medium)培养基成分与制作（以1升为例）：
[0054]
[0055] 固体NGM培养基配制好后，121 °C下高压恒温灭菌20min，在无菌操作台下加入 5mg/ml胆固醇lml，1MMgS04lml, 1MCaCl2lm摇勾，趁热倒入已灭菌的9cm培养板，约20ml/ 板。静置等待培养基凝固，备用。
[0056] (3)配制含盐酸美金刚的NGM培养基
[0057] 盐酸美金刚溶解于无菌水中，配制成为2. 16mg/ml的母液，分别配制含盐酸美金 刚终浓度为215. 76 μ g/ml、107. 88 μ g/ml、21. 58 μ g/ml、4. 32 μ g/ml、0. 86 μ g/ml的NGM培 养基。
[0058] 空白对照为同样条件下加入与盐酸美金刚等体积无菌水的NGM培养基。
[0059] 上述培养基上均涂布大肠杆菌0P50作为线虫的食物。
[0060] (4)M9 液配方
[0061]
[0062] (5)裂解液的配制：6. 4%NaC103溶液和1MNaOH溶液按体积比1:1混合。
[0063] 3.实施步骤
[0064] (1)线虫的培养：
[0065] 将线虫接在涂有大肠杆菌0P50的固体NGM板上，然后置于16°C的培养箱中培养， 当线虫长到成虫时进行同步化处理。
[0066] (2)线虫同步化：
[0067] 挑选含有大量成虫并且有部分线虫卵已经孵出的NGM培养基，用M9液将线虫从培 养基上冲下，转移到离心管中，静置使线虫自由沉降至管底，弃上清。视线虫量多少向离心 管中加入线虫裂解液，在漩祸搅拌器上振荡5-7分钟待线虫全部断裂时停止涡旋，并分装 于1. 5mL离心管中，用M9溶液洗线虫卵三次。
[0068] (3)盐酸美金刚对秀丽隐杆线虫CL4176的作用
[0069] 线虫同步化后将线虫卵转移到含不同浓度盐酸美金刚的NGM培养基，每个培养基 60条线虫，每个药物浓度以三个培养基作为平行，16°C培养3天至L3期。
[0070] 为了使线虫表达Αβ，将L3期线虫转在25°C下进行诱导，34h后开始计数线虫麻痹 条数。每两小时计数一次，直至所有线虫都麻痹（麻痹是指机械刺激线虫身体时，线虫不能 运动或者只有头部运动），结果见图1。
[0071] 由图1可以看出，阳性药物盐酸美金刚在21. 58μg/ml、4. 32μg/ml、0. 86μg/ml 时能够显著抑制CL4176麻痹表型，215. 76μg/ml和107. 88μg/ml的盐酸美金刚强烈抑制 线虫发育。实验结果表明本实验体系正常，说明本发明能够采用秀丽线虫品系CL4176作为 筛选抗阿尔茨海默病药物。
[0072] 实施例三中药组合物对秀丽隐杆线虫CL4176的作用
[0073] 1.生物材料同实施例二。
[0074] 2.试剂
[0075] (1)中药组合物片为按照实施例一方法所制备的制剂，具体为：配方1的中药组合 物片、配方2的中药组合物片、配方3的中药组合物片。
[0076] (2)固体NGM (Nematode Growth Medium)培养基成分与制作（以1升为例）：同实 施例二。
[0077] (3)配制含中药组合物的NGM培养基
[0078] 将中药组合物片用研钵研成粉末，溶解于无菌水中，并配制成为150mg/ml中药组 合物水溶液，室温下超声30min，并于lOOOOrpm下离心lOmin，取上清，于4°C保存。将中药组 合物水溶液加入融化的NGM培养基中，配制成为含中药组合物终浓度为1. 0mg/ml、5.Omg/ ml、15. 0mg/mlNGM培养基。
[0079] 空白对照为同样条件下加入与中药组合物水溶液等体积无菌水的NGM培养基。
[0080] 上述培养基上均涂布大肠杆菌0P50作为线虫的食物。
[0081] (4)M9液配方：同实施例二。
[0082] (5)裂解液的配制：同实施例二。
[0083] 3.实施步骤
[0084] (1)线虫的培养：同实施例二。
[0085] (2)线虫同步化：同实施例二。
[0086] (3)中药组合物对秀丽隐杆线虫CL4176的作用
[0087] 线虫同步化后将线虫卵转移到涂布有0P50并混合不同浓度配方1中药组合物片、 配方2中药组合物片、配方3中药组合物片的NGM培养基中；空白对照为涂布有0P50并加 有等体积无菌水的NGM培养基，每个培养基60条线虫，每个药物浓度以三个培养基作为平 行，16°C培养3天至L3期。
[0088] 为了使线虫表达Αβ，将L3期线虫转在25°C下进行诱导，34h后开始计数线虫麻痹 条数。每两小时计数一次，直至所有线虫都麻痹（麻痹是指机械刺激线虫身体时，线虫不能 运动或者只有头部运动），结果见图2、图3、图4。
[0089] 由图2、图3、图4可以看出，配方1、配方2、配方3都会显著抑制Αβ过度表达引 起的线虫麻痹表型（Ρ< 0.001)，其中，配方2抑制Αβ过度表达引起的线虫麻痹表型效果 最好，4411时，1511^/1]11、511^/1]11的未麻痹比例还保持在80%左右（图3)，而配方1和配方3 中，5mg/ml时未麻痹比例均低于80% (图2、图4)。
[0090] 总之，由上述实施例可以看出，该中药组合物对阿尔茨海默病模型秀丽隐杆线虫 Αβ聚集引起的麻痹表型具有明显的抑制作用，说明该中药组合物具有预防或治疗阿尔茨 海默病的潜力。因此本发明所公开的中药组合物可在制备预防或治疗阿尔茨海默病的药物 中应用。
[0091] 实施例四中药组合物的药效及毒性对比评价实验
[0092] 1.生物材料同实施例一。
[0093]2.试剂
[0094] (1)中药组合物片为按照实施例一方法所制备的制剂，具体为：配方2的中药组合 物片。
[0095] ⑵固体NGM(NematodeGrowthMedium)培养基成分与制作（以1升为例）：同实 施例一。
[0096] (3)配制含水溶解的中药组合物的NGM培养基
[0097] 将中药组合物片用研钵研成粉末，溶解于无菌水中，并配制成为150mg/ml中药组 合物水溶液，室温下超声30min，并于lOOOOrpm下离心l