36]实施例1、制备添加了丙酮酸钠的储存红细胞
[0037]1.丙酮酸钠溶液的配制
[0038]用电子分析天平准确称量35mg丙酮酸钠粉末，溶于ImL生理盐水中，配制得到丙酮酸钠浓度为35mg/mL的丙酮酸钠溶液，待其溶解完全，在超净工作台上用0.22μπι孔径的细菌滤器过滤，放置于无菌离心管中，待用。
[0039]2.红细胞的获取及储存红细胞的制备
[0040]取小鼠腹腔注射2.5%的戊巴比妥钠溶液(其注射量按0.3mL/100g小鼠体重计算)，将麻醉后的小鼠固定在37°C加热板上，放于无菌超净工作台上，用酒精棉球擦拭小鼠腹腔和胸腔外表面，无菌心脏穿刺取血，用CPDA-1溶液作为抗凝剂和血液保存液(购自美国Sigma公司，货号C4431-50mL。100mL CPDA-1溶液中含有枸橼酸钠26.3g、枸橼酸3.27g、葡萄糖31.9g、腺嘌呤0.275g、磷酸二氢钠2.22g和灭菌水(补足到100mL))。用白细胞滤器去除白细胞，得到去白全血，并使CPDA-1溶液在去白全血中的最终体积百分含量为14 %。以上取血过程是说明实验过程，不作为得到本发明的必经步骤。
[0041]将去白全血分成七组(n= 8): SP组1#_6#，即丙酮酸钠组，添加步骤I中配制好的丙酮酸钠溶液使去白全血中丙酮酸钠的终浓度为ImM、1.5mM、2mM、2.49mM、5mM、I OmM(这六个终浓度分别对应SP组1#、SP组2#、……、SP组6#)；空白对照组:加入生理盐水，生理盐水的加入体积与SP组丙酮酸钠溶液的加入体积相同。各组去白全血在4°C，400g离心15min，去上清，使红细胞压积为70-75 %,4°C血液保存冰箱储存14天，得到储存红细胞，待用。
[0042]实施例2、测定储存红细胞中ATP含量
[0043]用ATP检测试剂盒中说明书方法(ATP检测试剂盒购自碧云天生物技术有限公司，货号S0026)测定实施例1得到的储存14天后七组储存红细胞的ATP含量。以SP组3#(储存红细胞中丙酮酸钠的终浓度为2mM)为例，结果如图1所示。
[0044]图1结果显示，空白对照组ATP含量是2.46 ±0.19nmol/mg蛋白，SP组3#储存红细胞中ATP含量是2.82 ± 0.21nmol/mg蛋白。与空白对照组比较，SP组3#储存红细胞中的ATP含量明显升高(*表示P<0.05)。说明丙酮酸钠在红细胞的储存过程中能够提高红细胞中ATP水平，为储存红细胞能量代谢提供底物，缓解红细胞在储存过程中能量供应不足的问题，从而进一步提高储存红细胞的质量。
[0045]SP组1#、2#和4#与3?组3#结果无异，不再赘述，SP组5lP6%^ATP含量显著低于SP组3%9ATP 含量(ρ<0.05)。
[0046]实施例3、测定储存红细胞中MDA含量
[0047]用MDA检测试剂盒中说明书方法(MDA检测试剂盒购自南京建成生物科技有限公司，货号Α003-1)测定实施例1得到的储存14天后的七组储存红细胞的脂质过氧化产物-丙二醛(MDA)含量。以SP组2#为例，结果如图2所示。
[0048]MDA是细胞膜的脂类物质与ROS发生过氧化反应所产生的最重要的终末代谢产物之一，其含量反映了细胞内脂质过氧化发生的强度和速度，因此用MDA含量来反映细胞及组织氧化应激损伤程度的重要指标(Kwiecien S , Konturek PC, Sliwowski Z , etal.1nteract1n between selective cyclooxygenase inhibitors and capsaicin-sensitive afferent sensory nerves in pathogenesis of stress-1nduced gastricles1ns.Role of oxidative stress.J Phys1l Pharmacol，2012，63:143-151) 0MDA含量越高，说明细胞的氧化应激水平越高;反之，说明细胞的氧化水平越低。
[0049]图2结果显示，空白对照组MDA含量是15.45±0.33nmol/mg蛋白，3?组2#储存红细胞中MDA含量是14.66 ± 0.87nmo I/mg蛋白。与空白对照组比较，SP组2#储存红细胞中的MDA含量明显降低(*表示P<0.05)。说明丙酮酸钠显著降低了红细胞中的MDA含量，降低了红细胞氧化应激水平，起到了抗氧化的作用，保护了储存红细胞膜脂质，提高了储存红细胞的质量。
[0050]SP组1#_6#与5?组3#结果无异，不再赘述。
[0051 ]实施例4、测定储存红细胞中SOD活性
[0052]用SOD测定试剂盒中说明书方法(试剂盒购自南京建成生物科技有限公司，货号A001-1)测定实施例1得到的储存14天后的七组储存红细胞的SOD活性。以SP组1#为例，结果如图3所示。
[0053]SOD可以催化超氧阴离子自由基发生歧化反应生成H2O2,清除生物体内过高浓度的超氧阴离子自由基，其活性改变可以反映生物体受氧化胁迫的程度(董亮，何永志，王远亮&董志扬(2013)超氧化物歧化酶(SOD)的应用研究进展.中国农业科技导报，53-58.KSOD活性越低，说明细胞的氧化水平越高;反之，说明细胞的氧化水平越低。
[0054]图3结果显示，空白对照组SOD活性为648.1±10.0U/mg蛋白，SP组1#储存红细胞中SOD活性是726.8± 12.3U/mg蛋白。与空白对照组比较，SP组1#储存红细胞中的SOD活性显著升高(*表示P<0.05)。说明丙酮酸钠显著提高储存红细胞SOD活性，降低储存红细胞的氧化应激水平，增强储存红细胞的抗氧化能力，改善储存红细胞质量。
[0055]SP组1#_6#与5?组3#结果无异，不再赘述。
[0056]实施例5、测定储存红细胞中P50值
[0057]用血氧分析仪Hemox Analyzer(美国宾夕法尼亚TCS科技有限公司，型号TCS-200型)测定实施例1得到的储存14天后的七组储存红细胞的P5q值。以SP组4#为例，结果如图4所不O
[0058]储存红细胞的P5q值可以反映红细胞携氧能力，一定范围内，P5q值越大，红细胞携氧能力越强(Mehta N, Watts N.B1Welge J.A, et al.Comparison of serum calciumchange following thyroid and nonthyroid neck surgery.0tolaryngol Head NeckSurg，2006.134(6): 901-906.)。与空白对照组比较，SP组4#储存红细胞中的P5Q值明显高于空白对照组(*表示P <0.05)。
[0059]图4结果显示，空白对照组P5Q值为21.0 ± 0.7mmHg，SP组4#储存红细胞中P5Q值为23.9± 1.5mmHg。说明在储存过程中添加丙酮酸钠能够显著提高储存红细胞的携氧能力，回输机体后，提高了红细胞为组织供氧的效率，改善了组织氧供。
[0060]SP组l#、2lP4$SP组3#结果无异，不再赘述，SP组5#和6#的？5()显著低于SP组3#的卩50值(ρ<0.05)ο
[0061 ]实施例6、储存红细胞回输体内后，测定体内血楽AST活性、BUN含量和LDH活性
[0062]回输前处理储存红细胞:取实施例1得到的储存14天后的SP组1#_6#和空白对照组的储存红细胞，分别用其10倍体积的生理盐水洗涤，400g转速离心，弃上清；重复3次，使红细胞压积为70 %-75%,最后得到重悬红细胞，待用。
[0063]回输储存红细胞:将小鼠固定于小鼠专用固定器上，仅露出尾巴用于尾静脉注射储存红细胞。根据血容量占体重的7%估计小鼠总血量，然后分别尾静脉输注小鼠总血量20%的处理后的SP组1#-6#和空白对照组的重悬红细胞(处理及回输储存红细胞的过程参见该文献:Yu,B.,Lei ,C.,Baron,D.M.,Steinbicker1A.U.,Bloch,K.D.&Zapol ,ff.Μ.(2012)Diabetes augments and inhaled nitric oxide prevents the adverse hemodynamiceffects of transfusing syngeneic stored blood in mice.Transfus1n，52，1410—1422.)o
[0064]输注2h后，心脏穿刺取血，6000rpm，离心90s，取上清，待用D
[0065]根据Hod，E.A.，Zhang，N.，Sokol，S.A.,WojczykjB.S.,Francis，R.0.,Ansaldi，D.,Francis,K.