丙酮酸钠在制备改善储存红细胞质量和/或输注后组织损伤储存液中的应用_3

文档序号:9898100阅读:来源:国知局
P.,Della-LattajP.,WhittierjS.,ShethjS.,Hendrickson,J.E.,Zimring,J.C.,BrittenhamjG.M.&SpitalnikjS.L.(2010)Transfus1n of red blood cells afterprolonged storage produces harmful effects that are mediated by iron andinflammat1n.Blood,115,4284-4292.中的记载,AST活性、BUN含量、LDH活性分别可以反应肝、肾和全身器官的损伤情况,且其活性/含量越高,说明器官的损伤越严重;反之,器官的损伤程度越轻。
[0066]于是用日立7180血浆生化自动分析仪配合该分析仪的试剂包(试剂包购自北京周天华楓医疗仪器有限公司,测定过程按分析仪说明书的测定方法)测定实施例1得到的储存14天后的SP组1#-6#和空白对照组中储存红细胞回输至小鼠体内后,小鼠体内血浆的AST活性、BUN含量和LDH活性,以SP组3#为例,结果如图5所示。
[0067]图5结果显示,AST活性:空白对照组为579 土96.5U/L,SP组3#为332 土 111.2U/L ;BUN含量:空白对照组为14.6 ± 0.8mmol/L,SP组3#为11.9 ± 1.0mmoI/L ; LDH活性:空白对照组为479.0 ± 101.6U/L,SP组3#为368.8 ± 72.5U/L。与空白对照组比较,SP组3#回输后血浆中AST活性、BUN含量和LDH活性均显著降低(*表示p<0.05)。说明丙酮酸钠组受体的肝功能和肾功能明显高于空白对照组,丙酮酸钠可显著降低储存红细胞回输机体后造成的肝组织、肾组织损伤,有效地保护了受体的组织和器官的功能。
[0068]SP组l#、2lP4$SP组3#结果无异,不再赘述,SP组5lP6^AST活性、BUN含量、LDH活性都分别显著高于SP组3%^]AST活性、BUN含量、LDH活性(P<0.05)。
[0069 ]实施例7、储存红细胞回输体内后,测定肝组织中MDA含量
[0070] 取实施例6中输注储存红细胞2h后的小鼠处死,取小鼠肝组织(具体方法参见Hod,E.A.,ZhangjN.,Sokol,S.A.,WojczykjB.S.,Francis,R.0.,Ansaldi,D.,Francis,K.P.,Della-LattajP.,WhittierjS.,ShethjS.,Hendrickson,J.E.,ZimringjJ-C.,BrittenhamjG.M.&Spitalnik,S.L.(2010)Transfus1n of red blood cells after prolongedstorage produces harmful effects that are mediated by iron andinflammat1n.Blood,115,4284-4292.),用MDA检测试剂盒中说明书方法(试剂盒购自南京建成生物科技有限公司,货号A003-1)测定实施例1得到的储存14天后的七组储存红细胞回输至小鼠体内后,小鼠肝组织中MDA含量。以SP组3#为例,结果如图6所示。
[0071 ] 图6结果显示,空白对照组MDA含量为12.77± I.IImmoΙ/mg蛋白,SP组3#小鼠肝组织中MDA含量为11.69 ± 0.95mmol/mg蛋白。与空白对照组比较,SP组3#储存红细胞中的MDA含量显著降低(*表示P<0.05)。丙酮酸钠组肝组织的MDA水平显著低于空白对照组,说明丙酮酸钠组肝组织的氧化水平显著低于空白对照组,丙酮酸钠可显著改善储存红细胞回输造成的肝组织的氧化应激水平,减轻受体的氧化应激水平,起到减轻受体不良反应的作用。
[0072]SP组1#、2#和4#与3?组3#结果无异,不再赘述,SP组5#和6#的]\?从含量显著高于SP组3#的]\?从含量(ρ<0.05)。
[0073]实施例8、储存红细胞回输体内后,测定肝组织中髓过氧化物酶(MPO)活性
[0074]同实施例7,取小鼠肝组织,用MPO检测试剂盒中说明书方法(试剂盒购自南京建成生物科技有限公司,货号Α044-1)测定实施例1得到的储存14天后的七组储存红细胞回输至小鼠体内后,小鼠肝组织中MPO活性。以SP组3#为例,结果如图7所示。
[0075]MPO是一种既与天然免疫防御有关,又与组织损伤有关的酶。MPO来源于多形核中性粒细胞(PMN)、单核细胞及巨噬细胞,组织炎症水平升高,会诱发它们产生ΜΡ0,导致组织中MPO含量升高(Zhao,J.X.,Wang1B-,You,G.X.,Wang,Y.,Chen,G.,Wang,Q.,Zhang1X.G.,Zhao ,L.,Zhou,H.&He,Y.Z.(2015)Hypertonic Saline Dextran Amel1rates OrganDamage in Beagle Hemorrhagic Shock.PLoS One,10,e0136012.)。所以,组织中MPO含量越高,说明组织中中性粒细胞越多,即浸润至组织的中性粒细胞越多,组织炎症水平越高;反之,组织炎症水平越低。
[0076]图7结果显示,空白对照组MPO含量为0.36 ± 0.04U/g湿重组织,SP组3#小鼠肝组织中MPO含量为0.32 ± 0.02U/g湿重组织。与空白对照组比较,SP组3#储存红细胞中的MPO含量显著降低(*表示p<0.05)。说明SP组3#肝组织炎症反应水平显著低于空白对照组,丙酮酸钠可显著改善储存红细胞回输造成的肝组织的炎症反应水平,降低机体的炎症反应水平。
[0077]SP组1#、2#和4#与3?组3#结果无异,不再赘述,SP组5#和6#的]^0含量显著高于SP组3#的]^0 含量(ρ<0.05)。
[0078]实施例9、储存红细胞回输体内后,测定肝组织中IL-6含量和TNF-α含量
[0079]同实施例7,取小鼠肝组织,用ELISA试剂盒中说明书方法(Elisa试剂盒购自美国PeproTech)测定实施例1得到的储存14天后的七组储存红细胞回输至小鼠体内后,小鼠肝组织中的IL-6含量和TNF-α含量。以SP组3#为例,结果如图8所示。
[0080]IL-6是活化的T细胞和成纤维细胞产生的淋巴因子,在损伤后协调损伤防御反应中起重要作用,参与免疫调节和炎性反应的重要细胞因子之一,是宿主对感染和组织损伤所引起反应的主要介质。TNF-a参与炎症反应和免疫应答,在机体免疫调节、机体生理功能和抗感染等方面发挥重要作用(Chen,G.,You,G.,Wang,Y.,Lu,M.,Cheng1W.,Yang,J.,Zhao ,L.&Zhou,Η.(2013)Effects of synthetic colloids on oxidative stress andinflammatory response in hemorrhagic shock:comparison of hydroxyethyl starch130/0.4,hydroxyethyl starch 200/0.5,and succinylated gelatin.Crit Care ,17,R141.)DIL-6和TNF-ct水平的升高,说明机体炎症反应水平升高;反之,说明机体免疫反应水平降低。
[0081 ] 图8结果显示,IL-6含量:空白对照组为389.7 ± 46.lpg/mg蛋白,SP组3#小鼠肝组织中为305.1 ± 26.5pg/mg蛋白;TNF-α含量:空白对照组为42.59 ± 2.I lpg/mg蛋白,SP组3#小鼠肝组织中为37.60 ± 3.41pg/mg蛋白。与空白对照组比较,SP组3#储存红细胞中的IL-6含量和TNF-a含量显著降低(*表示p<0.05)。说明将丙酮酸钠在储存过程中处理过的红细胞回输至小鼠体内后,小鼠肝组织的IL-6和TNF-a显著降低,丙酮酸钠组炎症反应水平显著降低,说明丙酮酸钠可显著降低储存红细胞回输后的机体炎症反应水平。
[0082] SP组1#、2#和4#与SP组3#结果无异,不再赘述,SP组5#和6#的IL-6含量和TNF-α含量显著高于SP组3#的1卜6含量和TNF-a含量(p<0.05)。
[0083 ]实施例1O、储存红细胞回输体内后,观察肝组织的病理变化
[0084]同实施例7,取小鼠肝组织,病理蜡块包埋和HE染色处理后,(方法步骤参考,Hod,E.A.,Zhang,N.,Sokol,S.A.,等Blood,115,4284-4292.)观察肝组织的病理变化,以实施例1中SP组3#的结果为例,如图9所示。
[0085]图9结果显示,图中标号I的白色气泡状部分为肝
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