一种负载紫薯皮活性物质的纳米囊泡的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明公开了一种负载紫薯皮活性物质的纳米囊泡的制备方法，属于囊泡领域。
【背景技术】
[0002]囊泡作为一种重要的自组装纳米结构，是由一些特殊的分子构成的由一个双层膜或多层膜围起来的一种纳米空心球。近年来越来越多的在药物和基因传输，纳米反应器，细胞膜表面修饰等方面应用。是从原理上来讲，只要同时具有亲水和疏水部分的两亲分子，都有可能聚集成囊泡结构。因此，很多具有亲疏水性质的高分子都可以用来制备囊泡结构，例如:嵌段共聚物，可以用来人工合成囊泡。相比于脂质体囊泡，高分子囊泡有许多优势，例如，更加稳定，可变的透过性，结构牢固，在化学改性和生物应用方面有更高的应用潜力。
[0003]两亲性嵌段聚合物在水中可以进行自组装形成囊泡双层膜，但目前广泛应用的脂质体类囊泡的稳定性较差，容易破裂并产生囊泡膜间融合。而聚合物囊泡能显著提高囊泡的机械性能。如果聚合物囊泡的表面为亲水性聚氧乙烯链，就可以改变囊泡表面的物理化学性质，使其具有较好的水溶性和稳定性。这种聚合物囊泡有较强的增溶能力，其疏水的双层膜具有较好的牢固性和稳定性，同时也具有良好的生物相容性和渗透性。当其作为药物载体时，可赋予药物更好的生物相容性和靶向性。
[0004]紫薯中营养成分丰富多样，含有淀粉、蛋白质、粗脂肪、多糖、膳食纤维素，还含有多种维生素、胡萝卜素、色素、绿原酸以及钙、磷、铁等微量元素紫薯花青素分子结构中含有多个酚羟基，生物活性显著，也已将紫薯色素应用于化妆品和纺织品染织中，由于天然色素安全可靠用途广泛，且种类繁多，不少天然色素兼有营养和药理作用，具有非常广阔的开发应用前景。
【发明内容】
[0005]本发明主要解决的技术问题:针对两亲性嵌段聚合物在可以形成囊泡双层膜，但目前应用的脂质体类囊泡的稳定性较差，容易破裂并产生囊泡膜间融合，聚合物囊泡作为药物载体时载药率低的问题，提供了一种负载紫薯皮活性物质的纳米囊泡的制备方法，本发明从紫薯皮中得到活性物质，再制备得两亲性嵌段共聚物，利用两亲性嵌段共聚物，将紫薯活性物质负载在嵌段共聚物中，形成纳米囊泡，本发明制备得到的纳米囊泡具有显著的机械性能，作为药物载体不仅具有较高的载药率，同时也有良好的生物相容性和渗透性，两亲性嵌段共聚物负载紫薯皮活性物质制得囊泡，可大幅度提高紫薯皮活性的水溶性和靶向性，而且应用更方便，效果更显著。
[0006]为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是:
(I)取200?300g紫薯皮，洗净后干燥、粉碎、过筛得80?100目紫薯皮粉末，
按液料比10?12mL/g加入质量分数80%乙醇溶液，混合后在350?450W功率下提取70?90s，将提取液在2000?3000r/min转速下离心分离15?20min，去除沉淀物，得上清液，将上清液再5000?7000r/min转速下离心分离15?20min，去除沉淀物，得上清液，将上清液在60?70°C下蒸馈40?60min，得浓缩液；
(2)将上述的浓缩液用0.1?0.3μπι微滤膜过滤，收集微滤后的液体，将微滤后
的液体再用0.05?0.08μηι超滤膜过滤，收集滤液后的液体，即为紫薯皮活性液，备用；
(3)准确称取8?1ge-己内酯、8?1g聚乙二醇、50?80mL甲苯并加入圆
底烧瓶中，搅拌至固体完全溶解，溶解后向烧瓶中加入ε -己内酯质量0.1?0.3%的辛酸亚锡为催化剂，将烧瓶密封，并放入油浴中，在160?180°C和300?400r/min条件下进行搅拌反应10?12h，反应结束后，将所得的产物溶于二氯甲烷中，过滤，得过滤物；
(4)将上述过滤物按固液比1:8重新溶解于甲醇中再重新沉淀进行纯化，抽滤
后将沉淀物重复上述溶解步骤2?3遍，将最终得到沉淀物放入真空烘箱中干燥至恒重，即可得到PCL-b-PEG-b-PCL两亲性三嵌段共聚物；
(5)按重量份数计，分别选取60?70份上述PCL-b-PEG-b-PCL两亲性三嵌段共聚物，20?30份步骤(2)的紫薯皮活性液和5?8份二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇，将其溶于2?4倍体积的二氯甲烷中，在茄行瓶中旋转蒸发制成均匀薄膜，抽真空过夜去除里面残留的有机溶剂，在茄形瓶中加入总体积20%的双蒸水，在50?70 0C下水化2?4h，震荡混匀，在O?5°C的冰浴下进行超声处理15?20min，即可得到纳米囊泡分散液，随后将分散液移入透析袋中，在装有超纯水的烧杯中透析，透析时间为5?8h，每隔一小时换水一次，透析后将其在12000?150001'/1]1；[11下离心分离20?251]1；[11，收集沉淀物，并将沉淀物进行冷冻干燥，即可得到负载紫薯皮活性物质的纳米囊泡。
本发明的应用方法:本发明制备的负载紫薯皮活性物质的纳米囊泡在25°C时可以保持稳定2?4个月的稳定性，能使紫薯皮活性物质在水溶液中的浓度从原来的0.8?1.2yg/mL增加到0.1?0.5mg/mL，使其在紫薯具有通便、防癌、抗癌、清除自由基、抗衰老、抗突变、改善肝功能、降血压、防动脉硬化等方面功能显著。
[0007]本发明的有益效果是:
(1)本发明制备得到的聚合物囊泡具有显著的机械性能，作为药物载体不仅具有较高的载药率，同时也有良好的生物相容性和渗透性；
(2)本发明制备得到两亲性嵌段共聚物负载紫薯皮活性物质，可大幅度提高紫薯皮活性的水溶性和靶向性。
【具体实施方式】
[0008]首先取200?300g紫薯皮，洗净后干燥、粉碎、过筛得80?100目紫薯皮粉末，
按液料比10?12mL/g加入质量分数80%乙醇溶液，混合后在350?450W功率下提取70?90s，将提取液在2000?3000r/min转速下离心分离15?20min，去除沉淀物，得上清液，将上清液再5000?7000r/min转速下离心分离15?20min，去除沉淀物，得上清液，将上清液在60?70 °C下蒸馈40?60min，得浓缩液;将的浓缩液用0.1?0.3μηι微滤膜过滤，收集微滤后的液体，将微滤后的液体再用0.05?0.08μπι超滤膜过滤，收集滤液后的液体，即为紫薯皮活性液，备用;准确称取8?1ge-己内酯、8?1g聚乙二醇、50?80mL甲苯并加入圆底烧瓶中，搅拌至固体完全溶解，溶解后向烧瓶中加入ε-己内酯质量0.1?0.3%的辛酸亚锡为催化剂，将烧瓶密封，并放入油浴中，在160?180°C和300?400r/min条件下进行搅拌反应10?12h，反应结束后，将所得的产物溶于二氯甲烷中，过滤，得过滤物;将过滤物按固液比1:8重新溶解于甲醇中再重新沉淀进行纯化，抽滤
后将沉淀物重复上述溶解步骤2?3遍，将最终得到沉淀物放入真空烘箱中干燥至恒重，即可得到PCL-b-PEG-b-PCL两亲性三嵌段共聚物；按重量份数计，分别选取60?70份PCL-b-PEG-b-PCL两亲性三嵌段共聚物，20?30份紫薯皮活性液和5?8份二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇，将其溶于2?4倍体积的二氯甲烷中，在茄行瓶中旋转蒸发制成均匀薄膜，抽真空过夜去除里面残留的有机溶剂，在茄形瓶中加入总体积20%的双蒸水，在50?70°C下水化2?4h，震荡混匀，在O?5°C的冰浴下进行超声处理15?20min，即可得到纳米囊泡分散液，随后将分散液移入透析袋中，在装有超纯水的烧杯中透析，透析时间为5?8h，每隔一小时换水一次，透析后将其在12000?15000r/min下离心分离20?25min，收集沉淀物，并将沉淀物进行冷冻干燥，即可得到负载紫薯皮活性物质的纳米囊泡。
[0009]实例I
首先取200g紫薯皮，洗净后干燥、粉碎、过筛得80目紫薯皮粉末，按液料比10mL/g加入质量分数80%乙醇溶液，混合后在350W功率下提取70s，将提取液在2000r/min转速下离心分离15min，去除沉淀物，得上清液，将上清液再5000r/min转速下离心分离15min，去除沉淀物，得上清液，将上清液在600C下蒸馏40min，得浓缩液;将的浓缩液用0.1wn微滤膜过滤，收集微滤后的液体，将微滤后的液体再用0.05μπι超滤膜过滤，收集滤液后的液体，即为紫薯皮活性液，备用;准确称取8g ε -己内酯、8g聚乙二醇、50mL甲苯并加入圆底烧瓶中，搅拌至固体完全溶解，溶解后向烧瓶中加入ε-己内酯质量0.1%的辛酸亚锡为催化剂，将烧瓶密封，并放入油浴中，在160°C和300r/min条件下进行搅拌反应10h，反应结束后，将所得的产物溶于二氯甲烷中，过滤，得过滤物;将过滤物按固液比I: 8重新溶解于甲醇中再重新沉淀进行纯化，抽滤后将沉淀物重复上述溶解步骤2遍，将最终得到沉淀物放入真空烘箱中干燥至恒重，SP可得到PCL-b