神香草有效部位及其制备方法和应用
【专利摘要】本发明涉及一种神香草有效部位及其制备方法和应用，是将硬尖神香草Hyssopus cuspidatus Boriss.的干燥地上部分，经乙醇水溶液提取，再经聚酰胺柱分离纯化获得神香草有效部位。获得的神香草有效部位中总黄酮含量55%?65%，总多酚含量12%?15%，迷迭香酸含量0.15%?0.25%。本发明所述方法安全、稳定、简便、高效，所得的神香草有效部位具有良好的抗哮喘、抗炎、抗氧化的作用，是一类可以应用于预防、治疗哮喘、支气管炎、肺炎等疾病的药品、保健品或食品中的生产原料。
【专利说明】
神香草有效部位及其制备方法和应用
技术领域
[0001 ]本发明涉及神香草有效部位及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 神香草，是多年生草本植物，原产自地中海和黑海附近地区，最早作为一种香料植 物，添加于食物中，亦可用于制成精油，在欧洲得到广泛使用。神香草作为药用香料两用植 物，在我国许多地区都有栽培，如新疆、西安、辽宁等地，而野生神香草主要分布在我国新疆 北部的阿勒泰地区。近年来在新疆巴州地区人工大面积种植神香草获得成功，为开发和利 用神香草的食用价值和药用价值提供了充足的物质资源。据《维吾尔药志》记载，神香草为 唇形科植物硬尖神香草Hyssopus cuspidatus Boriss的干燥地上部分，维吾尔名为"祖发 奇尼"，是维吾尔族民间习用药材，性质干热，有很强的香味，具有镇咳、袪痰、平喘作用，神 香草药用全草，全株主要含挥发油，具有痉挛停生物碱样作用，可使支气管痉挛解除，神香 草的叶、花均可入药，也表现出镇咳祛痰的功用。在维吾尔医和民间用于治疗气管炎已有几 百年的历史，其疗效确切、显著。神香草和以神香草为主药的寒喘祖帕颗粒，均收载于《中华 人民共和国卫生部药品标准维吾尔药分册》(WS3-BW-0195-98)。现代药理学亦证实:神香草 具有镇咳、袪痰、平喘作用，研究表明神香草水提取液能明显地对抗氨水引起的咳嗽和磷酸 组胺造成的哮喘作用，也具有一定的祛痰作用，对变应性哮喘小鼠Thl和Th2型细胞因子的 影响，发现神香草水提液可抑制哮喘小鼠IL-4的分泌，纠正Thl/Th2型的细胞因子失衡，并 抑制炎症细胞的汇集，对变应性哮喘有明显的干预作用；神香草精油具有痉挛停生物碱样 作用，使支气管痉挛解除，而具镇咳作用。神香草多糖可调节哮喘HPA轴的功能，改善内源性 抗炎机制和抑制，炎性细胞因子的释放来改善哮喘的炎症;神香草乙酸乙酯部位可能通过 抑制白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、内皮素-1 (ET-1)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、淋巴细胞(Ly)、嗜酸性粒细胞(Eos)、中性粒细胞(Neu)的分泌，减轻哮喘的炎症反应;神 香草总黄酮（发明专利《一种神香草总黄酮提取物及其制备方法和用途》专利申请号： 201210399112.X)中的方法制备）可能通过抑制Ly、E 〇S、Neu等炎症细胞及细胞因子转化生 长因子-m (TGF-m)的分泌，减轻或改善哮喘的气道炎症。
[0003] 目前有大量关于神香草有效部位制备以及对应抗哮喘、抗炎药效研究。当前有效 部位的制备方法主要依赖不同比例有机溶剂提取以及相对粗狂的大孔树脂分离，由于缺乏 相对精细的制备工艺，使得现有报道的神香草有效部位在组成的一致性，有效成分的含量， 质量的稳定性等方面存在较大的缺陷，这些问题极大地影响了质控方法的开发，后续药效 的考察以及进一步的应用。因此急需开发一种新型、精细、可控的神香草有效部位制备方 法，以解决目前神香草抗哮喘研究与应用的窘境。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于，提供一种神香草有效部位及其制备方法和应用，是将硬尖神 香草Hyssopus cuspidatus Boriss.的干燥地上部分，经乙醇水溶液提取，再经聚酰胺柱分 离纯化获得神香草有效部位。获得的神香草有效部位中总黄酮含量55%-65%，总多酚含量 12 % -15 %，迷迭香酸含量0.15 % -0.25 %。本发明所获得的神香草有效部位具有良好的抗 哮喘、抗炎、抗氧化的作用，是一类可以应用于治疗、预防哮喘、支气管炎、肺炎等疾病的药 物、保健品、食品中的生产原料。
[0005] 本发明所述的一种神香草有效部位，按下列步骤进行：
[0006] a、取干燥、粉碎，过10目筛的神香草地上部分，置圆底烧瓶中，加入重量10-20倍的 体积浓度为30-70 %乙醇水溶液进行提取，水浴加热温度50-80 °C，回流提取1-5次，时间为 1-3小时/次，提取后的滤液经减压浓缩至相对密度为1.0-1.5，备用；
[0007] 13、将步骤8中得到的提取液，经真空干燥箱干燥，真空度-0.081〇^，温度35-65°(：， 得到提取物，备用；
[0008] C、将步骤b得到的提取物与聚酰胺树脂为尼龙-6或尼龙-66或尼龙-610或尼龙-1010树脂按重量比1: 5-1:10进行吸附，树脂柱径高比为1:1-1: 5，上样液提取物浓度为 10%-30%，上样流速为0.5-38￥/11，吸附后先用水洗脱聚酰胺树脂5-108￥，洗脱流速0.5-3BV/h，再将水洗脱液弃去后，用体积比浓度为20-95 %的乙醇水溶液洗脱5-10BV，流速为 0.5-3BV/h，收集浓度为20-60 %梯度的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，再经真空干燥箱干 燥，粉碎，即得神香草有效部位，该有效部位的指纹图谱特征峰个数为16个，其中总黄酮含 量55%-65%，总多酚含量12%-15%，迷迭香酸含量0.15%-0.25%。
[0009] -种神香草有效部位的制备方法，按下列步骤进行：
[001 0] a、取干燥、粉碎，过10目筛的神香草地上部分，置圆底烧瓶中，加入重量10-20倍的 体积浓度为30-70 %乙醇水溶液进行提取，水浴加热温度50-80 °C，回流提取1-5次，时间为 1-3小时/次，提取后的滤液经减压浓缩至相对密度为1.0-1.5，备用；
[0011] 13、将步骤8中得到的提取液，经真空干燥箱干燥，真空度-0.081〇^，温度35-65°(：， 得到提取物，备用；
[0012] C、将步骤b得到的提取物与聚酰胺树脂为尼龙-6或尼龙-66或尼龙-610或尼龙-1010树脂按重量比1: 5-1:10进行吸附，树脂柱径高比为1:1-1: 5，上样液提取物浓度为 10%-30%，上样流速为0.5-38￥/11，吸附后先用水洗脱聚酰胺树脂5-108￥，洗脱流速0.5-3BV/h，再将水洗脱液弃去后，用体积比浓度为20-95 %的乙醇水溶液洗脱5-10BV，流速为 0.5-3BV/h，收集浓度为20-60 %梯度的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，再经真空干燥箱干 燥，粉碎，即得神香草有效部位，该有效部位的指纹图谱特征峰个数为16个，其中总黄酮含 量55%-65%，总多酚含量12%-15%，迷迭香酸含量0.15%-0.25%。
[0013 ]所述的神香草有效部位在制备抗哮喘、抗炎或抗氧化的药物中的用途。
[0014]所述的神香草有效部位在制备预防哮喘、支气管炎、肺炎的保健品或食品中的用 途。
【附图说明】
[0015 ]图1为本发明白细胞计数(109/L)图；
[0016] 图2为本发明嗜酸性粒细胞计数(109/L)图；
[0017] 图3为本发明中性粒细胞计数(109/L)图；
[0018] 图4为本发明免疫球蛋白E(IgE)浓度(pg/mL)图；
[0019 ]图5为本发明肿瘤坏死因子(TNF-a)浓度(pg/rnL)图；
[0020]图6为本发明白介细胞-4(IL-4)浓度(pg/mL)图；
[0021 ]图7为本发明对小鼠肺组织病理切片的影响图；
[0022]图8为本发明高效液相色谱(HPLC)特征图谱。
【具体实施方式】
[0023]本发明结合实施例作进一步的说明 [0024] 实施例1
[0025] a、取干燥、粉碎，过10目筛的神香草地上部分，置圆底烧瓶中，加入重量10倍的体 积浓度为30%乙醇水溶液进行提取，水浴加热温度50°C，回流提取5次，时间为2小时/次，提 取后的滤液经减压浓缩至相对密度为1.0-1.5，备用；
[0026] b、将步骤a中得到的提取液，经真空干燥箱干燥，真空度-0.08MPa，温度35°C，得到 提取物，备用；
[0027] c、将步骤b得到的提取物与聚酰胺树脂为尼龙-6树脂按重量比1:5进行吸附，树脂 柱径高比为1:1，上样液提取物浓度为10%，上样流速为〇.5BV/h，吸附后先用水洗脱聚酰胺 树脂5BV，洗脱流速0.5BV/h，再将水洗脱液弃去后，用体积比浓度为20 %的乙醇水溶液洗脱 5BV，流速为0.5BV/h，收集浓度为20-60 %梯度的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，再经真空 干燥箱干燥，其真空度.〇8MPa，温度40°C，经摇式高速万能粉粹机粉碎至粉末，即得神香 草有效部位，所得有效部位总黄酮含量为55.63%，总多酚含量为13.07%，迷迭香酸含量为 0.156%〇
[0028] 实施例2
[0029] a、取干燥、粉碎，过10目筛的神香草地上部分，置圆底烧瓶中，加入重量15倍的体 积浓度为50%乙醇水溶液进行提取，水浴加热温度60°C，回流提取1次，时间为3小时/次，提 取后的滤液经减压浓缩至相对密度为1.0-1.5，备用；
[0030] b、将步骤a中得到的提取液，经真空干燥箱干燥，真空度-0.08MPa，温度50 °C，得到 提取物，备用；
[0031] C、将步骤b得到的提取物与聚酰胺树脂为或尼龙-66树脂按重量比1:6进行吸附， 树脂柱径高比为1:2,上样液提取物浓度为20%，上样流速为lBV/h，吸附后先用水洗脱聚酰 胺树脂7BV，洗脱流速lBV/h，再将水洗脱液弃去后，用体积比浓度为50 %的乙醇水溶液洗脱 7BV，流速为lBV/h，收集浓度为20-60 %梯度的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，再经真空干 燥箱干燥，其真空度.〇8MPa，温度40°C，经摇式高速万能粉粹机粉碎至粉末，即得神香草 有效部位，所得有效部位总黄酮含量为62.75 %，总多酚含量为15 %，迷迭香酸含量为 0.184%〇
[0032] 实施例3
[0033] a、取干燥、粉碎，过10目筛的神香草地上部分，置圆底烧瓶中，加入重量20倍的体 积浓度为70%乙醇水溶液进行提取，水浴加热温度80°C，回流提取3次，时间为3小时/次，提 取后的滤液经减压浓缩至相对密度为1.0-1.5，备用；
[0034] b、将步骤a中得到的提取液，经真空干燥箱干燥，真空度-0.08MPa，温度65 °C，得到 提取物，备用；
[0035] c、将步骤b得到的提取物与聚酰胺树脂为尼龙-610树脂按重量比1:10进行吸附， 树脂柱径高比为1:5,上样液提取物浓度为30%，上样流速为3BV/h，吸附后先用水洗脱聚酰 胺树脂10BV，洗脱流速3BV/h，再将水洗脱液弃去后，用体积比浓度为95%的乙醇水溶液洗 脱10BV，流速为3BV/h，收集浓度为20-60 %梯度的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，再经真 空干燥箱干燥，再经真空干燥箱干燥，其真空度. 〇8MPa，温度40°C，经摇式高速万能粉粹 机粉碎至粉末，即得神香草有效部位，所得有效部位总黄酮含量为59.91 %，总多酚含量为 14.48 %，迷迭香酸含量为0.201 %。
[0036] 实施例4
[0037] a、取干燥、粉碎，过10目筛的神香草地上部分，置圆底烧瓶中，加入重量18倍的体 积浓度为60%乙醇水溶液进行提取，水浴加热温度70°C，回流提取2次，时间为2小时/次，提 取后的滤液经减压浓缩至相对密度为1.0-1.5，备用；
[0038] b、将步骤a中得到的提取液，经真空干燥箱干燥，真空度-0.08MPa，温度45 °C，得到 提取物，备用；
[0039] c、将步骤b得到的提取物与聚酰胺树脂为尼龙-1010树脂按重量比1:8进行吸附， 树脂柱径高比为1:3,上样液提取物浓度为25%，上样流速为2BV/h，吸附后先用水洗脱聚酰 胺树脂8BV，洗脱流速2BV/h，再将水洗脱液弃去后，用体积比浓度为40 %的乙醇水溶液洗脱 8BV，流速为2BV/h，收集浓度为20-60 %梯度的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，再经真空干 燥箱干燥，再经真空干燥箱干燥，其真空度.〇8MPa，温度40°C，经摇式高速万能粉粹机粉 碎至粉末，即得神香草有效部位，所得有效部位总黄酮含量为65%，总多酚含量为12.33 %， 迷迭香酸含量为0.25 %。
[0040] 实施例5
[0041 ]神香草各提取部位体外抗炎筛选：
[0042]通过体外抗炎药物筛选模型，对不同提取分离方法神香草提取物进行了抗炎药效 学的研究。实验以脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7炎症活化细胞为研究对象，评价神香草不同 提取物对细胞活力的影响，以及对一氧化氮(N0)和肿瘤坏死因子(TNF-a)的抑制作用。结果 显示本发明获得的有效部位较其他各提取物有很好的抗炎效果。神香草提取物的制备方法 见表1。
[0043]表1神香草提取物制备方法
[0045] 对RAW264.7细胞活力的影响：
[0046]神香草提取物3#在浓度为200yg/mL时对细胞的生长有一定的抑制作用，其他各提 取物在200iig/mL，40iig/mL，8yg/mL，1 ? 6yg/mL，0 ? 32yg/mL浓度梯度时对细胞的生长无抑制 作用，细胞活力均正常，细胞存活率趋近于1 〇〇 %。
[0047] 对RAW264.7细胞释放N0的影响：
[0048] 神香草提取物6#样品能够显著地抑制脂多糖(LPS)诱导的一氧化氮(N0)产生，且 一氧化氮(N0)水平抑制率随着神香草提取物浓度的增大而增大，详见表2。
[0049] 表2神香草提取物对RAW264 ? 7细胞活力及释放N0的影响
[0052]用ELISA法检测神香草提取物6#样品对肿瘤坏死因子和白介-6的影响。实验结果 表明，神香草提取物6#样品能够显著抑制脂多糖(LPS)刺激的RAW264.7细胞中肿瘤坏死因 子(TNF-a)和IL-6的产生，详见表3。
[0053] 表3神香草提取物6#对RAW264.7细胞细胞活力、释放N0、TNF-a和IL-6的影响
[0055] ***p〈0 ? 001，**p〈0 ? 01，*p〈0 ? 05 与 LPS 模型组比较
[0056] 实施例6
[0057]本发明方法获取有效部位的药效学研究：
[0058]神香草有效部位的抗哮喘、抗炎实验：
[0059]通过整体动物实验，进行了的神香草有效部位抗哮喘药效学的研究。以BALB/C小 鼠为研究对象，通过卵白蛋白（0VA)法建立小鼠哮喘模型。通过对小鼠行为学、临床数据（白 细胞数(WBC)、嗜酸性粒细胞数(E0S)、中性粒细胞数(NE))、部分炎症因子TNF-a，IL-4、血清 IgE及肺组织病理切片数据的分析(结果如表4、表5和图1-图7所示），说明神香草有效部位 具有明显的平喘效果，并且能够抑制炎症因子的释放，同时能减轻肺组织支气管周围、血管 周围的Eos浸润，减少粘液的过度分泌，对哮喘及炎症性疾病的治疗具有潜在的作用。
[0060]表4白细胞分类计数
[0062]表5免疫球蛋白及炎症因子测定
[0064]神香草有效部位的镇咳实验：
[0065]本实验通过考察对浓氨水引起小鼠咳嗽次数的抑制作用，观察神香草有效部位对 小白鼠的止咳作用。与空白对照组比较，神香草有效部位可明显抑制咳嗽次数，其差异具有 统计学意义。结果见表6。
[0066]表6神香草有效部位对小白鼠的镇咳作用
[0068] 与空白对照组比较，*P<0 ? 05，林P<0 ? 01
[0069]神香草有效部位的祛痰实验：
[0070]本实验通过气管酚红祛痰法考察神香草有效部位对小鼠气管中酚红排泌量的影 响，观察神香草有效部位的祛痰作用。与空白对照组比较，神香草提取物可明显增加小鼠气 管中酚红的排泌量，其差异具有统计学意义。结果见表7。
[0071 ]表7神香草有效部位对小白鼠的祛痰作用
[0073] 与空白对照组比较，*P<0.05
[0074]神香草有效部位的平喘实验：
[0075] 本实验通过小鼠组胺喷雾致喘法考察从接受喷雾开始到出现咳嗽的潜伏时间，观 察神香草有效部位的平喘作用。与空白对照组比较，神香草有效部位可明显延长出现咳嗽 的潜伏时间，其差异具有统计学意义。结果见表8。
[0076] 表8神香草有效部位对小白鼠的平喘作用
[0078] 与空白对照组比较*P<0 ? 05，#P<0 ? 01
[0079] 神香草有效部位的豚鼠离体气管环实验：
[0080] 通过豚鼠离体气管环实验，考察神香草有效部位对乙酰胆碱、磷酸组胺致豚鼠气 管平滑肌收缩活动的影响。结果显示，神香草有效部位与生理盐水对照组相比较，随着样品 剂量升高降低了 o.lug/ml乙酰胆碱、lug/ml磷酸组胺引起的豚鼠离体气管环的收缩作用， 舒张豚鼠气管平滑肌;但与阳性对照组相比较任弱于阳性对照组氨茶碱。以上结果说明，本 发明制备的神香草有效部位可以有效缓解气管的哮喘症状，具有平喘、镇咳的作用。结果见 表9,表10。
[0081 ] 表9神香草有效部位对0. lug/ml乙酰胆碱收缩离体豚鼠气管环的影响(尤:e 6D n =8)
[0083] *p〈〇 ? 05，林p〈0 ? 01，*林p〈0 ? 001与生理盐水组比较
[0084] #p〈0 ? 05，##p〈0 ? 01，###p〈0 ? 001 与阳性对照氨茶碱组比较。
[0085]表10神香草有效部位对lug/ml磷酸组胺收缩离体豚鼠气管环的影响（无±泣），11 =8)
[0087] *p〈〇 ? 05，林p〈0 ? 01，*林p〈0 ? 001与生理盐水组比较
[0088] #p〈0 ? 05，##p〈0 ? 01，###p〈0 ? 001 与阳性对照氨茶碱组比较。
[0089] 实施例7
[0090]神香草有效部位特征图谱：
[0091 ] 仪器与试药：UltiMate 3000系列高效液相色谱仪（美国Thermo Scientific Technologies公司）。神香草有效部位为课题组自制；色谱纯乙腈、甲醇、甲酸购自Merck公 司(Darmstadt，Germany)，其余试剂为分析纯;实验用水:纯净水;其余试剂均为分析纯。 [0092]供试品溶液的制备：称取神香草有效部位适量，加60%乙醇水使成1.5mg/ml，摇 匀，滤过(0.22mi滤膜），取滤液作为供试品溶液，即得。
[0093] 色谱条件：
[0094] C18(4.6 X 250mm，5mi)，流动相:A为0.1 %甲酸水溶液(v/v)，B为乙腈;梯度洗脱条 件:0-60min，A:90% - 10%流速：1.0mL ? min-1;柱温：25°C;进样量：10此，结果见图3。
[0095] 实施例8
[0096] 神香草有效部位中总黄酮、总多酚及迷迭香酸的含量测定：
[0097]总黄酮含量测定：
[0098] 对照品溶液的制备精密称取木犀草素对照品约8.5mg，置10ml量瓶中，加无水乙醇 至刻度，摇匀，即得。
[0099] 样品溶液的制备精密称取神香草有效部位适量，加无水乙醇制成浓度约lmg/ml的 溶液，摇匀，即得。
[0100] 标准曲线的制备分别精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.6、0.8、1.0ml，置25ml 量瓶中，加10%硝酸铝溶液lml，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15min。以相应试剂为空白，同 法操作，于298nm处测定吸光度值，以对照品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标进行线性回 归，结果见表11。
[0101] 表11木犀草素标准曲线
[0103]回归方程:Y = 0.03x+0.234，r = 0.999。
[0104] 线性范围：木犀草素对照品浓度在0.00340-0.03404mg ? mL-1范围内，与吸光度线 性关系良好。
[0105] 样品测定精密量取样品溶液0.2ml，置25ml量瓶中，加10%硝酸铝溶液lml，摇匀并 加蒸馏水至刻度，放置15min，于298nm处测定吸光度值。
[0106]总多酚含量测定：
[0107] 对照品溶液的制备精密称取没食子酸照品5.05mg，置10ml量瓶中，加无水乙醇至 亥渡，摇勾，即得。
[0108] 样品溶液的制备精密称取神香草有效部位适量，加无水乙醇制成浓度约lmg/ml的 溶液，摇匀，即得。
[0109] 标准曲线的制备分别精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5和0.6ml，置25ml 量瓶中，加磷钼钨酸试液lml，加29 %的碳酸钠溶液刻度，摇匀，放置30min。以相应试剂为空 白，同法操作，于760nm处测定吸光度值，以对照品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标进行线 性回归，结果见表12。
[0110]表12没食子酸准曲线
[0112] 回归方程:Y = 0.166x-0.018，r = 0.999。
[0113] 线性范围：没食子酸对照品浓度在0.00202-0.01212mg ? mL-1范围内，与吸光度线 性关系良好。
[0114] 样品测定精密量取样品溶液0.2ml，置25ml量瓶中，磷钼钨酸试液lml，加29%的碳 酸钠溶液刻度，摇勾，放置30min。以相应试剂为空白，同法操作，于760nm处测定吸光度值。
[0115] 迷迭香酸含量测定：
[0116] 色谱条件:柱:(：18,4.6\250臟，5_;流动相 ：乙腈-水（15:85);检测波长:33〇11111。
[0117] 对照品溶液的制备：精密称取迷迭香酸照品6.57mg，置25ml量瓶中，加甲醇至刻 度，摇匀，即得。
[0118] 样品溶液的制备:精密称取神香草有效部位适量，加甲醇制成浓度约lmg/ml的溶 液，摇匀，即得。
[0119] 标准曲线的制备:分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8ml，置10ml量瓶中，加甲醇至 刻度，摇匀，注入液相色谱仪，记录峰面积。以对照品浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标进行 线性回归。
[0120] 表13迷迭香酸酸准曲线
[0122] 回归方程:Y = 315.7x-3.613，r = 0.9999。
[0123] 线性范围：迷迭香酸对照品浓度在0.0526-0.263mg ? ml/1范围内，与峰面积线性关 系良好。
[0124] 样品测定取样品溶液，过0.45mi的微孔滤膜，精密吸取样品溶液10y 1，注入液相色 谱仪，测定。
[0125] 4.4含量测定结果，见表14
[0126]表14神香草有效部位含量测定结果
[0128] 本发明所述的神香草有效部位及其制备方法和应用，选用神香草为唇形科植物硬 尖神香草(取88(^118〇118口1(^1：118 13〇1^88.)的干燥全草，经粉碎，采用体积浓度为30-70% 乙醇水溶液进行提取，再用聚酰胺树脂分离纯化，收集体积浓度为20-60 %梯度的乙醇洗脱 部分，获取的神香草有效部位。本发明建立了可以高效、安全、稳定、简便提取神香草有效部 位的方法，所得的神香草有效部位具有良好的抗哮喘、抗炎、抗氧化的作用，是一类可以应 用于预防、治疗哮喘、支气管炎、肺炎、咳嗽等疾病的药品、保健品或食品的生产的原料。
[0129] 本发明所述的神香草有效部位及其制备方法和应用，将硬尖神香草的干燥地上部 分，经乙醇水溶液提取，再经聚酰胺柱分离纯化获得多个部位，经药效实验确定有效部位， 有效部位经指纹图谱分析有16个特征峰，所得神香草有效部位中总黄酮含量55%-65 %，总 多酚含量12%-15%，迷迭香酸含量0.15%-0.25%。
【主权项】
1. 一种神香草有效部位，其特征在于按下列步骤进行： a、 取干燥、粉碎，过10目筛的神香草地上部分，置圆底烧瓶中，加入重量10-20倍的体 积浓度为30-70%乙醇水溶液进行提取，水浴加热温度50-80°C，回流提取1-5次，时间为1-3 小时/次，提取后的滤液经减压浓缩至相对密度为1.0-1.5，备用； b、 将步骤a中得到的提取液，经真空干燥箱干燥，真空度-0.08MPa，温度35-65 °C，得到 提取物，备用； c、 将步骤b得到的提取物与聚酰胺树脂为尼龙-6或尼龙-66或尼龙-610或尼龙-1010树 脂按重量比1:5-1:10进行吸附，树脂柱径高比为1:1-1:5，上样液提取物浓度为10%-30%，上 样流速为〇. 5-3 BV/h，吸附后先用水洗脱聚酰胺树脂5-10BV，洗脱流速0.5-3 BV/h，再将水 洗脱液弃去后，用体积比浓度为20-95%的乙醇水溶液洗脱5-10BV，流速为0.5-3 BV/h，收集 浓度为20-60%梯度的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，再经真空干燥箱干燥，粉碎，即得神 香草有效部位，该有效部位的指纹图谱特征峰个数为16个，其中总黄酮含量55%-65%，总多 酚含量12%-15%，迷迭香酸含量0.15%-0.25%。2. -种神香草有效部位的制备方法，其特征在于按下列步骤进行： a、 取干燥、粉碎，过10目筛的神香草地上部分，置圆底烧瓶中，加入重量10-20倍的体 积浓度为30-70%乙醇水溶液进行提取，水浴加热温度50-80°C，回流提取1-5次，时间为1-3 小时/次，提取后的滤液经减压浓缩至相对密度为1.0-1.5，备用； b、 将步骤a中得到的提取液，经真空干燥箱干燥，真空度-0.08MPa，温度35-65 °C，得到 提取物，备用； c、 将步骤b得到的提取物与聚酰胺树脂为尼龙-6或尼龙-66或尼龙-610或尼龙-1010树 脂按重量比1:5-1:10进行吸附，树脂柱径高比为1:1-1:5，上样液提取物浓度为10%-30%，上 样流速为〇. 5-3 BV/h，吸附后先用水洗脱聚酰胺树脂5-10BV，洗脱流速0.5-3 BV/h，再将水 洗脱液弃去后，用体积比浓度为20-95%的乙醇水溶液洗脱5-10BV，流速为0.5-3 BV/h，收集 浓度为20-60%梯度的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，再经真空干燥箱干燥，粉碎，即得神 香草有效部位，该有效部位的指纹图谱特征峰个数为16个，其中总黄酮含量55%-65%，总多 酚含量12%-15%，迷迭香酸含量0.15%-0.25%。3. 根据权利要求1所述的神香草有效部位在制备抗哮喘、抗炎或抗氧化的药物中的用 途。4. 根据权利要求1所述的神香草有效部位在制备预防哮喘、支气管炎、肺炎的保健品 或食品中的用途。
【文档编号】A61P29/00GK105853500SQ201610208337
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月5日
【发明人】贺金华, 戎晓娟, 严欢, 毛艳, 孙玉华, 王新堂, 蔡晓翠, 康雨彤
【申请人】新疆维吾尔自治区药物研究所