稳定的胰高血糖素类似物以及用于治疗低血糖的用图

稳定的胰高血糖素类似物以及用于治疗低血糖的用图
【专利摘要】本发明涉及包含置换Imp1和His3、与赖氨酸的侧链共价连接的具有三至十个带负电荷部分的取代基的胰高血糖素类似物的衍生物及其中间体和组合物，以及它们在医学中的用途。
【专利说明】稳定的膜高血糖素类似物从及用于治疗低血糖的用途
[0001] 本发明设及膜高血糖素类似物的新型衍生物W及它们在医学中，例如在低血糖治 疗中的用途。
【背景技术】
[0002] 人们早已了解到膜高血糖素对于治疗由膜岛素作用引起的低血糖是有效的。膜高 血糖素的升血糖效应是刺激肝糖原分解成葡萄糖(糖原分解)和增加来源于氨基酸前体的 葡萄糖产生(糖异生)从而导致从肝输出的葡萄糖增加的结果。
[0003] 用于治疗严重低血糖的可商购的膜高血糖素作为药盒提供，该药盒包含具有冻干 的膜高血糖素的小瓶和预先装有水的一次性注射器巧li Lilly和Novo Nordisk)。使用前， 必须通过将注射器中的水添加至具有膜高血糖素的小瓶中来重建膜高血糖素。随后必须轻 轻摇动小瓶直至所有膜高血糖素溶解，并且应将所得到的溶液吸回注射器中，并注射至有 需要的人中。在严重的低血糖事件中，患者是无意识的或半无意识的，因此要依赖提供帮助 的人来施用膜高血糖素。
[0004] 糖尿病患者的亲属认为所述重建步骤是麻烦的，并且该步骤会延迟或甚至可能妨 碍对严重低血糖事件的治疗。
[0005] 预装填的即用型装置的主要障碍是膜高血糖素的固有不稳定性。在溶解之后的数 小时内膜高血糖素的溶液形成凝胶或原纤维。另外，膜高血糖素在pH 3-9的范围内具有固 有的低溶解度。膜高血糖素含有若干种不稳定的氨基酸，并且膜高血糖素组合物的化学稳 定性非常差，运主要是由于脱酷胺化、异构化、氧化和水解裂解。
[0006] 为了能够开发预装填的即用型装置，需要开发新的不形成原纤维的膜高血糖素类 似物。另外，要求膜高血糖素具有改善的化学稳定性W使溶液能够在室溫下保持延长的一 段时间。此外，运样的膜高血糖素类似物应当在皮下（SC)或肌肉内（IM)施用之后迅速起效 (诸如升血糖效应）。

【发明内容】

[0007] 在一个实施方案中，本发明设及一种膜高血糖素类似物的衍生物，或所述衍生物 的药学上可接受的盐、酷胺或醋，所述衍生物包含式I:
[0008] Imp-X2-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser_Asp-Xi〇-Ser-Xi2-Tyr-Leu-Xi5-Xi6-Ar 邑一Ar 邑一 Ala-X2〇-X2 广陆 e-Val-X24-T 巧-Leu-X27-X28-枯 9-X3〇[I]
[0009] 其中
[0010] X2 为 Ser 或 Aib;
[0011] Xi 日为 Tyr、Leu、Ile 或化 1;
[0012] Xi2 为 Lys 或 Arg;
[0013] Xi 日为 Asp 或 Glu;
[0014] Xi6 为 56'、41日、1^611、1'虹、4化、116、化1或1^73;
[0015] X2 日为 Gln、Glu、Aib 或 Lys;
[0016] X21 为 Asp、Glu 或 Lys;
[0017] X24 为 6111、41日、6111、4化或1^73;
[001 引 X27 为 161、1^611或化1;
[0019] X28 为 Asn'Ser、!'虹、61]1、41日、617、6111或1^73;
[0020] X29 为 Τ'虹、617、56'、6111、41日、6111或1^73;且
[0021] X3Q不存在或为Lys;
[00剖并且其中所述衍生物包含与在式1的位置《12^16心2日^21心24^28心2减乂3日处的赖 氨酸的侧链的氮原子共价连接的取代基，其中所述取代基具有式II:
[002；3] Y 广 Y2-Y3-Y4-Y 己-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y1广 Yi广山]
[0024]其中Yi为氨或表示C2-6酷基基团或班巧酷基部分，并且
[002引其中Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y8、村、Yl()、Yl域Yl2单独地不存在或单独地表示选自Ser残 基、Ala残基、Gly残基、式i、式ii、式iii、式iv和式V的氨基酸残基：
[0026]
[0027] 其中式i、i i、i i i和iv单独地具有立体化学L或D，
[0028] 并且条件是所述取代基具有Ξ至十个带负电荷的部分。
[0029] 在一个实施方案中，本发明设及一种膜高血糖素类似物形式的中间产物，或其药 学上可接受的盐、酷胺或醋，该中间产物与膜高血糖素 (SEQ ID Ν0:1)相比包含W下修饰：
[0030] (i) [ Impl，Aib2，His3，Leul6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0031] (ii) [Impl，Aib2，His3，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0032] (iii)[ Impl, Aib2，His3，LeulO，Glul5，Lys24, Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0033] (iv) [ Impl，Aib2，His3，Glul5，Ala24，Leu27，Lys28]-膜高血糖素；
[0034] (V) [ Impl，His3，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0035] (vi)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0036] (vii)[Impl，Aib2，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0037] (viii) [ Impl，His3，Leul6，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0038] (ix) [ Impl，His3，Leul6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0039] (X) [ Impl，Aib2，His3，化116，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0040] (xi)[Impl，His3，Glul5，Lysl6，Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0041 ] (xii) [Impl，His3，Glul5，Lys20，Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0042] (xiii) [Impl，His3，Glul5，Lys21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0043] (xiv)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Lys28]-膜高血糖素；
[0044] (XV) [ Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28，Lys29]-膜高血糖素；
[0045] (xvi)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28，Lys30]-膜高血糖素。
[0046] 在一个实施方案中，本发明设及一种包含本发明的衍生物W及一种或多种药学上 可接受的赋形剂的组合物。
[0047] 在一个实施方案中，本发明设及如本发明所定义的衍生物，其用于在医学中使用。
【具体实施方式】
[0048] 在一个实施方案中，本发明设及膜高血糖素类似物的新型快速作用衍生物，即可 在例如低血糖的治疗中使用的膜高血糖素类似物的衍生物，其中需要在施用后生物作用快 速起效。
[0049] 本发明人惊讶地发现，本发明的衍生物在溶液中具有改善的化学和物理稳定性， 同时保持对人膜高血糖素受体的良好效力和升血糖效应的迅速起效。因此，本发明的衍生 物能够获得一种液体组合物，其具有包含所述衍生物的所述液体组合物的长期储存稳定 性。
[0050] 所述衍生物包含在位置1的氨基酸置换咪挫并丙酷基(Imp)和在位置3的氨基酸置 换组氨酸。所述衍生物进一步包含具有3-10个带负电荷的部分的取代基，其中所述取代基 与氨基酸的侧链如赖氨酸侧链的氮原子共价连接。
[0051] 在一个实施方案中，本发明设及一种膜高血糖素类似物的衍生物，或所述衍生物 的药学上可接受的盐、酷胺或醋，所述衍生物包含式I:
[0052] Imp_X2_His_Gly_Thr_Phe_Thr_Ser_Asp_Xio_Ser_Xi2_Tyr_Leu_Xi5_Xi6_Ar 邑 _Ar 邑一 Ala-X2〇-X2 广陆 e-Val-X24-T 巧-Leu-X27-X28-X29-X3〇[I]
[0化3] 其中 [0化4] X2 为 Ser 或 Aib;
[0化5] Xi 日为 Tyr、Leu、Ile 或化 1;
[0化6] Xi2 为 Lys 或 Arg;
[0化7] Xi 日为 Asp 或 Glu;
[0化引 Xi6 为 56'、41日、1^611、1'虹、4化、116、化1或1^73;
[0化9] X2 日为 Gln、Glu、Aib 或 Lys;
[0060] X21 为 Asp、Glu 或 Lys;
[0061] X24 为 6111、41日、6111、4化或1^73;
[0062] X27 为 161、1^611或化1;
[0063] X28 为 Asn'Ser、!'虹、Gln、Ala、Gly、Glu 或 Lys;
[0064] X29 为 Τ'虹、617、56'、6111、41日、6111或1^73;且 [00化]Χ3日不存在或为Lys;
[0066] 并且其中所述衍生物包含与在式1的位置乂12^16心2日^21心24^28心2减乂3日处的赖 氨酸的侧链的氮原子共价连接的取代基，
[0067] 其中所述取代基具有式II:
[006引 Y 广 Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y1广 Yi广[I。
[0069] 其中Yi为氨或表示C2-6酷基基团或班巧酷基部分，并且
[0070] 其中Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y8、村、Yl()、Yl域Yl2单独地不存在或单独地表示选自Ser残 基、Ala残基、Gly残基、式i、式ii、式iii、式iv和式V的氨基酸残基：
[0071]
[0072] 其中式和iv单独地具有立体化学L或D，
[0073] 并且条件是所述取代基具有Ξ至十个带负电荷的部分。
[0074] 在一个实施方案中，当本文在化学结构的图中使用符号(或者可替代的波浪 线)时，其表示与该衍生物中相邻位置的连接点。
[0075] 膜高血糖素肤和类似物
[0076] 如本文使用的术语"膜高血糖素肤"是指人膜高血糖素(其序列作为SEQ ID NO: 1 包括在序列表中），或其类似物(例如式I的膜高血糖素类似物）。具有SEQ ID NO: 1的序列的 肤在本文中还可被称为"膜高血糖素"。在一个实施方案中，如本文使用的术语"膜高血糖 素"是指 His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Ar 邑- Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-T;rp-Leu-Met-Asn-T虹（SEQ ID N0:1)。
[0077] 本发明的衍生物包括膜高血糖素类似物。如本文使用的术语"膜高血糖素类似物" 是指作为膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)的变体的肤或化合物。在一个实施方案中，该膜高血糖 素类似物包含式I:
[0078] Imp-X2-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser_Asp-Xi〇-Ser-Xi2-Tyr-Leu-Xi5-Xi6-Ar 邑一Ar 邑一 Ala-X2〇-X2 广陆 e-Val-X24-T 巧-Leu-X27-X28-枯 9-X3〇[I]
[0079] 其中
[0080] X2 为 Ser 或 Aib;
[0081 ] Xi 日为 Tyr、Leu、Ile 或化 1;
[0082] Xi2 为 Lys 或 Arg;
[0083] Xi 日为 Asp 或 Glu;
[0084] Xi6 为 56'、41日、1^611、1'虹、4化、116、化1或1^73;
[0085] X2 日为 Gln、Glu、Aib 或 Lys;
[0086] X21 为 Asp、Glu 或 Lys;
[0087] X24 为 6111、41日、6111、4化或1^73;
[008 引 X27 为 161、1^611或化1;
[0089] X28 为 Asn'Ser、!'虹、Gln、Ala、Gly、Glu 或 Lys;
[0090] X29 为 Τ'虹、617、56'、6111、41日、6111或1^73;且
[0091] Χ3日不存在或为Lys。
[0092] 可参考W下各项来描述本发明的衍生物的膜高血糖素类似物：i)人膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)中对应于被修饰的氨基酸残基（即在膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)中的相应位 置)的氨基酸残基的数目，W及ii)实际的修饰。W下是合适的类似物命名的非限制性实例。
[0093] 换言之，所述膜高血糖素类似物是与人膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)相比具有多个 氨基酸残基修饰的膜高血糖素肤。运些修饰可w独立地代表一个或多个氨基酸置换、添加 和/或缺失。例如，? Imp 1，Hi S3，Glul 5，Ly s24，Leu27，Ser 28 ]-膜高血糖素"表示运样的膜高 血糖素 (SEQ ID NO: 1)，其中在位置1的氨基酸已被置换为Imp,在位置3的氨基酸已被置换 为化S，在位置15的氨基酸已被置换为Glu，在位置24的氨基酸已被置换为Lys，在位置27的 氨基酸已被置换为Leu,并且在位置28的氨基酸已被置换为Ser。
[0094]与SEQ ID NO: 1相比，"包含"某些指定变化的类似物可W包含进一步的变化。在特 定的实施方案中，该类似物"具有"指定的变化。
[00M]从W上的实例中可W明显看出，氨基酸残基可用其全名、其单字母密码和/或其Ξ 字母密码来表示。运Ξ种方式是完全等同的。在一个实施方案中，根据IUPAC-IUB命名法使 用标准的单字母或Ξ字母密码来描绘肤类似物及其衍生物。
[0096] 可使用表述"位置"或"相应位置"来表征膜高血糖素类似物序列相对于膜高血糖 素 (SEQ ID N0:1)的变化的位点。例如，通过简单的书写和目测容易推断出变化的位置W及 变化的数目。
[0097] 例如在本发明衍生物的膜高血糖素类似物的上下文中使用的术语1太"是指包含 通过酷胺(或肤)键互相连接的一系列氨基酸的化合物。本发明的肤包含至少五个通过肤键 连接的组成氨基酸。在特定的实施方案中，所述肤a)包含i)29个或ii)30个氨基酸，或者b) 由i)29个或ii)30个氨基酸组成。在进一步的特定实施方案中，所述肤由通过肤键互相连接 的氨基酸组成。
[0098] 氨基酸是含有氨基基团和簇酸基团W及任选的一个或多个通常被称为侧链的附 力睡团的分子。如本文使用的术语"氨基酸"包括编码的氨基酸(其中有20种标准氨基酸似 及非编码的氨基酸。编码的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸（IUPAC表1 3AA-1部分， http: //www. chem. qmul. ac.址/iupac/AminoAcid/AAln2. html#AAl)。非编码的氨基酸是在 天然的肤和/或蛋白质中未发现的，或者不是由标准的细胞机器产生的（例如，它们可能已 经经历翻译后修饰）。非编码的氨基酸的非限制性实例是Aib(a-氨基异下酸）、脱氨基组氨 酸（别名为咪挫并丙酸，缩写为Imp) W及编码的氨基酸的D-异构体。在此，Imp被称为氨基 酸，虽然它不含有氨基基团。
[0099] 在下文中，没有规定光学异构体的膜高血糖素肤的所有氨基酸应理解为意指心异 构体(除非另有说明）。
[0100] 该膜高血糖素肤可W是运样的膜高血糖素类似物(SEQ ID NO: 1):与膜高血糖素 相比，其具有总计最多15个氨基酸差异(在本文中也被称为修饰），例如一个或多个添加 、一 个或多个缺失和/或一个或多个置换。
[0101] 在一个实施方案中，该膜高血糖素类似物由式I组成。在一个实施方案中，X2为 Ser。在一个实施方案中，Χ?ο为Tyr。在一个实施方案中，Xi2为Lys。在一个实施方案中，Xi5为 Asp。在一个实施方案中，Xi6为Ser。在一个实施方案中，X20为Gin。在一个实施方案中，X21为 Asp。在一个实施方案中，X24为Gin。在一个实施方案中，X27为Met。在一个实施方案中，X28为 Asn。在一个实施方案中，X29为化r。在一个实施方案中，X30不存在。在一个实施方案中，)(2为 Aib。在一个实施方案中，Χ?ο为Leu。在一个实施方案中，Xi5为Glu。在一个实施方案中，Xi6为 Leu。在一个实施方案中，Xi6为Val。在一个实施方案中，X20为Lys。在一个实施方案中，X21为 Glu。在一个实施方案中，X24为Lys。在一个实施方案中，X24为Ala。在一个实施方案中，X27为 Leu。在一个实施方案中，X28为Ser。在一个实施方案中，X28为Lys。在一个实施方案中，X29为 Lys。在一个实施方案中，该膜高血糖素类似物不包含C-末端酷胺。在一个实施方案中，该膜 高血糖素类似物或衍生物不包含添加至X30的C-末端的氨基酸残基。
[0102] 在一个实施方案中，该膜高血糖素类似物与膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)相比在所 述膜高血糖素类似物中包含3-15个氨基酸残基修饰，如置换或添加。在一个实施方案中，该 膜高血糖素类似物与膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)相比包含3-15个氨基酸残基修饰，如置换 或添加。在一个实施方案中，该衍生物与膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)相比在所述膜高血糖素 类似物中包含最多14个如最多13个或最多12个氨基酸残基修饰，如置换或添加。在一个实 施方案中，该膜高血糖素类似物与膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)相比在所述膜高血糖素类似 物中包含最多11个如最多10个或最多9个氨基酸残基修饰，如置换或添加。在一个实施方案 中，该膜高血糖素类似物与膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)相比在所述膜高血糖素类似物中包 含最多8个如最多7个或最多6个氨基酸残基修饰，如置换或添加。
[0103] 膜高血糖素衍生物
[0104] 本发明设及膜高血糖素类似物的衍生物。如本文在膜高血糖素肤的上下文如膜高 血糖素类似物中使用的术语"衍生物"，意指化学修饰的膜高血糖素肤，其中一个或多个取 代基已与该膜高血糖素肤共价连接。如本文使用的术语"取代基"意指替代氨原子的化学部 分或基团。该衍生物可包含一个或多个选自酷胺、碳水化合物、烷基基团、酷基基团、醋等的 修饰。
[010引在一个实施方案中，所述衍生物包含与在式1的位置乂12^16心2日^21心24^28心29或 X30处的赖氨酸的侧链的氮原子共价连接的取代基。在一个实施方案中，该取代基具有式II:
[0106] Y 广 Y2-Y3-Y4-Y 已-Y6-Y 广 Y8-Y9-Y10-Y1广 Yi广[Π ]
[0107] 其中Yl为氨或表示C2-6酷基基团或班巧酷基部分，并且其中Y2、Y3、Y4、Ys、Y6、Y7、Y8、 Υ9、Υιο、Υιι或Y12单独地不存在或单独地表示选自Ser残基、Ala残基、Gly残基、式i、式ii、式 iii、式iv和式V的氨基酸残基：
[010 引
[0109] 其中式i、i i、i i i和i V单独地具有立体化学L或D。
[0110] 在一个实施方案中，Υ?2与在所述衍生物的位置乂12^16心2日^21心24^28心29或乂30处 的赖氨酸的侧链的氮原子连接。在一个实施方案中，所述取代基与赖氨酸的侧链的ε-氮原 子共价连接。在一个实施方案中，所述取代基与在位置Χ?2、Χ?6或枯0处的赖氨酸连接。在一个 实施方案中，所述取代基与在位置Χ21、枯4或Χ28处的赖氨酸连接。在一个实施方案中，所述取 代基与在位置Χ29或Χ30处的赖氨酸连接。在一个实施方案中，所述取代基与在位置枯4处的赖 氨酸连接。所述取代基可经由Υ?2与赖氨酸的侧链的ε-氮原子共价连接。所述取代基可经由 Υ?2与在位置Χ?2、Χ?6或Χ20处的赖氨酸连接。所述取代基可经由Υ?2与在位置Χ21、Χ24或Χ28处的 赖氨酸连接。所述取代基可经由Υ?2与在位置拉9或X30处的赖氨酸连接。所述取代基可经由Υ?2 与在位置拉4处的赖氨酸连接。
[0111] 在一个实施方案中，Yi为氨或表示C2-6酷基基团或班巧酷基部分。如本文使用的术 语乂2-6酷基基团"是指具有二至六个碳原子的支链或无支链的酷基基团，诸如：
敦在一个实施方案中，Yi为乙酷基基团。如本文使用的术语"班巧酷基"是指W下
[0112]
〇
部分：
[0113] 在一个实施方案中，Yi为班巧酷基部分。在一个实施方案中，Yi为氨。 0
[0114] 在一个实施方案中，￥2、￥3心、￥5、￥6、￥7、￥8、￥9、￥1〇、￥11和￥12(如果存在)经由酷胺键 连接。在一个实施方案中，Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y8、Y9、Yl0、Yll或Yl2不存在。在一个实施方案中， Y2、Y3、Y4、Y日、Y6、Y7、Y8、Y9、Yl0、Yll或Yl2为Ser残基。在一个实施方案中，Y2、Y3、Y4、Y日、Y6、Y7、Y8、 Υ9、Υιο、Υιι 或 Υ?2 为 Ala 残基。在一个实施方案中，￥2、￥3^4、￥日^6、￥7、￥8、￥9^1日、￥11或￥12为617 残基。在一个实施方案中，￥2、￥3、￥4、￥5、￥6、￥7、￥8、￥9、￥10八11或￥12为式1。在一个实施方案中， ￥2、￥3^4、￥5^6、￥7^8、￥9^10、￥11或￥12为式11。在一个实施方案中瓜、￥3^4、￥5^6、￥7^8、￥9、 Υιο、Υιι或Υ?2为式iii。在一个实施方案中，￥2、￥3^4、￥日^6、￥7^8、￥9^1日、￥11或￥12为式1￥。在一 个实施方案中，Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y8、Y9、Yl()、Yl减Yl2为式V。在一个实施方案中，所述取代基 包含3-10个如3-5个或4个式i的残基。
[0115] 在一个实施方案中，所述取代基具有Ξ至十个带负电荷的部分。在一个实施方案 中，所述取代基具有3、4、5、6、7、8、9或10个带负电荷的部分。在一个实施方案中，所述取代 基具有Ξ至十个带负电荷的部分。在一个实施方案中，所述取代基具有3-10个如3-7或3-5 个带负电荷的部分。如本文使用的术语"带负电荷的部分"意指可带负电荷的化学部分，诸 如但不限于氨基酸部分(例如Glu、丫-Glu、Asp或β-Asp、簇酸、横酸或四挫部分）。在一个实 施方案中，在生理抑(pH 7.4)下测定"带负电荷的部分"的数目。在一个实施方案中，"带负 电荷的部分"为簇酸基团。
[0116] 在一个实施方案中，所述取代基为W下部分：
[0117]
[0118] 在一个实施方案中，所述取代基为W下部分：
[0124] 在一个实施方案中，所述衍生物为妒24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[Impl，Aib2，His3，Leul6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0125] 化学式1:
[0126]
[0127]在一个实施方案中，所述衍生物为妒24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[1111口1，4比2，化33,611115，1^7324，1^61127,56^8]-膜高血糖素 [012引化学式2:
[0129] ?
[0130] 在一个实施方案中，所述衍生物为Νε24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[1111口1，4比2，化33，1^61110,611115，1^7324，1^61127,56^8]-膜高血糖素
[0131] 化学式3:
[0132]
[0133] 在一个实施方案中，所述衍生物为妒28-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[1111口1，4比2，化33,611115,41日24，1^61127，1^7328]-膜高血糖素
[0134] 化学式4:
[0135]
[0136] 在一个实施方案中，所述衍生物为Νε24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[111191，化33,611115，1^7324，1^61127,56^8]-膜高血糖素
[0137] 化学式5:
[013 引
[0139] 在一个实施方案中，所述衍生物为Νε24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[1111口1，化33,611115,611121，1^7324，1^61127,56^8]-膜高血糖素
[0140] 化学式6:
[0141]
[0142] 在一个实施方案中，所述衍生物为Νε24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[1111口1，4比2，化33,611115,611121，1^7324，1^61127,56^8]-膜高血糖素
[0143] 化学式7:
[0144]
[0145] 在一个实施方案中，所述衍生物为Νε24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[Impl，His3，Leul6，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0146] 化学式8:
[0147]
[0148] 在一个实施方案中，所述衍生物为Νε24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[111191，化33，1^61116，1^7324，1^61127,56^8]-膜高血糖素
[0149] 化学式9:
[0150]
[0151 ]在一个实施方案中，所述衍生物为Νε24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[Impl，Aib2，His3，化116，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0152] 化学式10;
[0153]
[0154] 在一个实施方案中，所述衍生物为Νε16-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[111191，化33,611115，1^7316,611121，1^61127,56^8]-膜高血糖素
[0155] 化学式11:
[0156]
[0157] 在一个实施方案中，所述衍生物为妒2〇-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[111191，化33,611115，1^7320,611121，1^61127,56^8]-膜高血糖素
[015引化学式12:
[0159]
[0160] 在一个实施方案中，所述衍生物为Νε21-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[111191，化33,611115，1^7321，1^61127,56^8]-膜高血糖素
[0161] 化学式13:
[0162]
[0163] 在一个实施方案中，所述衍生物为Νε28-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[111191，化33,611115,611121，1^61127，1^7328]-膜高血糖素
[0164] 化学式14:
[01 化]
[0166] 在一个实施方案中，所述衍生物为妒29-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[1111口1，化33,611115,611121，1^61127,56的8，1^7329]-膜高血糖素
[0167] 化学式15:
[016 引
ο
[0169] 在一个实施方案中，所述衍生物为 Nα([Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28]- 膜高血糖素基)-Ne[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨 基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]Lys
[0170] 化学式16:
[0171]
[0172] 在一个实施方案中，所述衍生物为N"4-[2-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4- [[(4S)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]乙酷基]-[111191，化33,611115,611121，1^7324，1^61127,56^8]-膜高血糖素
[0173] 化学式17:
[0174]
〇
[0175] 在一个实施方案中，所述衍生物为NeM-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酷氨基- 4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Glu21, Lys24，Leu27，Ser2引-膜高血糖素
[0176] 化学式18:
[0177]
[017引在一个实施方案中，所述衍生物为Νε24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- [[(4S)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[111191，化33,611115,611121，1^7324，1^61127,56的8]-膜高 血糖素
[0179] 化学式19:
[0180]
[0181 ]在一个实施方案中，所述衍生物为Νε24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[Impl，His3，Alal6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0182] 化学式20:
[0183]
[0184] 在一个实施方案中，所述衍生物为Νε24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[Impl，His3，Aibl6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0185] 化学式21:
[0186]
[0187]在一个实施方案中，所述衍生物为Νε24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4- 乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[1111口1，化33,611115,611121，1^7324，1^61127,611128]-膜高血糖素 [018引化学式22:
[0189]
[0190] 药学上可接受的盐、酷胺、醋或簇酸
[0191] 本发明的衍生物、类似物和中间产物可W是药学上可接受的盐、酷胺、簇酸或醋的 形式。例如通过碱与酸之间的化学反应形成盐，例如：2畑3+也S04^(N也)2S〇4。该盐可W是碱 式盐、酸式盐，或者它可W两者都不是（即为中性盐）。碱式盐在水中产生氨氧根离子，而酸 式盐在水中产生水合氨离子。在一个实施方案中，所述衍生物为所述衍生物的药学上可接 受的盐、酷胺或醋。
[0192] 本发明衍生物的盐可通过分别在阴离子或阳离子基团之间添加阳离子或阴离子 来形成。运些基团可位于膜高血糖素类似物部分，和/或位于本发明衍生物的取代基中。
[0193] 本发明衍生物的阴离子基团的非限制性实例包括在取代基（如果有的话）中W及 在膜高血糖素类似物部分中的游离簇酸基团。膜高血糖素类似物部分通常在C-末端处包含 游离簇酸基团，并且它还可W在内部酸性氨基酸残基如Asp和Glu处包含游离簇酸基团。
[0194] 膜高血糖素类似物部分中的阳离子基团的非限制性实例包括内部碱性氨基酸残 基如化s、A巧和Lys的任何游离氨基基团。
[01M]本发明衍生物的醋例如可通过游离簇酸基团与醇或苯酪的反应来形成，该反应导 致至少一个径基基团被烷氧基或芳氧基基团所替代。
[0196] 所述醋的形成可设及在膜高血糖素类似物的C-末端处的游离簇酸基团，和/或在 取代基中的任何游离簇酸基团。
[0197] 本发明衍生物的酷胺例如可通过游离簇酸基团与胺或取代的胺的反应或通过游 离或取代的氨基基团与簇酸的反应来形成。
[0198] 所述酷胺的形成可设及在膜高血糖素类似物的C-末端处的游离簇酸基团，在取代 基中的任何游离簇酸基团，在膜高血糖素类似物的N-末端处的游离氨基基团，和/或膜高血 糖素类似物和/或取代基的任何游离或取代的氨基基团。在一个实施方案中，所述衍生物不 包含膜高血糖素类似物的C-末端酷胺。
[0199] 在一个实施方案中，除非另有说明，本发明的衍生物包含C-末端簇酸基团。在一个 实施方案中，本发明设及该衍生物的药学上可接受的盐、酷胺或醋。术语"药学上可接受的 盐"意在表示对患者无害的盐。在一个实施方案中，该衍生物为药学上可接受的盐的形式。 在一个实施方案中，该衍生物的簇酸是在膜高血糖素类似物的C-末端处包含酷胺基团的衍 生物，即膜高血糖素类似物。在另一个特定的实施方案中，该衍生物为药学上可接受的酷胺 的形式，优选在膜高血糖素类似物的C-末端处具有酷胺基团。在进一步特定的实施方案中， 该膜高血糖素类似物或衍生物为药学上可接受的醋的形式。
[0200] 膜高血糖素肤的衍生物的制备
[0201] 本发明的衍生物可通过W下描述的方法制备。
[020。SPPS通用方法
[0203]将要使用的Fmoc保护的氨基酸衍生物可W是W下推荐的标准品：由例如Anaspec、 Bachem、Iris Biotech或NovabioQiem提供的Fmoc-Ala-〇HJmoc-Arg^bf)-0山化〇。-八311 (T;rt)-OH、Fmoc-Asp(0tBu)-OH、Fmoc-Cys(T;rt)-OH、Fmoc-Gln(T;rt)-OH、Fmoc-Glu(0tBu)- (^、尸111〇(3-617-(^、化〇(3-化3(时1:)-(^^111〇(3-116-(^、化〇(3-1^611-(^、化〇(3-1^73(130〇-(^、 Fmoc-Met-〇H、Fmoc-Phe-〇H、Fmoc-P;r〇-〇H、Fmoc-Se;r(tBu Τ'巧（BOC) -OH、Fmo c-Tyr (tBu) -OH、Fmo c-Va 1 -OH 和 Fmoc-Ly s (Mt t) -OH。使用 3- (N-1苯甲 基-咪挫-4-基)-丙酸来引入Imp。
[0204]可使用基于Fmoc 的化学法在来自 Protein Technologies(Tucson, AZ85714U.S.A.)的Prelude固相肤合成仪(陆ase Peptide Synthesizer)上进行SPPS。用于 制备C-末端簇酸的合适的树脂是预加载有氨基酸的Wang树脂，诸如Fmoc-T虹(tBu) -Wang树 月旨(低负载，〇.35mmol/g)。在取代基与C-末端赖氨酸连接的情况下，合适的树脂为预加载的 fmoc-Lys(Mtt)-Wang。用于制备C-末端肤酷胺的合适的树脂为H-Rink Amide-化emMatrix 树脂（加载例如0.52nmol/g)或Rink Amide AM聚苯乙締树脂（Novabiochem，加载例如 0.62mmo 1 /g)等。采用在NMP中的20 %赃晚来实现化OC脱保护。在没有预激活的情况下通过 使用DIC/HOAt/S甲基化晚（collidine)或DIC/Oxyma Pure/S甲基化晚进行肤偶联。将氨 基酸/册At或氨基酸/Oxyma化re溶液(在3-10倍摩尔过量下在NMP中0.3M/0.3M)添加至树 脂中，然后添加相同摩尔当量的DIC(在NMP中3M)，接着添加 Ξ甲基化晚(在NMP中3M)。例如， 对于W下规模的反应，每一偶联可W使用W下量的0.3M氨基酸/HOAt溶液：规模/mL， 0.05mmol/l. 5mL、0. lOmmol/3.0mL、0.25mmol/7.5mL。可通过用HFIP/DCM(75: 25)洗涂树脂 (2x 2min)，用DCM洗涂并将树脂悬浮于HFIP/DCM(75:25)中（2x 20min)，并随后用赃晚/NMP (20:80)、DCM( lx)、NMP( lx)、DCM( lx)、NMP( lx)依次洗涂来去除Mtt基团。
[02化]取代基的连接
[0206] 可通过如上所述的Prelude肤合成仪，使用适当保护的结构单元在逐步程序中引 入取代基，其中伴随氨基酸和簇酸衍生物的修饰，包括化oc-Ado-OHJmoc-Glu-OtBu和乙 酸、丙酸、异下酸、下酸、戊酸、己酸或4-甲基戊酸。在每个偶联步骤之后，可使用过量的乙酸 酢和Ξ甲基化晚(〉10个当量)对未反应的肤中间体加帽。
[0207] 使用受Ml:t保护的赖氨酸巧moc-Lys(Mtt)-OH)实现在赖氨酸的ε-氮上引入取代 基。或者，可用：[￥0(16基团保护赖氨酸的6-氮巧1]10(3-1^73。￥〇(16)-(^)。可通过与氨基酸。1]10(3- Glu-0巧u偶联实现在取代基中并入丫 -Glu部分。
[0208] 可使用延长的偶联时间（lx 6小时）接着用乙酸酢或可替代的乙酸/DIC/HOAt/S 甲基化晚加帽来实现每个部分在取代基中的引入。在NMP中使用乙酸酢（10个当量)和Ξ甲 基化晚(20个当量)实现取代基上末端氮的乙酷化。
[0209] 从树脂上切割
[0210] 在合成之后用DCM洗涂树脂，并且通过用TFA/TIS/水(95/2.5/2.5)处理2-3小时接 着用二乙酸沉淀，将肤从树脂上切割下来。用二乙酸洗涂沉淀物。 脚。纯化和定量
[0212] 将粗肤溶解于水和MeCN的适当混合物如水/MeCN(4:1)中，并在含有C18-硅胶的柱 上通过反相制备型册LC( Waters Del taprep 4000或Gil son)进行纯化。采用逐渐增加的 MeCN在含有0.1 % TFA的水中的梯度进行洗脱。通过分析型HPLC或UPLC检查相关级分。将含 有纯的祀肤的级分混合并减压浓缩。分析化PLC，LCMS)所得溶液，并使用化学发光氮特异性 HPLC检测器(Antek 8060HPLC-化ND)或通过测量280nm处的UV吸收对产物（即衍生物)进行 定量。将产物分配至玻璃小瓶中。给小瓶盖上Millipore玻璃纤维预滤器。冷冻干燥得到呈 白色固体的肤Ξ氣乙酸盐。
[0213] 中间产物
[0214] 在一个实施方案中，本发明设及一种膜高血糖素类似物形式的中间产物，或其药 学上可接受的盐、酷胺或醋，该中间产物与膜高血糖素 (SEQ ID N0:1)相比包含W下修饰： 惦15] (i) [ Impl，Aib2，His3，Leul6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素； 惦16] (ii)[Impl，Aib2，His3，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素； 惦17] (iii)[ Impl, Aib2，His3，LeulO，Glul5，Lys24, Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[021 引（iv)[Impl，Aib2，His3，Glul5，Ala24，Leu27，Lys28]-膜高血糖素；
[0219] (v)[Impl，His3，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0220] (vi)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0221] (vii) [Impl, Aib2，His3，Glul5，Glu21，Lys24, Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0222] (viii) [ Impl，His3，Leul6，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0223] (ix) [ Impl，His3，Leul6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0224] (X) [ Impl，Aib2，His3，化116，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[02 巧](xi)[Impl，His3，Glul5，Lysl6，Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[02%] (xii) [Impl，His3，Glul5，Lys20，Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0227] (xiii) [Impl，His3，Glul5，Lys21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0228] (xiv)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Lys28]-膜高血糖素；
[02巧](XV) [ Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28，Lys29]-膜高血糖素；
[0230] (xvi)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28，Lys30]-膜高血糖素。在一个实施 方案中，本发明设及一种膜高血糖素类似物形式的中间产物，或其药学上可接受的盐、酷胺 或醋，该中间产物与膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)相比包含W下修饰：
[0231] (xvii) [Impl, His3，Alal6, Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0232] (xviii)[Impl，His3，Aibl6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0233] (xix)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Glu28]-膜高血糖素。
[0234] 在一个实施方案中，本发明设及一种中间产物，或其药学上可接受的盐、酷胺或 醋，其中膜高血糖素类似物选自W下的膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)类似物：
[0235] (i-a) [ Impl，Aib2，His3，Leul6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0236] (ii-a) [ Impl，Aib2，His3，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0237] (iii-a) [Impl，Aib2，His3，LeulO，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[023引（iv-a) [ Impl，Aib2，His3，Glul5，Ala24，Leu27，Lys28]-膜高血糖素；
[0239] (v-a) [ Impl，His3，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0240] (vi-a)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0241] (vii-a) [Impl, Aib2，His3，Glul5，Glu21，Lys24, Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0242] (viii-a)[Impl，His3，Leul6，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0243] (ix-a) [ Impl，His3，Leul6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0244] (x-a) [ Impl，Aib2，His3，化116，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0245] (xi-a)[Impl，His3，Glul5，Lysl6，Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0246] (xii-a) [ Impl，His3，Glul5，Lys20，Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0247] (xiii-a)[Impl，His3，Glul5，Lys21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0248] (xiv-a)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Lys28]-膜高血糖素；
[0249] (xv-a) [ Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28，Lys29]-膜高血糖素；
[02 加](xvi-a)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素。在一个实施方案 中，本发明设及一种中间产物，或其药学上可接受的盐、酷胺或醋，其中膜高血糖素类似物 选自W下的膜高血糖素 (SEQ ID N0:1)类似物：
[0巧 1 ] (xvii-a) [ Impl，His3，Alal6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0巧2] (xviii-a) [ Impl，His3，Aibl6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0 巧 3] (xix-a)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Glu28]-膜高血糖素。
[0254] 可通过W下的逐步合成法来制备本发明的膜高血糖素衍生物，该方法包括（i)中 间膜高血糖素类似物的制备，W及随后的（ii)取代基的连接。可使用受保护的氨基酸，使用 如实验部分中描述的标准固相合成来实现本方法的步骤(i);从树脂上切割后，可如本文实 验部分中所述使用制备型HPLC使膜高血糖素类似物经历纯化，W得到中间产物。或者，可使 用如W02009/083549中所述的半重组合成来进行本方法的步骤(i)，即中间产物的制备。可 使用W02009/083549中描述的方法来实现本方法的步骤(ii)，即，取代基与中间产物连接而 产生最终产物，W及取代基本身的制备。
[0255] 功能性质
[0256] 在第一功能性实施方案中，本发明的衍生物是化学稳定的。而且，或者备选地，在 第二功能性实施方案中，该衍生物是物理稳定的。而且，或者备选地，在第Ξ功能性实施方 案中，该衍生物对膜高血糖素受体具有良好的受体结合和效力。而且，或者备选地，在第四 功能性实施方案中，该衍生物是快速作用的衍生物。而且，或者备选地，在第五功能性实施 方案中，该衍生物具有高溶解度。而且，或者备选地，在第六功能性实施方案中，该衍生物具 有其对化P-1受体的EC50与其对膜高血糖素受体的EC50之间的高比值(或等于人膜高血糖 素 (SEQ ID NO: 1)的比值）。在一个实施方案中，在功能性实施方案中的作用是相对于人膜 高血糖素 (SEQ ID NO:1)而确定的。
[0巧7]化学稳定性
[0258] 如本文使用的术语肤组合物的"化学稳定性"是指肤结构中的化学共价变化，其导 致与天然肤(例如人膜高血糖素)结构相比具有潜在较低的生物效力和/或潜在增强的免疫 原性性质的化学降解产物的形成。可根据天然肤的类型和性质W及该肤所暴露的环境而形 成各种化学降解产物。化学降解很可能不能完全避免，并且在延长的储存过程中经常看到 化学降解产物的量增加。大多数的肤倾向于脱酷胺，即谷氨酷胺酷基或天冬酷胺酷基残基 中的侧链酷胺基团水解W形成游离簇酸的过程。其他降解途径包括高分子量转化产物的形 成，其中两个或更多个肤分子通过转酷胺基作用和/或二硫键相互作用彼此共价结合，从而 导致共价结合的二聚体、寡聚体和聚合物降解产物的形成（Stability of Protein Pharmaceuticals,Ahern.T.J.&Manning Μ.C.,Plenum Press,New Yorkl992)。（例如甲硫 氨酸残基的）氧化可作为化学降解的另一变型而提及。含有天冬酷胺或天冬氨酸的肤可能 倾向于经由中间体天冬氨酷亚胺的形成而异构化，从而产生相应的异天冬氨酸异构体，其 中可形成〇-和心异构体两者。天冬氨酷亚胺中间体还可W导致D-天冬氨酸异构体的形成。 (Formulation Consideration for Proteins Susceptible to Asparagine Deamidation and Aspartate Isomerization,Wakankar和Borchardt,Journal ofPharmaceutical Sciences,2006，Vol.95，no. 11，p 2321)。最后，肤还可W经历水解裂解，其中肤片段或单个 氨基酸通过肤键的水解而裂解。
[0259] 可通过在暴露于不同的环境条件(通常可通过例如提高溫度来加速降解产物的形 成)之后的各个时间点测量化学降解产物的量来评估组合物的化学稳定性。通常通过使用 各种色谱技术(例如SE-HPLC和/或RP-UPLC)根据分子大小和/或电荷分离降解产物，来确定 每个单独的降解产物的量。
[0260] 因此，如上所概述的，"稳定的组合物"是指具有增强的物理稳定性、增强的化学稳 定性或增强的物理和化学稳定性的组合物。通常，组合物在使用和储存过程中（按照推荐的 使用和储存条件)必须是稳定的，直到达到失效期。
[0261] 可通过本文描述的试验（IV)中的化学降解的测定来测量所述衍生物的化学稳定 性。在一个实施方案中，化学稳定的衍生物具有小于5%如小于4%、小于3 %或小于2 %的化 学降解，其中所述化学降解可通过本文描述的试验(IV)来测定。在一个实施方案中，所述衍 生物具有小于5%如小于4%、小于3%或小于2%的化学降解，其中所述化学降解可通过本 文描述的试验(IV)来测定。
[026。物理稳定性
[0263]肤可能经历物理状态的各种变化。肤可能由于在某一组条件下缺乏溶解性而沉 淀，例如由于因抑的变化而引起的氨基酸侧链上排斥电荷的中和而沉淀。另一个物理变化 是淀粉样原纤维的形成，其包括构象变化成富含β-折叠的大分子纤维结构。可通过因聚集 引起的较少的系统结构重复而形成其他的大分子结构。在后两种情况下，最终可观察到作 为沉淀物的肤物质。实际上，运些物理变化可能在一定程度上是相关的，例如溶解度相对于 pH 与原纤维形成是相关的[Schmitt schmitt 和Scholtz , Protein Science ,12,10,2374- 2378，2003]。此外，仅通过目测很难区分运些现象，因此通常通过通用术语"沉淀物"来描述 运些变化的结果。
[0264] 物理状态的其他变化包括作为溶液中肤含量损失而观察到的向表面上的吸附，和 液体溶液到凝胶的变化。然而，不论沉淀物的性质或凝胶的形成如何，当沉淀物为药物可注 射的形式时在其储存和使用期间，对该沉淀物的观察是一个问题。
[0265] 膜高血糖素在中性pH下具有非常低的水溶解度，运使药物组合物在中性pH下失 效。即使在酸性抑下溶解时，膜高血糖素也可根据浓度和溫度而经历不同的相变，并且因此 是非常物理不稳定的。在膜高血糖素样品溶解在盐酸中之后，可能出现滞后期，此时样品的 粘度低并且溶液完全透明。若干小时之后粘度开始增加一一指示凝胶形成(Beaven等人， European J.Biochem. 11(1969)37-42)。在达到稳定期之后，粘度可能开始再次下降，并且 同时原纤维可能出现并从溶液中沉淀出来。该过程是有可播性的（seedable)，添加少量预 形成的凝胶减少了滞后期。凝胶的形成和原纤维形成高度依赖于物理应力，诸如加热和摇 动，它们均增加该过程的速率。
[0266] 如本文使用的术语组合物的"物理稳定性"是指由于肤和/或蛋白质暴露于热-机 械应力和/或与不稳定的界面和表面如疏水性表面和界面相互作用，使肤和/或蛋白质形成 肤和/或蛋白质的生物失活的和/或不可溶的聚集体的倾向。在装在合适容器(例如筒厘或 小瓶）中的组合物在不同溫度下暴露于机械/物理应力(例如揽拌)不同的时间段之后，借助 于目测和/或浊度测量来评估水性肤和/或蛋白质组合物的物理稳定性。在暗背景下采用锐 聚焦光进行组合物的目测。通过对浊度的程度进行排序的例如在0至3范围上的目测得分来 表征组合物的浊度（显示没有浊度的组合物对应于目测得分0,而在日光下显示可见浊度的 组合物对应于目测得分3)。当组合物在日光下显示可见浊度时，将该组合物归类为就蛋白 质聚集而言物理不稳定的。或者，可通过技术人员公知的简单浊度测量来评估组合物的浊 度。水性肤和/或蛋白质组合物的物理稳定性还可W通过使用该肤和/或蛋白质的构象状态 的光谱剂或探针来评估。该探针优选为优先与该肤和/或蛋白质的非天然构象异构体结合 的小分子。肤和/或蛋白质结构的小分子光谱探针的一个实例是硫代黄素 T。硫代黄素 T是已 经广泛用于检测淀粉样原纤维的巧光染料。在原纤维W及可能的其他肤和/或蛋白质构型 的存在下，硫代黄素 T当与原纤维肤和/或蛋白质形式结合时产生了在约450nm处的新的最 大激发和在约48化m处的增强的发射。未结合的硫代黄素 T在运些波长处基本上是非巧光 的。
[0267] 其他小分子可W用作肤和/或蛋白质结构从天然到非天然状态的变化的探针。例 如，优先与肤和/或蛋白质的暴露的疏水小片化ydrophobic patch)结合的"疏水小片"探 针。疏水小片通常掩埋在天然状态的肤和/或蛋白质的Ξ级结构内，但随着肤和/或蛋白质 开始展开或变性而变得暴露。运些小分子、光谱探针的实例是芳香族疏水性染料，诸如蔥、 叮晚、菲咯嘟等。
[0268] 可通过本文描述的试验（III)即ThT原纤维形成试验中的回收率和/或滞后时间来 确定所述衍生物的物理稳定性。在一个实施方案中，在本文描述的试验（III)中，物理稳定 的衍生物具有大于70%的回收率和/或大于7小时的滞后时间。
[0269] 在一个实施方案中，在化T原纤维形成试验如本文描述的试验（III)中，所述衍生 物具有大于70%的回收率。在一个实施方案中，在ThT原纤维形成试验如本文描述的试验 (III)中，所述衍生物具有大于90%如大于95%或大于98%的回收率。在一个实施方案中， 在化T原纤维形成试验如本文描述的试验(III)中，所述衍生物具有约100%的回收率。
[0270] 在一个实施方案中，在化Τ原纤维形成试验如本文描述的试验（III)中，所述衍生 物具有大于7小时如大于20小时或大于45小时的滞后时间。
[0271] 受体结合和效力
[0272] 本发明的衍生物是膜高血糖素受体激动剂。可将受体激动剂定义为与受体结合并 引起天然配体典型的响应的衍生物。在一个实施方案中，如本文使用的术语"膜高血糖素受 体"意指人膜高血糖素受体。
[0273] 在一个实施方案中，本发明的衍生物是膜高血糖素受体激动剂和/或具有膜高血 糖素受体活性。在一个实施方案中，本发明的膜高血糖素类似物是膜高血糖素受体激动剂 和/或具有膜高血糖素受体活性。在一个实施方案中，所述膜高血糖素肤是膜高血糖素受体 激动剂和/或具有膜高血糖素受体活性。术语"膜高血糖素受体活性"是指与膜高血糖素受 体结合并激活细胞内信号转导途径的能力，诸如激活腺巧酸环化酶和增加细胞内cAMP水 平，从而介导如本领域已知的生理效应。例如，可使用本文描述的试验（I)(b)或试验（II) (b)测试本发明的衍生物或类似物的膜高血糖素受体活性。
[0274] 在一个实施方案中，所述衍生物是膜高血糖素受体的激动剂，其EC50不大于 20化M。在一个实施方案中，所述衍生物是膜高血糖素受体的激动剂，如通过例如本文描述 的试验（I)(b)所测定的，其具有低于2(K)pM如低于l(K)pM或低于20pM的EC50。在另一个实施 方案中，所述衍生物是膜高血糖素受体的激动剂，如通过例如本文描述的试验（I)(b)所测 定的，其具有低于lOpM如低于5pm的EC50。
[0275] 在一个实施方案中，所述衍生物对化P-1受体的EC50与其对膜高血糖素受体的 EC50的比值为至少50,诸如至少100、1000或5000,其中可使用本文描述的试验（I) (a)和试 验（I) (b)测定所述效力（即EC50)。
[0276] 在一个实施方案中，如通过本文描述的试验（II)(b)所测定的，本发明的衍生物具 有低于1 OOnM如低于50nM、低于1 OnM或低于2nM的IC50。 脚7] 快速作用的衍生物
[0278] 在一个实施方案中，所述衍生物是快速作用的衍生物。在一个实施方案中，如本文 所用的"快速作用的衍生物"具有迅速起效的升血糖效应。在一个实施方案中，"快速作用的 衍生物"在皮下或肌肉内施用之后具有与膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)等同的升血糖效应的 起效。
[0279] 在一个实施方案中，快速作用的衍生物在皮下或肌肉内施用之后具有与人膜高血 糖素 (SEQ ID NO: 1)相比改善的生物利用度。
[0280] 溶解度
[0281] 本发明的衍生物可W是可溶的膜高血糖素受体激动剂。在一个实施方案中，所述 衍生物的溶解度为至少0. lmmol/1、至少0.2mmo 1/1或至少0.5mmol/l，诸如至少2mmol/l、至 少4mmol/l或至少8mmol/l，或诸如至少lOmmol/1或至少15mmol/l。在一个实施方案中，当与 本发明的衍生物结合使用时，术语"可溶的"、"溶解度"和"水溶解度"是指所述衍生物1)在 水中，或2)在水性盐或水性缓冲溶液例如lOmM憐酸盐溶液中，或3)在含有其他化合物的水 溶液中的溶解度，并且其中可在6.5至8.5如7.0至8.5或7.4至8.2范围内的抑下测定所述溶 解度。
[0282] 在一个实施方案中，可溶的衍生物在pH在7.0-8.5如7.4-8.2范围内的lOmM憐酸盐 溶液中具有至少0. lmmol/1的溶解度。
[0283] 在一个实施方案中，所述衍生物具有至少0. lmmol/1的溶解度。在一个实施方案 中，可在抑在7.4-8.2范围内的lOmM憐酸盐缓冲液中，在包含所述衍生物的组合物中测定所 述衍生物的溶解度。
[0284] 药物组合物
[0285] 在一个实施方案中，本发明设及一种包含本发明的衍生物W及一种或多种药学上 可接受的赋形剂的药物组合物。在一个实施方案中，该组合物适合于肠胃外施用，诸如SC、 IM或IV施用。术语"药物组合物"和"组合物"在本文中可互换使用。
[0巧6]可通过常规技术，例如如Remington's Pharmaceutical Sciences,1985或 Remington:The Science and Practice ofPharmacy,第19版，1995中所述，来制备含有本 发明的衍生物的药物组合物。
[0287] 在一个实施方案中，本发明设及一种包含本发明的衍生物的药物组合物，其中所 述衍生物W约0 . Olmg/mL至约25mg/mL，诸如约0.05mg/mL至约5mg/mL和约0 . Img/mL至约 2mg/mL的浓度存在，并且其中所述组合物具有2.0至10.0的pH。该药物组合物可包含本发明 的衍生物，其中所述衍生物W约0.0 lmg/mL至约50mg/mL的浓度存在，并且其中所述组合物 具有2.0至10.0的抑。
[0288] 在一个实施方案中，所述药物组合物包含本发明的衍生物的水溶液和缓冲液，其 中所述衍生物W〇.〇lmg/mL或W上的浓度存在，并且其中所述组合物具有约2.0至约10.0的 pH。在另一个实施方案中，所述药物组合物包含本发明的衍生物的水溶液和缓冲液，其中所 述衍生物W0.0 lmg/mL或W上的浓度存在，并且其中所述组合物具有约6.5至约8.5的pH。
[0289] 在一个实施方案中，本发明的组合物具有约2.0至约10.0的抑。在另一个实施方案 中，该组合物具有约6.5至约8.5的pH。在进一步的实施方案中，该组合物具有约7.0至约8.5 如约7.2至约8.2的pH。
[0290] 所述组合物可进一步包含缓冲系统、防腐剂、等渗剂、馨合剂、稳定剂和表面活性 剂。在一个实施方案中，所述药物组合物是水性组合物，即包含水的组合物。运样的组合物 通常是溶液或悬浮液。在本发明的进一步的实施方案中，所述药物组合物是水溶液。将术语 "水性组合物"定义为包含至少50 % w/w水的组合物。同样地，将术语"水溶液"定义为包含至 少50%w/w水的溶液。在一个实施方案中，所述组合物包含非水性有机溶剂。
[0291] 在另一个实施方案中，所述药物组合物是冷冻干燥的组合物，在使用之前例如由 医师或患者向其中添加溶剂和/或稀释剂。
[0292] 在另一个实施方案中，所述药物组合物是经干燥(例如冷冻干燥或喷雾干燥)的组 合物，W供在没有任何预先溶解的情况下使用。
[0293] 在一个实施方案中，本发明设及一种包含本发明的衍生物W及一种或多种其他活 性成分如化P-1、膜岛素或其类似物和/或衍生物的组合物。在一个实施方案中，本发明设及 一种包含本发明的衍生物W及化P-1或其类似物和/或衍生物的组合物。在一个实施方案 中，本发明设及一种包含本发明的衍生物W及膜岛素或其类似物和/或衍生物的组合物。包 含本发明的衍生物W及一种或多种其他活性成分的组合物可被称为"联合制剂（co- formulation)" 。在一个实施方案中 ，运样的联合制剂是物理稳定和 / 或化学稳定的组合物。
[0294] 本发明的衍生物在中性pH下可W溶解运一事实可W允许获得具有膜岛素的联合 制剂，并允许更稳定的血糖水平和次数减少的低血糖发作，w及降低的糖尿病相关并发症 的风险。
[02巧]药物施用
[0296] 本发明的衍生物可W肠胃外施用于患者。该衍生物的施用途径可W是肌肉内 (IM)、皮下（SC)或静脉内（IV)。推荐由医师选择将向患者施用的包含本发明衍生物的组合 物的剂量。
[0297] 可通过借助于注射器(任选地，笔状注射器)进行的皮下、肌肉内、腹膜内或静脉内 注射进行肠胃外施用。在一个实施方案中，可W使用包含本发明衍生物的组合物W备使用 笔装置进行膜高血糖素施用。或者，可借助于输注累进行肠胃外施用。在一个实施方案中， 可W在用于膜高血糖素施用的累中使用包含本发明衍生物的组合物。肠胃外施用可W是经 鼻施用。作为其他选择，含有本发明衍生物的膜高血糖素制剂还可W适于经皮施用，例如通 过无针注射或经由贴剂(任选地，离子电渗贴剂），或跨粘膜例如经颊施用。
[0298] 本发明的衍生物或组合物在根据本发明的方法中使用时的典型剂量在每日约 0.0001至约Img/kg体重，优选约0.001至约Img/kg体重，更优选约0.005至约0.02mg/kg体重 的范围内。如上所述，本发明的衍生物可与一种或多种附加的治疗活性化合物或物质联合 施用或使用，并且合适的附加化合物或物质可W选自，例如，抗糖尿病药、抗高血脂药、减肥 药、抗高血压药W及用于治疗由糖尿病引起或与糖尿病有关的并发症的药剂。
[0299] 合适的抗糖尿病药包括膜岛素、膜岛素衍生物或类似物、GLP-1(膜高血糖素样肤- 1)衍生物或类似物[诸如在W0 98/08871(Novo Nordisk A/S)中公开的那些，或其他化P-1 类似物如艾塞那肤（8761:1日,6111^;[117/411171;[]1;4\^0010,5日]1〇門-4￥6]11:13)、他泊鲁肤 (Taspoglutide) (Roche)、阿必鲁泰（A化iglutide) (Sync;ria,GlaxoSmithKline)]、膜淀素 (amyl in)、膜淀素类似物(例如Symlin/Praml intide似及口服活性降血糖药。
[0300] 药物适应证
[0301] 本发明还设及本发明的衍生物，其用于在医学中使用。在一个实施方案中，所述衍 生物用于治疗和/或预防低血糖。
[0302] 在一个实施方案中，本发明设及一种治疗和/或预防低血糖的方法，其包括向有需 要的患者施用治疗有效量的本发明的衍生物。
[0303] 在一个实施方案中，本发明的衍生物用于治疗或预防低血糖、膜岛素诱发的低血 糖、反应性低血糖、糖尿病性低血糖、非糖尿病性低血糖、空腹低血糖、药物诱发的低血糖、 胃旁路术诱发的低血糖、妊娠期低血糖、酒精诱发的低血糖、膜岛瘤和/或Von Girkes病。
[0304] 在一个实施方案中，本发明的衍生物用于抑制胃肠道的运动性，运对于使用诸如 X-射线、CT-和NMR-扫描等技术进行胃肠道的检查而言是有用的。
[0305] 在一个实施方案中，所述衍生物用于治疗β-阻滞剂中毒。在一个实施方案中，所述 衍生物用于治疗或预防肝脂肪变性。在一个实施方案中，所述衍生物用于治疗或预防低血 糖。在一个实施方案中，所述衍生物用于治疗或预防膜岛素诱发的低血糖。在一个实施方案 中，所述衍生物用于治疗或预防反应性低血糖。在一个实施方案中，所述衍生物用于治疗或 预防糖尿病性低血糖。在一个实施方案中，所述衍生物用于治疗或预防非糖尿病性低血糖。 在一个实施方案中，所述衍生物用于治疗或预防空腹低血糖。在一个实施方案中，所述衍生 物用于治疗或预防药物诱发的低血糖。在一个实施方案中，所述衍生物用于治疗或预防胃 旁路术诱发的低血糖。在一个实施方案中，所述衍生物用于治疗或预防妊娠期低血糖。在一 个实施方案中，所述衍生物用于治疗或预防酒精诱发的低血糖。在一个实施方案中，所述衍 生物用于治疗或预防膜岛瘤。在一个实施方案中，所述衍生物用于治疗或预防Von Girkes 病。
[0306] 在一个实施方案中，所述衍生物W提供治疗有效量的所述衍生物的剂量方案来施 用。如本文所用的，术语本发明衍生物的"治疗有效量"是指足W治愈、减轻或部分抑制给定 疾病和/或其并发症的临床表现的量。将足W实现该目标的量定义为"治疗有效量"。用于各 个目的的有效量将取决于疾病或损伤的严重性W及患者的体重和整体状况。将会理解，可 通过构建值的矩阵并测试该矩阵中的不同的点，使用常规实验来确定合适的剂量，所有运 些均在受过训练的医师或兽医的普通技术水平之内。
[0307] 如本文使用的术语"治疗"、"处理"及其其他变型是指为了对抗状况如疾病或病症 的目的而对患者的管理和照护。该术语意在包括对患者正在罹患的给定状况的全范围的治 疗，诸如施用所讨论的活性化合物W减轻其症状或并发症，W延缓疾病、病症或状况的进 展，W治愈或消除疾病、病症或状况，和/或W预防状况，其中预防应理解为为了对抗疾病、 状况或病症的目的而对患者的管理和照护，并且包括施用所讨论的活性化合物W预防症状 或并发症的发作。待治疗的患者优选为哺乳动物，尤其是人，但诸如狗、猫、牛、马、绵羊、山 羊或猪等其他动物的治疗也在本发明的范围内。
[0308] 在标题为"特定实施方案"的部分中描述了本发明衍生物的另外的特定实施方案。
[0309] 特定实施方案
[0310] W下是本发明的非限制性特定实施方案：
[0311] 1.-种包含式I的膜高血糖素类似物的衍生物，或所述衍生物的药学上可接受的 盐、酷胺或醋：
[0312] Imp_X2_His_Gly_Thr_Phe_Thr_Ser_Asp_Xio_Ser_Xi2_Tyr_Leu_Xi5_Xi6_Ar 邑 _Ar 邑一 Ala-X2〇-X2 广陆 e-Val-X24-T 巧-Leu-X27-X28-X29-X3〇[I]
[0313] 其中
[0314] X2 为 Ser 或 Aib;
[0；315] Xi 日为 Tyr、Leu、Ile 或化 1;
[0；316] Xi2 为 Lys 或 Arg;
[0317] X 化为 Asp 或 Glu;
[0318] Xi6 为 56'、41日、1^611、1'虹、4化、116、化1或1^73;
[0319] X2 日为 Gln、Glu、Aib 或 Lys;
[0320] X21 为 Asp、Glu 或 Lys;
[0321] X24 为 6111、41日、6111、4化或1^73;
[0322] X27 为 161、1^611或化1;
[0323] X28 为 Asn'Ser、!'虹、Gln、Ala、Gly、Glu 或 Lys;
[0324] X29 为 Τ'虹、617、56'、6111、41日、6111或1^73;并且 [03巧]Χ30不存在或为Lys;
[0326] 并且其中所述衍生物包含与在式1的位置《12^16心2日^21心24^28心2减乂3日处的赖 氨酸的侧链的氮原子共价连接的取代基，
[0327]其中所述取代基具有式II:
[0；32 引 Y 广 Y2-Y3-Y4-Y 己-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y1广 Yi广[Π ]
[0329] 其中Yi为氨或表示C2-6酷基基团或班巧酷基部分，并且
[0330] 其中Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y8、村、Yl()、Yl域Yl2单独地不存在或单独地表示选自Ser残 基、Ala残基、Gly残基、式i、式ii、式iii、式iv和式V的氨基酸残基：
[0331]
[0332] 其中式和iv单独地具有立体化学L或D，
[0333] 并且条件是所述取代基具有Ξ至十个带负电荷的部分。
[0334] 2.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述膜高血糖素类似物由式I 组成。
[0335] 3.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述膜高血糖素类似物或衍生 物不包含添加至X30的C-末端上的氨基酸残基。
[0336] 4.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述衍生物为所述衍生物的药 学上可接受的盐、酷胺或醋。
[0337] 5.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述膜高血糖素类似物与膜高 血糖素 (SEQ ID NO: 1)相比在所述膜高血糖素类似物中包含3-15个氨基酸残基修饰，如置 换或添加。
[033引6.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述衍生物与膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)相比在所述膜高血糖素类似物中包含最多14个如最多13个或最多12个氨基酸残 基修饰，如置换或添加。
[0339] 7.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述膜高血糖素类似物与膜高 血糖素 (SEQ ID NO: 1)相比在所述膜高血糖素类似物中包含最多11个如最多10个或最多9 个氨基酸残基修饰，如置换或添加。
[0340] 8.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述膜高血糖素类似物与膜高 血糖素 (SEQ ID NO: 1)相比在所述膜高血糖素类似物中包含最多8个如最多7个或最多6个 氨基酸残基修饰，如置换或添加。
[0%1] 9.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X2为Ser。
[0342] 10.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X10为Tyr。
[0343] 11.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X12为Lys。
[0344] 12.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X15为Asp。
[0345] 13.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X16为Ser。
[0346] 14.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X20为Gin。
[0347] 15.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X21为Asp。
[0348] 16.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X24为Gin。
[0349] 17.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X27为Met。
[0350] 18.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X28为Asn。
[0351] 19.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X29为化r。
[0352] 20.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X30不存在。
[0353] 21.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X2为Aib。
[0354] 22.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中Xi日为Leu。
[03W] 23.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中Xi5为Glu。
[0356] 24.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中Xi6为Leu。
[0357] 25.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中Xi6为化1。
[035引26.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X20为Lys。
[0359] 27.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X21为Glu。
[0360] 28.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X24为Lys。
[0361] 29.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X24为Ala。
[0362] 30.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X27为Leu。
[0363] 31.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X28为Ser。
[0364] 32.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X28为Lys。
[0365] 33.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中X29为Lys。
[0366] 34.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中Y12与在所述衍生物的位置 Xl2、Xl6、X2日、X21、X24、X28、拉减X3日处的赖氨酸的侧链的所述氮原子连接。
[0367] 35.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述取代基与赖氨酸的侧链 的ε-氮原子共价连接。
[0368] 36.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述取代基与在位置Χ?2、Χ?6 或拉0处的赖氨酸连接。
[0369] 37.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述取代基与在位置Χ2?、Χ24 或拉8处的赖氨酸连接。
[0370] 38.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述取代基与在位置Χ29或Χ30 处的赖氨酸连接。
[0371] 39.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述取代基与在位置Χ24处的 赖氨酸连接。
[0372] 40.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述取代基具有3、4、5、6、7、 8、9或10个带负电荷的部分。
[0373] 41.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述取代基包含3-10个如3-5 个或4个式i的残基。
[0374] 42.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述取代基的Yi为乙酷基基 团。
[0375] 43.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述取代基选自W下部分：
[0376]
ο
[0377]
[0378] 44.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述取代基为W下部分：
[0379]
[0380] 45.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述衍生物选自：
[0381] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，Aib2，His3，Leul6， Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0382] 化学式1:
[0383]
[0384] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，Aib2，His3，Glul5， Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0385] 化学式2:
[0386]
[0387] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，Aib2，His3，LeulO， Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[038引化学式3:
[0389]
[0390] 妒28-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，Aib2，His3，Glul5， Ala24，Leu27，Lys28 ]-膜高血糖素
[0391] 化学式4:
[0392]
[0393] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Lys24, Leu27，Ser28 ]-膜高血糖素
[0394] 化学式5:
[0395]
[0396] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Glu21, Lys24，Leu27，Ser2引-膜高血糖素
[0397] 化学式6:
[039引
[0399] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，Aib2，His3，Glul5， Glu21，Lys24，Leu27，Ser28 ]-膜高血糖素
[0400] 化学式7:
[0401]
?V
[0402] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl ,His3,Leul6,Glu21, Lys24，Leu27，Ser2引-膜高血糖素
[0403] 化学式8:
[0404]
[0405] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Leul6，Lys24, Leu27，Ser28 ]-膜高血糖素
[0406] 化学式9:
[0407]
[040引妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，Aib2，His3，Vall6， Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0409] 化学式10:
[0410]
5·
[0411] Nel6-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4义酷氨基-4-簇基T酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Lysl6， Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0412] 化学式11:
[0413]
[0414] 妒2〇-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Lys20, Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[041引化学式12:
[0416]
[0417] 妒21-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Lys21, Leu27，Ser28 ]-膜高血糖素
[0418] 化学式13:
[0419]
[0420] 妒28-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Glu21, Leu27，Ly s28 ]-膜高血糖素
[0421] 化学式14:
[0422]
[0423] 妒29-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Glu21, Leu27，Ser28，Lys29]-膜高血糖素
[0424] 化学式15:
[04 巧]
[04%]沪（[Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素基）-^(45)-4-[[(45)- 4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]氨基]-4-簇基下酷基]Lys
[0427] 化学式16:
[0428]
[0429] 46.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述衍生物选自
[0430] n"4-[2-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨 基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]乙酷基]-[Impl， His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0431] 化学式17:
[0432]
[0433] νε24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]氨基]-4-簇基下酷基]-[1111口1，化33,611115,611121，1^7324，1^61127,56的8]-膜高血糖素
[0434] 化学式18:
[0435]
[0436] n"4-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷 基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[1111口1，化33,611115,611121，1^7324，1^61127,56^8]-膜高血糖素
[0437] 化学式19:
[0438]
[0439] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Alal6，Lys24, Leu27，Ser28 ]-膜高血糖素
[0440] 化学式20:
[0441]
[0442] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Aibl6，Lys24, Leu27，Ser2引-膜高血糖素
[0443] 化学式21:
[0444]
[0445] W及
[0446] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Glu21, Lys24，Leu27，Glu28]-膜高血糖素
[0447] 化学式22:
[044引
[0449] 47.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述膜高血糖素类似物不包 含C-末端酷胺。
[0450] 48.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述衍生物是膜高血糖素受 体的激动剂，其EC50不大于20化M。
[0451] 49.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述衍生物在化T原纤维形成 试验如本文描述的试验(III)中具有大于70 %的回收率。
[0452] 50.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述衍生物在化T原纤维形成 试验如本文描述的试验(III)中具有大于7小时的滞后时间。
[0453] 51.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述衍生物具有如通过本文 所述的试验(IV)测定的小于5%的化学降解。
[0454] 52.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述衍生物具有至少 O.lmmoVl的溶解度。
[0455] 53.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述溶解度可在抑在7.4-8.2 范围内的lOmM憐酸盐缓冲液中在包含所述衍生物的组合物中测定。
[0456] 54.根据前述实施方案中任一个所述的衍生物，其中所述衍生物对化P-1受体的 EC50效力与其对膜高血糖素受体的EC50效力的比值至少为50,其中所述效力可使用本文描 述的试验（I)(a)和试验（I)(b)来测定。
[0457] 55. -种膜高血糖素类似物形式的中间产物，或其药学上可接受的盐、酷胺或醋， 该中间产物与膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)相比包含W下修饰：
[045引（i) [ Impl，Aib2，His3，Leul6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0459] (ii) [Impl，Aib2，His3，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0460] (iii)[ Impl, Aib2，His3，LeulO，Glul5，Lys24, Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0461 ] (iv) [ Impl，Aib2，His3，Glul5，Ala24，Leu27，Lys28]-膜高血糖素；
[0462] (V) [ Impl，His3，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0463] (vi)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0464] (vii)[Impl，Aib2，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[04化](viii)[ Impl，His3，Leul6，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0466] (ix) [ Impl，His3，Leul6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0467] (X) [ Impl，Aib2，His3，化116，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0468] (xi)[Impl，His3，Glul5，Lysl6，Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0469] (xii) [Impl，His3，Glul5，Lys20，Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0470] (xiii) [Impl，His3，Glul5，Lys21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0471] (xiv) [Impl, His3，Glul5，Glu21，Leu27，Lys28]-膜高血糖素；
[0472] (XV) [ Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28，Lys29]-膜高血糖素；
[0473] (xvi) [ Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28，Lys30]-膜高血糖素。
[0474] 56. -种膜高血糖素类似物形式的中间产物，或其药学上可接受的盐、酷胺或醋， 该中间产物与膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)相比包含W下修饰：
[04 巧](xvii)[Impl，His3，Alal6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0476] (xviii)[Impl，His3，Aibl6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0477] (xix)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Glu28]-膜高血糖素。
[0478] 57.根据前述实施方案中任一个所述的中间产物，或其药学上可接受的盐、酷胺或 醋，其中所述膜高血糖素类似物选自W下膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)类似物：
[04巧](i-a) [ Impl，Aib2，His3，Leul6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0480] (ii-a) [ Impl，Aib2，His3，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0481 ] (iii-a) [Impl，Aib2，His3，LeulO，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0482] (iv-a) [ Impl，Aib2，His3，Glul5，Ala24，Leu27，Lys28]-膜高血糖素；
[0483] (v-a) [ Impl，His3，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0484] (vi-a) [ Impl，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[04 化](vii-a)[Impl，Aib2，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[04 化](viii-a)[Impl，His3，Leul6，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0487] (ix-a) [ Impl，His3，Leul6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0488] (x-a) [ Impl，Aib2，His3，化116，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0489] (xi-a)[Impl，His3，Glul5，Lysl6，Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0490] (xii-a) [ Impl，His3，Glul5，Lys20，Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0491 ] (xiii-a) [ Impl，His3，Glul5，Lys21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0492] (xiv-a)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Lys28]-膜高血糖素；
[0493] (xv-a) [ Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28，Lys29]-膜高血糖素；
[0494] (xvi-a) [ Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28，Lys30]-膜高血糖素。
[04M] 58.根据前述实施方案中任一个所述的中间产物，或其药学上可接受的盐、酷胺或 醋，其中所述膜高血糖素类似物选自W下膜高血糖素 (SEQ ID NO: 1)类似物：
[0496] (xvii)[Impl，His3，Alal6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0497] (xviii)[Impl，His3，Aibl6，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素；
[0498] (xix)[Impl，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Glu28]-膜高血糖素。
[0499] 59.-种组合物，其包含如前述实施方案中任一个所述的衍生物W及一种或多种 药学上可接受的赋形剂。
[0500] 60.如前述实施方案中任一个所述的衍生物，其用于在医学中使用。
[0501] 61.根据实施方案60所述的衍生物，其用于治疗和/或预防低血糖。
[0502] 62.-种治疗和/或预防低血糖的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗有效 量的如前述实施方案中任一个所述的衍生物。
[0如引实施例
[0504]参考W下实施例进一步说明本发明，运些实施例并非旨在W任何方式限制所请求 保护的本发明的范围。
[0如引缩写列表
[0如6] B0C:叔下氧幾基
[0如7] DCM:二氯甲烧
[0如引 DIC:二异丙基碳二亚胺
[0如9] Fmoc:9-巧基甲氧幾基
[051日]册41:1-径基-7-氮杂苯并^挫
[051" HPLC:高效液相色谱法
[051^ LCMS:液相色谱质谱法
[051引 MeCN:乙腊
[0514] Min:分钟
[0515] 甲基Ξ苯甲基
[0516] NMP:N-甲基化咯烧酬
[0517] Oxyma化re:氯基-径基亚氨基-乙酸乙醋 [051引 RP:反相
[化19] RP-HPLC:反相高效液相色谱法
[0520] RT:室溫
[0521] Rt:保留时间 邮剖 SPPS:固相肤合成
[0523] TFA:S氣乙酸
[0524] TIPS 异丙基硅烷
[化巧]UPLC:超高效液相色谱法
[0526] 10ΕΕ:10的幕(例如"10ΕΕ(ΧΓ指数字10的幕(X)或简化为数字lO?，即5Χ10ΕΕ3为 5x10^) 腑7] 通用方法
[0528]该章节设及用于合成树脂结合的肤的方法(SPI^法，其包括氨基酸脱保护方法、用 于从树脂上切割肤的方法和肤纯化方法似及用于检测和表征所得肤的方法化CMS和UPLC 法)。
[化巧]SPPS通用方法
[0530] 该章节设及固相肤合成方法(SPI^法，其包括氨基酸脱保护方法、用于从树脂上切 割肤的方法和肤纯化方法）W及用于检测和表征所得肤的方法化CMS和UPLC法）。所使用的 Fmoc保护的氨基酸衍生物为W下推荐的标准品：由例如Anaspec、Bachem、I;ris Biotech或 Novabiochem提供的Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asn(T;rt)-OH、Fmoc-Asp (化邮）-(^^1]1〇(3-切3(化1:)-0山化〇(3-61]1(化1:)-0山化〇(3-6111(011311)-(^少1]1〇(3-617-細、 Fmoc-His(Trt)-〇H、Fmoc-Ile-〇H、Fmoc-Leu-〇H、Fmoc-Lys(Boc)-〇H、Fmoc-Met-〇H、Fmoc- Tyr(tBu)-〇H或Fmoc-Val-OH等。当没有其他指定时，使用氨基酸的天然k形式。使用3-(N- 1苯甲基-咪挫-4-基)-丙酸来引入N-末端Imp。
[0531] 该章节"SPI^通用方法"中W下所述的所有操作在ΙΟΟ-μ mol合成规模下进行。
[0532] 用于制备C-末端簇酸的合适的树脂是预加载有氨基酸的Wang树脂，如Fmoc-Thr (tBu)-Wang树脂(低负载，0.35mmol/g)。在取代基与C-末端赖氨酸连接的情况下，合适的树 脂是预加载的fmoc-Lys (Mtt) -Wang。
[05削在100-μηιο1规模下，使用相对于树脂负载例如低负载Fmoc-Gly-Wang(0.35mmol/ g)六倍过量的Fmoc-氨基酸（在含有300mM HOAt或OxymaPii化愈的匪P中300mM)，在来自 Protein Technologies (Tucson ,ΑΖ 85714U. S.A.)的Prelude 固相肤合成仪上进行SPPS。义 用在NMP中的20 %赃晚进行Fmoc脱保护。使用在NMP中的3:3:3:4氨基酸/Oxymapure婚/DIC/ Ξ甲基化晚进行偶联。在脱保护与偶联步骤之间进行NMP和DCM顶部洗涂(各2x 2)。偶联时 间通常为60或120分钟。将一些氨基酸"双偶联"，意味着在第一次偶联之后，排空树脂并添 加更多试剂(氨基酸、化OAt或OxymaPure?)、DIC和Ξ甲基化晚），并使混合物再次反应。
[0534] 取代基与树脂结合的受保护的肤骨架的连接
[0535] 用Mtt保护待酷化的赖氨酸的ε氨基基团。通过用六氣异丙醇/DCM(75:25,5x 20ml，各lOmin)处理然后如W上在"SPI^通用方法"章节中所述洗涂来进行化t脱保护。
[化36] 如上所述使用化oc-Glu-〇tBu或结构单元通过一个或多个自动化步骤在Prelude 肤合成仪上进行赖氨酸的化学修饰。W每次偶联120分钟的反应时间进行双偶联。使用乙酸 酢实现乙酷化。
[化別从树脂上切割
[053引在合成后用DCM洗涂树脂，并且通过用TFA/TIS/水(95/2.5/2.5)处理2-3小时将肤 从树脂上切割下来，随后用二乙酸沉淀。用二乙酸洗涂沉淀物。
[化例纯化和定量
[0540] 将粗肤溶解于水和MeCN的适当混合物如水/MeCN(9:1)中，并在含有C18-硅胶的柱 上通过反相制备型册LC( Waters Del taprep 4000或Gil son)进行纯化。采用逐渐增加的 MeCN在含有0.1 % TFA的水中的梯度进行洗脱。通过分析型HPLC或UPLC检查相关级分。将含 有纯祀肤的级分混合并减压浓缩。分析化PLC，LCMS)所得溶液，并使用化学发光氮特异性 HPLC检测器(Antek 8060HPLC-化ND)或通过测量280皿处的UV吸收对产物进行定量。将产物 分配至玻璃小瓶中。给该小瓶盖上Millipore玻璃纤维预滤器。冷冻干燥得到呈白色固体的 肤Ξ氣乙酸盐。
[0541 ] 检测和表征方法
[0542] 方法：LCMS01
[0543]
[0544] 方法:UPLC01
[0549] 实施例1
[0550] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，Aib2，His3，Leul6， Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0巧1] 化学式1:
[0552]
[ο 巧 3] UPLC01:IU = 10.2min
[Ο巧4] LCMSO1: lU = 1.99min;计算111八=4014.3;实测m/^3 = 1339;实测111/4 = 1004;实测111/ 5 = 803
[0巧5] 实施例2
[0556]妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，Aib2，His3，Glul5， Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素 [0巧7] 化学式2:
[055引
[0559] UPLC02:IU = 6.3min
[化 60] LCMS01:化=1.75min;计算111八=4002.3;实测m/^3 = 1335;实测111/4 = 1001;实测111/ 5 = 801
[0561] 实施例3
[0562] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，Aib2，His3，LeulO， Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0563] 化学式3:
[化 64]
[05 化]UPLC02:IU = 6.7min
[0566] LCMS01: Rt = 1.8min;实测 m/1 = 3952.3;实测 m/3 = 1318;实测 m/4 = 989;实测 m/5 = 791
[0567] 实施例4 邮6引妒28-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，Aib2，His3，Glul5， Ala24，Leu27，Lys28 ]-膜高血糖素 [0569] 化学式4:
[0570]
[0571] UPLC02:IU = 6.2min
[0572] LCMSO1: Rt = 1.7min;计算111八=3986.3;实测m/^3 = 1329;实测111/4 = 997;实测111/5 = 798
[0573] 实施例5
[0574] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Lys24, Leu27，Ser28 ]-膜高血糖素
[化巧]化学式5:
[0576]
[0577] UPLC01:IU = 9.2min
[057引 LCMS01:化=1.8min;计算m/z = 4004.2;实测m/^3 = 1336;实测111/4= 1002;实测111/5 = 801
[0579] 实施例6
[0580] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Glu21, Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0581 ] 化学式6:
[0582]
[0583] UPLC01:IU = 9.4min
[化 84] LCMS01:化=1.82min;计算111八=4018.3;实测m/^3 = 1340;实测111/4 = 1005;实测111/ 5 = 804
[化化]实施例7
[0586] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，Aib2，His3，Glul5， Glu21，Lys24，Leu27，Ser28 ]-膜高血糖素
[0587] 化学式7:
[化8引
[0589] UPLC02:IU = 6.4min
[0590] LCMS01:化=1.7min;计算m/z = 4016.3;实测m/^3 = 1339;实测111/4= 1005;实测111/5 = 804
[0591 ] 实施例8
[0592] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl ,His3,Leul6,Glu21, Lys24，Leu27，Ser2引-膜高血糖素
[0593] 化学式8:
[0594]
[0595] UPLC01:IU = 10.8min
[0596] LCMSOl: lU = 1.9min;计算m/z = 4030.3;实测m/^3 = 1344;实测111/4= 1008;实测111/5 = 807
[0597] 实施例9
[059引妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Leul6，Lys24, Leu27，Ser28 ]-膜高血糖素 [0599] 化学式9:
[0600]
[0601 ] UPLC01:IU = 10.5min
[0602] LCMSOl: lU = 1.9min;计算m/z = 4016.3;实测m/^3 = 1340;实测111/4= 1005;实测111/5 = 804
[0603] 实施例10
[0604] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，Aib2，His3，Vall6， Lys24，Leu27，Ser2引-膜高血糖素
[0605] 化学式10;
[0606]
[0607] UPLC01:IU = 10.3min
[060引 LCMS01:化=1.9min;计算m/z = 4000.3;实测m/^3 = 13：34;实测111/4= 1001;实测111/5 = 801
[0609] 实施例11
[0610] Nel6-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Lysl6， Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[061" 化学式11:
[0612]
[0613] UPLC02:IU = 6.4min
[0614] LCMS01:化=3. Imin;计算m/z = 4059.3;实测m/^3 = 1354;实测111/4 = 1015;实测111/5 = 812
[061引实施例12
[0616] 妒2<>-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Lys20, Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0617] 化学式12:
[061 引
[0619] UPLC02:IU = 6.4min
[0620] LCMS01:化=3.2min;计算m/z = 4018.3;实测m/^3 = 1340;实测111/4= 1005;实测111/5 = 804
[062。 实施例13
[0622] 妒21-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Lys21, Leu27，Ser2引-膜高血糖素
[0623] 化学式13:
[0624]
[0625] UPLC01:IU = 9.5min
[0626] LCMS01:化=3. Imin;计算m/z = 4017.3;实测m/^3 = 1340;实测111/4= 1005;实测111/5 = 804
[0627] 实施例14
[062引妒28-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Glu21, Leu27，Lys2引-膜高血糖素
[0629] 化学式14:
[0630]
[0631] UPLC02:IU = 6.2min
[0632] LCMSOl: lU = 3.2min;计算m/z = 4059.3;实测m/^3 = 1354;实测111/4= 1015;实测111/5 = 812
[0633] 实施例15
[0634] N。9-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4义酷氨基-4-簇基T酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Glu21， Leu27，Ser28，Lys29]-膜高血糖素 [06对化学式15:
[0636]
[0637] UPLC01:IU = 9.4min
[063引 LCMS01:IU = 4.1min;计算 m/z = 4045.3;实iim/3 = l：M9;实iim/4=1012;实测 m/5 = 810
[0639] 实施例16
[0640] 沪（[Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28]-膜高血糖素基）-N{Epsilon}[(4S)- 4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]- 4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]Lys
[0641 ] 化学式16:
[0642]
[0643] UPLC01:IU = 9.2min
[0644] LCMSOl:lU = 4. Imin;计算m/z = 4146.4;实测m/^3 = 1383;实测111/4= 1037;实测111/5 = 830
[0645] 实施例17
[0646] n"4-[2-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨 基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]乙酷基]-[Impl， His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]-膜高血糖素
[0647] 化学式17:
[064引
[0649] UPLC01:IU = 9.6min
[0化0] LCMS01: Rt = 1.8min;计算m/z = 4075.3;实测ι?Λ = 1359.7;实测m/4 = 1020.0;实 iim/5 = 816.2 [0651] 实施例18
[0化2]妒24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]氨基]-4-簇基下酷基]-[1111口1，化33,611115,611121，1^7324，1^61127,56的8]-膜高血糖素 [0化3] 化学式18:
[0 化4]
[0化5] UPLC01:IU = 9.8min
[0 化 6] LCMS01:化=1.8min;计算m/z = 3889.2;实测m/^3 = 1297.3;实测111/4 = 973.2;实测 m/5 = 1178.8 [0化7] 实施例19
[Ο化引 ν"4-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷 基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷 基]-[1111口1，化33,611115,611121，1^7324，1^61127,56^8]-膜高血糖素 [0化9] 化学式19:
[0660]
[0661 ] UPLC01:IU = 9.8min
[0662] LCMS01: Rt = 1.8min;计算 m/z = 4147.4;实测 ι?Λ = 1383.4;实测 m/4 = 1037.7;实 iim/5 = 830.4
[0663] 实施例20
[0664] N。4-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酷氨基-4-簇基T酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Alal6，Lys24， Leu27，Ser2引-膜高血糖素
[06化]化学式20;
[0666]
[0667] UPLC01:IU = 10.2min
[066引 LCMS01:化=1.9min;计算m/z = 3974.2;实测m/^3 = 1325.6;实测111/4 = 994.5;实测 m/5 = 795.8
[0669] 实施例21
[0670] N。4-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酷氨基-4-簇基T酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Aibl6，Lys24， Leu27，Ser2引-膜高血糖素
[0671] 化学式21:
[0672]
[0673] UPLC01:IU = 10.6min
[0674] LCMSOl: lU = 2. Omin;计算m/z = 3988.2;实测m/^3 = 1330.0;实测111/4 = 998.0;实测 m/5 = 798.6
[06巧]实施例22
[0676] 妒24-[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-[[(45)-4-乙酷氨基-4-簇基下酷基]氨基]-4- 簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]氨基]-4-簇基下酷基]-[Impl，His3，Glul5，Glu21, Lys24，Leu27，Glu28]-膜高血糖素
[0677] 化学式22:
[067引
[0679] UPLC01:IU = 10.0min
[0680] LCMS01: Rt = 1.8min;计算m/z = 4060.3;实测ι?Λ = 1354.3;实测m/4 = 1016.0;实 iim/5 = 813.0
[0681 ]试验(I) :GLP-1和膜高血糖素受体效力
[0682] 本试验的目的在于测试本发明的衍生物的体外活性或效力。在全细胞试验中，体 外效力分别是人GLP-1受体和/或膜高血糖素受体激活的量度。
[0683] 原理
[0684] 通过在报道基因试验中分别测量人化P-1或膜高血糖素受体的响应来测定体外效 力。在稳定转染的BHK细胞系中进行该试验，该细胞系表达人GLP-1受体或人膜高血糖素受 体，并且包含与启动子偶联的cAMP响应元件（CRE)的DNAW及蛋火虫蛋光素酶(CRE蛋光素 酶）的基因。当分别激活人化P-1或膜高血糖素受体时，导致cAMP的产生，运转而导致蛋光素 酶蛋白质被表达。当完成测定溫育时，添加蛋光素酶底物(蛋光素），并且该酶将蛋光素转化 为氧化蛋光素并产生生物发光。测量发光作为该试验的读出。
[0685] (a)GLP-l 受体激活
[0686] 细胞培养和准备
[0687] 本试验中使用的细胞(克隆FCW467-12A/KZ10-1)为肌K细胞，WB皿TS13作为亲本 细胞系。该细胞来源于表达人化P-1受体的克隆(FCW467-12A)，并且通过用CRE蛋光素酶进 一步转染w获得当前的克隆而建立。
[068引 将细胞在5%C02下在含有 10%FBS、lxGlutaMAX、lmg/mL G418、240nM MTX(甲氨蝶 岭)和l%pen/strep(青霉素/链霉素)的DMEM培养基中培养。对细胞进行等分并储存在液氮 中。在每次测定之前，取出等份并将其在PBS中洗涂Ξ次，然后W所需浓度悬浮于测定缓冲 液中。对于96孔板，制备悬浮液W得至化X10EE3个细胞/孔的最终浓度。材料
[0689] 在该试验中使用W下化学品：Pluronic F-68( 10% ) (Gibco 2404)、卵清蛋白 (Sigma A5503)、不含酪红的DMEM(G化CO 11880-028)、1M Hepes(G化CO 15630)、Glutamax 100x(Gibco 35050)和steadylite plus(Perki址Imer 6016757)。
[0690] 测定培养基由不含酪红的DMEM、10mM Hepes、lx GlutaMAX、2%卵清蛋白和0.2% Pluronic F-68组成。
[0691 ] 程序
[0692 ]将细胞储备物在37 °C水浴中解冻。将细胞在PBS中洗涂Ξ次。对细胞进行计数并调 整到在测定培养基中5x10邸3个细胞/5化1(1x10邸5个细胞/mL)。将细胞的50μ1等份转移至 测定板的每个孔中。
[0693] 将测试化合物和参考化合物的储备物在测定培养基中稀释至0.2μΜ的浓度。将化 合物稀释10倍W得到W下浓度：2χ10邸-6Μ、2χ10邸-7Μ、2χ10趾-8Μ;2χ10邸-9Μ、2χ10邸- 101、2^1066-1謹、2^10邸-121和社10趾-131。对于每种化合物，还包括空白测定缓冲液对 照。
[0694] 将化合物或空白的50μ1等份从稀释板转移至测定板中。在W下最终浓度下测试化 合物：lxl0EE-6M、lxl0EE-7M、lxl0EE-8M;lxl0EE-9M、lxl0EE-10M、lxl0邸-llM和lxl0邸- l2M和lxl0邸-13M。
[06巧]沿7C下将测定板在5%C02培养箱中溫前h。从培养箱中取出测定板并使其在室 溫下静置15min。将steadylite plus试剂的10化1等份添加至该测定板的每个孔中（试剂是 光敏性的）。用侣锥覆盖每个测定板W使其避光，并在室溫下摇动30min。在Packard TopCountNXT仪器中读取每个测定板。
[0696] 计算
[0697] 将来自TopCount仪器的数据转移至GraphPad Prism软件。该软件进行非线性回归 (log(激动剂)相对于响应-可变斜率（四参数））。通过该软件计算EC50值并WpM为单位记 5? 〇 幽](b)膜高血糖素受体激活
[0699] 细胞培养和准备
[0700] 本试验中使用的细胞(克隆pLJ6'-4-25)为BHK细胞，WBHK570作为表达CRE蛋光素 酶基因的亲本细胞系(克隆BHK/KZ10-20-48)，并通过用人膜高血糖素受体进一步转染而建 立(在P监-1载体中的克隆pLJ6'）。
[0701] 将细胞在5%C02下在含有 10%FBS、lxGlutaMAX、lmg/mL G418、240nM MTX(甲氨蝶 岭)和l%pen/strep(青霉素/链霉素)的DMEM培养基中培养。对细胞进行等分并储存在液氮 中。在每次测定之前，取出等份并将其在PBS中洗涂Ξ次，然后W所需浓度悬浮于测定缓冲 液中。对于96孔板，制备悬浮液W得至化X10EE3个细胞/孔的最终浓度。材料
[0702] 在该试验中使用W下化学品：Pluronic F-68( 10% ) (Gibco 2404)、卵清蛋白 (Sigma A5503)、不含酪红的DMEM(G化CO 11880-028)、1M Hepes(G化CO 15630)、Glutamax 100x(Gibco 35050)和steadyliteplus(Perki址Imer 6016757)。
[0703] 测定培养基由不含酪红的DMEM、10mM Hepes、lx GlutaMAX、2%卵清蛋白和0.2% Pluronic F-68组成。
[0704] 程序
[0705] 将细胞储备物在37 °C水浴中解冻。将细胞在PBS中洗涂Ξ次。对细胞进行计数并调 整到在测定培养基中5x10邸3个细胞/5化1(1x10邸5个细胞/mL)。将细胞的50μ1等份转移至 测定板的每个孔中。
[0706] 将测试化合物和参考化合物的储备物在测定培养基中稀释至0.2μΜ的浓度。将化 合物稀释10倍W得到W下浓度：2χ10邸-6Μ、2χ10邸-7Μ、2χ10趾-8Μ;2χ10邸-9Μ、2χ10邸- 101、2^1066-1謹、2^10邸-121和社10趾-131。对于每种化合物，还包括空白测定缓冲液对 照。
[0707] 将化合物或空白的50μ1等份从稀释板转移至测定板中。在W下最终浓度下测试化 合物：lxl0EE-6M、lxl0EE-7M、lxl0EE-8M;lxl0EE-9M、lxl0EE-10M、lxl0邸-llM和lxl0邸- l2M和lxl0邸-13M。
[070引在37Γ下将测定板在5%C02培养箱中溫育化。从培养箱中取出测定板并使其在室 溫下静置15min。将steadylite plus试剂的10化1等份添加至测定板的每个孔中（试剂是光 敏性的）。用侣锥覆盖每个测定板W使其避光，并在室溫下摇动30min。在Packard TopCountNXT仪器中读取每个测定板。
[0709] 计算
[0710] 将来自TopCount仪器的数据转移至GraphPad Prism软件。该软件进行非线性回归 (log(激动剂)相对于响应-可变斜率（四参数））。通过该软件计算EC50值并WpM为单位报 告。
[07川试验（II) :GLP-1和膜高血糖素受体结合
[0712] (a)GLP-l 受体结合
[0713] 本试验的目的在于测试本发明的膜高血糖素衍生物的体外受体结合活性。该受体 结合是化合物对人GLP-1受体的亲和力的量度。
[0714] 原理
[0715] 在置换结合试验中测量每种化合物与人GLP-1受体的受体结合。在运一类型的试 验中，使标记的配体(在运种情况下为125I-GLP-1)与受体结合。W-系列的浓度将每种衍 生物添加至含有人GLP-1受体的分离的膜中，并监测标记的配体的置换。将受体结合报告为 一半的标记的配体从受体上置换时的浓度，即I巧0值。
[0716] 材料
[0717] 在该试验中使用W下化学品：不含酪红的DMEM(Gibco 11880-028)、Pen/strep (Invitrogen 15140-122)、G418(Invitrogen 10131-027)、1M Η邱es(Gibco 15630)、EDTA (Invihogen 15575-038)、PBS(Invi1:;rogen 14190-094)、胎牛血清（Invitrogen 16140- 071)、EGTA、MgC12(Merck 1.05832.1000)、吐溫20(Amresco 0850C335)、SPA颗粒(麦胚凝集 素（WGA)SPA珠 ，Perkin Elmer RPNQ0001)、[125I]-GLP-l]-(7-36)NH2(内部生产的）、 0ptiPlateTM-96(Packard 6005290)〇
[071引缓冲液1由20mM Na-HE阳S加 lOmM邸ΤΑ组成，并且将抑调节至7.4。缓冲液2由20111]\1 船-皿阳巧日0.11111邸了4组成，并且将抑调节至7.4。测定缓冲液由5〇1111补充有5111]\166了4、5111]\1 MgCl2、0.005 %吐溫20的肥阳S组成，并且将pH调节至7.4。
[0719] 细胞培养和膜制备
[0720] 本试验中使用的细胞(克隆FCW467-12A)为B皿细胞，WB皿TS13作为亲代细胞系。 该细胞表达人GLP-1受体。
[07川使细胞在5%C02下在DMEM、10%胎牛血清、l%Pen/Strep(青霉素/链霉素）和 l.Omg/血选择标记G418中生长。为了进行膜制备，使细胞生长至约80%汇合。将细胞在憐酸 盐缓冲盐水中洗涂两次并收获。使用短暂离屯、使细胞沉淀，并将细胞沉淀物保持在冰上。在 适量的缓冲液1 (例如，lOmL)中，将细胞沉淀物用ULTRA-THURRAX分散仪器匀浆化20-30秒。 将匀浆离屯、15分钟。将沉淀物在lOmL缓冲液2中重悬（匀浆化)并离屯、。再一次重复该步骤。 将所得沉淀物重悬于缓冲液2中并测定蛋白质浓度。对膜进行等分并储存在-8(TC下。
[0722] 程序
[0723] 1.对于受体结合试验，将50μ1的测定缓冲液添加至测定板的每个孔中。
[0724] 2.连续稀释测试化合物W得到W下浓度：8χ10ΕΕ-7Μ、8χ10ΕΕ-8Μ、8χ10ΕΕ-9Μ、 8x10邸-101、扣1066-1謹、扣10邸-121和扣1(^6-131。将2541添加至测定板的适当的孔中。
[0725] 3.将细胞膜等份解冻并稀释至其工作浓度。将50μ1添加至测定板的每个孔中。
[0726] 4.将WGA SPA珠 W20mg/mL悬浮于测定缓冲液中。在临添加至测定板之前将悬浮液 在测定缓冲液中稀释至lOmg/mL。将50μ1添加至测定板的每个孔中。
[0727] 5.通过将25μ1的480ρΜ[125Ι]-化Ρ-1]-(7-36)Ν此溶液添加至测定板的每个孔中 开始溫育。留下25μ1等份W用于测量总计数/孔。
[072引 6.测定板在30°C下溫育化。
[07巧]7.将测定板离屯、lOmin。
[0730] 8.在化ckard TopCountNXT仪器中读取测定板。
[0731] 计算
[0732] 将来自TopCount仪器的数据转移至GraphPad Prism软件。该软件对重复测量的值 取平均，并进行非线性回归。通过该软件计算IC50值并WnM为单位报告。 師](b)膜高血糖素受体结合
[0734]本试验的目的在于测试本发明的膜高血糖素衍生物的体外受体结合活性。该受体 结合活性是衍生物对人膜高血糖素受体的亲和力的量度。
[07对原理
[0736]在置换结合试验中测量每种化合物与人膜高血糖素受体的受体结合。在运一类型 的试验中，使标记的配体(在运种情况下为1251-膜高血糖素)与受体结合。W-系列的浓度 将每种衍生物添加至含有人膜高血糖素受体的分离的膜中，并监测标记的配体的置换。将 受体结合报告为一半的标记的配体从受体上置换时的浓度，即I巧0值。
[0737] 材料
[073引在该试验中使用W下化学品：含有Glutamax的DMEM(Gibco 61965-026)、Pen/ strepdnvitrogen l5l40-l22)、G4l8(Invi1:;rogen 10131-027)、Versene(G;Lbco 15040)、 IM 胎pes(Gibco 15630)、PBS(Invit;rogen 14190-094)、胎牛血清（Invitrogen 16140- 071 )、MgCb(Merck 1.05832.1000)、抓TAQnvitrogen 15575-038)、CaCl2(Sigma，C5080)、 吐溫20(Amresco 0850C335)、卵清蛋白（Sigma A5503)、SPA颗粒(麦胚凝集素(WGA) SPA珠， Perkin Elmer RPNQOOOl)、[1251]-膜高血糖素（内部生产的）、0ptiPlateTM-96(Packard 6005290)ο
[0739] 歷6缓冲液由25111]\1皿?68、2111]\11旨(：12和1111]\1抓了4组成，并且将抑调节至7.4。结合 缓冲液由50mM补充有5mM MgCb、ImM CaCl2、0.02 %吐溫20和0.1 %卵清蛋白的皿阳S组成， 并且将pH调节至7.4。
[0740] 细胞培养和膜制备。
[0741 ]本试验中使用的细胞(克隆BHK hGCGR A3巧5)为用含有编码人膜高血糖素受体的 cDNA的表达质粒稳定转染的BHK细胞。
[0742] 使细胞在5%C02下在DMEM、10%胎牛血清、l%Pen/Strep(青霉素/链霉素）和 l.Omg/血选择标记G418中生长。为了进行膜制备，使细胞生长至约80%汇合。将细胞在憐酸 盐缓冲盐水中洗涂两次并收获。使用短暂离屯、使细胞沉淀，并将细胞沉淀物保持在冰上。通 过添加约5mL HME缓冲液裂解细胞，通过吸液混合，并在液氮中骤冻。使细胞裂解物快速解 冻，并添加 HME缓冲液至10血。将细胞沉淀物用化TRA-T皿RRAX分散仪器匀浆化20-30秒。在4 °C下W20，OOOxG离屯、匀浆10分钟。将沉淀物在l-2mL HME缓冲液中重悬（匀浆化）。测定蛋白 质浓度。对膜进行等分并在液氮中骤冻，并储存在-80°C下。
[0743] 程序
[0744] 1.对于受体结合试验，将50μ1测定缓冲液添加至测定板的每个孔中。
[0745] 2.连续稀释测试化合物W得到W下浓度：8χ10ΕΕ-7Μ、8χ10ΕΕ-8Μ、8χ10ΕΕ-9Μ、 8x10邸-101、扣1066-1謹、扣10邸-121和扣1(^6-131。将2541添加至测定板的适当的孔中。
[0746] 3.将细胞膜等份解冻并稀释至其工作浓度。将50μ1添加至测定板的每个孔中。
[0747] 4.将WGA SPA珠 W20mg/mL悬浮于测定缓冲液中。在临添加至测定板之前将悬浮液 在测定缓冲液中稀释至lOmg/mL。将50μ1添加至测定板的每个孔中。
[0748] 5.通过将25μ1的48化Μ[125Ι]-膜高血糖素溶液添加至测定板的每个孔中开始溫 育。留下25μ1等份W用于测量总计数/孔。
[0749] 6.测定板在25°C下溫育化。
[0"7加]7.将测定板在1500巧m下离屯、lOmin。
[0巧1] 8.在化ckard TopCountNXT仪器中读取测定板。
[0巧2] 计算
[0753] 将来自TopCount仪器的数据转移至GraphPad Prism软件。该软件对重复测量的值 取平均，并进行非线性回归。
[0754] 试验（III):用于评估肤组合物的物理稳定性的化T原纤维形成试验
[0755] 本试验的目的在于评估本发明的膜高血糖素衍生物在水溶液中的物理稳定性。
[0756] 肤的低物理稳定性可导致淀粉样原纤维的形成，观察到其在样品中呈有序的丝状 大分子结构，运最终可导致凝胶形成。运在传统上通过对样品的目测来测量。然而，运种测 量非常不方便，并且取决于观察者。因此，小分子指示探针的应用更为有利。硫代黄素 T (化T)是运样一种探针，并且当与原纤维结合时具有不同的巧光特征[Naiki等人（1989) Anal.Biochem.177,244-249；LeVine(1999)Methods.Enzymol.309,274-284]〇
[0757]可采用W下表达式利用S形曲线描述原纤维形成的时程[Nielsen等人（2001) Biochemistry 40,6036-6046]：
[0巧引
[0759] 运里，F为在时间t时的化T巧光。常数to为达到最大巧光的50%所需的时间。描述 原纤维形成的两个重要参数是通过t〇-2T计算出的滞后时间和表观速率常数kapp 1Λ。
[0760]
[0761] 提出肤的部分折叠中间体的形成是原纤维形成的一般启动机制。运些中间体中很 少成核形成模板(进一步的中间体可W装配到该模板上)并且原纤维形成继续进行。滞后时 间对应于建立核的临界质量的时间间隔，而表观速率常数是形成原纤维本身的速率。
[0762] 在每次测定之前新鲜制备样品。每种样品的组成在图例中描述。使用适量的浓 化0H和肥1将样品的抑调节至所需值。将硫代黄素 T从在出0中的储备溶液添加至样品中，至 ΙμΜ的最终浓度。
[0763] 将20化1的样品等份(在lOmM pH 7.5的皿PES缓冲液中的25化Μ膜高血糖素衍生 物/类似物)放置在96孔微量滴定板(Packard 0ptiPlate?-96，白色聚苯乙締）中。通常，将 每种样品（对应于一个测试条件）的四个或八个重复物放置在一列孔中。该板用Scotch Pad (Qiagen)密封。
[0764] 在Fluoroskan Ascent化巧光读板器(Thermo Labsystems)中完成在给定溫度下 的溫育、摇动和化T巧光发射的测量。采用调节至96化pm、振幅为1mm的定轨摇动（orbital shaking),将板在37°C下溫育。使用通过444nm滤光器的激发，W及通过485nm滤光器的发射 的测量，来完成巧光测量。
[0765] 通过将板在测定溫度下溫育lOmin来启动每个运行。在期望的时间段内每20分钟 对板进行测量。在各次测量之间，如描述的那样将板摇动并加热。
[0766] 完成化T试验之后，合并每种样品的四个或八个重复物，并在18°C下W200(K)巧m离 屯、30分钟。通过0.22μπι过滤器过滤上清液，并将等份转移至HPLC小瓶中。
[0767] 使用合适的标准作为参考，通过反相HPLC测定在初始样品中和在过滤的上清液中 的肤的浓度。将过滤样品的浓度占初始样品浓度的百分比分数报告为回收率。
[0768] 将测量点^Microsoft Excel格式保存W供进一步处理，并使用Gra地Pad Prism 进行曲线绘制和拟合。在不存在原纤维时来自ThT的背景发射可忽略不计。数据点通常是四 个或八个样品的平均值，并示出标准差误差条。仅将在同一实验（即在同一板上的样品）中 获得的数据呈现在同一曲线图中，W确保实验之间原纤维形成的相对量度。
[0769] 可将数据集拟合至方程（1)。然而，通过目测曲线来确定本文报告的原纤维形成之 前的滞后时间，W确定化T巧光增加至显著高于背景水平的时间点。
[0770] 试验(IV):化学稳定性评估
[0771 ]本试验的目的在于评估本发明的膜高血糖素衍生物在水溶液中的化学稳定性。
[0772] 通过RP-U化C测定膜高血糖素类似物的化学稳定性。将冻干样品溶解在8mM pH 8.6的憐酸盐缓冲液中，接着用肥1调节至抑7.3，至最终浓度为33341。将样品在5°(：和371： 下溫育14天，然后进行RP-UPLC分析。将纯度定义为每个色谱图中的主峰相对于所有完整峰 的总面积的面积百分比。化学稳定性被确定为在37Γ下14天之后的纯度损失(本文中也称 为化学降解），其如下确定:在5°C下溫育的样品或起始样品（没有溫育）与37°C之间的纯度 差除W起始样品或在5°C下溫育14天之后的纯度。
[0773] 使用Waters Acquity C甜 Fluoro-phenyl 150x 2.1mm, 1.7μηι柱进行RP-UF*LC分 析，该柱使用由A : 0 . 0 9 Μ憐酸盐缓冲液p Η 3 . 6 (憐酸氨二锭（d i - ammoniumhy化oge吨hosphat))、10%MeCN(v/v% )，和B:60%MeCN(v/v% )、20%异丙醇（v/ V%)组成的流动相系统在50°C和0.3mL/min的流速下操作。
[0774] 在215nm下进行UV检测。W下示出了用于大多数样品的典型梯度图形。为了使类似 物在与大多数类似物相比基本不同的保留时间下洗脱，对梯度图形作了一些调整，W便更 好地实现样品间的纯度评估比较。数据证实了本发明的膜高血糖素衍生物的改善的化学稳 定性。
[0775] 通过大小排阻高效液相色谱法（SE-HPLC)测定高分子量蛋白质化MWP)含量。使用 Waters Insulin HMWP 7.8x 300mm柱进行分析，该柱使用由500mM 化CUlOmM NaH2P〇4、5mM 出P〇4和50%(v/v)2-丙醇组成的解离流动相在50°C和0.5mL/min的流速下操作。在215nm下 进行UV检测。
[0776] 用于RP-UPLC分析的典型梯度图形：
[0777]
[0778] 实施例23:本发明的衍生物的性质
[0779] 分别使用如本文所述的试验（I)(b)、试验（II)(b)、试验（III)和试验（IV)测试本 发明的衍生物对人膜高血糖素受体的效力化巧化GlucagonR)、对人膜高血糖素受体的亲和 力（I巧OhGlucagonR)、物理稳定性和化学稳定性。结果不于表1中。
[0780] 表 1
[0781]
[0782]
[0783] 结果显示本发明的衍生物具有良好的对膜高血糖素受体的效力、良好的对膜高血 糖素受体的亲和力W及良好或适度的物理稳定性和良好的化学稳定性。
[0784] 虽然本文已说明并描述了本发明的某些特征，但本领域普通技术人员现将想到许 多修改、替换、变化和等同项。因此，应当理解，所附权利要求旨在涵盖落入本发明的真正范 围之内的所有运样的修改和变化。
【主权项】
1. 一种包含式I的胰高血糖素类似物的衍生物，或所述衍生物的药学上可接受的盐、酰 胺或酯： Imp-X2-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xi〇-Ser-Xi2-Tyr-Leu-Xi5-Xi6-Arg-Arg-Ala-X2〇 -X2i_Phe-Val-X24_Trp-Leu-X27_X28 _X29_X3〇 [ I ] 其中 X2 为 Ser 或 Aib; Xio为Tyr、Leu、Ile或Val; Xi2 为 Lys 或 Arg; Xi5 为 Asp 或 Glu; Xi6 为Ser、Ala、Leu、Thr、Aib、lie、Val或Lys; X2〇 为 Gln、Glu、Aib 或 Lys; X2i 为 Asp、Glu 或 Lys; X24 为 Gln、Ala、Glu、Ait^Lys; X27为Met、Leu或Val; X28*Asn、Ser、Thr、Gln、Ala、Gly、Gli^Lys; 父29为!111'、617、361'、6111、厶1&、6111或1^8;并且 X3〇不存在或为Lys; 并且其中所述衍生物包含与在式1的位置乂12、乂16、乂20、乂21、乂24、乂28、乂29或乂3()处的赖氨酸的 侧链的氮原子共价连接的取代基， 其中所述取代基具有式II: Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12- [II] 其中Yl为氢或表示C2-6酰基基团或琥珀酰基部分，并且 其中Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y8、Y9、Yl()、Yll或Yl2单独地不存在或单独地表示选自Ser残基、 Ala残某、CM V残某、式i、式i i、式i i i、式i V和式V的氣某酸残某， 其中式i、i i、i i i和i V单独地具有立体化学L或D， 并且条件是所述取代基具有三至十个带负电荷的部分。2. 根据前述权利要求中任一项所述的衍生物，其中所述胰高血糖素类似物与胰高血糖 素 (SEQ ID NO: 1)相比在所述胰高血糖素类似物中包含3-15个氨基酸残基修饰，如置换或 添加。3. 根据前述权利要求中任一项所述的衍生物，其中Y12与在所述衍生物的位置X12、X16、 Χ20、Χ2Ι、Χ24、Χ28、Χ29或X3Q处的赖氨酸的侧链的所述氮原子连接。4. 根据前述权利要求中任一项所述的衍生物，其中所述取代基与赖氨酸的侧链的ε_氮 原子共价连接。5. 根据前述权利要求中任一项所述的衍生物，其中所述取代基与在位置X24处的赖氨酸 连接。6. 根据前述权利要求中任一项所述的衍生物，其中所述取代基具有3、4、5、6、7、8、9或 10个带负电荷的部分。7. 根据前述权利要求中任一项所述的衍生物，其中所述取代基包含3-10个如3-5个或4 个式i的残基。8. 根据前述权利要求中任一项所述的衍生物，其中所述取代基的心为乙酰基基团。9. 根据前述权利要求中任一项所述的衍生物，其中所述取代基选自以下部分：10. 根据前述权利要求中任一项所述的衍生物，其中所述衍生物选自 Ne24-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]-[Impl，Aib2，His3，Leul6，Lys24, Leu27，Ser28 ]-胰高血糖素 化学式I:Ne24-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]-[Impl，Aib2，His3，Glul5，Lys24, Leu27，Ser28 ]-胰高血糖素 化学式2:Ne24-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]-[Impl，Aib2，His3 ,LeulO，Glul5， Lys24，Leu27，Ser28]_ 胰高血糖素 化学式3:Ne28-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]-[Impl，Aib2，His3，Glul5，Ala24, Leu27，Lys28]-胰高血糖素 化学式4:Ne24-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]-[Impl，His3，Glul5, Lys24，Leu27， Ser28]_胰高血糖素 化学式5:Ne24-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]-[Impl，His3，Glul5，Glu21，Lys24, Leu27，Ser28 ]-胰高血糖素Ne24-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]-[Impl，Aib2，His3，Glul5，Glu21, Lys24，Leu27，Ser28]_ 胰高血糖素 化学式7:7 Ne24-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]-[Impl ,His3 ,Leul6,Glu21 ,Lys24, Leu27，Ser28 ]-胰高血糖素 化学式8:Ne24-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]-[Impl，His3，Leul6，Lys24，Leu27， Ser28]_胰高血糖素 化学式9:Ne24-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]-[Impl，Aib2，His3，Vall6，Lys24, Leu27，Ser28 ]-胰高血糖素 化学式10:Nel6-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]-[Impl，His3，Glul5，Lysl6，Glu21, Leu27，Ser28 ]-胰高血糖素 化学式11:Ne2°-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]-[Impl，His3，Glul5，Lys20，Glu21, Leu27，Ser28 ]-胰高血糖素 化学式12:Ne21-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]-[Impl，His3，Glul5，Lys21，Leu27， Ser28]_胰高血糖素 化学式13:Ne28-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]-[Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27， Lys28]_胰高血糖素 化学式14:Ne29-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]-[Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27， Ser28，Lys29]_胰高血糖素 化学式15:Na( [Impl,His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28]_胰高血糖素基）-，[(45)-4-[[(45)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰 基]氨基]-4-羧基丁酰基]Ly s 化学式16:Ne24-[2-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-駿基丁酰基]氨基] _4_駿基丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]氨基]乙酰基]-[Impl，His3， Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]_ 胰高血糖素 化学式17:Ne2M(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]氨 基]-4-羧基丁酰基]-[Impl，His3，Glul5，Glu21，1^824，1^1127,36128]-胰高血糖素 化学式18:Νε24-[ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-[ [ (4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨 基]-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]_ [Impl，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]_胰高血糖素 化学式19:Ne24-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]-[Impl，His3，Alal6，Lys24，Leu27， Ser28]_胰高血糖素 化学式20:Ne24-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基丁酰基]-[Impl，His3，Aibl6，Lys24，Leu27， Ser28]_胰高血糖素 化学式21:以及 Ne24-[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-[[(4S)-4-乙酰氨基-4-羧基丁酰基]氨基]-4-羧基 丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]氨基]_4_駿基丁酰基]-[Impl，His3，Glul5，Glu21，Lys24, Leu27，Glu28]_胰高血糖素 化学式22:11. 根据前述权利要求中任一项所述的衍生物，其中所述衍生物具有如通过本文所述 的试验(IV)所测定的小于5%的化学降解。12. -种胰高血糖素类似物形式的中间产物，或其药学上可接受的盐、酰胺或酯，该中 间产物与胰高血糖素(SEQ ID NO: 1)相比包含以下修饰： (i) [Impl，Aib2，His3，Leul6，Lys24，Leu27，Ser28]_胰高血糖素； (ii) [Impl，Aib2，His3，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]_胰高血糖素； (iii) [Impl，Aib2，His3 ,LeulO，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]_胰高血糖素； (iv) [Impl，Aib2，His3，Glul5，Ala24，Leu27，Lys28]_胰高血糖素； (V) [Impl，His3，Glul5，Lys24，Leu27，Ser28]_膜高血糖素； (vi) [Impl，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]_ 胰高血糖素； (vii) [Impl，Aib2，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]_胰高血糖素； (viii) [Impl，His3，Leul6，Glu21，Lys24，Leu27，Ser28]_膜高血糖素； (ix) [Impl，His3，Leul6，Lys24，Leu27，Ser28]_膜高血糖素； (X) [Impl，Aib2，His3，Val 16，Lys24，Leu27，Ser28]_胰高血糖素； (xi) [Impl，His3，Glul5，Lysl6，Glu21，Leu27，Ser28]_胰高血糖素； (xii) [Impl，His3，Glul5，Lys20，Glu21，Leu27，Ser28]_胰高血糖素； (xiii) [Impl，His3，Glul5，Lys21，Leu27，Ser28]_膜高血糖素； (xiv) [Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Lys28]_膜高血糖素； (XV) [Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28，Lys29]_胰高血糖素； (xvi) [Impl，His3，Glul5，Glu21，Leu27，Ser28，Lys30]_胰高血糖素； (xvii) [Impl，His3，Alal6，Lys24，Leu27，Ser28]_膜高血糖素； (xviii) [Impl，His3，Aibl6，Lys24，Leu27，Ser28]_膜高血糖素； (xix) [Impl，His3，Glul5，Glu21，Lys24，Leu27，Glu28]_ 胰高血糖素。13. -种组合物，其包含如前述权利要求中任一项所述的衍生物以及一种或多种药学 上可接受的赋形剂。14. 如前述权利要求中任一项所述的衍生物，其用于在医学中使用。15. 根据权利要求14所述的衍生物，其用于治疗和/或预防低血糖。
【文档编号】C07K14/605GK106029088SQ201580008796
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2015年2月18日
【发明人】J.F.劳, T.克鲁塞, P.K.尼伊森
【申请人】诺和诺德股份有限公司