富含低含量植烷酸的ω-3脂肪酸的组合物的制作方法

专利名称：富含低含量植烷酸的ω-3脂肪酸的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及获得富含ω-3脂肪酸的组合物的方法，所述ω-3脂肪酸具有含量低于90 μ g/克油的植烷酸。本发明还涉及获得富含DHA且植烷酸含量低于90 μ g/克油的组合物，更具体地，DHA为650-950mg/g，S卩，65% (重量)至95% (重量)且PhA的值为每克形成所述组合物的油的低于90 μ g、优选低于5 μ g。获得的组合物由于其预防作用和治疗效果而用于食品添加、营养产品和药物产品领域。
背景技术：
ω-3脂肪酸是多不饱和脂肪酸家族，其共同特点在于最后一个双键位于从该脂肪酸的最后一个甲基起始的第三个C-C键处。ω-3脂肪酸是必需的，即人体自身无法产生，因此必需通过膳食或通过组合物摄取它们。由于它们多不饱和的性质，ω-3脂肪酸在人体内具有非常特殊的物化功能(即极低的熔点)并因此已得到广泛研究。目前，已知存在多达 10种ω-3脂肪酸(即硬脂酸)，但是除了 DHA和/或ΕΡΑ，它们在人体内以极小量存在，并且其生理活性非常低或者没有生理活性。5,8,11，14，17- 二十碳五烯酸或EPA以及4,7,11，13，16，19- 二十二碳六烯酸或
DHA是具有最多生理功能的ω-3脂肪酸，特别是DHA，其在视网膜、精子、神经组织等具有特定功能。DHA和EPA都具有共同的生理功能，但是DHA所具有的特定生理功能是其它脂肪酸所不具备的，特别是在光感受器、神经组织和精子等方面。摄入高剂量DHA可以提高EPA的水平，但反过来不发生；并且，DHA不改变其它脂肪酸的合成(Voss等人，1992年)。从生理角度来说，出于生物学观点，DHA是用于人体摄入的最令人感兴趣的ω-3 脂肪酸。由于DHA和EPA存在于相同的食物来源中，并且由于EPA含量更大，最初EPA是得到更多关注、更容易获得的ω-3脂肪酸。但是，经过去15年对这两种脂肪酸的了解，对DHA 及其所必需的纯化的兴趣已经显著增强，这是因为，除了例外情况，DHA最多以不超过脂肪的10-15%存在于最大量的食物来源中。用于获得富含DHA的ω-3脂肪酸的多数来源为海洋来源微藻(即裂壶藻、隐甲藻、吾肯氏壶藻(Ulkenia sp.)、裸藻)，甲壳类(即南极磷虾)，多脂鱼(即Thurmus ibynnus thynnus或红色金枪鱼)，海洋哺乳动物；以及蘑菇和酵母(即解脂耶氏酵母)和细菌(即乳酸杆菌)。鱼类是用于以高纯度且最充足地获得供人体摄入的富含DHA的ω-3脂肪酸的最大量来源，原因在于每年鱼类和贝类动物的产量为1.4亿吨(FA0，2007年)，并且估计每年鱼油产量为 100 万公吨(IFFO, International Fishmeal & Fish oil Organisation)。最适合的鱼是金枪鱼和其它物种，ω-3含量最高，DHA的百分比高于20% (重量)；并且，由于它们为食品，因此在公共健康方面最有保证、最安全。另一方面，除了鱼类以外，磷虾是地球上DHA的最大储库和生物质。但是，开发磷虾来获得ω-3脂肪酸对于营养链和发展人类膳食必需的物种和鱼类具有严重的已知风险。将来，一种可能性是从磷虾养殖场获得此类磷虾，在磷虾养殖场将不会有对于营养链的风险，并且，它们将在不含有通常存在于海洋水域中的污染物的环境中繁殖。很多作者都认为，在世界范围内的多数膳食中，DHA都是一种缺乏的营养物。但是，除了其作为DNA缺乏疾病的治疗方法的相关性，DHA的生理作用使得其成为用于治疗和预防下述疾病的最相关的辅助因子神经退行性疾病，例如阿尔茨海默氏病或精神分裂症；视网膜退行性疾病、癌症、自身免疫疾病、慢性关节和皮肤炎性疾病、肾和泌尿疾病(前列腺)、雄激素性脱发、男性和女性生育力改变、原发性注意力障碍或多动症、智力和认知发育，并且是视觉发育(特别是黄斑)、心血管疾病、糖尿病和高甘油三脂血症所必需的。为了治疗多种疾病，必需使用比仅通过膳食获得的(通常> 2-4克)高数十倍的剂量，这使得必需获得高纯度的DHA组合物，以便得到足够剂量的摄入(即，要从20%油组合物中获得4克DHA的剂量，将必需需要20克油或40个500mg的常规软凝胶)。多不饱和脂肪酸在其自由形式时极不稳定，因此其口服需要稳定化，这可以通过酯化或连接至其它分子如甘油和乙醇实现，使得它们更稳定并提高其生物利用度。第一种载体(甘油)使得可以获得更高的纯度(甘油三酯)、稳定性并具有最大的生物利用度，避免了醇的存在，这在需要高剂量的情况下和在多种应用中其长期使用时、以及对于怀孕妇女和儿童是特别重要的。甘油三酯以高于正常食物部分数百倍的浓度摄入，并且是天然的营养来源和靶标组织中脂肪酸的药代动力学。甘油三酯的药代动力学最大，并且其使得活性物质DHA的纯度最高，因此DHA甘油三酯表现具有最佳的吸收且具有更好的生理和代谢作用。伴随着对于食物和健康之间联系的敏感性提高，将鱼类作为健康营养来源的接受程度提高。除了多不饱和ω-3脂肪酸以外，鱼类还是高质量蛋白、矿物质和维生素的重要来源，其健康益处得到了广泛的认可。然而，近期研究揭示了与环境污染物有关的风险，所述环境污染物例如已知在鱼类中积累的汞和二噁英。脂肪酸的合成和活生物中的营养链是膜的物化性质以及膜对环境条件(即温度) 的生理适应的成因。见于活生物的磷脂和脂肪中的具有最低熔点(FP)的脂肪酸是降植烷酸(PA)、植烷酸(PhA)、EPA、DHA、花生四烯酸(AA)和estearic acid(SDA)，这些物质在低温下允许最佳生理情况。生物采用两种化学策略来获得具有极低FP的脂肪酸甲基化和羧酸的不饱和。考虑到海洋来源的生物面临的极端条件，此类脂肪酸的最为丰富的来源主要位于寒冷海洋水域中，这并不令人惊讶。在这点上，自然界、食物和脂肪衍生产品如海洋来源的油中的具有最低FP的脂肪酸为长支链脂肪酸(C > 18)，其具有多个甲基，其中PhA是浓度最高的一种，并且长链线性ω-3脂肪酸(C ^ 18)为DHA和ΕΡΑ(由于它们的浓度和丰度是最为相关的种类)。PhA存在于人类膳食或动物组织中，在动物组织中其可以穿过叶绿素。PhA由相应的醇即叶绿醇形成，并氧化以形成ΡΑ，这就是通常发现PA和PhA在一起的原因。PhA参与一种人类病理，即雷弗素姆氏综合症，其特征在于PhA在血液和组织中积累，随后已发现其与肝中的α-氧化途径缺乏有关。多数食物含有小于5 μ g的WiA/g，然而有些具有超过Img的PhA/g的最高含量，并且在鱼类的情况下，由于其数量与脂肪百分比成比例，因此其超过750 μ g/g。认为具有最高浓度PhA的食物在疾病如色素性视网膜炎(RP)和PhA氧化缺陷如雷弗素姆氏综合症中具有摄入的较高风险(III类)。另一方面，用于在鱼油生产中分离脂肪的方法显著提高了WiA的浓度。已知来自鱼类的脂肪酸是膳食中ω -3脂肪酸DHA和EPA的主要来源，但是它也是 PhA的主要来源。具有最高EPA和DHA含量的来源代表多数DHA和EPA的摄入，同时与PhA 的最高浓度和摄入来源有关。DHA和PhA具有相同的来源，远高于用于食物和药物用途的产品，因此在海洋和微生物来源的产品中可见最高浓度的DHA和PhA。通常，PhA与EPA和 DHA—起可见。细菌、真菌和微藻是自然界中具有最高浓度的PhA的生物。源自微生物的油类富含DHA，且PhA比例最小，通常超过100 μ g/g。研究的所有西方膳食(包括地中海地区的膳食)，具有100_150mg的DHA的每日摄入量，然而很多作者认为每日需要200-300mg。DHA是实际上全世界范围的人群都在其膳食中缺乏的唯一一种营养物。在文献中通常未显示且非常重要的一点是，来自膳食的DHA是100%的动物来源， 这是因为在植物食物来源中不存在DHA (除了不用做食物的一些藻类之外)。因此，素食者的需求更高，特别是在严格的素食主义者中，仅可见最低水平。其缺乏甚至更严重，并被一些作者认为是疾病色素性视网膜炎(RP)以及与过氧化物酶体缺陷有关的代谢性的神经退行性疾病的标志物。鉴于全世界范围内对纯化《-3脂肪酸(主要为0撤丄 々或二者)的关注，几十年来，已有多个专利和常规程序来获得富含DHA和EPA的精制油，从而获得更高的纯度。然而，如图3所示，市场上现有的和通过专利方法和良好生产规范(Good Manufacturing Practice, GMP)获得的精制和纯化油，含有高水平的PhA，甚至在具有高 DHA纯度的那些油中也是如此。PhA对健康的负面作用。PhA是公共健康的风险因素，原因在于其引起前列腺癌、乳腺癌、结肠癌等以及神经和视觉障碍(Lloyd-MD 等人，2008 ；AlIen-NE 等人，2008 ；Thornburg-G 等人，2006 年；Xu-J等人，2005年)。此外，它具有细胞毒性(Komen-JC等人，2007年；ScMnfeld et Reiser，2006 年；Schonfeld 等人，2006 年；Heinz，2005 年；Elmazar & 妝11，2004 年)。 PhA的摄入是下列疾病的发展和/或演化的风险因素眼部(视网膜、白内障、干眼等)、嗅觉和听觉改变，神经(阿尔茨海默氏病、脑病等)和精神改变，肾脏改变，心血管(电异常 S. Purkinje、平滑肌改变、缺血性心脏病、动脉粥状硬化)，肌病和严重肌萎缩，骨改变，肝改变，男性和女性生育力的改变，慢性自身免疫和炎性疾病(克罗恩病、溃疡性结肠炎、LES) 和癌症(前列腺、结肠、乳腺、肾脏、卵巢、一些类型的白血病等)。PhA对感觉神经和神经组织、心脏、肾、肝、肠、平滑肌和横纹肌、前列腺、乳腺、精子、肺和骨系统具有毒性的确切机制正在逐步得到阐明。最为众所周知的机制与肿瘤标志物(α-metylacil辅酶A消旋酶(AMACAR)或SPC-2)的过表达以及线粒体和细胞质膜中的呼吸电子传递链的解偶联去质子作用(即视网膜中的光传导)有关。在极低剂量下，PhA是具有体内氧化应激最高诱导作用的分子之一，其增强致畸，并且是动脉粥状硬化和心力衰竭造成死亡的重要诱导因子。PhA对线粒体具有直接的毒性，并且表现具有致动脉粥样硬化的强活性。PhA在线粒体内膜的氧化磷酸化作用中的复合物I解偶联中具有鱼藤酮型活性，导致随后产生活性氧簇以及DHA和其它多不饱和脂肪酸或PUFA的体内脂质过氧化(Kahler-S等人，2005年)。其降低磷脂(主要在光受体和神经组织中)中的DHA水平，提高对缺血、心血管再灌注创伤和低密度脂蛋白(LDLox)氧化的敏感性，提高巨噬细胞抗炎活性，降低活力和代谢活性(抑制氧化磷酸化作用)并诱导线粒体DNA突变。其自身的此毒性代谢活性对下述情况作出了解释光受体、色素上皮、神经组织(Purkinje细胞)、肾、肝、卵巢、精子、肺等所有富含线粒体的组织是在具有PhA高浓度的患者中最先受到影响的部分。PhA诱导Purkinje细胞中 Cf2介导的细胞凋亡(Powers-J.M等人，1999年)和动物模型中的心脏性猝死。PhA造成缺血、血管平滑肌的细胞凋亡、致动脉粥样硬化，特别具有心脏毒性。在小鼠中，留醇-2转运蛋白(SPC-2)的缺乏造成由PhA积累引起的心脏性猝死。PhA诱导人、小鼠和猪的血管平滑肌细胞(VSMC)的细胞培养物的细胞凋亡。由于PhA造成的Ca+2再吸收的活性改变和破骨细胞的细胞凋亡导致骨异常。在光受体外部(钙调蛋白特别浓集于在此处)膜上的与Cf2连接的蛋白负责控制光受体内多个事件的Ca+2流动，所述事件包括光传导和突触传导。钙调蛋白的功能由与其相连的多种蛋白介导，所述蛋白包括GTP酶。当光受体中的钙调蛋白浓度降低时，在视觉、特别是对光和暗的适应中会发生缺陷。PhA对睫状神经节细胞具有直接的毒性，所述睫状神经节细胞影响眼睑后部区域的副交感神经节神经，负责瞳孔缩小和视觉适应(老花眼、远视、光敏等)。PhA干扰睫状细胞、基体以及与生物发生纤毛(Cillium)所需的微管相连的蛋白的功能，所述功能受不同类型的肌球蛋白的相互作用和光受体原发纤毛中的Rab GTP酶的异戊烯化介导，影响必需蛋白例如opsine的转运、嗅觉细胞、耳蜗、肾细胞、呼吸系统、精子、肠微绒毛、以及视网膜色素上皮中的黑素体的运动。表现具有PhA的代谢改变的RP是睫状细胞改变的模型，可见精子轴丝和视杆睫状细胞的异常，引发依赖睫状体的视杆细胞外部的更新，造成不可逆的视力损害。并且，在没有相关综合症的RP中，发现了听觉诱发电位的改变以及与睫状细胞特有的耳蜗改变相一致的听力测定改变。睫状体的显著改变导致例如与听觉改变的综合症无关的患者的RP和耳聋，其方式与Usher和其它综合症相似。Rho和Rab家族小G蛋白需要在其C末端添加这些类异戊二烯基部分以发挥正常的GTP酶功能。特别需要Iih0 GTP酶信号传导途径来靶向在下述疾病中的治疗性干预肾脏疾病、神经障碍(髓鞘形成)、癌症发展、心血管疾病、感染性疾病等。PhA和其它类异戊二烯以与DHA和他汀类相反的方式损害Iih0-GTP酶信号传导，特别是Rac途径。PhA以与一些生物毒素类似的方式改变上皮和消化和呼吸粘膜中的Mio-GTP酶，从而发展侵入和感染过程；肿瘤过程和转移(即前列腺、乳腺)、肾损伤(肾小球、肾小管等)和demielinisation0这些GTP酶作为主要机制，解释了无PhA的DHA比有PhA的DHA在本发明的多种应用中更有效的原因。此外，PhA和PA是血管发生和炎症表型的主要和最有力的介质的控制者。PhA和 PA诱导血管发生、TNF α、GBP-I、GBP-2和炎性细胞因子(Cl)是发展癌症(转移)、自身免疫疾病、炎性疾病、感染性疾病、肾、肺和神经疾病的决定因素。PhA通过氧化成为PA，并且PhA和PA 二者在处理后2小时内都诱导由一氧化氮合酶和高浓度的该蛋白的UNAM形成介导的细胞凋亡(Idel等人2002)。此外，PhA和PA控制血管发生表型和炎症的主要和最有利的介质。并且，PhA和PA是活化和分泌肿瘤坏死因子α (TNFa)的最有力的诱导剂(Idel等人2002)。人鸟苷酸结合蛋白(GBP)-I的表达由炎症细胞因子(IC)高度诱导，因此，可以表征IC-活化细胞。GBP-I是表征内皮细胞的 IC-活化表型的新型细胞活化标志物。GBP-I是内皮细胞对IC的抗血管生成响应的主要调节子。GBP-I是胞浆蛋白，其在内皮细胞中的表达由干扰素-Y、白介素-1 α、白介素1- β、 或TNF-α选择性地诱导，但不被其它细胞因子、趋化因子、或生长因子诱导。PhA和PA是 α TNF和干扰素γ的诱导剂。GBP-I表达与血管内皮细胞高度相关，而在皮肤中是不可检测的，但是其在具有高炎性组分的皮肤疾病的血管中被高度诱导，所述皮肤疾病包括银屑病、 药物不良反应、和卡波西氏肉瘤。已表明GBP-I的表达和基质金属蛋白酶-I(MMP-I)的表达在体内和体外负相关，并且GBP-I在内皮细胞中选择性抑制MMP-I的表达，而不抑制其它蛋白酶的表达。后一发现表明，毛细血管形成的抑制特异性地归因于GBP-I对MMP-I表达的抑制，而不被GBP-I的螺旋结构域的抗增殖活性影响(Guenzi等人，2003年)。PhA引发视黄酸的致畸作用(Elmazar & Nau，2004年)，这是特别相关的，原因在于经常与PhA相结合的DHA推荐用于怀孕、哺乳和儿童食品中。色素性视网膜炎(RP)是研究在DHA存在下PhA的毒性的理想模型，如本文献将要进一步阐明的。PhA的物化性质使其成为在DHA开始掺入到磷脂2位(DHA在光感受器中的通常位置)时的重要竞争者。PhA具有大量自由旋转键(14个)，且具有非常低的结晶点，使其在膜中具有高度流动性。然而，由于范德华力与视紫红质的α-螺旋相互作用，PhA缺少 DHA特有的结构构型，这对于其在膜中的运动和四级结构是必需的。因此，PhA降低视紫红质和光传导的活性。PhA具有使光感受器膜解偶联的能力，造成见于RP中光传导失败(连续超极化)。PhA对于氧化造成降解不敏感，并且对如见于RP中的那些营养不良条件具有抗性。这特别会发生于DHA缺乏的情况下，例如在作为营养不良的后果的RP中，在这种情况下，RP是其中DHA缺乏的单一疾病，所述DHA缺乏被认为是该疾病的标志物。PhA通过其掺入到磷脂和甘油三酯中而改变光感受器的功能，从而替代 DHA (McCoII & Converse，1995 年；Powers 等人，1999 年，M5nning等人，2004 年)并且由于脂质过氧化和由PhA引起的线粒体损伤而降低DHA的水平。PhA还具有毒性能力，从而在线粒体和光感受器膜中都作为质子转运体(解偶联剂)(Gutknecht-J，1988年)，从而改变光感受器外部区段的极化。用PhA 替代 DHA。PhA通过其掺入到磷脂和甘油三酯中而改变光感受器的功能，从而从ROS膜中和线粒体中的磷脂的第2个碳替代DHA。因此，DHA在膜中被PhA替代，改变了光感受器的功能，成为在光传导中的DHA拮抗剂，改变了钙的动态平衡和视紫红质的再生。DHA被PhA替代是一些疾病中的不同作用机制之一(即RD =雷弗素姆氏疾病)，是部分致病机制。而DHA是细胞凋亡的抑制剂，以及光感受器的神经营养或存活因素，PhA则是氧化和体内细胞凋亡的最有力的诱导剂之一，以拮抗剂方式干扰DHA的作用机制。由于DHA抑制视网膜内细胞凋亡的能力被PhA的存在以剂量依赖性方式降低，因此油中的PhA水平干扰DHA的活性。PhA在具有RP的动物模型中造成光感受器的细胞凋亡，产生线粒体的不可逆的损伤。在这些条件下，负责光感受器存活的肽无法抑制细胞凋亡。然而，DHA是在营养不良条件下中和视网膜中的反应性物质的唯一的脂肪酸。PhA在营养不良的视网膜中特别具有毒性，而DHA降低其作用。已证实DHA是氧化应激和不可逆的线粒体损伤的抑制剂，所述不可逆的线粒体损伤导致光感受器退化(Rotstein等人，2003年)。因此，可以得出以下结论PhA除具有毒性外，还在所涉及的所有适应症中是DHA 的拮抗剂。特别地，PhA以DHA的拮抗剂的方式经线粒体诱导细胞凋亡。在本发明中，已开发了两个在光感受器中诱导细胞凋亡的临床前实验，所述光感受器具有百草枯(图1)和MNU(图2)，从而研究DHA与PhA浓度相联系的体外和体内抗细胞凋亡作用。在两个实验中都证实了 DHA在光感受器中的抗细胞凋亡能力与PhA浓度负相关。通过0至20 μ g/g的浓度获得了最高的抗细胞凋亡活性，其中比率Bcl-2/Bax显著低于饲喂<5 μ g/g的小鼠。PhA 的毒性。PHA氧化的代谢改变或药理或营养相互作用并不一定是表现毒性所必需的，这是由于通过常规膳食的PhA的营养剂量也造成PhA的显著改变以及健康和毒性的风险上升。 以示意方式，PhA通过其低剂量摄入的毒性与下述情况相关1. PhA的氧化过程被包括为生理病理过程——诱导AMACAR——的一部分。PhA对健康的作用还由与流行病学价值极大的多种癌症有关的某些分子标志物的过表达决定，所述多种癌症为前列腺癌、结直肠癌和肾细胞癌。存在证据即此相同的标志物与卵巢癌、乳腺癌以及与对胰岛素抗性有关的内分泌癌症相关。PhA对于导致过表达AMACAR和SPC-2的数种肿瘤细胞系(前列腺、肾、乳腺、结肠、肺)的存活至关重要。已描述了具有神经病、RP的下述病例其AMACAR缺陷，且PhA和PA上升(Ferdinanduse等人，2000年)。2.在具有RP的患者中，例如在幼年或成人的雷弗素姆氏疾病、脑肝肾综合症、新生儿肾上腺脑白质营养不良和肢根点状软骨发育不良中，PhA氧化失败造成PhA积累增加。3.然而，相比正常人群，由于过氧化物酶体缺陷，其它遗传疾病表现出PhA的提高，例如在a)具有线粒体病(复合物IV)、C0X缺陷、Leigh综合症、肾范可尼综合症的疾病中(Fingerhut R 等人 1994)。4.经氧化和细胞色素P450消除超过50mg/天的PhA。众所周知，细胞色素P450 介导PhA的氧化，但是还已知存在细胞色素P450的强抑制剂(即唑类抗真菌药、丙戊酸、西咪替丁、红霉素、磺胺甲基异噁唑、阿片类、环孢素、蛋白酶抑制剂、抗抑郁剂、刺桐硷、巴比妥类、抗组胺药、它莫西芬、大麻素类、S-warfarine等)。因此，某些药物能够以显著方式提高PhA浓度。多种药物治疗剂抑制PhA的代谢降解，从而积累并且主要形成视网膜毒性、神经和心血管毒性。PhA可以和钙拮抗剂、抗血管生成剂、免疫抑制剂和抗炎剂相互作用。人体内，细胞色素P450的不同同工酶(即CYP2C8)介导PhA的快速氧化(α -氧化=PhA的 90%氧化)。由于其商业价值和用途，一种最为突出的药物是高血脂药贝特类和他汀类， 这是Ρ450 CYP2C8的抑制剂，强烈抑制PhA氧化代谢从而造成PhA积累。贝特类活化过氧化物酶体的β氧化，但是PhA的降解需要α氧化，贝特类通过抑制细胞色素Ρ450 CYP2C8 而抑制α氧化。PhA可能是其主要次生效应即横纹肌溶解的部分成因。5. PhA氧化中的次生故障在阿尔茨海默氏病中，过氧化物酶体中的硫胺素依赖性酶的活性被降低，导致PhA氧化所必需的羟基植烷酰辅酶A裂解酶的量降低。伴随着见于阿尔茨海默氏病中的乙酰胆碱水平提高，可见PhA水平的提高。6.引发硫胺素降低的营养改变(抗代谢物硫胺素酶和硫胺素拮抗剂乙酰胆碱) (其中经裂解酶，焦磷酸硫胺素是PhA氧化的辅因子)以及最为熟知的之中的硫胺素缺乏与Wernicke-Korsakoff综合症有关，即由于摄入carp和salmonid造成的致命的心血管疾病 (维生素B缺乏)和神经毒性综合症。硫胺素拮抗剂见于例如来自植物和常规食物(即茶、 葡萄、柠檬酸等)的食物防腐剂(即亚硫酸盐)的物质中，其对沸腾具有抗性(间和羟基苯酚)，例如咖啡酸、绿原酸和单宁酸、獬皮黄素和rutine (经常用于药物中和用作食品添加剂)；来自食物的硫胺素酶(常见于主要来自鱼类养殖场的鱼类中，80%的摄入)、酸菜、奶制品和反刍动物的肉(富含PhA)、醇摄入、葡萄果汁(以及较轻程度的橙汁、中国柑橘、苹果、葡萄及其衍生物)和咖啡因能够引起较轻程度的PhA累积。令人感兴趣的模型是产生硫胺素和神经感受性耳聋的遗传疾病。仅需要醇和吡啶硫胺素(硫胺素抗代谢物)100 μ g/ ml即可在短于7天内产生严重的硫胺素缺乏。这些相互作用引起关注，其不仅对于获取食物中所含的PhA和植醇是重要的，而且与膳食、药物治疗剂、食品添加剂和习惯有关的食物可以引发来自膳食的PhA的积累。7.在另一方面，流行病学数据确定，认为正常的剂量(50_100mg/天)具有毒性效应，在低至0. lymol/mg脂肪的剂量即具有毒性。即使在低得多的浓度，PhA是具有诱导体内氧化的最强能力的分子之一，其与DHA的一些必需生理机制相互作用并降低其体内水平，通过脂质过氧化损害其结构。在神经组织的总脂肪酸的300 μ 8/!111或< lmmol/l(< 总脂肪酸)和大约5-10%的这一极低血液浓度，其产生严重的神经疾病和死亡。在与PhA 积累有关的死亡后毒性研究中(雷弗素姆氏疾病)，最高水平见于达到总脂肪酸的8. 5%的一些组织中”。成人和儿童中的具有严重PhA积累的雷弗素姆氏疾病是研究PhA毒性的理想模型，其包括色素性视网膜炎、眼球震颤、眼张力过低、运动失调、智力和生长迟缓、面部和骨变形、肝肿大和低胆固醇血症。DHA 和 PhAPhA毒性与其中推荐DHA摄入和使用的疾病和情况有关，例如色素性视网膜炎 (RP)，其中DHA作为疾病的标志物，而PhA为RP的病原。通常需要DHA用于其治疗的疾病同时受PhA诱导。除了癌症，最为明显的是RP。支链脂肪酸PhA和PA是不同RP疾病的标志物(雷弗素姆氏、新生儿肾上腺脑白质营养不良(NALD)、肢根点状软骨发育不良、脑肝肾综合症、Usher IV)，所述不同RP疾病与PA的α和β氧化的代谢缺陷有关。PhA是这些病况中RP的单独成因。数十年来，已知RP中，所有靶组织中都缺乏DHA。具有RP的所有患者都表现出DHA 代谢的改变，并且其绝大部分具有高浓度的PhA，后者在某种程度上是疾病发展的成因。DHA 缺乏的程度并不与疾病的发展和预后有关。从这一点来看，非全身的主要常染色体的RP是所有遗传性疾病中最为良性的(博士论文Cela-L0pez，JM)，即使在DHA水平低于那些偶尔摄入的情况下也是如此Gchaefer等人，1995年)。然而，在具有XLRP的患者中2g/天的 DHA的口服也不能使DHA的水平正常化，这是由于在营养不良的视网膜中的DHA损失需要摄入4g/天，从而使红细胞磷脂中的DHA水平正常化。不同类型的RP的发展和预后取决于 DHA和其最初摄入时刻的药物剂量以及PhA水平。因此，可以说，PhA的浓度与疾病的发展和中枢功能(黄斑区)的损失中最严重的预后有关。植烷酸水平提高已见于用“DHA”的治疗中。来自到达我们实验室的4位患者的4个样品用于评估在具有RP的两个综合症中用DHA治疗的有益效果。在3个月期间，用4g/天的DHA(4.86mg植烷的)对4位患者(具有青少年雷弗素姆氏病和脑肝肾综合症)进行治疗，以50%和44%提高了支链脂肪酸植烷酸和降植烷酸的量。以平行方式观察到临床病况的完全恶化神经性的耳聋和RP (视觉灵敏度和视野)。来自Kennedy Krieger研究所(Baltimore)的过氧化物酶体实验室定期提供的对他们全年研究的所有患者的所有分析结果，对来自鱼类的DHA的摄入提高了植烷酸的毒性水平，因此，他们一直推荐来自藻类的DHA。数据表明DHA的商业浓度对具有和过氧化物酶体缺陷有关的RP患者具有毒性。1994年，RP患者协会(AARPE，西班牙)进行了具有RP的17位患者的研究，所述患者具有或不具有综合症(雷弗素姆氏、脑肝肾、NADL、Kearns、B0rdet-Bield、常染色体缺陷RP、和偶发RP)，且具有血浆内植烷酸的升高的水平。他们在1个月至3年的不同时间段内都摄入具有不同量的植烷酸(5mg至11. 5mg/天)的DHA油。他们都显示植烷酸水平从 23%升高至82%，无论其鱼油来源。1年后，RP的发展要比不具有综合症的RP患者(11位患者)(小8.3%)中所期望的大，尽管在具有综合症的患者中(6位患者)，视觉功能的损失相当严重。接下来，放弃用富含植烷酸的DHA进行治疗，根据植烷酸的血浆水平(中度水平5-30 μ g/ml ；高水平30-900 μ g/ml)将患者分成两组。进行用4g低植烷酸(< 90 μ g/ ml)的DHA治疗，评估植烷酸的水平和视觉功能。在具有中度植烷酸水平的组(与综合症无关)中，观察到植烷酸水平的逐步降低，在十二个月内变得正常(图4)。同时，在疾病的进展中观察到视觉功能的回复，其和开始用富含植烷酸的DHA治疗之前获得的相似。PhA的毒性和摄入富含DHA和EPA的来源(即金枪鱼)有关，因为其以非常低的百分比(约0.1%)存在于油中。PhA存在于人类膳食或动物组织中，在动物组织中，它可以从植物提取物获得叶绿素，这是它可以在动物组织中积累的原因。PhA由植醇形成，并且氧化形成降植烷酸(PA)。 鉴于人群脂肪膳食中存在较大不同(素食主义、蛋奶素食主义等)，已经发现PhA血液水平的变化(达6. 7倍)完全与从常规膳食中摄入PhA有关，其中素食主义膳食表现出高达10 倍少的PhA，而同时极度缺乏DHA。植烷酸是前列腺癌的风险因素，而DHA是相同类型的癌症的保护因素。具有超出众多分子研究的证据，并且受到流行病学数据和众多病理研究的支持，其中膳食研究关于 DHA与其它化学治疗药物(塞来考西、Plaquitaxel)在预防和临床治疗前列腺癌以及胃癌中的作用，其中一些进展良好(II期)(Ballet等人，2004年Jones等人，2007年)。对于植烷酸在诱导前列腺癌中的作用，还存在足够的流行病学证据(Walsh，2005年；Xu等人，2005 年；Thornburg等人，2006年；Mobley等人，2003年)。此外，还存在将摄入脂肪鱼类、红肉和奶制品(具有最高浓度植烷酸的来源)与前列腺癌联系起来的3个不同研究。在专利领域，已知有文献来纯化含有EPA和DHA的油，例如文献US 4，874，629 (1989)，其涉及处理含有ω -3脂肪酸的油的程序，例如大马哈鱼、沙丁鱼和其它含有EPA和DHA的鱼类，其基本包括a)在30-150摄氏度下使油进行真空蒸馏2_5小时， 然后使油与选自硅胶和硅酸的吸收剂接触，以降低高沸点温度和减少最挥发的极性调味剂以及其它不期望的组分。例如聚合物、胆固醇、色素、杀虫剂和重金属；和b)之后从混合物中回收油。之后，同一作者在US 5,023, 100中应用前述程序来产生具有EPA和DHA的食用油，其可以与植物油和/或迷迭香油组合以改善其氧化稳定性。同样，文献US2008/(^68117 Al描述了纯化含有EPA和DHA的油的方法，其包括(a)在油和醇分离成2个相的温度(约10摄氏度)下，向油中加入C1-C4的脂族醇，优选 60-70%的乙醇水溶液；(b)加热混合物直至油和醇开始混溶(50-80摄氏度)；(c)在油和醇分离的温度(约10摄氏度)下，冷却混合物；以及(d)回收油相。特别指出的是，此方法尤其足以制备用于食品和药品的油，其原因在于下述事实前述方法消除了例如胆固醇的有机污染物和例如汞的重金属。事实上，其提到以此方法制备的油特别适用于制备婴儿配方(US 5，013，569)和用于治疗风湿性关节炎的组合物(US 4，843，095)。还存在用于获得EPA和DHA甘油三酯的文献，例如文献ES 2035751 T3，其涉及制备在分子中具有至少一个长脂肪酸C8+的甘油三酯的程序，其特征在于在酯酶存在下进行游离长链脂肪酸或其一个低级烷基酯C1-C4与分子中具有一个或多个短链脂肪酸C2-C6的甘油三酯的酯交换，并且在反应过程中通过蒸发分离短链脂肪酸或其低级烷基酯以及组合物，在组合物中多不饱和脂肪酸为EPA或DHA或者二者的混合物。文献GB 2350610 A描述了由这种油将DHA制备为甘油三酯，其通过组合使用下述反应的程序进行甘油三酯与低级烷基醇的酯转移反应、蒸馏和采用通过可以固定化的酯酶催化的与烷氧基醇的选择性酶促酯转移反应。此外，文献US2008/0114181 Al涉及用于采用脂族醇C1-C8将脂肪酸酯化为甘油三酯的方法。该方法采用酸性离子交换树脂作为催化剂，其在进行酯化反应的充足条件下与反应混合物接触，所述反应混合物含有至少具有的游离脂肪酸的甘油三酯。同样，已知作为乙基酯获得EPA和DHA的方法，例如在文献US 5，679，809中，其描述了用于从多不饱和脂肪酸获得乙基酯浓缩物的程序，所述多不饱和脂肪酸优选为EPA和 DHA，所述方法包括在催化剂存在下，将含有脂肪酸的油与乙醇混合，从而形成脂肪酸的乙基酯，通过将其与尿素和乙醇混合分离其相，然后将其冷却直至产生固相，之后分离液相， 从中获得富含期望的多不饱和酸的级份。另一篇文献是EP 0347509 Al，其也采用尿素来分离饱和的脂肪酸和来自存在于海洋动物油中的剩余脂肪酸的多数单不饱和脂肪酸，所述文献中获得的最终产物为EPA和DHA的混合物。文献US 5734071使用和尿素类似的方法从鱼油中获得了含有EPA+DHA的产品，而ES 2018384以1 2至2 1的相对量制备了含有EPA和DHA的组合物，其中这些脂肪酸占总脂肪酸的75% (重量)，并且还有一种方法， 其使用通过用尿素分级的浓缩和分子蒸馏和/或在超严格条件或色谱法下用流体萃取。文献ES 2056852 T3还要求保护一种用于从鱼油中提取DHA的乙基酯的程序，其包括在硫酸存在下，用乙醇进行鱼油的酯转移反应，然后用己烷、硅胶色谱法进行萃取，在冷却至-40摄氏度的丙酮中处理残余物，过滤，蒸发丙酮，在0，133 下分两步进行分子蒸馏，其中第一步在80-100摄氏度下，第二步在105-125摄氏度下。 存在大量文献涉及将DHA用于不同需求状态和上文提及的疾病。例如，我们将提到文献CN1557453 (A)，其描述了一种提高记忆并改善认知的组合物，所述组合物包含千层塔、还阳草和50mg的鱼油浓缩物，其中DHA为活性物质。该文献强调，其加强信息在神经元突触连接之间的传递，改善对缺氧的耐受，稳定神经细胞的结构，并且给此类神经细胞提供必需营养物质。 此外，在不同文献中都提及DHA具有健康的有益性质，例如，作为用于人类大脑的营养物质和恢复智力(CN 1130040(A))。在JP 8098659(A)中，提到DHA作为酯或磷脂，具有抗压的改进效果。CN 1105205(A)描述了这样一种胶囊，其含有11_45%的纯DHA以及钙、 维生素和淀粉，从而补养大脑和活化智力。此外，文献ES 2277557 Al涉及DHA用于制备药物组合物的用途，所述药物组合物用于治疗氧化性细胞损伤。在本领域中，可以发现选择性分离和纯化EPA和DHA的文献。因此，文献EP 1065196 Al涉及从酸或酯的混合物中选择性分离和纯化EPA或DHA或它们的酯的方法，所述方法包括(a)将具有银盐的含水流体通过具有硅藻土的柱子，从而使银盐附着于硅藻土上；(b)使含有高度不饱和的脂肪酸或其衍生物的混合物的溶剂的溶液通过该具有硅藻土和银盐的柱子；以及(c)通过溶剂来分离期望的脂肪酸。文献US 6，846，942 B2涉及用于制备纯EPA和DHA的方法，所述方法包括a)将 DHA和EPA的混合物溶解于丙酮中，并加入镁离子，产生在丙酮中具有不同溶解性的EPA和 DHA ;b)冷却(a)中获得的溶液以沉淀EPA盐，c)过滤沉淀的EPA盐，以及d)酸化获得的沉淀物，从而获得纯EPA，以及e)从滤液中蒸发溶剂，以获得纯DHA。当EPA和DHA混合物获自鱼油时，首先进行醇解或皂化，从而将甘油三酯转化成游离酸。因此，仍存在对下述组合物的需求所述组合物应该不仅由于健康有效量(即高量的DHA)的DHA的存在而对膳食和健康有益，而且同时，其应该含有最少可能量的PhA，从而防止在摄入DHA时PhA的作用。

发明内容
因此，本发明的第一个目的是从海洋来源的油中获得富含ω-3脂肪酸的组合物的方法，所述ω-3脂肪酸具有低于90μ g/g的植烷酸水平，其中所述方法包括下述步骤a)皂化海洋来源的油，从而获得脂肪酸盐。b)酸化来自步骤a)的脂肪酸盐，从而获得酸化的油。c)在真空下，在10摄氏度的温度下，在甘油梯度中使来自步骤b)的酸化的油进行超离心。d)在0摄氏度至-57摄氏度的温度范围，使来自步骤c)的甘油梯度进行结晶，从而获得固相和液相，其中固相含有饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和PhA，而液相含有PhA含量低于90 μ g/g的多不饱和ω-3脂肪酸。e)从固相中分离来自步骤d)的液相，以通过倾析进行其回收。并且，所述方法包括另外的步骤，其中酯化所述ω-3脂肪酸以获得PhA含量低于 90 μ g/g的ω-3甘油三酯。在优选实施方式中，在惰性气氛下，在40摄氏度的温度下，采用Κ0Η、水和乙醇以 300rpm震摇混合物1小时而进行本发明目的的皂化步骤。在另一个优选实施方式中，在惰性气氛下以200rpm混合步骤(a)中获得的脂肪酸盐和70%的乙酸而进行酸化步骤b)。如果步骤c的超离心为等密度的，则意味着采用的超离心条件应该是IOOOOOg持续42小时。如果超离心为根据未平衡的密度梯度，则超离心条件应该是IOOOOOg持续M 小时。在另一个优选实施方式中，如果超离心步骤是等密度的，则在0摄氏度的温度下进行结晶步骤。在另一个优选实施方式中，如果超离心步骤是等密度的，则在-30摄氏度的温度下进行结晶步骤。在另一个优选实施方式中，如果超离心步骤是在未平衡的密度梯度的，则在-30摄氏度的温度下进行结晶步骤。本发明的第二个目的包括组合物，其根据第一发明中描述的方法获得，所述组合物具有范围为65% (重量)至99% (重量)的ω-3脂肪酸，所述ω-3脂肪酸具有低于 90 μ g/g的PhA含量；优选的，所述组合物具有范围为75% (重量)至99% (重量)的ω-3 脂肪酸含量；更优选的，其中所述ω-3脂肪酸占重量的至少90%。在另一个优选实施方式中，根据第一发明中描述的方法获得所述组合物，所述组合物具有范围为65% (重量)至99% (重量)的ω-3脂肪酸，所述ω-3脂肪酸具有低于 5 μ g/g的PhA含量；优选的，所述组合物具有范围为75% (重量)至99% (重量)的ω-3 脂肪酸含量；更优选的，其中所述ω-3脂肪酸占重量的至少90%。在另一个优选实施方式中，根据第一发明中描述的方法获得所述组合物，所述 ω-3脂肪酸包含范围为65% (重量)至95% (重量)的DHA，并且PhA含量低于90 μ g/g ； 优选地，具有75% (重量)至95% (重量)的DHA含量；更优选地，具有小于80% (重量) 的DHA含量。在另一个实施方式中，根据第一发明所述的方法获得所述组合物，所述ω-3脂肪酸包含范围为65% (重量)至95% (重量)的DHA，并且PhA含量低于5 μ g/g ；优选地，具有75% (重量)至95% (重量)的DHA含量；更优选地，具有至少80% (重量)的DHA含量。在另一个实施方式中，根据第一发明所述的方法获得所述ω-3脂肪酸组合物，所述ω-3脂肪酸组合物还包含范围为5% (重量)至35% (重量)的ΕΡΑ。在另一个优选实施方式中，根据第一发明所述的方法获得包含DHA的所述ω-3脂肪酸组合物，其还包含范围为5% (重量)至35% (重量)的ΕΡΑ。在优选实施方式中，根据第一发明所述的方法获得的所述组合物中，DHA的重量百分比为80. 65%, EPA的重量百分比为13. 38%，在所述组合物中的脂肪酸总重量中的百分比为 91. 75%。在优选实施方式中，根据第一发明所述的方法获得的所述组合物还包含辅因子、 提取物和/或用于药物或食品用途的活性物质。在优选实施方式中，根据第一发明所述的方法获得的所述组合物还包含用于药物或食品用途的赋形剂和/或佐剂。本发明的第三个目的涉及营养添加剂，其在可饮用形式、软或硬胶囊、水性乳液或粉末中含有在本发明的第二个目的中描述的组合物。本发明的第四个目的涉及食品，其在可饮用形式、软或硬胶囊、水性乳液或粉末中含有在本发明的第二个目的中描述的组合物。本发明的第五个目的涉及药物组合物，其包含富含ω-3脂肪酸的化合物或药学稀释剂或载体，所述富含ω -3脂肪酸的化合物根据本发明的第二个目的或者可以通过根据本发明的第一个目的的方法获得。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防过敏性病况、眼表面疾病和干眼症的药物组合物中的用途，所述疾病优选自眼睑炎、眼睑结膜炎、结膜炎、角膜炎、干燥性角膜结膜炎、角膜疾病，治疗角膜移植排斥，在LASIK(激光援助屈光角膜层状重塑术)术前和术后通过测厚提高平均细胞角膜密度。
本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防与遗传性营养不良无关的视网膜退行性疾病的药物组合物中的用途，所述疾病优选自与增龄变性有关的潮湿性或干燥性黄斑变性、糖尿病视网膜病变、青光眼、眼内压改变、 与近视有关的视网膜病变、视网膜脱落、LASIK后近视眼中孔源性视网膜脱落、缺血造成的继发性黄斑水肿、黄斑囊样水肿或欧文-加斯综合症、柏林(Berlin)盲点、脉络膜病、脉络膜视网膜炎、梅毒性视神经视网膜炎、麻疹、巨细胞病毒、脉络膜的恶性黑色素瘤、汞中毒 (水俣病、肢端痛、享-罗二氏征)、视网膜血管炎(伊尔斯氏病)、出血外伤性视网膜劈裂。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防非色素性视网膜炎的遗传性视网膜营养不良的药物组合物中的用途，所述疾病优选自 Margardt病(眼底黄斑点退化)、X-连锁的无脉络膜、先天性利伯氏黑蒙、X-连锁的视网膜劈裂症、Goldman-Favre高-凡氏(Goldman-Favre)玻璃体视网膜营养不良、瓦格纳 (Wagner)氏玻璃体视网膜营养不良、和斯蒂克勒(Stickler)氏综合症、睫状体平坦部炎。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防非色素性视网膜炎的药物组合物中的用途。本发明的第九个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防非色素性视网膜炎相关综合症的药物组合物中的用途。在优选实施方式中，所治疗的视网膜营养不良是非综合症的RP，其由于肝合成或 DHA转运中的特定突变和/或故障，或者由于代谢压力，并且优选自典型非全身性RP的所有孟德尔类型，例如区域嵌合体的、两侧的、单侧的、两侧的、反向的；常染色体显性RP;常染色体隐性RP ；X连锁的RP ；简单或偶发的RP ；玻璃体视网膜RP ；RP点状白变；不具有色素的RP ；脉络膜萎缩；脉络膜和/或视网膜萎缩；具有视锥细胞和视杆细胞营养不良的RP ； Usher综合症，如I、II、III、IV型；医源性RP，例如NP 207 ；甲硫哒嗪、CloroKine、羟氯喹、 氯丙嗪。在另一个优选实施方式中，所治疗的视网膜营养不良为具有过氧化物酶体缺陷的遗传性综合症，其具有RP和/或DHA缺乏和PhA和PA的提高，所述视网膜营养不良表现出可变的神经、心血管、肌肉骨骼和皮肤改变，并且优选自脑肝肾综合症、婴儿雷弗素姆氏疾病、新生儿肾上腺脑白质营养不良、过氧化物酶体生物发生异常、根茎软骨发育不全点状 (RCDP)、乙酰辅酶A氧化酶缺陷、双功能酶缺陷、雷弗素姆氏疾病、β -氧化缺陷、家族性鱼鳞癣样角化病(舍格伦-拉森综合症)。具有线粒体营养不良的疾病(复合物IV) :C0X缺陷、Leigh综合症。在另一个优选实施方式中，所治疗的视网膜营养不良为具有过氧化物酶体、 线粒体缺陷和/或与RP和相关的视网膜改变有关的遗传性综合症，并且优选自棘状红细胞-β-脂蛋白缺乏综合症(Bassen-kornzweig)综合症，巴氏或脂褐质症综合症，低β-脂蛋白血症，视网膜色素变性综合症(Usher综合症)，哈-斯二氏综合征 (Hallervorden-Spatz)综合症，无铜蓝蛋白血症，卡恩斯-塞尔综合征(Kearns-Sayre)综合症，达-柏氏肌肉营养不良，拉-姆-巴-贝氏(Lawrence-Moon-Bardet-Biedl)综合症， 拉-姆氏(Lawrence-Moon)综合症，巴-贝氏(Bardet-Biedl)综合症，拉格夫(Grafe)综合症，海氏(Hallgreen)综合症，科凯恩(Cokayne)综合症，阿氏(Alstrom)综合症，派-莫氏 (Pelizaeus -Merzbacher)Tg K 3 ] ^ciI ^E (Cerebelous Ataxy), ^ ft (FriederichAtax)综合症，脂褐素沉积病，家族性玛-艾氏综合征(maurotic idiopatic)泰-撒氏(Tay-^ichs)综合症，海-森氏(Haltia-Santavuori)综合症、贝-思-詹氏综合征 (Biel-Schowsky-Jansky)，沃-思-柏-麦氏(Vogt-Spielmeyer-Batten-Mayou)综合症，库氏(Kufs)综合症，骨神经内分泌发育不良，莫氏综合征(Mucopolisacaridosis)， 赫氏(Hurler)综合症，亨特(Hunter)综合症，斯氏(Scheire)综合症，MPS I-H/S，瑟氏 (Sanfilippo)综合症，巴-科(Bassen Kornzweig)综合症、黑视网膜发育不良，骨骼发育不良，若-欧-思科氏(renal-ocular-skeletic)综合症，爱德华兹(Edwards)综合症，与 X隐性连锁欧科(Oculocerebrorenal)或洛氏(Lowe)综合症，莱-凡氏(Lignac-Fanconi) 综合症(胱氨酸病)，巨大轴索型神经病，和/或家族性丹麦痴呆。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防葡萄膜炎或相关疾病的药物组合物中的用途，所述疾病优选自虹膜炎、扁平部睫状体炎、脉络膜炎、脉络膜视网膜炎、前部和/或后部葡萄膜炎、虹膜睫状体脉络膜炎、感染性葡萄膜炎例如布氏杆菌病、单纯疱疹病毒、带状疱疹、钩端螺旋体病、莱姆病、眼拟组织胞质菌病综合症、梅毒、弓蛔虫病、弓形体病、肺结核、念珠菌、葡萄膜炎综合症例如急性后部多灶性鳞状色素上皮病变、鸟枪弹样脉络膜视网膜病变、福斯氏异色虹膜睫状体炎、多灶性脉络膜炎和全葡萄膜炎综合症、多发性一过性白点综合症、点状内层脉络膜病变、匐行性脉络膜视网膜炎、与葡萄膜炎有关的全身性障碍例如强直性脊柱炎、白塞病、慢性肉芽肿、起止点炎、炎症性肠病、幼年类风湿病、风湿性关节炎、多发性硬化、结节性多动脉炎、银屑病关节炎、莱特尔氏病、结节病、系统性红斑狼疮、Vogt-小柳原田综合症、惠普尔病、前部和/或后部的伪装综合症例如成视网膜细胞瘤、视网膜脱落、恶性黑色素瘤、白血病、幼年性黄色肉芽肿、眼内异物伤、淋巴瘤、多发性硬化、网状细胞肉瘤。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防视网膜退行性疾病和与血管疾病有关的继发性眼科病况的药物组合物中的用途，所述疾病优选自高血压性视网膜病变；高压缺血性视神经病变；高血压病变(Hypertensive Choroidopaties)，例如脉络膜硬化、支静脉或中央静脉栓塞、艾氏和赛氏(Elschnig and Slegrist)条纹；粥状动脉硬化；脑和神经眼科缺血；主动脉弓综合症；主动脉弓综合症； 多发性大动脉炎；全身动脉炎；虹膜睫状体炎；巩膜炎；由缺血造成的视网膜前新血管化， 并且可导致玻璃体积血；角膜水肿；房水中炎性渗出物；增生性糖尿病性视网膜病变或新生血管性青光眼；颈动脉灌流不足或慢性眼部缺血；眼动脉堵塞；视网膜中心动脉堵塞；凝血障碍，例如蛋白S和C缺乏、潘氏视网膜炎(Panophtalmia retinitis)、脉络膜炎、派氏停滞病变(papilar stasis)；视网膜出血，例如罗恩(Roth斑)、免疫复合物造成的损伤、视神经病变；缺血性视网膜病变；眼肌麻痹、眼眶假瘤；眼部缺血综合症；枕叶梗死；复视；眼睑水肿；眼睑下垂；眼睑毛细血管扩张；结膜；视网膜；视网膜中央动脉急性堵塞；眼科或其分支；睫状后动脉堵塞，例如非动脉炎性的缺血性视神经病变、低灌注造成的慢性眼部缺血综合症和视力模糊或思-达氏(Shy-Drager)综合症。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防与视网膜或其它眼科用途无关的视觉灵敏度损失的药物组合物中的用途，所述疾病优选自白内障、玻璃体炎、玻璃体脱落、眼内炎、远视、近视和/或老花眼。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防神经和/或精神障碍的药物组合物中的用途，特别是神经退行性疾病，优选自遗传性运动和感觉性神经病、运动失调、痉挛状态、视神经炎、阿尔茨海默氏病、痴呆、原发性注意不足、抑郁、双相和分裂障碍、多发性硬化和/或肌萎缩性侧索硬化症。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防癌性疾病的药物组合物中的用途，所述疾病优选自转移和最为普遍的肿瘤系、结肠直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、艾氏(esofagic)癌、胰腺癌、肾癌、肝癌、脑癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、视网膜神经胶质瘤、胆囊、多发性骨髓瘤、内分泌癌和/或与对胰岛素抗性有关的癌症。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防肾病(肾炎和肾病)的药物组合物中的用途，所述疾病优选自IgA肾病、与全身性红斑狼疮有关的肾病、肾功能不全、肾小球疾病、肾小管病、间隙组织和/或肾血管病。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防心血管疾病的药物组合物中的用途，所述疾病优选自缺血改变、动脉硬化、高甘油三酯血症、高脂血症、室性心律失常、高血压、糖尿病和/或其中脱辅基蛋白a(载脂蛋白(a)) 水平提高的心血管疾病。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防医源性疾病的药物组合物中的用途，所述疾病优选自横纹肌溶解症、肝脏毒性、心脏毒性、神经毒性、水肿、脂肪营养不良、和/或与他汀类、类皮质激素类、免疫抑制、抗逆转录病毒药和/或免疫抑制剂有关的免疫抑制。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防纤维肌痛和/或慢性疲劳综合症的药物组合物中的用途。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防关节病和骨质疏松的药物组合物中的用途。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防自身免疫疾病、慢性炎性和骨骼肌肉疾病的药物组合物中的用途，所述疾病优选自类风湿关节炎、幼年型关节炎、肖各伦病(Sjogren disease)、强直性脊柱炎、全身性红斑狼疮、关节病、骨质疏松。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防皮肤病的药物组合物中的用途，所述疾病优选自雄激素性脱发、酒糟鼻、痤疮、湿疹和 /或银屑病。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防过敏性病况、哮喘和/或慢性呼吸性疾病的药物组合物中的用途。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防呼吸系统疾病和炎性肠病的药物组合物中的用途，所述疾病优选自自身免疫、病毒和 /或毒性的、胃炎、食管炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、假膜性结肠炎、胶原性结肠炎、小肠通透性改变、消化吸收不良综合症、食物不耐受和过敏症和/或痔核本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防寄生虫和感染性疾病的药物组合物中的用途。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物在制备用于治疗或预防DHA不足的药物组合物中的用途。在优选实施方式中，此类不足由小肠吸收不良综合症造成，其选自囊肿性纤维化、小肠吸收不良综合症、胰腺炎、胰功能不全和/或胆石病。 在另一个优选实施方式中，DHA不足由消化道障碍造成，其选自厌食症和/或易饥症。在第三个优选实施方式中，本发明目的的化合物涉及补充在人类社会中观察到的常见营养DHA 缺乏，优选在怀孕妇女、哺乳妇女和优选在出生第一年期间的儿童。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物作为其它药物的辅因子或辅佐剂以降低其次生效应和/或提高其治疗活性的用途，当与他汀类、抗炎药、类皮质激素、免疫抑制剂、抗高血压药共同使用时治疗高血脂、抗炎、治疗自身免疫疾病、过敏、 治疗移植器官排斥和/或抗高血压。本发明的另一个目的涉及根据本发明的第二个目的的化合物用于改善生理情况的用途，从而提高视觉灵敏度、记忆和认知功能，提高运动表现和降低损伤和/或降低正常神经肌肉疲劳。


图1.在不同PhA浓度(蓝色)和Bcl-2/Bax指数(绿色)下，DHA对百草枯体外诱导的光感受体细胞凋亡(％)的抑制能力。红色线示出了不用DHA处理的细胞凋亡程度。 在此实验中，可以明显看到具有< 5 μ g/g的PhA的DHA油比具有较大浓度的那些油具有更大的细胞凋亡抑制活性，并且产生的氧化压力也比较小。这确定了体外DHA < 5 μ g/g作为细胞凋亡抑制剂对治疗视网膜营养不良具有较高的生理活性。图2.在不同PhA浓度(蓝色)和Bcl-2/Bax指数(绿色)下，DHA对MNU体内诱导的光感受体细胞凋亡的抑制能力。红色线示出了不用DHA处理的细胞凋亡程度。此实验证实了体外观察结果，证明口服摄入具有< 5 μ g/g的PhA的DHA作为细胞凋亡抑制剂对口服治疗视网膜营养不良具有较高的生理活性。图3.此图显示了在进行研究时市场上的主要公司和产品，以及市场上可见的具有最低PhA水平的那些产品。对于多数制造商，这些产品的质量和方法得到保障，满足根据欧洲药典和FDA的食品和药品GMP，得到用于营养用途的明确批准。它们是专利的目的，并且在人类研究中进行了系统地研究。可以看到，不同纯度DHA的商业油含有高水平的PhA， 不论DHA纯度而明显不同。图4.在不具有综合症且具有DHA <5μβ/πι1的患者中PhA水平的降低。此图示出 11位具有无相关综合症的RP的患者采用含有PhA < 5 μ g/g的DHA的变化，所述患者事先用含有PhA彡5 μ g/g的DHA进行过治疗。在此图中，可以看到具有RP且具有PhA彡5 μ g/ g水平的DHA的患者提高了他们PhA的水平(TO)，显示当摄入含有PhA < 5 μ g/g的DHA时 PhA水平显著降低。这证实了含有PhA < 5 μ g/g的DHA可安全用作具有RP的患者的治疗剂。图5.通过DSC (差量扫描量热法)对PhA的两种非对映异构体的熔点(FP)的计算。DSC方法是一种热分析技术，其区分提高样品温度所需的热。该技术的主要功能是研究相转变或物理状态如熔点(MP)。该技术显示具有消除MP的极大灵敏性。对于本发明，由于世界市场上无法获得，因此已经为PhA的每种异构体制备了 2个标准物。
纯化了来自金枪鱼的PhA。该图显示了从来自金枪鱼的富含DHA( > 700mg/g)的油中分离的含有>96. 5%的PhA的样品的MP。进行了 DSC，并发现2个明显不同的峰。为了进行研究，将其在-50摄氏度结晶，分离2个相，通过GC-MS分析，表明它们是PhA的2个级分。再重复DSC技术一次，通过纯化，分离的每个相都可见在-45摄氏度和-65摄氏度的单峰。通过结晶学，证实并检查到异构体PhA (3S)具有-45摄氏度的MP，而PhA (3R)具有-65摄氏度的MP。以此方式，通过DSC，可以开发出进行PhA的2种异构体的定量分析的简单方法。 这使得可以证实，可以就选择本发明中PhA的最有效分离，对PhA(3 进行评估。不排除将来用于从富含DHA和ω-3的油的不同样品中分离PhA的其它方法。如本发明中所述，所述两种异构体在人类健康中显示出不同的生理病理活性。通过该分析对异构体进行确定将是具有重要意义的流行病学、临床和营养标志物，从而在癌症和来自主导(3R)的毒性中测定其它分子标志物如AMACAR(与3S有关，而与3R无关)的活性。图6.密度分级结晶(FCD)。在富含ω-3的粗油的密度平衡梯度或等密度中进行分级。级分(a)绿色，级分(b)蓝色，级分(c)橙色。此图显示当将油暴露给等密度离心时脂肪酸级分的形成。对应于起始点所用的油中的最大密度的ω-3脂肪酸(级分c)在转子轴的最远端进行分级，而具有较低密度的级分a和b较接近转子轴。梯度以及级分a和b的结晶使得能够分离液相，其中ω-3脂肪酸保留在级分c中。
具体实施例方式本发明涉及用于获得含有水平低于90μ g/g油的植烷酸的丰富ω-3脂肪酸的方法。具体而言，本发明提供了用于分离处理海洋动物、微生物和藻类中存在的ω-3脂肪酸的方法，其通过温度梯度，冷却该提取物直至形成浓缩了 PhA以及饱和和单不饱和脂肪酸的固相，以及浓缩了基本上不含PhA的ω-3脂肪酸、优选DHA的液相。所述方法可以用于获得和纯化自然中存在的任何高度不饱和的脂肪酸。常规上，用于获得基本上不含PhA的ω -3脂肪酸、优选DHA的油要尽可能新鲜，从而避免可能的脂肪酸降解或氧化。大多数鱼类(基本上为油性鱼类)、单细胞藻类培养物和磷虾最初被认为是ω-3的主要来源。然而，还可以从其它海洋来源(即金枪鱼、鳕鱼、大马哈鱼、沙丁鱼、鲑鱼、鲸鱼、海豹、鲨鱼、非单细胞藻类等)、细菌来源和真菌获得ω-3。除了海洋来源，最有价值的来源是具有微生物来源的那些(得自受控培养和发酵器)，其含有更高水平的PhA和类异戊二烯。尚未利用的一些物种(即迪氏(Diatomea)海藻)将引起作为PhA产生者的极大兴趣，如鳕鱼肝油将是姥鲛烷的来源。将来，我们可以利用来自基因修饰的动物、植物、微生物和/或真菌物种的油，所述物种作为提高ω-3产量(特别是DHA) 的来源物质。PhA水平在养殖和野生鱼中都高。本发明的主题方法由若干阶段组成，尽管其中部分是任选的1.预精炼(任选)此阶段的目的是去除不可皂化的脂肪。其可专门应用于非精制的粗原料，例如粗鱼油。
2.甘油三酯和酯水解此阶段的目的是允许用于从油获得脂肪酸的过程。水解可以是a)皂化+酸解，或b)通过酯酶水解。皂化过程可以形成脂肪酸盐。酸化将形成非极性游离脂肪酸(酸化油)的相以及打开反应器底部而去除的盐的极性相。3.离心(等密度或非等密度)在此阶段中，通过甘油梯度使上阶段获得的酸化油进行超离心。超离心可以是等密度的或通过非平衡密度梯度。当离心为等密度时，通过使用甘油梯度的密度梯度进行分级结晶，从而形成平衡。如果离心后甘油梯度的温度在0摄氏度急剧降低，获得3个级分2个固体——其一具有饱和脂肪酸；第二个具有不饱和脂肪酸和PhA，并且这2个被去除；以及具有多不饱和脂肪酸的第三液体级分，含有65% -99%的ω-3酸和65% -85%的DHA水平，以及小于 90 μ g/g 的 WiA。使用甘油梯度可以将温度降低至-30摄氏度M小时，结果为获得2个相固相，其含有饱和和单不饱和脂肪酸、PhA和甘油梯度；以及液相，其含有多不饱和脂肪酸，后者具有65% -99%的ω-3脂肪酸水平和含有小于90 μ g/g的PhA的65% -85%的DHA水平。如果离心是非等密度的，应将温度急剧降低至-30摄氏度甘油梯度，从而产生2个级分固体级分，其含有饱和和单不饱和脂肪酸以及PhA ；以及液相，其含有多不饱和脂肪酸，后者具有65% -99%的ω-3脂肪酸水平和含有小于90 μ g/g的PhA的65% -85%的 DHA水平。4.游离脂肪酸的酯化目标是将游离脂肪酸稳定为酯和乙基酯或者甘油三酯(将为第一终产物)。在油纯化过程中，不分离PhA，除非为此目的而稳定特定的相，这是由于PhA(C20) 的物化性质类似于长链ω-3脂肪酸(C ^ 18) :PF、熔点、皂化值、碘指数、水和其它溶剂中的溶解性、对溶剂的极性、旋光性等。作为对照研究，DHA和PhA具有相同对2个)键受体和供体(1个)的值、自由旋转键(14个)、极性表面积3A2)、在25摄氏度的水溶解性 (0.001)和比较分子体积(347.0相比354.8cm3)、分子量(328. 49相比312. 53)，蒸发焓 (77. 28 相比 74. 2kj/mol)、极性(41.97 10_M 相比 38. 09 10_24)、折射率(1. 52 相比 1. 454)。 在所有的脂肪酸中，PhA、PA、EPA、DHA、SDA具有最低的PF，为-40摄氏度至-80摄氏度。基于使用尿素复合物对饱和脂肪酸的皂化和降低从而去除皂化产物和去除饱和脂肪中的硬脂，提高了 PhA在富含ω -3级分中的浓度。在精制鱼油中，所分析的所有情况都显示了 PhA浓度的提高(> 0. )，仅在获得高纯度DHA ( > 700mg/g)的某些程序中，降低了最初精炼和纯化程序中的前述提高(< 0. )(图幻。这表明用鱼油进行的所有精炼和纯化程序(即最大值DHA < 200mg/g)，PhA都没有被去除，并且相反，鉴于PhA具有与见于ω-3中的高度类似的物化性质(而非将其与饱和脂肪酸的其余种类相比时的情况)， ω-3浓度水平的提高产生了 PhA成比例提高。尿素复合物的形成和这些复合物结晶的方法变化在专利(W01995/011216)中，并由于其极大工业应用而优化，并且广泛用于鱼油纯化过程。已证明这些程序中在形成尿素复合物中乙醇-尿素反应引起氨基甲酸乙酯或氨基甲酸乙酯(urethan，EC)的形成，并且其存在于纯化的油中。氨基甲酸乙酯于超过150年前发现，已知是致癌剂，并且如FDA成员喀纳斯(Canas)和Yurawecz编辑所称，其处于FDA (食品和药品监督管理局)的研究之下，自 1980年以来是环境危险物质列表中的成员(CERCLA)。因此，本发明提供了对于当前脱臭和纯化过程的改进结果，避免了在工业中频繁但并不理想的过程的使用，所述过程例如脱臭 (高温)，和用尿素的纯化和精炼程序，其明显不足且不推荐用于PhA去除。专利中，通常在超过-5摄氏度的温度下采用冷却精炼和纯化过程，并且在一些情况中，在低至-20摄氏度的温度进行。然而，这样的用于分离饱和脂肪酸的可用程序并不适用于PhA，原因在于其会在ω-3级分中浓缩，因为EPA、DHA、PhA和PA分别具有约- 摄氏度、"43摄氏度、-65摄氏度和-80摄氏度的PF。PhA和PA是见于鱼油中与ω-3脂肪酸类似的甘油三酯的部分。目前，通常使用酶促水解过程；其是浓缩ω-3脂肪酸并且特别是DHA的选择性酯化反应。长时间以来，证实了在PhA的所有生物学中，如见于DHA和其它PUFA，其具有位于甘油三酯和磷脂的第2位碳上的趋势；还已知PhA和DHA以及其它ω-3对皂化和酶促水解具有相同的抗性。胰腺酯酶水解短链脂肪酸要比水解长链脂肪酸快，而PhA、PA、DHA、EPA作用非常慢，因此对酯解具有抗性(Brocherhoff，1970 年；ElIingboe & Steinberg，1972 年)。由于 PhA、PA、DHA 和 EPA 的类似的硬脂酸效应，这样的抗性类似于在DHA和PhA上发现的抗性(Nus等人，2006年)。 更严重的，使用酶促过程和其它程序一样，可以提高PhA的水平。例如完全水解的过程和非特异酯酶和皂化和催化固体水解一样有效，并不改变PhA水平。出于这些原因，不存在分离具有ω-3和DHA的油中的PhA而不改变油组成(或者通过精炼过程)的方法，因此需要这样一种用于分离PhA的特定方法。图3显示了用于获得基本上纯的DHA( > 700mg/g)的方法，造成对于本发明的目的并不有效的变化。色谱方法可能是最佳选择，并且尽管其不特定用于分离PhA，其实际上用于获得基本上纯的DHA。对于以合理成本分离PhA和PA，现今通过色谱法进行的工业分离方法并不足够灵敏，发现水平在本发明的所需范围之外，随着其产生于分子蒸馏中，在相同时间具有苯并芘水平提高的较高风险(由于使用高温)。最突出的色谱方法(即SFC)基于极性和硬脂酸效应。强度吸收不仅取决于极性、洗脱时间和分子官能团特性，还取决于硬脂酸因子。如之前所述，相比EPA和其它脂肪酸，PhA和DHA具有的硬脂酸功能、分子量等更为接近DHA。鉴于PhA的低浓度，并考虑在所有DHA纯化过程中EPA也有相当地提高，发现表明下述情况的分析并不令人吃惊同样不适当地存在PhA，并且在某些情况中，其存在在所有金枪鱼油中达到升高水平，金枪鱼油中含有700mg/g并通常可见400 μ g/g的水平， 而可见专利水平下的其它方法高于1500 μ g/g(> 0.1%)，这表明了比粗油(金枪鱼)中可见的更高PhA水平。鉴于具有色谱分析级的常规研究中PhA的低浓度(< 0. )，并没有测定PhA和 PA。为此目的，需要改变色谱技术(GC)，以高得多的敏感水平用于PhA的特异检测。鉴于PhA和DHA的物化特性，需要改变此技术至非常高的纯度水平，以非常昂贵的成本从而降低PhA。由此方法且无需投入以及需要的工业技术，已经从实验室色谱技术和从分子蒸馏从鱼油(特别是从金枪鱼，因为其具有最高浓度水平的DHA)中纯化了 DHA，直至获得了 830mg/g，而可见平均值为57 μ g/g的PhA水平，显示出高可变性(+31 μ g/g)。就此， 特定工业DHA纯化方法并不有效去除鱼油中存在的PhA。
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在摄入具有高纯度DHA水平的油和较低PhA摄入之间存在间接关系，其原因基本在于存在的这一几何事实从较低纯度的油中摄取较高量的油，从而获得相同的DHA量。就此而言，高纯度的商业产品并不带来PhA水平的任何降低。用于精炼或纯化DHA和ω-3脂肪酸的方法之间的差别非常大(图3)，尽管它们都具有比期望的更高的浓度水平。此本发明而言，已经开发了用于分离PhA的特定方法，其应该在最初的阶段或者精炼阶段进行，从而获得含有所有DHA纯度水平和/或不同ω -3组合的油，从而获得丰富的DHA和ω-3油，其具有非常低的PhA或甚至不含PhA(检测限值5 μ g/ml)。因此，此方法可以适用于所有工业过程以及具有不同纯度水平的产品。本发明还表明，为了获得低PhA的油或不含PhA的油，无需再纯化一种或多种脂肪酸，或者改变油的天然组成。当使用ω-3脂肪酸的天然混合物用于食品或健康目的时，这是特别相关的。该方法还是一种有利方法，因为不再需要ω-3脂肪酸的脱臭和纯化过程， 从而相比目前进行的方法，获得风险更小的食品和药物级。本发明涉及一种用于从富含ω-3的来源中物理地分离见于含有> 5μ g/gPhA/g 且富含ω-3脂肪酸的酯的任何油中的PhA，用于大规模工业生产DHA、EPA或其它ω-3脂肪酸，所述富含ω-3的来源例如鱼、藻类或具有低水平至零水平的PhA的其它微生物。此方法采用结晶从而获得油的物理状态的改变，将PhA和PA保持在液相中，其原因在于，PhA和PA具有的MP要显著低于DHA和ω -3脂肪酸或任何其它脂肪酸。表1.在大气压下进行的最显著的脂肪酸的实验性MP的参照值
权利要求
1.一种用于从海洋来源的油中获得富含ω-3脂肪酸的组合物的方法，其中，所述ω-3 脂肪酸的PhA含量低于90 μ g/g,所述方法包括下述步骤a)皂化海洋来源的油，从而获得脂肪酸盐；b)酸化所述来自步骤a)的脂肪酸盐，从而获得酸化的油；c)在真空07Pa)下，在10摄氏度的温度下，在甘油梯度中对所述来自步骤b)的酸化的油进行超离心；d)在0摄氏度至-57摄氏度的温度范围，使所述来自步骤c)的甘油梯度进行结晶，从而获得固相和液相，其中所述固相含有饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和PhA，而所述液相含有PhA含量低于90 μ g/g的多不饱和ω -3脂肪酸；e)从所述固相中分离所述来自步骤d)的液相，以通过倾析进行回收。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法还包括另外的步骤，在该步骤中酯化所述ω-3脂肪酸以获得PhA含量低于90 μ g/g的ω-3甘油三酯。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，在惰性气氛下，在40摄氏度的温度下，采用Κ0Η、 水和乙醇以300rpm震摇混合物1小时而进行所述步骤a)的皂化。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，在惰性气氛下以200rpm混合所述步骤a)中获得的脂肪酸盐和70%的乙酸而进行所述步骤b)的酸化。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤c)的超离心是等密度的，并且以 IOOOOOg持续进行42小时。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤c)的超离心在未平衡的密度梯度中进行，并且以IOOOOOg持续进行M小时。
7.根据权利要求5所述的方法，其中在0摄氏度下进行所述结晶步骤d)。
8.根据权利要求5所述的方法，其中在-30摄氏度下进行所述结晶步骤d)。
9.根据权利要求6所述的方法，其中在-30摄氏度下进行所述结晶步骤d)。
10.根据前述任一项权利要求可获得的组合物，其特征在于，所述组合物包含范围为65% (重量)至99% (重量)的ω-3脂肪酸且所述ω-3脂肪酸的PhA含量低于90 μ g/g°
11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述PhA含量低于5μ g/g。
12.根据权利要求10-11所述的组合物，其中所述ω-3脂肪酸的含量范围是75%(重量)至99% (重量)。
13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述ω-3脂肪酸的含量范围是90-99%(重量)O
14.根据权利要求10-13中任一项所述的组合物，其中所述ω-3脂肪酸包含65%(重量)至95% (重量)的DHA。
15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述DHA的含量范围为75%(重量)至95%(重量)。
16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述DHA的含量范围为80-95%(重量)。
17.根据权利要求10-16中任一项所述的组合物，其中所述ω-3脂肪酸还包含范围为 5% (重量)至35% (重量)的ΕΡΑ。
18.根据权利要求10-17中任一项所述的组合物，其中所述DHA的含量为80.65% (重量)，所述EPA的含量为13. 38 % (重量)，并且所述组合物中的脂肪酸总重量为91. 75 %(重量)。
19.根据权利要求10-18中任一项所述的组合物，还包含用于药物和食品用途的赋形剂和/或佐剂。
20.营养添加剂，其含有饮品、软或硬胶囊、水性乳液或粉末形式的根据权利要求 10-19中任一项所述的组合物。
21.食品，其含有饮品、软或硬胶囊、水性乳液或粉末形式的根据权利要求10-19中任一项所述的组合物。
22.药物组合物，其包含富含ω-3脂肪酸的化合物和/或药学稀释剂或载体，其中，所述富含ω-3脂肪酸的化合物是根据权利要求10至19中任一项所述的、或者能够通过根据权利要求1至9中任一项所述的方法获得。
23.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防眼中、眼表面的过敏性病况和/或干眼症的药物组合物中的用途。
24.根据权利要求23所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自眼睑炎、眼睑结膜炎、结膜炎、角膜炎、干燥性角膜结膜炎、角膜疾病，治疗角膜移植排斥，在LASIK(激光援助屈光角膜层状重塑术)术前和术后通过测厚提高平均细胞角膜密度。
25.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防与遗传性营养不良无关的视网膜退行性疾病的药物组合物中的用途。
26.根据权利要求25所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自与增龄有关的潮湿性和干燥性黄斑变性、糖尿病视网膜病变、青光眼、眼内压改变、与近视有关的视网膜病变、 视网膜脱落、LASIK后近视眼中孔源性视网膜脱落、缺血造成的继发性黄斑水肿、黄斑囊样水肿、欧文-加斯综合症、柏林盲点、脉络膜病、脉络膜视网膜炎、梅毒性视神经视网膜炎、 麻疹、巨细胞病毒、脉络膜的恶性黑色素瘤、汞中毒(水俣病、肢端痛、享-罗二氏征)、视网膜血管炎(伊尔斯氏病)、或出血外伤性视网膜劈裂。
27.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防非色素性视网膜炎的遗传性视网膜营养不良的药物组合物中的用途。
28.根据权利要求27所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自眼底黄斑点退化、 先天性利伯氏黑蒙、X-连锁的无脉络膜、X-连锁的视网膜劈裂症、高-凡氏玻璃体视网膜营养不良、瓦格纳氏玻璃体视网膜营养不良、和斯蒂克勒氏综合症、睫状体平坦部炎。
29.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防非色素性视网膜炎的药物组合物中的用途。
30.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防非色素性视网膜炎相关综合症的药物组合物中的用途。
31.根据权利要求30所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自非综合症的RP，其由于肝合成或DHA转运中的特定突变和/或故障，或者由于代谢压力，典型非全身性RP的所有孟德尔类型，区域嵌合体的非全身性RP、两侧的非全身性RP、单侧的非全身性RP、两侧的非全身性RP、反向的非全身性RP，常染色体显性RP，常染色体隐性RP，X连锁的RP，简单或偶发的RP，玻璃体视网膜RP，RP点状白变，不具有色素的RP，脉络膜萎缩，脉络膜和/或视网膜萎缩，具有视锥细胞和视杆细胞营养不良的RP，Usher综合症I型，Usher综合症II型、Usher综合症III型，Usher综合症IV型，医源性RP,例如NP 207，甲硫哒嗪，CloroKine, 羟氯喹，氯丙嗪；具有过氧化物酶体缺陷的遗传性综合症，与RO相关且具有PhA和PA的提高，表现出可变的神经、心血管、肌肉骨骼和/或皮肤改变，脑肝肾综合症、婴儿雷弗素姆氏疾病、新生儿肾上腺脑白质营养不良、过氧化物酶体生物发生异常、根茎软骨发育不全点状 (RCDP)、乙酰辅酶A氧化酶缺陷、双功能酶缺陷、雷弗素姆氏疾病、β -氧化缺陷、家族性鱼鳞癣样角化病，舍格伦-拉森综合症，具有线粒体营养不良的疾病，COX缺陷和/或Leigh 综合症，具有过氧化物酶体、线粒体缺陷和/或与RP和相关的视网膜改变有关的遗传性综合症，棘状红细胞-β-脂蛋白缺乏综合症(Bassen-kornzweig)综合症，巴氏或脂褐质症综合症，低β-脂蛋白血症，视网膜色素变性综合症(Usher综合症)，哈-斯二氏综合征 (Hallervorden-Spatz)综合症，无铜蓝蛋白血症，卡恩斯-塞尔综合征(Kearns-Sayre)综合症，达-柏氏肌肉营养不良，拉-姆-巴-贝氏(Lawrence-Moon-Bardet-Biedl)综合症， 拉-姆氏(Lawrence-Moon)综合症，巴-贝氏(Bardet-Biedl)综合症，拉格夫(Grafe)综合症，海氏(Hallgreen)综合症，科凯恩(Cokayne)综合症，阿氏(Alstrom)综合症，派-莫氏 (Pelizaeus -Merzbacher)TgK3 ]^ciI^E (Cerebelous Ataxy) , (FriederichAtax)综合症，脂褐素沉积病，家族性玛-艾氏综合征(maurotic idiopatic)泰-撒氏(Tay-^ichs)综合症，海-森氏(Haltia-Santavuori)综合症、贝-思-詹氏综合征 (Biel-Schowsky-Jansky)，沃-思-柏-麦氏(Vogt-Spielmeyer-Batten-Mayou)综合症，库氏(Kufs)综合症，骨神经内分泌发育不良，莫氏综合征(Mucopolisacaridosis), 赫氏(Hurler)综合症，亨特(Hunter)综合症，斯氏(Scheire)综合症，MPS I-H/S，瑟氏 (Sanfilippo)综合症，巴-科(Bassen Kornzweig)综合症、黑视网膜发育不良，骨骼发育不良，若-欧-思科氏(renal-ocular-skeletic)综合症，爱德华兹(Edwards)综合症，与 X隐性连锁欧科(Oculocerebrorenal)或洛氏(Lowe)综合症，莱-凡氏(Lignac-Fanconi) 综合症(胱氨酸病)，巨大轴索型神经病，和/或家族性丹麦痴呆。
32.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防葡萄膜炎和相关疾病的药物组合物中的用途。
33.根据权利要求32所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自虹膜炎、扁平部睫状体炎、脉络膜炎、脉络膜视网膜炎、前部和/或后部葡萄膜炎、虹膜睫状体脉络膜炎、感染性葡萄膜炎、布氏杆菌病、单纯疱疹病毒、带状疱疹、钩端螺旋体病、莱姆病、眼拟组织胞质菌病综合症、梅毒、弓蛔虫病、弓形体病、肺结核、念珠菌、葡萄膜炎综合症、急性后部多灶性鳞状色素上皮病变、鸟枪弹样脉络膜视网膜病变、福斯氏异色虹膜睫状体炎、多灶性脉络膜炎和全葡萄膜炎综合症、多发性一过性白点综合症、点状内层脉络膜病变、匐行性脉络膜视网膜炎、与葡萄膜炎有关的全身性障碍例如强直性脊柱炎、白塞病、慢性肉芽肿、起止点炎、 炎症性肠病、幼年类风湿病、风湿性关节炎、多发性硬化、结节性多动脉炎、银屑病关节炎、 莱特尔氏病、结节病、系统性红斑狼疮、Vogt-小柳原田综合症、惠普尔病、前部和/或后部的伪装综合症例如成视网膜细胞瘤、视网膜脱落、恶性黑色素瘤、白血病、幼年性黄色肉芽肿、眼内异物伤、淋巴瘤、多发性硬化和/或网状细胞肉瘤。
34.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防视网膜退行性疾病和与血管疾病有关的继发性眼科病况的药物组合物中的用途。
35.根据权利要求34所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自高血压性视网膜病变、高压缺血性视神经病变、高血压病变(Hypertensive Choroidopaties)、脉络膜硬化、 支静脉或中央静脉栓塞、艾氏和赛氏(Elschnig and Slegrist)条纹、粥状动脉硬化、脑和神经眼科缺血、主动脉弓综合症、多发性大动脉炎、全身动脉炎、虹膜睫状体炎、巩膜炎、 由缺血造成的视网膜前新血管化并且可导致玻璃体积血、角膜水肿、房水中炎性渗出物、 增生性糖尿病性视网膜病变或新生血管性青光眼、颈动脉灌流不足或慢性眼部缺血、眼动脉堵塞、视网膜中心动脉堵塞、凝血障碍、蛋白S和C缺乏、潘氏视网膜炎(Panophtalmia retinitis)、脉络膜炎、派氏停滞病变(papilar stasis)；视网膜出血、罗恩(Roth)斑、免疫复合物造成的损伤、视神经病变、缺血性视网膜病变、眼肌麻痹、眼眶假瘤、眼部缺血综合症、枕叶梗死、复视、眼睑水肿、眼睑下垂、眼睑毛细血管扩张、结膜、视网膜、视网膜中央动脉急性堵塞、眼科或其分支、睫状后动脉堵塞、非动脉炎性的缺血性视神经病变、低灌注造成的慢性眼部缺血综合症和/或视力模糊或思-达氏(Shy-Drager)综合症。
36.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防与视网膜无关的视觉灵敏度损失的、或用于不涉及眼表面的其它眼科用途的药物组合物中的用途。
37.根据权利要求36所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自白内障、眼内炎、近视、远视、玻璃体炎、玻璃体脱落和/或老花眼。
38.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防神经和/或精神障碍的药物组合物中的用途。
39.根据权利要求38所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自特别是遗传性运动和感觉性神经病、痴呆、阿尔茨海默氏病、多发性硬化和/或运动失调。
40.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防癌性疾病的药物组合物中的用途。
41.根据权利要求40所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自转移、最为普遍的肿瘤系、结肠直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、艾氏(esofagic)癌、胰腺癌、 肾癌、肝癌、脑癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、视网膜神经胶质瘤、胆囊、多发性骨髓瘤、内分泌癌和/或与对胰岛素抗性有关的癌症。
42.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防肾病的药物组合物中的用途。
43.根据权利要求42所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自IgA肾病和/或与全身性红斑狼疮有关的肾病、肾功能不全、肾小球疾病、肾小管病、间隙组织和/或肾血管病。
44.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防心血管疾病的药物组合物中的用途。
45.根据权利要求44所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自缺血改变、动脉硬化、高甘油三酯血症、高脂血症、室性心律失常、高血压、糖尿病和/或其中脱辅基蛋白a(载脂蛋白(a))水平提高的心血管疾病。
46.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防医源性疾病的药物组合物中的用途.
47.根据权利要求46所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自横纹肌溶解症、肝脏毒性、心脏毒性、神经毒性、水肿、脂肪营养不良、和/或与他汀类、类皮质激素类、抗逆转录病毒药和/或免疫抑制剂有关的免疫抑制。
48.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防纤维肌痛和 /或慢性疲劳综合症的药物组合物中的用途。
49.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防关节病和骨质疏松的药物组合物中的用途。
50.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防自身免疫疾病、慢性炎性和/或骨骼肌肉疾病的药物组合物中的用途。
51.根据权利要求50所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自类风湿关节炎、幼年型关节炎、肖格伦氏病、强直性脊柱炎、全身性红斑狼疮、关节病和/或骨质疏松。
52.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防皮肤病的药物组合物中的用途。
53.根据权利要求52所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自雄激素性脱发、酒糟鼻、痤疮、湿疹和/或银屑病。
54.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防过敏性病况、 哮喘和/或慢性呼吸性疾病的药物组合物中的用途。
55.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防呼吸系统疾病和/或炎性肠病的药物组合物中的用途。
56.根据权利要求55所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自自身免疫、病毒和 /或毒性胃炎、食管炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、假膜性结肠炎、胶原性结肠炎、小肠通透性改变、消化吸收不良综合症、食物不耐受和过敏症和/或痔核。
57.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防寄生虫和感染性疾病的药物组合物中的用途。
58.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防DHA不足的药物组合物中的用途。
59.根据权利要求58所述的化合物的用途，其中所治疗的疾病选自小肠吸收不良综合症、囊肿性纤维化、小肠吸收不良综合症、胰腺炎、胰功能不全、胆石病、营养障碍、厌食症、 易饥症。
60.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于治疗或预防在人类社会、 怀孕妇女、哺乳妇女和/或儿童中观察到的常见营养DHA缺乏的药物组合物中的用途。
61.根据权利要求10至19中任一项所述的化合物在制备用于改善生理情况的药物组合物中的用途，从而提高视觉灵敏度、记忆和认知功能，提高运动表现和降低损伤和/或降低正常神经肌肉疲劳。
全文摘要
本发明涉及获得富含ω-3脂肪酸的组合物的方法，该ω-3脂肪酸的植烷酸含量低于90μg/克油。本发明还涉及获得富含DHA且植烷酸含量低于90μg/克油的组合物，更具体地，DHA为650-950mg/g，即，65％(重量)至95％(重量)且PhA的值为每克形成所述组合物的油的低于90μg、优选低于5μg。获得的组合物由于其预防作用和治疗效果而用于食品添加、营养产品和药物产品领域。
文档编号C11C1/08GK102438468SQ200980158786
公开日2012年5月2日 申请日期2009年4月17日 优先权日2009年4月17日
发明者何塞·曼纽尔·塞拉洛佩兹 申请人:赛拉维斯塔制药有限公司