一种由侧孢芽孢杆菌制备的微生物肥料及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种由新的侧抱芽抱杆菌制备的微生物肥料W及其制备方法，属于微 生物肥料领域。
【背景技术】
[0002] 我国人口多、耕地少，且随着人口增长、工业和城市的发展耕地逐年递减。为此，我 国增加农产品产量的唯一可行途径是提高单位面积产量。才能满足工业发展和人口增加对 农产品的需求，化肥也就顺理成章的得到了广泛应用。长期W来不合理使用化学肥料带来 的±壤板结、地力下降、生态破坏、环境污染W及农副产品品质下降问题，已经受到国 家有关部口和农业科技界的高度重视。近几十年来，我国一直努力探索合理施肥、克服化肥 的弊端及提高化肥利用率的有效途径。
[0003] 农业肥料包括化学肥料和生物肥料，是我国农业生产不可替代的重要生产资料。
[0004] 其中，生物肥料作为农业生物工程学科的重要分支和±壤肥料学的重要组成部 分，近十年无论在基础研究和应用研究方面都得到了迅速发展。近几年来我国微生物肥料 发展很快，有多家企业从事生产经营，品种不断增加，同时也有一些国外产品打入国内市 场。由于菌种等原因，目前市场的产品质量参差不齐，生产应用上出现了一些问题。据最近 几年农业部监督抽查、跟踪抽查，国家统检的情况看，抽查合格率不到60%，产品质量问题主 要是有效菌数不达标，保质期过短。微生物肥料中有效活菌数是产品质量的重要指标，有效 活菌数不达标，产品质量就得不到保证，反映出来的是应用效果不稳定，其中原因主要是菌 种问题，菌种在制备为微生物菌种剂后，在保藏过程中的存活能力下降，存活时间变短。运 个问题实际上是由于运些微生物菌种剂所使用的菌种要么不能产生芽抱，要么产生芽抱的 能力比较弱，或者产生的芽抱萌发能力差，不能很好渡过微生物菌种剂生产过程中的胁迫 条件和库存、保藏过程，在生产使用过程中表现为菌种活性下降，生产性能减弱，繁殖速度 变慢，抗逆性差。因此，菌种问题一直困扰我国微生物肥料的生产和发展。
[0005] 中国专利公开了一种保藏号为CGMCCNo. 5090的微生物菌种，但是经过实验发 现，其中的培养方法有缺陷，产量低，价格高，为提高产量，本发明人对培养方法进行了改 进，意外的得到一种高产的保藏号为CGMCCNo. 5090的微生物菌种培养物，大大降低了肥料 的价格，有利于大规模生产。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种由CGMCCNo. 5090的微生物菌种培养物制备而成的微生 物肥料及其制备方法。
[0007] 为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案： 一种培养高产的侧抱芽抱杆菌（BacillusIaterosporus)的方法，所述侧抱芽抱杆菌 保藏号为CGMCCNo. 5090的微生物菌种。
[0008] 该菌种被命名为"新侧芽抱杆菌1号"，该菌种分离自高产农田，并经驯化，长期W 来性状稳定。
[0009] 新侧芽抱杆菌1号菌株在2010年7月22日提交中国微生物菌种保藏管理委员 会普通微生物中屯、保藏，保藏编号为CGMCCNo. 5090,生物学命名Bacilluslaterosporus， 保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所。
[0010] 该菌种的生物学特性为菌体杆状，属于芽抱杆菌属，其细胞大小为0.15~ 0.18X215~510um，革兰氏染色阳性，可变为阴性，芽抱为楠圆形，侧生、中生或近中 生，抱囊膨大，游离芽抱一边比另一边厚(独木舟形)。能利用多种氮源、碳源，生长溫度 20-55°C，最佳生长溫度37°C，最适PH7. 2。在不良条件下，菌体转化产生芽抱，芽抱对不良 环境抗逆性强，可耐受l〇〇°C高溫20分钟和干燥等恶劣条件。
[0011] 本发明的菌种的保存用斜面保存，培养时先自斜面取种后，划线接入斜面培养基， 30-38°C培养箱静置黑暗条件下培养18小时；用无菌水冲洗斜面，形成菌悬液，作为原始 菌液。
[0012] 本发明的保藏编号为CGMCCNo. 5090的微生物菌种培养物，其培养方法是：W上 述菌悬液为原始菌液，对菌种进行扩增培养，W达到生产培养物的目的，具体培养方法步骤 如下： 1) 将1体积菌悬液接入20倍体积的1号培养基中，30-38°C有氧培养8小时； 2) 将步骤1)得到的培养液加入到约20倍体积的2号培养基中，30-38°C有氧培养8 小时； 3) 将步骤2)得到的培养液加入到约20倍体积的3号培养基中，35-38°C培养8小时， 即得可生产用的培养物。
[0013] 本发明进一步提供微生物菌种剂，所述菌种剂的制备方法如下： 将草炭粉进行干热灭菌后冷却，加入到本发明得到的培养物中进行充分揽拌，用造粒 机造粒，低溫烘干获得微生物菌种剂。粒机造粒，低溫烘干获得微生物菌种剂，其中草炭粉 和培养物的重量比例为3-5:1。
[0014] 优选的，草炭粉和培养物的重量比例为4:1。
[0015] 本发明所述的制备方法，其中微生物菌种剂与常规肥料的重量比例为1 :9 - 11， 优选的，微生物菌种剂与常规肥料的重量比例为1 :1〇。
[0016] 本发明在于提供新的菌种培养方法，本发明的重点在于改进了培养基的配方，本 发明通过加入海藻酸钢获得了W下培养基： 培养过程中所用的斜面培养基配方为：海藻酸钢5g/l，蛋白腺5g/l，氯化钢5g/l，牛肉 膏 5g/L，琼脂 1. 5%-2. 0%，PH调至 6. 5-7. 8。
[0017] 1号培养基配方为：海藻酸钢5g/l，蛋白腺5g/l，氯化钢5g/l，牛肉膏5g/L，PH调 至 6. 5-7. 8。
[0018] 2号培养基：海藻酸钢5g/l，淀粉5g/l，薦糖IgA,酵母浸出汁0. 2g/l，蛋白腺 5邑/1，牛肉膏5g/l，硫酸锭Ig/l，憐酸二氨钟0. 5g/l，硫酸儀0. 2g/L,氯化钢5g/L，PH调 至 6. 5-7. 8。
[0019] 3号培养基配方为：海藻酸钢5g/l，淀粉lOg/l，薦糖5g/l，酵母浸出汁0.Ig/L， 蛋白腺0. 5g/L，豆饼粉lOg/l，硫酸锭Ig/l，憐酸二氨钟0. 5g/l，氯化钢5g/L，PH调至 6. 5-7. 8〇
[0020] W上所有培养基均在使用前经高压蒸汽灭菌（12rc，l.Ikg/cm3,30分钟)，冷却。
[0021] 海藻酸钢，是一种天然多糖，1881年，英国化学家E.C.Stan化rd首先对褐色海藻 中的海藻酸盐提取物进行科学研究。他发现该褐藻酸的提取物具有几种很有趣的特性，它 具有浓缩溶液、形成凝胶和成膜的能力，可用于食品工业作乳化稳定剂和增稠剂。
[0022] 本发明通过在培养基中加入海藻酸钢，意外的发现培养时间大大缩短，培养效率， 菌种的存活率和肥效大大提高。
[0023]W下为本发明的培养方法和现有技术的参数比较：
现有技术培养方法1为中国专利201110260431. 8中实施例2的培养方法。
[0024] 现有技术培养方法2为中国专利201110260431. 8中实施例1的培养方法。
[00巧]菌数检测方法 按照常规的稀释平板记数法检测微生物菌种剂中的活菌含量。称取微生物菌种剂1克 (库存半个月），用无菌水溶解，用无菌水稀释至菌体数为20-100个/ml,然后移取Iml稀 释液到无菌培养皿中，加入适量新1培养基(斜面培养基)，充分混合后凝固，在37°C保溫箱 中倒置培养48小时，统计平板上的菌落，重复=次W上，W平均值乘W该一克微生物 菌种剂稀释为菌体浓度为20-100个/ml时的毫升数即为每克微