生物菌种剂的菌种数。 [002引肥效检测方法： 将制成的本发明微生物肥料在不同作物上进行与现有技术肥料和基质肥比较的小区 肥效实验，每个小区面积0. 16亩。实验时每亩分别施本发明的微生物肥料W及现有技术肥 料1和肥料2各25公斤；基质肥(经由鸡粪、粉碎玉米忍、煤渣Wl:2 :3重量百分比混合 均匀，调整含水量为30%后，在溫度大于30°C的条件下堆积7-10天制成）每亩施25公 斤；均作为基肥，一次施完，不追加。空白对照不施肥。
[0027] 实验结果如下(数据均为各肥料相对于空白对照的增产百分比） 生菜丝瓜玉米水稻花生黄瓜 本发明微生物肥料 20 25 30 35 35 36 现有技术微生物肥料1 14 25 15 14 17 30 现有技术微生物肥料2 14 25 15 14 17 30 基质肥 1 19 10 9 10 25 结果表明，本发明微生物菌种剂增产作用最佳。
【具体实施方式】 [002引 实施例1 : 本发明培养方法 步骤1、先对菌种进行斜面培养活化，再用5ml无菌水冲洗斜面，形成菌悬液， 步骤2、菌悬液接入500mlS角瓶，该S角瓶含100mLl号培养基，使用摇床培养8小时， 培养条件为37°C，180-200巧m， 步骤3、将500ml=角瓶中的105ml菌液转接入5000ml=角瓶中，瓶中含2100ml2号培 养基，使用摇床培养8小时，培养条件为37°C，180-200巧m; 步骤4、将5000ml=角瓶中的2205ml菌液接入60m3发酵罐中，该发酵罐中含有44. 1L3 号培养基，发酵条件为：溫度36-38°C，罐压0.化g/cm，通气量20m3A，培养8小时；得到培 养物。
[0029] 检测菌体浓度，浓度为1〇1°数量级。
[0030] 然后按1 :4的重量比例与进行干热灭菌后冷却的优质草炭粉饰斷混合，再进行 造粒，低溫烘干成为微生物菌种剂。
[0031] 所得微生物菌种剂和常规肥料混合即可用于农作物的生产，混合比例为。微生物 菌种剂和常规肥料的重量比例为1:10。
[00础对比例： 现有技术培养法，中国专利201110260431. 8中实施例2的培养方法。
[003引先对菌种进行活化，再用5ml无菌水冲洗斜面，形成菌悬液，菌悬液接入500ml=角瓶，该=角瓶含100mL新1液体培养基，使用摇床培养18小时，培养条件为37°C， 180-200rpm，检测菌体浓度，在浓度达到IO8数量级，进行下一步；将500ml=角瓶中的 100mL菌液转接入2000ml=角瓶中，该=角瓶含700ml新2培养基，使用摇床培养20小 时，培养条件为37°C，180-200rpm;检测菌体浓度，在浓度达到1〇8数量级，进行下一步；将 2000ml=角瓶中的菌液接入lm3发酵罐中，接入量为6升，该发酵罐中含有50化新3培 养基，发酵条件为：溫度36-38°C，罐压0.化g/cm，通气量20m3/h，培养8小时；检测菌体浓 度，在浓度达到IO8数量级，进行下一步；将Im3发酵罐中的菌液接入5m3发酵罐，接入量为 500升，该发酵罐含有3m3新4培养基，发酵条件为：溫度36-38 °C，罐压0.化g/cm，通气量 120m3/h，培养15小时。检测菌体浓度，在浓度达到IO9数量级，停止发酵。然后按1 :4的 比例与进行干热灭菌后冷却的优质草炭粉(市售）混合，再进行造粒，低溫烘干成为微生物 菌种剂。
【主权项】
1. 一种微生物肥料的制备方法，该肥料由保藏号为CGMCCNo. 5090的微生物菌种经过 培养得到培养物，所得培养物和草炭粉混合得到微生物菌种剂，所得微生物菌种剂再与常 规肥料混合制备而成，其中所述微生物菌种培养物的培养方法如下： 先将CGMCCNo. 5090的微生物菌种进行斜面培养活化，再用无菌水冲洗斜面，形成菌悬 液，以菌悬液为原始菌液，进行扩增培养，培养方法步骤如下： 1) 将1体积菌悬液接入20倍体积的1号培养基中，30- 38°C有氧培养8小时； 2) 将步骤1)得到的培养液加入到约20倍体积的2号培养基中，30- 38°C有氧培养8 小时； 3) 将步骤2)得到的培养液加入到约20倍体积的3号培养基中，35-38°C培养8小时， 即得可生产用的培养物； 其中，所述斜面培养基配方为：海藻酸钠5g/L，蛋白胨5g/L，氯化钠5g/L，牛肉膏5g/L， 琼脂 1. 5%-2. 0%，PH调至 6. 5-7. 8 ; 1号培养基配方为：海藻酸钠5g/L，蛋白胨5g/L，氯化钠5g/L，牛肉膏5g/L，PH调至 6. 5-7. 8 ； 2号培养基：海藻酸钠5g/L，淀粉5g/L，蔗糖lg/L，酵母浸出汁0. 2g/L，蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/L，硫酸铵lg/L，磷酸二氢钾0. 5g/L，硫酸镁0. 2g/L，氯化钠5g/L，PH调至 6. 5-7. 8 ； 3号培养基配方为：海藻酸钠5g/L，淀粉10g/L，蔗糖5g/L，酵母浸出汁0.lg/L，蛋白胨 0. 5g/L，豆饼粉10g/L，硫酸铵lg/L，磷酸二氢钾0. 5g/L，氯化钠5g/L，PH调至6. 5-7. 8 ; 以上所有培养基均在使用前经高压蒸汽灭菌（121°C，1.Ikg/cm3,30分钟)，冷却。2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤如下： 步骤1、先对菌种进行斜面培养活化，再用5ml无菌水冲洗斜面，形成菌悬液， 步骤2、菌悬液接入500ml三角瓶，该三角瓶含100ml1号培养基，使用摇床培养8小时， 培养条件为 37°C，180-200rpm， 步骤3、将500ml三角瓶中的105ml菌液转接入5000ml三角瓶中，瓶中含2100ml2号培 养基，使用摇床培养8小时，培养条件为37°C，180-200rpm; 步骤4、将5000ml三角瓶中的2205ml菌液接入60m3发酵罐中，该发酵罐中含有44. 1L3 号培养基，发酵条件为：温度36-38°C，罐压0. 5kg/cm，通气量20m3/h，培养8小时；得到培 养物。3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中所述微生物菌种剂的制备方法 如下： 将草炭粉进行干热灭菌后冷却，加入到培养物中进行充分搅拌，用造粒机造粒，低温烘 干获得微生物菌种剂，其中草炭粉和培养物的重量比例为3-5:1。4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，其中草炭粉和培养物的重量比例为 4:1〇5. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中微生物菌种剂与常规肥料的重 量比例为1 :9 - 11。6. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，其中微生物菌种剂与常规肥料的重 量比例为1 :1〇。
【专利摘要】本发明涉及一种由侧孢芽孢杆菌制备的微生物肥料及其制备方法，该肥料由保藏号为CGMCC？No.5090的微生物菌种经过培养得到培养物，所得培养物和草炭粉混合得到微生物菌种剂，所得微生物菌种剂再与常规肥料混合制备而成，其中所述微生物菌种培养物的培养方如下：1）将1体积菌悬液接入20倍体积的1号培养基中，30-38℃有氧培养8小时；2）将步骤1）得到的培养液加入到约20倍体积的2号培养基中，30-38℃有氧培养8小时；3）将步骤2）得到的培养液加入到约20倍体积的3号培养基中，35-38℃培养8小时，即得可生产用的培养物。
【IPC分类】C12R1/07, C12N1/20, C05F11/08
【公开号】CN105272406
【申请号】CN201510699985
【发明人】麻林涛, 王莉
【申请人】北京鑫鑫盛达生物工程技术有限公司
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2015年10月26日