专利名称：新方法与中间体的制作方法
技术领域：
本发明涉及制备3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸的新方法，这一化合物可进一步反应生成具有糖原磷酸化酶抑制活性的化合物。本发明还提供了这些方法中使用的新中间体。这些糖原磷酸化酶抑制剂对患有下述疾病的哺乳动物(尤其是人)具有有效的治疗作用糖原磷酸化酶依赖性疾病或病症，包括血胆固醇过多症、高血糖、血胰岛素过多症、血脂过多症、高血压、动脉粥样硬化、糖尿病和心肌缺血。
国际PCT申请PCT／IB95／00443(公开号WO96／39385)和PCT／IB95／00442(公开号WO96／39384)中公开了新型取代的N-(吲哚-2-羰基)-酰胺化合物、其衍生物和包括3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸在内的中间体、制备这类化合物的方法、包含这类化合物或衍生物的药物组合物、以及通过施用这类化合物或衍生物治疗糖原磷酸化酶依赖性疾病的方法。
正如其中所公开的那样，3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸可如下制备偶联酰氯与氨基酸，产生3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸酯，然后用碱水溶液水解脱保护，得到相应的酸。
本发明提供了制备3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸的新方法，它采用反应步骤比上述现有技术方法少两步的方法，从而提供了一种快捷、简便的低成本生产方法。本方法仅产生少至两个不必分离的中间体，并且通过一次分离就能得到3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸。另外，这一产物也不一定必须分离，亦即如上面WO96／39865和／或WO96／29284所述，它可以继续反应生成这些文献中公开的糖原磷酸化酶抑制剂。
本文引用的所有文献(包括上述文献在内)的内容在此全部并入引作参考。
本发明涉及制备3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸的新方法。
本发明还涉及本发明方法过程中所产生的新中间体。
本发明的第一个方面提供了制备3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸(亦即式6化合物)的方法 该方法包括以下步骤制备包含式2化合物的溶液 该步骤依次包括向非质子溶剂A中加入式1化合物 在惰性气体下搅拌下加入适量催化性非质子溶剂；及加入活化剂；由式3化合物 制备式4化合物 其中M+为任一种一价阳离子，该步骤依次包括向非质子溶剂B和质子性溶剂的混合物内加入式3化合物和碱，温度为大约-20℃至溶剂混合物的回流温度，并维持所述混合物的pH为大约pH8-大约pH13；通过偶联上述式2和式4化合物制备式5化合物 该步骤包括在惰性气氛中，同时保持上述温度，将所述溶液加到所述混合物内，加完之后，使所述混合物的温度达到室温；向所述混合物中加入适量有机溶剂；和将所述式6化合物提取到所述有机溶剂内，该步骤依次包括分离水层A和有机层A，用酸水溶液或用酸水溶液和水处理有机层A，将水层B与有机层B分开，并保留所述有机层B；其条件是，当M+为N(C1-C6烷基)4+时，在加入所述碱之后再向所述混合物中加入四-C1-C6烷基卤化铵。
在所述第一个方面的优选实施方案中，所述非质子溶剂A和所述非质子溶剂B各自独立地为THF，甲苯，或二氯甲烷。非质子溶剂A和非质子溶剂B各自优选为甲苯。
在所述第一个方面的另一优选实施方案中，所述催化性非质子溶剂为DMF。
在所述第一个方面的另一优选实施方案中，所述惰性气体为N2。
在所述第一个方面的另一优选实施方案中，所述活化剂为草酰氯或亚硫酰氯。亚硫酰氯是特别优选的活化剂。在优选实施方案中，所述活化剂为亚硫酰氯，所述加入过程在大约16小时后完成。
在所述第一个方面的另一优选实施方案中，所述M+为Li+，Na+，K+，Cs+或四-C1-C6烷基铵离子。特别优选的M+为Na+，K+，或NBu4+。M+尤为优选K+特别优选的四-C1-C6烷基卤化铵为TBAB。
在所述第一个方面的另一优选实施方案中，所述碱为碳酸氢钠，氢氧化钠，磷酸钠，碳酸钾，磷酸氢二钾或磷酸钾。特别优选的碱包括碳酸氢钠，碳酸氢钾和磷酸钾。磷酸钾是格外优选的碱。在优选的实施方案中，所述碱为碳酸钾，所述M+为NBu4+且所述四-C1-C6烷基卤化铵为TBAB。在优选的实施方案中，所述碱为碳酸氢钠，所述M+为Na+。在优选的实施方案中，所述碱为碳酸氢钠和所述M+为Na+，所述非质子溶剂B为THF，所述质子性溶剂为H2O，且所述温度为大约65℃。在一优选实施方案中，所述碱为磷酸钾，M+为K+。在优选的实施方案中，其中所述的碱为磷酸钾和所述M+为K+，所述非质子溶剂B为THF，所述质子性溶剂为H2O，且所述温度为大约-5℃。
在所述第一个方面的另一优选实施方案中，所述质子性溶剂为H2O或ROH，其中R为C1-C4烷基。特别优选的质子性溶剂包括H2O和MeOH。格外优选的质子性溶剂为水。
在所述第一个方面的另一优选实施方案中，所述pH由所述碱维持。
在所述第一个方面的另一优选实施方案中，所述pH为大约pH11-大约pH13。
在所述第一个方面的另一优选实施方案中，所述有机溶剂为EtOAc和CH2Cl2。特别优选的有机溶剂为CH2Cl2。
在所述第一个方面的另一优选实施方案中，所述酸水溶液为HCl水溶液或H2SO4水溶液。特别优选的酸水溶液为HCl水溶液。
在所述第一个方面的另一优选实施方案中，浓缩保留的有机层B，并置换(displace)到己烷或庚烷内，在所述己烷或所述庚烷中、于惰性气体下颗粒化适当时间，过滤所形成的浆状物并干燥保留物(其中包含式6化合物)。优选的适当时间为过夜。优选的惰性气体为氮气。
在所述第一个方面的另一优选实施方案中，所述式2化合物在加入到所述混合物之前先加以分离，然后溶于非质子溶剂C，并通过将包含所述式2化合物的非质子溶剂C加到所述混合物完成式2化合物加到所述混合物的过程。优选的分离方法依次包括向所述溶液中加入己烷或庚烷，过滤所形成的浆状物并干燥保留物。非质子溶剂C优选为THF、甲苯、或二氯甲烷，且特别优选THF。
在所述第一个方面的特别优选实施方案中，制备所述式6化合物的所述方法包括步骤制备包括式2化合物的溶液，该步骤依次包括向甲苯中加入式1化合物，在N2下于搅拌下加入适量DMF，并加入SOCl2；由式3化合物制备其中M+为Na+的式4化合物，该步骤依次包括在大约65℃下向THF和水的混合液中加入式3化合物和NaHCO3；通过偶联所述式2和式4化合物制备其中M+为Na+的式5化合物，该步骤依次包括在N2气氛和保持大约65℃温度下将所述溶液加到所述混合物内，并且在加完之后使混合物温度降到室温；向所述混合物中加入适量EtOAc；将所述式6化合物提取到所述EtOAc内，该步骤依次包括分离所述水层A和所述有机层A，用酸水溶液处理所述的有机层A，使所述水层B与所述有机层B分开，并保留所述有机层B；以及分离所述式6化合物，该步骤依次包括浓缩所保留的有机层B，将浓缩的有机层B置换到己烷或庚烷内，N2下在所述己烷或庚烷中颗粒化所置换的有机层B过夜，过滤所得浆状物，并干燥保留物。
在所述第一个方面的特别优选实施方案中，制备式6化合物的所述方法包括以下步骤制备包含式2化合物的溶液，该步骤依次包括向甲苯中加入式1化合物，在N2下于搅拌下加入适量DMF，和加入SOCl2；由式3化合物制备其中M+为K+的式4化合物，该步骤依次包括在大约-5℃下向THF和水的混合液中加入式3化合物和K3PO4；通过偶联所述式2和式4化合物制备其中M+为K+的式5化合物，该步骤依次包括在N2气氛和保持大约-5℃的温度下将所述溶液加到所述混合物内，并且在加完之后使混合物温度升到室温；向所述混合物中加入适量二氯甲烷；将所述式6化合物提取到所述二氯甲烷内，该步骤依次包括分离所述水层A和所述有机层A，用1MHCl处理所述的有机层A，分离所述水层B与所述有机层B，并保留所述有机层B；以及分离所述式6化合物，该步骤依次包括蒸馏浓缩所保留的有机层B，将浓缩层置换到庚烷或己烷内，直至蒸汽温度达到大约95℃，然后冷却到室温，过滤所得浆状物，并干燥保留物。
在所述第一个方面的进一步特别优选的实施方案中，如上文WO96／39385和／或WO96／39384所述，例如应用方法A(采用DEC的肽偶联法)，所述式6化合物可进一步反应生成这些文献中所述的取代的N-(吲哚-2-羰基)酰胺及其衍生物。
例如，如上面WO96／39385所述，按本发明新方法制备的式6化合物可进一步反应产生例如下列化合物5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-((R)-羟基-二甲基氨基甲酰基甲基)-2-苯基-乙基]-酰胺，5，6-二氯-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-[(R)-羟基-(甲氧基-甲基-氨基甲酰基)-甲基]-2-苯基-乙基}-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-[(R)-羟基-(甲氧基-甲基-氨基甲酰基)-甲基]-2-苯基-乙基}-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸((1S)-{(R)-羟基-[2-羟基-乙基)-甲基-氨基甲酰基]-甲基}-2-苯基-乙基)-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-[(R)-羟基-(甲基-吡啶-2-基-氨基甲酰基)-甲基]-2-苯基-乙基}-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸((1S)-{(R)-羟基-[甲基-(2-吡啶-2-基-乙基)-氨基甲酰基]-甲基}-2-苯基-乙基)-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-3-氧代-丙基]-酰胺盐酸盐，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-(3-羟基-氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代-丙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-异噁唑烷-2-基-3-氧代-丙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-[1，2]噁嗪烷-2-基-3-氧代-丙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-((3S)-羟基-吡咯烷-1-基)-3-氧代-丙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-3-((3S，4S)-二羟基吡咯烷-1-基)-(2R)-羟基-3-氧代-丙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-3-((3R，4S)-二羟基-吡咯烷-1-基)-(2R)-羟基-3-氧代-丙基]-酰胺，或5-氯-1H-吲哚-2-羧酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-吗啉-4-基-3-氧代-丙基)-酰胺。
如上面WO96／39384所述，按本发明新方法制备的式6化合物可进一步反应产生例如下列化合物5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-2-(3-羟基亚氨基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[2-(顺式-3，4-二羟基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[2-((3S，4S)-二羟基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-2-(顺式-3，4-二羟基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[2-(1，1-二氧代-噻唑烷-3-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸(2-氧代-2-噻唑烷-3-基-乙基)-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-(4-氟苄基)-2-(4-羟基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-2-((3RS)-羟基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[2-氧代-2-((1RS)-氧代-1-噻唑烷-3-基)-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-(2-氟-苄基)-2-(4-羟基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-2-((3S，4S)-二羟基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，
5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-2-(3-羟基-氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-2-(3-羟基亚氨基-氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，或5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-2-(4-羟基亚氨基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺。
本发明的第二个方面提供了式4新化合物 其中M+为四-C1-C6烷基铵离子。所述第二个方面的优选实施方案涉及式4a新化合物 本发明的第三个方面提供了式5新化合物 其中M+为四-C1-C6烷基铵离子。所述第三个方面的优选实施方案涉及式5a新化合物 本发明的再一方面还包括按比例放大本发明新方法，以便得到商业数量这些方法中使用或形成的任何化合物(包括起始原料、中间体和最终产物)。例如，向包含式4化合物的混合物中逐滴加入(优选使用滴液漏斗)包含式2化合物的溶液的步骤。
本领域技术人员能够完全理解用于说明本发明的本发明说明书及附加权利要求中所用的术语；然而，除非另有说明，下列术语具有下文所述含义。
“烷基”是指直链或支链烃基，其中“C1-C6烷基”包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基和异己基，且“C1-C4烷基”包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、和叔丁基。
“非质子”是指无可利用质子的溶剂。
“质子性”是指具有可利用质子的溶剂。
除非另有说明，贯穿本文及附加权利要求中的％表示百分比，ACN代表乙腈，℃表示摄氏度，CH2Cl2代表二氯甲烷，cm代表厘米，DEC代表1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，DMF代表二甲基甲酰胺，eq．或equiv．代表当量，EtOAc代表乙酸乙酯，g代表克，h代表小时，HCl代表盐酸，HClO4代表高氯酸，H2O代表水，H2SO4代表硫酸，HPLC代表高效液相色谱，K2CO3代表碳酸钾，K3PO4代表磷酸钾，M为摩尔(浓度)，MeOH代表甲醇，MgSO4代表硫酸镁，min表示分钟，mL表示毫升，mm表示毫米，mmol表示毫摩尔，MS代表质谱，N表示当量(浓度)，NaHCO3代表碳酸氢钠，NaOH代表氢氧化钠，NBu4+代表四丁基铵离子或TBA，nm代表纳米，NMR代表质子核磁共振光谱，RP-HPLC代表反相HPLC，RT表示室温，TBAB代表四丁基溴化铵，THF表示四氢呋喃，μL表示微升，μm表示微米，UV代表紫外线，和v／v代表体积／体积。
发明祥述本发明提供了由式1和3化合物制备式6化合物的新方法。这些起始物质是已知化合物，本领域技术人员能够制得它们。另外，如下文实施例部分详细描述，这两种化合物都能从市场上购得。
式2化合物可如下制备将式1化合物置于任何适宜的非质子溶剂(优选甲苯)内，加入(优选滴加)适宜的活化剂制备酰氯(优选加入SOCl2)，然后加入合适的催化性非质子溶剂(优选DMF)。随后将此包含式2化合物的溶液直接加到包含式4化合物的溶液内。另一方面(并且也是优选的)，式2化合物也可以按下所述先行分离向包含式2化合物的溶液中加入合适的不溶解溶剂(优选己烷)，过滤溶液，然后干燥保留物。随后将分离出的式2化合物溶于任何适宜的非质子溶剂中，优选THF，并加入到包含式4化合物的溶液内。
室温及任何适宜的惰性气体气氛(优选N2)下，将式3化合物和合适的碱(优选K3PO4)加到任何适宜的非质子溶剂(优选THF)和任何适宜的质子性溶剂(优选H2O)的混合物中，然后可冷却(优选使用冰／丙酮混合物)所得浆状物，可以制得式4化合物。上文所述的碱用于维持pH为大约pH8-大约pH13，优选大约pH11-大约pH13。
然后在任何适宜的惰性气体(优选N2)下，经适当时间(优选大约1h-大约2h)加入包含式2化合物的溶液，加料期间保持冷却，接着继续冷却适当时间(优选大约1-大约2小时)，然后温热至RT，分离式5化合物。
随后可按下所述由式5化合物制备式6化合物加入合适的非质子溶剂(优选二氯甲烷)，分离水层与有机层，用酸水溶液(优选HCl，更优选1M HCl)洗涤有机层，浓缩(优选通过蒸馏方式)洗涤后的有机层，将有机层浓缩物置换到合适的有机液体(优选庚烷)内，冷却至RT放置适当时间(例如过夜)，过滤所形成的浆状物，真空下干燥所得固体或保留物(即式6化合物)适当时间(如过夜)。
本领域技术人员能够很容易地验证制备式6化合物的本发明新方法。所得干燥固体中的式6化合物及其相对和绝对纯度可利用HPLC(具体讲是利用HPLC UV面积％)通过与外标比较测定。所得式6化合物的结构可由质谱和NMR光谱证实。
正如本领域技术人员所知，本发明新方法中各物质的用量可以为任何适宜数量，这取决于，例如，3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸的需要量。
不过，更具体讲，在制备式2化合物的步骤中，非质子溶剂A、催化性非质子溶剂和活化剂的用量都基于式1化合物的用量。
对于非质子溶剂A-优选大约4mL／g式1化合物-大约30mL／g式1化合物，特别优选大约7mL／g-大约20mL／g，且最优选约10mL／g。
对于催化性非质子溶剂-优选大约0．0001 mL／g式1化合物-大约0．25 mL／g式1化合物，特别优选大约0．002 mL／g-大约0．1 mL／g，且最优选约0．0004 mL／g。
对于活化剂-优选大约0．95摩尔／摩尔式1化合物-大约2．0摩尔／摩尔式1化合物，特别优选大约1．1摩尔／摩尔-大约1．5摩尔／摩尔，且最优选大约1．3摩尔／摩尔。
同样，在制备式4化合物的步骤中，碱、非质子溶剂B和质子性溶剂的用量都基于式3化合物的用量。
对于碱-优选大约1．9摩尔／摩尔式3化合物-大约3．0摩尔／摩尔式3化合物，特别优选大约2．0摩尔／摩尔-大约2．3摩尔／摩尔，且最优选大约2．1摩尔／摩尔。
对于非质子溶剂B-优选大约3mL／g式3化合物-大约30mL／g式3化合物，特别优选大约4mL／g-大约10mL／g，且最优选大约5mL／g。
对于质子性溶剂-优选大约3mL／g式3化合物-大约30mL／g式3化合物，特别优选大约4mL／g-大约10mL／g，且最优选大约5mL／g。
更进一步地，在加料有机溶剂的步骤中，有机溶剂的用量以式3化合物的量为基准，亦即优选大约3mL／g式3化合物-大约30mL／g式3化合物，特别优选大约4mL／g-大约10mL／g，且最优选大约5mL／g。
如上所述，本发明新方法产生了新的中间体。从时间顺序来看首先为由式3化合物制得的式4新中间体，其中M+为四-C1-C6烷基铵离子，其次为偶联式4化合物和式2化合物而产生的式5新中间体。优选的中间体包括上述式4a和5a，其中M+为NBu4+(例如由TBAB制得)。
根据这一公开，本领域技术人员将懂得如何利用常规合成方法方便地制备式4、4a、5和5a新化合物。例如，式4a化合物可如下制备RT及合适的惰性气体(优选N2)存在下，向合适的非质子溶剂(优选THF)和合适的质子性溶剂(优选H2O)以及四丁基溴化铵的混合物中加入式3化合物和合适的碱(优选K3PO4)，并冷却(优选用冰／丙酮混合物)所得浆状物。然后如上所述，将按上所述制备的式2化合物加到包含式4a化合物的这一溶液内，产生式5a化合物。如上式4和5化合物所述，式4a和5a化合物都不必分离，在它们进行相应的下一操作步骤之前的本发明方法过程中优选不进行分离。
根据本发明的公开内容，本领域技术人员应当理解，依据例如所需规模，本发明新方法可以以任何合适的方式进行加热，例如通常较为便利的是使用加热套。同样，本发明方法中可以使用任何适宜的冷却方法，例如RT下放置、冰浴、冷却室、或简单地移去加热源。
本发明还包括这些新中间体的任何几何和光学异构体。同样还包括同位素标记的式4a和5a化合物，它们与式4a和5a中所述的那些相同，但只是其中的一个或多个原子被其原子质量或质量数不同于自然界常见的原子质量或质量数的原子置换。可以引入到本发明这种新中间体内的同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如相应的2H、3H、13C、14C、15N，18O、17O、31P、32P、35S、18F和36C。
尽管不拟囿于任何具体理论，但本领域技术人员不难理解，式3化合物的羧酸盐能使式3化合物在式2化合物与式3化合物偶联用的非质子溶剂内具有更好的溶解性。本领域技术人员还应当理解，式3化合物的这种溶解性提高基本上能消除式2化合物逆向生成式1化合物的水解副反应，否则将会对式4化合物的生成产生不利影响，进而影响3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸的收率。
虽然本发明新方法制备的式6化合物可以进一步反应来制备上面WO96／39385和／或WO96／39384中所公开的化合物及其衍生物，但由于形成了式3化合物的羧酸盐，本发明方法则避免了上面WO96／39385和／或WO96／39384中所述的保护和脱保护羧基的步骤。正如本领域技术人员所知，较少的总反应步骤和使用能保持其溶解性的中间体偶联之前将不会发生明显的自二聚或水解反应，而且在其随后的偶联步骤之前还无需进行分离，这样就提供了在以工业规模进行时能特别实现的优点。
本发明包括制备式2和4化合物的任何适宜方法。对此，对于任何特定情况，基于本文的公开内容，本领域技术人员能够决定对特殊官能团进行保护以防止这种官能团干扰分子内其它部位的反应，或保持该官能团的完整性。本领域技术人员能够很容易地确定是否需要进行这种保护以及保护的类型，并根据下列因素而变化例如，官能团的性质和所选择的制备方法的反应条件。参见例如T．W．Green．有机合成中的保护基(Protective Groups in Organic Synthesis)，John，Wiley＆Sons，New York，1991。对于任何特定的官能团，合适的保护基应当是在本发明新方法所述的反应条件下基本上无化学反应性，而且能够除去，同时不会对任何特定中间体的其它官能团产生明显的化学改性。本领域技术人员不难理解，在任何特定的制备方法中，保护基可以根据需要随时除去，例如，在后续步骤中。
根据本文所公开的内容以及上面WO96／39385和WO96／39384中的描述，本领域技术人员将懂得如何采用常规合成方法由式6化合物简便地制备WO96／39385和WO96／39384的化合物，例如，采用本文上面提到的方法A，并描述如下。
方法A(采用DEC的肽偶联法)25℃下，将伯胺在二氯甲烷(或任何合适溶剂)中的溶液(0．1-0．7M，1．0 equiv．或伯胺盐酸盐，和每当量HCl1．0-1．3当量三乙胺)依次用特定羧酸(0．95-1．2 euqiv)、羟基苯并三唑水合物(1．2-1．8 equiv．通常为1．5 equiv．，相对于羧酸)、和DEC(0．95-1．2 equiv．，相对于羧酸的摩尔比)处理，并搅拌混合物14-20h(大规模偶联时，例如采用＞50ml溶剂，此时要浓缩混合物，并将残留物溶于EtOAc)。混合物用EtOAc稀释，用1N或2N NaOH洗涤2-3次，再用1N或2N HCl洗涤2-3次(当产物含有可离子化胺官能团时，此酸洗可略去)，以MgSO4干燥有机层，浓缩得到粗产物，进而通过硅胶色谱、用合适溶剂研制或重结晶方式进行纯化。纯化产物用RP-HPLC分析。反应在0℃-25℃下进行，开始先将容器在保温冰浴中冷却，随后在数小时内使之温热至RT。本领域技术人员将懂得(例如根据上面WO96／39385和WO96／39384中的描述)如何按照下列因素调整方法A例如，由式6化合物所要制备的最终化合物。这种修饰也应当认作是本发明的一部分。
本发明用下列实施例加以说明，这些实施例只用于说明而非限制本发明。此外，还应当懂得，可实施的其它改进和修饰也都属于本发明部分，因而也同样落在附加的权利要求范围之内。本领域技术人员无需进行过多试验就能够了解或确定这里所述的本发明特定实施方案的等同方案，而且这些等同方案也都由附加权利要求所包括。
在实施例中，本发明新方法中产物的鉴定和纯度评估由RP-HPLC完成。更具体讲，RP-HPLC分析采用Waters(34 Maple Street，Milford，Massachusetts 01757)Symmetry C8，5μm，15cm长x 3．9mm I．D．进行，柱温为40℃。流动相A[8002004，去离子水MeOHHClO4，v／v]按下所述制备对于每升上述流动相A，混合800mL去离子水、200mLMeOH和4mL HClO4，真空下脱气[对于任何给定情形，可调整各组分的体积以得到合适体积量]。流动相B[800200 ACNMeOH，v／v]可制备如下，对于1L此流动相，混合800mLACN和200mL MeOH，然后在真空下脱气[对于任何给定情形，可调整各组分的体积以得到合适体积量]，溶剂通过泵入氦气或通过使用管线脱气装置连续脱气，在UV220nm处检测，流速2．0mL／min，注射体积20μL，运转时间65分钟[包括每次注射期间的再平衡时间]。3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸的保留时间在这些色谱条件下大约为15min。
各实施例中使用的式1化合物购自Merck SA．(ZoneIuindustrielle 45300，Tithivier，法国)。
各实施例中使用的式3化合物购自Nippon Kayaku．(FujimiBuilding，11-2 fujimi 1-Chone，Chiyoda-Ka 102，日本)。
2．将水[20 mL]和二氯甲烷[200 mL]加到式3化合物[10．0g，51．3 mmol，(1．0 eq．)]，接着加入K2CO3[35g，256 mmol，(5．0eq．)]，随后再加入TBAB[17．0g，51．3mmol，(1．0 eq．)]。搅拌浆状物直至能自由流动。
2．终止和分离将二氯甲烷[25 mL]加到已完成的偶联反应物中，并搅拌混合物15分钟。然后分离水层和有机层。有机层用1M HCl[2x25 mL]处理。然后将酸处理过的有机层通过蒸馏浓缩，并通过逐渐加入庚烷而置换到庚烷内，直至蒸汽温度达到95℃，然后冷却至室温。过滤所得浆状物，在真空炉内干燥所得固体物。3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸的产量为9．16g(固体，96．0％)。
3．分析a．根据HPLC UV面积％，所得固体物的纯度大于99％。
b．1H NMR(400 MHz，CDCl3／DMSO-d6)δ 10．99(s，1H，NH)，7．61(d，1H，NH)，6．82-7．34(m，9H)，4．63-4．69(m，1H，C3H)，3．99-4．00(m，1H，C2H)，2．84-2．95(m，2H，C4H)．c．MS(M-1)=371(C19H17ClN2O4)．B．实施例1．A．的化合物与实施例2．B．的化合物1．偶联将按照与实施例1．A．所述相同的总方式制备的式2化合物[82．24g，384．2mmol]溶于THF[190 mL]。然后于65℃经历50分钟将此溶液加到实施例2．B．所制的溶液内。65℃下搅拌所形成的浆状液大约3．5h，然后冷却至RT。
2．终止和分离将乙酸乙酯[375 mL]加到已完成的偶联反应物内。搅拌所得混合物，然后使之静置。分离水层和有机层，用1M HCl[375mL]和水[375 mL]处理有机层。然后分离水层和有机层，并通过蒸馏浓缩有机层。浓缩EtOAc／THF混合物，并除去它们，同时替代为庚烷[375 mL]。颗粒化所得浆状物，过滤并在真空炉内干燥。3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸的产量为132．34g(固体物，92．4％)。
3．分析HPLC UV面积％显示该固体物为纯的，并且所给出的NMR和MS数据与实施例3．A．中提供的相同。C．实施例1．B．的化合物与实施例2．C．1．的化合物1．偶联利用滴液漏斗，2小时内将实施例1．B．的溶液逐滴加到实施例2．C．1．的溶液内。在加入1／4实施例2化合物的溶液后，加入K2CO3[7．0g，51．3mmol，(1．0 eq．)，研细]。然后加入剩余的3／4式2化合物溶液，接着再加入K2CO3[7．0g，51．3 mmol，(1．0 eq．)，研细]。通过将pH试纸直接浸入到反应混合物内，分别在加入式2化合物之前[pH 11]或之后[pH9]测定反应的pH。
2．终止和分离过滤已完成的偶联反应物除去无机盐[滤饼用MeOH洗涤至HPLC显示无产物为止]，用EtOAc稀释，真空除去挥发物。然后用1M H2SO4[100 mL，冰冷的]洗涤乙酸乙酯层[大约500 mL]三次。为确保除去TBA盐，取液样用NMR分析。然后用盐水[100 mL]洗涤两次，以硫酸钠干燥，并真空浓缩。将产物浓缩至大约100ml EtOAc体积，加己烷[大约100 mL]沉淀。搅拌所得浆状液过夜，然后过滤。3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸的产量为16．62g(固体物，87％)。
3．分析HPLC UV面积％显示该固体物的纯度大于99．5％，而且所给出的NMR和MS数据与实施例3．A．中提供的相同。D．实施例1．B．的化合物与实施例2．C．2．的化合物1．偶联利用滴液漏斗，2小时内将实施例1．B．的溶液逐滴加到实施例2．C．2．的混合物内。浆状液的pH始终为大约pH11[将pH试纸直接浸入到反应混合物内测定]。用MeOH稀释反应混合物，并真空除去二氯甲烷。用1N NaOH调节pH至pH13-14，搅拌过夜。
2．终止和分离反应混合物用EtOAc稀释，然后真空除去挥发物。用6M HCl调节混合物[包含大约500mL EtOAc]的pH为1。分离乙酸乙酯层，用1M HCl洗涤两次。接着用盐水[100 mL]再洗涤两次，以硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将产物浓缩至大约100mL乙酸乙酯体积，加己烷[大约100mL]进行沉淀。搅拌浆状液过夜，然后过滤。3(S)-[(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-氨基]-2(R)-羟基-4-苯基丁酸的产量为16．59g(固体物，87％)。
3．分析HPLC UV面积％显示该固体物的纯度大于98％，而且所给出的NMR和MS数据与实施例3．A．中提供的相同。
权利要求
1．制备式6化合物的方法，该方法包括以下步骤制备包含式2化合物的溶液，该步骤依次包括向非质子溶剂A中加入式1化合物，在惰性气体及搅拌下加入适量催化性非质子溶剂，并加入活化剂；制备式4化合物，该步骤依次包括向非质子溶剂B和质子性溶剂的混合物内加入式3化合物和碱，其中温度为大约-20℃至溶剂混合物的回流温度，并保持所述混合物的pH为大约pH8-大约pH13；制备式5化合物，该步骤依次包括在惰性气体下，同时保持上述温度，将所述溶液加到所述混合物内，加完之后，使所述混合物的温度达到室温；向所述混合物中加入适量有机溶剂；和将所述式6化合物提取到所述有机溶剂内，该步骤依次包括分离水层A和有机层A，用酸水溶液或用酸水溶液和水处理有机层A，将水层B与有机层B分开，并保留所述有机层B；其中M+为任何一价阳离子，其条件是，当M+为N(C1-C6烷基)4+时，在加入所述碱之后再向所述混合物中加入四-C1-C6烷基卤化铵；所述式1化合物为 所述式2化合物为 所述式3化合物为 所述式4化合物为 所述式5化合物为 和所述式6化合物
2．权利要求1的方法，其中所述非质子溶剂A和所述非质子溶剂B各自独立地为THF，甲苯，或二氯甲烷。
3．权利要求1的方法，其中催化非质子溶剂为DMF。
4．权利要求1的方法，其中所述惰性气体为N2。
5．权利要求1的方法，其中所述活化剂为草酰氯或亚硫酰氯。
6．权利要求1的方法，其中M+为Li+，Na+，K+，Cs+或四-C1-C6烷基铵离子。
7．权利要求6的方法，其中M+为Na+，K+，或NBu4+。
8．权利要求1的方法，其中所述碱为碳酸氢钠，氢氧化钠，磷酸钠，碳酸钾，磷酸氢二钾或磷酸钾。
9．权利要求8的方法，其中所述碱为碳酸氢钠，所述M+为Na+，所述非质子溶剂B为THF，所述质子性溶剂为H2O，且所述温度为大约65℃。
10．权利要求8的方法，其中所述碱为碳酸钾，所述M+为NBu4+，且所述四-C1-C6烷基卤化铵为TBAB。
11．权利要求8的方法，其中所述M+为K+，所述非质子溶剂B为THF，所述质子性溶剂为H2O，且所述温度为大约-5℃。
12．权利要求1的方法，其中所述质子性溶剂为H2O或ROH，其中R为C1-C4烷基。
13．权利要求1的方法，其中所述所述pH由所述碱维持。
14．权利要求13的方法，其中所述pH为大约pH11-大约pH13。
15．权利要求1的方法，其中所述有机溶剂为EtOAc和CH2Cl2。
16．权利要求1的方法，其中所述的酸水溶液为HCl水溶液或H2SO4水溶液。
17．权利要求1的方法，其中浓缩所保留的有机层B，并置换到己烷或庚烷内，在所述己烷或所述庚烷中、于惰性气体下颗粒化适当时间，过滤所形成的浆状物并干燥保留物(其中包含式6化合物)。
18．权利要求1的方法，其中所述式2化合物在加入到所述混合物之前先加以分离，然后溶于非质子溶剂C，并通过将包含所述式2化合物的非质子溶剂C加到所述混合物内的方式将式2化合物加到所述混合物中。
19．权利要求18的方法，其中所述分离依次包括向所述溶液中加入己烷或庚烷，过滤所形成的浆状物并干燥保留物。
20．权利要求18的方法，其中所述非质子溶剂C为THF、甲苯、或二氯甲烷。
21．权利要求1的方法，该方法包括以下步骤制备包括式2化合物的溶液，该步骤依次包括向甲苯中加入式1化合物，在N2中于搅拌下加入适量DMF，并加入SOCl2；由式3化合物制备其中M+为Na+的式4化合物，该步骤依次包括在大约65℃下向THF和水的混合液中加入式3化合物和NaHCO3；通过偶联所述式2和式4化合物制备其中M+为Na+的式5化合物，该步骤依次包括在N2气氛和保持大约65℃温度下将所述溶液加到所述混合物内，并且在加完之后使混合物温度降到室温；向所述混合物中加入适量EtOAc；将所述式6化合物提取到所述EtOAc内，该步骤依次包括分离所述水层A和所述有机层A，用酸水溶液处理所述的有机层A，使所述水层B与所述有机层B分开，并保留所述有机层B；和分离所述式6化合物，该步骤依次包括浓缩所保留的有机层B，将浓缩的有机层B置换到己烷或庚烷内，N2下在所述己烷或庚烷中颗粒化所置换的有机层B过夜，过滤所得浆状物，并干燥保留物。
22．权利要求1的方法，该方法包括步骤制备包含式2化合物的溶液，该步骤依次包括向甲苯中加入式1化合物，在N2中于搅拌下加入适量DMF，并加入SOCl2；由式3化合物制备其中M+为K+的式4化合物，该步骤依次包括在大约-5℃下向THF和水的混合液中加入式3化合物和K3PO4；通过偶联所述式2和式4化合物制备其中M+为K+的式5化合物，该步骤依次包括在N2气氛和保持大约-5℃的温度下将所述溶液加到所述混合物内，并且在加完之后使所述混合物升温到室温；向所述混合物中加入适量二氯甲烷；将所述式6化合物提取到所述二氯甲烷内，该步骤依次包括分离所述水层A和所述有机层A，用1M HCl处理所述的有机层A，分离所述水层B与所述有机层B，并保留所述有机层B；以及分离所述式6化合物，该步骤依次包括蒸馏浓缩所保留的有机层B，将浓缩层置换到庚烷或己烷内，直至蒸汽温度达到大约95℃，然后冷却到室温，过滤所得浆状物，并干燥保留物。
23．权利要求1的方法，其中所述式6化合物进一步反应生成WO96／39385或WO96／39384中所述的取代的N-(吲哚-2-羰基)酰胺或其衍生物。
24．权利要求23的方法，其中所述取代的N-(吲哚-2-羰基)-酰胺或其衍生物为5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-((R)-羟基-二甲基氨基甲酰基甲基)-2-苯基-乙基]-酰胺，5，6-二氯-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-[(R)-羟基-(甲氧基-甲基-氨基甲酰基)-甲基]-2-苯基-乙基}-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-[(R)-羟基-(甲氧基-甲基-氨基甲酰基)-甲基]-2-苯基-乙基}-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸((1S)-{(R)-羟基-[2-羟基-乙基)-甲基-氨基甲酰基]-甲基}-2-苯基-乙基)-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-[(R)-羟基-(甲基-吡啶-2-基-氨基甲酰基)-甲基]-2-苯基-乙基}-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸((1S)-{(R)-羟基-[甲基-(2-吡啶-2-基-乙基)-氨基甲酰基]-甲基}-2-苯基-乙基)-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-3-氧代-丙基]-酰胺盐酸盐，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-(3-羟基-氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代-丙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-异噁唑烷-2-基-3-氧代-丙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-[1，2]噁嗪烷-2-基-3-氧代-丙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-((3S)-羟基-吡咯烷-1-基)-3-氧代-丙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-3-((3S，4S)-二羟基吡咯烷-1-基)-(2R)-羟基-3-氧代-丙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-3-((3R，4S)-二羟基-吡咯烷-1-基)-(2R)-羟基-3-氧代-丙基]-酰胺，或5-氯-1H-吲哚-2-羧酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-吗啉-4-基-3-氧代-丙基)-酰胺。5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-2-(3-羟基亚氨基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[2-(顺式-3，4-二羟基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[2-((3S，4S)-二羟基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-2-(顺式-3，4-二羟基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[2-(1，1-二氧代-噻唑烷-3-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸(2-氧代-2-噻唑烷-3-基-乙基)-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-(4-氟苄基)-2-(4-羟基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-2-((3RS)-羟基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[2-氧代-2-((1RS)-氧代-1-噻唑烷-3-基)-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-(2-氟-苄基)-2-(4-羟基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-2-((3S，4S)-二羟基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-2-(3-羟基-氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-2-(3-羟基亚氨基-氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺，或5-氯-1H-吲哚-2-羧酸[(1S)-苄基-2-(4-羟基亚氨基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基]-酰胺。
25．权利要求23的方法，其中所述的进一步反应是按方法A进行。
26．式4化合物 其中M+为四-C1-C6烷基铵离子。
27．权利要求26的化合物，其中M+为NBu4+。
28．式5化合物
29．权利要求28的化合物，其中M+为NBu4+。
全文摘要
本发明提供了制备3(S)－[(5－氯－1H－吲哚－2－羰基)－氨基]－2(R)－羟基－4－苯基丁酸的新方法。同样还提供了这些方法中使用的新中间体。而且,按照本发明新方法制备的3(S)－[(5－氯－1H－吲哚－2－羰基)－氨基]－2(R)－羟基－4－苯基丁酸的新方法可进一步反应生成已知的吲哚－2－甲酸胺化合物及其衍生物,这些化合物具有糖原磷酸化酶抑制活性,它们对患有糖原磷酸化酶依赖性疾病或病症的哺乳动物(尤其是人)具有有效的治疗作用。
文档编号C07D209/42GK1283615SQ0011839
公开日2001年2月14日 申请日期2000年6月16日 优先权日1999年6月18日
发明者K·M·德夫莱斯, D·E·弗克斯, P·D·翰曼, J·B·乔金森, D·J·胡弗 申请人:辉瑞产品公司