苯并咪唑衍生物的制作方法

专利名称：苯并咪唑衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及苯并咪唑衍生物，所述化合物在个体之间的疗效没有差异。本发明苯并咪唑衍生物非常安全，并且因此可用作消化性溃疡的治疗剂。
背景技术：
质子泵(H+/K+-ATPase)抑制剂能有力地抑制胃酸分泌，而胃酸是消化性溃疡的主要原因。因此，质子泵抑制剂被广泛地用作消化性溃疡的治疗剂。迄今为止已知的质子泵抑制剂(在下文中称为“现有质子泵抑制剂”)的实例包括奥美拉唑、艾美拉唑、兰索拉唑、雷贝拉唑和泮托拉唑(日本专利申请特开平54-141783、WO 94/27988、日本专利申请特开平61-50978、日本专利申请特开平64-6270和日本专利申请特开平61-22079)。
近几年，药动学分析已揭示，现有质子泵抑制剂主要是由CYP2C19—细胞色素P450(CYP)的同种型代谢的(Clin.Pharmacokinet.，1996，Vol.31，p 9-28；USP 5877192；Aliment.Pharmacol.Ther.，2001，Vol.15，p 793-803)。而且，已知多种现有质子泵抑制剂诱导CYP1A2—细胞色素P450的另一同种型(Xenobiotica，1997，Vol.27，No.1，p 1-9)。
已经在人中鉴定了CYP2C19的遗传多态性，因此，某些人是弱代谢者，它们在CYP2C19活性方面有遗传性的不足，而其他人是表现出CYP2C19活性的强代谢者。所以，已经为人所接受的是，当通过CYP2C19代谢的现有质子泵抑制剂以常用剂量施用给强代谢者时，在某些情况下，他们对抑制剂效力产生的反应小于弱代谢者产生的反应(Ann.Intern.Med.，1998，Vol.129，1027-1030；Gastroenterology，2001，Vol.120，Suppl.1.，A-432，(#2203)；and Gastroenterology，2001，Vol.120，Suppl.1.，A-435，(#2219))。因此，使强代谢者对这些药物起的反应与弱代谢者一样有效的一种方法是将药物以较高剂量施用给强代谢者。然而，对于弱代谢者来说，无需以这样的高剂量给药，并且也增加了副作用的发生率。
出于上述原因，当现有质子泵抑制剂施用给个体时，有益的作用过程是首先鉴定个体的CYP2C19基因型，然后根据基因型信息来确定适于该个体的抑制剂有效剂量(Aliment.Pharmaeol.Ther.，1999，Vol.13，p453-458)。
如上所述，某些现有质子泵抑制剂诱导CYP1A家族的酶。当发生酶诱导作用时，由这些酶代谢的茶碱、咖啡因和类似药物在早期失去，引起不能获得预期疗效的药物相互作用危险(Eur.J.Clin.Pharmacol.，1995，Vol.48，p391-395)。
已知，当被CYP1A亚族成员摄取和代谢时，某些原致癌物质被激活，并由此表现出致癌性。因此，可以相象，当施用可诱导CYP1A家族同种型成员—事实是导致诱导同种型的质子泵抑制剂时，就促进了原致癌物质的激活，增加了癌症发生率提高的危险性(Gastroenterology，1990，Vol.99，p737-747)。
由于这些因素，需要这样的质子泵抑制剂，它们因为不受CYP2C19酶活性的影响而能够保证接受相同剂量抑制剂的患者可同等地获得适当疗效，并且由于不诱导CYP1A家族的成员而具有低的诱导药物相互作用—导致这些成员的酶活性增加—的危险性和低的癌症发展危险性。
本发明公开由于上述原因，本发明者们已经合成了多种化合物，并使用他们所设计的综合筛选方法—也就是使用所有质子泵抑制作用、CYP2C19活性抑制能力和CYP1A2诱导能力的筛选方法—进行了筛选，结果发现，下式(1)所示的苯并咪唑衍生物或其盐表现出优良的质子泵抑制作用，较少地被CYP2C19代谢，且具有低的CYP2C19诱导能力，因此它们在患者之间的疗效方面表现出极小差异，而且是高度安全的，所以可用作消化性溃疡治疗剂，这样本发明得以完成。
因此，本发明提供了下式(1)所示的苯并咪唑衍生物或其盐 (其中R代表氢原子或甲氧基，且n是0或1)。
本发明还提供了含有式(1)苯并咪唑衍生物或其盐作为活性组分的药物。
本发明还提供了含有式(1)苯并咪唑衍生物或其盐和可药用载体的药物组合物。
本发明还提供了抑制胃酸分泌的方法和治疗消化性溃疡的方法，其特征在于施用式(1)苯并咪唑衍生物或其盐。
本发明还提供了式(1)苯并咪唑衍生物或其盐在制备药物中的应用。
实施本发明的最佳方式对于本发明化合物的盐没有任何特别限制，只要盐是可药用的即可。盐的实例包括无机酸的酸加成盐，例如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、氢溴酸盐和氢碘酸盐；有机酸的加成盐，例如乙酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐和四氟硼酸盐；和金属盐例如锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和铋盐。
其中R是甲氧基的本发明化合物的具体实例包括2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑、2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑、(+)-2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑、(+)-2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑、(-)-2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑、(-)-2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑和它们的盐。
其中R是氢原子的本发明化合物的具体实例包括2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑、2-{4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑、(+)-2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑、(+)-2-{4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑、(-)-2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑、(-)-2-{4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑和它们的盐。
本发明化合物可具有立体异构体、旋光化合物和外消旋化合物，它们都在本发明范围内。此外，本发明化合物包括溶剂化物，优选水合物。
本发明化合物可通过下述方法1或2来制得(制备方法1) (其中X1代表卤素原子，且n和R具有上述相同含义)。
简言之，将4-卤代吡啶(2)与醇(3)在碱存在下进行缩合反应。然后将所得甲硫基苯并咪唑(4)氧化，以由此获得本发明化合物(1)。
原料4-卤代吡啶(2)是通过例如将4-氯-2-氯甲基-3-甲氧基吡啶与1H-苯并咪唑-2-硫醇在碱例如氢氧化钠存在下进行反应而获得的。
在4-卤代吡啶(2)与醇(3)的缩合反应中使用的碱的实例包括金属氢化物例如氢化钠、氢化锂或氢化钾；金属例如锂、钠或钾；叔丁醇钾；和正丁基锂。该缩回反应优选在溶剂例如二甲亚砜、N，N-二甲基甲酰胺、二甲氧基乙烯、四氢呋喃或二氧杂环己烷中，或者在起溶剂作用的醇(3)中，在室温-回流温度于搅拌下进行1-24小时。
所得甲硫基苯并咪唑(4)的氧化反应优选通过使用有机过酸例如间氯过苯甲酸或过乙酸；醇过氧化物例如偏高碘酸钠、氢过氧化枯烯、叔丁氧基过氧化物或过氧化氢水溶液；或OXONE(Du Pont产物)来进行。该氧化反应优选在溶剂例如二氯甲烷、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺、甲苯或乙酸乙酯中，在0-50℃于搅拌下进行10分钟-24小时。
(制备方法2) (其中X2代表羟基或卤素原子，且n和R具有上述相同含义)。
简言之，将1H-苯并咪唑-2-硫醇(5)与2-取代的甲基吡啶(6)反应。然后将所得甲硫基苯并咪唑(4)氧化，以由此获得本发明化合物(1)。当化合物(6)中的X2是羟基时，在进行该反应方案之前，用卤化剂例如亚硫酰氯处理化合物(6)。
在1H-苯并咪唑-2-硫醇(5)与2-取代的甲基吡啶(6)的反应中使用的碱的实例包括氢氧化钠、氢氧化锂和氢氧化钾。在该反应中使用的溶剂的实例包括醇例如甲醇、乙醇或将水合醇；非质子溶剂例如二甲亚砜或N，N-二甲基甲酰胺；和醚例如四氢呋喃或二氧杂环己烷。该反应优选在室温-回流温度于搅拌下进行1-24小时。
按照类似于上面的制备方法1所述的方式进行所得甲硫基苯并咪唑(4)的氧化反应。
当欲制备的本发明化合物是旋光化合物时，通过使用N，N-二异丙基乙基胺、四异丙醇钛或旋光羟基羧酸酯(例如酒石酸酯或扁桃酸酯(其适当地选自L-型和D-型以制备所需的旋光化合物))和醇过氧化物(Sharpless氧化)来进行氧化反应，以由此获得所需的本发明旋光化合物。
可按照常规方法，使用碱例如氢氧化钠或氢氧化钾将所得本发明化合物(1)转化成所需的盐。通过盐交换，使用例如氯化镁或氯化钙(和起溶剂作用的醇，特别是乙醇或水合乙醇)可将盐进一步转化成另一种盐。
本发明化合物(1)表现出优良的质子泵抑制作用和胃酸分泌抑制活性，较少地被人CYP2C19代谢，并且具有低的CYP1A2诱导能力。因此，由于在个体之间疗效的极小差异(否则这种差异将由于个体与个体之间的不同CYP2C19活性而产生)，本发明化合物(1)保证接受相同剂量药物的患者可同等地获得适当疗效。而且，本发明化合物(1)具有低的通过诱导CYP1A家族成员酶而引起的药物相互作用的危险性和低的癌症发展危险性，因此可用作能可靠地提供具有安全性的疗效的胃酸分泌抑制剂或消化性溃疡治疗剂。
本发明药物含有本发明化合物(1)或其盐作为活性组分，并且可形成含有本发明化合物(1)或其盐与可药用载体的药物组合物。
当本发明化合物作为胃酸分泌抑制剂或消化性溃疡治疗剂给药时，化合物可以以粒剂、粉剂、胶囊或糖浆剂的形式口服给药，或者作为栓剂、注射剂、外用制剂或滴注剂的形式非胃肠道给药。本发明化合物的剂量取决于病症严重程度、患者年龄和溃疡类型。日剂量一般为约0.01-200mg，优选为0.05-50mg，更优选为0.1-10mg，化合物每天给药一次或者以分开的方式每天给药几次。
本发明化合物的药物产品是按照常规方法，使用常用载体制得的。
如下所述制备用于口服给药的固体药物产品。将活性组分与赋形剂(以及如果需要的话添加剂例如粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂或甜味剂/矫味剂)混和，通过常规方法加工所得混合物，以由此制得例如片剂、包衣片、粒剂、粉剂或胶囊形式的产品。
赋形剂的实例包括乳糖、玉米淀粉、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、晶状纤维素、二氧化硅；粘合剂的实例包括聚(乙烯醇)、聚(乙烯醚)、乙基纤维素、甲基纤维素、阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、虫胶、羟丙基纤维素、羟丙基淀粉和聚(乙烯吡咯烷酮)；崩解剂的实例包括淀粉、琼脂、明胶粉、晶状纤维素、碳酸钙、碳酸氢钠、柠檬酸钙、糊精和果胶；润滑剂的实例包括硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇、二氧化硅和氢化植物油；着色剂的实例包括被允许加到药品中的着色剂；甜味剂和矫味剂的实例包括可可粉、薄荷醇、芳香粉、薄荷油、冰片和肉桂皮粉。通过使用包衣材料例如邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素和异丁烯酸共聚物，可将这些口服固体药物产品形成肠溶药物产品。当然，可根据需要用糖、明胶或其它包衣材料将这些片剂或粒剂适当地包衣。
如下所述制备注射剂。将如果需要的话已经与添加剂例如pH调节剂、缓冲剂、稳定剂或助溶剂混和的活性组分按照常规方法加工，以由此制得注射剂例如皮下注射剂、肌内注射剂或静脉内注射剂。
实施例下面通过实施例来更详细地描述本发明，这些实施例不应当理解为将本发明限于此。
参考实施例1(1)将乙酸酐(400mL)加到4-氯-3-甲氧基-2-甲基吡啶-1-氧化物(65.0g)中，将该混合物在90℃加热。约3分钟后，开始剧烈反应。反应在20分钟内完成。减压除去溶剂。然后将甲苯(50mL)加到残余物中，减压除去溶剂。将残余油状物用于下面的反应。
(2)将在(1)中获得的残余物溶解在甲醇(200mL)中，在冰浴冷却和搅拌下，将通过把85％氢氧化钾(50.0g)溶解在100mL水中而制得的溶液加到该混合物中。移去冰浴，继续在室温搅拌30分钟。将该反应混合物减压浓缩(浴温40℃)，向其中加入水(400mL)，然后用二氯甲烷(200mL×3)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，然后用无水硫酸钠脱水。减压除去溶剂。用少量己烷-异丙基醚混合物洗涤残余物，获得了4-氯-2-羟基甲基-3-甲氧基吡啶(46.1g，产率71％)。
1H-NMR(CDCl3，δ)3.89(3H，s)，4.00(1H，t，J＝5.0Hz)，4.80(2H，d，J＝5.0Hz)，7.30(1H，d，J＝5.5Hz)，8.23(1H，d，J＝5.5Hz)m.p.68-69℃(3)将4-氯-2-羟基甲基-3-甲氧基吡啶(41.0g)溶解在二氯甲烷(150mL)中。在冰浴冷却和搅拌下，用10分钟滴加亚硫酰氯。移去冰浴，将该混合物在室温搅拌30分钟。减压除去溶剂，将己烷(50mL)加到残余物中，然后蒸馏，获得了4-氯-2-氯甲基-3-甲氧基吡啶氯化物，为棕色固体(54.1g，产率定量)。
(4)将4-氯-2-氯甲基-3-甲氧基吡啶氯化物(54.1g)溶解在乙醇(200mL)中，加入1H-苯并咪唑-2-硫醇(35.4g)。在冰浴冷却下，用30分钟滴加通过将18.9g氢氧化钠溶解在300mL水中而制得的溶液。在冰浴冷却下将该混合物搅拌30分钟。经由过滤收集所沉淀出的固体结晶，然后用水洗涤。除去水后，将固体溶解在二氯甲烷中，分离出有机层。用水和盐水洗涤有机层，然后用无水硫酸钠脱水。减压除去溶剂。通过硅胶柱色谱(硅胶NH-DM1020(Fuji Silicia的产品)，二氯甲烷)纯化残余物，获得了2-[(4-氯-3-甲氧基)吡啶-2-基-甲硫基]-1H-苯并咪唑(62.7g，产率86.9％)。
1H-NMR(CDCl3，δ)4.00(3H，s)，4.47(2H，s)，7.15-7.22(2H，m)，7.37(1H，d，J＝5.5Hz)，7.4 2-7.65(2H，m)，8.29(1H，d，J＝5.5Hz)，12.20-12.30(1H，bs)m.p.140-141℃
MASS(El)305M+参考实施例2在冰浴冷却下，将4，4，4-三氟丁醇滴加到234mg氢化钠(60％的油分散液)在5mL二甲亚砜内的悬浮液中。加入完成后，将该混合物在室温搅拌2小时。将2-[(4-氯-3-甲氧基)吡啶-2-基-甲硫基]-1H-苯并咪唑(600mg)加到该反应混合物中。将该混合物加热至60℃(内温)，并搅拌2小时。将该反应混合物倒入碎冰和水(50mL)上，加入饱和硫酸氢钾溶液直至混合物的pH变为7，然后用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并有机层，依次用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。用正己烷-异丙基醚混合物洗涤由此制得的结晶，获得了2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲硫基]-1H-苯并咪唑(580mg，产率74.5％)。
1H-NMR(CDCl3，δ)2.11-2.41(4H，m)，3.94(3H，s)，4.16(2H，t，J＝6.5Hz)，4.40(2H，s)，6.84(1H，d，J＝5.5Hz)，7.17-7.22(2H，m)，7.53-7.57(2H，m)，8.26(1H，d，J＝5.5Hz)，12.70-12.80(1H，bs)MASS(El)397M+实施例1(1)在冰浴冷却下，用20分钟将20mL 80％间氯过苯甲酸(309mg)在二氯甲烷中的溶液滴加到2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲硫基]-1H-苯并咪唑(580mg)在二氯甲烷(5mL)与二甲基甲酰胺(25mL)的溶剂混合物内的混合物中。加入完成后，将该混合物在相同温度下搅拌50分钟。将该反应混合物倒入50mL碎冰和饱和碳酸氢钠溶液上，然后用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并有机层，用水和盐水洗涤2次，然后用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过硅胶柱色谱(硅胶NH-DM1020(Fuji Silicia的产品)，氯仿∶甲醇＝20∶1)纯化残余物，获得了2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲基亚磺酰基]-1H-苯并咪唑(524mg，产率89％)。
(2)将由此获得的2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲基亚磺酰基]-1H-苯并咪唑(524mg)溶解在0.1N氢氧化钠溶液(12.7mL)和乙醇(3mL)中。减压除去溶剂。将乙醚加到所得粉末中。通过过滤收集所沉淀出的粉末，然后在室温减压干燥，获得了2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲基亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的钠盐(498mg，产率90％)。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)1.95-2.05(2H，m)，2.40-2.50(2H，m)，3.81(3H，s)，4.18(2H，t，J＝6.5Hz)，4.32(1H，d，J＝13.0Hz)，4.74(1H，d，J＝13.0Hz)，6.84-6.88(2H，m)，7.07(1H，d，J＝5.5Hz)，7.43-7.47(2H，m)，8.21(1H，d，J＝5.5Hz)MASS(FAB)436MH+IR(KBr，cm-1)3450，1589，1387，1255，1151，1035参考实施例3将2，2，2-三氟乙醇(24.0g)、三乙胺(24.0g)、四丁基碘化铵(1.7g)和碳酸亚乙酯(30.5g)混和，将该混合物在100℃(内温)加热并搅拌36小时。将该反应混合物在室温减压浓缩，然后蒸馏(67℃，30mmHg)，获得了2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙醇(24.7g，产率71％)。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.97-1.99(1H，m)，3.73-3.78(4H，m)，3.90(2H，q，J＝8.5Hz)参考实施例4在冰浴冷却下，将2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙醇(3.77g)滴加到785mg氢化钠(60％的油分散液)在20mL二甲亚砜内的悬浮液中。加热完成后，将该混合物加热至50℃，并搅拌30分钟。将2-[(4-氯-3-甲氧基)吡啶-2-基-甲硫基]-1H-苯并咪唑(2.0g)加到该反应混合物中，在50℃继续搅拌1.5小时。将该反应混合物加到碎冰和水(50mL)中，然后用乙酸乙酯(100mL)萃取。将有机层依次用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)纯化残余物，获得了2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲硫基}-1H-苯并咪唑(2.0g，产率74％)。
1H-NMR(CDCl3，δ)3.96(3H，s)，3.97(2H，q，J＝8.5Hz)，4.05-4.08(2H，m)，4.26-4.29(2H，m)，4.40(2H，s)，6.86(1H，d，J＝5.5Hz)，7.17-7.21(2H，m)，7.40-7.70(2H，m)，8.27(1H，d，J＝5.5Hz)，12.80-12.90(1H，bs)MASS(El)413M+实施例2(1)在冰浴冷却下，用20分钟将10mL 80％间氯过苯甲酸(329mg)在二氯甲烷中的溶液滴加到2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲硫基}-1H-苯并咪唑在10mL二氯甲烷内的溶液中。加入完成后，将该混合物在相同温度下搅拌60分钟。将该反应混合物倒入50mL碎冰和饱和碳酸氢钠溶液上，然后用氯仿(40mL×2)萃取。合并有机层，用水洗涤2次，用盐水洗涤1次，然后用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过硅胶柱色谱(硅胶NH-DM1020(FujiSilicia的产品)，氯仿∶甲醇＝20∶1)纯化残余物，获得了2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲基亚磺酰基}-1H-苯并咪唑(560mg，产率86％)。
(2)将由此获得的2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲基亚磺酰基}-1H-苯并咪唑(560mg)溶解在0.1N氢氧化钠溶液(13.0mL)和乙醇(3mL)中。减压除去溶剂。加入乙醚，通过过滤收集所得沉淀，然后在室温减压干燥，获得了2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲基亚磺酰基}-1H-苯并咪唑的钠盐(523mg，产率89％)。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)3.81(3H，s)，3.95-4.00(2H，m)，4.17(2H，q，J＝9.0Hz)，4.25-4.30(2H，m)，4.35(1H，d，J＝13.0Hz)，4.72(1H，d，J＝13.0Hz)，6.80-6.90(2H，m)，7.08(1H，d，J＝5.5Hz)，7.40-7.50(2H，m)，8.20(1H，d，J＝5.5Hz)MASS(FAB)452MH+IR(KBr，cm-1)2943，1589，1492，1269，1163，1074，1010实施例3(1)将2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲硫基}-1H-苯并咪唑(1.56g)溶解在无水甲苯(40mL)中。加入水(68μL)和4分子筛(1.5g)，将该混合物在室温搅拌15分钟。然后依次加入L-(+)-酒石酸二乙酯(1.95g)和钛酸四异丙酯(1.07g)，将该混合物在50℃搅拌1小时。让该混合物的温度返回室温。加入N，N-二异丙基乙基胺(650μL)和氢过氧化枯烯(560μL)，将该混合物在室温再搅拌3小时。将饱和亚硫酸钠溶液(4mL)加到该反应混合物中，将该混合物搅拌10分钟，然后过滤。将饱和碳酸氢钠溶液加到滤液中，搅拌该混合物，然后经由硅藻土过滤。用甲苯萃取滤液。依次用水和盐水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过硅胶柱色谱(硅胶NH-DM1020(Fuji Silicia的产品)，氯仿∶甲醇＝20∶1)纯化残余物，获得了(+)-2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲基亚磺酰基}-1H-苯并咪唑(1.13g)。
(2)将(+)-2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲基亚磺酰基}-1H-苯并咪唑(1.13g)溶解在乙腈(5mL)中。加入0.1N氢氧化钠水溶液(26.2mL)，搅拌该混合物。减压除去溶剂，用乙醚将该残余物重结晶，获得了(+)-2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲基亚磺酰基}-1H-苯并咪唑的钠盐(880mg)。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)3.81(3H，s)，3.99-4.01(2H，m)，4.18(2H，q，J＝9.0Hz)，4.27-4.38(2H，m)，4.33(1H，d，J＝13.0Hz)，4.72(1H，d，J＝13.0Hz)，6.85-6.88(2H，m)，7.08(1H，d，J＝5.5Hz)，7.44-7.47(2H，m)，8.20(1H，d，J＝5.5Hz)MASS(FAB)452MH+光学纯度89.7％ee(液相色谱法)[α]D25＝+39.4(c＝0.51，H2O)实施例4重复实施例3的操作，但是使用D-(-)-酒石酸二乙酯代替L-(+)-酒石酸二乙酯，由此获得了(-)-2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲基亚磺酰基}-1H-苯并咪唑的钠盐。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)3.80(3H，s)，3.98-4.01(2H，m)，4.18(2H，q，J＝9.0Hz)，4.25-4.38(2H，m)，4.34(1H，d，J＝13.0Hz)，4.72(1H，d，J＝13.0Hz)，6.85-6.87(2H，m)，7.09(1H，d，J＝5.5Hz)，7.44-7.47(2H，m)，8.20(1H，d，J＝5.5Hz)MASS(FAB)452MH+光学纯度92.0％ee(液相色谱法)[α]D25＝-39.5(c＝0.500，H2O)实施例5(1)重复实施例3的操作，但是使用在参考实施例2中获得的2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲硫基]-1H-苯并咪唑作为原料，由此获得了(+)-2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的钠盐。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)1.95-2.05(2H，m)，2.40-2.50(2H，m)，3.81(3H，s)，4.18(2H，t，J＝6.5Hz)，4.34(1H，d，J＝13.0Hz)，4.74(1H，d，J＝13.0Hz)，6.86-6.89(2H，m)，7.07(1H，d，J＝5.5Hz)，7.44-7.48(2H，m)，8.20(1H，d，J＝5.5Hz)MASS(FAB)436MH+光学纯度75.9％ee(液相色谱法)[α]D25＝+66.7(c＝0.500，MeOH)(2)将(+)-2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的钠盐(2.0g)溶解在20mL甲醇与40mL水的混合物中。在室温向其中加入467mg氯化镁六氢水合物在10mL水中的溶液，将该混合物搅拌30分钟。经由过滤收集沉淀，然后减压干燥，获得了(+)-2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的镁盐(1.03g)。
1H-NMR(CD3OD，δ)1.98-2.05(2H，m)，2.24-2.31(2H，m)，3.69(3H，s)，4.10(2H，t，J＝6.0Hz)，4.65-4.75(2H，m)，6.97(1H，d，J＝5.5Hz)，7.04-7.10(2H，m)，7.40-7.50(2H，m)，8.02(1H，d，J＝5.5Hz)[α]D25＝+113.4(C＝0.520，MeOH)MASS(FAB)849MH+实施例6(1)重复实施例3的操作，但是使用在参考实施例2中获得的2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲硫基]-1H-苯并咪唑作为原料，并使用D-(-)-酒石酸二乙酯代替L-(+)-酒石酸二乙酯，由此获得了(-)-2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的钠盐。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)1.95-2.05(2H，m)，2.40-2.50(2H，m)，3.81(3H，s)，4.18(2H，t，J＝6.5Hz)，4.32(1H，d，J＝13.0Hz)，4.78(1H，d，J＝13.0Hz)，6.85-6.88(2H，m)，7.06(1H，d，J＝5.5Hz)，7.44-7.47(2H，m)，8.20(1H，d，J＝5.5Hz)MASS(FAB)436MH+光学纯度82.0％ee(液相色谱法)[α]D25＝-73.3(c＝0.468，MeOH)(2)使用(-)-2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的钠盐重复实施例5(2)的一般操作，由此获得了(-)-2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的镁盐。
1H-NMR(CD3OD，δ)1.97-2.03(2H，m)，2.23-2.32(2H，m)，3.67(3H，s)，4.09(2H，t，J＝6.0Hz)，4.65-4.75(2H，m)，6.95(1H，d，J＝5.5Hz)，6.95-7.05(2H，m)，7.40-7.50(2H，m)，8.01(1H，d，J＝5.5Hz)[α]D25＝-115.5(C＝0.496，MeOH)MASS(FAB)849MH+实施例7使用(+)-2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲基亚磺酰基}-1H-苯并咪唑的钠盐重复实施例5(2)的一般操作，由此获得了(+)-2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲基亚磺酰基}-1H-苯并咪唑的镁盐。
1H-NMR(CD3OD，δ)3.71(3H，s)，3.93(2H，q，J＝9.0Hz)，3.92-3.95(2H，m)，4.18-4.21(2H，m)，4.76-4.80(2H，m)，6.97(1H，d，J＝5.5Hz)，6.99-7.05(2H，m)，7.40-7.50(2H，m)，8.01(1H，d，J＝5.5Hz)[α]D25＝+44.0(C＝0.502，H2O)MASS(FAB)881MH+实施例8使用(-)-2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲基亚磺酰基}-1H-苯并咪唑的钠盐重复实施例5(2)的一般操作，由此获得了(-)-2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲基亚磺酰基}-1H-苯并咪唑的镁盐。
1H-NMR(CD3OD，δ)3.70(3H，s)，3.92(2H，q，J＝9.0Hz)，3.90-3.93(2H，m)，4.15-4.21(2H，m)，4.77-4.82(2H，m)，6.97(1H，d，J＝5.5Hz)，6.98-7.05(2H，m)，7.40-7.50(2H，m)，8.01(1H，d，J＝5.5Hz)[α]D25＝-44.0(c＝0.506，H2O)MASS(FAB)881MH+实施例9(1)将2-羟基甲基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶(9.6g)溶解在二氯甲烷(100mL)中。在冰浴冷却下滴加亚硫酰氯(5.3g)，将该混合物在相同温度下搅拌30分钟。将该混合物减压浓缩，把残余物溶解在甲醇(100mL)中。向其中加入2-巯基苯并咪唑(6.1g)、氢氧化钠(4.9g)和水(50mL)，将该混合物在室温搅拌1小时。将该反应混合物减压浓缩，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层依次用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过硅胶柱色谱(硅胶NH-DM1020(Fuji Silicia的产品)，氯仿)纯化残余物，获得了2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲硫基]-1H-苯并咪唑(13.8g)。
1H-NMR(CDCl3，δ)2.07-2.15(2H，m)，2.27-2.37(2H，m)，4.10(2H，t)，4.30(2H，s)，6.80(1H，dd)，6.88(1H，d)，7.13-7.26(2H，m)，7.45-7.68(2H，m)，8.48(1H，d)，12.91(1H，s)MASS(EI)367M+m.p.136-137℃(2)将上面获得的2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲硫基]-1H-苯并咪唑(1.27g)溶解在二氯甲烷(20mL)中。在-30℃滴加80％间氯过苯甲酸(746mg)在二氯甲烷(10mL)中的溶液，将该混合物在相同温度下搅拌1小时。将饱和碳酸氢钠溶液(30mL)加到该反应混合物中。让该混合物的温度返回室温，将混合物搅拌10分钟，然后用二氯甲烷萃取。将有机层依次用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过硅胶柱色谱(硅胶NH-DM1020(Fuji Silicia的产品)，氯仿∶甲醇＝10∶1)纯化残余物，获得了2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑(1.2g)。
(3)在加热下将上面获得的2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑溶解在乙醇(20mL)中。加入5N氢氧化钠(0.62mL)，然后减压除去溶剂，获得了2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的钠盐(1.2g)，为粉末。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)1.78-1.87(2H，m)，2.24-2.34(2H，m)，3.69-3.87(2H，m)，4.44(1H，d)，4.56(1H，d)，6.63(1H，d)，6.83(1H，dd)，6.84-6.91(2H，m)，7.44-7.48(2H，m)，8.34(1H，d)MASS(FAB)406MH+(4)将在(2)中获得的2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑溶解在乙醇中。加入氢氧化钾溶液，然后减压除去溶剂，获得了2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的钾盐，为粉末。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)1.77-1.83(2H，m)，2.22-2.35(2H，m)，3.60-3.70(1H，m)，3.80-3.92(1H，m)，4.48(1H，d，J＝12.0Hz)，4.59(1H，d，J＝12.0Hz)，6.61(1H，d，J＝2.5Hz)，6.82(1H，dd，J＝2.5，5.5Hz)，6.86-6.89(2H，m)，7.44-7.47(2H，m)，8.32(1H，d，J＝5.5Hz)MASS(FAB)422MH+(5)通过常规方法，使用氯化镁六水合物将在(3)中获得的2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的钠盐进行盐交换，由此获得了2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的镁盐，为粉末。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)1.80-1.95(2H，m)，2.30-2.45(2H，m)，3.80-4.05(2H，m)，4.40-4.60(2H，m)，6.65-7.05(4H，m)，7.45-7.55(2H，m)，8.35-8.37(2H，m)MASS(FAB)789MH+(6)通过常规方法，使用氯化钙二水合物将在(3)中获得的2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的钠盐进行盐交换，由此获得了2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的钙盐，为粉末。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)1.75-1.86(2H，m)，2.25-2.31(2H，m)，3.73-3.88(2H，m)，4.47(1H，d，J＝12.5Hz)，4.59(1H，d，J＝12.5Hz)，6.67(1H，d，J＝2.5Hz)，6.85(1H，dd，J＝2.5，5.5Hz)，6.90-6.94(2H，m)，7.47-7.51(2H，m)，8.35(1H，d，J＝5.5Hz)MASS(FAB)805MH+实施例10(1)将2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲硫基]-1H-苯并咪唑(6.0g)溶解在乙酸乙酯(150mL)中。加入4分子筛(6.0g)和水(290μL)，将该混合物在室温搅拌15分钟。然后加入(+)-酒石酸二乙酯(6.7g)和钛酸四异丙酯(4.6g)，将该混合物在50℃搅拌1小时。让该混合物的温度返回室温。加入N，N-二异丙基乙基胺(2.8mL)和88％氢过氧化枯烯(2.7mL)，将该混合物在室温搅拌4小时。将饱和碳酸氢钠溶液加到该反应混合物中，将该混合物搅拌30分钟，然后经由硅藻土过滤。用乙酸乙酯萃取滤液。依次用水和盐水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过硅胶柱色谱(硅胶NH-DM1020(Fuji Silicia的产品)，氯仿∶甲醇＝10∶1)纯化残余物，获得了(-)-2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑(4.5g)。
(2)在加热下将上面获得的(-)-2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑溶解在乙醇(40mL)中。加入5N氢氧化钠溶液(2.3mL)，然后减压除去溶剂。经由过滤收集沉淀，获得了(-)-2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的钠盐，为粉末(4.7g)。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)1.78-1.89(2H，m)，2.22-2.40(2H，m)，3.69-3.87(2H，m)，4.48(1H，d)，4.59(1H，d)，6.69(1H，d)，6.86(1H，dd)，6.98-7.02(2H，m)，7.51-7.54(2H，m)，8.33(1H，d)MASS(FAB)406MH+[α]D25＝-12.2(C＝0.48，H2O)实施例11重复实施例10的操作，但是使用(-)-酒石酸二乙酯代替(+)-酒石酸二乙酯，由此获得了(+)-2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑的钠盐。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)1.79-1.87(2H，m)，2.25-2.35(2H，m)，3.72-3.87(2H，m)，4.45(1H，d)，4.57(1H，d)，6.65(1H，d)，6.85(1H，dd)，6.91-6.94(2H，m)，7.47-7.50(2H，m)，8.33(1H，d)MASS(FAB)406MH+[α]D25＝+14.0(C＝0.49，H2O)
实施例12重复实施例9的步骤(1)-(3)，但是使用2-羟基甲基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶代替2-羟基甲基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶，由此获得了2-{4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)3.79-4.02(4H，m)，4.07(2H，q)，4.46(1H，d)，4.58(1H，d)，6.70(1H，d)，6.84-6.89(3H，m)，7.44-7.47(2H，m)，8.34(1H，d)MASS(FAB)422MH+实施例13(1)重复实施例9(1)的操作，但是使用2-羟基甲基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶代替2-羟基甲基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶，由此获得了2-{4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲硫基}-1H-苯并咪唑。
(2)将上面获得的2-{4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲硫基}-1H-苯并咪唑(6.5g)溶解在甲苯(160mL)中。加入4分子筛(6.5g)和水(310μL)，将该混合物在室温搅拌15分钟。然后加入(+)-酒石酸二乙酯(7.0g)和钛酸四异丙酯(4.8g)，将该混合物在50℃搅拌1小时。让该混合物的温度返回室温。加入N，N-二异丙基乙基胺(3.0mL)和88％氢过氧化枯烯(2.8mL)，将该混合物在室温搅拌3小时。将饱和碳酸氢钠溶液加到该反应混合物中，将该混合物搅拌10分钟，然后经由硅藻土过滤。用乙酸乙酯萃取滤液。依次用水和盐水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过硅胶柱色谱(硅胶NH-DM1020(Fuji Silicia的产品)，氯仿∶甲醇＝10∶1)纯化残余物，获得了(-)-2-{4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑(5.4g)。
(3)将上面获得的(-)-2-{4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑溶解在50mL甲醇中。加入5N氢氧化钠溶液(2.7mL)，然后减压除去溶剂。通过过滤收集沉淀，获得了(-)-2-{4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑的钠盐，为粉末(5.4g)。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)3.80-4.06(4H，m)，4.08(2H，q)，4.42(1H，d)，4.57(1H，d)，6.73(1H，d)，6.87-6.90(3H，m)，7.45-7.49(2H，m)，8.35(1H，d)MASS(FAB)422MH+[α]D25＝-28.7(C＝0.49，H2O)实施例14重复实施例13的步骤(2)和(3)，但是使用(-)-酒石酸二乙酯代替(+)-酒石酸二乙酯，由此获得了(+)-2-{4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑的钠盐。
1H-NMR(DMSO-d6，δ)3.80-4.06(4H，m)，4.08(2H，q)，4.44(1H，d)，4.58(1H，d)，6.72(1H，d)，6.85-6.91(3H，m)，7.45-7.49(2H，m)，8.35(1H，d)MASS(FAB)422MH+[α]D25＝+23.6(C＝0.49，H2O)测试实施例1(质子泵抑制作用)(1)制备酶样本(H+/K+-ATPase)将以冷冻状态贮藏的取自猪的胃体分离成肌肉层和粘膜层。在混和器内，将粘膜层在体积是其5倍，并含有蔗糖(0.25mol/L)和EGTA(1mmol/L)的Tris-HCl缓冲液(20mmol/L，pH7.4)(在下文中该混合物称为Tris-HCl缓冲液)中匀化。将该匀化物离心(9,000×g，30分钟)。将上清液轻轻地放置在含有30％蔗糖和1mmol/L EGTA的8mL Tris-HCl缓冲液(20mmol/L，pH7.4)上。将该混合物以100,000×g超离心60分钟。将通过离心所获得的界面级份离心(113,000×g，60分钟)两次。将沉淀悬浮在Tris-HCl缓冲液中，将该悬浮液以低速匀化。所得匀化物是所要的酶样本，将其在-80℃贮藏。依据Smith等人描述的方法(Anal.Biochem.，150，76-85(1985))，使用BCA蛋白测分析试剂定量测定样本的蛋白含量。所有这些步骤都是在冰浴冷却下进行的。
(2)抑制H+/K+-ATPase的活性(在pH1)依据Biochem.Biophys.Res.Commun.，40，880-886(1970)中描述的方法测定抑制H+/K+-ATPase的活性。具体来说，使用ATP作为底物，定量测定是所得降解产物的无机磷酸盐。考虑到测试化合物的溶解度，预先用盐酸溶液(含有50％DMSO，1×10-1mol/L，pH1)处理测试化合物。将具有不同浓度的各种测试化合物加到盐酸溶液中，以由此产生1000倍稀释度，然后让稀释的化合物在室温静置15分钟。这些初步处理后，将10μL已进行过上述初步处理的溶液加到840μL含有或不含有20mmol/L KCl的Tris-乙酸盐缓冲液(40mmol/L，pH7.5，含有2mmol/L MgCl2，可称为TE缓冲液)中。然后加入100μL用TE缓冲液稀释的酶溶液(5μg蛋白)。在37℃培养30分钟。然后加入50μL溶解在TE缓冲液中且不含KCl的ATP溶液(40mmol/L)以开始酶反应(总体积1mL，ATP终浓度2mmol/L)。在37℃培养30分钟。然后加入冰冷的12％三氯乙酸(2mL)以停止酶反应。加入钼试剂(1mL，3.75％钼酸铵/1.5mol/L硫酸)和乙酸丁酯(5mL)，然后在剧烈摇动下混和5分钟。在310nm测定乙酸丁酯层的吸收度。基于使用以不同浓度溶解在8％TCA溶液中的KH2PO4按照类似方法获得的稀释度来确定标准曲线，并计算无机磷酸盐浓度。以一式两份制备欲测定的样本。将测定结果平均，由在含有KCl的样本中测定的无机磷酸盐浓度与在不含有KCl的样本中测定的无机磷酸盐浓度之间的差值获得残余活性。根据由对照样本(DMSO)获得的视为100％的活性计算活性被抑制的百分比。计算并显示作为每种测试化合物的抑制效力的IC50值。所有测试化合物都是在临用前溶解在二甲亚砜中。
所得结果如表1所示。
表1
测试实施例2(胃酸分泌抑制作用)(1)所用的测试动物是购自Charles River Japan，Inc.的sprague-Dawley(SD)大鼠(7周大小，雄性)，将大鼠喂养5天或更长时间。
将每种测试药物悬浮或溶解在0.5％羧甲基纤维素钠溶液中，由此制得悬浮液或溶液来达到2.5mL/kg。
(2)测定胃酸分泌使用Hiramatsu等人描述的快速Fistula法(Dig.Dis.Sci.，39，689-697(1994))测定禁食18小时的大鼠的在组胺刺激下的分散分泌量。简言之，将每只大鼠轻度麻醉，然后将装满3.8％柠檬酸溶液的有翼管式针头留置在大鼠的尾静脉中。打开大鼠的腹部，将胃的幽门部分扎住。然后在十二指肠制一个小孔，用留置的装满盐水的喂食管将大鼠腹部封住。用盐水洗涤胃内部，将聚乙烯制成的Fistula管(内径4mm)放置在前胃，将前胃的切口部分扎住并固定。将胃和十二指肠放回腹腔内，让Fistula管和进食管暴露在外面。将大鼠放在Ballman笼子II中。经由预先留置在尾静脉内的有翼注射针头连续施用组胺(8mg/kg/h，1.38mL/h)。15分钟后，收集大鼠的胃液。然后每一小时收集一次胃液。每次记录收集的胃液的量，然后用NaOH(0.1mol/L)滴定至pH7.0终点。由滴定所消耗的体积计算酸度。在开始测试之前，将大鼠分组，使各组之间开始收集的组内胃液总体积相同。然后经由预先连接在十二指肠上的进食管将每种测试药物施用(2.5mL/kg)到十二指肠中。给对照组的每只大鼠施用0.5％Na-CMC溶液。
(3)结果分析上面获得的数据以平均值±标准误差表示。通过将在3个时间点，即开始收集胃酸后3、4和5个小时的酸排放量加和来获得酸的排放总量。由对照组的酸排放总量和每个治疗组的酸排放总量计算出每个治疗组的抑制百分比。根据所计算的每个治疗组的抑制百分比，使用Probit方法计算出50％有效剂量(ED50)。结果如表2所示。
表2
测试实施例3(人CYP2C19活性抑制测试)CYP2C19特异性地参与由S-(+)-美芬妥因生成4’-羟基美芬妥因的代谢反应。因此，使用表达系统CYP2C19，测定作为CYP2C19活性指数的4’-羟基美芬妥因的产量(浓度)，以由此评价各种测试物质的抑制作用。
(a)代谢活性测试将S-(+)-美芬妥因的甲醇溶液(125μmol/L，50μL)和测试物的甲醇溶液(25μmol/L，0、10、100或200μL)置于10-mL玻璃试管中。在氮气氛下于40℃除去溶剂。加入75μL 0.5M磷酸盐缓冲液(pH7.4)-0.5mM EDTA混合物(20∶10)、140μL纯化水和10μL人CYP2C19酵母表达系统微粒体(购自Sumitomo Chemical Co.，Ltd.)。加入25μL NADPH产生系统(60mM MgCl2、6.7mg/mL β-NADP+、27.2mg/mL G-6-P和10μL/mL G-6-Pdh的混合物)以开始反应。
在37℃培养10分钟。然后加入12％高氯酸水溶液(50μL)来终止反应。
(b)定量测定方法将反应停止后，加入内标物质(I.S.)对羟基苯甲酸甲酯(100μg/mL，50μL)和乙醚(2mL)。将该混合物摇动10分钟，然后以3,000rpm离心10分钟。分离出有机层，在氮气氛下于40℃除去溶剂。将残余物溶解在200μL流动相中，通过高效液相色谱法(HPLC)分析该混合物。
为了产生校准曲线，使用4’-羟基美芬妥因溶液代替S-(+)-美芬妥因溶液来重复上述方法的一般操作。根据4’-羟基美芬妥因与I.S.的峰面积来进行定量测定。比较在对照样本中产生的4’-羟基美芬妥因的量与在测试化合物存在下产生的4’-羟基美芬妥因的量，比较结果用作活性指数。当加入的测试化合物浓度为10μM时所获得的结果如表3所示。
HPLC是在下述条件(HPLC条件A或HPLC条件B)下进行的。
<测定条件>
HPLC条件A柱CAPCELL PAK C18 UG120，5μm 4.6mmφ×250mm前柱CAPCELL PAK C18 UG120，4.0mmφ×10mm检测波长UV 204nm检测器灵敏度0.01 AUSF流动相CH3CN∶50mM磷酸盐缓冲液(pH8)＝20∶80流动相流速0.8mL/分钟
I.S.对羟基苯甲酸甲酯柱温40℃样本量40μLHPLC条件B柱CAPCELL PAK C18 UG120，5μm 4.6mmφ×250mm前柱CAPCELL PAK C18 UG120，4.0mmφ×10mm检测波长UV 204nm检测器灵敏度0.01 AUSF流动相CH3CN∶50mM磷酸盐缓冲液(pH4)＝20∶80流动相流速0.8mL/分钟I.S.对羟基苯甲酸甲酯柱温40℃样本量40μL表3
测试实施例4(人CYP1A诱导测试)CYP1A特异性地参与从7-乙氧基试卤灵形成试卤灵的代谢反应。因此，使用HepG2细胞，测定作为CYP1A活性指数的在暴露于测试物条件下的试卤灵产量，以由此评价CYP1A诱导作用。
(a)暴露于HepG2细胞和制备样本将HepG2细胞(购自Dainippon Pharmaceutical Co.，Ltd.)在含有失活牛血清的培养基(补充有5mL丙酮酸钠(100mM)、5mL非必需氨基酸(×100)、5mL抗生素和抗真菌剂溶液(10,000单位青霉素、10mg链霉素、25μg两性霉素B/mL)、5mL L-谷氨酰胺溶液(200mM)和50mL失活牛血清的450mL极限必需培养基)中培养。培养约7天后(70-80％铺满)，通过抽吸除去培养基。加入新鲜的培养基(10mL)和5μL测试物在二甲亚砜(DMSO)中的溶液，然后在37℃培养24小时。用于培养的培养基含有浓度为0.05％的DMSO、浓度为20μM的测试物、浓度为20μM的β-萘并黄酮(阳性对照)和浓度为0.1μM的3-甲基胆蒽(阳性对照)。24小时后，通过抽吸除去培养基，然后用5mL磷酸盐缓冲液洗涤2次(37℃)。将冰冷的磷酸盐缓冲液(0.5M，pH7.4)与EDTA(0.5mM)的混合物(20∶10)稀释3倍，把该稀释的溶液(4-5mL)加到细胞中。使用细胞刮器将细胞刮下来，然后在冰冷却下用玻璃匀化器匀化，以由此制得可用于下面测试的样本。
(b))代谢活性测试将10μL 78μM 7-乙氧基试卤灵在DMSO中的溶液加到细胞匀化物(890μL)中。加入100μL NADPH产生系统(60mM MgCl2、6.7mg/mL β-NADP+、27.2mg/mL G-6-P和10μL/mL G-6-Pdh的混合物)，并立即在37℃开始反应。
在37℃培养10或20分钟。然后加入17％碳酸钾水溶液(100μL)以终止反应。
(c)定量测定方法停止反应后，将该反应混合物以3,000rpm离心20分钟。使用荧光计(激发550nm，荧光586nm)测定上清液的试卤灵含量。使用试卤灵溶液重复上述一般操作，以产生校准曲线。
如下所述测定测试样本的蛋白浓度。将5倍稀释的2.5mL蛋白测定溶液(Bio-Rad)加到细胞匀化物(100μL)中。将该混合物在室温静置30分钟，然后使用荧光计(波长595nm)测定蛋白浓度。使用人白蛋白(Sigma的产品)产生用于测定蛋白浓度的校准曲线。
当获得试卤灵浓度时，将浓度除以代谢反应时间和样本的蛋白浓度，以由此计算代谢速度。把暴露于阳性对照物质奥美拉唑下的试卤灵产生速度设为100％，计算暴露于测试物下的相应速度，将其用作CYP1A诱导活性的指数。结果如表4所示。
表4
从表1-4中可清楚地看到，本发明化合物表现出优良的质子泵抑制作用和胃酸分泌抑制作用。此外，高达60％或更高的高水平的CYP2C19活性指数表明本发明化合物较少地被CYP2C19代谢，这意味着在疗效方面个体之间的差异很小。而且，低至约10％或更低的低水平CYP1A2诱导活性指数证实了本发明化合物的高度安全性。与之相反，所测定的常规质子泵抑制剂的CYP2C19活性指数值非常低(低于40％)，这表明它们显著地被CYP2C19代谢，导致个体之间有不同的治疗反应。此外，大部分常规质子泵抑制剂表现出相当高的CYP1A2诱导活性。
工业实用性本发明化合物表现出在个体之间有较小差异的治疗作用，虽然个体表现出不同的CYP2C19活性，这样在施用相同剂量时患者可同等地获得相同的适当疗效。此外，由于本发明化合物具有低的通过诱导CYP1A家族成员酶而引起的药物相互作用的危险性和低的癌变危险性，因此本发明化合物可用作能安全可靠地提供疗效的消化性溃疡治疗剂。
权利要求
1.下式(1)所代表的苯并咪唑衍生物或其盐 其中R代表氢原子或甲氧基，且n是0或1。
2.权利要求1的苯并咪唑衍生物或其盐，其中所述化合物选自2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑、2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑、(+)-2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑、(+)-2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑、(-)-2-[3-甲氧基-4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑、(-)-2-{3-甲氧基-4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑和它们的盐。
3.权利要求1的苯并咪唑衍生物或其盐，其中所述化合物选自2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑、2-{4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑、(+)-2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑、(+)-2-{4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑、(-)-2-[4-(4，4，4-三氟丁氧基)吡啶-2-基-甲亚磺酰基]-1H-苯并咪唑、(-)-2-{4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)乙氧基]吡啶-2-基-甲亚磺酰基}-1H-苯并咪唑和它们的盐。
4.药物，其中含有如权利要求1-3任一项所述的苯并咪唑衍生物或其盐作为活性组分。
5.权利要求4的药物，其中所述药物是胃酸分泌抑制剂。
6.权利要求4的药物，其中所述药物是消化性溃疡治疗剂。
7.药物组合物，其中含有如权利要求1-3任一项所述的苯并咪唑衍生物或其盐和可药用载体。
8.抑制胃酸分泌的方法，其特征在于施用如权利要求1-3任一项所述的苯并咪唑衍生物或其盐。
9.治疗消化性溃疡的方法，其特征在于施用如权利要求1-3任一项所述的苯并咪唑衍生物或其盐。
10.如权利要求1-3任一项所述的苯并咪唑衍生物或其盐在制备药物中的应用。
11.如权利要求1-3任一项所述的苯并咪唑衍生物或其盐在制备胃酸分泌抑制剂中的应用。
12.如权利要求1-3任一项所述的苯并咪唑衍生物或其盐在制备消化性溃疡治疗剂中的应用。
全文摘要
通式(1)所代表的苯并咪唑衍生物或其盐；和含有所述化合物的药物其中R代表氢原子或甲氧基，且n是0或1。尽管个体之间的CYP2C19活性不同，但是上述化合物在个体之间的疗效方面表现出很小差异，所以它们可以以相同给药剂量对任何患者产生适当疗效。此外，它们表现出低的由CYP1A家族酶诱导的相互作用和癌症发生危险性。因此，这些化合物可安全地用作消化性溃疡治疗剂和有保证地产生疗效。
文档编号C07D401/12GK1511153SQ0281072
公开日2004年7月7日 申请日期2002年9月18日 优先权日2001年9月18日
发明者长泽正明, 西冈裕康, 浅见一保, 三浦直良, 筱崎丰, 森田仁, 保, 康, 良 申请人:泽里新药工业株式会社