专利名称：端基巯基修饰的肽核酸寡聚体化合物的合成方法
技术领域：
本发明叙述了一种端基巯基修饰的肽核酸寡聚体化合物的合成方法。
背景技术：
肽核酸(PNA，peptide nucleic acid)是90年代初丹麦科学家发明的一种全新的DNA类似物。它以中性酰胺(2-氨基乙基)甘氨酸键取代了DNA中的戊糖磷酸二酯键骨架，碱基部分通过亚甲基羰基连接与主骨架，碱基与骨架间隔3个键，相邻碱基间隔6个键，是一类模拟DNA的反义核酸。PNA与DNA的结构比较见
图1。
图1 DNA与PNA的结构比较B＝核酸碱基，A，T，G，C从化学角度来看，PNA的结构是“寡聚核苷酸”和“蛋白质”的杂交体，因此其显示了独特的性质。PNA不仅具有对酶的稳定性和对DNA(RNA)结合的序列特异性，而且还可以方便地进行化学合成，这些优点使PNA作为反义核酸药物十分引人注目。因此，自1991年PNA问世以来，科学家们对其进行了大量的研究，并针对其缺点和各种不同研究的需要设计出了许多修饰或改造了的PNA。PNA很有希望成为有效的抗肿瘤药物和有力的分子生物学工具。
发明内容
本发明的目的在于提供一种端基巯基修饰的肽核酸寡聚体化合物的合成方法。
本发明通过如下措施实现端基巯基修饰的肽核酸寡聚体化合物的结构式如式(I)化合物HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTOHI其中NH2TTTOH＝ 本发明以本试验室合成的NH2TTTO-Resin为起始物，经过一步反应得到目标产物式(I)化合物。
通式(I)的端基巯基修饰的肽核酸寡聚体化合物的合成方法，其特征在于式(I)化合物的合成方法包括三个步骤A)使用式(II)的Br-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-Br和式(III)的NH2TTTO-Resin反应生成式(IV)的Br-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-NH2TTTO-Resin；B)使用式(IV)的Br-(CH2CH2O)3CH2CH2-NH2TTTO-Resin与式(V)的NH2CSNH2反应生成式(VI)的HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NH2TTTO-ResinC)使用式(VII)的CF3COOH和式(VIII)的m-CH3C6H4OH与式(VI)的HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTO-Resin反应生成式(I)的化合物。
在上述的合成方法中，本发明的A步骤中，以DMF和二氯甲烷为溶剂，在-5℃-常温条件下进行12～24小时反应。
本发明的A步骤中，式(II)和式(III)的摩尔比为5～15∶1在上述的合成方法中，本发明的B步骤中，以DMF和二氯甲烷为溶剂，在-5℃～室温反应12～24小时的条件下进行反应。
本发明的B步骤中，式(IV)的Br-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTO-Resin与式(V)的NH2CSNH2的摩尔比为1∶5～13。
在上述的合成方法中，本发明的C步骤中，以式(VII)的CF3COOH和式(VIII)的m-CH3C6H4OH为溶剂，在常温条件下进行1-3小时反应。
本发明的C步骤中，式(VII)的CF3COOH和式(VIII)的m-CH3C6H4OH摩尔比为3-5∶1。
本发明的C步骤中，HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NH2TTTO-Resin与反应介质的摩尔比为1∶10-20。
本发明所涉及的端基巯基修饰的肽核酸寡聚体化合物的合成可以用下面的化学方程式来表示1)Br-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-Br+NH2TTTO-Resin--Br-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTO-Resin2)Br-(CH2CH2O)3CH2CH2-NH2TTTO-Resin+NH2CSNH2--HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTO-Resin3)HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTO-Resin+CF3COOH/m-CH3C6H4OH--HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTOH为了更好的理解本发明，通过以下实例进行说明实施例1A.Br-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTO-Resin的合成在固相合成仪中，加入NH2TTTO-Resin0.5g，适量DMF/二氯甲烷将其淹没。将五倍量的Br-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-Br加入。室温反应12小时后，反应完毕，二氯甲烷洗三次(5ml×3)。抽滤。
B.HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTO-Resin的合成在上述A反应体系中，适量DMF/二氯甲烷将其淹没反应树脂，加入10倍量的硫脲，室温反应12小时，反应完毕，二氯甲烷洗三次(5ml×3)。抽滤。
C.HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTOH在上述B反应体系中，加入适量CF3COOH/m-CH3C6H4OH，室温反应2小时，过滤，收集滤液，加入乙醚，冷冻数日，得到沉淀，即为目标产物。
产物的表征产物由MS表征(m/e)Mr1008分子式C41H60N12O16SMS测得(M/e)HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTOH 1008主要M/e及解析1.HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTT+7252.TOH+2833.TOH+-C＝O＝2554.T2665.HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NH2-CH2CH2+235其中1)+2)＝1008证实目标化合物的生成。
权利要求
1.一种端基巯基修饰的肽核酸寡聚体的合成方法，其特征在于该方法依次包括以下步骤A.使用式(II)的Br-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-Br与式(III)的NH2TTTO-Resin反应生成式(IV)Br-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-NHTTTO-ResinBr-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-BrNH2TTTO-ResinIIIIIBr-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2O CH2CH2-NHTTTO-ResinIVB.使用式(IV)的Br-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTO-Resin与式(V)的NH2CSNH2反应生成式(VI)的HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTO-ResinNH2CSNH2HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTO-ResinVI VC.使用式(VII)的CF3COOH和式(VIII)的m-CH3C6H4OH与式(VI)的HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTO-Resin反应生成式(I)的标题化合物。HS-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTOHI
2.如权利要求1所说的方法，其特征在于A步骤以DMF和二氯甲烷的混合物作为反应介质，-5℃～室温反应12～24小时的条件下进行反应。
3.如权利要求1所说的方法，其特征在于A步骤中式(II)的Br-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-Br与式(III)的NH2TTTO-Resin摩尔比为5～15∶1。
4.如权利要求1所说的方法，其特征在于B步骤以DMF和二氯甲烷的混合物作为反应介质，-5℃～室温反应12～24小时的条件下进行反应。
5.如权利要求1所说的方法，其特征在于B步骤中式(IV)的Br-(CH2CH2O)3CH2CH2-NHTTTO-Resin与式(V)的NH2CSNH2的摩尔比为1∶5～13。
5.如权利要求1所说的方法，其特征在于C步骤以式(VII)的CF3COOH和式(VIII)的m-CH3C6H4OH溶液作为反应介质，室温，1～3小时的条件下进行反应。
6.如权利要求1所说的方法，其特征在于C步骤中式(VII)的CF3COOH和式(VIII)的m-CH3C6H4OH的摩尔比为3～5∶1。
全文摘要
本发明公开了一种端基巯基修饰的肽核酸寡聚体的合成方法。该方法采用固相合成技术制备肽核酸寡聚体，末端氨基被溴代聚醚取代，再经巯基化反应得到目标产物。相比较于文献报道，本发明具有路线简单，产物稳定性好，易纯化等特点。
文档编号C07K1/00GK1978461SQ200510126590
公开日2007年6月13日 申请日期2005年11月30日 优先权日2005年11月30日
发明者刘相, 陈淼 申请人:中国科学院兰州化学物理研究所