作为抗肿瘤剂的喹喔啉衍生物的制作方法

专利名称：：作为抗肿瘤剂的喹喔啉衍生物的制作方法作为抗肿瘤剂的喹喔啉衍生物政府资助本文工作，全部或者部分，是在国立癌症研究院资金1R01CA97061-01的资助下完成的。美国联邦政府在本发明中享有一定权利。发明背景许多用于治疗疾病的药物是以疾病细胞和正常细胞间的普遍差异作为靶标。例如，用于治疗卵巢癌和乳腺癌并抑制微管功能的紫杉醇，被认为基于肿瘤细胞相对正常细胞更高的增殖率而显示对肿瘤细胞的特异性(Miller和Ojima,Chem.Rec.1:195-211，2002)。然而，尽管这是一致的观点，紫杉醇的体外活性在不同肿瘤细胞系间差别很大(Weinstein等人，Science275:343-349,1997)，表明遗传因子可以调节肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性，并且肿瘤细胞的反应性不是简单的决定于增殖率。分子靶向治疗代表了抗癌药物开发的一种有前途的新方法(Shawver等人，CancerCell1:117-23,2002)。利用这个方法，设计小分子用于直接抑制特定肿瘤细胞类型中突变或者过表达的癌蛋白。通过靶向于肿瘤细胞内发现的特定分子缺陷，这种方法最终可以产生适于特定治疗各种肿瘤遗传组成的方法。近来成功的两个分子靶向抗癌治疗剂的例子是Gleevec(甲磺酸伊马替尼imatinibmesylate)，一种在费城染色体阳性慢性髓性白血病中发现的断裂点簇集区-abelsen激酶(BCR-ABL)癌蛋白的抑制剂(Capdeville等人，NatRevDmgDiscov1:493-502,2002),和Herceptin(曲妥单抗trastuzumab),—种耙向在转移性乳腺癌中发现的HER2/NEU癌蛋白的单克隆抗体(Mokbel和Hassanally,CurrMedResOpin17:51-9，2001)。一种互补的策略涉及寻找基因型选择性的抗肿瘤试剂，所述试剂只有在特定癌蛋白存在或者特定肿瘤抑制物缺失的条件下对肿瘤细胞才是致死性的。这种基因型选择性化合物可以直接靶向癌蛋白，或者他们可以耙向其他参与癌蛋白相联信号网络的关键蛋白。已报道的显示合成致死性的化合物包括(i)雷帕霉素类似物CCI-779在缺少PTEN的骨髓瘤细胞中(Shi等人，CancerRes62:5027-34，2002)，(ii)Gleevec在BCR-ABL-转化细胞中(Druker等人，NatMed2:561-6,1996)，和(iii)大量未充分表征的化合物(Stockwell等人,ChemBiol6:71-83，1999;Torrance等人，NatBiotechnol19:940-5,2001)。尽管有上述研究，仍然非常需要开发和/或鉴定能够选择性靶向肿瘤细胞的化合物。发明简述利用一种合成致死筛选法，尤其是合成致死高通量筛选法，这种方法可有效鉴定用于治疗或者预防病症或者疾病的试剂或者药物，所述病症或者疾病例如肿瘤或者其他以细胞增生为特征的病症(例如白血病)的存在或者发展，申请人已经鉴定出大量化合物/试剂/药物用于在个体中治疗或者预防癌症(例如肿瘤或者白血病)，所述个体例如需要治疗或者预防的人。本发明还提供与一些鉴定出的有治疗价值的化合物/试剂直接或者间接结合的细胞蛋白。这种细胞蛋白提供治疗以细胞增生(例如白血病)为特征的疾病或者病症的其他方法。此处使用的术语"试剂"和"药物"可以互换使用；它们可以是化合物或者分子。在一个实施方案中，本发明指向此处公开的化合物，包括它的盐。在另一个实施方案中，本发明指向药物组合物，包括药学上可接受的载体和此处公开的化合物。仍在另一个实施方案中，本发明是一种促进细胞死亡的方法，包括对细胞给药有效量的此处公开的化合物。一方面，本发明是一种鉴定候选抗肿瘤试剂的方法，包括以下步骤a)在合适条件下用足量待测试剂接触细胞；b)检测待测试剂是否增强或者抑制erastin结合蛋白的水平或者编码erastin结合蛋白的核酸的水平。该方法还可以包括以下步骤a)用肿瘤细胞接触待测试剂(体内或者体外)；b)检测待测试剂是否抑制肿瘤细胞的生长。另一方面，本发明是一种鉴定候选抗肿瘤试剂的方法，包括a)用待测试剂接触erastin结合蛋白或者表达erastin结合蛋白的细胞，其中erastin结合蛋白或者待测试剂可选用可检测标记物标记；b)检测待测试剂是否结合erastin结合蛋白。该方法还可以包括a)用肿瘤细胞接触待测试剂(体内或者体外)；b)检测待测试剂是否抑制肿瘤细胞的生长。使用不同的待测试剂文库，可重复上述两种方法。另一方面，本发明涉及鉴定化合物的筛选方法，所述化合物杀伤或者抑制致瘤细胞的生长，例如工程化致瘤细胞，但不是它们对应的同源正常细胞。该方法已经用于鉴定已知的和新的具有基因型-选择活性的化合物，包括已知的化合物阿霉素、柔红霉素、米托蒽醌、喜树碱、桑吉瓦霉素、棘霉素、波凡霉素、NSC146109和新的化合物即此处的erastin。这些化合物在一种或者多种下列物质存在的情况下具有增加的活性hTERT癌蛋白，SV40大T癌蛋白(LT)，小T癌蛋白(ST)，人乳头状瘤病毒类型16(HPV)E6癌蛋白，HPVE7癌蛋白,和致癌的HRAS，NRAS禾PKRAS。申请人检测到hTERT和E7或者LT的过表达增加拓扑异构酶2a的表达，以及在表达hTERT的细胞中过表达的RASV^和ST增加拓扑异构酶1的表达并且使细胞致敏到erastin起始的非凋亡细胞死亡步骤。本发明涉及一种鉴定试剂(例如药物)的方法，所述试剂对致瘤细胞有选择毒性(例如杀伤或者抑制生长)，例如工程化致瘤细胞，包括人致瘤细胞(例如工程化致瘤细胞和/或肿瘤细胞)。在一个实施方案中，本发明涉及鉴定选择性杀伤或者抑制工程化人致瘤细胞生长(有毒的)的试剂(例如药物)，包括用候选试剂接触作为待测细胞的工程化人致瘤细胞；检测与候选试剂接触的待测细胞的活性；将待测细胞的活性与合适对照的活性进行比较。在所有实施方案中，通过检测试剂(例如药物)杀伤细胞或者抑制细胞生长/增殖以及两者兼有的能力来评定活力。如果待测细胞的活力低于对照细胞，则鉴定出对工程化人致瘤细胞具有选择毒性(杀伤或者抑制生长)的试剂(例如药物)。适当的对照是与待测细胞相同类型的细胞，除了对照细胞未被工程化为致瘤的。例如，对照细胞可能是衍生出待测细胞的亲本原代细胞。对照细胞在与待测细胞相同的条件下接触候选试剂。适当的对照可以同时进行，或者预先确立(例如，预先确立的标准或者参考)。'在一个实施方案中,鉴定对致瘤细胞有选择毒性的试剂的方法还包括评定试剂的毒性，所述试剂经鉴定是在适当的动物模型的工程化人致瘤细胞或者其他的基于细胞或者基于非细胞的体系或者试验中筛选的结果。例如，如此鉴定的试剂或者药物可以评定其对诸如从个体获得的肿瘤细胞或者白血病细胞的毒性或者对(一种或者多种)癌(肿瘤)细胞系的毒性。例如，本方法还可以包含在合适的小鼠模型或者非人灵长类动物中评定试剂(或者药物)对致瘤细胞的选择毒性。本发明还涉及一种生产通过本发明方法鉴定的试剂(例如药物)的方法，例如对工程化人致瘤细胞具有选择毒性的试剂(例如药物)。利用已知方法合成对致瘤细胞显示选择毒性的试剂(例如药物)。本发明另外还涉及鉴定对工程化致瘤细胞有毒性的试剂(例如药物)的方法，例如工程化人致瘤细胞。在一个实施方案中，本发明涉及鉴定杀伤或抑制工程化人致瘤细胞的生长(对其有毒性)的试剂的方法，包括将待测细胞与候选试剂接触，所述待测细胞是工程化的人致瘤细胞；检测与候选试剂接触的待测细胞的活性；将待测细胞的活性与合适对照的活性进行比较。如果待测细胞的活力低于对照细胞，则鉴定出对工程化人致瘤细胞具有毒性(杀伤或者抑制生长)的试剂(例如药物)。这里，适当的对照是与待测细胞相同类型的细胞(例如工程化人致瘤细胞)，除了对照细胞未与候选试剂接触。适当的对照可以同时进行，或者预先确立(例如，预先确立的标准或者参考)。例如，如此鉴定的试剂或者药物可以评定其对诸如从个体获得的肿瘤细胞或者白血病细胞的毒性或者对(一种或者多种)癌(肿瘤)细胞系的毒性。在一个实施方案中,鉴定对工程化致瘤细胞有毒性的试剂的方法还包括评定试剂的毒性，所述试剂是在适当的动物模型或者其他的基于细胞或者基于非细胞的体系或者试验中的工程化人致瘤细胞中筛选的结果所鉴定的。例如，本方法还包括在适当的小鼠模型或者非人灵长类动物中评定试剂(例如药物)对致瘤细胞的毒性。本发明还涉及一种生产本发明方法鉴定的试剂(例如药物)的方法，例如对工程化人致瘤细胞具有毒性的试剂(例如药物)。利用已知方法合成对致瘤细胞显示毒性的试剂(例如药物)。在另一个实施方案中，本发明是一种降低肿瘤生长率的方法，包括给药足够降低肿瘤生长率的量的治疗试剂，其中治疗试剂是(a)增强或者抑制VDAC蛋白水平的试剂；(b)增强或者抑制VDAC蛋白活性的试剂；(c)结合VDAC蛋白的试剂；(d)结合和/或调节包括至少一个VDAC和任选一个或多个其他蛋白的蛋白复合物的试剂；(e)包括VDAC多肽或者其功能变异体的试剂；(f)包括编码VDAC多肽或者其功能变异体的核酸的试剂；合适的试剂在现有形式、或者完全或部分新陈代谢后具有所述活性。一方面，本发明是一种治疗癌症患者的方法，包括对患者给药选自以下的治疗试剂，(a)增强或者抑制VDAC蛋白水平的试剂；(b)增强或者抑制VDAC蛋白活性的试剂；(c)结合VDAC蛋白的试剂；(d)结合和/或调节包括至少一种VDAC和任选一或多种其他蛋白的蛋白复合物的试剂；(e)包括VDAC多肽或者其功能变异体的试剂；(f)包括编码VDAC多肽或者其功能变异体的核酸的试剂；合适的试剂在现有形式、或者完全或部分新陈代谢后具有所述活性。适合用于降低肿瘤生长率和治疗癌症患者的合适试剂包括但不限于，小的有机分子、肽、蛋白质、模拟肽、核酸、抗体及其组合。这种试剂通常与可接受的载体制成制剂，可以静脉内、口服、颊的、胃肠外、通过吸入喷雾、通过局部施用或者经皮肤给药。试剂还可以通过局部给药方式给药。试剂还可以与至少一种其他抗癌化疗剂联用，所述化疗剂以累加或者协同方式抑制癌细胞。在另一方面，本发明是一种增加肿瘤细胞对化疗剂敏感性的方法，其中肿瘤细胞与增加或者减少erastin结合蛋白丰度的化合物接触。在相关方面，本发明是一种降低正常细胞对化疗剂敏感性的方法，其中正常细胞与减少或者增加erastin结合蛋白丰度的化合物接触。在本发明的某些实施方案中，通过筛选包括未知或者己知化合物(例如试剂，药物)或者两者的标记的(annotated)化合物文库、组合文库或者其他文库鉴定候选试剂。在某些实施方案中，本发明是一种鉴定抑制不需要的细胞增殖的候选治疗剂的方法，包括a)将待测试剂和VDAC蛋白或者包括至少一种VDAC和任选一或多种其他蛋白的蛋白复合物混合；b)检测待测试剂是否结合VDAC蛋白；c)如果待测试剂结合VDAC蛋白，将待测试剂与细胞接触(体内或者体外)并检测待测试剂是否改变细胞的增殖。VDAC蛋白与待测试剂的结合是可以例如，通过物理结合试验，诸如免疫结合试验、酵母双杂试验、荧光偏振试验、表面细胞质基因组(plasmon)共振或者荧光共振能量传递(FRET)试验来检测。在某些实施方案中，本发明涉及化合物erastin和一类erastin相关化合物(例如，本发明的化合物)。在其他实施方案中，本发明涉及化合物、erastinB和其相关化合物。在其他实施方案中，本发明涉及化合物、erastinA和其相关化合物。在本发明的其他实施方案中，本发明涉及选择性杀伤或者抑制工程化人致瘤细胞生长的(对其有毒的)emsthi的类似物。任选，本发明的这些化合物与药学可接受的载体一起制备成药物组合物。本发明还涉及鉴定参与肿瘤发生的细胞组分的方法。细胞组分包括，例如，蛋白(例如酶、受体)、核酸(例如脱氧核糖核酸、核糖核酸)，和脂(例如磷脂)。在一个实施方案中，本发明涉及一种鉴定参与肿瘤发生的(一种或者多种)细胞组分的方法，其中(a)细胞，诸如工程化人致瘤细胞与erastin接触；和(b)直接或者间接与erastin作用的细胞组分被鉴别。被鉴别的细胞组分是参与肿瘤发生的细胞组分。在另外的实施方案中，本发明涉及一种鉴定与erastin作用的(一种或者多种)细胞组分的方法，其中(a)细胞，诸如工程化人致瘤细胞、组织、器官、有机体或者上述之一的裂解产物或者提取物，与erastin接触；(b)直接或者间接与emstin作用的细胞组分被鉴别。被鉴别的细胞组分是直接或者间接与erastin作用的细胞组分。本发明还涉及治疗或者预防癌症的方法。在一个实施方案中，本发明涉及一种治疗或者预防癌症的方法，其中治疗有效量的化合物，诸如，例如erastin或者其类似物，或者下面式I-V的化合物，给药需要癌症治疗的个体。在某些实施方案中，癌症的特点在于细胞中的RAS途径被活化。在某些其他实施方案中，癌症的特点在于细胞表达SV40小T癌蛋白，或者与表达ST的细胞表型相似，和/或致癌HRAS。在某些优选的实施方案中，细胞基本上表达野生型水平的Rb(例如，至少大约50%、60%、70%、80%、90%、100%、110%、120%、130%或者150%等等)。本发明还涉及鉴定与一种或多种细胞组分作用的试剂(例如药物)的方法，所述细胞组分直接或者间接与erastin作用。在一个实施方案中，本发明涉及一种鉴定与细胞组分作用的试剂的方法，所述细胞组分与erastin作用，包括(a)用erastin接触细胞、组织、器官、有机体或者上述之一的裂解产物或者提取物；(b)鉴别与erastin(直接或者间接)作用的细胞组分；(c)用候选试剂接触细胞、组织、器官、有机体或者上述之一的裂解产物或者提取物，所述试剂是待被评定与细胞组分作用的能力的试剂或者药物，所述细胞组分与erastin作用；和(d)检测试剂是否与(b)中的细胞组分(直接或者间接)作用。如果试剂与(b)中的细胞组分作用，它就是与细胞组分作用的试剂，所述细胞组分与erastin作用。在相关方面，本发明还涉及鉴定与一种或者多种细胞组分作用的试剂(例如药物)的方法，所述细胞组分已知与erastin直接或者间接作用，该方法包括(a)用候选试剂接触细胞、组织、器官、有机体或者上述之一的裂解产物或者提取物，所述试剂是待被评定与细胞组分作用的能力的试剂或者药物，所述细胞组分已知与erastin作用；和(b)检测试剂是否与(a)中的细胞组分(直接或者间接)作用。如果试剂与(a)中的细胞组分作用，它就是与细胞组分作用的试剂，所述细胞组分与erastin作用。在某些实施方案中，细胞是一种工程化人致瘤细胞。在其他实施方案中，本发明涉及与(一种或多种)细胞组分直接或间接相互作用的化合物，所述细胞组分与erastin相互作用。在某些实施方案中，与erastin相互作用的细胞组分参与肿瘤发生。使用已知方法合成显示与细胞组分相互作用的试剂(例如药物)，所述细胞组分与erastin相互作用。本发明还涉及一种鉴定试剂(例如药物)的方法，所述试剂在肿瘤细胞中诱导死亡，例如通过细胞凋亡或者非细胞凋亡机理。在一个实施方案中，一种鉴定在肿瘤细胞中通过非细胞凋亡机理诱导死亡的试剂包括(a)用在肿瘤细胞中诱导死亡的候选试剂接触待测细胞，所述待测细胞是肿瘤细胞(或者包含肿瘤细胞的器官或者组织)；(b)评定试剂是否在待测细胞中诱导凋亡；和(c)与合适的对照比较(b)中凋亡的诱导。如果凋亡在对照细胞而不是待测细胞中被诱导，则鉴定出在肿瘤细胞中通过非细胞凋亡机理诱导死亡的试剂(例如药物)。合适的对照是与待测细胞相同类型的细胞，除了对照细胞与已知在细胞中诱导凋亡的试剂接触。合适的对照可以同时进行，或者可以预先建立(例如，预先建立标准或者参考)。在某些实施方案中，待测细胞是工程化人致瘤细胞。此处使用的"一"和"一个"是指一个或多个所指的物。在某些方面，本发明提供药物开发活动的方法。在一个实施方案中，本发明涉及一种进行药物开发活动的方法，包括(a)鉴定对工程化人致瘤细胞有选择毒性的试剂(例如药物)；(b)评定在(a)中鉴定的试剂或者其类似物在动物中的功效和毒性；和(c)制备包括一种或多种在(b)中评定的试剂的药物制剂。评定的功效可以是在动物的致瘤细胞中试剂选择性诱导细胞死亡的能力。在另一个实施方案中，进行药物开发活动的方法包括建立用于分配待售药物制剂的分配系统。任选，建立销售团队用于药物制剂的市场推广。在其他实施方案中，本发明涉及一种进行蛋白组学活动的方法，包括鉴定对工程化人致瘤细胞有选择毒性的试剂(例如药物)和将进一步开发对工程化人致瘤细胞有选择毒性的试剂的权利许可给第三方。在另一个实施方案中，本发明涉及一种进行药物开发活动的方法，包括(a)鉴定对工程化人致瘤细胞有毒性的(一种或多种)试剂(例如药物)；(b)评定在(a)中鉴定的试剂或者其类似物在动物中的功效和毒性；和(c)制备包括一种或多种在(b)中评定的试剂的药物制剂。例如，鉴定的试剂是erastin。评定的功效可以是在动物的致瘤细胞中，试剂选择性诱导细胞生长、毒性或者细胞死亡变化的能力。在另一个实施方案中，进行药物开发活动的方法包括建立用于分配待售药物制剂的分配系统。任选,建立销售团队用于药物制剂的市场推广。在其他实施方案中，本发明涉及一种进行蛋白组学活动的方法，包括鉴定对工程化人致瘤细胞有选择毒性的试剂(例如药物)和将进一步开发对工程化人致瘤细胞有选择毒性的试剂的权利许可给第三方。在另一个实施方案中，本发明涉及一种进行药物开发活动的方法，包括(a)鉴定与细胞组分相互作用的(一种或多种)试剂(例如药物)，所述细胞组分与erastin相互作用；(b)评定在(a)中鉴定的试剂或者其类似物在动物中的功效和毒性；和(c)制备包括一种或多种在(b)中评定的试剂的药物制剂。评定的试剂功效可以是其在动物的致瘤细胞中选择性诱导细胞死亡的能力。在另一个实施方案中，进行药物开发活动的方法包括建立用于分配待售药物制剂的分配系统。任选，建立销售团队用于药物制剂的市场推广。在其他实施方案中，本发明涉及一种进行蛋白组学活动的方法，包括鉴定与细胞组分相互作用的试剂(例如药物)，所述细胞组分与erastin相互作用，和将进一步开发与细胞组分相互作用的试剂的权利许可给第三方，所述细胞组分与erastin相互作用。在另一个实施方案中，本发明是一种进行制药活动的方法，包括(a)鉴定一种抑制细胞增殖的候选治疗剂，其中候选治疗剂是(i)增强或者抑制VDAC蛋白水平的试剂；(ii)增强或者抑制VDAC蛋白活性的试剂；(Hi)与VDAC蛋白结合的试剂；(iv)结合和/或调节包括至少一种VDAC和任选一种或多种其他的蛋白的蛋白质复合物的试剂；(v)包括VDAC多肽或者其功能性变体的试剂；(vi)包括编码VDAC多肽或者其功能性变体的核酸的试剂；或者(vii)此处公开的化合物，(b)进行在步骤(a)中鉴定的候选治疗剂在动物中的功效和毒性的治疗评价；和(c)制备药物制剂，其包括一种或多种在步骤(b)中鉴定的具有可接受的治疗评价的候选治疗剂。取代步骤(b)和(C)的一步或者两步或者除了步骤(b)和(C)的一步或者两步之外，所述方法可以包括将候选治疗剂进一步开发的权利许可给第三方。在另一个实施方案中，进行药物开发活动的方法包括建立用于分配待售药物制剂的分配系统。任选，建立销售团队用于药物制剂的市场推广。在另一个实施方案中，本发明是一种进行制药活动的方法，包括(a)鉴定抑制细胞增殖的候选治疗剂，其中候选治疗剂是(i)增强或者抑制VDAC蛋白的试剂；或者(ii)增强或者抑制VDAC蛋白和第二种蛋白之间相互作用的试剂，禾卩(b)将进一步开发候选治疗剂的权利许可给第三方。在另一个实施方案中，进行药物开发活动的方法包括建立用于分配待售药物制剂的分配系统。任选，建立销售团队用于药物制剂的市场推广。本发明的另一个方面是进行制药活动的方法，包括下面的一种或者多种市场开发、生产、将市场开发权利许可给第三方和将生产试剂盒的权利许可给第三方，其中试剂盒包括(a)在生物样品中检测erastin结合蛋白、erastin结合蛋白的活性或者以上两者的一种或多种试剂；和(b)解释试验结果的说明书。通常，说明书会指出erastin结合蛋白的水平和/或活性是否正常，相对其所需水平和/或活性是增加还是降低，这样的话可检测水平和/或活性是否应该改变，或者预测(部分地)取决于水平和/或活性(例如癌症化疗)的治疗是否会成功。在某些实施方案中，说明书包括关于emstin结合蛋白一个或多个正常、降低和升高的水平或者活性的指导。在某些实施方案中，基于erastin结合蛋白、emstin结合蛋白的活性或者两者的水平，说明书包括关于用下列一个或多个后续治疗的指导(i)增强或者抑制VDAC蛋白水平的试剂；(ii)增强或者抑制VDAC蛋白活性的试剂；(iii)结合VDAC蛋白的试剂；(iv)结合、调节或者结合和调节包括至少一种VDAC和任选一种或多种其他的蛋白的蛋白质复合物的试剂；(v)包括VDAC多肽或者其功能性变体的试剂；(vi)包括编码VDAC多肽或者其功能性变体的核酸试剂；和(vii)此处公开的化合物。在某些实施方案中，基于emstin结合蛋白、erastin结合蛋白的活性或者两者的水平，说明书包括关于下列一个或多个治疗是否成功的指导(i)增强或者抑制VDAC蛋白水平的试剂；(ii)增强或者抑制VDAC蛋白活性的试剂；(iii)结合VDAC蛋白的试剂；(iv)结合、调节或者结合和调节包括至少一种VDAC和任选一种或多种其他的蛋白的蛋白质复合物的试剂；(v)包括VDAC多肽或者其功能性变体的试剂；(vi)包括编码VDAC多肽或者其功能性变体的核酸的试剂；和(vii)此处公开的化合物。在某些实施方案中，基于erastin结合蛋白、emstin结合蛋白的活性或者两者的水平，说明书包括关于癌症治疗成功概率的指导。鉴定增加人细胞对特定化合物敏感性的遗传改变，最终可能允许从机理上剖析致癌信号网络并定制针对特定肿瘤类型的化疗方法。申请人已经开发了一种发现小分子的系统学方法，所述小分子在带有特定遗传变化的细胞中具有增加的活性。使用这个系统，他们检测到几个临床使用的抗肿瘤试剂，在特定遗传元件存在的情况下更具效力和更具活性。此外，他们鉴定出新的选择性杀伤细胞的化合物，所述细胞表达小的T癌蛋白和致癌RAS。这些遗传靶向的小分子可以作为开发具有良好治疗指数的抗癌药物先导物。本发明还提供包装的药物。在一个实施方案中，包装的药物包括-(i)治疗有效量的对工程化人致瘤细胞具有选择毒性的试剂；和(ii)用于治疗癌症患者的试剂给药的说明书和/或标签。在一个特定实施方案中，试剂是erastin。在另一个实施方案中，包装的药物包括(i)治疗有效量的对工程化人致瘤细胞具有选择毒性的试剂；和(ii)用于治疗癌症患者的试剂给药的说明书和/或标签。在另一个相关的实施方案中，包装的药物包括(i)治疗有效量的与细胞组分相互作用的试剂，所述细胞组分与erastin相互作用；和(ii)用于治疗癌症患者的试剂给药的说明书和/或标签。说明书或者标签可以储藏在电子介质，例如CD、DVD、软盘、存储卡等等，这些可以通过电脑读取。本发明还提供使用本发明鉴定的任意试剂制备癌症治疗药剂，例如，利用erastin或者其类似物制备癌症治疗药剂。在某些实施方案中，本发明的方法还包括联合给药一种或多种试剂，例如通常通过细胞凋亡机制杀伤细胞的化疗剂。适合用于降低肿瘤生长率和治疗癌症患者的合适试剂包括但不限于，小的有机分子、肽、蛋白质、模拟肽、核酸、抗体及其组合。可以预期的是本发明的所有实施方案可与一种或多种其他实施方案组合。在另一个方面，本发明涉及用于鉴定化合物的筛选法，所述化合物在工程化细胞而不是其等基因的正常细胞相似物中抑制蛋白的细胞毒性。这些方法已经被用于鉴定已知的和新的具有基因型选择性活性的化合物。任选，这些化合物在突变蛋白存在情况下活性增加。本发明涉及一种鉴定试剂(例如，药物)的方法，所述试剂在工程化细胞中选择性抑制细胞毒性。在一个实施方案中，本发明涉及一种鉴定试剂(例如，药物)的方法，所述试剂在工程化细胞中抑制突变蛋白的细胞毒性，包括用候选试剂接触待测细胞(例如，表达突变蛋白的工程化细胞)；检测与候选试剂接触的待测细胞的活力；和将待测细胞的活力与合适对照的活力作比较。如果待测细胞的活力大于对照细胞的活力，则鉴定出选择性抑制细胞毒性的试剂(例如，药物)。合适的对照是与待测细胞类型相同的细胞，除了对照细胞没有进行工程化以表达造成毒性的蛋白。例如，对照细胞可以是衍生出待测细胞的亲本原代细胞。对照细胞在与待测细胞相同的条件下接触候选试剂。合适的对照可以同时进行，或者预先建立(例如，预先建立标准或者参考)。在某些方面，本发明提供在哺乳动物中治疗病症的方法，包括给药哺乳动物治疗有效量的erastin类似物，例如，通式I代表的化合物(I)其中病症的特点在于细胞具有增强的Ras信号活性和改变(例如，降低或者增加)的SV40小t抗原的细胞靶向蛋白的活性；和任选基本上野生型水平的Rb活性；和其中R'选自H、-Z-Q-Z、-C卜s垸基-N(R2)(R4)、-d-s烷基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，和Cl4芳院基；每次出现的W和R"均是独立选自H、C,-4垸基、Q-4芳烷基、芳基、杂芳基、酰基、垸基磺酰和芳基磺酰，如果W和R"在相同氮原子和不同时是氢时，它们是不同的，并且当112和R"在相同氮并且R2或W是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰，另一个选自H、Q—8垸基、芳基、Cm芳院基，和杂芳基；R选自H、C,-4垸基、Q-4芳烷基、芳基和杂芳基；W选自和Q选自O禾口NR2;和每次出现的Z独立地选自Q-6垸基、C2-6烯基和C2-6炔基。当Z是烯基或者炔基基团，双键或者三键优选不在基团的末端(从而排除，例如，烯醇醚、炔醇醚(alkynolether)、烯胺和/或炔胺)。在一些实施方案中，W选自或。在某些这种实施方案中，W选自-Z-Q-Z、-Q-8垸基-N(R2)(R4)、《1-8烷基-0113、芳基、杂芳基，和C卜4芳烷基；在某些实施方案中，W夷R4。在某些这种实施方案中，W选自-Z-Q-Z、-C,.s烷基-N(R2)(R4)、-CLs垸基-OR3、芳基、杂芳基，禾口Ci-4芳烷基。在某些实施方案中，W选自-Z-Q-Z、烷基-N(R2)(R4)、烷基-OR3、芳基、杂芳基，和CV4芳垸基。'在某些实施方案中，W选自CM芳烷基和酰基。在某些这种实施方案中，W是酰基。在某些实施方案中，W是酰基，R4是-C(0)-d-3烷基-Y,Y选自H、烷基、垸氧基、芳氧基、芳基、杂芳基、杂芳氧基和环烷基。在某些实施方案中，Y选自芳氧基、芳基、杂芳基、杂芳氧基和环垸基。在优选的这种实施方案中，Y选自芳氧基和杂芳氧基。在更优选的这种实施方案中，Q-3垸基-Y是-CH20-苯基，其中苯基任选用卤素取代，优选氯。在某些Y是-CH20-苯基的优选实施方案中，选择剩余的值以从实施方案中排除erastin。在某些实施方案中，芳基任选用选自Cr6垸基、CF3、羟基、Cr4烷氧基、芳基、芳氧基、卤素、-NR2R4、硝基、羧酸、羧酸酯和磺酰的基团取代。适当的试剂可以在现有形式或者完全或者部分新陈代谢后具有所述活性。在某些实施方案中，病症的特点在于细胞具有基本上野生型水平的Rb活性。在某些这种实施方案中，细胞特征还在于增强的Ras信号活性和/或SV40小t抗原的细胞靶向蛋白的改变(例如，降低或者增加)的活性。在某些实施方案中，化合物通过非细胞凋亡机理杀伤细胞。在某些实施方案中，化合物通过非细胞凋亡机理外的机理杀伤细胞。在某些实施方案中，细胞具有增强的Ras途径活性(例如，RasV12)，过表达SV40小t抗原，具有本质上降低的磷酸酶PP2A活性，和/或调节(例如，增强或者抑制)VDAC水平或者活性，比如VDAC2或者VDAC3。在某些实施方案中，病症是癌症。在某些实施方案中，细胞被诱导表达SV40小t抗原，例如，用过表达SV40小t抗原的病毒载体感染所述细胞，例如逆转录病毒载体或者腺病毒载体。在某些实施方案中，病毒载体是逆转录病毒载体或者腺病毒载体。在某些实施方案中，本发明的方法还包括联合给药所述哺乳动物一种试剂，例如通常通过细胞凋亡机理杀伤细胞的化疗剂。在某些实施方案中，联合给药的试剂选自表皮生长因子受体拮抗剂、五硫化二砷、阿霉素、顺铂、卡铂、西咪替丁、洋红霉素、氮芥盐酸、五甲三聚氰酰胺、塞替派、替尼泊甙、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、去甲氧基竹红菌甲素A、左旋苯丙氨酸氮芥、异环磷酰胺、曲磷胺、曲奥舒凡、足叶草毒素(prodophyllotoxin)或者足叶草毒素衍生物、鬼臼乙叉甙磷酸盐、替尼泊甙、鬼臼乙叉甙、异长春碱、环氧长春碱、长春地辛、9-氨基喜树碱、camptoirinotecan、克立那托、甲地孕酮、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、ecteinascidin743、白消安、亚硝脲氮芥(BCNU)、环己亚硝脲(CCNU)、洛弗斯特丁、1-甲基-4-苯基吡啶鎗离子、司莫司汀、十字孢碱(stau!"QspQrin)、链脲霉素、酞菁、达卡巴嗪、氨基蝶呤、氨甲蝶呤、曲美沙特、硫鸟嘌呤、巯基嘌呤、氟达拉滨、pentastatin、2-氯脱氧腺苷(cladribin)、阿糖胞苷(araC)、甲基丝裂霉素、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、阿霉素氢氯化物、甲酰四氢叶酸、霉酚酸、柔红霉素、去铁敏、5-氟脱氧尿苷、去氧氟尿苷、雷替曲塞、伊达比星、表柔比星、吡柔比星、佐柔比星、米托蒽醌、争光霉素硫酸盐、放线菌素D、番红精、saframycins、quinocarcins、discodennolides、长春新碱、长春花碱、长春瑞滨酒石酸盐、vertoporfm、紫杉醇、他莫昔芬、雷洛昔芬、噻唑呋林、硫鸟嘌呤、病毒唑、EICAR、雌氮芥、雌氮芥磷酸钠、氟他米特、比卡鲁胺、布舍瑞林、亮丙瑞林、蝶啶、烯二炔、左旋四咪唑、aflacon、干扰素、白介素、阿地白介素(aldesleukin)、非格司亭、沙莫司亭、利妥昔单抗、卡介苗、维甲酸、倍他米松、吉西他滨氢氯化物、异搏定、VP-16、六甲密胺、毒胡萝卜内酯(thapsigargin)、奥沙利铂、异丙铂、四铂、洛铂、DCP、PLD-147、JM118、JM216、JM335、沙铂、紫杉萜、脱氧紫杉醇、TL-139、5'-降-脱氢长春碱(下文中5'-降长春碱)、喜树碱、依立替康(Camptosar，CPT-ll)、托泊替康(Hycamptin)、BAY38-3441、9-硝基喜树碱(Orethecin、卢比替康)、依沙替康(DX-8951)、勒托替康(GI-147211C)、gimatecan、homocamptothecinsdiflomotecan(BN-80915)和9-氨基喜树碱(IDEC-13')、SN-38、ST1481、karanitecin(BNP1350)、氮茚并咔唑(例如NB-506)、原小蘖碱、茚托利辛、idenoisoquinolones、苯并-吩嗪或者NB-506。本发明另一个方面提供一种杀伤细胞、促进细胞死亡或者抑制细胞增殖的方法，包括给药细胞(l)有效量的化合物，由通式I代表<formula>formulaseeoriginaldocumentpage48</formula>其中:W选自H、-Z-Q-Z、-CN8烷基-N(R2)(R4)、s烷基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，和CL4芳烷基；每次出现的112和W均是独立选自H、Cm院基、Cm芳院基、芳基、杂芳基、酰基、垸基磺酰和芳基磺酰，如果W和W在相同氮原子和不同时是氢时，它们是不同的，并且当112和114在相同氮上并且f或W是酰基、垸基磺酰或者芳基磺酰，另一个选自H、Q.8烷基、芳基、Cl4芳焼基，和杂芳基；RS选自H、C,V烷基、Cr4芳垸基、芳基和杂芳基；Q选自O和NR2;和每次出现的z独立地选自Cl6院基、(:2.6烯基和<:2.6炔基。(当z是烯基或者炔基基团，双键或者三键优选不在基团的末端)；和(2)—种在细胞中增加VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)丰度的本发明另一个方面提供一种杀伤细胞的方法，包括给药细胞(1)有效量的化合物，由通式I代表w选自试剂。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage49</formula>其中:W选自H、-Z-Q-Z、烷基-N(R2)(R4)、-C卜s烷基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，^芳烷基；每次出现的W和R"均是独立选自H、Cu4垸基、cm芳烷基、芳基、杂芳基、酰基、垸基磺酰和芳基磺酰，如果W和R"在相同氮原子和不同时是氢时，它们是不同的，并且当112和114在相同氮上并且R2或W是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰，另一个选自H、d.s烷基、芳基、Cm芳焼基，和杂芳基；W选自H、Cm院基、C,-4芳垸基、芳基和杂芳基；W选自R4,R4,或、R,Q选自0和NR2;和每次出现的z独立地选自(^.6垸基、<:2.6烯基和<:2.6炔基。(当z是烯基或者炔基基团，双键或者三键优选不在基团的末端)；和(2)—种在细胞中降低VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)丰度的在另一个实施方案中，本发明是一种促进细胞死亡的方法，包括对细胞给药有效量的式(I)的化合物。试剂。在某些实施方案中，化合物如上所述。在某些实施方案中，细胞是癌细胞。在某些实施方案中，试剂包括编码VDAC比如VDAC3的多核苷酸。在某些实施方案中，试剂是适合运输进细胞的VDAC蛋白(例如，VDAC3)，例如，与异源内化结构域融合的蛋白。在某些实施方案中，试剂是包括VDAC蛋白(例如，VDAC3)的脂质体制剂。在某些实施方案中，试剂增强或者抑制内源VDAC(例如，VDAC3)表达，刺激或者抑制VDAC(例如，VDAC3)表达或者增强或者抑制VDAC(例如，VDAC33)抑制剂的功能。在某些方面，该方法还涉及给药一种增加细胞中VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)丰度的试剂。在某些方面，该方法还涉及给药一种降低细胞中VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)丰度的试剂。在另一个方面，本发明是一种增加肿瘤细胞对化疗剂敏感性的方法(例如，累加的或者协同的)，其中肿瘤细胞与此处公开的化合物接触。在相关方面，本发明是一种降低正常细胞对化疗剂敏感性的方法，其中正常细胞与此处公开的化合物接触。在一个实施方案中，本发明是一种鉴定对利用本发明的化合物的治疗可能有反应的患者的方法。使用本领域已知的标准表征鉴定方法，确定为具有肿瘤形成的患者显示一个或多个下列表征将被认为是有反应的异常的Ras信号途径活性，其特征在于一种或多种途径成员的活化(例如，磷酸化Erkl/2,磷酸化MEK等等)，禾口/或VDAC蛋白(1，2或者3)的表达，和/或在体外或者体内暴露于本发明的化合物的相似或者相同基因型的细胞系的敏感性。本发明的另一个方面提供一种通式I代表的化合物，或者其药学可接受的盐WCO其中Ri选自H、-Z-Q-Z、-d.8垸基-N(R2)(R4)、-<:1-8垸基-0113、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，和Cm芳院基；每次出现的W和R"均是独立选自H、d-4烷基、d-4芳垸基、芳基、杂芳基、酰基、垸基磺酰和芳基磺酰，如果W和R"在相同氮原子和不同时是氢时，它们是不同的(除了在某些实施方案中，其中R2和R"是氢)，并且当R"和R"在相同氮上并且W或R"是酰基、垸基磺酰或者芳基磺酰，另一个选自H、d-8烷基、芳基、Cl4芳院基，和杂芳基；W选自H、CM烷基、d-4芳垸基、芳基和杂芳基；，ANR2IW选自Q选自O和NR2;禾口每次出现的Z独立地选自d-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基。当Zn是烯基或者炔基基团，双键或者三键优选不在基团的末端。本发明的另一个方面提供一种通式n代表的化合物-其中Ar是取代的苯基；W选自H、-d.8烷基、-Z-Q-Z、-d.8垸基-N(R2)(R4)、-d.8垸基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，和Cm芳院基；每次出现的W和W均是独立选自H、Cm院基、CM芳烷基、芳基、杂芳基、酰基、垸基磺酰和芳基磺酰，当W和R"在相同氮并且112或114是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰，另一个选自H、d.s烷基、芳基、C"4芳垸基，芳基和杂芳基；RS选自H、C"4烷基、Cr4芳烷基、芳基和杂芳基；RS代表在其结合的环上的0-4取代基。Q选自O禾nNR2;禾口每次出现的z独立地选自Qv烷基、c2—6烯基和(:2.6炔基。当z是烯基或者炔基基团，双键或者三键优选不在基团的末端。本发明的另一个方面提供一种通式iii代表的化合物:其中Ar是取代的或者未取代的苯基；r1选自h、-d.8烷基、-z-q-z、-c卜s院基-N(r2)(R4)、-d—8烷基-or3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，和Cm芳院基；每次出现的112和W均是独立选自H、Cm院基、Cm芳院基、芳基、杂芳基、酰基、垸基磺酰和芳基磺酰，当112和r"在相同氮并且RZ或R"是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰，另一个选自H、d.s垸基、芳基、Cl4芳院基，和杂芳基；RS选自H、CM烷基、Cr4芳烷基、芳基和杂芳基；RS代表在其结合的环上的0-4取代基。R4q选自0和nr2;和丑每次出现的Z独立地选自C^垸基、(32.6烯基和C2-6炔基。当Z是烯基或者炔基基团，双键或者三键优选不在基团的末端。本发明的另一个方面提供一种通式IV代表的化合物(IV)其中Af是取代的或者未取代的苯基；R1是-C"8院基；每次出现的W和R"均是独立选自H和Q-8垸基；RS代表在其结合的环上的0-4取代基。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage54</formula>Q选自0和NR2。本发明的另一个方面提供一种通式V代表的化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage55</formula>其中R'选自H和d.8烷基；R2选自H和d-s垸基；W选自卤素、C,.8垸氧基和d.8垸基；R4选自H、卤素、Cw烷氧基和d.s烷基;RS选自H、卤素和硝基；和N是1或者2。预期上述通式I一V代表的化合物可用于以下方法1)治疗哺乳动物的病症，包括给药哺乳动物治疗有效量的所述化合物，2)杀伤细胞，包括给药细胞a)有效量的所述化合物，和b)增加细胞中VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)丰度的试剂，或者3)杀伤细胞，包括给药细胞a)有效量的所述化合物，和b)降低细胞中VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)丰度的试剂。预期本发明的全部的实施方案可以和一个或多个其他实施方案联用，即使它们在本发明的不同方面描述。在本发明的某些实施方案中，化合物或者试剂不是公开在表2中的化合物。附图简述图1是显示实验转化的人细胞间关系的示意图。BJ细胞是原代人包皮成纤维细胞。BJ-TERT细胞衍生于BJ细胞，并表达hTERT，端粒末端转移酶的催化亚单位。BJ-TRET/LT/ST细胞通过引入编码猴病毒40大(LT)和小T(ST)癌蛋白的基因组构建体而衍生自BJ-TRET细胞。BJ-TERT/LT/ST/RAS^2肿瘤细胞通过引入HRAS(RAS^2)的致癌等位基因而衍生自BJ-TERT/LT/ST细胞(Hahn等人，1999，NatMed5,1164-70)。BJ-TERT/LT/RASV12细胞起源于BJ细胞，通过引入编码TERT，LT,RASV12的构建物和对照载体的cDNA(Hahn等人，2002,NatRevCancer2,331-41)。BJ-TERT/LT/RASV12/ST细胞通过引入编码ST的cDNA而起源于BJ-TERT/LT/RASV12细胞(Hahn等人，2002，NatRevCancer2,331-41)。TIP5细胞是原代人包皮成纤维细胞。TIP5-衍生的细胞系通过引入编码hTERT,LT,ST，RAS或者乳头状瘤病毒E6或者E7蛋白的载体来制备，如图所示。E6和E7可以共同代替LT(Lessnick等人，2002，CancerCell1，393-401)。图2显示九个基因型选择性化合物的化学结构。图3显示棘霉素和喜树碱对工程化细胞的效果图示。标记的细胞在384孔板用棘霉素(A)或者喜树碱(B，C)处理48小时。显示使用钙黄绿素AM检测的细胞活力的抑制百分比。误差线表明一个标准差。(A)棘霉素处理的BJ，BJ-TERT，BJ-TERT/LT/ST禾卩BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞；(B)喜树碱处理的BJ，BJ-TERT,BJ-TERT/LT/ST和BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞；和(C)喜树碱处理的BJ-TERT/LT/RASV12，BJ-TERT/LT/RASV12/ST和BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞。图4显示erastin对工程化细胞的效果图示。标记的细胞在384孔板用erastin处理48小时。显示使用钙黄绿素AM检测的细胞活力的抑制百分比。误差线表明一个标准差。(A)erastin处理的BJ，BJ-TERT,BJ-TERT/LT/ST和BJ-TERT/LT/ST/RASVI2细胞；(B)erastin处理的BJ，BJ-TERT,BJ-TERT/LT/RASV'2细胞(缺少ST)，BJ陽TERT/LT/RASV12/ST(致瘤细胞)和TERT/LT/ST/RASV12(致瘤细胞)；和(C)独立衍生的TIP5/TERT、TIP5/TERT/E6、TIP5/TERT/LT、TIP5/TERT/LT/ST禾口TIP5/TERTLT/ST/RASV12细胞。图5显示肿瘤选择性化合物的蛋白靶标在工程化致瘤细胞中被上调。(A-C)来自BJ,BJ-TERT,BJ-TERT/LT/ST，BJ-TERT/LT/ST/RASV12BJ-TERT/LT/RASV'2禾卩BJ-TERT/LT/RASV12/ST细胞裂解物的Westernblot，使用抗拓扑异构酶II(A)或者TOPI(B，C)的抗体。在(C)栏，细胞用针对TOPI,lamicA/C的siRNA或者相同长度的对照双链DNA双链体(TOPIdsDNA)转染。在各种情况下，各点用抗eIF-4E的抗体检测以确定蛋白上样量的差异。对每条带的相对量进行定量测定。(D)TOPIsiRNA防止工程化肿瘤细胞中喜树碱造成的细胞死亡。用针对TOPI的siRNA转染和指定浓度喜树碱处理后，检测细胞数目。(E)冈田酸，PP2A及其他细胞磷酸酶的抑制剂，使原代人细胞对喜树碱敏感。BJ原代细胞用指定浓度的喜树碱和冈田酸同时处理，测定对钙黄绿素AM活性染色的效果。虽然冈田酸在测试的最高浓度杀伤BJ细胞，在3.4nM它自身是无效的，但它导致细胞对喜树碱敏感。(F)冈田酸促进TOPI的表达。BJ原代细胞用指定浓度的冈田酸处理，TOPI的表达水平用westernblot检测。对每条带的相对量进行定量测定。图6显示erastin以ST/RASV12依赖模式诱导快速细胞死亡。(A)erastin对BJ-TERT和BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞时间依赖的效应。在含有指定浓度erastin的情况下，细胞种植于384孔板。在使用钙黄绿素AM24,48和72小时后检测细胞活力的抑制。(B)在BJ-TERT(红)和BJ-TERT/LT/ST/RASV12(蓝)细胞中erastin对AlamarBlue活性染色的效果。(C)用erastin处理的BJ-TERT/LT/ST/RASV12禾BBJ原代细胞细胞的照片。细胞结合过夜，然后用9pMerastin处理24小时，然后拍昭。"、、o图7显示喜树碱而不是erastin诱导凋亡的特征。(A)喜树碱处理，而不是erastin处理的，BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞显示破碎的核(总核的10-20%、红色和蓝色箭头)如图所示。(B)喜树碱处理，而不是erastin处理的，BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞显示AnnexinV染色。与未处理、erastin处理(9/xM)和喜树碱处理(1/xM)相应的在指定的Ml区域的细胞百分比是6%，6%和38%。(C)喜树碱处理，而不是erastin处理的，BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞带有活化的caspase3。喜树碱和erastin处理样品的裂解产物利用针对有活性/剪切形式的caspase3的抗体通过westernblot分析。斑点用抗elF4E的抗体再次检测，以控制上样水平。图8显示erastin和erastinB的化学结构。图9显示在erastin处理的肿瘤细胞核保持完整。图10显示erastin诱导活性氧的形成。图11显示erastinA的化学结构。图12指出相对于非致瘤BJEH细胞中的表达，致瘤BJELR细胞中VDAC3的表达显著地升高。图13显示将VDAC—1水平设为100%，VDAC同工型在靶细胞中的相对表达水平。图14显示利用线粒体提取物和固定化的活性(A6)和无活性(B1)Erastin衍生物从pull-down试验中通过Westernblot和SDS-PAGE鉴定的蛋白。图15显示在(a)HCT116细胞，(b)DLD-I细胞，(c)OVCAR-3细胞和(d)BT549细胞的MCL试验中的化合物12、13和5。图16显示在(a)MiaPaca2细胞，(b)DU145细胞，(c)SK—Mel28细胞和(d)Malm3M细胞的MCL试验中的化合物12、13和5。图17显示在(a)BT549细胞，(b)MCF-7细胞，(c)HOP-92细胞和(d)HOP-62细胞的MCL试验的化合物12，13和5。图18显示化合物6在HT-1080异种移植物中诱导肿瘤生长抑制。图19显示化合物5在HT-1080异种移植物中诱导明显的肿瘤消退。图20显示在HT-1080异种移植物中使用化合物5的体重趋势。图21显示化合物6在PANC-1异种移植物中诱导肿瘤生长抑制。图22显示化合物5在PANC-1异种移植物中诱导肿瘤消退。发明详述基因型选择性化合物作为分子探针的能力基于化学遗传学的前提，即小分子可用于鉴定行使生物学效果的蛋白和途径(Schreiber,1998,Bioorg.Med.Chem.6,1127-1152;Stockwell，2000，NatRevGenet1,116-25;Stockwell，2000，TrendsBiotechnol18，449-55)。例如，观测到天然产物雷帕霉素阻止细胞生长，使发现哺乳动物的雷帕霉素(mTOR)的耙标作为调节细胞生长的蛋白成为可能(Brown等人，1994,Nature369，756-758;Sabatini等人，1994,Cell78，35-43)。申请人已经结合这两种方法，化学和分子遗传学，用于发现受人类疾病例如癌症关联突变影响的途径。申请人已经加工了一系列具有确定遗传元件的肿瘤细胞，用于鉴定那些关键途径，这些途径的破坏将导致致瘤表型(Hahn等人，1999,NatMed5,1164-70;Hahn等人，2002,NatRevCancer2,331-41;Lessnick等人，2002,CancerCell1,393-401)。申请人推定这些实验转化的细胞使从已知的和新的化合物来源中鉴定基因型选择性试剂成为可能，所述试剂在特定癌症相关等位基因存在的情况下显示合成致死性。具有基因型选择致死性的化合物可以作为肿瘤细胞中信号网络的分子探针，并作为后续开发具有良好疗效指数的临床有效药物的先导物，和/或作为有效药物。使用这种方法，申请人已经对天然和合成化合物文库进行高通量筛选研究，并且已经鉴定出强杀伤癌症活性的化合物。erastin和erastin类似物比如erastinB和erastinA就在这些化合物中。尽管如此，很多检测试剂或者化合物可被用于此处描述的筛选研究(例如，鉴定抗肿瘤候选物的方法)。这种检测试剂包括但不限于，小的有机分子，肽，模拟肽，蛋白(包括抗体)，核酸，糖类。因此，本发明提供通式I的化合物，所述化合物杀伤癌细胞，尤其是基因型特异的癌细胞，比如那些具有升高的Ras信号活性，改变的SV40小t抗原耙向活性，和/或基本上完整的Rb活性的癌细胞。申请人还已经鉴定了几个直接或者间接结合erastin和/或它的类似物的细胞蛋白。这些蛋白包括电压依赖性阴离子通道(VDAC1，VDAC2，和VDAC3)，Prohibitin，核糖体结合糖蛋白(ribophorin)，Sec61a禾卩Sec22b。定量RT-PCR还表明对erastin杀伤敏感的细胞的VDAC3表达水平升高(例如，高2-6倍，通常高2-2.5倍)。但不希望被任何特定理论束缚，这些实验表明高水平的VDAC，尤其是VDAC3禾口VDAC2，表达增强erastin(和其类似物)介导的细胞杀伤，这甚至可能是功效所需要的。因此，本发明的一个方面提供一种选择性杀伤癌细胞的方法，尤其是那些具有升高的Ras活性，改变的SV40小t抗原靶向活性，和优选的基本上完整的Rb和/或p53活性，所述方法包括对需要治疗的哺乳动物患者给药治疗有效量的由通式I代表的化合物其中W选自H、-Z-Q-Z、烷基-N(R2)(R4)、-C卜s烷基-OR3、3墨到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，和芳烷基；每次出现的112和仗4均是独立选自H、Cl4院基、Cm芳院基、芳基、杂芳基、酰基、烷基磺酰和芳基磺酰，如果W和W在相同氮原子和不同时是氢时，它们是不同的，并且当W和W在相同氮并且R2或W是酰基、垸基磺酰或者芳基磺酰，另一个选自H、d-8烷基、芳基、Cm芳院基，和杂芳基；W选自H、Cm焼基、d-4芳垸基、芳基和杂芳基;NR2w选自Q选自O禾BNR2;和每次出现的Z独立地选自d-6垸基、(32.6烯基和C2.6炔基。当Z是烯基或者炔基基团，双键或者三键优选不在基团的末端。在某些实施方案中，通式I的化合物不包括erastin或者erastinA。如本领域公知，Ras的组成性活化是人癌细胞恶性生长的重要因素。在20%到30%的人类肿瘤中发现，RAS原癌基因(H-RAS，N-RAS,K-RAS)的突变是频发的遗传畸变，尽管在不同肿瘤类型中的发生率变化很大(Bos，CancerRes.49:4682-4689,1989)。最高的RAS突变率是在胰腺腺癌(90%)，结肠腺癌(50%)和肺腺癌(30%)中发现。在甲状腺的滤泡和未分化癌中，RAS突变的发生也是相当高的(50%)。最常观察到的RAS突变出现在Ras调节的关键位点--即密码子12、13和61。这些突变的每一种均导致Ras正常GTPase活性的消除。Ras活化还经常在血液恶性肿瘤例如骨髓性白血病和多发性骨髓瘤中观察到。在大约三分之一的脊髓发育不良综合征(MDS)和急性骨髓性白血病(AML)中，RAS基因被突变活化。RAS突变存在于大约40%新确诊的多发性骨髓瘤患者中，并且频率随病程进展增加。另一方面，多瘤病毒感染多种脊椎动物(现在已知12个成员)。鼠科多瘤病毒在1953年被LudwigGross在研究小鼠的白血病时分离，这样命名是因为它在多个位点引起实体瘤。本家族的第二个成员,Sweet和Hilleman于1960年在用于生长SabinOPV的原代猴肾细胞培养物中分离了猿空泡病毒40(SV40)(Hilleman,DevBiolStand94:183-190,1998)。两种人多瘤病毒，cBK病毒(BKV)和JC病毒(JCV)，在1971年被分离。多瘤病毒编码三种参与细胞转化的蛋白，称为大肿瘤抗原(LT)，中T抗原(mT)和小肿瘤抗原(sT)。这三种蛋白是由早期区域转录产物的不同剪接造成的，包含同源序列。多瘤的大T抗原与肿瘤抑制蛋白pRb相互作用，能够在培养中使原代成纤维细胞永生化。位于N末端的DnaJ结构域，尤其是在残基42和47之间发现的HPDKYG序列，对Rb家族的功能性失活非常关键，对SV40大T抗原也是这样。LT的表达不足以产生完全转化的细胞表型--这需要mT,它是多瘤病毒的主要转化蛋白。小鼠多瘤中T由421个氨基酸组成，可以被分为至少三个结构域，其中一些与LT和sT共用。氨基末端结构域包括前面79个氨基酸，所述结构域还存在于LT和sT。在残基80-192之间邻近它的是还存在于多瘤sT的结构域，包含两个半胱氨酸富集区，Cys-X-Cys-X-X-Cys，这在SV40的小T中也被鉴定出。这些半胱氨酸的突变消除mT转化细胞的能力。剩余的229氨基酸对mT是独特的，包含小鼠mT的主要酪氨酸磷酸化位点和参与转化活性必需蛋白的膜定位的疏水性区域(在羧基端的大约20个氨基酸)。SV40的小T抗原包括174个氨基酸。在残基97-103之间的区域与蛋白磷酸酶2A(PP2A)相互作用。这些相互作用降低了PP2A灭活ERK1和MEK1蛋白激酶的能力，导致刺激静止的猴肾细胞的增殖。小T抗原依赖试验还鉴定出其他具有增强细胞转化的能力的区域。这些区域位于N端部分，这是SV40的小和大T抗原共用的，能潜在地起DnaJ结构域的作用。小T抗原还可以结合微管蛋白，已经表明这在其生物机能中起作用。申请人发现具有活化Ras活性和小T抗原表达的细胞(因此减少小T抗原耙蛋白活性，例如减少的PP2A等等，或者增强ERK1和MEK1)可以通过erastin和其类似物被选择性的杀伤，可能通过非细胞凋亡机理。在优选的实施方案中，细胞表达基本上野生型水平的Rb和/或p53(或者其他E6/E7蛋白靶标)。因此，在某些实施方案中，某些特定基因型的癌细胞可被本发明的化合物选择性的杀伤。这些可以包括带有组成活化的Ras突变或者Ras信号途径突变和增强的ERK1、MEK1活性或者减活的PP2A的癌症。在某些其他实施方案中，靶细胞的基因型可以被选择性的改变(例如，表达SV40的小T抗原，表达ERK1或者MEK1，或者抑制PP2A，等等)，这样的话以前对erastin和erastin类似物不敏感的靶细胞现在对这种杀伤敏感。具体地，本发明提供一种选择性杀伤癌细胞的方法，所述癌细胞具有升高的Ras活性和小T抗原表达(或者改变的小T抗原靶蛋白活性，例如PP2A活性，增强的ERK1或者MEK1活性，或者一种模仿sT效果的机理，包括但不限于PP2A调节亚单位中的突变)，而保护不具有升高的Ras活性的相对正常细胞，即使这些细胞也表达小T抗原。这可能是有用的，因为许多癌症带有体细胞Rasvl2或者导致癌细胞中Ras信号活性升高的其他类似突变，而相同患者/个体中的正常细胞通常没有相同的RasV^或者其他的Ras途径突变。Erastin和其类似物可以用来选择性的杀伤这些癌细胞，如果癌细胞同时表达小T抗原(或者具有改变的小T抗原靶蛋白活性)。即使个体/患者中的其他正常细胞还表达小T抗原，本发明方法仍能有效杀伤癌细胞，因为正常细胞可能没有升高的Ras信号活性。即使个体不表达小T抗原，小T抗原可以输送给患者(以蛋白或者载体编码DNA的形式)使其具有对erastin/erastin类似物杀伤癌症(而不是正常)细胞的敏感性。既然已理解的是小T抗原自身不足以诱导对患者的副作用，治疗的副作用(提供小T抗原给患者)将是微小或者不存在的。事实上多达3000万美国人被认为已经通过1955至1963年之间的脊髓灰质炎疫苗接种而暴露于SV40。SV40通过用于生长脊髓灰质炎病毒的猕猴肾细胞进入疫苗。那些方法不再被使用，从1963年起脊髓灰质炎疫苗已经不含病毒。90年代的DNA研究在一些人类肿瘤中发现SV40。然而，肿瘤组织中的病毒DNA与分裂细胞的相关不能证明病毒引起肿瘤的形成。在2002年10月，美国医学会的一个科学小组得出结论，没有办法确定几十年前广泛使用的被猴肾病毒SV40污染的脊髓灰质炎疫苗是否导致人类癌症患病率的增加。在一些实施方案中，升高的Ras活性通过在氨基酸位置12、13和/或61的组成性活化Ras(N-，H-，或者K-Ras)突变而显示。在一些其它实施方案中，Ras活性的升高通过Ras途径蛋白一种或多种下游组件增强的活性显示，包括但不限于Raf、MEK、MAPK等等。在其他实施方案中，小T抗原表达可以伴随有载体对靶细胞的感染，比如表达SV40小T抗原的腺病毒或者逆转录病毒载体(见下文)。或者，小T抗原可以直接地提供给靶细胞。例如，小T抗原可利用本领域已知的各种方法导入靶细胞(参见下文细节)。在一个实施方案中，小T抗原可以通过捕获在带有正电荷的脂质体表面(例如lipofectins)而提供给靶细胞，任选可用抗靶组织细胞表面抗原的抗体标记，例如，抗癌细胞表面抗原的抗体。在另一个实施方案中，小T抗原可以通过胞转(transcytosis)作用提供给靶细胞，利用任何能够调节这种功效的"内化肽"，包括但不限于HIV蛋白Tat的N端结构域(例如，Tat的残基l-72或者其能够促进胞转作用的更小片段)，果蝇antenopediaIII蛋白的全部或者部分，黄峰毒素(mastoparan)的足够部分等等(见下文)。在其他实施方案中，通过输送抗体、RNAi(siRNA，短发夹RNA，等等)、反义序列或者对这种靶蛋白特异的小分子抑制剂可获得减少的PP2A。这种靶细胞蛋白拮抗剂的输送是本领域公知的。参见，例如，WO04078940A2，EP1439227A1，WO04048545A2,US20040029275A1,WO03076592A2,WO04076674A1,W09746671A1，在此全部引入作为参考。本发明的另一个方面提供一种利用erastin/erastin类似物和一种或多种通过细胞凋亡机理杀伤细胞的试剂或者疗法(例如放疗)的联合疗法。这种试剂包括如下所述的多种化疗药物。据信某些蛋白在erastin敏感细胞中表达水平升高。例如，这样一种蛋白，VDAC3，当暴露于erastin时丰度升高2-2.5倍，但申请人不希望被理论束缚，其存在乃至增加的丰度被认为是erastin介导的杀伤必不可少的。因此在本发明的另一个方面，提供一种杀伤细胞或者降低细胞增殖率的方法，所述细胞中VDAC例如VDAC2或者VDAC3的水平升高，所述方法包括将靶细胞与通式I-IV的erastin和/或erastin类似物接触。在某些实施方案中，靶细胞被调控表达更高水平的VDAC例如VDAC2或者VDAC3，这样通过erastin和其功能类似物增强杀伤或者降低增殖率的敏感性。例如，VDAC蛋白可利用本领域已知的各种方法导入靶细胞(参见下面详述)。在一个实施方案中，VDAC蛋白可以通过被捕获到带有正电荷表面的脂质体(例如lipofectins)中而提供给靶细胞，该脂质体可选地用抗耙组织的细胞表面抗原的抗体进行标记，例如，抗癌细胞表面抗原的抗体。在另一个实施方案中，VDAC蛋白可以通过胞转作用提供给靶细胞，利用任何能够调节这种功效的"内化肽"，包括但不限于HIV蛋白Tat的N端结构域(例如，Tat的残基1-72或者其能够促进胞转作用的更小片段)，果蝇antennapediaIII蛋白的全部或者部分，黄峰毒素的足够部分等等。(见下文)。此外，编码功能性VDAC的核酸可以导入这种靶细胞，利用例如表达VDAC的腺病毒或者逆转录病毒载体。此外，内源VDAC(例如，VDAC3)活性可以被试剂刺激，所述试剂刺激VDAC表达，或者抑制VDAC抑制剂(转录或者翻译抑制剂，或者促进VDAC在细胞中转换的抑制剂)的活性。在某些方面，本发明的方法还涉及给药一种增加细胞中VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)丰度的试剂。用于增加VDAC丰度的试剂可以，例如，包括编码VDAC诸如VDAC3的多核苷酸；适合运输进细胞的VDAC蛋白(例如，VDAC3)，例如，与异源内化结构域融合或者制备成脂质体制剂。在某些方面，本发明的方法还涉及给药一种降低细胞中VDAC(例如，VDAC2，VDAC3)丰度的试剂。用于降低VDAC丰度的试剂能够，例如，抑制(inhibit)内源VDAC(例如VDAC3)表达，抑制(suppress)VDAC(例如，VDAC3)表达或者增强VDAC(例如，VDAC3)抑制剂的功能。下面章节描述本发明的某些示范性的实施方案，它们预期能够彼此结合。此外，所述实施方案只用于说明目的，不是用于在任何方面进行限制。工程化细胞系一方面，本发明涉及工程化致瘤细胞系。之前的报告己经表明，通过引入表达hTERT和致癌RAS蛋白以及其他破坏p53、RB和PP2A功能的载体，有可能将原代人细胞转化为致瘤细胞(Hahn等人,2002，MolCellBiol22，2111-23;Hahn等人，1999,Nature400，464-8;Hahn禾口Weinberg,2002，NatRevCancer2,331-41;Lessnick等人，2002，CancerCell1,393-401)。申请人利用了一系列工程化人致瘤细胞和它们的的前体，这些通过在原代人包皮成纤维细胞中引入特定遗传元件而构建(图l)。先前已经报告了这些工程化致瘤细胞的各种特征，包括它们的倍增时间，它们抗i制老化和培养危机的能力，它们的对Y照射的反应，它们以非贴壁依赖性模式生长的能力，以及它们在免疫缺陷小鼠中形成肿瘤的能力(Hahn等人，1999，前文；Hahn等人，2002,前文；Lessnick等人，2002,前文)。在一个系列的工程化细胞中，下列遗传元件顺序引入原代BJ成纤维细胞人端粒末端转移酶的催化亚单位(hTERT)，编码猴病毒40大(LT)和小T(sT)癌蛋白的基因构建体，和HRAS的致癌等位基因(RAS^2)。获得的转化细胞系分别命名为BJ-TERT,BJ-TERT/LT/ST和BJ-TERT/LT/ST/RASV12。在第二个系列中，编码LT和ST的互补DNA(cDNA)构建体用于代替编码这两种病毒蛋白的SV40基因构建体，从而构建出细胞系。在后一个系列中，ST在最后阶段被引入，使申请人:能够在ST存在或者缺失的情况下检测化合物。后一种工程化人致瘤细胞系命名为BJ-TERT/LT/RASV12/ST。在第三个系列中，使用来源于独立制备的人TIP5包皮成纤维细胞的细胞系，这是通过引入编码hTERT、LT、ST和RASV12的cDNA构建体得到的(Lessnick等人，2002,CancerCell1，393-401)。获得的这些细胞系分别命名为TIP5/TERT，TIP5/TERT/LT，TIP5/TERT/LT/ST和TIP5/TERT/LT/ST/RASV12。在第四个系列中，使用来源于TIP5成纤维细胞的细胞系，这是通过引入编码hTERT，E6，E7，ST禾BRASVI2的cDNA得至U的。这些细胞系分别命名为TIP5/TERT/E6，TIP5/TERT/E6/E7，TIP5/TERT/E6/E7/ST禾卩TIP5/TERT/E6/E7/ST/RASV12。在这些系列中，HPVE6禾卩E7，分别灭活p53和RB,起到与在LT在上述系列中的类似的作用。但是，通过利用HPVE6和E7，申请人能观察到分别和独立地灭活p53和RB的效果。在随后实例中描述大规模的筛选化合物的结果，所述化合物显示选择性杀伤这些工程化致瘤细胞系。筛选基因型选择性化合物的方法，在某些实施方案中，本发明涉及大规模筛选化合物，所述化合物显示选择性杀伤或者抑制工程化致瘤细胞系生长(有选择性的毒性)。此处使用的术语试剂和药物是可互换使用的。此处使用的术语"对...有毒性"是指试剂或者化合物杀伤或者抑制致瘤细胞的生长/增殖的能力。大规模筛选包括对成百上千的化合物进行高通量筛选对工程化致瘤细胞的选择毒性。在本发明的一个实施方案中，通过比较与候选试剂接触后待测细胞与对照细胞的活力，来检测选择性的毒性，所述待测细胞是工程化致瘤细胞。一种合适的对照是与待测细胞相同类型的细胞，除了对照细胞未被工程化为致瘤的。例如，对照细胞可能是衍生出待测细胞的亲本原代细胞。对照细胞在与待测对照细胞相同的条件下接触候选试剂。合适的对照可以同时进行，或者可以预先建立(例如，预先建立标准或者参考)。在某些实施方案中，候选试剂选自化合物文库，比如组合文库。细胞活力可以通过本领域已知的的各种方法检测，包括利用染料例如钙黄绿素乙酰甲酯(钙黄绿素AM)和AlamarBlue。在本发明的某些实施方案中，在用候选试剂处理后，染料比如钙黄绿素被用于待测和对照细胞。在活细胞中，钙黄绿素AM被胞内酯酶切割，形成阴离子荧光衍生物钙黄绿素，它无法扩散出活细胞。因此，当与钙黄绿素AM孵育时，活细胞显示绿色荧光，而死细胞不显示。活细胞显示的绿色荧光可以被检测，从而提供检测细胞活力的方法。在本发明的某些实施方案中，进一步在动物模型中鉴定试剂的特性，所述试剂已经在工程化致瘤细胞中确定为选择性诱导细胞死亡。动物模型包括小鼠，大鼠，兔子和猴子，它们可以是非转基因(例如野生型)或者转基因动物。在工程化致瘤细胞中选择性诱导细胞死亡的试剂的效果可以在动物模型中进行评定任意多种效果，例如其在动物致瘤细胞中选择性诱导细胞死亡的能力和其对动物的总体毒性。例如，本方法还包括在适当的小鼠模型中评定试剂(例如药物)对致瘤细胞的选择毒性。在工程化致瘤细胞中诱导细胞死亡的试剂的效果可以在动物模型中进行评定任意多种效果，例如其在动物的致瘤细胞中诱导细胞死亡的能力和其对动物的总体毒性。例如，本方法还包括在适当的小鼠模型中评定试剂(例如药物)对致瘤细胞的毒性。为了说明，通过使用肿瘤生长试验进一步评价试剂，所述试验评定待测试剂抑制小鼠中建立的实体瘤生长的能力。所述试验通过在裸鼠的脂肪垫植入肿瘤细胞来进行。给药之前允许肿瘤细胞生长到一定大小。在数周内监控肿瘤体积，例如，三周。在试验过程中还监控待测动物的总体健康状况。在本发明的其他实施方案中，进一步在基于细胞的试验中评定试剂的作用机理，所述试剂已经被鉴定为一种选择性杀伤或者抑制工程化致瘤细胞生长/增殖的试剂。例如，试剂可以在凋亡试验中检测其通过前-细胞凋亡途径诱导细胞死亡的能力。在本发明的其他实施方案中，评定试剂通过非细胞凋亡途径在致瘤细胞中诱导死亡的能力，所述试剂在肿瘤细胞中诱导死亡。例如，试剂可以在凋亡试验中检测其通过前-细胞凋亡途径不能诱导细胞死亡的能力。在其他实施方案中，本发明涉及一种鉴定试剂(例如，药物)的方法，所述试剂在工程化细胞中选择性抑制细胞毒性。在一个实施方案中，本发明涉及一种鉴定抑制细胞毒性的试剂(药物)的方法，包括用候选试剂接触待测细胞(例如，表达突变蛋白的工程化细胞)；检测与候选试剂接触的待测细胞的活力；和将待测细胞的活力与合适的对照的活力作比较。如果待测细胞的活如果大于对照细胞的活力，则鉴定出选择性抑制细胞毒性的试剂(药物)。合适的对照是与待测细胞类型相同的细胞，除了对照细胞没有进行工程化以表达造成毒性的蛋白。例如，对照细胞可能是衍生出待测细胞的亲本原代细胞。对照细胞在与待测对照细胞相同的条件下接触候选试剂。合适的对照可以同时进行，或者可以预先建立(例如，预先建立标准或者参考)。在某些实施方案中，本发明的基因型选择性的化合物(抗肿瘤试剂)可以是任何化学制剂(元素，分子，化合物，药物)，不论是合成的、用重组技术制备的或者从天然来源分离的。例如，这些化合物可以是肽，多肽，类肽，糖，激素，或者核酸分子(比如反义或者RNAi核酸分子)。此外，这些化合物可以是小分子或者通过组合化学制备的更复杂的分子，例如，并且组合成文库。这些文库可以包括，例如，醇，垸基卤，胺，酰胺，酉旨，醛，乙醚及其他类型的有机化合物。这些化合物还可以是分离自细胞--细菌、动物或者植物细胞--裂解产物或者生长培养基的天然或者遗传工程产品或者可以是细胞裂解产物或者生长培养基自身。可以采用分离的化合物或者混合的化合物的形式将这些化合物用于检测系统，尤其是在初始筛选步骤。本发明的基因型选择性化合物申请人的结果证明在特定遗传元件存在的情况下，可能鉴定出具有增加的效力和活性的化合物。尽管先前的报告指出对感兴趣的一种遗传元件可能鉴定出这种基因型选择性的化合物(Simons等人，2001,GenomeRes11，266-73;Stockwell等人，1999，ChemBiol6，71-83;Torrance等人，2001，NatBiotechnol19，940-5)，此处描述的工作提供一种利用超过23,000种化合物和一种或多种癌症相关遗传元件的合成致死性的系统试验。鉴定的9种选择性化合物有助于明确在正常人细胞引入TERT和一个或多个LT、ST、E6、E7和致癌RAS的后果。这些遗传改变的一个效果是提高细胞增殖率，并对抑制DNA合成的小分子敏感。尽管已经确定这种试剂优选的耙向到快速复制的肿瘤细胞，这个原则在这个无偏筛选方法出现是另外的确证。此外，该方法可以容易地区分具有明确的遗传选择性基础和不具有的那些化合物。结果显示hTERT和E7或者LT的表达使细胞对拓扑异构酶II毒素敏感。因为RB的损失或者失活(Sellers和Kaelin，1997,JClinOncol15，3301-12;Sherr，2001,NatRevMolCellBiol2，731-7)和端粒末端转移酶的活化(Hahn和Weinberg,2002，NatRevCancer2,331-41;Harley,1994，PatholBiol(Paris)42,342-5)在大部分人类癌症中都有发现，这些观察可以部分地解释在大范围人类肿瘤类型中这些试剂的活性。申请人发现喜树碱选择性致死带有ST和致癌RAS的细胞，因为这两种基因对拓扑异构酶I的表达有组合的效应。快速分裂的肿瘤细胞利用拓扑异构酶I解开超螺旋DNA以便连续和快速的细胞分裂。当这两个途径被同时改变，拓扑异构酶I被上调，可能是间接地，致使这种肿瘤细胞对拓扑异构酶I毒素敏感。这些观察表明ST与RASV12、LT和hTERT转化人细胞能力的一个方面可以是ST和RASV^对拓扑异构酶I的效果。HRAS和KRAS中的突变已经在许多种人类癌症中描述过。此外，最近报道在结肠和肺肿瘤中有PP2A元件—PPP2RlB的失活(Wang等人，1998,Science282284-7)，而在不同PP2A亚基中的突变在黑素瘤、肺、乳腺和结肠癌中有描述(Calin等人，2000,Oncogene19,1191-5;Kohno等人，1999,CancerRes59,4170-4;Ruediger等人，2001，Oncogene20,1892-9;Ruediger等人，2001，Oncogene20，10-5)。目前，还不清楚这两个途径的同时改变在人类肿瘤中是否高发或者这两个途径紊乱的癌症是否显示对这些化合物的敏感度增加。此外，申请人鉴定出一种新的化合物，称为erastin(参见图8)，它对表达ST和RASV"的细胞是致死的。即使当其使用浓度比在表达RASvl2WST的细胞中观察到效果所需浓度高8倍时，用这个化合物处理细胞没能杀伤缺乏RASV"和ST的细胞，表明一定的特异性。一旦获得，erastin的致死效应是快速和不可逆的。Erastin可以用于在任何肿瘤细胞中诱导细胞死亡，其中erastin与肿瘤细胞接触导致细胞死亡。通过erastin活性产生致死性的致瘤细胞中包括的不仅是工程化致瘤细胞，例如表达ST和RASV"的工程化细胞，而且还有包括不依赖于ST和RASV"表达的活化的RAS途径的致瘤细胞。申请人还检测了135个erastin类似物在肿瘤细胞相对正常细胞中的活性和选择性。这些类似物中的134个是没有活性的。一个是有活性和选择性的，但效力比erastin低。这个化合物被命名为erastinB(参见图8)。在本发明的某些实施方案中，本发明涉及化合物，erastin。在其他实施方案中，本发明涉及化合物erastin的类似物，其中类似物显示对工程化致瘤细胞的选择毒性，比如工程化人致瘤细胞。在一个实施方案中，显示对工程化人致瘤细胞选择毒性的erastin类似物，是erastinB。在某些实施方案中，本发明涉及本发明化合物的外消旋混合物，所述混合物显示对工程化致瘤细胞的选择毒性。对喜树碱(CPT)和erastin来说，申请人确定了被RASV12，CIST表达改变的途径间的协同作用。RASV12的表达导致几种已经清楚表征的信号途径的活化，包括RAF-MEK-MAPK信号级联，磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号途径和Ral-鸟嘌呤解离因子途径(Ral-GDS)。这些途径的每一种都与人类癌症有关，最近的研究显示这些途径与细胞转化体系相呼应而起作用(Hamad等人，2002，GenesDev16,2045-57)。此外，ST结合并灭活一种广泛表达的丝氨酸-苏氨酸磷酸酶PP2A。尽管在ST表达时被扰乱的PP2A的的特定酶靶标还不知道，在被PP2A和RAS改变的途径中存在本质上的重叠(Millward等人，1999，TrendsBiochemSci24,186-91)。进一步了解通过何种机理，erastin在带有改变的这两个信号途径细胞中诱导死亡，可以提供这两个途径功能重叠的本质和程度的线索。本发明的erastin类似物，除了erastinB和erastinA，用通式I代表W选自H、-Z-Q-Z、-C,.s垸基-N(R2)(R4)、-Q.s烷基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，和Cl4芳院基；每次出现的W和W均是独立选自H、Cl4院基、Cl4芳院基、芳基、杂芳基、酰基、烷基磺酰和芳基磺酰，如果当112和114在相同氮上并且W或W是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰，另一个选自H、d-8烷基、芳基、Cl4芳院基，和杂芳基；RS选自H、Cm院基、C,-4芳烷基、芳基和杂芳基；Q选自O和NR2;和每次出现的Z独立地选自Cl6院基、C2-6烯基和C2-6炔基。当Z是烯基或者炔基基团，双键或者三键优选不在基团的末端。其中:w选自在某些优选实施方案中，当W和R"在相同N原子上时，它们可以都是H，或者是不同的。在某些实施方案中，W是H。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage74</formula>在某些实施方案中，W是R4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage74</formula>在某些实施方案中，W选自H或者取代的或者未替取的的低级烷在某些实施方案中，Rt是H,W是r4，W选自H或者取代的或者未取代的的低级垸基。通式I的示例化合物包括:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage75</formula>本发明的其他erastin类似物，用通式II表示:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage75</formula>其中Ar是取代的苯基；W选自H、-C,.s烷基、-Z-Q-Z、-d.8烷基-N(R2)(R4)、-Q.8烷基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，和Cl4芳院基；每次出现的112和R"均是独立选自H、dv烷基、Cw芳烷基、芳基、杂芳基、酰基、垸基磺酰和芳基磺酰，如果W和R"在相同氮上并且112或114是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰，另一个选自H、d.s烷基、芳基、Cm芳院基，和杂芳基；W选自H、Cl4院基、C,-4芳烷基、芳基和杂芳基；RS代表在其结合的环上的0-4个取代基。Q选自0禾口NR2;禾口每次出现的Z独立地选自CL6烷基、02.6烯基和C2V块基。当Z是烯基或者炔基基团，双键或者三键优选不在基团的末端。在一些实施方案中，115代表1-4个取代基比如卤素或者硝基。在某些实施方案中，R5代表一个取代基，比如卤素或者硝基，尤其是氯，位于喹唑酮环的羰基对位上。在其他实施方案中，R5代表环上无取代基(即，所有取代基是氢原子)。在某些实施方案，Ar是单一取代，其中取代基是卤素，低级烷氧基，或者低级垸基。在某些实施方案中，Ar在邻位有一个取代基，其中取代基是卤素，低级烷氧基，或者低级垸基。在某些实施方案中，Ar是2，6-二取代，这样的话一个取代基是卤素，低级烷氧基，或者低级烷基，第二个取代基是卤素，低级烷氧基，或者低级垸基。在某些实施方案中，通式II的化合物不包括那些其中Ar上的取代基是乙氧基，其位于喹唑酮环上氮键邻位的位置的化合物。在其他实施方案中，通式II的化合物不包括那些其中Ar没有位于喹唑酮环的氮键的邻位的低级烷氧基或者低级烷基取代基。在通式II的化合物的某些实施方案中，Ar至少有一个卤素取代基。W是R4在某些实施方案中，Ar有在邻位一个卤素取代基。在优选的实施方案中，通式II的化合物包括那些其中Ar是2，6—二取代的苯环，其中取代基是卤素原子。通式II的示例性化合物包括Ar是取代或未取代的苯基；Ri选自H、-CM烷基、-Z-Q-Z、-d—8烷基-N(R2)(R4)、-d-s垸基-OR3、3-到S-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，和Cm芳院基；每次出现的112和R"均是独立选自H、Q-4垸基、Cl4芳院基、芳基、杂芳基、酰基、烷基磺酰和芳基磺酰，如果W和W在相同氮上并且R或W是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰，另一个选自H、d.s烷基、芳基、Cm芳院基，和杂芳基；W选自H、dv烷基、C,-4芳烷基、芳基和杂芳基；RS代表在其结合的环上的0-4个取代基。本发明的其他emstin类似物，用通式III代表:、w选自R2^Q选自0和NR2。每次出现的Z独立地选自d-6烷基、C2—6烯基和(32.6炔基。当Z是烯基或者炔基基团，双键或者三键优选不在基团的末端。在某些实施方案中，R2和R4或者都是氢或者是不同的。在某些实施方案，R5代表其结合的环上的l一4个取代基，比如卤素或者硝基。在某些实施方案中，R5代表一个取代基，比如卤素或者硝基，尤其是氯，位于喹唑酮环的羰基对位上。在其他实施方案中，R5代表环上无取代基(即，所有取代基是氢原子)。在某些实施方案中，通式III的化合物不包括那些其中Ar上的取代基是位于喹唑酮环上氮键邻位的位置的乙氧基的化合物。在其他实施方案中，通式III的化合物不包括那些其中Ar没有位于喹唑酮环的氮键的邻位的低级垸氧基或者低级烷基取代基原的化合物。在本发明优选的实施方案中，Ar是取代的苯基。在通式III的化合物的某些实施方案中，Ar至少有一个卤素取代基。在某些实施方案中，Ar有在邻位卤素取代基。在优选的实施方案中，通式III的化合物包括那些其中Ar是2，6—二取代的苯环，其中取代基是卤素原子。通式m的示例性化合物包括:本发明的其他erastin类似物，用通式IV代表:79<formula>formulaseeoriginaldocumentpage79</formula>其中Ar是取代的或者未取代的苯基；R1是-C"8焼基；每次出现的W和R"均是独立选自H和Q-8垸基;W代表在其结合的环上的0-4取代基。W选自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage80</formula>在某些实施方案，R5代表其结合的环上的l一4个取代基，比如齒素或者硝基。在某些实施方案中，R5代表一个取代基，比如卤素或者硝基，尤其是氯，位于喹唑酮环的羰基对位上。在其他实施方案中，R5代表环上无取代基(即，所有取代基是氢原子)。在本发明优选的实施方案中，Ar是取代苯基。在某些实施方案中，Ar是单一取代，其中取代基是卤素，低级垸氧基，或者低级垸基。在某些实施方案中，Ar在邻位有取代基，其中取代基是卤素，低级烷氧基，或者低级烷基。在某些实施方案中，Ar是2，6-二取代的，这样的话一个取代基是卤素，低级垸氧基，或者低级垸基，第二个取代基是卤素，低级烷氧基，或者低级垸基。在某些实施方案中，通式IV的化合物不包括那些其中Ar上的取代基是位于喹唑酮环上氮键邻位的位置的乙氧基的化合物。在其他实施方案中，通式IV的化合物不包括那些其中Ar没有位于喹唑酮环的氮键的邻位的低级烷氧基或者低级垸基取代基的化合物。在通式IV的化合物的某些实施方案中，Ar至少有一个卤素取代基。在某些实施方案中，Ar在邻位有卤素取代基。在优选的实施方案中，通式IV的化合物包括那些其中Ar是2，6—二取代的苯环，其中取代基是卤素原子。通式IV的示例性化合物包括:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage81</formula>本发明的其他erastin类似物，用通式V代表:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage81</formula>(V)其中R'选自H和d.s浣基；R2选自H和C,.8垸基；R选自卤素、Q.8烷氧基和d.s垸基；R4选自H、卤素、d.8垸氧基和d.s垸基;W选自H、卤素和硝基；和n是1或者2。通式V的示例性化合物包括-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage82</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage83</formula>通式I-V的化合物可用于此处所述的用于erastin和erastin类似物任意方法。本发明的化合物包括此处公开化合物的对映体和非对映体。本发明还包括此处公开化合物的盐，尤其药学可接受的盐。此外，本发明包括此处公开化合物的溶剂化物，水合物和多形体结晶形式。适当的试剂可以在现有形式或者完全或者部分新陈代谢后具有前述的活性。.本发明还提供本发明化合物的合成或者制备。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage84</formula>在某些实施方案中本发明提供化合物A的制备，其中RS和W如对结构II-V的描述。在某些实施方案中化合物A的合成步骤是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage84</formula>在某些实施方案中，化合物B与化合物C的反应是在极性的质子惰性溶剂中进行，例如乙腈、DMSO、二乙醚、丁酮、环己酮、苯乙酮、四氢呋喃、丙酮、二氯甲烷、环丁砜或者二甲基甲酰胺。在优选的实施方案中，溶剂是二氯甲垸或者二甲基甲酰胺。在某些实施方案中，反应在氮气中进行。在某些实施方案中，有机碱，比如吡啶、二异丙胺、2，6-二甲基吡啶、三垸基胺(例如，三乙胺)、吡咯烷、咪唑或者哌啶，被添加到化合物B的溶液中，然后将化合物C添加到得到的溶液中。在优选的实施方案中，有机碱是胺碱，比如三烷基胺例如三乙基胺。在优选的实施方案中,反应是在0-10'C进行。本发明还提供结构D的化合物制备方法D，其中R5、R'和Ar如对结构II-V的描述。在某些实施方案中，D的合成步骤是化合物A与化合物E，Ar-NH2的反应。在某些实施方案中，化合物A与化合物E的反应是在极性的质子惰性溶剂中进行，例如乙腈、DMSO、二乙醚、丁酮、环己酮、苯乙酮、四氢呋喃、丙酮、二氯甲烷、环丁砜或者二甲基甲酰胺。在优选的实施方案中，溶剂是乙腈。在某些实施方案中，反应在氮气中进行。在某些实施方案中，反应在三氯膦存在的条件下进行。在某些实施方案中，反应在40-60'C维持一段时间，例如5-15小时。在其他的实施方案中，磷酰基三氯化物被添加到搅拌的溶液A和E中，得到的混合物加热回流一段时间，比如1-5小时。本发明还提供结构F的化合物制备方法F，其中R5、R1、Ar和W如对结构II-V的描述。在某些实施方案中，化合物F的合成步骤是化合物D与HNR2的反应，其中HNR2相当于HW。在某些实施方案中，反应是在碳酸钾和碘化物来源存在的条件下进行，比如碘化亚铜，碘化钾，碘化铯，碘化钠，或者碘化四丁铵，在极性质子惰性溶剂中。在某些实施方案中，化合物D和碳酸钾混合，并且添加HNR2，然后是碘化物来源。在优选的实施方案中，溶剂是乙腈。在某些实施方案中，碘化物试剂是碘化四丁铵；在某些实施方案中，碘化物试剂是碘化钠。在一些实施方案中，混合物在50-7(TC保持一段时间比如5-15小时。在某些实施方案中HNR2(HW)包括第二个氮原子，其上有胺保护基团。在一些实施方案中，保护基团可以是叔丁氧碳基，苄氧羰基，烯丙氧羰基，9-芴甲氧羰基，2-(三甲基甲硅烷)乙氧羰基，或者2，2,2-三氯乙氧基羰基。在某些实施方案中，反应在碱存在的条件下进行，比如碳酸钾，碳酸钠，吡啶，二异丙胺，2，6-二甲基吡啶，三乙胺，吡咯烷，咪唑，或者哌啶，和碘化物来源，在极性质子惰性溶剂中进行。在某些实施方案中，碱是碳酸钾或者三乙基胺。在某些实施方案中，化合物D和碱混合，并且添加HNR2，然后是碘化物来源。在优选的实施方案中，溶剂是乙腈或者丙酮。在某些实施方案中，碘化物试剂是碘化四丁铵；在某些实施方案中，碘化物试剂是碘化钠。在一些实施方案中，混合物在70-90'C保持一段时间比如1-10小时。在加成反应完成后，可以通过合适的脱保护反应从获得的产品去除保护基团。例如，当保护基团是叔丁氧碳基时，保护基团可以通过在化合物溶液中添加酸来去除(例如在产品的二噁烷溶液中添加4NHC1的二噁垸溶液)。在某些实施方案中，在中和混合物之前，反应液用水和有机溶剂稀释。在某些实施方案中，混合物通过添加饱和碳酸钠水溶液调为碱性。预期本发明的全部的实施方案可以和一个或多个其他实施方案联用，尽管它们在本发明的不同方面描述。术语"酰基"是本领域熟知的，是指通式烃基C(O)-代表的基团，优选垸基C(0)-。术语"酰氨基"是本领域熟知的，是指氨基团被酰基团取代，可以例如用通式烃基C(O)NH-代表。术语"酰氧基"是本领域熟知的，是指通式烃基C(O)O-，优选烷基C(O)O-代表的基团。术语"烷氧基"是指具有氧与其结合的烷基，优选低级烷基。典型的烷氧基包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，叔-丁氧基及其类似物。术语"烷氧烷基"是指垸基用烷氧基取代，可以用通式烷基-O-烷基代表。此处使用的术语"烯基"，是指一种脂肪基，包含至少一个双键，并且包括"未被取代的烯基"和"取代的烯基"，其中后者是指烯基部分具有取代基，所述取代基替换烯基基团一个或多个碳上的氢。这种取代可能发生在一个或多个碳原子上，所述碳原子包括或不包括在一个或多个双链内。此外，这种取代包括所有能够预料到的垸基的取代，如下所述，除非稳定性是不允许的。例如，用一种或多种烷基、碳环、芳基，杂环或者杂芳基基团取代烯基基团是预料得到的。术语"烷基"是指饱和脂肪基团，包括直链烷基、支链垸基、环烷基(脂环的)基团、垸基-取代的环烷基基团和环垸基-取代的烷基。在优选的实施方案中，直链或者支链烷基在其骨架上具有30个或者更少的碳原子(例如，对于直链而言C1-C30，对于支链而言C3-C30),并且更优选20个或者更少。同样地，优选的环烷基在它们的环状结构具有从3个到10个碳原子，并且更优选在环状结构具有5、6或者7个碳。此外，在整个说明书、实施方案和权利要求中使用的术语"垸基"(或者"低级垸基")包括"未被取代的烷基"和"取代的烷基"，其中后者是指烷基部分具有取代基，所述取代基替换烃的骨架的一个或多个碳上的氢。这种取代基可以包括，例如，卤素，羟基，羰基(比如羧基，烷氧羰基，甲酰，或者酰基)，硫代羰基(比如硫酯，硫代醋酸盐，或者硫代甲酸盐)，烷氧基，磷酰基，磷酸盐，膦酸盐，次膦酸盐，氨基，酰氨基，脒，亚胺，氰基，硝基，叠氮基，巯基，烷硫基，硫酸盐，磺酸盐，氨磺酰，亚磺酰氨基，磺酰，杂环，芳垸基，或者芳香族或者杂芳香族部分。本领域技术人员知道烃链上被取代的部分它们自身也是可以被取代的，如果合适的话。例如，取代垸基的取代基可以包括取代和未取代形式的氨基，叠氮基，亚氨基，酰氨基，磷酰基(包括膦酸盐和次膦酸盐)，磺酰(包括硫酸盐，磺氨基，氨磺酰和磺酸盐)，和甲硅烷基基团，以及醚，烷硫基，羰基(包括酮，醛，羧酸酯，和酯)，-CF3，-CN和类似物。示范性取代的烷基描述如下。环烷基还可以用垸基，烯基，垸氧基，烷硫基，氨垸基，羰基取代的烷基，-CF3，-CN和类似物取代。术语"C,.y"当与化学部分例如酰基，酰氧基，烷基，烯基，炔基，或者烷氧基联用时表示包括一些基团，所述基团在链上包含从X到Y个碳。例如，术语"Cx.y垸基"是指取代的或者未取代的饱和烃基团，包括直链垸基和支链垸基基团，所述基团在链上包含从X到Y个碳，包括卤垸基基团例如三氟甲基和2,2，2-三氟乙基等等。Cq院基表示如果位于末端位置为氢，如果在内部，则为键。术语"C2.y烯基"和"C2.y炔基"是指取代的或者未取代的非饱和的脂肪基，长度相似并且可能取代上述烷基，但分别包含至少一个双键或者三键。此处使用的术语"垸氨基"是指用至少一个垸基取代的氨基团。此处使用的术语"烷硫基"是指用垸基取代的硫醇基，可以由通式烷基S-代表。此处使用的术语"炔基"，是指一种脂肪基，包含至少一个三键，并且包括"未被取代的炔基"和"取代的炔基"，其中后者是指炔基部分具有取代基，所述取代基替换炔基基团一个或多个碳上的氢。这种取代基可能出现在一个或多个碳原子上，所述碳原子包括或不包括在一个或多个三键内。此外，这种取代包括所有能够预料到的对烷基的取代，如上所述，除非稳定性是不允许的。例如，用一种或多种烷基、碳环、芳基，杂环或者杂芳基基团取代炔基基团是预料得到的。此处使用的术语"酰胺"，作为使用此处，是指一种基g^Q其中W和R"各自独立地代表氢或者烃基基团，或者W和R"与它们结合的氮原子一起形成在环结构上具有4-8个原子的杂环。术语"胺"和"氨基"是本领域熟知的，是指未取代的和取代的胺及其盐，例如，可被下面结构代表的部分其中R9、R"和R^各自独立地代表氢或者烃基基团，或者W和R1Q与它们结合的氮原子一起形成在环结构上具有4-8个原子的杂环。此处使用的术语"氨烷基"是指用氨基基团取代的烷基团。此处使用的术语"芳垸基"是指用芳基基团取代的烷基团。此处使用的术语"芳基"包括取代的或者未取代的单环芳族基，其中环上的每个原子是碳。优选的环是5-到7-元环，更优选6-元环。术语"芳基"还包括具有两个或更多环的多环体系，具有两个或更多碳是两个相邻环公用的，其中至少一个环是芳香族，例如，另一个环可以是环烷基，环烯基，环炔基，芳基，杂芳基，和/或杂环。芳基基团包括苯，萘，菲，苯酚，苯胺和类似物。术语"氨基甲酸盐"是本领域熟知的，是指基团3-t1LR4Z-R<formula>formulaseeoriginaldocumentpage90</formula>其中W和R"独立地代表氢或者烃基基团。此处使用的术语"碳环"，"碳环基"和"碳环的"是指非芳香族饱和的或者非饱和的环，其中环上的每个原子是碳。优选的碳环包含3-10个原子，更优选5-7个原子。此处使用的术语"碳环烷基"是指用碳环基团取代的烷基团。术语"碳酸酯"是本领域熟知的，是指基团-OC02-R9，其中R9代表烃基基团。此处使用的术语"羧基"是指由式-C02H代表的基团。此处使用的术语"酯"是指基团-C(O)OR9，其中W代表烃基基团。此处使用的术语"醚"是指烃基基团通过氧连接到另一个烃基基团。因此，烃基基团的醚取代基可以是烃基-O-。醚可以是对称或者不对称的。醚的实例包括，但不限于，杂环-O-杂环和芳基-O-杂环。乙醚包括"垸氧基烷基"基团，可以由通式烷基-O-烷基代表。此处使用的术语"卤"和"卤素"表示卤素，包括氯，氟，溴和碘。此处使用的术语"杂烷基"和"杂芳垸基"是指用杂芳基基团取代的烷基团。术语"杂芳基"和"杂芳基"包括取代的或者未取代的芳香族单环结构，优选的5-到7-元环，更优选的5-到6-元环，其环状结构包括至少一个杂原子，优选一到四个杂原子，更优选一到两个杂原子。术语"杂芳基"和"杂芳基"还包括具有两个或更多环的多环体系，两个或更多碳是两个相邻环公用的，其中至少一个环是杂原子的，例如，另一个环可以是环烷基，环烯基，环炔基，芳基，杂芳基，和/或杂环。杂芳基基团包括，例如吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，恶唑，噻唑，吡唑，吡啶，吡嗪，哒嗪，和嘧啶，以及类似物。此处使用的术语"杂原子"表示除碳或者氢以外的任意元素的原子。优选的杂原子是氮，氧和硫。术语"杂环基"，"杂环"和"杂环的"是指取代的或者未取代的非芳环结构，优选的3-到10-元环，更优选的3-到7-元环，其环状结构包括至少一个杂原子，优选一到四个杂原子，更优选一到两个杂原子。术语"杂环基"和"杂环的"还包括具有两个或更多环的多环体系，其中两个或更多碳是两个相邻环公用的，其中至少一个环是杂环，例如，另一个环可以是环垸基，环烯基，环炔基，芳基，杂环，和/或杂环基。杂环基团包括，例如，哌啶，哌嗪，吡咯烷，吗啉，内酯，内酰胺，及类似物。此处使用的术语"杂环烷基"是指用杂环基团取代的烷基团。此处使用的术语"烃基"是指通过碳原子成键的基团，所述碳原子没有=0或者-s取代基，通常具有至少一个碳氢键和主要的碳骨架，但任选包括杂原子。因此，像甲基、乙氧基乙基、2-吡啶基和三氟甲基的基团被认为是用于本申请目的的烃基，但取代基比如乙酰基(在连接碳上具有-O取代基)和乙氧基(通过氧而不是连接碳)不是。烃基基团包括，但不限于芳基，杂芳基，碳环，杂环，烷基，烯基，炔基，及其组合。此处使用的术语"羟烷基"是指用羟基取代的垸基团。术语"低级"当与化学部分例如，酰基，酰氧基，垸基，烯基，炔基，或者烷氧基联用时表示包括一些基团，所述基团在取代基上具有十个或者更少非氢原子，优选六个或者更少。"低级烷基"，例如，是指一种垸基，所述垸基包含十个或者更少碳原子，优选六个或者更少。在某些实施方案中，此处定义的酰基，酰氧基，垸基，烯基，炔基，或者烷氧基取代基，分别是低级酰基，低级酰氧基，低级垸基，低级烯基，低级炔基，或者低级烷氧基，不论它们是单独或者与其他取代基共同存在，比如在羟垸基和芳烷基(在这样情况下，例如，当计算烷基取代基中的碳原子时，不计算芳基基团中的原子)。术语"多环基"，"多环"和"多环的"是指两个或更多环(例如，环烷基，环烯基，环炔基，芳基，杂芳基和/或杂环基)，其中两个或更多原子是两个相邻环共用的，例如，环是"稠环"。多环中的每个环可以是取代或者未取代的。在某些实施方案中，多环的每个环在环中包含3到IO个原子，优选的5到7个。术语"取代的"是指具有替换骨架上一个或多个碳上的氢的取代基的部分。很清楚"取代"或者"用...取代"包括隐含条件，即这种取代与取代的原子和取代基允许的化合价一致，并且取代导致稳定的化合物，例如，不会自发进行转化例如通过重排、环化、消除等等。此处使用的术语"取代的"预期包括有机化合物所有允许的取代。在较宽范围，允许的取代基包括有机化合物的非环状的和环状的，支流和无支链的，碳环的和杂环的，芳香族和非芳香族取代基。对合适的有机化合物，允许的取代可以是一种或多种，可以是相同或者不同的。对本发明来说，杂原子比如氮可以有氢取代基和/或此处描述的任何允许的有机化合物取代，其满足杂原子的化合价。取代基可以包括此处描述的任何取代基，例如卤素，羟基，羰基(比如羧基，垸氧羰基，甲酰，或者酰基)，硫代羰基(比如硫酯，硫代醋酸盐，或者硫代甲酸盐)，垸氧基，磷酰基，磷酸盐，膦酸盐，次膦酸盐，氨基，酰氨基，脒，亚胺，氰基，硝基，叠氮基，巯基，垸硫基，硫酸盐，磺酸盐，氨磺酰，磺酰氨，磺酰，杂环，芳垸基，或者芳香族或者杂芳族部分。本领域技术人员知道烃链上被取代的部分它们自身也是可以被取代的，如果合适的话。除非特别表明为"未取代的"，此处关于化学基团的参考理解为包括取代的变体。例如，关于"芳基"基团或者部分的参考隐含的包括取代的和未取代的变体。术语"硫酸盐"是本领域熟知的，是指基团-OS03H，或者药学可接受的盐。术语"氨磺酰"是本领域熟知的，是指由下列通式代表的基团其中W和R"独立地代表氢或者烃基。术语"亚砜"是本领域熟知的，是指基团-S(O)-R9，其中W代表烃基基团。术语"磺酸盐"是本领域熟知的，是指基团S03H，或者药学可接受的盐。术语"砜"是本领域熟知的，是指基团-S(0)2-R9，其中RS代表烃基基团。此处使用的术语"硫代烷基"是指用硫醇基取代的烷基团。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage93</formula>此处使用的术语"硫酯"是指基团-C(O)SR9或者-SC(O)R9，其中Rg代表烃基基团。此处使用的术语"硫醚"相当于醚，其中氧用硫替换。术语"尿素"是本领域熟知的，可以由下列通式代表其中W和R"独立地代表氢或者烃基基团。术语"小的有机分子"是指分子量小于2000amu的非聚合物。通常，这种分子的分子量小于1000amu，比如小于500amu。鉴定基因型选择性化合物靶标的方法在某些实施方案中，本发明涉及利用基因型选择性化合物，此处也称为"配体"(例如，erastin)，鉴定参与改变患病细胞表型的耙标(此处还被称为"细胞组分"(例如，蛋白，核酸，或者脂类)。在一个实施方案中，本发明提供一种鉴定参与肿瘤发生的细胞组分的方法，其中致瘤细胞，诸如工程化人致瘤细胞、组织、器官、有机体或者其裂解产物或者提取物，与所述抗肿瘤化合物接触；在接触后，与erastin作用(直接或者间接)的细胞组分被鉴别，从而可以鉴定出参与肿瘤发生的细胞组分。在另一个实施方案中，本发明提供一种鉴定参与肿瘤发生的细胞组分的方法。在这个方法中，(a)致瘤细胞，诸如工程化人致瘤细胞、组织、器官、有机体或者其裂解产物或者提取物，与erastin抑制剂接触和与erastin接触；和(b)与erastin抑制剂作用(直接或者间接)的细胞组分被鉴别，这些细胞组分参与肿瘤发生。细胞可以先后或者同时接触erastin和erastin抑制剂。可利用己知的方法鉴定与erastin或者本发明的任何试剂相互作用的细胞组分。如此处描述，这些方法所述化合物(或者配体)可以用任何化学方法制备。此外，所述化合物可以是体内或者体外合成的天然存在的生物分子。配体可选衍生自另一个化合物。这种改变的一个益处是，衍生化合物可以用于促进配体靶复合物收集或者配体收集，例如，在分离配体和靶标后。衍生基团的非限制性实例包括生物素，荧光素，地高辛，绿色荧光蛋白，同位素，多聚组氨酸，磁珠，谷胱甘肽S转移酶，光激活交联剂或者任意其组合。衍生基团还可以用于结合靶标(例如，erastin结合蛋白)以有利于它们的检测。根据本发明，靶标(细胞组分)可以是体内或者体外合成的天然存在的生物分子。靶标可以包括氨基酸，核酸，糖，脂类，天然产物或者其任意组合。本发明的一个益处是不需要耙标性质或者功能的先验知识。配体和靶标的相互作用可以是共价的或者非共价的。任选，配体_耙标配对中的配体对其他靶标可以显示亲合力，或者也可以不显示亲合力。配体-耙标配对中的耙标对其他配体可以显示亲合力，或者也可以不显示亲合力。例如，配体和耙标间的结合可以使用体外生化法在蛋白水平鉴定，包括光-交联，放射性同位素标记的配体结合和亲和色谱法(JakobyWB等人，1974，MethodsinEnzymology46:1)。此外，小分子可以固定在合适的固体支持物或者亲合基质例如琼脂糖基质上，用于筛选不同细胞类型和生物体的提取物。同样地，小分子可以接触细胞，组织，器官，生物体或者其裂解产物或者提取物，然后加入固相支持体以捕获小分子和结合的耙蛋白。表达克隆可用于检测蛋白的小库中的靶标(KingRW等人，1997，Science277:973)。肽(Kieffer等人,1992,PNAS89:12048)，核苷衍生物(HaushalterKA等人，1999,Curr.Biol.9:174)和药物-牛血清白蛋白(药物-BSA)结合物(Tanaka等人，1999，Mol.Pharmacol.55:356)已经被用于表达克隆中。另一个将配体与编码耙标的DNA紧密联系的有用技术是噬菌体展示。噬菌体展示，主要用于单克隆抗体领域，在病毒表面创建了肽或者蛋白文库，并用于筛选活性(SmithGP,1985，Science228:1315)。淘筛噬菌体以获得连接到固相上的靶标(ParmleySF等人，1988，Gene73:305)。噬菌体展示的一个优点是cDNA位于噬菌体中，因此不需要分离克隆步骤。一种非限制性实例包括结合反应条件，其中配体包括标记物例如生物素、荧光素、地高辛、绿色荧光蛋白、放射性同位素、组氨酸标记物、磁珠、酶或者其组合。在本发明的一个实施方案中，靶标可以在基于机理的试验中筛选，比如检测结合靶标的配体的试验。这可以包括与配体或者蛋白或者被检测的指示剂的固相或者液相结合情况。或者，编码功能还不确定的蛋白的基因可以与报告系统(例如，^-半乳糖苷酶、荧光素酶或者绿色荧光蛋白)一起转染细胞，并筛选文库，优选的通过高通量筛选或者用文库的单独成员。可以使用基于其他机理的结合试验，例如，检测对酶活性作用的生化试验，基于细胞的试验，其中靶标和报告系统(例如，荧光素酶或者/3-半乳糖苷酶)已经导入细胞，以及检测自由能变化的结合试验。靶标被固定到孔、珠或者芯片上，或者通过固定化抗体捕获，或者毛细管电泳分析，进行结合试验。结合的配体通常可以使用比色或者荧光或者表面等离子共振来检测。在某些实施方案中，通过调节本发明鉴定的靶标(细胞组分)的功能(例如，活性或者表达)，本发明还预期了治疗或者预防疾病(例如癌症)的方法。为了说明，如果靶标被鉴定促进肿瘤生长，治疗剂可用于改变或者降低靶标的功能(活性或者表达)。或者，如果靶标被鉴定抑制肿瘤生长，治疗剂可用于增强靶标的功能(活性或者表达)。治疗剂包括，但不限于，抗体、核酸(例如，反义寡聚核苷酸或者用于RNA干扰的小抑制RNA)、蛋白、小分子(例如，本发明的化合物)或者模拟肽。Erastin耙标在某些实施方案中，本发明提供emstin和erastin类似物的靶标，在此处通称为erastin靶标。Erastin靶标可以直接或者间接地结合erastin或者如上所述的erastin类似物。可选地，erastin靶标可以在细胞中调节化合物例如erastin或者erastin类似物的抗肿瘤活性。示例性erastin靶标包括，但不限于VDAC1，VDAC2,VDAC3，Prohibitin，核糖体结合糖蛋白，Sec61a和Sec22b。电压依赖性阴离子通道(VDACs)是被不同基因编码的孔道形成蛋白家族，在哺乳动物组织中表达出至少三种蛋白产品(VDAC1，VDAC2，和VDAC3)。VDACs已知主要功能是允许外线粒体膜(ODF)的几乎自由渗透性。参见，例如，Shoshan-Barmatz等人，2003，CellBiochemBiophys39:279-92。在ODF中与在线粒体中，VDAC2和VDAC3可能具有可选择的结构组织，不同的功能(Hinsch等人，2004，JBiolChem.279:15281-8)。不同种类的代表性VDAC序列已经储存在GenBank。例如，人VDAC1氨基酸和核酸序列可以在GenBank登录号NP—003365和NM—003374中找到；人VDAC2氨基酸和核酸序列可以在GenBank登录号NP_003366和NM—003375中找到；人VDAC3氨基酸和核酸序列可以在GenBank登录号NP—005653和NM—005662中找到。Prohibitin是遍在表达的进化保守的基因。据认为它是细胞增殖的负调节剂，可用作肿瘤抑制物(例如，Fusaro等人，2003,J.Biol.Chem.278:47853-47861;Fusaro等人，2002，Oncogene21:4539-4548)。不同种类的代表性prohibitin序列已经储存在GenBank。例如，人prohibitin氨基酸和核酸序列在GenBank登录号NP_002625和NM—002634中可以找到。核糖体结合糖蛋白(例如，I和II)是看起来参与核糖体结合的蛋白。它们是大量的、高度保守的糖蛋白，专一靶向于粗面内质网的膜上(例如，Fu等人，2000,J.Biol.Chem.275:3984-3990;Crimaudo等人，1987,EMBOJ.6:75-82)。不同种类的代表性核糖体结合糖蛋白序列已经储存在GenBank。例如，人核糖体结合糖蛋白I氨基酸和核酸序列在GenBank登录号NP一002941禾QNM—002950中可以找到；人核糖体结合糖蛋白II氨基酸和核酸序列在GenBank登录号NP—002942和NM—002951中可以找到。Sec61-alpha蛋白据认为在分泌肽和膜多肽插入内质网中起作用(参见，例如，Higy等人，2004,Biochemistry43:12716-22)。不同种类典型的Sec61alpha序列已经储存在GenBank中。例如，人Sec61-alpha-I氨基酸和核酸序列在GenBank登录号NP—037468和NM—013336中可以找到；而人Sec61-alpha-I1的氨基酸和核酸序列在GenBank登录号NP_060614和NM—018144中可以找到。Sec22-beta蛋白表明在内质网-高尔基体蛋白的运送以及与SNARE形成复合物中起作用(例如，Parlati等人，2000，Nature407:194-198;Mao等人，1998,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95:8175-8180)。不同种类典型的Sec61-beta序列已经储存在GenBank中。例如，人Sec61-beta的氨基酸和核酸序列在GenBank登录号NP—004883和NM—004892中可以找到。在某些实施方案中，本发明涉及通过利用erastin靶标鉴定候选抗肿瘤治疗剂的方法。在这种方法中，与erastin靶标结合或者增加或者降低emstin靶标功能(例如，活性或者表达或者相互作用)的待测试剂可以确定为候选抗肿瘤治疗剂。候选抗肿瘤治疗剂还可以在体内或者体外检测其抗肿瘤活性。鉴定候选抗肿瘤治疗剂的方法类似地可通过如上所述的筛选法来完成。输送方法本发明的某些实施方案中使用输送蛋白(例如，小t抗原，VDAC，PP2A抑制剂等等)或者编码这种蛋白的DNA到靶细胞的方法，这可以通过任意标准分子生物学和分子医学技术来实现。下面举例说明的实施方案只是可用于这种目的的技术中的几种。在本发明的一个方面，有关蛋白或者产生反义分子的表达构建体，可用任意生物学有效的载体给药，例如在体内能够有效地将重组基因转染细胞的任意制剂或者组合物。所述方法包括将有关基因插入病毒载体，所述病毒载体包括重组逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒和单纯疱疹病毒-1，或者重组细菌或者真核质粒。病毒载体可用于直接转染细胞；质粒DNA可以借助于例如阳离子脂质体(例如，lipofectin)或者衍生的(例如，抗体结合的)、多聚赖氨酸结合物、gramacidinS、人工病毒被膜或者其他这类胞内载体进行输送，以及基因构建体直接注入或者在体内进行CaP04沉淀。应该了解合适的靶细胞的转导代表基因治疗中关键的第一步，特定基因输送系统的选择依赖于一些因素，诸如预定靶标的表型和给药途径，例如局部的或者全身的。体内向细胞引入编码有关蛋白的核酸的优选的方法是使用包含核酸的病毒载体，例如，编码基因产物的cDNA。用病毒载体感染细胞的优势在于大部分靶细胞可以捕获核酸。此外，病毒载体内编码的分子，例如，通过病毒载体中包含的cDNA，可以在接纳病毒载体核酸的细胞中有效表达。逆转录病毒载体和腺相关病毒载体通常被认为是重组基因输送系统的选择，用于外源基因传递到体内，尤其是到人体内。这些载体可以有效的将基因输送入细胞，传递的核酸稳定地整合到宿主的染色体DNA中。人类免疫缺陷性病毒(HIV)和猫免疫缺陷病毒(FIV)代表了称为"慢病毒"的逆转录病毒家族亚群，它们因为在整合后长时间处于潜伏期而得名。来源于这两种病毒的载体系统已经有效用于临床前模型，在治疗应用中显示了广阔前景。与大部分逆转录病毒不同，HIV和FIV(和来源于它们的载体)能够转导非分裂细胞(Humeau等人，MolTher.2004，9(6):902-13;Curran等人，MolTlier.2000，1(1》31-8)。根据靶细胞类型这个性质可能是有利的。此外，FIV可以通过其增加的转基因运载能力同其他逆转录病毒区分开(Curmn等人，MoITher,2000,1(1):31-8).2000,1(1):31-8)。逆转录病毒使用的主要先决条件是确保其使用安全，尤其是考虑到野生型病毒在细胞群中传播的可能性。只产生复制缺陷型逆转录病毒的专化细胞系(称为"包装细胞")的开发促进了逆转录病毒在基因治疗中的应用，对缺陷型逆转录病毒进行了深入研究以用于基因治疗目的的基因转移(综述参见Miller,A.D.，Blood76:271,1990)。因此，可以构建重组逆转录病毒，其中部分逆转录病毒编码序列(gagpol，env)被编码有关多肽的核酸取代，导致逆转录病毒复制缺陷。复制缺陷型逆转录病毒然后被包装变成病毒颗粒，所述病毒颗粒采用标准技术通过辅助病毒感染靶细胞。产生重组逆转录病毒和体外或者体内用这种病毒感染细胞的实验步骤参见CurrentProtocolsinMolecularBiology，Ausubel，F.M.等人，(eds.)，JohnWiley&Sons,Inc.,GreenePublishingAssociates,(2001),9.9-9.14章及其他标准实验手册。合适的逆转录病毒的实例包括pLJ、pZIPpWE和pEM，这些都是本领域技术人员公知的。用于制备嗜亲性和兼嗜性逆转录病毒系统的合适包装病毒系的实例包括vCrip、vCre、V2和vAm。逆转录病毒已经用于在体外和/或体内将各种基因导入许多不同的细胞类型中，包括神经细胞、上皮细胞、内皮细胞、淋巴细胞、成肌细胞、肝细胞、骨髓细胞(参见例如Eglitis等人，Science230:1395-1398，1985;Danos和Mulligan,PNASUSA85:6460-6464，1988;Wilson等人，PNASUSA85:3014-3018,1988;Armentano等人，PNASUSA87:6141-6145，19卯；Huber等人，PNASUSA88:8039-8043，1991;Ferry等人，PNASUSA88:8377-8381，1991;Chowdhury等人，Science254:1802-1805，1991;vanBeusechem等人，PNASUSA89:7640-7644,1992;Kay等人，HumanGeneTherapy3:641-647，1992;Dai等人，PNASUSA89:10892-10895，1992;Hwu等人，J.Immunol.150:4104-4115，1993;U.S.PatentNo.4,868,116;U.S,专利4,980,286;PCT申i青WO89/07136;PCT申请WO89/02468;PCT申请WO89/05345;禾卩PCT申请WO92/07573)。此外，已证明通过修饰病毒颗粒表面上的病毒包装蛋白，能够限制逆转录病毒的感染范围，从而限制基于逆转录病毒的载体(参见PCT公开文本W093/25234,WO94/06920,和W094/11524)。例如，改变逆转录病毒载体感染范围的步骤包括将对细胞表面抗原特异的抗体偶联到病毒env蛋白(Roux等人，PNASUSA86:9079-卯83，1989;Julan等人，J.GenVirol73:3251-3255，1992;和Goud等人,Virology163:251-254,1983);或者将细胞表面配体偶联到病毒env蛋白(Nedaetal，J.Biol,chem.266:14143-14146,1991)。偶联可以是与蛋白或者其他种类化学交联的形式(例如，偶联到乳糖以将env蛋白转化为脱唾液酸糖蛋白)，以及通过产生融合蛋白(例如，单链抗体/env融合蛋白)而偶联。这些技术，不仅有利于限制或与此相反，指导对某些组织类型的感染，还可以用于将嗜亲性载体转换成兼性载体。对本发明有用的另一种病毒基因输送系统是腺病毒衍生的载体。腺病毒的基因组可以被调控，这样的话它编码感兴趣的基因产物，但其不具有在正常病毒裂解性生命周期中复制的能力(参见例如Berkner等人，BioTechniques6:616,1988;Rosenfeld等人，Science252:431-434,1991;和Rosenfeld等人，Cell68:143-155，1992)。合适的腺病毒载体来源于腺病毒株Ad型5dl324或者本领域技术人员公知的其他腺病毒株(例如Ad2，Ad3，Ad7等等)。重组腺病毒在某些方面是有优势的，它们不能感染非分裂细胞，可用于感染大量细胞类型，包括气道上皮(Rosenfeld等人，(1992)引用前文)，内皮细胞(Lemarchand等人，PNASUSA89:6482-6486，1992),肝细胞(Herz和Gerard,PNASUSA90:2812-2816,1993)和肌细胞(Quantin等人，PNASUSA89:2581-2584，1992)。此外，病毒颗粒相对稳定，易于纯化和浓缩，并且如上所述，可以进行修饰以影响感染的范围。此外，导入的腺病毒DNA(和其包含的外源DNA)不整合到宿主细胞的基因组，仍保持为附加体，从而避免了潜在问题，即作为在导入DNA整合入宿主基因组(例如，逆转录病毒DNA)的位置发生的插入致突变作用的结果。此外，相对其他基因输送载体，腺病毒基因组运载外源DNA的能力较强(到8kb)(Berkner等人,前文；Haj-Ahmand和GrahamJ.,Virol.57:267,1986)。当前使用的大多数是复制缺陷型腺病毒载体，因此本发明也使用这种载体，所述载体被切除全部或者部分病毒El和E3基因，但保持差不多80%的腺病毒遗传物质(参见例如Jones等人，Cell16:683,1979;Berkner等人，前文；和Graham等人，在MethodsinMolecularBiology,EJ.Murray,Ed.(Humana,Clifton,NJ,1991)vol.7.pp.109-127)。插入相关基因的表达可受例如，E1A启动子、主要晚期启动子(MLP)和结合的前导序列、病毒E3启动子或者外源添加启动子序列的控制。另一种用于有关基因输送的病毒载体系统是腺相关病毒(AAV)。腺相关病毒是一种天然发生的缺陷病毒，需要另一种病毒，例如腺病毒或者疱疹病毒作为辅助病毒以便有效的复制和多产的生命周期(综述参见Muzyczka等人，Curr.TopicsinMicro.Immunol.(1992)158:97-129,1992)。它也是少数几种能够将其DNA整合到非分裂细胞中，显示出高频率的稳定整合的病毒(参见例如Flotte等人，Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.7:349-356,1992;Samulski等人，J.Virol.63:3822-3828，1989;和McLaughlin等人，J.Virol.62:1963-1973，1989)。只包含有AAV的300碱基对的载体可以包装和整合。用于外源DNA的空间限于大约4.5kb。如Tratschin等人，Mol.Cell.biol.5:3251-3260,1985中所述的AAV载体可用于将DNA导入细胞。使用AAV载体已经将多种核酸导入不同的细胞类型(参见例如Hermonat等人，PNASUSA81:6466-6470，1984;Tratschin等人，Mol.Cell.biol.4:2072-2081，1985;Wondisford等人，Mol.Endocrinol.2:32-39，1988;Tratschinetal，J.Virol.51:611-619，1984;和Flotte等人，J.Biol.Chem.268:3781-3790，1993)。其他用于基因治疗的病毒载体系统来源于疱疹病毒、牛痘病毒和几种RNA病毒。尤其是，疱疹病毒载体可以提供一种在中枢神经系统和眼组织的细胞中持续维持有关重组基因的独特策略(Pepose等人,InvestOphthalmolVisSci35:2662-2666,1994)。除比如上面那些举例说明的病毒递送法之外，非病毒方法也可以用于引起有关蛋白在动物组织中的表达。基因转移的大多数非病毒方法依靠哺乳动物细胞摄取和胞内运输高分子的常规机理。在优选的实施方案中，本发明的非病毒基因输送系统依靠靶细胞的内吞途径摄取有关基因。这种类型示范性的基因输送系统包括脂质体衍生的系统、多聚赖氨酸结合物和人工病毒被膜。在一个典型的实施方案中，编码有关多肽的基因可以被表面带有正电荷的脂质体(例如lipofectins)捕获，(任选)所述脂质体用抗靶组织细胞表面抗原的抗体标记(Mizuno等人，NoShinkeiGeka20:547-551,1992;PCT公布WO91/06309;日本专利申请1047381;和欧洲专利公布EP-A-43075)。例如，可以使用抗神经胶质瘤-抗原单克隆抗体标记的脂质体进行神经胶质瘤细胞的脂质体转染(Mizuno等人，Neurol.Med.Chir.32:873-876，1992)。在另一个说明性的实施方案中，基因输送系统包括抗体或者细胞表面配体，它们与基因结合剂例如多聚赖氨酸交联(参见，例如，PCT公布WO93/04701,W092/22635,WO92/20316,W092/19749,和WO92/06180)。例如，有关基因构建体可用于通过使用包括抗体的可溶多核苷酸载体在体内转染特定细胞，所述抗体结合多聚阳离子，例如多聚赖氨酸(参见美国专利5,166,320)。应该了解通过肽介导的胞吞作用有关核酸构建体的有效输送可以利用试剂进行改进，所述试剂增强基因从内体结构逃逸。例如，整个腺病毒或者流感HA基因产物的融合肽可以用作输送系统的一部分以诱导包含DNA的内体的有效破坏(Mulligan等人，Science260-926,1993;Wagner等人，PNASUSA89:7934,1992;和Christiano等人，PNASUSA90:2122，1993)。在临床条件下，基因输送系统可以通过本领域熟知的任意大量方法之一导入患者。例如，基因输送系统的药物制剂可以全身性的导入，例如，通过静脉注射，并且耙细胞中构建体的特异转导主要源自转染的特异性，这是由基因运载载体、控制基因表达的转录调节序列造成的细胞类型或者组织类型表达，或者其组合引起的。在其他实施方案中，重组基因的初始输送非常受限，这是因为导入动物时非常受局限。例如，基因运载载体可以通过导管(参见美国专利5,328，470)或者立体靶向注射(例如Chen等人，PNASUSA91:3054-3057，1994)导入。此外，有关蛋白可以与第二种肽以融合肽的形式提供，所述第二种肽促进"胞转作用"，例如通过靶细胞摄取肽。举例说明，有关蛋白可以作为融合多肽的一部分，所述融合多肽还包括HIV蛋白TatN端结构域的全部或者一个片段，例如，Tat的残基1-72或者能够促进胞转作用的其更小片段。在其他实施方案中，有关多肽可以与触角足m蛋白的全部或者部分形成融合多肽。合成肽已经有效地用于转运蛋白、肽和小分子穿过包括血脑屏障的生物膜，因此可以用于本申请(Rothbard等人,NatMed.2000,6(11):1253-7;Rothbard等人,JMedChem,2002，45(17):3612-8)。尽管提供的合成蛋白转导序列实例的特征在于高密度的精氨酸残基，还可以用其他功能类似但结构不同的分子或者序列取代的。为进一步举例说明，有关多肽(或者模拟肽)可以嵌合肽形式提供，其中包括异源肽序列("内化肽"或者"内化作用结构域")，所述肽序列驱驶有关多肽序列胞外形式穿过细胞膜的移位，以促进有关多肽的胞内定位。在这点上，治疗性有关多肽是在胞内有活性的。内化肽自身能够通过例如胞转作用以较高比率穿过细胞膜。任选，内化肽以可切割方式与有关多肽融合例如形成融合蛋白。相对于单独的活化多肽，所获嵌合肽以较高比率被运输入细胞，从而提供一种促进其导入它所作用细胞的方法，例如，促进有关多肽的局部施用。除蛋白和模拟肽之外，一种药物试剂可以与促进输送到一种物质的化合物偶联(例如，受体介导的化合物比如维生素B12)。在一个实施方案中，内化肽起源于果蝇触角足蛋白，或者其类似物。相似-蛋白触角足的60氨基酸长的同源结构域已经证明能够移位穿过生物膜，可以促进与其偶联的异源多肽的移位。参见例如，Derossi等人(1994)JBiolChem269:10444-10450;和Perez等人(1992)JCellSci102:717-722。已经证明这个蛋白小至16氨基酸的片段足以驱动内化作用。参见Derossi等人(1996)JBiolChem271:18188-18193。本发明还提供此处所述的多肽(小t抗原或者VDAC)或者模拟肽序列，以及触角足蛋白(或者其同系物)的至少一部分，相对有关多肽或者模拟肽，足以在统计意义上显著的促进嵌合蛋白的跨膜运输。这种多肽或者其模拟肽可以用于帮助有效和特异杀伤癌细胞的相关方法。内化肽的另一个实例是HIV反式激活因子(TAT)蛋白。这个蛋白被分成四个结构域(Kuppuswamy等人(1989)Nucl.AcidsRes.17:3551-3561)。纯化的TAT蛋白可以被在组织培养中的细胞摄取(Frankel和Pabo,(1989)Cell55:1189-1193)，例如对应于TAT残基37-62的片段的肽在体外被细胞快速摄取(Green和Loewenstein,(1989)Cell55:1179-1188)。高度碱性的区域调节内化作用和内化部分靶向到核(Ruben等人，(1989)J.Virol.63:1-8)。另一种示范性跨细胞的多肽可以被产生以包括黄峰毒素的足够部分(T.Higashijima等人，(1990)J.Biol.Chem.265:14176)以促进嵌合蛋白的跨膜运输。但不希望被任何具体理论束缚，应该注意到通过将多肽偶联或者结合到可运输的肽，所述可运输的肽能够通过受体介导的胞转作用穿过膜，亲水性多肽也可以生理地运输穿过隔膜。可以使用，例如，组蛋白，胰岛素，转铁蛋白，碱性白蛋白，催乳激素和胰岛素样生长因子I(IGF-I)，胰岛素样生长因子II(IGF-II)或者其他生长因子的全部或者部分，来产生这种类型的合适的内化肽。例如，已经发现一种胰岛素片段，显示对毛细管细胞上胰岛素受体的亲合力，其降低血糖效率比胰岛素低，通过受体介导的胞转作用能够跨膜转运，因此可以作为有关跨细胞肽和模拟肽的内化肽。优选的生长因子-衍生的内化肽包括EGF(表皮生长因子)-衍生肽例如CMHIESLDSYTC禾BCMYIEALDKYAC;TGF-beta(转化生长因子beta)衍生肽；衍生自PDGF(血小板衍生生长因子)或者PDGF-2的肽；衍生自IGF-I(胰岛素样生长因子)或者IGF-II的肽；和FGF(成纤维细胞生长因子)-衍生肽。另一类移位/内化肽显示pH-依赖的膜结合。对于在酸性pH假定具有螺旋构象的内化肽，内化肽获得两亲性的性质，例如，它具有疏水性和亲水性界面。更具体地，在大约5.0-5.5的pH范围内，内化肽形成促进基团插入靶标膜的alpha—螺旋、两亲性结构。在例如细胞内体内的低pH环境中，可以发现诱导alpha-螺旋的酸性pH。通过内吞机理摄取，这种内化肽可用于促进有关多肽和模拟肽从内体隔室转运到细胞质。优选的pH依赖的膜结合内化肽包括高比例的螺旋形成残基，比如谷氨酸，甲硫氨酸，丙氨酸和亮氨酸。此外，优选的内化肽序列包括pKa在pH5-7范围内的离子化残基，这样的话在pH5时肽内存在充分不带电荷的膜结合结构域以便插入靶细胞膜。在这方面特别优选的pH依赖的膜结合内化肽是aal-aa2-aa3-EAALA(EALA)4-EALEALAA-酰胺，这代表Subbarao等人的肽序列的修饰(Biochemistry26:2964，1987)。在这些肽序列中，第一个氨基酸残基(aal)优选的是独特的残基，比如半胱氨酸或者赖氨酸，促进内化肽与靶蛋白结合物的化学结合。可以选择氨基酸残基2-3来调节内化肽对不同膜的亲合力。例如，如果残基2和3都是赖氨酸或者精氨酸，内化肽将具有结合具有负表面电荷的膜或者脂类的能力。如果残基2-3是中性氨基酸，内化肽将插入中性膜。其他优选的内化肽包括apo-脂蛋白A-I和B的肽；肽毒素，比如蜂毒素，bombolittin，delta溶血素和豹鳎剂(paradaxin);抗生素肽，比如丙甲菌素；肽类激素，比如降钙素，促肾上腺皮质激素释放因子，beta内啡肽，胰高血糖素，甲状旁腺激素，胰多肽；和对应于很多分泌蛋白信号序列的肽。此外，示范性的内化肽可以通过添加取代基进行修饰，所述取代基增强内化肽在酸性pH下的alpha-螺旋特性。另一类适合用于本发明的内化肽包括在生理pH下"隐藏"的疏水性结构域，但在耙细胞内体的低pH环境下暴露。当pH诱导疏水性结构域打开和暴露时，该部分结合脂质双分子层并影响共价连接的多肽移位进细胞质。这种内化肽在例如假单胞菌属外毒素A，网格蛋白，或者白喉毒素中测序鉴定后可以构建模型。孔形成蛋白或者肽也可作为此处的内化肽。孔形成蛋白或者肽可以获自或者衍生自，例如，C9补体蛋白，溶胞T细胞分子或者NK细胞分子。这些部分在膜上能够形成环状结构，从而允许结合的多肽转运过膜进入细胞内部。仅内化肽的膜插入就足以使有关多肽或者模拟肽移位穿过细胞膜。但是，移位可以通过将内化肽附着在胞内酶的底物上来改进(即，"附属肽")。优选的附属肽附着于内化肽的一部分，所述内化肽从细胞膜突出到胞质表面。附属肽可以有利地附着于移位/内化部分或者锚肽的末端。本发明的附属部分可以包含一种或多种氨基酸残基。在一个实施方案中，附属部分可以提供细胞磷酸化作用的底物(例如，附属肽可以包含酪氨酸残基)。在这方面示范性的附属部分是N-十四酰转移酶的肽底物，例如GNAAAARR(Eubanks等人，在Peptides.ChemistryandBiology,GarlandMarshall(ed.)，ESCOM，Leiden,1988,pp.566-69)。在这些构建体中，内化肽将结合于附属肽的C端，因为N端甘氨酸对附属部分的活性非常关健。这个杂交肽，在C端附着到E2肽或者模拟肽后，被N-十四烷基化的，进一步锚定到靶细胞膜，例如，它用于增加肽在细胞膜上的局部浓度。为进一步举例说明附属肽的使用，可磷酸化的附属肽首先共价附着于内化肽的C端，然后与有关多肽或者模拟肽整合成融合蛋白。融合蛋白的肽组件插入靶细胞质膜，于是附属肽移位穿过膜突进靶细胞的细胞质。在质膜的胞质面，在中性pH中附属肽被细胞激酶磷酸化。一旦磷酸化，附属肽不可逆将融合蛋白锚定到膜上。靶向到细胞表面膜可以促进多肽移位进细胞质。合适的附属肽包括作为激酶底物的肽，具有单个正电荷的肽，和包含被膜结合糖基转移酶糖基化的序列的肽。被膜结合糖基转移酶糖基化的附属肽可以包括序列x-NLT-x，其中"x"可以是例如另一个肽，一种氨基酸，偶合剂或者疏水性分子。当这种疏水性三肽与微粒体小囊泡孵育时，它穿过胞囊膜，在腔面被糖基化，由于其亲水性被捕获在小囊泡内(C.Hirschbergetah,(1987)Ann.RRev.BBiochem.556:63-87)。包含序列x-NLT-x的附属肽因此将促进靶细胞保留相应多肽。在本发明这方面的另一个实施方案中，附属肽可用于促进多肽或者模拟肽与靶细胞的相互作用。在这方面示范性附属肽包括衍生自包含序列"RGD"的细胞粘连蛋白的肽，或者衍生自包含序列CDPGYIGSRC的层粘连蛋白的肽。胞外基质糖蛋白，比如纤粘连蛋白和层粘连蛋白，通过受体介导的步骤结合细胞表面。三肽序列，RGD，已经确定是结合细胞表面受体必需的。这个序列存在于纤粘连蛋白，玻连蛋白，补体C3bi，von—Willebrand因子，EGF受体，转化生长因子beta，胶原类型I，大肠杆菌的lambda受体，纤维蛋白原和Sindbis衣壳蛋白(E.Ruoslahti，Ann.Rev.Biochem.557:375-413，1988)。识别RGD序列的细胞表面受体已经集合成称为"整合素"的相关蛋白的超家族。"RGD肽"与细胞表面整合素的结合将促进多肽的细胞表面滞留，最终是多肽的移位。如上所述，通过化学交联或者融合蛋白形式，内化肽和附属肽可以各自单独的被添加到多肽或者模拟肽。在融合蛋白的例子中，无结构的多肽接头可以包括在每个肽部分之间。通常，内化肽足以用于多肽的直接输出。但是，当提供附属肽例如RGD序列时，可能需要包括分泌信号序列以便从其宿主细胞直接输出融合蛋白。在优选的实施方案中，分泌信号序列位于N末端远端，并且(任选)侧翼是分泌信号和融合蛋白其他部分的蛋白水解作用位点。在一个示范性的实施方案中，多肽或者模拟肽被设计包括整合素结合RGD肽/SV40核定位信号(参见例如HartSL等人，1994;J.Biol.Chem.269:12468-12474)，例如被Ndel-EcoRl片段中的核苷酸序列编码:catatggutgactgccgtggcgatatgttcggttgcggtgctcctccaaaaaagaagagaaaggtagctggattc,其编码RGD/SV40核苷酸序列MGGCRGDMFGCGAPPKKKRKVAGF。在另一个实施方案中，蛋白可1以与HIV-1tat(1-72)多肽工程化，例如，如Ndel-EcoRl片段所提供catatggagccagtagatcctagactagagccctggaagcatccaggaagtcagcctaaaactgcttgtaccaattgctattgtaaaaagtgttgctttcattgccaagtgtttcataacaaaagcccttggcatctcctatggcaggaagaagcgagacagcgacgaagacctcctcaaggcagtcagactcatcaagtttctctaagtaagcaaggattc，其编码HIV-1tat(1-72)肽序歹ij:MEPVDPRLEPWKHPGSQPKTACTNCYCKKCCFHCQVCFITKALGISYGRKKRRQRRRPPQGSQTHQVSLSKQ。在另一个实施方案中，融合蛋白包括HSV-IVP22多肽(ElliottG.,O'HareP(1997)Cell,88:223-233)，由Ndel-EcoRl片段提供。在另一个实施方案中，融合蛋白包括来自例如核苷酸序列(Ndel-EcoRl片段)的VP22蛋白的C端结构域。在某些例子中，需要包括核定位信号作为有关多肽的一部分。在产生包括多肽的融合多肽时，可能需要包括无结构的接头以便确保不同肽结构域的正确折叠。本领域已知多种合成和天然的接头可以用于本发明，包括(Gly3Ser)4接头。治疗方法在某些实施方案中，本发明提供在个体中治疗或者预防癌症的方法。术语"癌症"，"肿瘤"，和"瘤形成"在此处可以互换使用。此处使用的癌症(肿瘤或者肿瘤形成)的特点在于一种或者多种下列性质在环境中细胞生长不受正常生化和生理影响调节；退行发育(例如，缺少正常调节的细胞分化)；和在有些情况下，转移。癌症疾病包括，例如，肛门癌，膀胱癌，乳腺癌，宫颈癌，慢性淋巴细胞性白血病，慢性髓性白血病，子宫内膜癌，毛细胞性白血病，头和颈癌，肺(小细胞)癌，多发性骨髓瘤，非hodgkin's淋巴瘤，滤泡性淋巴瘤，卵巢癌，脑肿瘤，结肠直肠癌，肝细胞癌，卡波西肉瘤，肺(非小细胞癌)，黑素瘤，胰腺癌，前列腺癌，肾细胞癌，和软组织肉瘤。其他的癌症病症可以参见，例如，Isselbacher等人(1994)Harrison'sPrinciplesofInternalMedicine1814-1877，在此引入作为参考。通常，如上所述的可用此处所述方法治疗的癌症显示不受控制的VDAC表达。在一个实施方案中，上述癌症包含Ras信号途径的突变，导致Ras信号活性升高。例如，突变可以是Ras基因上的组成性活化突变，比如RasV12。在其他实施方案中，癌症可以包含PP2A上丧失功能的突变，禾口/或MEKl禾口/或ERKl的活化突变。在某些其他实施方案中，癌症的特点在于细胞表达SV40小t癌蛋白，或者与表达ST和/或致癌HRAS的细胞表型相似。在某些优选的实施方案中，细胞表达基本上野生型水平的Rb(例如，至少大约50%，60%，70%，80%，90%，100%,110%，120%,130%，或者150%等等)。在一个实施方案中，本发明涉及一种在个体中治疗或者预防癌症的方法，包括给药个体治疗有效量的化合物，所述化合物对工程化人致瘤细胞，或者特定基因型(或者特异改变的基因型)的癌细胞显示选择毒性。在某些实施方案中，癌症的特点在于包括活化的RAS途径的细胞。在某些其他实施方案中，癌症的特点在于细胞表达SV40小t癌蛋白，或者显示sT和/或致癌RAS的靶标的调节。在相关实施方案中，本发明预期本发明的方法与其他抗肿瘤疗法，例如抗实体瘤和控制转移建立的传统化疗方法，联合应用。本发明化合物的给药可以在化疗期间或者化疗之后进行。这种试剂通常与可接受的载体配制成制剂，可以静脉内、口服、颊的、胃肠外、通过吸入喷雾、通过局部施用或者经皮肤给药。试剂还可以通过局部给药方式给药。优选的，一种或多种其他试剂与抗癌症化疗剂(例如，本发明的化合物)联合给药，以累加或者协同方式抑制癌细胞。大量的传统化合物已经显示具有抗肿瘤活性。这些化合物已经在化疗中用作药物制剂縮小实体瘤，预防转移和进一步生长，或者降低在白血病或者骨髓恶性肿瘤中恶性细胞的数目。尽管化疗在治疗各种类型的恶性肿瘤中有效，许多抗肿瘤化合物诱导不良副作用。多数情况下，当两种或者多种不同治疗方法结合时，治疗可以协同作用，可以降低每种疗法的剂量，从而降低每种化合物在较高剂量时的不良副作用。在其他情况下，对一种治疗无反应的恶性肿瘤可能对两种或更多种不同治疗的疗法组合有反应。因此，本发明的化合物和药物组合物可以与传统抗肿瘤化合物联合给药。传统的抗肿瘤化合物包括，仅仅为举例说明氨鲁米特，安吖啶，阿那曲唑，天冬酰胺酶，卡介苗，比卡鲁胺，争光霉素，布舍瑞林，白消安，喜树碱，卡培他滨，卡铂，亚硝脲氮芥，苯丁酸氮芥，顺铂，2-氯脱氧腺苷，氯膦酸盐，秋水仙碱，环磷酰胺，环丙氯地孕酮，阿糖胞苷，达卡巴嗪，放线菌素D,柔红霉素，双烯雌酚，己烯雌酚，紫杉萜，阿霉素，表柔比星，雌二醇，雌氮芥，鬼臼乙叉甙，依西美坦，非格司亭，氟达拉滨，氟氢可的松，氟尿嘧啶，氟烃甲基睾丸素，氟他米特，吉西他滨，染料木素，戈舍瑞林，羟基脲，伊达比星，异磷酰胺，伊马替尼，干扰素，依立替康，ironotecan，来曲唑，甲酰四氢叶酸，亮丙瑞林，左旋四咪唑，环己亚硝脲，氮芥，甲羟孕酮，甲地孕酮，左旋苯丙氨酸氮芥，巯基嘌呤，美司钠，氨甲蝶呤，丝裂霉素，米托坦，米托蒽醌，尼鲁米特，诺考达唑，奥曲肽，奥沙利铂，紫杉醇，帕屈膦酸二钠，喷司他丁，普卡霉素，卟菲尔钠，甲基苄肼，雷替曲塞，riruximab，链脲霉素，苏拉明，他莫昔芬，替莫唑胺，替尼泊甙，睾丸激素，硫鸟嘌吟，塞替派，二氯环戊二烯钛，托泊替康，曲妥单抗，维甲酸，长春花碱，长春新碱，长春地辛，和长春瑞滨。在其他实施方案中，本发明的化合物和药物组合物可以与传统抗肿瘤化合物联合给药，所述传统抗肿瘤化合物选自表皮生长因子受体拮抗剂，五硫化二砷，阿霉素，顺铂，卡铂，西咪替丁，洋红霉素，氮芥氢氯化物，五甲三聚氰酰胺，塞替派，替尼泊甙，环磷酰胺，苯丁酸氮芥，去甲氧基竹红菌甲素A，左旋丙氨酸氮芥，异磷酰胺，曲磷胺，曲奥舒凡，足叶草毒素或者足叶草毒素衍生物，鬼臼乙叉甙磷酸盐，替尼泊甙，鬼臼乙叉甙，异长春碱，环氧长春碱，长春地辛，9-氨基喜树碱，camptoirinotecan，克立那托，甲地孕酮，甲氨蝶呤，丝裂霉素C，ecteinascidin743，白消安，亚硝脲氮芥(BCNU)，环己亚硝脲(CCNU)，洛弗斯特丁，l-甲基-4-苯基吡啶鎗离子，司莫司汀，十字孢碱，链脲霉素，酞菁，达卡巴嗪，氨基蝶呤，氨甲蝶呤，曲美沙特，硫鸟嘌呤，巯基嘌呤，氟达拉滨，pentastatin,克拉曲宾，阿糖胞苷(araC)，泊非霉素，5-氟尿嘧啶，6-巯基嘌呤，阿霉素氢氯化物，甲酰四氢叶酸，霉酚酸，柔红霉素，去铁敏，5-氟脱氧尿苷，去氧氟尿苷，雷替曲塞，伊达比星，表柔比星，吡柔比星，佐柔比星，米托蒽醌，博来霉素硫酸盐，放线菌素D，番红精，saframycins，quinocarcins，discodermolides，长春新碱，长春花碱，长春瑞滨酒石酸盐，vertoporfm，紫杉醇，他莫昔芬，雷洛昔芬，噻唑呋林，硫鸟嘌呤，病毒唑，EICAR，雌氮芥，雌氮芥磷酸钠，氟他米特，比卡鲁胺，布舍瑞林，亮丙瑞林，蝶啶，烯二炔，左旋四咪唑，aflacon，干扰素，白介素，阿地白介素，非格司亭，沙莫司亭，利妥昔单抗，卡介苗，维甲酸，betamethosone,盐酸吉西他滨，异搏定，VP-16，六甲密胺，毒胡萝卜内酉旨(thapsigargin)，奥沙利铂，异丙铂，四铂，洛铂，DCP,PLD-147，JM118，JM216，JM335，沙铂，紫杉萜，脱氧紫杉醇，TL-139，5'-降-脱水长春碱(以下5'-降-长春花碱)，喜树碱，依立替康(Camptosar，CPT-ll)，托泊替康(Hycamptin)，BAY38-3441,9-硝基喜树碱(Orethecin,卢比替康)，依沙替康(DX-8951)，勒托替康(GI-147211C)，gimatecan，homocamptothecinsdiflomotecan(BN-80915)和9-氨基喜树碱(IDEC-13')，SN-38,ST1481,karanitecin(BNP1350)，口引哚咔唑(indolocarbazole)(例如，NB-506),原小蘖碱，茚托利辛，idenoisoquinolones,苯-吩嗪或者NB-506。在另一个相关实施方案中，本发明预期将本发明实施的方法与其他抗肿瘤疗法例如照射联用。此处使用的术语"照射"是用于包括通过光子、中子、电子或者其他类型的电离辐射治疗赘生性细胞或者相关细胞的任意疗法。这种放疗包括，但不限于，X射线，伽马照射，或者重离子颗粒，比如alpha或者beta粒子。此外，照射可以是放射性的。在患者中照射赘生性细胞的方法是本领域公知的，包括例如，外粒子束疗法和近距放射疗法。检测癌症(肿瘤或者肿瘤形成)是否已经被治愈的方法是本领域技术人员公知的，包括，例如，肿瘤细胞数目减少(例如，细胞增殖下降或者肿瘤大小减小)。应该意识到本发明的治疗可以是耐久和完全反应，或者可以包括部分或者短暂的临床反应。参见实例，Isselbacher等人(1996)Harrison'sPrinciplesofInternalMedicine13ed.,1814-1882，在此引入作为参考。检测肿瘤细胞的致敏性或者增加的死亡的试验是本领域公知的，包括，例如，评定细胞活力的标准剂量反应试验；DNA提取物的琼脂糖凝胶电泳或者检测表示细胞死亡特征的DNA断裂的流式细胞计量术；检测参与凋亡的多肽活性的试验；和检测细胞死亡形态特征的试验。关于这些试验的细节在此处其他地方描述。其他试验包括，染色质试验(例如，计数浓縮的核染色质的频率)或者例如在Lowe等人(1993)Cell74:957-697中描述的抗药性试验，在此引入作为参考。还可参见美国专利号5,821,072，也在此引入作为参考。药物组合物预期的治疗剂可以进行评价以便检测它们包含在药物组合物中的适应性。这种试剂一个通用的检测方法是疗效指数，这是治疗剂量对有毒剂量的比率。治疗剂量(功效)和有毒剂量的阈值可以调整为适当的(例如，治疗反应或者最小化毒性反应的必需量)。例如，治疗剂量可以是试剂治疗有效量的(相对于治疗一种或多种病症)，有毒剂量可以是引起死亡的剂量(例如，LD50)或者在一定比例受治疗者中引起不希望有的效果。优选的，试剂的疗效指数至少是2，更优选的至少是5，甚至更优选的至少是10。评价治疗剂还可以包括检测试剂的药物动力学，当以不同制剂和/或通过不同途径给药时检测其生物利用率和/或吸收。本发明的化合物，例如erastin或者微管蛋白抑制剂，可以给需要它的个体施用。在某些实施方案中，个体是哺乳动物比如人，或者非人哺乳动物。当给药个体时，本发明的化合物可以作为药物组合物给药，所述药物组合物包含，例如，本发明的化合物和药学可接受的载体。药学可接受的载体是本领域公知的，包括，例如，水溶液比如水或者生理缓冲盐水或者其他溶剂，或者媒介例如乙二醇，甘油，油剂比如橄榄油或者可注射的有机酯。在优选的实施方案中，当这种药物组合物用于人施用时，水溶液是无热原的，或者基本上无热原的。可以选择赋形剂，例如，以延缓试剂的释放或者选择性靶向一种或多种细胞，组织或者器官。药学可接受的载体可以包含生理可接受的试剂，所述试剂用作，例如，稳定或者促进化合物例如erastin或者微管蛋白抑制剂的吸收。这种生理可接受的试剂包括，例如，糖类，比如葡萄糖，蔗糖或者右旋糖酐，抗氧化剂，比如抗坏血酸或者谷胱甘肽，螯合剂，低分子量蛋白或者其他稳定剂或者赋形剂。药学可接受的载体的选择，包括生理可接受的试剂，依赖于例如组合物的给药途径。药物组合物(制剂)还可以是脂质体或者其他聚合物基质，这可以整合入例如本发明的化合物。脂质体，例如，由磷脂或者其他脂类组成，是无毒的的，生理可接受的和可代谢的载体，可以相对容易的制造和给药。包含本发明化合物的药物组合物(制剂)可以通过多种给药途径给药，包括，例如，口服；肌内；静脉内；肛门；阴道；胃肠外；鼻；腹膜内；皮下；和局部。组合物可以通过注射或者通过温育给药。在某些实施方案中，本发明的化合物(例如，erastin)可以单独给药或者与另一种抗肿瘤治疗剂联合给药。此处使用的短语"联合给药"是指联用两种或更多不同治疗化合物的任意给药形式，这样的话在先前给药的治疗化合物在体内仍然有效时给药第二种化合物(例如，两种化合物同时在患者体内起作用，这可以包括两种化合物的协同效应)。例如，不同的治疗化合物可以在相同制剂或者在分开的制剂中给药，或者同时的或者依次的。因此，接受这种治疗的个体可以受益于不同治疗化合物的协同效应。预期本发明的化合物(例如erastin)以治疗有效量(剂量)给药患者(例如哺乳动物，优选的是人)。"治疗有效量"是指化合物的浓度足以得到所需治疗效果(例如，病症的治愈，赘生性细胞的死亡)。应该理解化合物的有效量会根据患者的重量，'性别，年龄和治疗史而变化。其他影响有效量的因素可能包括，但不限于，患者病症的严重程度,接受治疗的疾病，化合物的稳定性，和，如果需要，与本发明的化合物一起给药的另一种治疗剂。通常，对人类患者有效量的范围从大约0.001mg/kg体重到大约50mg/kg体重。通过多次试剂给药可以输送更多的总剂量。检测功效和剂量的方法是本领域技术人员已知的。参见例如，Isselbacher等人(1996)Harrison'sPrinciplesofInternalMedicine13ed.,1814-1882，在此引入作为参考。实施例现在概述本发明，参考下列实施例更容易理解本发明，包括下列实施例仅仅为了举例说明本发明的某些方面和实施方式，不是用于限制本发明。实施例1鉴别在特定的癌症相关等位基因存在条件下具有增强效力或者活性的化合物此处描述的工作是用于鉴定在hTERT，LT，ST，E6,E7或者RASV12存在条件下具有增强的效力或者活性的化合物。尽管此处描述的工作利用hTERT，LT，ST，E6，E7和RASV12作为转化基因，将来的研究可以利用多种癌症结合等位基因，利用这种方法以便确定参与许多癌基因和肿瘤抑制物的信号网络。具有这些遗传元件的工程化细胞系用于筛选23,550种化合物，包括来自组合文库的20,000种化合物，来自国家的癌症学会多样性收集物的1,990种化合物，和1，540种有生物学活性的已知化合物，所述已知化合物是申请人选择和购买并制成可供筛选的集合。初筛检测(一式四份)测定用每种化合物治疗致瘤BJ-TERT/LT/ST/RASV12工程化致瘤细胞的效果，所述化合物在g/mL浓度作用48小时，对应于分子量400的化合物10uM，这大约是文库的中值分子量。使用染料钙黄绿素乙酰甲酯(钙黄绿素AM)检测细胞活力(Wang等人，1993，Hum.Immunol.337,264-270)，这是一种能够自由扩散进细胞的非荧光化合物。在活细胞中，,丐黄绿素AM被胞内酯酶切割，形成阴离子荧光衍生物钙黄绿素，它不能扩散出活细胞。因此，当与钙黄绿素AM孵育时，活细胞显示绿色荧光，而死细胞不显示。对于在BJ-TERT/LT/ST/RASV"细胞中显示50%或者更强抑制染料钙黄绿素AM染色活力的化合物，然后在BJ和BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞中所述化合物进行两倍系列稀释以鉴定显示合成致死性的化合物，这种化合物在致瘤细胞中是致死性的，但在同源原代细胞中不是。计算各化合物在各细胞系中的IC5o值(抑制50%的钙黄绿素AM信号所需浓度)(表1)。结果鉴定出九种化合物(图2)，这些化合物在BJ-TERT/LT/ST/RASV12致瘤细胞中比BJ原代细胞活性至少高4倍(在BJ原代细胞中至少需要4倍高的浓度以便获得相同的钙黄绿素AM信号的50%抑制)。以下是这九种化合物的更详细的分析。这些化合物中的三种(阿霉素，柔红霉素和米托蒽醌)现在临床用作抗癌药物，一种(喜树碱)是临床使用抗癌药(托泊替康和依立替康)的天然产物类似物，一种(棘霉素)最近在进行n期临床试验。所有这九种化合物然后在各组工程化细胞中进行多剂量复孔检测，以证实观察到的选择性也存在于多种独立衍生的细胞系中(图1和表1)。申请人开发了一种检测化合物在两种不同细胞系中IC5o(抑制50yo活力信号所需的浓度)改变的选择性计量法。为计算两个细胞系间的选择性值，化合物在一种细胞系中的IC5Q除以相同化合物在第二种细胞系中的IC50。因此，具有选择性值4的化合物在一种细胞系中使用的浓度比第二种细胞系高4倍。计算各化合物的"肿瘤选择性值"，通过用化合物在亲本原代BJ细胞中的IC5o值除以化合物在工程化BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞中的IC5o值，工程化BJ-TERT/LT/ST/RASV"细胞包含产生致瘤细胞所需的全部四种遗传元件(表1)。这些工程化致瘤细胞利用起主要作用的病,癌蛋白比如LT，ST，E6和E7。这些病毒蛋白可能在特定形式的癌症中参与细胞转化，所述特定形式的癌症即猴病毒40诱导的恶性间皮瘤(Testa和Giordano,2001，SeminCancerBiol77，31-8)和人乳头状瘤病毒诱导的宫颈癌(Bosch等人，2002，JClinPathol55，244-65)，并且这些病毒蛋白已经用于破坏p53和pRB的功能以在体外和体内转化细胞(Elenbaas等人，2001，GenesDev15,50-65;Jorcyk等人，1998,Prostate34，10-22;Perez-Stable等人，1997,CancerRes57，卯0-6;Rich等人,2001,CancerRes61,3556-60;Sandmoller等人，1995,CellGrowthDiffer6,97-103)。申请人:利用两种不同的方法灭活细胞蛋白，(它们检测LT和基于E6/E7灭活pRB和p53的效果)以便控制对特定病毒蛋白观察到的特应性效果。这些化合物的选择性还在表达p53和pRB主要负抑制剂的细胞系中确认，所述p53和pRB不是衍生自病毒元件。这个细胞系表达(i)破坏内源p53四聚体化的p53截短形式(p53DD)，(ii)抗pl6皿"和pl5INK4B(CDK4的主要负调节物)抑制的CDK4^e突变体和(iii)细胞周期蛋白Dl。在这些细胞中在多种浓度范围内检测九种基因型选择性化合物的效果，所述细胞是指BJ-TERT/p53DD/CDK4R24C/Dl/ST/RAS^2细胞(表1)。结果显示在这些细胞中检测时，所有的化合物都存在活性总体适度减少。但是，这些细胞系中利用非病毒蛋白质分析的总体结果没有改变(表l)。实施例2测定化合物选择性的遗传基础申请人设法检测了每种化合物选择性的遗传基础。简而言之，对每种化合物，尝试确定导致细胞对化合物敏感的基因或者基因的组合(表l)。结果显示这九种化合物可以分为3组，即(i)显示无简单的遗传选择性的化合物，(ii)对带有TERT和非活性RB的细胞显示选择性的化合物，和(iii)为显示致死性需要致癌RAS和ST的存在的化合物。组(i)中的化合物，桑吉瓦霉素，波凡霉素，NSC146109和棘霉素，致瘤细胞选择性没有明确的遗传基础。，例如，当各遗传元件导入时棘霉素活性有些升高(图3a)。申请人己经注意到当这些遗传元件均导入时，细胞增殖率增加。因此，很可能组(i)中的化合物只对快速分裂的细胞有选择性。支持这种解释的事实是，所有这些化合物据报道通过抑制DNA或者蛋白质合成起作用，其在快速分裂的细胞中需求更大。例如，据报道棘霉素的作用是作为DNA双插入剂(VanDyke禾卩Dervan，1984,Science225,1122-7;Waring禾口Wakelin，1974，Nature252,653-7)，波凡霉素作为蛋白质合成抑制剂(Zalacain等人，1982，FEBSLett148,95-7)，桑吉瓦霉素是核苷酸类似物(Rao，1968,JMedChem11，939-41)，NSC146109在结构上类似于DNA插入剂(图2)。应当注意到已经报道桑吉瓦霉素作为PKC抑制剂(LoomisandBell,1988,JBiolChem263，1682-92)，尽管这种活性似乎大不可能是与这点相关的，因为其他PKC抑制剂在这个系统中显示无选择性。申请人能鉴定出只是在快速分裂的细胞中活性更高的化合物，例如组(i)中的化合物，因为它们没有显示明确的选择性遗传基础。对这些化合物没有进行进一步的工作。因此，他们可以集中于显示选择性的组(ii)和(iii)中化合物的机理研究。组(ii)中的化合物，米托蒽醌，阿霉素和柔红霉素，是拓扑异构酶II毒素，它们结合拓扑异构酶II和DNA并预防拓扑异构酶II引起的双链DNA断裂的重新连接。这些化合物和蒽环类抗生素，已经有报道在一些细胞类型中诱导活性氧的形成(ROS)(Laurent和Jaffrezou，2001，Blood98，913-24;Muller等人，1998,IntJMolMed14914;Richard等人，2002，LeukRes26,927-31)，尽管申请人在这三种化合物存在的条件下在这些工程化细胞中没有观察到ROS的形成。他们发现当hTERT被导入并且当RB通过导入LT或者HPVE7被灭活时，这些化合物活力更高(在更低浓度下也有活性)。在细胞中，E7在E6之后导入，所以这些化合物在带有E7的细胞中增加的效力可能还依赖于E6的存在，即使E6自身不导致这些化合物效力的增加。hTERT的导入和RB的失活引起引起拓扑异构酶IIa表达的增加(图5a)，拓扑异构酶lla表达的只是非常有限的增^。致癌RAS的导入引起拓扑异构酶IIa表达的进一步增加，尽管申请人没有观察到在致癌RAS存在的情况下对于拓扑异构酶Ila毒素进一步的致敏化。组(iii)的化合物是喜树碱(CPT)和来自组合文库的新化合物，申请人:已经将其命名为erastin，因为它是表达RAS和ST的细胞的去除剂(兰radicatorofRASandgl-expressingcells)(图2)。有效的CPT诱导和erastin诱导的细胞死亡需要ST和RASV12的存在(图3、4和表1)。尽管CPT和erastin具有相同的选择性遗传基础，它们的作用机理不同。CPT在缺乏RB功能(通过E7的表达)的细胞中是部分活化的，而erastin不是，并且CPT需要两天引起BJ-TERT/LT/ST/RASV12中死亡，而erastin在18小时内是100%有效的(图3禾n4)。磷酸酶抑制剂冈田酸能够使在其他情况下是具有抗性的BJ原代细胞对CPT敏化(图5E)，可能因为冈田酸上调TOPI(图5F)。冈田酸不会导致BJ或者BJ-TERT细胞对erastin敏感，与CPT和erastin通过不同的机理作用模型一致。此外，申请人发现致死的化合物足叶草毒素，一种微管蛋白抑制剂，不使BJ或者BJ-TERT细胞对CPT敏感，证实冈田酸导致的BJ细胞对CPT的致敏性是特异的，不是两种具有累加但功能上不相干的效果的微弱细胞死亡刺激的结果。为理解表达RASV^和ST的细胞对CPT敏感性增加的分子基础，申请人:检测了工程化细胞中拓扑异构酶I的表达水平，拓扑异构酶I是公认的CPT耙标(Andoh等人,1987,ProcNatlAcadSdUSA84,5565-9;Bjornsti等人，1989，CancerRes49，6318-23;Champoux,2000，AnnNYAcadSd922,56-64;D'Arpa等人，1990,CancerRes50，6919-24;Eng等人，1988，MolPharmacol34，755-60;Hsiang等人，1989，CancerRes49，5077-82;Hsiang和Liu，1988，CancerRes48，1722-6;Liu等人，2000，AnnNYAcadSd922，1-10;Madden禾口Champoux，1992，CancerRes52，525-32;Tsao等人，1993,CancerRes53，5908-14)。他们发现表达RASV12和ST的细胞上调TOPI(图5B)。因为CPT在其他细胞类型中作用的公认作用机理涉及功能的获得，即以TOPl依赖的方式导入双链DNA断裂(Liu等人，2000,AnnNYAcadSci922,1-10)，TOPI的上调可以解释表达RASvl2fnST细胞对CPT敏感性的增加。为支持这些解释，他们发现在BJ-TERT/LT/ST/RASV"细胞中用小干扰RNA(siRNA)导致的TOPI遗传失活引起对CPT的部分抗性(图5C，D)。此外申请人检测了其他erastin类似物在肿瘤细胞相对正常细胞中的活性和选择性。另一个类似化合物被确定为有活性和选择性，但活性比erastin低。这个化合物被命名为erastinB(参见图8)。BJELR细胞是BJ-TERT/LT/ST/RAS^2细胞，BJEH细胞是BJ-TERT细胞。在BJELR和BJEH细胞中进一步的化合物检测如下实施例3细胞死亡的表征鉴定申请人设法鉴定了在致瘤BJ-TERT/LT/ST/RAS^2细胞中CPT和erastin诱导的细胞死亡类型。在其他文献中，已经发现CPT诱导凋亡性细胞死亡(Traganos等人，1996,AnnNYAcadSci803,101-10)，其特点在于核形态学的改变包括固縮，核破裂和/或染色质的着边(Majno和Joris,1995，AmJPathol146,3-15)。为检测erastin或者CPT在其系统中是否诱导凋亡，申请人使用荧光显微术监控接受CPT和erastin处理的致瘤细胞的核形态学。尽管在CPT处理的细胞中可显见核破裂和染色质的着边，在erastin处理的细胞中未见这种形态学改变(图7A)。因为核形态变异是凋亡细胞所需的，申请人得出结论erastin诱导的细胞死亡是非细胞凋亡的。进一步支持该结论的是观察到CPT，而不是erastin，诱导DNA断裂(形成DNA条带)，泛caspase抑制剂(50nMBoc-Asp(Ome)-氟甲基酮，Sigma#B2682(Chan等人，2001，Neuroreport12，541-545))，部分阻断CPT而不是erastin诱导的细胞死亡，并且CPT而不是erastin引起AnnexinV染色的增加(图7B)和切割、活化的caspase3的出现(图7C)。此外，在erastin处理的肿瘤细胞中核保持完整(图9)。Erastin在表达ST和RASV12细胞中诱导非凋亡细胞死亡的能力是选择性的。Erastin更长时间的处理和更高的浓度对缺乏RASV"或者ST的细胞活性影响很小，这证实erastin选择性的定性性质(图6A，C)。因为erastin处理的细胞不经历凋亡，申请人设法证实erastin确实诱导细胞死亡，而不是细胞脱离。他们使用检测胞内还原电势的染料AlamarBlue在erastin存在的条件下定量测定细胞活力(Ahmed等人，1994，J.Immunol.Methods170,211-224)。在同质AlamarBlue活力试验中，相对于BJ-TERT细胞Erastin在致瘤BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞中显示选择性致死性(图6B)。用erastin处理18小时的BJ-TERT/LT/ST/RAS^细胞变圆和脱离(图6C)，不能排除活体染料台盼蓝，在电势测定染料JC-1检测中显示线粒体膜电势的损失，具有死细胞特征的小细胞尺寸。申请人检测到，erastin诱导的活力损失一旦完成就是不可逆的，因为用erastin处理24小时的BJ-TERT/LT/ST/RASV^细胞变圆、脱离，当重新放到不含erastin的介质上不能恢复。因此，erastin以ST和RASV12依赖方式诱导快速(12-24小时)、不可逆的、非凋亡细胞死亡。此外进行研究以证明erastin诱导活性氧的形成(参见图IO)。进行筛选寻找emstin活性的遏制剂(抑制剂)。鉴定出四种抑制erastin活性的抗氧化剂，其中之一是抗氧化剂，a-生育酚。下列方法和材料用于此处描述的实施例。构建体和逆转录病毒hTERT，LT，ST，SV40早期区域和HRASV12的表达构建体按先前所述使用(Harm等人，1999，前文；Hahn等人，2002，前文)。hTERT-pWZL-Blaste,E6-pWZL-zeoe和E6E7-pWZL-Zeoe先前已有描述(Lessnick等人，2002，前文)。E6禾卩LTcDNAs克隆入pWZL-Hygroe逆转录病毒载体(J.Morgenstern，MilleniumPharmaceuticals惠贝曾)。制备泡状口腔炎病毒-G糖蛋白假模标本逆转录病毒，感染按前述方法进行(Lessnick等人，2002,前文)。细胞系TIP5原代成纤维细胞(Lessnick等人，2002，前文)从丢弃的新生包皮制备，用hTERT-pWZL-blaste或者hTERT-pBabe-hygro逆转录病毒感染使细胞永生化，分别用杀稻瘟菌素或潮霉素筛选。BJ细胞由JimSmith惠赠。hTERT-永生化成纤维细胞用指定逆转录病毒感染，选择合适标记物。所有的BJ衍生物在添加15%灭活胎牛血清、青霉素和链霉素(pen/strep)的DMEM和M199的1:1混合物中培养。TIP5细胞在包含10%FBS和pen/strep的DMEM中生长。所有细胞培养物在37。C包含5。/。C02的湿润温箱中孵育。化合物文库包括1,540种化合物的标注化合物文库(ACL)，从国家癌症学会获得的1，990种化合物的NCI多样性组和包含20，000种化合物的组合文库(ComgenexInternational,Inc.)用于肿瘤选择性的合成致死筛选。所有化合物文库在384孔聚丙烯板中制备为溶解在DMSO中的4mg/ml溶液(歹!j3—22)，.20。C保存。喜树碱(cat#—C9911，MW348.4)，阿霉素(cat#—D1515MW580.0)，柔红霉素(cat#—D8809,MW564.0)，米托蒽醌(cat弁—M6545,MW517.4)，冈田酸(cat#—04511，MW805.0)，棘霉素(cat弁—E4392,MW1101)，桑吉瓦霉素(cat弁一S5895，MW309.3)获自Sigma-AldrichCo。波凡霉素(MW772.84)和NSC146109(MW280.39)获自国家癌症学会发展治疗项目。Erastin(MW545.07)获自ComgenexInternational,Inc。钙黄绿素AM活力试验钙黄绿素乙酰甲酯(AM)是细胞膜可渗透、非荧光的化合物，它被胞内酯酶切割形成阴离子、细胞不可渗透的、荧光化合物钙黄绿素。活细胞被钙黄绿素染色，因为胞内酯酶的存在并且因为完整的质膜阻止荧光钙黄绿素渗出细胞(Wang等人，1993，前文)。细胞使用ZymarkScicloneALH接种在384孔板，初筛时用各种化合物4ug/mL—式三份处理两天，在PackardMinitrak的384孔清洗机上用磷酸盐缓冲液洗涤，与0.7Pg/mL钙黄绿素(MolecularProbes)孵育四小时。在PackardFusion板计数器记录各孔的总荧光强度，通过扣除仪器本底和除以细胞不用任何化合物处理时得到的平均信号，将其转变为信号的抑制率。AlamarBlue活力i式验AlamarBlue被活细胞中线粒体酶的活性还原，引起比色和荧光变化(Nociari等人，1998，J.IImnmnol.MMethods，13，157-167)。使用注射式大量分注器(Zymark)将细胞以每孔6000个细胞的密度(50yl)接种于384孔黑色、透明底板。使用384固定套管头从两倍系列稀释的erastin板(6X最终浓度)取出10ul，使最高浓度孔中的最终浓度达到20ug/ml。板孵育24小时。AlamarBlue(BiosourceInternational)1:10稀释后加入各孔，在37。C孵育16小时。使用激发滤片集中在535nm和发射滤片集中在590nm的PackardFusion板计数器来检测荧光强度。计算各浓度的平均抑制率。误差条表明一个标准差。AlamarBlue试验不涉及洗涤细胞。筛选影印子板用ZymarkScicloneALH制备，通过用不含血清和pen/strep的培养基稀释母板50倍来整合TwisterII，以获得子板中具有2%DMSO的80ng/ml的化合物浓度。使用注射式大量分注器将细胞接种于黑色、透明底384孔板的1-23列(每孔6000个细胞，57ul)制备检测板。3-22列用来自文库子板的化合物处理，通过使用384位置固定的管阵从文库子板转移3y1。试验板中最终化合物浓度因此是4ug/ml。试验板在37°C包含5%C02的湿润温箱中孵育48小时。使用来自PackardBioscience(PerkinElmer)的整合Minitrak/Sidetrak机器人系统进行板处理步骤用于分析钙黄绿素AM活力。试验板用磷酸盐缓冲液洗涤，每孔添加20yl钙黄绿素AM(0.7ixg/ml)。板在室温孵育4小时。使用集中在535nm的激发滤片和集中在590nm的发射滤片的PackardFusion板计数器来检测荧光强度。化合物在系列稀释中的重复试验重复试验的化合物从厂商处购买。储备物在384孔聚丙烯板中以1mg/ml浓度溶于DMSO中制备，各化合物在每列中具有16点、两倍稀释剂量曲线，一式两份。列1-2和23-24留为空白作为对照。通过在384孔deep-deep孔板中用DMEM稀释66.6倍(4.5u1转移到300ti1中)，用储存的重复试验板制备重复试验子板。细胞以每孔40P16000个细胞的密度种植，20nl从重复试验子板添加。板在37'C5%C02下孵育两天。数据分析未处理细胞的平均RFU(相对荧光单位)通过平均列1、2和23(有细胞但无化合物的孔)的值来计算。钙黄绿素背景通过平均列24(有钙黄绿素但无细胞的孔)的值来计算。每孔的抑制率按[l-(RFU-钙黄绿素对照)/(未处理细胞-钙黄绿素对照)X100]计算。通过在BJ原代和BJ-TERT/LT/ST/RASV^细胞中一定浓度范围内的检测，确定在初筛中造成钙黄绿素染色至少50%抑制的化合物对BJ-TERT/LT/ST/RASV12工程化肿瘤细胞的选择性。选择性化合物在所有工程化细胞系中重复试验。核形态学试验在六孔板的每孔中的玻璃盖玻片上接种2mL200,000个致瘤BJ-TERT/LT/ST/RASV'2细胞，分别在生长培养基中用空白(NT)，9nMerastin或者1.1uM喜树碱(CPT)处理18小时，在37°C5%C02下孵育。核用25ug/mLHoechst33342(MolecularProbes)染色，在荧光显微镜上用油镜IOOX物镜观察。细胞大小测量200,000个BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞种于六孔板，只有2mL生长培养基(无处理)，具有9liMerastin或者具有1.1nM喜树碱(CPT)。24小时后，细胞用胰蛋白酶/EDTA消化释放，在生长培养基中稀释到10mL，在库尔特计数器上检测各样品的细胞大小分布。喜树碱活性的细胞计数试验BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞种于6孔板(200000细胞/孔；每孔2ml)，利用Oligofectamine(LifeTechnologies)在无血清和无抗生素的培养基中转染，每孔100nMsiRNA，总体积lml。500y1包含30%FBS的培养基在转染后4小时添加。转染后细胞用指定浓度的喜树碱处理30小时。500nl所需喜树碱浓度的5X溶液被添加到各孔。转染75小时后用胰蛋白酶-EDTA消化细胞，血球计数器计数。对照实验表明转染效率大约是10%。WesternBlot分析C3spase-3实验前在60mm皿中种入5X105BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞。细胞用5ug/mlerasthi(9l4M)处理2、4、6、8或者10小时。一个皿用喜树碱处理(0.4ug/ml24小时)作为阳性对照。在每个时间点后细胞在裂解缓冲液(50mMHEPESKOHpH7.4，40nMNaCl，2mMEDTA，0.5%TritonX-100，l,5mMNa3V04，50mMNaF，10mM焦磷酸钠，lOmMbeta-甘油磷酸钠和蛋白酶抑制片(Roche))中裂解。用Biorad蛋白检测试剂定量蛋白质含量。等量蛋白于16。/。SDS-聚丙烯酰胺凝胶上分离。电泳迁移的蛋白转移到PVDF膜上，用5%牛奶封闭，与1:1500稀释的抗活化caspase-3的多克隆的抗体在4。C孵育过夜。然后膜与1:3000稀释的抗兔HRP(SantaCruzBiotechnology)孵育1小时，再用增强化学发光混合物(NENlifescience,Renaissance)显色。为检测每条泳道等量上样，斑点被切成条，封闭，用1:1000稀释的抗elF-4E抗体(BDTransductionlaboratories)检测。拓扑异构酶-IIaBJ，BJ-TERT，BJ-TERT/LT/ST，BJ-TERT/LT/ST/RASVI2，BJ-TERT/LT/RASV"禾口BJ-TERT/LT/RASV12/ST细胞种入60mm皿，每皿1X1(^个细胞。在37'C5。/。C02孵育过夜后，细胞按上述方法裂解，蛋白于10%聚丙烯酰胺凝胶上分离。膜与1:1000稀释的抗人拓扑异构酶IIap170抗体(TopoGEN)在4'C孵育过夜，然后和抗小鼠HRP(SantaCruzBiotechnology)孵育。拓扑异构酶1(TOPI)一个针对TOPI的21核苷酸双链siRNA(核苷酸2233-2255，从起始密码子计数，Genbank登录号J03250)被合成(Dharmacon，纯化和脱盐/脱保护)，在六孔板中用oligofectamine(LifeTechnologies)转染(100nM)BJ-TERT/LT/ST/RAS^2细胞。75小时后，细胞被裂解，通过Westernblot检测TOPI的表达水平(Topogen，Cat#_2012-2，1:1000稀释)。通过切条和用抗eIF的抗体(BDBiosciences,Cat#—610270，1:500稀释)重新测定相同斑点，对蛋白上样水平进行检测。此外，1乂106细胞种于60mm皿，在37°C5%C02条件下生长过夜，然后在150U1裂解缓冲液中裂解。细胞用刮刀刮下，转移到微量离心管，在冰上孵育30分钟。用Biorad蛋白检测试剂定量裂解物中的蛋白质含量。等量蛋白上样于10%梯度SDS-聚丙烯酰胺凝胶。电泳迁移蛋白转移到PVDF膜上。用5%奶粉封闭后，膜与小鼠抗人拓扑异构酶I抗体(Pharmingen)在4'C孵育过夜，然后与抗小鼠过氧化物酶偶联抗体(SantaCruzBiotechnology)醉育。AnnexinV-FITC凋亡试验每个100mm皿中种入1X1()6个BJ-TERT/LT/ST/RAS^2细胞，生长过夜。细胞用erastin(5或者10ng/ml)处理6、8或者11小时。保持喜树碱处理(0.4yg/ml)，在接种时处理20小时。处理后，细胞用胰蛋白酶/EDTA收获，并用包含血清的新鲜培养基洗涤一次，然后用磷酸盐缓冲液洗涤两次。细胞用1X结合缓冲液(BDPharmingen)重新悬浮，浓度是lXl()S细胞/ml。在室温避光条件下100"(1X1()S个细胞)与5ulAnnexinV-FITC(BDPharmingen)和碘化丙啶孵育15分钟。然后加入400yl1X结合缓冲液，通过流式细胞仪(BectonDickinson)分析细胞。使用Cellquest软件获得和分析数据。使用FL1通道只分析活细胞的AnnexinV-FITC染色，所述活细胞不被碘化丙啶染色的。ROS分析利用H2DCF-DA的流式细胞分析2'，7'-双氯双氢荧光素双醋酸酯(H2DCF-DA)是非荧光细胞可渗透化合物。细胞内的内源酯酶切割双醋酸酯部分，它不再渗出细胞。因此它在细胞内积累。然后H2DCF与ROS反应形成荧光二氯荧光素(DCF)，这可以用流式细胞仪在FL1通道检测。1.每个60mm皿中种入3X10S个细胞，生长过夜。2.用待测化合物处理不同时间(1-10小时)。3.每个时间点分别维持一个未处理细胞，化合物处理细胞和阳性对照(过氧化氢处理)的皿。4.在37。C细胞与10yMH2DCF-DA孵育10分钟。5.对阳性对照细胞，在加入H2DCF-DA5分钟后，添加500pM过氧化氢，再孵育5分钟。6.胰酶消化收获细胞。7.用冷的PBS洗涤两次。8.在100ulPBS中重悬沉淀，转移到5mlFACS管。9.添力卩5tM碘化丙锭(50ug/ml)，在避光条件下冰浴10分钟。10.添力口400MPBS，通过流式细胞仪(Becton-Dickinson)分析。11.使用Cellquest软件程序获得和分析数据。12.只选取碘化丙啶阴性细胞(活细胞)进行DCF染色分析，使用FL1通道，PI在FL3通道，作象限图。筛选ACL文库中能够抑制BJELR细胞中erastin活性的化合物方法包括1，540种化合物的ACL文库和所有的化合物在384孔聚丙烯板中制备为溶解在DMSO中的4ug/ml溶液，-20^保存。使用ZymarkSciloneALH制备每个文库的影印子板。子板用DMEM稀释50倍，子板中的化合物浓度是80iig/ml，具有2%DMSO中。在试验板中来自子板的化合物用细胞悬液稀释20倍，因此各化合物的最终浓度是g/ml。BJELR细胞以6000细胞/孔(57p1)(用于共处理筛选)和5000细胞/L(57ul)(用于预处理筛选)用注射式大量分注器种于384孔黑色、透明底板。对共处理抑制物筛选，细胞用3ul来自ACL文库的子板的化合物处理(试验板中最终浓度在4ug/ml)，同时用5ug/mlerastin处理。使用384固定管头进行化合物转移。板在37°C5%C02温箱中孵育48小时。对预处理筛选，细胞用来自ACL文库子板的化合物预孵育过夜，然后用5pg/mlerastin再处理48小时。使用PackardBioscience的MiniTrak/SideTrak机器人系统对板进行l丐黄绿素试验。试验板用PBS洗涤，在室温下与钙黄绿素AM(0.7ug/ml)孵育4小时。使用集中在485nm的激发滤片和集中在535nm的发射滤片以Fusion板计数器来检测荧光强度。BJELR细胞是BJ-TERT/LT/ST/RASVu细胞。表1显示工程化细胞系中肿瘤选择性的化合物的效力。九种肿瘤选择性化合物在全部工程化细胞系种进行16点、两倍稀释剂量曲线的重复试验。表列出在各细胞系中各化合物达到钙黄绿素AM染色50%抑制(IQo)的浓度(Ug/mL)。在原代BJ细胞中的ICso除以BJ-TERT/LT/ST/RASV12致瘤细胞中的IC5Q得到各化合物的肿瘤选择比。通过计算系列中每个随后细胞系的对的选择比来检定化合物对各遗传元件的选择性。小T癌蛋白-选择性化合物被认为是对PP2A(小T癌蛋白的耙标)有选择性，而E6-选择性化合物被认为是对p53缺失有选择性，E7-选择性化合物被认为是对RB的缺失有选择性。<table>tableseeoriginaldocumentpage131</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage131</column></row><table>表2显示肿瘤选择性化合物在工程化细胞系中的效力。表列出各细胞系中各化合物对钙黄绿素染色的抑制(阴性％值)或者增强(阳性％值)(ic50)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage133</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage134</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage135</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage136</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage137</column></row><table><image>imageseeoriginaldocumentpage138</image><formula>formulaseeoriginaldocumentpage139</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage140</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage141</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage142</column></row><table><image>imageseeoriginaldocumentpage143</image><formula>formulaseeoriginaldocumentpage144</formula>-27%-1%-33%-10%-23%-5%-24%-2%-20%-9%200680009733.5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage146</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage147</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage148</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage149</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage150</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage151</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage152</column></row><table><image>imageseeoriginaldocumentpage153</image><table>tableseeoriginaldocumentpage154</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage155</formula>实施例4Erastin结合伴侶的鉴定和表征最初用Pull-down试验鉴定细胞内的erastin结合伴侣，所述Pull-down试验使用固定的erastin和细胞裂解产物。最初的pull-down实验用HEK293、BJEH和BJELR全细胞裂解产物进行。在这些实验中，erastin的甲氨基衍生物(ERA-A6)被固定到Affigel10,在标准pull-down条件下与裂解产物孵育。洗涤珠子，然后用lOOuMemstin或者0.8。/。十二烷酰肌氨酸(sarkosyl)洗脱。洗脱液用于质谱分析。Erastinpull-down试验结果的分析发现在HEK293或者BJEH和BJELR裂解产物第一轮pull-down试验中鉴定到线fe体或者内质网膜蛋白的出现频率较高。这表明膜孔可能是erastin或者其类似物的靶标。但是，这些结果不排除以下可能性，即erastin可能还有在这轮pull-down实验中未被鉴定的其他和/或不同的靶标。在pull-down试验中用erastin或者erastin类似物反复观察几个蛋白。这些蛋白，包括VDAC1、VDAC2、VDAC3、Prohibitin、核糖体结合糖蛋白、Sec61a和Sec22b，假设它们是erastin的靶标。因为全细胞裂解产物混合物仍然是相当复杂的，那些蛋白只在pull-down实验的sarkosyl洗脱液中检测到。这潜在地增加了质谱分析的复杂性。因此，为简化混合物，使用不同的分离方法分离或者预浓縮在全细胞裂解产物pull-down实验中鉴定的一些蛋白。因为Prohibitin和VDAC同工型都是线粒体蛋白，申请人通过从细胞裂解产物分离线粒体来富集潜在的erastin靶标。分离的线粒体提取物然后用于erastinpull-down实验。在那些利用线粒体提取物的erastinpull-down实验中，Prohibitin、VDAC和核糖体结合糖蛋白还通过Westernblot鉴定。图14显示pull-down的Westernblot，其中线粒体提取物接触固定于珠上的活性(A6)和非活性的(Bl)erastin衍生物。Pull-down实验用线粒体提取物为0.25mg总蛋白进行。珠子在4'C与提取物孵育1.5小时，然后洗涤几遍。与固定的emstin衍生物结合的蛋白用50ixL0.8。/。十二烷酰肌氨酸溶液洗脱。Westernblot鉴定蛋白，所述westernblot使用抗-核糖体结合糖蛋白、-Sec6、-Prohibitin和抗-VDAC抗体的混合。蛋白还通过质谱分析鉴定。核糖体结合糖蛋白和Prohibitin是酸性蛋白，计算的PI值分别是5.57(Prohibitin)和5.96(核糖体结合糖蛋白I)。申请人利用MonoQ柱在pH6.8条件下通过离子交换色谱法把这两个蛋白与碱性更强的蛋白(VDAC同工型，Sec22和Sec61a)分离。然后使用抗体检测这些级分中Prohibitin或者核糖体结合糖蛋白含i。还检测这些级分它们与包含固定的ERA-A6和ERA-B1化合物的BIACORE表面的结合。在BIACORETM实验中显示结合的级份中发现了Prohibitin和核糖体结合糖蛋白。有趣地是，观察到一种未知的45kDa蛋白在银染SDS-PAGE凝胶中与ERA-A6或者ERA-B1珠子结合，所述未知蛋白不与任何使用的抗体反应。为证实这些发现，从MonoQ洗脱液级份对ERA-A6和ERA-B1进行pull-down实验。Prohibitin和核糖体结合糖蛋白再次被确定为结合来自几种级份的Erastin珠。这些实验清楚地支持以下观点，即VDAC同工型和Prohibitin及核糖体结合糖蛋白结合erastin和erastin类似物。因此这些蛋白在体内都是erastin的潜在靶标/结合伴侣。实施例5不同VDAC同工型的表达水平当利用BJELR裂解产物进行pull-down时，与来自BJEH细胞的裂解产物比较，erastin的ERA-A6类似物的成功的pull-down始终产生更高的VDAC3基于质谱的鉴定值。考虑可比较的总蛋白量时，VDAC同工型的值越高，与之一致的是这些同工型在BJELR裂解产物相对于BJEH裂解产物中的丰度更高。靶标蛋白的不同的水平可能影响Erastin的选择性。为说明这点，申请人使用定量PCR(Q-PCR)检测了不同VDAC同工型的相对表达水平。其他可用的方法包括Westernblot和质谱分析法。进行定量PCR(Q-PCR)实验检测"正常"BJEH细胞系和致瘤BJELR系中不同基因mRNA的相对量(作为基因表达的代替品标记物)。对各VDAC同工型(VDACl，2禾卩3)，mRNA的两个区域被用于扩增。这些区域分别称为1和1-2，2-1和2-2，以及3-1和3-2。各个感兴趣基因的mRNA片段扩增的Q-PCR信号与一系列内参比较，相对于靶细胞中GAPDHmRNA衍生的信号按比例绘图。图11中所示结果表明，BJELR细胞中VDAC3的表达相对于BJEH细胞中显著地升高。这个发现与其他几个基因观察的结果相反，在BJELR细胞中相对于BJEH细胞观察到所述基因被抑制。使用图11中相同的Q-PCR数据作出图12，但是图12重点在于靶细胞中VDAC同工型的相对表达水平。各扩增mRNA片段的Q-PCR信号与一系列内参比较，表示为相对于靶细胞中VDAC1mRNA的信号，这被定义为100%。如图11所示，各VDAC同工型(VDAC1,2和3)mRNA的两个扩增区域，分别称为1，1-2，2-1，2-2，3-i和3-2。结果表明BJELR细胞中VDAC3的表达比在BJEH细胞中的高2-2.5倍。综上，这些发现提示解释BJELR细胞对erastin处理不同敏感性的一种可能机理。实施例6Erastin对不同VDAC同工型的功能评价功能试验帮助确认鉴定的蛋白为erastin的功能靶标。在某些实施方案中，分离的线粒体可以用于判断erastin对线粒体功能是否具有作用或者表型效果。例如，表型效果可以通过显微镜观察，当检测线粒体膜电位变化时，或者通过使用某些染料观察erastin处理后活性氧的释放，这在本领域已知是用于检测活性氧(ROS)。在某些其他实施例中，确认实验可以包括用叠氮基-erastin衍生物，或者erastin类似物或者偶联到二齿螯合物亲和标记交联剂(例如SBED)或者可切割的交联剂的衍生物来光亲和标记靶标蛋白。仍在其他实施方案中，重组和过表达的蛋白可以用于某些体外试验，用于评定erastin对其功能具有的任意可能的效果。这种体外试验可以包括，但不限于直接结合(体外或者BIACORETm)，或者是可以检测VDAC同工型通道性质的外排试验。仍在其他实施方案中，可以使用那些靶标蛋白的敲除突变株(细胞或者生物体)。与野生型比较，这些突变株可以变成对erastin有抗性的或者超敏的。那些敲除细胞系也可以用于高通量筛选(HTS)以检测和/或评价erastin或者其类似物的特异性。仍在其他实施方案中，还可以用VDACs、Prohibitin和核糖体结合糖蛋白的RNAi实验来评定erastin处理后的任意表型(例如，erastin抗性或者超敏性)。根据本发明的这个实施方案，分别以VDAC1、VDAC2禾BVDAC3作为耙标的SMARTPOOLsiRNAs购自Dharmacon(Lafayette,CO)。然后优化转染条件，例如，在384孔板使用FUGENETM和oligofectamine和荧光标记的siRNA双链体。这种程序导致卯。/o的转染效率。然后ELR肿瘤细胞可以用抗VDAC1、VDAC2或者VDAC3的siRNAs转染，可以检测对erastin的剂量-反应。实施例7细胞生长的抑制检测化合物抑制BJELR和BJEH细胞生长的能力。化合物通过Sytox初筛进行分析，这是一种监控作为化合物处理结果的细胞幸存-增殖改变的表型试验。它设计为鉴定特异改变细胞生长潜力的化合物的高通量方法，所述细胞带有在癌症患者中发现的致病性的突变，而这种突变不影响正常细胞的生长。该试验依赖于一种便宜、简单和可靠的膜不可渗透的荧光染料(Sytox,来自MolecularProbes)的读数，所述荧光染料结合核酸。在健康细胞中，没有检测到信号，因为细胞膜是完整的，染料不会进入。但是，如果细胞膜是作为凋亡或者坏死的结果而受损，将检测到与受到类似影响细胞的数目成比例的荧光信号。利用两步读数(在去污剂存在条件下最终读数，以标记所有细胞)，该试验可以鉴定产生白细胞郁积、细胞毒性和/或致有丝分裂的化合物。第一次读数或者"死细胞"读数，通过显示试验时培养物中死亡或者濒死细胞的数目来评估给定化合物的毒性。第二次读数或者"总细胞"读数，获得细胞毒性在减小细胞群大小方面的累积效应，以及无毒性时待测化合物对待测细胞群的任意细胞的抑制细胞或者抗增殖效果。为筛选目的，先前描述的BJ-TERT系称为"正常"参照细胞系，BJ-TERT/LT/ST/RAS^细胞是致瘤细胞系。细胞种于96孔板过夜，在未处理情况下种植密度允许在72小时后孔中95%融合。随后几天，细胞接受系列稀释的待测化合物处理48小时。在这段温育期后，按厂商推荐浓度添加Sytox试剂到培养物，读取死细胞荧光读数。在完成这些测量后，添加去污剂皂角苷到培养物各孔对膜进行透化处理，以允许Sytox试剂对进入每个细胞，从而便于测量留在培养物中细胞总数。实施例83-(2-乙氧苯基)-2-(哌嗪-l-基甲基)喹唑啉-4(3H)-酮(化合物5)的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage161</formula>步骤1:2"氯甲基)-4H-苯并「dl「l,31噁嗪-4-酮"七合物2)的制备化合物2方法1:在氮气中，邻氨基苯甲酸(化合物l，15.3g)溶于300mL二氯甲烷(CH2C12)。然后添加三乙胺(TEA,1.1当量)，在冰浴中冷却混合物。滴加氯乙酰氯(1.1当量)的二氯甲烷溶液(150mL)，加温到室温搅拌混合物两小时。(在添加后可以去除冰浴或者混合物可以加温到室温超过两个小时。)通过过滤分离固体，用冷水洗涤(2X)，然后是5%二乙醚(Et20)的己烷溶液洗涤，风干，得到化合物2的白色粉末固体(22.5g，定量收率)。最终产品的特征是LC/MSm/zMH+196.13;纯度>95°/。；1HNMR。方法2二甲基甲酰胺(DMF)用作反应溶剂10克邻氨基苯甲酸溶于300mLDMF。然后添加TEA(1.5当量)，在冰/水浴中冷却混合物。氯乙酰氯(1.3当量)的DMF溶液(100mL)被滴加到冷却的反应混合物中。去除冰/水浴，反应混合物搅拌2小时。反应混合物注入冰水(200-300mL)中，用乙酸乙酯(EtOAc，3X提取)提取。合并有机层，用水和盐水洗涤，用硫酸钠(Na2S04)干燥。浓縮产生固体，该固体与100mL10%Et20/己垸研磨，得到化合物2的白色粉末(12g;85%收率)。最终产品用LC/MS表征。步骤2:2-(氯甲基V3-(2-乙氧苯基)喹唑啉酮-4(3HV酮(化合物3)的制备方法1使用三氯膦(PC13):在氮气中，化合物2(8.8g)溶于440mL乙腈(CH3CN)，添加2-乙氧基苯胺(1.5当量)，搅拌。向这些充分搅拌的反应混合物中滴加PC13(2当量)。得到的浆料加热到50°C6-12小时。反应混合物注入饱和Na2C03/冰混合物中，搅拌30分钟，用EtOAc(3X300mL)提取。合并的有机层用(最少量的)水和盐水洗涤，用硫酸钠(Na2S04)干燥。浓縮溶液，粗的固体/油混合物与3%Et20/己垸(2X100mL)研磨，以除去未反应氨基苯乙醚中的绝大部分。获得的固体过滤分离，然后过硅胶柱(20%EtOAc/己垸)纯化。分离的化合物3为白色粉末(11g，75-80%)。最终产品的特征是LC/MSm/zMH+315;纯度〉98%。方法2使用磷酰三氯(P0C13):在氮气中，化合物2(1.2g;6.0mmol;1.0当量)和2-乙氧基苯胺(1.2mL;9.0mmo1，1.5当量)溶于30mLCH3CN。向该溶液滴加P0C13(l.lmL，12mmol，2.0当量)，混合物回流加热3小时。反应物冷却至室温，注入冰/饱和NaHC03桨料中，用EtOAc(3X200mL)提取。合并的有机层用水和盐水洗涤，用Na2S04干燥。用LC/MS对粗反应混合物进行分析，证实所需产物化合物3(97%)及少量副产物化合物3c(2-3%)的存在。LC/MS中MH+m/z(333/334/335)与化合物3c的二酰氨结构一致。通常在硅胶上色谱层析分离所需产物(如前步骤2的方法1中所述)，得到的化合物3为白色粉末(1.3g，80-85%收率)。步骤3:3-(2-乙氧苯基)-2-(哌嗪-l-基甲基)喹唑啉-4(3HV酮(化合物5)的制备方法l:在氮气中，化合物3(5g)溶于CH3CN(0.08-0.2M化合物浓度)，向其中依次加入碳酸钾(K2C03，1.2当量，商品化粉末)，哌嗪(2当量)和碘化四丁铵(0.2当量)。混合物在60°C(水浴温度)加热8-10小时。反应可以按下列两条路线中的任何一条进行(a)蒸发掉80%的溶剂，添加水(20mL)，用EtOAc(4X60mL)提取混合物；或者(b)反应混合物是用400mLEtOAc稀释，用水(3X20mL)洗涤。合并的有机层用盐水洗涤，浓縮成微黄色的油。在硅石(10-25%甲醇/二氯甲烷)上用中压色谱层析(CombiFlash⑧)纯化后获得的化合物5为白色粉末(80-85%收率)。产物的特征是1HNMR和LC/MSMH+365。步骤4:叔丁基4-(3-2-乙氧苯基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)甲基〗哌嗪-l-羧酸酯(化合物4)的制备化合物3化合物4方法1:在氮气中，化合物3(4.0g，12.7mmo1，1.0当量)溶于60mLCH3CN，向该固体样品溶液中依次加入K2C03(2.1g，15mmol，1.2当量)，叔丁氧羰基一哌嗪(4.73g，25mmol，2.0当量)和碘化钠(Nal，570mg，3mmo1，0.3当量)的固体样品。混合物(悬浮液)在8(TC加热3-6小时。获得白色悬浮液。利用TLC和LC/MS检测反应,显示化合物3完全转化为化合物4。减压条件下通过蒸馏去除大约30mLCH3CN，向获得的桨料中加入60mL水，用EtOAc(4X60mL)提取混合物。合并的有机层用水，氯化铵饱和溶液(去除未反应的叔丁氧羰基一哌嗪)，NaHC03饱和溶液和盐水洗涤，用Na2S04干燥。固体与己垸研磨，经过滤浓縮成为白色固体(5.6g，量产)。这种材料无需进一步纯化就可用于后续脱保护步骤。最终化合物的特征通过1HNMR，LCMS描述。步骤5:3-(7-乙氧苯基)-2-(哌嗪-基甲基〗喹唑啉-4f3HV酮(化合物5)的制备化合物4化合物5方法1:室温下化合物4(2.7g，5.8mmol，1.0当量)悬浮于15mL无水二噁垸中。室温下滴加4NHCl/二噁垸溶液(17mL，12当量)；反应30分钟后再添加17mL4NHCl/二噁烷，用LC/MS监控反应进展。(这是一种放热反应，观察到气体逸出。反应体系必须是开放的，以释放压力，同时保持无水条件。)如果残余任何量的未反应化合物4，可再添加8-10mL4NHCl/二噁烷以驱动反应完成。反应最后分别添加40mL水和CH2C12到反应物中，通过加入足量饱和含水Na2C03溶液调节混合物为碱性，达到pH8-9。层被分离，水层用CH2C12(3X60mL)提取。合并有机层，用水(4X10mL，直到水提取物的pH大约为中性)和盐水洗涤，在Na2S04中干燥。浓縮产生微黄色的油，该油在硅石(10-25%甲醇/二氯甲垸)上用中压色谱层析(CombiFlash)纯化，与包含5-10%二乙醚的己垸研磨后产生的化合物5为白色粉末(85-95%收率)。化合物5的特征通过1HNMR和LC/MS描述。常规分析方法下列LC条件用于分析化合物5:柱用于质谱的XTerra;CI8，3.5/xm尺寸2.1x150mm梯度75%CH3CN(包含0.08%甲酸)/25%水(包含0.1%甲酸)-90%CH3CN(包含0.08%甲酸)/10%水(包含0.1%甲酸)所有化合物用下列柱和移动相条件进行LC/MS分析:柱用于质谱的XTerra;C18,3.5/mi尺寸2.1xl50mm<table>tableseeoriginaldocumentpage167</column></row><table>实施例9Sytox初筛Sytox初筛是一种表型试验，监控作为化合物处理结果的细胞幸存-增殖的改变。它设计为鉴定特异改变细胞生长潜力的化合物的高通量方法，所述细胞带有在癌症患者中发现的致病性突变，而这种突变不影响正常细胞的生长。该试验依赖于一种膜不可渗透的荧光染料(Sytox，来自MolecularProbes)的便宜、简单和可靠的的读数，所述荧光染料结合核酸。在健康细胞中，没有检测到信号，因为细胞膜是完整的，染料不会进入。但是，如果细胞膜是作为凋亡或者坏死的结果而受损，将检测到与受到类似影响细胞的数目成比例的荧光信号。利用两步读数(在去污剂存在条件下最终读数，以标记所有细胞)，该试验可以鉴定产生白细胞郁积、细胞毒性和/或致有丝分裂的化合物。第一次读数或者"死细胞"读数，通过显示试验时培养物中死亡或者瀕死细胞的数目来评估给定化合物的毒性。第二次读数或者"总细胞"读数，获得细胞毒性减小细胞群大小的累积效应，以及无毒性时待测化合物对待测细胞群的任意细胞抑制或者抗增殖效果。为筛选目的，先前描述的BJ-TERT系称为"正常"参照细胞系，BJ-TERT/LT/ST/RASV12细胞是致瘤细胞系。细胞种于96孔板过夜，在未处理情况下种植密度允许在72小时后孔中95%融合。随后几天，细胞接受系列稀释的待测化合物处理48小时。在这段温育期后，按厂商推荐浓度添加Sytox试剂到'培养物，读取死细胞荧光读数。在完成这些测量后，添加去污剂皂角苷到培养物各孔对膜进行透化处理，以允许Sytox试剂对进入每个细胞，从而便于测量留在培养物中的细胞总数。为数据评定，我们不区分显示细胞毒或者抑制细胞效应的化合物。为用于其他检测，化合物必须满足两个严格的标准i.死细胞或者总细胞读数(或者两者)对肿瘤细胞系产生至少2标准差大小的信号变化ii.对"正常"对照细胞产生小于1标准差大小的信号变化。参见表3和4和图15-17对应于本发明化合物的体外数据。化合物编号IC50inBJELR(口M)<0.1006gl扁7^0.1008kl扁9Sl扁14^0.10015Sl扁10-kl細11^0.10016^0.100n^0.10012<0.10013<0.1001<table>tableseeoriginaldocumentpage170</column></row><table>C:PRLX化合物5@100mg/Kg，QDX5天，IP，n=8D:PRLX化合物5@50mg/Kg，QDX5天，IP，n=8E:媒介对照，QDX5天，IP,n=8F:未治疗对照，n二8治疗计划当平均肿瘤体积达到200mn^时开始，持续至第5天，每天给药每只动物单一IP注射上述治疗中的一种，总共5个剂量。、肿瘤移植和分期70只小鼠每只都移植1X107个HT-1080细胞，通过在右后肢侧面SC注射0.1cc接种物。使用25GX5/8针号。使用HT-1080细胞(ATCC分离，第6次传代冻存物)制备肿瘤细胞接种物，所述HT-1080细胞在DMEM[Gibco，No.l0569-010]+10%FCS[Gibco，No.F-2442]中培养。在细胞收获时，细胞生长到95-100%的融合度。HT-1080接种物在无菌的DMEM培养基+10。/。FCS中制备，密度1.0Xl()8细胞/inl。在肿瘤移植后+9天，动物分组匹配为治疗和对照组，每组由8只小鼠组成。总共22个非正常值从实验中剔除，因为肿瘤太小或者太大。这被认为是实验第1天，治疗从这天开始。注射液的制备下列注射液在化合物给药的5天期间每天新鲜制备100mg/kg剂量(组A和C)首先，通过在0.35ml溶剂(0.25。/oTween-80，0.1。/。苯甲醇和350mM乙酸)中溶解35mgPRLX化合物6或者PRLX化合物5来制备各化合物的储液。然后通过将各储液与3.15ml稀释剂(lOOmM磷酸钾缓冲液和32mM蔗糖，pH6.8)混合来1:10稀释得到的储液制备最终注射液。溶液然后过滤杀菌(0.45lim膜)。获得的溶液包含PRLX化合物6或者PRLX化合物5，终浓度10.0mg/ml，pH=6.5。50mg/kg齐U量(组B和D)对两种化合物，通过添加1.0ml稀释剂(100mM磷酸钾缓冲液和32mM蔗糖，pH6.8)，1:2稀释1.0ml的10mg/ml注射液(如上所述)。获得的溶液包含PRLX化合物6或者PRLX化合物5的终浓度为5.0mg/mlpH=6.5。媒介对照(组E)然后使用稀释剂(100mM磷酸钾缓冲载体对照和32mM蔗糖，pH6.8)1:10稀释溶剂(0.25%Tween-80，0.1%苯甲醇和350mM乙酸)来制备媒介对照。媒介对照的最终成分包含在100mM磷酸钾和32mM蔗糖中的0.025%Tween-80,0.01%苯甲醇和35mMHOAc,最终pH=6.8。剂量概述:<table>tableseeoriginaldocumentpage172</column></row><table>肿瘤测量从第1天开始，每隔一天称重全部动物，测量肿瘤尺寸(长度(L)和宽度(W))。使用下列公式将肿瘤测量结果转换为肿瘤体积(mm3):肿瘤体积-LXWXW/2。计算各时间点各实验组获得的肿瘤体积的平均值，对时间作图。差异表示为平均值标准差(土SEM)。图18-20显示这些实验的结果。实施例11PANC-1肿瘤治疗研究PRLX化合物6和PRLX化合物5的抗肿瘤活性评定PANC-1异种移植物制备和移植PANC-1研究的实验计划基本与上述实施例10中所列的HT-1080研究相同，除了以下区别大约30-40mgPANC-1传代肿瘤组织碎块皮下植入免疫缺陷裸鼠的右侧。每天监控肿瘤生长，当肿瘤达到大约100mm3时，带有相似大小肿瘤的动物被分组匹配，开始化合物剂量给药。按下面所列计量连续5天每天给药化合物5—次。在PANC-1异种移植物中，吉西他滨，以模型最大耐受剂量给药，用作对照。吉西他滨疗法是9天内每3天进行给药每天180mg/kg3次。图21-22显示这些实验的结果。引用参考此处提及的全部出版物和专利在此完整引入作为参考，就像各个独立出版物或者专利是特异和单独引入作为参考。在冲突情况下，将以本申请，包括此处的任何定义，为准。等同物当讨论本发明的特定实施方案时，上述说明书是说明性和非限制的。在获知该说明书和下列权利要求时本发明的许多变化对本领域技术人员来说是显而易见的。本发明的全部范围应该参考权利要求和等同物的全部范围以及说明书和这种变化来决定。权利要求1.一种在哺乳动物中治疗病症的方法，包括对哺乳动物给药治疗有效量的具有式I结构的化合物或者其药学可接受的盐，其中R1选自H、Z-Q-Z、-C1-8烷基-N(R2)(R4)、-C1-8烷基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基和C1-4芳烷基；每次出现的R2和R4均是独立选自H、C1-4烷基、C1-4芳烷基、芳基、杂芳基、酰基、烷基磺酰和芳基磺酰，如果R2和R4在相同氮原子上和不同时是氢时，它们是不同的，并且当R2和R4在相同氮上并且R2和R4之一是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰时，另一个选自H、C1-8烷基、芳基、C1-4芳烷基，和杂芳基；R3选自H、C1-4烷基、C1-4芳烷基、芳基和杂芳基；W选自和Q选自O和NR2；和每次出现的Z独立地选自C1-6烷基、C2-6烯基和C2-6炔基，其中病症的特点在于细胞具有增强的Ras信号活性和SV40小t抗原的细胞靶标蛋白改变的活性。2.根据权利要求l所述的方法，其中病症的特点还在于基本上野生型水平的Rb活性。3.根据权利要求1所述的方法，其中Ri选自Z-Q-Z、8垸基-N(R2)(R4)、-(^.8垸基-0113、芳基，杂芳基和cl4芳烷基。4.根据权利要求l所述的方法，其中芳基任选用选自Cl6院基，CF3，羟基，CL4垸氧基，芳基，芳氧基，卤素，NR2R4，硝基，羧酸，羧酸酯和磺酰基的基团取代。5.—种在哺乳动物中治疗病症的方法，包括对哺乳动物给药治疗有效量的具有式I结构的化合物或者其药学可接受的盐，R!选自H、Z-Q-Z、-<:1-8烷基-风!12)(114)、-d-s垸基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基和cl4芳烷基；每次出现的RZ和R"均是独立选自H、CM烷基、Cl4芳院基、芳基、杂芳基、酰基、垸基磺酰和芳基磺酰，如果W和W在相同氮原子上和不同时是氢时，它们是不同的，而当112和W在相同氮上并且112和^之一是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰，另一个选自H、d.s垸基、芳基、C"4芳垸基，和杂芳基；W选自H、Cm院基、C^芳烷基、芳基和杂芳基；其中:W选自R4;Q选自o禾nNR2;和每次出现的Z独立地选自d-6烷基、C2、6烯基和CV6炔基，其中病症的特点在于细胞具有增强的Ras信号活性和SV40小t抗原的细胞靶标蛋白改变的活性。6.根据权利要求5所述的方法，其中病症的特点还在于基本上野生型水平的Rb活性。7.根据权利要求5所述的方法，其中W选自Z-Q-Z、-Cw烷基-N(R2)(R4)、-d.s垸基-OR3、芳基，杂芳基和C^4芳烷基。8.根据权利要求7所述的方法，其中W选自Cr4芳烷基和酰基。9.根据权利要求8所述的方法，其中W是酰基。10.根据权利要求9所述的方法，其中R4是-C(0)-Q-3烷基-Y，Y选自H、烷基、烷氧基、芳氧基、芳基、杂芳基、杂芳氧基和环烷基。11.根据权利要求9所述的方法，其中R4是-C(0)-d-3烷基-Y，Y选自芳氧基、芳基、杂芳基、杂芳氧基和环烷基。12.根据权利要求9所述的方法，其中W是-C(0)-d-3烷基-Y，Y选自芳氧基和杂芳氧基。13.根据权利要求1-12中任一所述的方法，其中所述化合物在哺乳动物中通过非细胞凋亡机理杀伤细胞。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述细胞具有增强的Ras信号活性。15.根据权利要求13所述的方法，其中所述细胞过表达SV40小t抗原。16.根据权利要求13所述的方法，其中所述细胞具有实质降低的磷酸酶PP2A活性。17.根据权利要求13所述的方法，其中所述细胞过表达VDAC。18.根据权利要求1-12中任一所述的方法，其中所述病症是癌症。19.根据权利要求13所述的方法，其中所述细胞被诱导表达SV40小t抗原。20.根据权利要求19所述的方法，其中通过用过表达SV40小t抗原的病毒载体感染所述细胞，所述细胞被诱导表达SV40小t抗原。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述病毒载体是逆转录病毒载体或者腺病毒载体。22.根据权利要求1-12中任一所述的方法，还包括对所述哺乳动物联合给药一种通过细胞凋亡机理杀伤细胞的试剂。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述试剂是化疗剂。24.根据权利要求23所述的方法，其中所述化疗剂选自表皮生长因子受体拮抗剂、五硫化二砷、阿霉素、顺铂、卡铂、西咪替丁、洋红霉素、氮芥盐酸、五甲三聚氰酰胺、塞替派、替尼泊甙、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、去甲氧基竹红菌甲素A、左旋苯丙氨酸氮芥、异磷酰胺、曲磷胺、曲奥舒凡、足叶草毒素或者足叶草毒素衍生物、鬼臼乙叉甙磷酸盐、替尼泊甙、鬼臼乙叉甙、异长春碱、环氧长春碱、长春地辛、9-氨基喜树碱、camptomnotecan、克立那托、甲地孕酮、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、ecteinascidin743、白消安、亚硝脲氮芥(BCNU)、环己亚硝脲(CCNU)、洛弗斯特丁、l-甲基-4-苯基吡啶鐵离子、司莫司汀、十字孢碱、链脲霉素、酞菁、达卡巴嗪、氨基蝶呤、氨甲蝶呤、曲美沙特、硫鸟嘌呤、巯基嘌呤、氟达拉滨、pentastatin、2-氯脱氧腺苷、阿糖胞苷(araC)、甲基丝裂霉素、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、阿霉素氢氯化物、甲酰四氢叶酸、霉酚酸、柔红霉素、去铁敏、5-氟脱氧尿苷、去氧氟尿苷、雷替曲塞、伊达比星、表柔比星、吡柔比星、佐柔比星、米托蒽醌、争光霉素硫酸盐、放线菌素D、番红精、saframycins、quinocarcins、discodermolides、长春亲j碱、长春花碱、长春瑞滨酒石酸盐、vertoporfm、紫杉醇、他莫昔芬、雷洛昔芬、噻唑呋林、硫鸟嘌呤、病毒挫、EICAR、雌氮芥、雌氮芥磷酸钠、氟他米特、比卡鲁胺、布舍瑞林、亮丙瑞林、蝶啶、烯二炔、左旋四咪唑、aflacon、干扰素、白介素、阿地白介素、非格司亭、沙莫司亭、利妥昔单抗、卡介苗、维甲酸、倍他米松、吉西他滨氢氯化物、异搏定、VP-16、六甲密胺、t毒胡萝卜内酯、奥沙利铂、异丙铂、四铂、洛铂、DCP、PLD-147、JM118、JM216、JM335、沙钴、紫杉萜、脱氧紫杉醇、TL-139、5'-降-脱水长春碱(下文中5'降长春花碱)、喜树碱、依立替康(Camptosar，CPT-ll)、托泊替康(Hycamptin)、BAY38-3441、9-硝基喜树碱(Orethedn、卢比替康)、依沙替康(DX-8951)、勒托替康(GI-147211C)、gimatecan、homocamptothecinsdiflomotecan(BN-80915)禾口9-氨基喜树碱(IDEC-13')、SN-38、ST1481、karanitecin(BNP1350)、氮茚并咔唑(例如NB-506)、原小蘖碱、茚托利辛、idenoisoquinolo跳苯并吩嗪和NB-506。25.—种杀伤细胞，促进细胞死亡或者抑制细胞增殖的方法，包括对细胞给药(1)有效量的具有式I结构的化合物或者其药学可接受的盐，W选自H、Z-Q-Z、-(^.8烷基->^&2)(114)、-<:1.8烷基-0113、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基和CM芳垸基；每次出现的112和W均是独立选自H、Cm院基、d—4芳烷基、芳基、杂芳基、酰基、垸基磺酰和芳基磺酰，如果w和w在相同氮原子和不同时是氢时，它们是不同的，而当112和W在相同氮上并且R2和W之一是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰时，另一个选自H、d.s烷基、芳基、C"4芳烷基，禾口杂芳基；R3选自H、Cm院基、Cm芳院基、芳基和杂芳基；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>W选自Q选自O和NR2;和每次出现的z独立地选自CL6烷基、<:2.6烯基和(32.6炔基，和(2)—种增加细胞中VDAC丰度的试剂。26.根据权利要求25所述的方法，其中W选自Z-Q-Z、-d.s烷基-N(R2)(R4)、-Q.s烷基-OR3、芳基，杂芳基和CL4芳烷基。其中:27.根据权利要求25所述的方法，其中芳基任选用选自CL6烷基，CF3，羟基，CM烷氧基，芳基，芳氧基，卤素，NR2R4，硝基，羧酸，羧酸酯和磺酰基的基团取代。28.根据权利要求25所述的方法，其中VDAC是VDAC1、VDAC2或者VDAC3。29.—种杀伤细胞，促进细胞死亡或者抑制细胞增殖的方法，包括对细胞给药-(1)有效量的具有式I结构的化合物或者其药学可接受的盐，Ri选自H、Z-Q-Z、-(31-8烷基->^(2)(^4)、-d-s烷基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基和CL4芳烷基；每次出现的112和W均是独立选自H、Cm焼基、Cu4芳垸基、芳基、杂芳基、酰基、烷基磺酰和芳基磺酰，如果f和W在相同氮原子和不同时是氢时，它们是不同的，而当W和W在相同氮上并且R2和W之一是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰，另一个选自H、C^烷基、芳基、Cm芳院基，和杂芳基；R选自H、Cw垸基、d-4芳烷基、芳基和杂芳基；其中:W选自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>,R4Q选自0和NR2;禾口每次出现的z独立地选自cl6垸基、〔2.6烯基和<:2.6炔基，禾口(2)—种增加细胞中VDAC丰度的试剂。30.根据权利要求29所述的方法，其中R'选自Z-Q-Z、-Cw烷基-n(r2)(r4)、-<:1-8垸基-0113、芳基，杂芳基和cm芳烷基。31.根据权利要求30所述的方法，其中W选自cm芳烷基和酰基。32.根据权利要求31所述的方法，其中W是酰基。33.根据权利要求32所述的方法，其中R4是-C(0)-d.3垸基-Y，Y选自H、垸基、垸氧基、芳氧基、芳基、杂芳基、杂芳氧基和环垸基。34.根据权利要求32所述的方法，其中R4是-C(0)-d.3烷基-Y，Y选自芳氧基、芳基、杂芳基、杂芳氧基和环烷基。35.根据权利要求32所述的方法，其中R4是-C(0)-d.3烷基-Y，Y选自芳氧基和杂芳氧基。36.根据权利要求29所述的方法，其中VDAC是VDAC1、VDAC2或者VDAC3。37.根据权利要求25-35中任一所述的方法，其中所述细胞是癌细胞。38.根据权利要求25-35中任一所述的方法，其中所述试剂包括编码VDAC的多核苷酸。39.根据权利要求25-35中任一所述的方法，其中所述试剂是适合转运进细胞的VDAC蛋白。40.根据权利要求39所述的方法，其中所述试剂是与异源内化作用结构域融合的VDAC蛋白。41.根据权利要求39所述的方法，其中所述试剂是包括VDAC蛋白的脂质体制剂。42.根据权利要求25-35中任一所述的方法，其中所述试剂增强或者抑制内源VDAC的表达。43.根据权利要求42所述的方法，其中所述试剂刺激VDAC表达。44.根据权利要求42所述的方法，其中所述试剂抑制VDAC抑制剂的功能。45.—种杀伤细胞，促进细胞死亡或者抑制细胞增殖的方法，包括对细胞给药(1)有效量的具有式I结构的化合物或者其药学可接受的盐，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中-Ri选自H、Z-Q-Z、-(:1_8烷基-:^(112)(114)、-d-s烷基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基和Cw芳垸基；每次出现的W和R"均是独立选自H、dv烷基、Cl4芳院基、芳基、杂芳基、酰基、垸基磺酰和芳基磺酰，如果f和W在相同氮原子和不同时是氢时，它们是不同的，而当W和W在相同氮上并且R2和W之一是酰基、垸基磺酰或者芳基磺酰时，另一个选自H、8垸基、芳基、Q-4芳烷基，禾口杂芳基；W选自H、(^.4垸基、Q-4芳烷基、芳基和杂芳基；Q选自0和NR2;禾口每次出现的z独立地选自CL6烷基、<:2.6烯基和(:2_6炔基，和(2)—种降低细胞中VDAC丰度的试剂。46.具有式I结构的化合物或者其药学可接受的盐，W选自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>(I)其中-Ri选自H、Z國Q-Z、-d.8垸基-N(R2)(R4)、-d.s烷基-OR3、3國到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基和Cw芳烷基；每次出现的R"和R"均是独立选自H、dv烷基、4芳垸基、芳基、杂芳基、酰基、垸基磺酰和芳基磺酰，如果W和W在相同氮原子和不同时是氢时，它们是不同的，并且当W和W在相同氮上并且rS和W之一是酷基、烷基磺酰或者芳基磺酰时，另一个选自h、Q-8烷基、芳基、C卜4芳烷基，禾口杂芳基；RS选自H、Cl4院基、Q-4芳垸基、芳基和杂芳基；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>w选自和Q选自O和NR2;和每次出现的z独立地选自c^烷基、02.6烯基和<:2.6炔基。47.根据权利要求46所述的化合物，其中W选自Z-Q-Z、烷基-N(R2)(R4)、-d.s垸基-OR3、芳基，杂芳基和CM芳烷基。48.根据权利要求46所述的化合物，其中芳基任选用选自Cw烷基，CF3，羟基，CM烷氧基、芳基，芳氧基，卤素，NR2R4，硝基，羧酸，羧酸酯和磺酰基的基团取代。49.具有式I结构的化合物或者其药学可接受的盐，Ri选自H、Z-Q-Z、《1.8烷基^(112)(114)、-CLs垸基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基和CM芳烷基；每次出现的W和R"均是独立选自H、d-4垸基、d-4芳垸基、芳基、杂芳基、酰基、烷基磺酰和芳基磺酰，如果W和R"在相同氮原子和不同时是氢时，它们是不同的，而当W和R"在相同氮上并且R2和R"之一是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰时，另一个选自H、d—8烷基、芳基、Ci-4芳烷基，禾口杂芳基；RS选自H、Cm院基、d-4芳烷基、芳基和杂芳基；W选自R4;Q选自O和NR2;禾口每次出现的Z独立地选自Q.6烷基、<:2.6烯基和C2-6炔基。50.根据权利要求49所述的化合物，其中W选自Z-Q-Z、-C,.s垸基-N(R2)(R4)、《1.8烷基-0113、芳基，杂芳基和CM芳烷基。51.根据权利要求50所述的化合物，其中W选自Q—4芳垸基和酰基。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>其中:52.根据权利要求51所述的化合物，其中W是酰基。53.根据权利要求52所述的化合物，其中R4是-C(0)-d.3垸基-Y，Y选自H、垸基、烷氧基、芳氧基、芳基、杂芳基、杂芳氧基和环烷基。54.根据权利要求52所述的化合物，其中R4是-C(0)-d.3烷基-Y，Y选自芳氧基、芳基、杂芳基、杂芳氧基和环烷基。55.根据权利要求52所述的化合物，其中R4是-C(0)-d.3垸基-Y，Y选自芳氧基和杂芳氧基。56.—种鉴定候选抗肿瘤试剂的方法，包括a)在合适条件下将细胞与足量待测试剂接触；和b)检测待测试剂是否增强或者抑制emstin蛋白结合复合物组分的水平或者编码erastin蛋白结合复合物组分的核酸的水平。57.根据权利要求56所述的方法，其中erastin结合蛋白是VDAC1，VDAC2，VDAC3，Prohibitin，核糖体结合糖蛋白，Sec61a或者Sec22b。58.根据权利要求56所述的方法，还包括a)将待测试剂与肿瘤细胞接触；和b)检测待测试剂是否抑制肿瘤细胞的生长。59.—种鉴定候选抗肿瘤试剂的方法，包括a)将待测试剂与erastin结合蛋白或者表达erastin结合蛋白的细胞接触；和b)检测待测试剂是否结合erastin结合蛋白。60.根据权利要求59所述的方法，其中erastin结合蛋白是VDAC1,VDAC2，VDAC3,Prohibitin，核糖体结合糖蛋白，Sec61a或者Sec22b。61.根据权利要求59所述的方法，还包括a)将待测试剂与肿瘤细胞接触；和b)检测待测试剂是否抑制肿瘤细胞的生长。62.根据权利要求56或者59所述的方法，其中待测试剂是小的有机分子。63.根据权利要求56或者59所述的方法，其中待测试剂是肽、蛋白、糖类或者核酸。64.根据权利要求56或者59所述的方法，其中对不同待测试剂的文库重复所述方法。65.根据权利要求59所述的方法，其中待测试剂或者erastin结合蛋白用可检测的标记物标记。66.根据权利要求65所述的方法，其中可检测的标记物是生物素，荧光素，地高辛，绿色荧光蛋白(GFP)，同位素，多聚组氨酸，磁珠，或者谷胱甘肽S转移酶(GST)。67.—种增加肿瘤细胞对化疗剂敏感性的方法，包括将肿瘤细胞与减少或者增加erastin结合蛋白丰度的化合物接触。68.根据权利要求67所述的方法，其中erastin结合蛋白是VDAC1，VDAC2，VDAC3，Prohibitin，核糖体结合糖蛋白，Sec61a或者Sec22b。69.根据权利要求67所述的方法，其中化疗剂是权利要求46所述的化合物。70.—种降低正常细胞对化疗剂敏感性的方法，包括将正常细胞与减少或者增加erastin结合蛋白丰度的化合物接触。71.根据权利要求70所述的方法，其中erastin结合蛋白是VDAC1，VDAC2，VDAC3，Prohibitin，核糖体结合糖蛋白，Sec61a或者Sec22b。72.根据权利要求70所述的方法，其中化疗剂是权利要求46所述的化合物。73.—种鉴定抑制不需要的细胞增殖的候选治疗剂的方法，包括(a)将待测试剂与VDAC蛋白或者蛋白复合物混合，所述蛋白复合物包括至少一种VDAC蛋白和任选一种或多种其他蛋白；(b)检测待测试剂是否结合VDAC蛋白；和(c)如果待测试剂结合VDAC蛋白，则将待测试剂与细胞接触，并检测待测试剂是否改变细胞的增殖。74.根据权利要求73所述的方法，其中待测试剂是小的有机分子、肽、蛋白、模拟肽、核酸或者抗体。75.根据权利要求73或者74所述的方法，其中通过物理结合试验检测VDAC蛋白与待测试剂的结合。76.—种降低肿瘤生长率的方法，包括给药足以降低肿瘤生长率的一定量的治疗剂，其中治疗剂是(a)增强或者抑制VDAC蛋白水平的试剂；(b)增强或者抑制VDAC蛋白活性的试剂；(C)与VDAC蛋白结合的试剂；(d)结合、调节或者结合并且调节包括至少一种VDAC和任选一种或多种其他蛋白的蛋白质复合物的试剂；(e)包括VDAC多肽或者其功能性变体的试剂；或者(f)包括编码VDAC多肽或者其功能性变体的核酸的试剂。77.—种治疗癌症患者的方法，包括给药患者一种治疗剂，所述治疗剂选自(a)增强或者抑制VDAC蛋白水平的试剂；(b)增强或者抑制VDAC蛋白活性的试剂；(c)结合VDAC蛋白的试剂；(d)结合、调节或者结合并且调节包括至少一种VDAC和任选一种或多种其他蛋白的蛋白质复合物的试剂；(e)包括VDAC多肽和其功能性变体的试剂；和(f)包括编码VDAC多肽或者其功能性变体的核酸的试剂。78.根据权利要求76或者77所述的方法，其中VDAC蛋白是VDAC1、VDAC2或者VDAC3。79.根据权利要求76或者77所述的方法，其中待测试剂是小的有机分子、肽、蛋白、模拟肽、核酸或者抗体。80.根据权利要求76或者77所述的方法，其中试剂与一种药学可接受的载体一起配制成制剂。81.根据权利要求76或者77所述的方法，其中所述试剂通过静脉内、口服、颊、胃肠外、通过吸入喷雾、通过局部施用或者经皮肤给药。82.根据权利要求76或者77所述的方法，其中试剂通过局部给药方式给药。83.根据权利要求76或者77所述的方法，还包括给药至少一种其他的抗癌化疗剂，所述化疗剂与所述治疗剂以累积或者协同作用的方式抑制癌细胞。84.具有式II结构的化合物或者其药学可接受的盐，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>其中Ar是取代的苯基；R1选自H、d.8烷基、-Z-Q-Z、垸基-N(R2)(R4)、烷基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，和d-4芳烷基；每次出现的R"和R"均是独立选自H、dv烷基、Cm芳院基、芳基、杂芳基、酰基、烷基磺酰和芳基磺酰，如果W和R"在相同氮上并且f和R"之一是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰时，另一个选自H、Q—8烷基、芳基、Ci-4芳烷基，芳基禾口杂芳基；RS选自H、dV烷基、d-4芳垸基、芳基和杂芳基；RS代表在其相连的环上的0-4个取代基。W是或者Q选自0和NR2;禾口每次出现的Z独立地选自Cw烷基、^.6烯基和C2—6炔基。85.具有式III结构的化合物或者其药学可接受的盐，w阿其中Ar是取代的苯基；R'选自H、-d.8烷基、-Z-Q-Z、-d.8烷基-N(R2)(R4)、-Q.8烷基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，和Cm芳踪基；每次出现的W和R"均是独立选自H、Cm院基、Cm芳院基、芳基、杂芳基、酰基、烷基磺酰和芳基磺酰，如果^和R"在相同氮并且^和W之一是酰基、垸基磺酰或者芳基磺酰时，另一个选自H、d.8烷基、芳基、C"4芳烷基，禾口杂芳基；RS选自H、Cm院基、d-4芳烷基、芳基和杂芳基；RS代表在其相邻的环上的0-4个取代基。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>Q选自O和NR2;禾口每次出现的Z独立地选自Cl6院基、C2V烯基和C2-6炔基。86.具有式IV结构的化合物或者其药学可接受的盐，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>其中Ar是取代的苯基；W是-d—8垸基；每次出现的W和W均是独立选自H和d.s烷基;RM戈表在其相连的环上的0-4个取代基。W选自，或者Q选自0和NR287.具有式V结构的化合物或者其药学可接受的盐,R4、R2(V)其中W选自H和-d.s垸基；R2选自H和-d.s垸基;113选自卤素、垸氧基和-Q—8烷基；W选自H、卤素、垸氧基和-Q.s垸基；rs选自H、卣素和硝基；和n是1或者2。88.—种杀伤细胞，促进细胞死亡或者抑制细胞增殖的方法，包括对细胞给药有效量的具有式I结构的化合物或者其药学可接受的盐，R/选自H、-Z-Q-Z、-d.8垸基-N(R2)(R4)、-(21_8烷基-0113、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基和cm芳垸基；每次出现的R3和R"均是独立选自H、Cm院基、Cm芳院基、芳基、杂芳基、酰基、烷基磺酰和芳基磺酰，如果W和R"在相同氮原子和不同时是氢时，它们是不同的，而当W和R"在相同氮上并且R2和R"之一是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰时，另一个选自H、C^垸基、芳基、Cm芳院基，和杂芳基；W选自H、Cm焼基、CM芳烷基、芳基和杂芳基；Q选自0禾tlNR2;禾口每次出现的Z独立地选自Qv烷基、(:2-6烯基和C2.6炔基。其中:w选自89.—种杀伤细胞，促进细胞死亡或者抑制细胞增殖的方法，包括对细胞给药有效量的具有式II结构的化合物或者其药学可接受的盐，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>(II)其中Ar是取代的苯基；W选自H、-d.8烷基、-Z-Q-Z、-d.8烷基-N(R2)(R4)、-d.8垸基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，和Cm芳院基；每次出现的W和W均是独立选自H、d-4烷基、Cm芳院基、芳基、杂芳基、酰基、垸基磺酰和芳基磺酰，如果W和R"在相同氮上并且^和114之一是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰时，另一个选自H、CV8烷基、芳基、Cm芳院基，芳基和杂芳基；W选自H、Cm院基、Cm芳焼基、芳基和杂芳基；RS代表在其相连的环上的0-4个取代基。w是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>或者<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>Q选自0和NR2;和每次出现的Z独立地选自Cl6院基、(:2.6烯基和Cw炔基。90.—种杀伤细胞，促进细胞死亡或者抑制细胞增殖的方法，包括对细胞给药有效量的具有式III结构的化合物或者其药学可接受的W其中(ni)Ar是取代的苯基；W选自H、-dV烷基、-Z-Q-Z、-C!.8垸基-N(R2)(R4)、-CL8烷基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，和Cm芳院基；每次出现的W和W均是独立选自H、Cm院基、d-4芳垸基、芳基、杂芳基、酰基、烷基磺酰和芳基磺酰，如果W和R"在相同氮原子以及它们都是氢或者它们是不同的，而当W和R"在相同氮并且R2和R"之一是酰基、垸基磺酰或者芳基磺酰时，另一个选自H、d-s垸基、芳基、Cm芳院基，和杂芳基；W选自H、d—4垸基、d-4芳烷基、芳基和杂芳基；RS代表在其相连的环上的0-4个取代基。W选自Q选自0和NR2;每次出现的z独立地选自Cl6院基、(:2.6烯基和<:2.6炔基；和其中Ar在喹唑啉酮环上氮键邻位的位置没有乙氧基取代基。91.一种杀伤细胞，促进细胞死亡或者抑制细胞增殖的方法，包括对细胞给药有效量的具有式IV结构的化合物或者其药学可接受的盐，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>其中Ar是取代的苯基；R1是-C"8院基；每次出现的R2和R4均是独立选自H和Cw烷基;RS代表在其相连的环上的0-4个取代基。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>W选自Q选自O和NR2。92.—种杀伤细胞，促进细胞死亡或者抑制细胞增殖的方法，包括对细胞给药有效量的具有式V结构的化合物或者其药学可接受的盐，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>其中R1选自H和-C1-8烷基；R2选自H和-C1-8垸基；R3选自卤素、烷氧基和-C1-8烷基；R4选自H、卤素、垸氧基和-C1-8烷基；R5选自H、卣素和硝基;和n是l或者2。93.—种增加肿瘤细胞或者正常细胞对化疗剂敏感性的方法，包括将所述细胞与权利要求46，84，85，86或者87所述的化合物接触。94.一种在哺乳动物中治疗癌症的方法，包括对哺乳动物给药治疗有效量的权利要求46，S4，85，86或者87所述的化合物或者其药学可接受的盐。95.—种杀伤细胞，促进细胞死亡或者抑制细胞增殖的方法，包括对细胞给药(1)有效量的权利要求85，85，86或者87所述的化合物或者其药学可接受的盐，和(2)增加细胞中VDAC丰度的试剂。96.—种杀伤细胞，促进细胞死亡或者抑制细胞增殖的方法，包括对细胞给药-(1)有效量的权利要求85，85，86或者87所述的化合物或者其药学可接受的盐，和(2)降低细胞中VDAC丰度的试剂。其中，HNR2相当于HW。Ar是取代的苯基；W选自H、-d.8烷基、-Z-Q-Z、-d.8烷基-N(R2)(R4)、-d.8烷基-OR3、3-到8-元碳环或者杂环，芳基，杂芳基，和CL4芳烷基；每次出现的f和W均是独立选自H、Cm院基、Cm芳院基、芳基、杂芳基、酰基、垸基磺酰和芳基磺酰，如果W和R"在相同氮上时，它们或者都是氢或者是不同的，以及当112或114在相同氮上时，并且RZ和W之一是酰基、烷基磺酰或者芳基磺酰时，另一个选自H、d.8烷基、芳基、C"4芳烷基，禾口杂芳基；W选自H、Cw烷基、CM芳烷基、芳基和杂芳基；RS代表在其相连的环上的0-4个取代基。97.—种制备式F代表的化合物的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>每次出现的Z独立地选自Q—6烷基、(:2.6烯基和C2.6炔基。全文摘要本发明涉及筛选结合伴侣的方法，尤其是erastin(例如VDACs，诸如VDAC3)生物活性必需的结合伴侣。本发明还提供利用erastin和相关化合物或者衍生物，例如化合物(I)有效杀伤癌细胞的试剂和方法。文档编号C07D239/90GK101218211SQ200680009733公开日2008年7月9日申请日期2006年1月25日优先权日2005年1月25日发明者保罗·B·罗宾斯,基思·西门斯,尤金·阵,布伦特·R·斯托克韦尔,拉杰·葛佩尔·文卡特,约翰·M·佩尔特,罗伯特·R·贝克林,罗伯特·塞利亚,苏迪尔·R·萨哈斯拉布德,莫里茨·冯雷兴贝格,辛迪·卢·彻帕诺斯克,齐龙武申请人:普罗历克西医药品公司;怀特黑德生物医学研究所;哥伦比亚大学(纽约)理事会