专利名称：一种羟基红花黄色素a的制备方法
技术领域：
本发明涉及从药用植物中提取有效成分的方法，具体是一种羟基红花黄色素A的制备方法。
背景技术：
红花(Catthamus tinctotins L.)为菊科一年生草本植物，在我国已有2100多年的栽培 与用药历史。其干燥管状花是一味常用中药，具有活血通络、祛瘀止痛的功效。临床上常用 来治疗子宫充血，心血管、血栓形成等疾病，也作止痛、消炎剂。羟基黄色素A是目前得到 认可的红花有效成分之一，药理实验证明羟基红花黄色素A能明显提高缺氧耐受力，使冠脉扩 张，增加冠脉流量，并有明显抑制ADP诱导的家兔血小板聚集作用。羟基红花黄色素A主要用作冻干粉针剂。羟基红花黄色素A的提取纯化，目前需解决的主 要问题是有效去除杂质，提高羟基红花黄色素A的含量，降低生产成本。当前，国内外对羟基 红花黄色素A( HSYA)的精制工艺研究的工作主要有①1993年Meselhy (ChemPhar -m.Bull.. 1993， 41(10): 1796-1802〕报道了通过丙酮提取，醋酸乙脂沉淀，然后通过纤维柱SephadexLH-20 凝胶色谱柱反复精制制备羟基红花黄色素A的方法。在凝胶色谱柱分离时，另一红花査耳酮成 分与HSYA混在一起，且需用制备型聚酰胺薄层板进行精制制备HSYA，该方法不适合工业化生 产。②2004年李盛学(申请号CN02132781.5)将红花提取液进行柱层析，醇沉，之后再进 行3-5次反复柱层析进行精制，冷冻干燥得到90X-99X的羟基红花黄色素A干粉。该工艺需进 行反复层析，且在精制过程中选用的是价格比较昂贵的葡聚糖凝胶作为填料。③2004金鸣等 报道(中草药，2004， 35(1)25-28)用D—4020型非极性大孔树脂柱水洗脱糖类等杂质，以30 %和10%乙醇洗脱分别得SY和HSYA;两洗脱液中所含SY和HSYA纯度分别为92. 4%和83. 0 % 。发明内容本发明的目的是提供一种生产成本低、工艺简单、无污染、收率高、纯度高、适合适合 工业化生产的羟基红花黄色A的制备方法。本发明提供的一种羟基红花黄色A的制备方法，包括如下步骤(1)提取取干燥红花，用红花重量20 40倍的去离子水提取两次，每次提取30 90 min， 提取温度40°C 90°C，将两次所得提取液合并，过滤，除去药渣，6(TC减压浓縮至比重为 1.05 1.15的水提液；(2) 分离上述水提液用大孔吸附树脂或氢键键合型柱层析材料柱层析，上样量为1:1 3 (w/w)，先用水淋洗2 4个柱体积，再用浓度为10% 60%乙醇水溶液淋洗1 5个柱体积，收集醇水淋洗液，60'C减压浓縮至比重为1. 05 1. 15得初步分离浓縮液；(3) 精制将上述初步分离浓縮液用非极性反相层析材料柱层析，上样量为0.5 2:1(w/w)，先用浓度为0% 10%乙醇水溶液淋洗2 4个柱体积，再用浓度为10% 70%乙醇水 溶液淋洗2 5个柱体积，收集醇水淋洗液，6(TC减压浓縮至比重为1.05 1.2得精制浓縮液；(4) 冷冻干燥上述精制浓縮液经冷冻干燥得橘黄色羟基红花黄色素A产品。 用HPLC测定上述所得产品的羟基红花黄色素A的含量，可达85% 99. 9%。 所述步骤(2)中的大孔吸附树脂可以是AB-8或H103;氢键键合型柱层析材料可以是聚酰胺。初步分离可有效去除大量杂质，为下一步柱层析得到高纯度产品奠定基础。所述步骤(3)中的非极性反相层析材料可选用^ffiS; MDS可再生重复利用，如用95%乙醇淋洗柱体即可使材料再生。本发明羟基红花黄色素A含量测定方法用HPLC测定(按外标法测定)。HPLC色谱条件为流动相甲醇乙睛0.25%磷酸=33.5:0.7:65.8 ;色谱柱Hypersil C18(4.0X250mm);柱温25。C;流速1.0mL/min;测定波长402nm， 10ul进样。与现有技术相比本发明具有如下优点(1) 本发明精制工艺简单，提取效率高。按羟基红花黄色素A不同用途对纯度的要求， 纯度可达85% 99.9%，提取率可达0. 8% 1. 5%。(2) 本发明使用溶剂安全无毒，价格低廉可回收再用，对环境无污染；(3) 本发明使用分离精制材料便宜，且易于洗脱再生，可多次利用；总之，本发明羟基红花黄色素A的制备方法，不仅生产成本低、工艺简单、无污染，而 且所得羟基红花黄色素A的收率高、纯度高，适合工业化生产。
具体实施例方式
实施例/取0.4Kg干燥红花，用12Kg去离子水提取两次，提取温度60'C，提取时间45min，合 并提取液，过滤，滤液6(TC减压浓缩至约比重为1.10的水提液；水提液上聚酰胺柱分离(径 高比为1:20)，上样量为1:3。先用去离子水淋洗3个柱体积，再用50%乙醇淋洗4个柱体积， 收集淋洗液，60。C减压浓縮至比重为1. 05得初步分离浓縮液；初步分离浓縮液上柱MDS-5(径 高比为I:IO)，上样量为0.5:1,先用10%乙醇淋洗2个柱体积，再用20%乙醇淋洗4个柱体 积，收集20%醇淋洗液。薄层层析检测(展开剂为乙酸乙酯:甲醇:3.6%盐酸=1:3:6)，合并 含有羟基红花黄色素A单一斑点的淋洗液，6(TC减压浓縮至比重为1.16，冷冻干燥即得橘黄色羟基红花黄色素A产物。以羟基红花黄色素A为对照品，用HPLC测得羟基红花黄色素A 的含量为99.9%，收率为0.8%。实施例2取0.4Kg干燥红花，用15Kg去离子水提取两次，提取温度8(TC，提取时间60min，合 并提取液，过滤，滤液6(TC减压浓縮至约比重为1.05的水提液；水提液上AB-8柱分离(径 高比为1:20)，上样量为1:2。先用去离子水淋洗2个柱体积，再用30%乙醇淋洗4个柱体积， 收集淋洗液，6(TC减压浓縮至比重为1. 10得初步分离浓縮液；初步分离浓縮液上柱MDS-5(径 高比为1:10),上样量为1:1，先用去离子水淋洗3个柱体积，再用30%乙醇淋洗4个柱体积， 收集30%醇淋洗液，薄层层析检测，合并含有羟基红花黄色素A斑点的淋洗液，60'C减压浓 縮至比重为1.10，冷冻干燥即得橘黄色羟基红花黄色素A产物。以羟基红花黄色素A为对 照品，用HPLC测得羟基红花黄色素A的含量为92. %，收率为1.2%。实施例3取lKg干燥红花，用30Kg去离子水提取两次，提取温度70'C，提取时间80min，合并 提取液，过滤，滤液6(TC减压浓縮至约比重为1.12的水提液；水提液上H103柱分离(径高 比为1:20)，上样量为1:3。先用去离子水淋洗4个柱体积，再用40%乙醇淋洗4个柱体积， 收集淋洗液，6(TC减压浓縮至比重为1. IO得初步分离浓縮液；初步分离浓縮液上柱MDS-5(径 高比为I:IO)，上样量为2:1，先用去离子水淋洗3个柱体积，再用40%乙醇淋洗3个柱体积， 收集40%醇淋洗液，薄层层析检测，合并含有羟基红花黄色素A斑点的淋洗液，6(TC减压浓 縮至比重为1.12，冷冻干燥即得橘黄色羟基红花黄色素A产物。以羟基红花黄色素A为对 照品，用HPLC测得羟基红花黄色素A的含量为86. %，收率为1.5%。
权利要求
1.一种羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于包括如下步骤(1)提取取干燥红花，用红花重量20～40倍的去离子水提取两次，每次提取30～90min，提取温度40℃～90℃，将两次所得提取液合并，过滤，除去药渣，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.15的水提液；(2)分离上述水提液用大孔吸附树脂或氢键键合型柱层析材料柱层析，上样量为1∶1～3，先用水淋洗2～4个柱体积，再用浓度为10％～60％乙醇水溶液淋洗1～5个柱体积，收集醇水淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.15得初步分离浓缩液；(3)精制将上述初步分离浓缩液用非极性反相层析材料柱层析，上样量为0.5～2∶1，先用浓度为0％～10％乙醇水溶液淋洗2～4个柱体积，再用浓度为10％～70％乙醇水溶液淋洗2～5个柱体积，收集醇水淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.2得精制浓缩液；(4)冷冻干燥上述精制浓缩液经冷冻干燥得橘黄色羟基红花黄色素A产品。
2. 如权利要求1所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述大孔 吸附树脂是AB-8或H103。
3. 如权利要求1所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述氢键键合型柱层析材料是聚酰胺。
4. 如权利要求1所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于步骤(3)中所述的反相层析材料是MDS。
全文摘要
一种羟基红花黄色素A的制备方法，采用干燥红花为原料，用去离子水作为提取溶剂，依次通过初步分离柱和精制柱，用去离子水和醇水溶液作为洗脱剂，冷冻干燥得羟基红花黄色素A，含量可达85％～99.9％。本发明所用材料便宜，溶剂安全无毒，工艺简单；对红花的利用率高，按羟基红花黄色素A不同用途对纯度的要求，提取率为0.8％～1.5％；成本低，适合工业化生产。
文档编号C07H15/00GK101215307SQ20081005442
公开日2008年7月9日 申请日期2008年1月8日 优先权日2008年1月8日
发明者张立伟, 俊 贾, 贾菲菲 申请人:山西大学