可溶性噻唑并吡啶的制作方法

专利名称：可溶性噻唑并吡啶的制作方法
可溶性噻唑并吡啶相关申请本申请要求2007年11月8日递交的美国临时申请61/002758的优先权，引证其
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沉默信息调节剂(Silent Information Regulator, SIR)基因家族代表一群存在 于范围从古细菌(archaebacteria)至各种真核生物的生物体的基因组中的高度保守性基 因(Frye，2000)。编码的SIR蛋白质涉及从基因沉默的调节至DNA修复的各种不同程序。 由许多SIR基因家族编码的蛋白质显示250氨基酸核心结构域中有高度序列保守。此家族 中已相当特征化的基因为酿酒酵母SIR2 (S. cerevisiae SIR2)，其涉及沉默含有指定酵母 交配型、端粒位置效应及细胞老化的信息的HM基因座(Guarente，1999 ；Kaeberlein等人，
1999；Shore, 2000) 0酵母Sir2蛋白质属于组蛋白脱乙酰基酶的家族(见综述Guarente，
2000；Shore, 2000)。于鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)中的 Sir2 同系物 (homolog) (CobB)，功能是作为一种NAD (烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)~依赖性ADP-核糖基转
(Tsang 与 Escalante-Semerena, 1998)。Sir2蛋白为使用NAD作为共底物的第III类脱乙酰基酶(Imai等人，2000 ； Moazed, 2001 ；Smith 等人，2000 ；Tanner 等人，2000 ；Tanny 和 Moazed，2001)。不同于其他 脱乙酰基酶，这些中的许多涉及基因沉默，Sir2对第1类及第II类组蛋白脱乙酰基酶抑制 剂，例如曲古抑菌素A(trichostatinA，TSA)不具敏感性(Imai等人，2000 ；Landry等人， 2000a ；Smith 等人，2000)。通过Sir2进行的乙酰基_赖氨酸的脱乙酰基化，与NAD水解作用紧密结合，产生 烟酰胺与新的乙酰基-ADP核糖化合物(Tanner等人，2000 ；Landry等人，2000b ；Tanny和 Moazed, 2001)。Sir2的NAD-依赖性脱乙酰基酶活性对于将其生物学角色与酵母中的细胞 代谢作用结合这一其功能而言是必需的活性(Guarente，2000 ；Imai等人，2000 ；Lin等人， 2000 ；Smith等人，2000)。哺乳动物Sir2同系物具有NAD-依赖性组蛋白脱乙酰基酶活性 (Imai等人，2000 ；Smith等人，2000)。关于Sir2所介导功能的大部分信息来自在酵母中进 行的研究(Gartenberg，2000 ；Gottschling，2000)。生物化学的研究已显示，Sir2可容易地将组蛋白H3与H4的氨基末端尾部脱 乙酰基化，导致形成1-0-乙酰基-ADP-核糖与烟酰胺。具有额外SIR2拷贝的菌株显现 其rDNA沉默增加且寿命增长30%。最近已显示，秀丽隐杆线虫(C. elegans) SIR2同系物 (sir-2. 1)及果蝇(D.melanogasteiOdSirf基因的额外拷贝会大大延长这些生物体的寿 命。这暗示了，针对老化的SIR2-依赖性调节途径，其在演化早期已出现且已经是相当保守 的(conserve)。现今，Sir2基因据相信已经演化以增强生物体的健康与抗压性，来增加其 度过存活逆境的机会。SIRT3为SIRTl的同系物，其在原核生物与真核生物中具保守性(P. Onyango等人， Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99 13653-13658 (2002))。SIRT3 蛋白通过位于 N-末端的独特结构域靶向至线粒体的嵴(cristae)。SIRT3具有NAD+-依赖性蛋白质脱乙酰基酶活性，且 被普遍地(upbiquitously)表达在，特别是，具有代谢活性的组织中。在转移至线粒体时， 相信SIRT3被线粒体基质加工肽酶(MPP)裂解成更小的、具活性的形式(B. Schwer等人， J.CellBiol. 158 :647_657(2002))。已知热限制(caloric restriction)有70年以上，以增进健康并延长哺乳动物的 寿命(MaSoro，2000)。酵母(如后生动物)的寿命也通过类似热限制(例如低葡萄糖)的 介入来增长。发现缺乏SIR2基因的酵母与蝇类在经热限制时都不再存活，这为SIR2基因 介导此类饮食有益健康功效提供了证据(Anderson等人，2003 ；HeIfand与ROgina，2004)。 而且，降低酵母葡萄糖_响应性cAMP(腺苷3‘ ,5'-单磷酸)-依赖性(PKA)途径活性的 突变，会延长野生型细胞的寿命，但在突变型sir2菌株中则不会延长，这证明SIR2似乎是 热限制途径的关键下游组分(Lin等人，2001)。发明概述本发明提供新的瑟土因(sirtuin)-调节性化合物及其利用方法。一方面，本发明提供如下所详述的具有结构式(I)和(II)的瑟土因调节性化合 物。在另一方面，本发明提供使用瑟土因调节性化合物的方法，或包含瑟土因调节性 化合物的组合物的方法。在某些实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因 调节性化合物可用于各种治疗应用，包括例如增加细胞寿命，及治疗和/或预防多种疾病 与病症，包括，例如与老化或压力有关的疾病或病症、糖尿病、肥胖、神经变性疾病、化学疗 法所诱发的神经病、与缺血性事件(ischemic event)相关的神经病、眼部疾病和/或病症、 心血管疾病、血液凝结病症、炎症、和/或潮红(flushing)等。增加瑟土因蛋白的水平和 /或活性的瑟土因调节性化合物也可用于治疗个体中会因线粒体活性的增加而受益的疾 病或病症，用于增进肌肉机能，用于增加肌肉ATP水平，或用于治疗或预防与缺氧或缺血相 关的肌肉组织损伤。在其他实施方式中，降低瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节 性化合物可用于各种治疗应用，包括例如增加细胞对压力的敏感性，增加细胞凋亡，治疗癌 症，刺激食欲和/或刺激体重增加等。如下文进一步所述，这些方法包含对有其需要的个体 给药药用有效量的瑟土因调节性化合物。在某些方面，瑟土因调节性化合物可单独使用，或与其他化合物包括其他瑟土因 调节性化合物，或其他治疗剂组合进行给药。发明详述1.定义如用于本文，下列术语及词组应具有于下文所叙述的定义。除非另行定义，所有于 本文中所使用的技术与科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的含义所相同的含 义。单数形式“一”、“一种”及“该”包括复数参考范围，除非上下文有另外清楚地指示。术语“试剂”用于本文是指化合物、化合物的混合物、生物大分子(例如核酸、抗 体、蛋白质或其部分例如肽类)、或从生物材料例如细菌、植物、真菌或动物(特别是哺乳动 物)细胞或组织制得的提取物。此类试剂的活性可使其适宜用作一种在生物学上、生理学 上或药学上具活性的在个体内局部地或全身性地起作用的“治疗剂”。
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术语“生物可利用的”当引述化合物时为本领域所认知的，且意指化合物其或所给 药化合物的一部份的量，能够被所给药的个体或患者吸收、并入或以其他方式在生理学上 被利用。“瑟土因的生物学上具活性的部分”意指具有生物活性，例如脱乙酰基化能力的瑟 土因蛋白的一部分。瑟土因的生物学上具活性的部分可包含瑟土因的核心结构域。具有 GenBank登录编号(Accession No.) NP_036370的SIRTl的生物学上具活性部分，包括NAD+ 结合结构域与底物结合结构域，例如，可包括但不限于GenBank登录编号NP_036370的氨 基酸62-293，其由GenBank登录编号NM_012238的核苷酸237至932所编码。因此，此区 域有时被称作核心结构域。SIRTl的其他生物学上具活性部分(也有时也被称作核心结构 域)大致包括GenBank登录编号NP_036370的氨基酸261至447，其由GenBank登录编号 ΝΜ_012238的核苷酸834至1394所编码；大致为GenBank登录编号NP_036370的氨基酸242 至493，其由GenBank登录编号NM_012238的核苷酸777至1532所编码；或大致为GenBank 登录编号NP_036370的氨基酸254至495，其由GenBank登录编号ΝΜ_012238的核苷酸813 至1538所编码。术语“陪伴动物”是指猫与狗。如用于本文，术语“狗”意指犬科物种 (Canisfamiliaris)的任一成员，其中有许多不同品种。术语“猫”意指猫科动物，包括豢养 猫及猫科猫属(family Felidae, genus Felis)的其他成员。“糖尿病”意指高血糖或酮酸中毒，以及因长期高血糖状态或葡萄糖耐受性减低所 引起的慢性、一般性代谢异常。“糖尿病”包含该疾病的I与II型(非胰岛素依赖性糖尿病 或NIDDM)形式。糖尿病的危险因素包括下列因素男子腰围超过40英寸或女子腰围超过 35英寸，血压为130/85mmHg或以上，甘油三酸酯高于150mg/dl，空腹血糖大于100mg/dl，或 男子中高密度脂蛋白少于40mg/dl或于女子少于50mg/dl。瑟土因的“直接活化剂”为通过与其结合而活化瑟土因的分子。瑟土因的“直接抑 制剂”为通过与其结合而抑制瑟土因的分子。术语"ED5tl”为本领域所认知的。在某些实施方式中，ED5tl意指药物产生其最大响 应或功效的50%时的剂量，或者在50%的测试个体或制剂中产生预定响应的剂量。术语 "LD5tl”为本领域所认知的。在某些实施方式中，LD5tl意指药物使50%的测试个体致死的剂 量。术语“治疗指数”为本领域所认知的术语，指药物的治疗指数，定义为LD5(i/ED5(i。术语“高胰岛素血症”意指个体中血液胰岛素水平高于正常值的状况。术语“胰岛素抗性”意指这样的一种状态，其中正常量胰岛素产生相较于在不具有 胰岛素抗性的个体中的生物响应而言，为低于正常(subnormal)生物响应的状态。“胰岛素抗性病症”(如本文所讨论)意指由胰岛素抗性所造成或引起的任何疾 病或病况。实例包括糖尿病、肥胖症、代谢综合征(syndromes)、胰岛素抗性综合征、综合 征X (syndromes X)、胰岛素抗性、高血压、血压过高、高血胆固醇、血脂异常、高脂血症、血脂 异常、动脉粥样硬化疾病包括中风、冠状动脉疾病或心肌梗塞、高血糖症、高胰岛素血症和/ 或高胰岛素原血症(hyperproinsulinemia)、葡萄糖耐受性减弱、延迟胰岛素释出、糖尿病 并发症包括冠心病、心绞痛、充血性心脏衰竭、中风、痴呆的识别功能、视网膜病、周围神经 病、肾病、肾小球肾炎、肾小球硬化症、肾病变综合征、高血压性肾硬化、某些类型癌症(例 如子宫内膜癌、乳癌、前列腺癌与结肠癌)、妊娠并发症、雌性生殖健康变差(例如月经不规则、不孕、不规则排卵、多囊卵巢性综合征(PCOS))、脂肪代谢障碍、胆固醇相关病症(例如 胆石、胆囊炎与胆石病)、痛风、障碍性睡眠呼吸暂停与呼吸问题、骨关节炎，及预防与治疗 骨丢失(bone loss)例如骨质疏松症。术语“家畜动物”是指经驯化的四足动物，其包括那些为肉类与各类副产品而饲养 的动物，例如牛类动物包括牛与其他牛属(genus Bos)的成员，猪类动物包括豢养猪与其他 猪属(genus Sus)的成员，羊类动物包括绵羊与其他羊属(genus Ovis)的成员、豢养山羊 与其他山羊属(genus Capra)的成员；为特定任务例如用做为负重的兽而饲养的经驯化的 四足动物，例如马类动物包括马与其他马科马属(family Equidae, genus Equus)的成员。术语“哺乳动物”为本领域已知的，且例举性哺乳动物包括人类、灵长类、家畜动物 (包括牛类、猪类等)、陪伴动物(例如犬类、猫类等)及啮齿类(例如小鼠与大鼠)。“肥胖的”个体或承受肥胖之苦的个体，一般指具有的身体体重指数(BMI)为至少 25或以上的个体。肥胖可能或可能不与胰岛素抗性相关。术语“经肠道外给药”及“经肠道外进行给药”为本领域所认知的，且指除了肠内 与局部给药以外的给药型式，一般经由注射，且包括但不限定于静脉内、肌肉内、动脉内、 鞘内、囊内、眼眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、 脊柱内与胸骨内注射及输注(infusion)给药。“患者”、“实体”、“个体”或“宿主”是指人类或非人类动物。术语“药学上可接受的载体”为本领域所认知的，且指涉及携带或运送任何主体组 合物或其组分的药学上可接受的材料、组合物或媒介，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋 形剂、溶剂或包封物料。各载体就其可与主体组合物或其组分相容的意义而言必须为“可 接受的”，且对患者是无害的。可用作药学上可接受载体的材料的一些实例包括(1)糖类， 例如乳糖、葡萄糖与蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉与马铃薯淀粉；(3)纤维素与其衍生物， 例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和纤维素醋酸酯；(4)成粉末的黄耆胶；(5)麦芽；(6)明 胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂与栓剂蜡；(9)油类，例如花生油、蓖麻油、葵花油、 芝麻油、橄榄油、玉米油与大豆油；(10) 二醇类，例如丙二醇；(11)多元醇类，例如甘油、山 梨糖醇、甘露糖醇与聚乙二醇；(12)酯类，例如油酸乙酯与月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14) 缓冲剂，例如氢氧化镁与氢氧化铝；(15)藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水(isotonic saline) ； (18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；及(21)其他用于医药制剂的 无毒性可相容物质。术语“预防性”或“治疗性”治疗为本领域所认知的，且指将药物给药至宿主。如 果在临床显现不希望病况(例如，宿主动物的疾病或其他不希望状态)之前进行给药，则该 项治疗为预防性，也即其保护宿主不会发展成该不希望病况，而如果在临床显现不希望病 况之后进行给药，则该项治疗为治疗性的(也即意在减少、改善或维持现存的不希望病况 或由其产生的副作用)。术语“无热原(pyrogen-free) ”引述组合物时，意指不含有其含量会在已给药该组 合物的个体中导致有害作用(例如，刺激、发热、炎症、腹泻、呼吸性窘迫、内毒素性休克等) 的热原的组合物。例如，该术语意欲包括不含(或基本上不含)诸如(例如)脂多糖(LPS) 等内毒素的组合物。细胞的“复制寿命”意指由单个“母细胞”所产生的子细胞数目。另一方面，“时间
9性老化”或“时间性寿命”意指一群不分裂的细胞当被剥夺养分时仍保持存活的时间长度。 “增加细胞寿命”或“延长细胞寿命”当应用于细胞或生物体时，意指增加由一个细胞所产生 的子细胞数目；增加细胞或生物体应付压力及对抗损伤(例如对DNA、蛋白质的损伤)的能 力；和/或增加细胞或生物体可于特别条件例如压力(如热休克、渗透压力、高能量照射、 化学诱导的压力、DNA损伤、不适当的盐水平、不适当的氮水平或不充足的营养物水平)下 存活和生存的状态达较长时间的能力。使用本文中所述的方法，寿命可增加至少约20%、 30%、40%、50%、60%，或 20%至 70%、30%至 60%、40%至 60%或以上。“瑟土因活化性化合物”意指使瑟土因蛋白水平增加，和/或增加瑟土因蛋白的至 少一种活性的化合物。在例举性的实施方式中，瑟土因活化性化合物可使瑟土因蛋白的至 少一种生物活性增加至少约10%、25%、50%、75%、100%或以上。瑟土因蛋白的例举性生 物活性包括(例如)组蛋白与P53的脱乙酰基化；延长寿命；增加基因组的稳定性；沉默转 录作用；及调控母细胞与子细胞间的经氧化蛋白质的分离。“瑟土因抑制性化合物”意指使瑟土因蛋白水平减少，和/或减低瑟土因蛋白的至 少一种活性的化合物。在例举性的实施方式中，瑟土因抑制性化合物可使瑟土因蛋白的至 少一种生物活性减低至少约10%、25%、50%、75%、100%或以上。瑟土因蛋白的例举性生 物活性包括(例如)组蛋白与P53的脱乙酰基化；延长寿命；增加基因组的稳定性；沉默转 录作用；及调控母细胞与子细胞间的经氧化蛋白质的分离。“瑟土因调节性化合物”意指如本文中所述式(I)和(II)的化合物。在例举性的 实施方式中，瑟土因调节性化合物可增量调节(例如活化或刺激)、减量调节(例如抑制或 压制)或改变瑟土因蛋白的功能特性或生物活性。瑟土因调节性化合物可作用从而直接或 间接调节瑟土因蛋白。在某些实施方式中，瑟土因调节性化合物可为瑟土因活化性化合物 或瑟土因抑制性化合物。“瑟土因蛋白”意指瑟土因脱乙酰基酶蛋白家族(或优选指sir2家族)的成员， 其包括酵母Sir2 (GenBank登录编号P53685)、秀丽隐杆线虫Sir_2. 1 (GenBank登录编号 NP_501912)及人类 51肌1(661^&1^登录编号匪_012238 与肥_036370(或4 083106))与 SIRT2 (GenBank 登录编号 NM_012237、NM_030593、NP_036369、NP_085096 与 AF083107)蛋 白质。其他家族成员包括四种称作“HST基因”(Sir2的同系物)的额外酵母类Sir2基 因 HSTl、HST2、HST3 与 HST4，及五种其他人类同系物 hSIRT3、hSIRT4、hSIRT5、hSIRT6 与 hSIRT7 (Brachmann 等人(1995) Genes Dev. 9 :2888 及 Frye 等人(1999) BBRC 260 :273)。优 选的瑟土因是那些和SIRT2相比，与SIRT1，即hSIRTl和/或Sir2共有更多相似性的瑟土 因，例如那些具有至少一部分存在于SIRTl中而不存在于SIRT2中的、例如SIRT3所具有的 N-末端序列。"SIRT1蛋白”意指瑟土因脱乙酰基酶的Sir2家族的成员。在一个实施方式中， SIRTl蛋白质包括酵母Sir2(GenBank登录编号P53685)、秀丽隐杆线虫Sir-2. 1 (GenBank 登录编号 NP_501912)、人类 SIRTl (GenBank 登录编号 NM_012238 或 NP_036370 (或 AF083106))与人类 SIRT2 (GenBank 登录编号 NM_012237、NM_030593、NP_036369、NP_085096 或AF083107)蛋白质，及其等同物与片段。在另一个实施方式中，SIRTl蛋白质包括这样 的多肽其包含一段由(或基本上由)列示于GenBank登录编号NP_036370、NP_501912、 NP_085096、NP_036369或P53685中的氨基酸序列所组成的序列。SIRTl蛋白质包括含有下列氨基酸序列的全部或一部分的多肽及其功能性片段列示于GenBank登录编号 NP_036370、NP_501912、NP_085096、NP_036369 或 P53685 中的氨基酸序列；列示于 GenBank 登录编号 NP_036370、NP_501912、NP_085096、NP_036369 或 P53685 中的具有 1 至约 2、3、 5、7、10、15、20、30、50、75或更多保守性氨基酸取代的氨基酸序列；与GenBank登录编号 NP_036370、NP_501912、NP_085096、NP_036369 或 P53685 具有至少 60 %、70 %、80 %、90 %、 95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列。本发明的多肽也包括GenBank登录编 号 NP_036370、NP_501912、NP_085096、NP_036369 或 P53685 的同系物(homologs)(直系同 源(orthologs)与旁系同源(paralogs))、变体或片段。"SIRT3蛋白”意指瑟土因脱乙酰基酶蛋白家族的成员，和/或指SIRTl蛋白质的 同系物。在一个实施方式中，SIRT3蛋白质包括人类SIRT3(GenBank登录编号AAH01042、 NP_036371 或 NP_001017524)与小鼠 SIRT3 (GenBank 登录编号 NP_071878)蛋白质，及其等 同物与片段。在另一个实施方式中，SIRT3蛋白质包括这样的多肽其包含一段由(或基 本上由)列示于 GenBank 登录编号 AAH01042、NP_036371、NP_001017524 或 NP_071878 中 的氨基酸序列所组成的序列。SIRT3蛋白质包括含有下列氨基酸序列的全部或一部分的 多肽及其功能性片段列示于GenBank登录编号AAH01042、ΝΡ_036371、ΝΡ_001017524或 NP_071878 中的氨基酸序列；列示于 GenBank登录编号 AAH01042、NP_036371、NP_001017524 或NP_071878中的具有1至约2、3、5、7、10、15、20、30、50、75或更多保守性氨基酸取代的氨 基酸序列；与 GenBank 登录编号 AAH01042、NP_036371、NP_001017524 或 NP_071878 具有至 少60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列。本发明的多 肽也包括 GenBank 登录编号 AAH01042、NP_036371、NP_001017524 或 NP_071878 的同系物 (直系同源与旁系同源)、变体或片段。在另一个实施方式中，SIRT3蛋白质包括以线粒体 基质加工肽酶(MPP)和/或线粒体中间体肽酶(MIP)裂解而产生的SIRT3蛋白质片段。术语“全身性给药”、“全身地给药”、“周边性给药”及“周边地给药”为本领域所认 知的，且指主体组合物、治疗剂或其他物质的除了直接进入中枢神经系统以外的给药方式， 以使其能进入患者的全身，而因此进行代谢作用及其他类似过程。术语“治疗剂”为本领域所认知的，且是指任何其为生物学上、生理上或药理学上 具活性的、可于个体内局部或全身性起作用的化学部分。该术语也意指任何欲用于诊断、治 愈、减轻、治疗或预防疾病的物质，或用于增进动物或人体的希望的身体或精神发展和/或 状况的物质。术语“治疗功效”为本领域所认知的，且指动物(特别是哺乳动物，且更特别地为 人类)中由药理学上具活性的物质产生的局部或全身性功效。词组“治疗上有效量”意指， 使物质能以可应用至任何治疗的合理利益/风险比下，产生某种所希望的局部或全身功效 的量。此类物质的治疗上有效量将随欲受治疗的个体与疾病状况、个体的体重与年龄、疾病 状况的严重度、给药方式等而有所变化，其可由本领域技术人员决定。例如，本文所述的某 些组合物可以在可应用至此类治疗的合理利益/风险比下产生所希望功效的足够量来进 行给药。“治疗”某一病况或疾病指，治愈以及改善该病况或疾病的至少一种症状。术语“视力损伤”意指视力减弱，其在进行治疗时(例如手术)往往仅部份可逆或 不可逆。特别严重的视力损伤称为“盲”或“视觉丧失”，其意指视力完全丧失、视力变差大
其中X1、X2和X3中的两个独立地选自-CH-和-N-；X1、X2 和 X3 中的另一个为-CH-；R1为增溶基；R2选自苯基、低级烷基苯基、氟苯基以及含有N杂原子和任选的选自N、0或S的第 二杂原子的5员至6员杂环，其中所述杂环任选经甲基取代；R 为-H 或-CH3 ；Y和Z中的一个为-CH-，Y和Z中的另一个为-N-；R3选自氢、卤素、低级烷基、低级烷氧基、低级烷基硫基和低级烷基磺酰基；R*为-CH3或卤素；以及N为0至4的整数。在一些实施方式中，本发明的瑟土因调节性化合物由结构式(II)表示
于20/200以致无法经由矫正镜片改善，或视野小于20度直径(10度半径)。2.瑟土因调节剂在一个方面，本发明提供用于治疗和/或预防种类繁多的疾病与病症的新颖瑟土 因调节性化合物，上述疾病与病症包括，例如与老化或压力有关的疾病或病症、糖尿病、肥 胖症、神经变性性疾病、眼部疾病与病症、心血管疾病、血液凝固病症、炎症、癌症和/或潮 红等。增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物也可用于治疗个体中会因 增加线粒体活性而受益的疾病或病症，用于增进肌肉机能，用于增加肌肉ATP水平，或用于 治疗或预防与缺氧或缺血相关的肌肉组织损伤。本文中所揭示的其他化合物可适用于药物 组合物，和/或一种或多种本文中所揭示的方法。在一个具体实施方式
中，本发明的瑟土因调节性化合物由结构式(I)或其盐表 示 下列值应用于结构式(I)和(II)中。在一些实施方式中，X1为-N-。在一些实施方式中，X2为-N-。在一些实施方式中， X3为-N-。在一些实施方式中，X1和X2为-Ν-，以及X3为-CH-。在一些实施方式中，R2选自经取代或未经取代的苯基、噻唑基、嘧啶基、吡啶基和 吡唑基。在一些实施方式中，R2选自苯基、低级烷基苯基、氟苯基、甲基噻唑基、嘧啶基、吡啶 基和吡唑基。在一些这类实施方式中，R2选自苯基、低级烷基苯基例如甲基苯基、氟苯基、
2-甲基噻唑-4-基、吡啶基和吡唑-1-基。通常，R2为苯基、低级烷基苯基或吡啶基。在一些实施方式中，Y为-N-且Z为-CH-。在其他实施方式中，Z为-N-且Y为-CH-。 在一些实施方式中，其中Y为-N-且Z为-CH-。R2选自苯基、低级烷基苯基例如甲基苯基、
3-氟苯基和吡啶基，以及X1和X2为-N-且X3为-CH-。在一些实施方式中，R3选自氢、卤素、低级烷基、低级烷氧基、低级烷基硫基和低级 烷基磺酰基。在一些实施方式中，R3为氢。在具体的实施方式中，X1和X2为-Ν-，X3S-CH-, R2选自苯基、低级烷基苯基、3-氟苯基和吡啶基，并且R3选自氢、卤素、低级烷基和低级烷氧基。在一些实施方式中，R1为-NR4R4, R4和R4在每次出现时独立地选自氢或低级烷基。 在一些实施方式中，R4为低级烷基、氨基低级烷基、低级烷基氨基低级烷基、低级二烷基氨 基低级烷基、单环基低级烷基、单环基氨基低级烷基、或单环基(monocyclyl)，以及R5为低 级烷基或H。在具体的实施方式中，单环基为含氮的单环。在具体的实施方式中，R2选自苯 基、低级烷基苯基、3-氟苯基和吡啶基，X1和X2为-N-，X3为-CH-，以及R1为-NHR4，其中R4 为低级烷基、氨基低级烷基、烷基氨基低级烷基或低级二烷基氨基低级烷基。在一些实施方式中，R1为含氮单环基。在一些实施方式中，R1为含氮单环基，其中 连接点是环上的氮。在一些实施方式中，含氮单环基为4、5、6、7或8员杂环。在一些实施方 式中，杂环为5、6或7员杂环。在一些实施方式中，含氮杂环为经取代或未取代的噻唑基、 噁唑基、异噁唑基、异噻唑基(isothiozolyl)、三唑基(triazolyl)、四唑基(tetrazolyl)、 吡唑基、咪唑基、吡啶基(pyridinyl)、吡咯基、噻嗪基、噁嗪基、哌啶基(piperidinyl)、哌 嗪基、嘧啶基、吗啉基、硫代吗啉基和1，1_ 二氧-1-硫代吗啉基。在具体的实施方式中，R2 选自苯基、低级烷基苯基，3-氟苯基和吡啶基，X1和X2为-N-，X3为-CH-，并且R1为含氮单 环基，其中连接点是环上的氮。在一些实施方式中，R1由下式表示
13
其中该单环为 5、6 或 7 员杂环；W为-N(R6) _、_S (O2) _、_C (R6R6) -、-N(CO2R6) -、-0-或 -S- ；R'在每次出现时独立地选自H、低级烷基羰基、低级烷基羧基、低级烷基羰基氧基、低级 烷基氨基羰基、低级烷基羰基氨基和低级烷基；m为0至2 ；并且R6独立地选自H和低级烷
基。在具体的实施方式中，R1由下式表示工J^ R2选自苯基、低级烷基苯基、3-氟
苯基和吡啶基，X1和X2为-N-，以及X3为-CH-。 在一些实施方式中，R1为含氮杂环，其中连接点是环上的氮。在一些实施方式中， 该杂环包含2个环，例如桥或稠合杂环。在一些实施方式中，R1选自6，6-(例如1，2，3， 4-四氢喹啉)或6，5-(例如吲哚)稠合含氮杂环。在具体的实施方式中，R1由下式表示
〔j)其中M为-CH-或-N-，且环A为5-或6员的。在一些实施方式中，环A为5员的
以及M为-N-。在一些实施方式中，R1由下式表示 其中，G为 NR4R5、-SR6, -OR6、-SO2R6, -NCO2R6-NR4SO2R6 或单环基；ρ 为 0 至 3 ;v 为 0
至2 ；R4为低级烷基、单环基氨基或单环基低级烷基，并且R5为低级烷基或H ；R6独立地为H 或低级烷基，以及R1任选经一个或多个独立地选自氧基(OXO)、羰基、羧基、低级烷基羧基、 低级烷基、羟基、硫基、商素、单环基或氰基的取代基取代。示例性的单环基基团包括经取代 或未取代的吗啉基、硫代吗啉基、哌啶基、嘧啶基、1，1- 二氧-ι-硫代吗啉基、噻唑基和噁唑
基。在具体的实施方式中，R1由下式表示丨—V^/3 R2选自苯基、低级烷基苯基、3-氟
苯基和吡啶基，X1和X2为-N-，以及X3为-CH-。 在一些实施方式中，R1为-(CH2) kG，并且 G 为 _NR4R5、-SR6, -OR6、-SO2R6, -NCO2R6 或 单环基；k为1至3 ;R4为低级烷基、单环基氨基或单环基低级烷基，且R5为低级烷基或H ； 以及R6独立地为H或低级烷基。示例性的单环基基团包括上述提到的那些基团。在具体 的实施方式中，R2选自苯基、低级烷基苯基、3-氟苯基和吡啶基，X1和X2为-N-，X3为-CH-， 以及 R1 为-(CH2) kG，且 G 为-NR4R5、-SR6、-OR6、-SO2R6、-NCO2R6 或单环基。在一些实施方式中，R1选自含有至少两个杂原子的部分(moiety)。在一些这样的 实施方式中，R1的至少两个杂原子中的一个为氮。在一些实施方式中，R1包括至少两个杂原子，其中之一为氮，和单环。本发明的化合物(包括本发明的新化合物)也可用于本文所述的方法中。本文所述的化合物及其盐也包括它们相应的水合物(如半水合物、一水合物、二 水合物、三水合物、四水合物)和溶剂合物。用于制备溶剂合物和水合物的合适溶剂通常可 以由本领域技术人员进行选择。所述化合物及其盐可以无定形或晶体(包括共结晶和多晶型)形式存在。本发明的瑟土因调节性化合物有利地调节瑟土因蛋白的水平和/或活性，特别是 瑟土因蛋白的脱乙酰基酶活性。分别地或除了前述性质以外，本发明的某些瑟土因调节性化合物在该化合物有效 调节瑟土因蛋白质(例如，SIRTl和/或SIRT3蛋白)的脱乙酰基活性的浓度下，实质上不 具有下列一种或多种活性抑制PI3-激酶、抑制糖醛还原酶(aldoreductase)、抑制酪氨酸 激酶、转活化(transactivatdEGFR酪氨酸激酶、冠状动脉扩张或解痉挛活性。烷基为完全饱和的直链或支链非芳族烃。代表性地，直链或支链烷基基团具有1 至约20个碳原子(优选为1至约10个)，而环状烷基基团具有3至约10个碳原子(优选 为3至约8个)。直链与支链烷基基团的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁 基、叔丁基、戊基、己基、庚基及辛基。低级烷基为含有1 8个碳原子的直链或支链烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙 基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基等。任选地，低级烷基被一个或多个选 自下列的取代基所取代商素、氰基、氨基、羟基、硫基、羰基、氧基、低级烷基羰基、低级烷氧 基、低级烷基硫基、低级烷基羰基氧基、单环基、羧基、低级烷基羧基、低级烷基磺酰基、低级 烷基氨基和低级二烷基氨基。环烷基为环状烷基。烯基和炔基类似于烷基，但是分别含有一个或多个双键或三键。单环基包括5-7员芳基或杂芳基、3-7员环烷基烷基和5_7员非芳香性杂环基。 单环基任选地被一个或多个选自下列的基团所取代卤素、氰基、氨基、羟基、硫基、羰基、氧 基、低级烷基、低级烷氧基、低级烷基硫基、低级烷基羰基氧基、低级烷基羧基、低级烷氧基 低级烷基、低级烷基羰基、单环基羰基、芳基羰基、芳氧基、单环基氧基(monocyclyloxy)、低 级烷基磺酰基、羟基羰基、环丙基、低级烷基硫基、低级烷基亚磺酰基、低级烷基磺酰基、低 级烷基氨基、低级二烷基氨基、单环基(例如环烷基、吡啶基、苯基)、单环基低级烷基、氨基 羰基、低级烷基_氨基羰基、二(低级烷基)“氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、低级烷基_氨 基烷基氨基羰基、二(低级烷基)_氨基烷基氨基羰基、氨基、亚磺酰氨基(sulfonamide))、低 级烷基亚磺酰氨基、环状氨基(包括单环和稠合的双环氨基，例如吗啉代(morpholino)、吡 咯烷基、哌啶基(piperadinyl)、哌嗪基、八氢吡咯并[l，2_a]吡嗪_2_基)、环状氨基羰基 (例如吗啉代羰基、吡咯烷基羰基、哌啶基羰基、哌嗪基羰基)、环状氨基_羰基氨基(例如 吗啉代羰基氨基、吡咯烷基羰基氨基、哌啶基羰基氨基、哌嗪基羰基氨基)、环醚(例如四氢 呋喃基、四氢吡喃基)和卤代(四氢亚吡喃基(tetrahydropyranylidene))低级烷基(例 如氟(4-四氢压吡喃基)甲基)，以及除上述具体指明的基团之外的增溶基(solubilizing group)，特别是环状增溶基。示例性的单环基包括取代或未取代的杂环，如噻唑基、噁唑 基、噁嗪基、噻嗪基、噻二唑基(thiadiazolyl)、二噻烷基(dithianyl)、二氧杂环己基(dioxanyl)、异噁唑基、异噻唑基、三唑基、呋喃基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、卩比喃基、四唑 基、吡唑基、吡嗪、哒嗪基、咪唑基、吡啶基、吡咯基，二氢吡咯基，吡咯烷基，噻嗪基、噁嗪基、 哌啶基、哌嗪基、嘧啶基、吗啉基、四氢硫苯基、硫苯基、环己基、环戊基、环丙基、环丁基、环 庚基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丙基、氧杂环丙基(oxiranyl)、氮杂环丙基和硫代吗 啉基。杂环包括4-7员单环和8-12员双环包含一个或多个选自例如N、0和S原子的杂原 子。在一些实施方式中，杂环基选自饱和的、不饱和的、芳族基团。杂环任选经一个或多个选 自下述的取代基所取代商素、氰基、氨基、羟基、硫基、羰基、氧基、低级烷基、低级烷氧基、 低级烷基硫基、低级烷基羰基氧基、低级烷基羧基、低级烷氧基低级烷基、低级烷基羰基、单 环基羰基、芳基羰基、芳氧基、单环基氧基、低级烷基磺酰基、羟基羰基、环丙基、低级烷基硫 基、低级烷基亚磺酰基、低级烷基磺酰基、低级烷基氨基、低级二烷基氨基、单环基(例如环 烷基、吡啶基、苯基)、单环基低级烷基、氨基羰基、低级烷基-氨基羰基、二(低级烷基)_氨 基羰基、氨基烷基氨基羰基、低级烷基_氨基烷基氨基羰基、二(低级烷基)“氨基烷基氨基 羰基、氨基、亚磺酰氨基、低级烷基亚磺酰氨基、环状氨基(包括单环和稠合的双环氨基，例 如吗啉代、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、八氢吡咯[l，2_a]吡嗪-2-基)、环状氨基羰基(例如 吗啉代羰基、吡咯烷基羰基、哌啶基羰基、哌嗪基羰基)、环状氨基_羰基氨基(例如吗啉代 羰基氨基、吡咯烷基羰基氨基、哌啶基羰基氨基、哌嗪基羰基氨基)、环醚(例如，四氢呋喃 基、四氢吡喃基)、卤代(四氢亚吡喃基)低级烷基(例如氟(4-四氢亚吡喃基)甲基)，以 及除上述具体指明的基团之外的增溶基，特别是环状增溶基。芳族基团(芳基)包括碳环类芳族基团例如苯基、萘基与蒽基，及杂芳基基团例如 咪唑基、噻吩基、呋喃基、批啶基、嘧啶基、批喃基、批唑基、批咯基、批嗪基、噻唑基、噁唑基 与四唑基。芳族基团也包括稠合多环芳族环系，其中碳环类芳族环或杂芳基环为经稠合至一 个或多个其他杂芳基环。实例包括苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、苯并噻唑基、 苯并噁唑基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基及异吲哚基。位于烷基、烯基、炔基、单环基或芳基(碳环类与杂芳基)上的适宜取代基，实 质上不会干扰所揭示化合物可具有的一种或多种本文中所揭示特性。当具有某一取代 基的化合物相较于不具有该取代基的化合物，其特性规模减小超过约50%时，则该取代 基实质上干扰化合物的特性。一般而言，合适取代基的实例包括-0H、卤素(-Br、-Cl、-I 和-F)、-0Ra、-0-C0R\-C0R\-C(0) Ra、_CN、-NO2、-C00H、-C00R\-OCO2Ra,-C(0)NRaRb,-OC(0) NRaRb、-SO3H, -NH2, _NHRa、-N(RaRb)、_C00Ra、-CHO, -CONH2, -CONffif、-CON(RaRb)、_NHC0Ra、-N RC0Ra、-NHCONH2、-NHCONRaH, -NHCON(RaRb)、-NRcCONH2、-NRcCONRaH, -NRcCON(RaRb)、-C(= NH)-NH2、-C( = NH)-NHRa、_C( = NH)-N (RaRb)、-C( = NRc)-NH2、_C( = NRc)-NHRa、_C(= NRc) -N(RaRb)、-NH-C ( = NH)-NH2、-NH-C ( = NH)-NHRa、-NH-C ( = NH)-N (RaRb)、-NH-C (= NRc)-NH2、-NH-C ( = NRc)-NHRa、-NH-C ( = NRc)-N (RaRb)、-NRdH-C ( = NH)-NH2、-NRd-C (= NH) -NHRa、-NRd-C ( = NH) -N (RaRb)、-NRd-C ( = NRc) -NH2、-NRd-C ( = NRc) _NHRa、-NRd-C ( = NRc) -N(RaRb)、-NHNH2、-NHNHRa、-NHRaRb、-S02NH2、-S02NHRa、-S02NRaRb、_CH = CHRa、-CH = CRaRb,-CRc =CRaRb、CRc = CHRa、-CRc = CRaRb、_CCRa、-SH、-SOkRa(k 为 0、1 或 2)、-S (O)kORa(k 为 0、1 或 2)及-NH-C ( = NH)-NH2。Ra-Rd均独立地为任选取代的基团，选自脂族、苯甲基或芳族基团，优选烷基、苯甲基或芳基基团。位于Ra-Rd上的任选取代基选自ΝΗ2、ΝΗ((ν4脂族)、N(Ci_4脂 族)2、卤素、Ch 脂族、OH、0 ((V4 脂族)、N02、CN、CO2H、CO2 (C1^4 脂族)、0 (卤基 C1^4 脂族)或 卤基CV4脂族，其中各前述的CV4脂族基团未经取代。此外，-NRaRb，一起，也可形成经取代 或未经取代的非芳族杂环基团。非芳族杂环基团或芳基基团也可具有脂族或经取代脂族基 团作为取代基。经取代脂族基团也可具有非芳族杂环、经取代的非芳族杂环、芳基或经取代 的芳基基团做为取代基。经取代脂族、非芳族杂环基团、经取代的芳基或经取代的苯甲基可 具有一个以上的取代基。一般而言，位于芳基环上的合适取代基选自增溶基，卤素；_R° ；-OR0 ；-SR0 ； 1，2-亚甲二氧基；1，2-亚乙二氧基；任选经R°取代的苯基(Ph)；任选经R ° 取代的-O(Ph) ；-(CH2) ^(Ph)，任选经R °取代；-CH = CH(Ph)，任选经R °取 代；-NO2 ；-CN ；-N (R ° )2 ;-C (O)C (O)R ° ；-C (0) CH2C (0) R ° ；-CO2R ° ；-C(O) R° ；-S(O)2Rd ；-SO2NOT )2;-S(0)R° ；-NR0 S02N(R° )2 ;_NR° SO2Rd ；_C( = S)N(R° )2 ； 或-C( = NH)-N(R° )2;或其中R°每次出现时独立地选自氢、任选经取代的Cp6脂族、未经 取代的5-6员杂芳基或杂环、苯基、-O(Ph)或-CH2(Ph),或者(尽管如前述之定义)R°独立 出现两次时(位于相同取代基或不同取代基上)与各R°基团所键合的原子一起形成具有 0-3个独立选自氮、氧或硫杂原子的3-8-员环烷基、杂环基、芳基或杂芳基环。位于R°的 脂族基团上的任选取代基选自NH2、NH((V4脂族)、N^4脂族)2、卤素、C1^4脂族、OH、0((V4 脂族),NO2XNXO2HXO2 (C1^4脂族)、0(卤基Ch脂族)或卤基C1^4脂族，其中各前述的R0 的Cy脂族基团未经取代。本发明设想的取代基与变体的组合，是会形成稳定化合物的那些。如用于本文，术 语“稳定的”意指化合物拥有足以令其制造的稳定性，且可使该化合物的完整性维持一段， 可用于本文中所详述目的的足够时间。如本文中所使用的，“增溶基”为具有足以促进或增加其中有包括该基团的化合物 的水溶解度(当相较于不包括该基团的类似化合物时)的亲水性特征部份。亲水性特征可 通过任何方式实现，例如通过包括可在用以形成带电荷部份的条件下(例如，羧酸、磺酸、 磷酸、胺类等)离子化的官能基；其包括永久性电荷的基团(例如季铵基)；和/或杂原子 或杂原子基团(例如 0、S、N、NH、N- (CH2) y-R\ N- (CH2) y_C (0) Ra、N- (CH2) y_C (0) ORa、N- (CH2) y-S (O)2Ra-, N-(CH2)y-S(O)2ORa, N-(CH2)y_C(0)NRaRa 等，其中 Ra 选自氢、低碳数烷基、低碳数 环烷基、(C6-C14)芳基、苯基、萘基、(C7-C20)芳基烷基及苯甲基，其中Ra为任选经取代；且 y为介于0至6的整数)、任选取代的杂环基团(例如-(CH2)n-Rb, -(CH2)n-C(O)-Rb、-(CH2) n-0-(CH2)n-Rb，其中Rb选自任选经取代的饱和单环杂环、任选经取代的饱和双环稠合杂环、 任选经取代的饱和双环螺杂环、任选经取代的杂芳基及任选经取代的部份经取代的非芳基 杂环；且η为介于0至2的整数)。应了解，存在于Ra或Rb上的取代基并不需要较其包含 于本发明范围内的未经取代的相对部份促进或增加水溶解度。所需要的是使此类取代基不 会显著逆转由未经取代的Ra或Rb部份所带来的水溶解度的增加。在一个实施方式中，增溶基使缺乏该增溶基的相应化合物的水溶解度增加至少5 倍，优选至少10倍，更优选至少20倍且最优选至少50倍。在一个优选的实施方式中，增溶基为具有下式的部份- (CH2) n-R100-N (R101) (R101)，其中
η 选自 0、1 或 2;R100 选自键、-C (0)-或-0 (CH2) η ；且各Rlt11独立地选自a.氢；b. C1-C4直链或支链烷基，其中该烷基任选地经卤基、CN、OH、0-(C1-C4直链或支链 烷基)、N(R/ )0V )或=0取代； g. 二个Rlt11部份共同与其所键合的氮原子一起形成含有1至3个额外N原子的 5-员杂芳基环，其中该杂芳基环任选地经R/取代；其中各Z 独立地选自-0-、-S-、-NR1 ‘-或-C (R5°) (R5q) _，其中Z20, Z21, Z22 及 Z23 中至少三个为-C (R5°) (R5q)-；Z24、Z25, Z26, Z27 及 Z28 中至少-三个为-C (R5°) (R5q)-；Z30、Z31 > Z32 及 Z33 中至少四个为-C(R5Q) (R5q)-；且Z34、Z35、Z36、Z37 及 Z38 中至少四个为-C(R5q) (R5q)-；各R1 ‘独立地选自氢或C1-C3直链或支链烷基，任选地经一个或多个独立地选自 卤基、-CN、-OH、-OCH3> -NH2, -NH(CH3)、-N(CH3)2 或=0 的取代基取代；各R5tl独立地选自R/、卤基、CN、OlCHC1-C4直链或支链烷基)、N (R1' ) OV )、 = CR1' ,SR1'、=NR/、=NOR1'或=0 ；任何二个适宜的非环状R5tl任选地直接，或经由C1至C2亚烷基(alkylene)、亚烯 基(alkenylene)或烷二亚基桥(alkanediylidene)彼此键合，而产生双环稠合或螺环；且
构，任选地经苯并稠合或稠合至单环杂芳基而产生双环。为求清楚，术语"C1至C2亚烷基、亚烯基或烷二亚基桥(alkanediylidenebridge)，， 意指多价结构-CH2-、-CH2-CH2-、-CH =，= CH-,-CH = CH-或=CH-CH =。任选地彼此键合 的二个Rsi部份，可位于相同碳原子或不同碳原子上。前者产生螺双环，而后者产生稠合双 环。对本领域普通技术人员显而易见的是，当二个R5tl彼此键合而形成环(直接或经由前述 其中一种桥连)时，将会失去位于各R5tl上的一个或多个末端氢原子。于是，可用于形成环 的“适宜的非环R5°”部份，为包含至少一个末端氢原子的非环状R5°。在另一实施方式中，增溶基为具有下式的部份-(CH2)n-0-R1(l1，其中η及Rlt11如前 述所定义。 在再一实施方式中，增溶基为具有下式的部份_ (CH2)n-c (O)-R1'，其中η及R1 ‘ 如前述所定义。 在一些实施方式中，增溶基选自-(CH2)n-Rlt12,其中η为0、1或2，优选为2，且Rltl2
其中R1'基团如前述所定义。在一些具体实施方式
中，增溶基选自2-二甲基氨基乙基氨基甲酰基、哌嗪-1-基 羰基、哌嗪基甲基、二甲基氨基甲基、4-甲基哌嗪-1-基甲基、4-氨基哌啶-1-基甲基、4-氟
哌啶-1-基甲基、吗啉基甲基、批咯烷-1-基甲基、2-氧-4-苯甲基哌嗪-1-基甲基、4-苯 甲基哌嗪-1-基甲基、3-氧哌嗪-1-基甲基、哌啶-1-基甲基、哌嗪-1-基乙基、2，3- 二氧 丙基氨基甲基、噻唑烷-3-基甲基、4-乙酰基哌嗪-1-基甲基、4-乙酰基哌嗪-1-基、吗啉 基、3，3-二氟氮杂环丁烷-1-基甲基、2H-四唑-5-基甲基、硫代吗啉-4-基甲基、1-氧硫 代吗啉-4-基甲基、1，1- 二氧硫代吗啉-4-基甲基、IH-咪唑-1-基甲基、3，5- 二甲基哌 嗪-1-基甲基、4-羟基哌啶-1-基甲基、N-甲基(1-乙酰基哌啶-4-基)-氨基甲基、N-甲 基奎宁环-3-基-氨基甲基、1H-1，2，4-三唑-1-基甲基、1-甲基哌啶-3-基-氧基甲基或 4-氟哌啶-1-基。在某种程度上，没有包括在前述所列任何定义中的，术语“增溶基”也包括所揭示 接附至1-环丙基-6-氟-1，4-二氢-4-氧喹啉-3-羧酸(环丙沙星(ciprofloxacin)) 及其衍生物的7-位置的部份，如揭示于PCT公开W02005/026165、WO 2005/049602与WO 2005/033108，及欧洲专利公开 EP0343524、EP 0688772、EP 0153163、EP 0159174;以及于 美国专利公开2006/0035891中所描述的“水-增溶基”。将这些专利公开所揭示的内容均 以引用方式纳入本文。本文中所揭示的化合物也包括经部份及完全氘化的变体。在某些具体实施方式
中，存在有一个或多个氘原子以供进行动力学研究。本领域普通技术人员可选择有此类氘 原子存在的部位。本发明也包括本文所述瑟土因调节性化合物的盐类，特别是药学上可接受的盐 类。拥有充分酸性、充分碱性或该二性的官能基的本发明化合物，可和许多的无机碱类、及 无机与有机酸类中的任一种形成盐类。或者，固有带电荷的化合物(例如具有季氮的化合 物)可和适当反荷离子(例如，卤化物如溴化物、氯化物或氟化物，特别是溴化物)形成盐类。一般用于形成酸加成盐的酸类为无机酸类，例如氢氯酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷 酸等类，及有机酸类例如P-甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、P-溴苯基-磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬 酸、苯甲酸、醋酸等类。此类盐类的实例包括硫酸盐、焦硫酸盐、酸式硫酸盐、亚硫酸盐、酸式 亚硫酸盐、磷酸盐、单氢磷酸盐、二氢磷酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、 醋酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、 草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、反丁烯二酸盐、顺丁烯二酸盐、丁炔-1， 4-二-酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、 羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、酞酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、 苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、Y -羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、 萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐等类。碱加成盐包括衍生自无机碱类，例如铵或碱金属或碱土金属氢氧化物、碳酸盐、碳 酸氢盐等那些盐。此类可用于制备本发明盐类的碱类因此包括氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化 铵、碳酸钾等。根据另一实施方式，本发明提供制造前述所定义的瑟土因调节性化合物的方法。 这些化合物可使用已知技术合成得到。有利地，这些化合物可由容易获得的起始物料方便 地合成得到。可用于合成本文所述瑟土因调节性化合物的合成化学转化作用与方法在本领域中是已知的，且包括，例如那些描述于R. Larock, Comprehensive Organic Transformations (综合有机转化作用)(I989) ；T. W. Greene 和 P. G. M. Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis (有机合成的保护基)，第 二版，(1991) ；L. Fieser 与 M. Fieser, Fieser and Fieser' s Reagents for Organic Synthesis (用于有机合成的费 瑟与费瑟氏i式齐Ll ) (1994)；及 L. Paquette 编著，Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis (有机合成试剂的百科全书)(1995)中的作用与方法。在一例举性实施方式中，瑟土因调节性化合物可能横跨细胞的胞质膜。例如，化合 物可具有至少约20 %、50 %、75 %、80 %、90 %或95 %的细胞-可穿透性。本文所述的瑟土因调节性化合物也可具有一种或多种下列特征化合物可基本上 对细胞或个体为无毒性；化合物可为具2000amU或以下、IOOOamu或以下的有机分子或小分 子；化合物可于正常大气条件下具有至少为约30天、60天、120天、6个月或1年的半衰期； 化合物可于溶液中具有至少为约30天、60天、120天、6个月或1年的半衰期；瑟土因调节 性化合物可于溶液中，较白藜芦醇(resveratrol)稳定至少约50%、2倍、5倍、10倍、30倍、 50倍或100倍；瑟土因调节性化合物可促进DNA修复因子Ku70的脱乙酰基化作用；瑟土因 调节性化合物可促进RelA/p65的脱乙酰基化作用；化合物可增加一般转换速率，及增强细 胞对TNF-所诱发细胞凋亡的敏感性。在一些实施方式中，瑟土因调节性化合物在(例如体内)有效调节瑟土因的脱乙 酰基酶活性的浓度下，不具有任何抑制第I类组蛋白脱乙酰基酶(HDACs)、第II类HDAC或 HDACs I与II的实质能力。例如，在优选的具体实施方式
中，瑟土因调节性化合物为瑟土 因_活化性化合物，且选择那些具有对活化瑟土因脱乙酰基酶活性的EC5tl值，较对于抑制 HDAC I和/或HDAC II的EC5tl值少至少5倍，且甚至优选少至少10倍、100倍或甚至1000 倍的瑟土因-活化性化合物。用于分析HDAC I和/或HDAC II活性的方法为本领域所熟 知，且进行此类分析的试剂盒(kit)可于商业上购得。参见例如，Bi0Visi0n，Inc. (Mountain View, CA ；网址 biovision. com)及 Thomas Scientific (Swedesboro, NJ ；网址 tomassci. com) ο在一些实施方式中，瑟土因调节性化合物不具有任何调节瑟土因同系物的实质能 力。在一个实施方式中，人类瑟土因蛋白质的活化剂，在(例如活体内)有效活化人类瑟土 因的脱乙酰基酶活性的浓度下，可能不具有任何活化得自低等真核生物，特别是酵母或人 类病原菌的瑟土因蛋白质的实质能力。例如，瑟土因_活化性化合物可选择具有对于活化 人类瑟土因(例如SIRTl和/或SIRT3)脱乙酰基酶活性的EC5tl值，较对于活化酵母瑟土因 (例如Sir2 (如念珠菌属、酿酒酵母等))的EC5tl值少至少5倍，且甚至优选少至少10倍、 100倍或甚至1000倍的那些化合物。在另一具体实施方式
中，得自低等真核生物(特别是 酵母或人类病原菌)的瑟土因蛋白质的抑制剂，在(例如活体内)有效抑制得自低等真核 生物的瑟土因蛋白质的脱乙酰基酶活性的浓度下，不具有任何抑制得自人类的瑟土因蛋白 质的实质能力。例如，瑟土因抑制性化合物可选择具有对于抑制人类瑟土因(例如SIRTl 和/或SIRT3)脱乙酰基酶活性的IC5tl值，较对于抑制酵母瑟土因(例如Sir2(如念珠菌 属、酿酒酵母等))的IC5tl值少至少5倍，且甚至优选少至少10倍、100倍或甚至1000倍的 那些化合物。在一些实施方式中，瑟土因调节性化合物可具有调节一种或多种人类瑟土因同系物，诸如(例如)一种或多种人类 SIRT1、SIRT2、SIRT3、SIRT4、SIRT5、SIRT6 或 SIRT7 的能 力。在一实施方式中，瑟土因调节性化合物具有调节SIRTl及SIRT3蛋白质的能力。在其他实施方式中，SIRTl调节剂在(例如活体内)有效调节人类SIRTl的脱乙 酰基酶活性的浓度下，不具有调节其他瑟土因蛋白质同系物，诸如(例如)一种或多种人类 SIRT2、SIRT3、SIRT4、SIRT5、SIRT6或SIRT7的实质能力。例如，瑟土因调节性化合物可选 择具有对于调节人类SIRTl脱乙酰基酶活性的ED5tl值，较对于调节一种或多种人类SIRT2、 SIRT3、SIRT3、SIRT4、SIRT5、SIRT6或SIRT7的ED50值少至少5倍，且甚至优选少至少10 倍、100倍或甚至1000倍的那些化合物。在一个实施方式中，SIRTl调节剂不具有任何调节 SIRT3蛋白质的实质能力。在其他实施方式中，SIRT3调节剂在(例如活体内)有效调节人类SIRT3的脱乙 酰基酶活性的浓度下，不具有调节其他瑟土因蛋白质同系物，诸如(例如)一种或多种人类 SIRTU SIRT2、SIRT4、SIRT5、SIRT6或SIRT7的实质能力。例如，瑟土因调节性化合物可选 择具有对于调节人类SIRT3脱乙酰基酶活性的ED5tl值，较对于调节一种或多种人类SIRT1、 SIRT2、SIRT4、SIRT5、SIRT6或SIRT7的ED50值少至少5倍，且甚至优选少至少10倍、100 倍或甚至1000倍的那些化合物。在一个实施方式中，SIRT3调节剂不具有任何调节SIRTl 蛋白质的实质能力。在一些实施方式中，瑟土因调节性化合物可具有对于瑟土因蛋白质的结合亲和力 为约IO-9MUO-iqMUO-11MUO-12或以下。瑟土因调节性化合物可减少(活化剂)或增加(抑 制剂)瑟土因蛋白质对于其底物或NAD+(或其他辅因子)的表观Km值达至少约2、3、4、5、 10、20、30、50或100倍。在一些实施方式中，Km值是使用本文所述的质谱分析测定得到的。 优选的活化性化合物减少瑟土因对于其底物或辅因子的Km值，至较由白藜芦醇在相似浓 度下所造成的更大程度，或减少瑟土因对于其底物或辅因子的Km值，使其相似于由白藜芦 醇在较低浓度下所造成的程度。瑟土因调节性化合物可增加瑟土因蛋白质的Vmax值至少 约2、3、4、5、10、20、30、50或100倍。瑟土因调节性化合物可具有的对于调节SIRTl和/或 SIRT3蛋白质的脱乙酰基酶活性的ED5tl值为少于约InM，少于约ΙΟηΜ，少于约ΙΟΟηΜ，少于 约1 μ M，少于约10 μ Μ,少于约100 μ Μ,或从约1-ΙΟηΜ，从约ΙΟ-ΙΟΟηΜ，从约0. 1-luM,从约 1-10 μ M或从约10-100 μ Μ。瑟土因调节性化合物可调节SIRTl和/或SIRT3蛋白质的脱 乙酰基酶活性达至少约5、10、20、30、50或100倍，是通过细胞分析或以细胞为基础的分析 (cell basedassay)中测量得到。瑟土因-活化性化合物可促使诱导瑟土因蛋白质的脱乙 酰基酶活性，相对于相同浓度的白藜芦醇大至少约10 %、30 %、50 %、80 %、2倍、5倍、10倍、 50倍或100倍。瑟土因调节性化合物可具有对于调节SIRT5的ED5tl值，较对于调节SIRTl 和/或SIRT3蛋白质的ED5tl值大至少约10倍、20倍、30倍、50倍。3.例举性用途在某些方面，本发明提供用于调节瑟土因蛋白的水平和/或活性的方法，及其使 用方法。在某些实施方式中，本发明提供使用瑟土因调节性化合物的方法，其中瑟土因调 节性化合物活化瑟土因蛋白，例如增加瑟土因蛋白的水平和/或活性。增加瑟土因蛋白的 水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可用于各种治疗应用，包括(例如)增加细胞寿命， 及治疗和/或预防许多各种疾病与病症，包括(例如)与老化或压力有关的疾病或病症、糖尿病、肥胖、神经变性性疾病、心血管疾病、血液凝结病症、炎症、癌症和/或潮红等。该方法 包含将药学上有效量的瑟土因调节性化合物，例如瑟土因_活化性化合物给药予对其有需 要的个体。虽然申请人无意受限于理论，但相信本发明的活化剂可在瑟土因蛋白内的相同部 位(例如，活性位置或影响该活性位置的Km或Vmax的位置)与瑟土因相互作用。认为此 即某些类瑟土因活化剂与抑制剂为何能具有实质结构相似性的原因。在某些实施方式中，本文中所述的瑟土因调节性化合物可单独使用或与其他化合 物组合。在一个实施方式中，可将两种或更多种瑟土因调节性化合物的混合物给药予对其 有需要的个体。在另一个实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节 性化合物可与一种或多种下列化合物一起进行给药白藜芦醇、紫铆花素(butein)、非瑟 素(fisetin)、白皮杉醇(piceatarmol)或槲皮黄素(quercetin)。在一个例举性的实施 方式中，可将增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物与烟酸组合进行给 药。在另一个实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可与 一种或多种下列化合物进行给药烟酰胺(NAM)、舒拉宁(suranim) ；NF023 (—种G-蛋白 质拮抗剂)；NF279(—种嘌呤能受体拮抗剂)；托洛索(Trolox) (6-羟基-2，5，7，8，四甲基 苯并二氢吡喃-2-羧酸)；(-)_表没食子儿茶精(印18&110(^切吐^1)(羟基位于位置3，5， 7,3'，4'，5' );(-)_表没食子儿茶精没食子酸酯(羟基位置5，7，3'，4'，5'，且没食 子酸酯位于位置3)；氯化矢车菊素(cyanidincholoride) (3，5，7，3' ,4'-五羟基氯化黄 鐵盐(3，5，7，3'，4' -pentahydroxyfIavyliumchloride))；氯化翠雀色素(delphinidin chloride) (3,5,7,3'，4'，5'-六羟基氯化黄鐺盐)；杨梅黄酮(myricetin)(大麻双酮 (cannabiscetin) ；3, 5, 7, 3' ,4' ,5'-六羟基黄酮)；3，7，3 ‘ ,4' ,5' _ 五羟基黄酮; 棉黄素(gossypetin) (3，5，7，8，3'，4'-六羟基黄酮)、瑟汀诺(sirtinol)；及斯托米辛 (splitomicin)。在又另一实施方式中，瑟土因调节性化合物可与一种或多种用于治疗或预 防各种疾病包括(例如)癌症、糖尿病、神经变性性疾病、心血管疾病、血液凝结、炎症、潮 红、肥胖、老化、压力等的治疗剂一起进行给药。在多种实施方式中，包含瑟土因调节性化合 物的组合疗法可指(1)其包含一种或多种瑟土因调节性化合物与一种或多种治疗剂(例 如，一种或多种于本文中所描述的治疗剂)的药物组合物；及(2) —种或多种瑟土因调节性 化合物与一种或多种治疗剂的共同给药，其中瑟土因调节性化合物与治疗剂尚未配制在同 一组合物中(但是可存在于相同试剂盒或包装内，例如发泡包装或其他多室包装；存在于 可由使用者自行分开的相连结的、分别密封的容器(例如锡箔小袋)内；或存在于其中瑟土 因调节性化合物与其他治疗剂处于分开的容器中的试剂盒内)。当使用分开的制剂时，瑟土 因调节性化合物可与另一治疗剂的给药同时、间歇、交错、在其之前、接续在其之后，或这些 方式的组合进行给药。在某些实施方式中，使用瑟土因调节性化合物以减少、预防或治疗疾病或病症的 方法，也可包括增加瑟土因(例如人类SIRT1、SIRT2和/或SIRT3，或其同系物)的蛋白质 水平。增加蛋白质水平可通过将编码瑟土因的一个或多个核酸拷贝导入细胞中而达成。例 如，可通过将编码瑟土因的核酸导入哺乳动物细胞中，而增加哺乳动物细胞中瑟土因的水 平，例如通过将编码列示于GenBank登录编号NP_036370的氨基酸序列的核酸导入，而增加 SIRTl的水平，和/或通过将编码列示于GenBank登录编号AAH01042的氨基酸序列的核酸导入，而增加SIRT3的水平。经导入细胞中以增加瑟土因蛋白质水平的核酸，可编码与瑟土因(例如SIRTl和/ 或SIRT3蛋白)的序列至少约80%、85%、90%、95%、98%或99%相同的蛋白质。例如，编 码该蛋白质的核酸可与编码SIRTl (例如GenBank登录编号NM_012238)和/或SIRT3(例 如GenBank登录编号BC001042)蛋白的核酸至少约80%、85%、90%、95%、98%或99%相 同。核酸也可为(优选于严格杂交条件下)与编码野生型瑟土因(例如SIRTl和/或SIRT3 蛋白)的核酸杂交的核酸。严格杂交条件可包括杂交并且在0.2XSSC中于65°C下进行清 洗。当使用编码与野生型瑟土因蛋白不同的蛋白质(例如其为野生型瑟土因的片段)的核 酸时，该蛋白质优选是生物学活性的，例如能够进行脱乙酰基化作用。仅需要在细胞中表达 瑟土因具有生物学活性的部份。例如，与具有GenBank登录编号NP_036370的野生型SIRTl 不同的蛋白质，优选含有其核心结构。核心结构有时指GenBank登录编号NP_036370的氨 基酸62-293，其由GenBank登录编号NM_012238的核苷酸237至932编码，其包含NAD结 合以及底物结合结构域。SIRTl的核心结构域也可指GenBank登录编号NP_036370的氨基 酸261至447，其由GenBank登录编号ΝΜ_012238的核苷酸834至1394所编码；指GenBank 登录编号NP_036370的氨基酸242至493，其由GenBank登录编号NM_012238的核苷酸777 至1532所编码；或指GenBank登录编号NP_036370的氨基酸254至495，其由GenBank登 录编号NM_012238的核苷酸813至1538所编码。可根据本领域已知的方法测定蛋白质是 否保留生物功能，例如脱乙酰基化能力。在某些实施方式中，使用瑟土因调节性化合物以减少、预防或治疗疾病或病症的 方法，也可包括降低瑟土因(例如人类SIRT1、SIRT2和/或SIRT3，或其同系物)的蛋白质 水平。降低瑟土因蛋白水平可根据本领域已知的方法达成。例如，可于细胞中表达靶向瑟 土因的siRNA、反义核酸或核酶。也可使用显性阴性(dominant negative)瑟土因突变体， 例如不能进行脱乙酰基化的突变体。例如，可使用经描述于(例如)Luo等人(2001)Cell 107 137中的SIRTl突变体H363Y。或者，可使用抑制转录作用的试剂。用于调节瑟土因蛋白水平的方法也包括，调节编码瑟土因的基因转录作用的方 法，稳定化/去稳定化相对应mRNA的方法，及其他本领域已知的方法。老化/压力在一个实施方式中，本发明提供通过将细胞与本发明增加瑟土因蛋白的水平和/ 或活性的瑟土因调节性化合物接触，而延长细胞寿命、增加细胞增生能力、减缓细胞老化、 促进细胞存活、延迟细胞衰老、模拟热限制功效、增加细胞对压力的抗性或防止细胞凋亡的 方法。在一个例举性的实施方式中，该方法包含将细胞与瑟土因-活化性化合物接触。本文所述的方法可用于增加细胞、特别是初生细胞(即得自生物体，例如人类的 细胞)在细胞培养物中可保持存活的时间量。胚胎干细胞(ES)与多潜能细胞(pluripotent cell)及由其分化的细胞，也可用增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合 物来处理，以使细胞(或其子代)在培养物中保持较长的时间。此类细胞也可用于(例如) 在进行离体修饰(ex vivomodification)后移植入个体中。在一个实施方式中，可用增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合 物处理要长时间保存的细胞。细胞可存在于悬浮液(例如血细胞、血清、生物学生长培养基 等)中，或存在于组织或器官中。例如，可用增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物处理收集自个体的、供输血目的的血液，使血细胞保存较长的时间。此外，用于 法医目的的血液也可使用增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物做保 存。其他可经处理以延长其寿命或保护其对抗凋亡的细胞，包括供消费的细胞例如得自非 人类哺乳动物(例如肉类)的细胞，或植物细胞(例如蔬菜)。也可在哺乳动物、植物、昆虫或微生物的发育及生长期施用增加瑟土因蛋白的水 平和/或活性的瑟土因调节性化合物，以(例如)改变、减缓或加速发育和/或生长过程。在另一个实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物 可用于处理有用于供移植或细胞疗法的细胞，包括(例如)固体组织移植物、器官移植物、 细胞悬浮液、干细胞、骨髓细胞等。细胞或组织可为自体移植、同种异体移植(allograft)、 同种同基因移植(syngraft)或异种移植。可将细胞或组织于给药/植入之前、于给药/植 入的同时、以及于给药/植入个体之后，以瑟土因调节性化合物进行处理。可将细胞或组织 于从供给者个体取出之前、于从供给者个体取后离体地(ex vivo)、或于植入接受体之后进 行处理。例如，可用瑟土因调节性化合物对供给者或接受体个体进行全身性处理，或增加瑟 土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物对细胞/组织的亚型(subset)进行局 部性处理。在某些实施方式中，可额外地用另一种有用于延长移植物存活的治疗剂，例如免 疫抑制剂、细胞因子、血管生成因子等处理细胞或组织。在其他的实施方式中，可在体内用增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调 节性化合物处理细胞，以增加其寿命或防止细胞凋亡。例如，可通过增加瑟土因蛋白的水平 和/或活性的瑟土因调节性化合物来处理皮肤或表皮细胞，而保护皮肤不会老化(例如，发 展出皱纹、丧失弹性等)。在一个例举性的实施方式中，将皮肤与包含增加瑟土因蛋白的水 平和/或活性的瑟土因调节性化合物的药物或化妆品组合物接触。可根据本文所述方法处 理的例举性皮肤困扰或皮肤病况，包括与炎症、晒伤或自然老化相关或由其引起的病症或 疾病。例如，组合物可用于预防或治疗接触性皮炎(包括刺激性接触性皮炎与过敏性接触 性皮炎)、特应性皮肤炎(也称作变应性湿疹)、光化性角化病、角质化病症(包括湿疹)、大 疱性表皮松解病(包括天疱疮(penfigus))、剥脱性皮肤炎、脂溢性皮肤炎、红斑(包括多形 红斑与结节性红斑)、由日晒或其他光源造成的损伤、盘状红斑性狼疮、皮肌炎、牛皮癣、皮 肤癌及自然老化作用。在另一个实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因 调节性化合物可用于治疗创伤和/或烧伤以促进愈合，包括(例如)第一度、第二度或第三 度烧伤和/或热烧伤、化学烧伤或电烧伤。可将制剂局部地给药至皮肤或粘膜组织。包含一种或多种增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物的局 部制剂，也可用作为预防性(例如化学预防性)组合物。当使用于化学预防性方法时，在特 定个体出现可目视病况之前处理易感染的皮肤。可将瑟土因调节性化合物局部或全身性地递送至个体。在一个实施方式中，通过 注射、局部制剂等，将瑟土因调节性化合物局部地给药至个体的组织或器官。在另一个实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物 可用于，治疗或预防因个体中细胞衰老所诱发或加重的疾病或病况；用以减低个体衰老速 度(例如在开始衰老之后)的方法；用以延长个体寿命的方法；用以治疗或预防与寿命有 关的疾病或病况的方法；用以治疗或预防与细胞增殖能力有关的疾病或病况的方法；及用 以治疗或预防由细胞损伤或死亡所导致的疾病或病况的方法。在某些实施方式中，该方法并非通过减低那些缩短个体寿命的疾病的发生率而其作用。在某些实施方式中，该方法并 非通过减低因疾病(例如癌症)所造成的致死率而起作用。在又另一个实施方式中，为了一般性地增加个体的细胞寿命以及为了保护其细胞 对抗压力和/或对抗凋亡的目的，可将增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性 化合物给药予个体。可以相信以本文所述的化合物治疗个体，类似于使个体经历毒物刺激 作用(hormesis)(即，对生物体有益且可延长其寿命的温和压力)。可将增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物给药予个体，以预 防老化及与老化有关的后果或疾病，例如中风、心脏病、心脏衰竭、关节炎、高血压及阿尔茨 海默病。其他可被治疗的病况包括例如与眼部老化关联的病症，例如白内障、青光眼及黄 斑变性。也可将增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物给药予个体，用 来治疗与细胞死亡关联的疾病，例如慢性疾病，以保护细胞不死亡的目的。例举性疾病包 括那些与神经细胞死亡、神经元功能障碍、或肌肉细胞死亡或功能障碍关联的疾病，例如帕 金森病、阿尔茨海默病、多发性硬化、侧索硬化(amniotropic lateral sclerosis)与肌肉 萎缩症；AIDS ；暴发性肝炎；与脑退化相关的疾病，例如克-雅综合征(Creutzfeld-Jakob disease)、色素性视网膜炎与小脑变性(cerebellar degeneration)；脊髓发育不良例如再 生障碍性贫血；缺血性疾病(ischemic disease)例如心肌梗塞与中风；肝病例如酒精性肝 炎、乙型肝炎与丙型肝炎；关节疾病例如骨关节炎；粥样动脉硬化；脱发；由UV光造成的皮 肤损伤；扁平苔藓；皮肤萎缩；白内障；以及，移植物排斥。细胞死亡也可由手术、药物治疗、 化学品接触或放射接触所造成。也可将增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物给药予患有急 性疾病，例如器官或组织受到伤害的个体，例如患有中风或心肌梗塞的个体，或罹患脊髓损 伤的个体。增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物也可用于修复酒精性 月干(alcoholic， liver)。心血管疾病在另一个实施方式中，本发明提供一种治疗和/或预防心血管疾病的方法，其系 通过将增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物给药予有其需要的个体。可使用增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物治疗或预防的 心血管疾病，包括心肌病或心肌炎；例如特发性心肌病、代谢性心肌病、酒精中毒性心肌病、 药物引发的心肌病、缺血性心肌病及高血压性心肌病。也可使用本文所述化合物与方法治 疗或预防的疾病，例如主动脉、冠状动脉、颈动脉、脑血管动脉、肾动脉、髂动脉、股动脉及 胭动脉(poplitealarteries)等主要血管(major blood vessels)的粥样硬化病症(大 血管疾病(macrovascular disease))。其他可被治疗或预防的血管疾病，包括那些与血 小板聚集、视网膜小动脉、肾小球小动脉(glomerular arteriole)、神经滋养血管(vasa nervorum)、心小动脉，及眼部、肾脏、心脏与中枢及周围神经系统相关的毛细血管床。增加 瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物也可用于增加个体血浆内的HDL水 平。其他可以用增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物治疗的病 症，包括再狭窄(例如在冠状介入后)，及与异常高密度及低密度胆固醇水平有关的病症。在一个实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物，可以作为组合疗法的一部分与另一种心血管药剂一起给药。在一个实施方式中，增加瑟土 因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物，可以作为组合疗法的一部份与抗_心率 失常药剂一起给药。在另一个实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调 节性化合物，可以作为组合疗法的一部分与另一种心血管药剂一起给药。细胞死亡/癌症可将增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物给药予最近已 接受或可能将接受一定剂量辐射或毒素的个体。在一个实施方式中，辐射或毒素的剂量 接受作为工作相关程序或医药程序的一部份，例如经给药作为预防措施(prophylactic measure)。在另一个实施方式中，非故意地接受辐射或毒素的接触。在这种情况下，优选在 接触后尽快给药化合物，以抑制细胞凋亡及后续发展成急性辐射综合征。瑟土因调节性化合物也可用于治疗和/或预防癌症。在某些实施方式中，增加瑟 土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可用于治疗和/或预防癌症。热限制已 经与年龄相关的病症(包括癌症)的发生率的减少相关联。于是，增加瑟土因蛋白的水平 和/或活性可用于治疗和/或预防年龄相关病症(例如癌症)的发生率。可使用瑟土因调 节性化合物治疗的例举性癌症，为下列癌症脑部与肾脏的癌症；激素_依赖性癌症包括乳 癌、前列腺癌、睾丸癌与卵巢癌；淋巴瘤及白血病。在与固体肿瘤关联的癌症中，可将调节性 化合物直接给药予该肿瘤。血液细胞的癌症(例如白血病)可通过将调节性化合物给药至 血流中或骨髓中而进行治疗。也可治疗良性细胞生长例如疣。其他可被治疗的疾病包括自 体免疫疾病，例如全身性红斑狼疮、硬皮病及关节炎，其中应将自体免疫细胞去除。也可通 过给药瑟土因调节性化合物，治疗与病毒感染(例如疱疹、HIV、腺病毒及HTLV-1)关联的恶 性与良性病症。或者，可自个体获取细胞，经体外处理以去除某些不希望的细胞(例如癌细 胞)，并再给药予相同或不同的个体。也可将化学治疗剂与本文所述具有抗癌活性的调节性化合物，例如诱发细胞凋亡 的化合物、减短寿命的化合物或使细胞对压力敏感的化合物共同给药。化学治疗剂本身可 与本文所述可诱发细胞凋亡或减短寿命的化合物或使细胞对压力敏感的瑟土因_调节性 化合物，和/或与其他化学治疗剂组合使用。除了常规化学治疗剂的外，本文所述的瑟土因 调节性化合物也可与反义RNA、RNAi，或其他抑制会造成不希望细胞增殖的细胞组成表达的 聚核苷酸一起使用。包含瑟土因调节性化合物与常规化学治疗剂的组合疗法，可能优于本领域已知的 组合疗法，因为该组合可使常规化学治疗剂在较低剂量下发挥更大功效。在优选的实施方 式中，对于化学治疗剂(或常规化学治疗剂的组合)的有效剂量(ED5tl)而言，当与瑟土因调 节性化合物组合使用时，相较于单独的该化学治疗剂的ED5tl低至少2倍(2 fold less)，且 甚至更优选低5倍、10倍或甚至25倍。反之，对于此类化学治疗剂或此类化学治疗剂的组 合的治疗指数(Tl)而言，当与本文所述瑟土因调节性化合物组合使用时，相较于单独的常 规化学治疗程序的TI高至少2倍，且甚至更优选地高5倍、10倍或甚至25倍。神经元疾病/病症在某些方面，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可用于治 疗患有神经变性性疾病，及中枢神经系统(CNS)、脊髓或周围神经系统(PNS)的创伤或机械 性损伤的患者。神经变性性疾病通常涉及人脑部质量与体积的减少，其可能由于脑细胞萎缩和/或死亡所致，这比健康人因老化所造成的人脑部质量与体积的减少影响更大。神经 变性性疾病可在执行长期正常脑功能后，由于特定脑区域的渐进性退化(例如神经细胞功 能不足及死亡)而逐渐演化成。或者，神经变性性疾病可具有快速开始发生(onset)，例如 那些与创伤或毒素相关联的神经变性性疾病。脑部退化的确切开始可能较出现临床表达早 许多年。神经变性性疾病的实例包括(但不限定于)阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、 亨廷顿病(Huntington' s disease) (HD)、肌萎缩性侧索硬化(ALS ；罗杰里格氏病(Lou Gehrig's disease))、弥散性路易体病(diffuse Lewy body disease)、舞蹈病-棘红细胞 增多症、原发性侧索硬化、眼部疾病(眼神经炎)、化学疗法诱发的神经病变(例如来自长春 新碱(vincristine)、紫杉醇、硼替佐米(bortezomib))、糖尿病诱发的神经病变及佛里德 赖希共济失调(Friedreich's ataxia)。增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节 性化合物可用于治疗这些病症及其他如下文所描述的病症。AD为导致记忆丧失、异常行为、个性改变及思考能力衰退的CNS病症。这些丧失与 特定类型的脑细胞死亡、及脑细胞间的连结与其支撑网络(例如神经胶质细胞)损坏有关。 最早期症状包括丧失最近的记忆、错误判断及个性改变。PD为导致身体运动不受控制、僵 硬、颤抖及运动障碍的CNS病症，与脑部制造多巴胺(dopamine)的区域中的脑细胞死亡关 联。ALS (运动神经元疾病)为攻击运动神经元(CNS中将脑与骨骼肌连结的组分)的CNS 病症。HD为另一种造成运动不受控制、智力丧失及情绪失调的神经变性性疾病。泰-萨 病(Tay-Sachs disease)与桑德霍夫病(Sandhoff disease)，其中GM2神经节苷脂与β-氨 基己糖胺酶(hexosaminidase)的相关糖脂类底物累积于神经系统中并引发急性神经变性 的糖脂储存疾病(glycolipid storage diseases)。已熟知，细胞凋亡在免疫系统的AIDS病变方面扮演重要角色。然而，HIV-I也诱 发可以用本发明的瑟土因调节性化合物治疗的神经学疾病。神经元丧失(neuronal loss)也为朊病毒病(prion diseases)(例如人类克-雅 综合征、牛BSE(疯牛病)、绵羊与山羊的瘙痒病及猫的猫类海绵状脑病(FSE))的突出特征。 增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可用于治疗或预防由这上述朊 病毒病引起的神经元丧失。在另一个实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合 物，可用于治疗或预防任何涉及轴突病变(axonopathy)的疾病或病况。远端轴索病为一类 由周围神经系统(PNS)神经元的某种代谢或毒性错乱所产生的周围神经病。其为神经对代 谢或毒性紊乱的最通常响应，而因此可能由代谢性疾病例如糖尿病、肾衰竭、缺乏综合征例 如营养不良及酒精中毒，或由毒素或药物的作用所造成。那些患有远端轴索病的患者通常 呈现对称性手套_袜样感觉_运动紊乱。在受影响区域也发生深层腱反射及自主神经系统 (ANS)功能丧失或缩减。糖尿病性神经病变为与糖尿病关联的神经病症。可能与糖尿病性神经病变关联的 较常见病况包括第三神经麻痹；单一神经病变；多发性单神经炎；糖尿病性肌肉萎缩；疼痛 性多神经病(painful polyneuropathy)；自主神经病(autonomic neuropathy)；及胸月复神 经病。周围神经病变为用于对周围神经系统的神经损伤的医学术语，其可能是由神经疾病，或因全身性疾病的副作用所造成。周围神经病变的主要成因包括癫痫发作、营养缺乏及 HIV，虽然糖尿病是最可能的成因。在一个例举性的实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节 性化合物可用于治疗或预防多发性硬化(MS)，包括复发性MS与单症状MS,及其他脱神 经髓鞘病况(demyelinating condition)，例如铬炎性脱神经髓鞘多神经病(chromic inflammatory demyelinatingpolyneuropathy) (CIDP)或与其关联白勺病症。在又另一个实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合 物也可用于治疗对神经的创伤，包括由于疾病、损伤(包括手术介入)或环境创伤(例如神 经毒素、酒精中毒等)所造成的创伤。增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物也可用于预防、治疗及 缓解各种PNS病症的症状。术语“周围神经病变”涵括广范围的位于脑与脊髓外部的神经 (即周围神经)已经受损的病症。周围神经病变也可指周围神经炎，或者如果涉及许多神经 时，可使用术语多神经病(polyneuropathy)或多神经炎(polyneuritis)。可以用增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物治疗的PNS疾病 包括糖尿病、麻疯、进行性神经病性肌萎缩(Charcot-MarieToothdisease)、格林-巴利综 合征(Gui 1 Iain-Barresyndrome)和壁神经丛神经病(Brachial Plexus Neuropathy)(颈 与臂神经丛的第一胸根、神经干、索(cord)及周围神经组成的疾病)。在另一个实施方式中，瑟土因活化性化合物可用于治疗或预防多聚谷氨 酰胺疾病(polyglutamine disease)。例举性多谷胺酰胺疾病包括脊髓炎髓肌 肉萎缩(肯尼迪病(Kennedy disease)),亨廷顿病(HD)、齿状红核苍白球萎缩 (dentatorubralpallidoluysian atrophy)(郝乌河综合征(Haw River syndrome))、脊髓 小脑性共济失调(spinocerebellar ataxia)第1型、脊髓小脑性共济失调第2型、脊髓小脑 性共济失调第3型(马-约病(Machado-Jos印h disease))、脊髓小脑性共济失调第6型、 脊髓小脑性共济失调第7型及脊髓小脑性共济失调第17型。在某些实施方式中，本发明提供一种治疗中枢神经系统细胞，以防止因响应于血 液流向细胞减低所造成的伤害的方法。通常可被预防的伤害严重度，将大部分取决于血液 流向细胞的减低程度及减少的持续时间。在一个实施方式中，可预防凋亡性或坏死性细胞 死亡。在再一个实施方式中，可预防缺血所介导的伤害，例如细胞毒性水肿或中枢神经系统 组织缺氧血症。在各实施方式中，中枢神经系统细胞可为脊髓细胞或脑细胞。另一方面包含将瑟土因活化性化合物给药予个体，以治疗中枢神经系统缺血性病 况。有许多中枢神经系统缺血性病况可由本文所述的瑟土因活化性化合物治疗。在一个实 施方式中，局部缺血性病况为导致任何类型缺血性中枢神经系统损伤，例如凋亡性或坏死 性细胞死亡、细胞毒性水肿或中枢神经系统组织缺氧的中风。中风可能冲击脑部任何区域， 或由任何一般已知会导致中风发生的病因所造成。在本实施方式的另一选择中，中风为脑 干中风。在本实施方式的另一选择中，中风为小脑中风。在本实施方式的又另一选择中，中 风为栓塞性中风(embolic stroke)。在本实施方式的另一选择中，中风为出血性中风。在 其他实施方式中，中风为血栓性中风。在又另一方面，可给药瑟土因活化性化合物，以在中枢神经系统缺血性病况后减 少缺血核心的梗塞大小。而且，也可有益地给药瑟土因活化性化合物，以在中枢神经系统缺血性病况后，减少缺血性半影或过渡区带的大小。在一个实施方式中，组合药物疗程可包括用于治疗或预防神经变性性病症、或与 这些病况关联的次生病况的药物或化合物。因此，组合药物疗程可包括一种或多种瑟土因 活化剂与一种或多种抗_神经变性剂。血液凝结病症在其他方面，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可用于治 疗或预防血液凝结病症(或止血病症)。如可交换地用于本文，术语“止血”、“血液凝结”及 “血液凝块(clotting)”意指控制流血，包括血管收缩与凝结的生理特性。血液凝结协助维 持哺乳动物在受伤、炎症、疾病、先天缺陷、功能障碍或其他瓦解(disruption)后的循环完 整性。而且，血块的形成在受伤的个案中不仅限于制流血(止血)，也可能在动脉粥样硬化 疾病方面，因阻塞重要动脉或静脉而导致严重器官损伤及死亡。因此血栓是在错误时间及 地点的形成的血液凝块。于是，本发明提供目的在于抑制血液凝块形成，以预防或治疗血液凝结病症，例如 心肌梗塞、中风、因周围动脉疾病的截肢或肺栓塞的抗凝结与抗血栓治疗。如可交换地用于本文，术语“调制止血”及“调节止血”包括诱导(例如刺激或增 加)止血，也包括抑制(例如减低或减少)止血。在一方面，本发明提供通过给药增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节 性化合物，以减低或抑制个体中止血的方法。本文所揭示的组合物或方法有用于治疗或预 防血栓性疾病。如用于本文，术语“血栓性病症”包括以过量或不希望的凝血或止血活性，或 凝固性过高的状态为特征的任何病症或病况。血栓性疾病包括涉及血小板粘着(platelet adhesion)与血栓形成的疾病或病症，且可能显示为形成血栓的可能性增加，例如形成血栓 数量增加、在低年龄期(early age)出现血栓、形成血栓的家族性倾向(familial tendency towards thrombosis)及在罕见部位(unusual site)形成血栓。在一些实施方式中，组合药物疗程可包括用于治疗或预防血液凝结病症，或与这 些病况关联的次生病况的药物或化合物。因此，组合药物疗程可包括一种或多种增加瑟土 因蛋白的水平和/或活性的瑟土因活化剂，与一种或多种抗凝结或抗血栓形成剂。体重控制在另一方面，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可用于治 疗或预防个体的体重增加或肥胖。例如，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节 性化合物可(例如)用于治疗或预防遗传性肥胖症、饮食性肥胖症、激素相关的肥胖症、与 给药医药品有关的肥胖症，用于减轻个体体重或防止个体体重增加。有需要此类治疗的个 体可为其已经肥胖、有可能变成肥胖、过重或有可能变成过重的个体。有可能变成肥胖或过 重的个体，可(例如)基于家族历史、遗传学、饮食、活动程度、药物摄取或其各种不同组合 来确定。在又其他的实施方式中，可将增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性 化合物给药予患有各种可通过促进个体的体重减轻而治疗或预防的其他疾病与病况。此类 疾病包括(例如)高血压、血压过高、高血胆固醇、血脂异常、II型糖尿病、胰岛素抗性、葡 萄糖不耐受性、高胰岛素血症、冠心病、心绞痛、充血性心脏衰竭、中风、胆结石、胆囊炎与胆 石病、痛风、骨关节炎、阻碍性睡眠呼吸暂停与呼吸问题、某些类型癌症(例如子宫内膜癌、乳癌、前列腺癌与结肠癌)、妊娠并发症、雌性生殖健康变差(例如月经不规则、不孕、不规 则排卵)、膀胱控制问题(例如压力失禁)；尿酸肾石病；精神性病症(例如忧郁、饮食失控 (eating disorders)、体态变形与自尊降低)。最后，患有AIDS的患者会对于AIDS的组合 疗法响应，而发展成脂肪代谢障碍或胰岛素抗性。在另一个实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物 可用于抑制脂肪形成或脂肪细胞分化(于体外或体内)。此类方法可用于治疗或预防肥胖症。在其他实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可 用于减低食欲和/或增加饱食感，藉此造成体重减轻或避免体重增加。有需要此类治疗的 个体可为已经过重、肥胖的个体，或有可能变成过重或肥胖的个体。该方法包含将一定剂量 (例如呈药丸(Pill)的形式)每日或每二日或一周一次给药予个体。剂量(dose)可为“食 欲减低剂量”。在一个例举性的实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性 化合物，可以作为治疗或预防体重增加或肥胖症的组合疗法进行给药。例如，可将一种或多 种增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因活化剂与一种或多种抗肥胖剂组合给药。在另一个实施方式中，可给药增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性 化合物，以减低由药物引发的体重增加。例如，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因 调节性化合物，能够与可以刺激食欲或造成体重增加(尤其是由于除了保留水份以外的因 素造成的体重增加)药物通过组合疗法进行给药。代谢病症/糖尿病在另一方面，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物，可用于 治疗或预防代谢病症，例如胰岛素抗性、糖尿病前期、II型糖尿病、和/或其并发症。增加瑟 土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物的给药，可增加个体的胰岛素敏感性和 /或减低胰岛素水平。有需要此类治疗的个体可为具有胰岛素抗性或其他II型糖尿病的前 驱症状(precursorsymptom)、具有II型糖尿病或有可能发展任何这些病况的个体。例如， 个体可为具有胰岛素抗性，例如具有高胰岛素循环水平和/或相关联病况，例如高血脂症、 脂肪生成障碍、高胆固醇血症、葡萄糖耐受性受损、高血糖水平、综合征Xkyndrome X)的其 他表征、高血压、动脉粥样硬化及脂肪代谢障碍的个体。在一个例举性的实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性 化合物，可以作为治疗或预防代谢病症的组合疗法进行给药。例如，可将一种或多种增加瑟 土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因活化剂与一种或多种抗_糖尿病剂组合给药。炎性疾病在另一方面，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可用于治 疗或预防与炎症关联的疾病或病症。可于引发炎症的开始前、同时或之后给药增加瑟土因 蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物。当预防性使用时，化合物优选在任何炎症 反应或症状之前提供。化合物的给药可预防或减弱炎症反应或症状。在另一个实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合 物，可用于治疗或预防过敏及呼吸病况，包括哮喘、支气管炎、肺纤维化、过敏性鼻炎、氧气 毒性、气肿、慢性支气管炎、急性呼吸窘迫综合征及任何慢性闭塞性肺病(COPD)。化合物可用于治疗肝炎感染，包括乙型肝炎及丙型肝炎。此外，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可用于治疗自体 免疫疾病，和/或与自体免疫疾病关联的炎症，例如器官_组织自身免疫疾病(例如雷诺得 氏综合征(Raynaud' s syndrome))、硬皮病、重症肌无力、移植排斥、内毒素休克、败血病、 牛皮癣、湿疹、皮肤炎、多发性硬化、自身免疫甲状腺炎、葡萄膜炎、全身性红斑狼疮、艾迪生 病(Addison' sdisease)、自身免疫多腺疾病(polyglandular disease)(也称为自身免疫 多腺综合征)及格雷夫斯病(Grave’ s disease)。在某些具体实施方案中，可单独采用一种或多种增加瑟土因蛋白质的水平和/或 活性的瑟土因_调节性化合物，或与其他有用于治疗或预防炎症的化合物组合使用。潮红另一方面，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可用于减 低其为病症的病症的潮红和/或潮热(hot flash)的发生率或严重度。例如，相关方法 (subject method)包括包括使用增加瑟土因蛋白质的水平和/或活性的瑟土因-调节性 化合物(单独或与其他药剂组合)，以减低癌症患者的潮红和/或潮热的发生率或严重度。 在其他实施方式中，该方法提供使用增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化 合物以减低绝经及绝经后(post-menopausal)妇女的潮红和/或潮热的发生率或严重度。另一方面，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可用作减低 作为另一种药物疗法的副作用病症的潮红和/或潮热(例如，药物_诱发性潮红)的发生 率或严重度的疗法。在某些实施方式中，用于治疗和/或预防药物_诱发性潮红的方法包 括将含有至少一种潮红-诱发性化合物与至少一种增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟 土因调节性化合物的制剂给药予有其需要的患者。在其他实施方式中，用于治疗药物所诱 发的潮红的方法包括，分别给药诱发潮红的化合物与一种或多种瑟土因调节性化合物，(例 如)其中瑟土因调节性化合物与潮红诱发剂未经配制于同一组合物中。当使用分别的制 剂时，可将瑟土因调节性化合物⑴在与潮红诱发剂的给药的同时，⑵在潮红诱发剂的间 歇，(3)与潮红诱发剂的给药错开，(4)在潮红诱发剂给药之前，(5)接续于潮红诱发剂给药 之后，及(6)以其各种不同组合进行给药。例举性潮红诱发剂包括(例如)烟酸、法洛昔芬 (faloxifene)、抗忧郁剂、抗_精神病药、化学治疗剂、钙通道阻断剂及抗生素。在一个实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可 用于减少血管扩张剂或抗血脂药(包括降胆固醇血药剂与抗脂肪肝剂)的潮红副作用。在 一个例举性的实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可用 于减少与给药烟酸关联的潮红。在另一个实施方式中，本发明提供具有减低潮红副作用的治疗和/或预防高血脂 症的方法。在另一代表性的实施方式中，该方法涉及使用增加瑟土因蛋白的水平和/或活 性的瑟土因调节性化合物，以减少雷洛昔芬(raloxifene)的潮红副作用。在另一代表性的 实施方式中，该方法涉及使用增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物， 以减少抗忧郁剂或抗精神病药的潮红副作用。举例而言，增加瑟土因蛋白的水平和/或 活性的瑟土因调节性化合物可用于与5-羟色胺再吸收抑制剂(reuptake inhibitor)，或 5HT2受体拮抗剂结合(分开或一起给药)。在某些实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可
33用作5-羟色胺再吸收抑制剂(SRI)的治疗的一部份以减少潮红。在又另一代表性的实施 方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可用于减少化学治疗剂 如环磷酰胺(cyclophosphamide)及他莫昔芬(tamoxifen)的潮红副作用。在另一个实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物 可用于减少钙通道阻断剂如氨氯地平(amlodipine)的潮红副作用。在另一个实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物 可用于减少抗生素的潮红副作用。例如，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节 性化合物可与左氧氟沙星(levofloxacin)组合使用。眼部病症本发明的一方面为用于抑制、减低或治疗视力损伤(vision impairment)的方法， 该方法通过将治疗剂量的选自本文所揭示化合物的瑟土因调节剂或其药学上可接受的盐、 前药或代谢衍生物给药予患者。在本发明的某些方面，视力损伤是由于对视神经或中枢神经系统的伤害所造成。 在特别的实施方式中，视神经伤害由高眼内压(例如由青光眼)所造成。在其他特别的实 施方式中，视神经伤害由神经肿胀(swelling)(其往往与感染或免疫(例如自身免疫)反 应如视神经炎关连)所造成。在本发明的某些方面，视力损伤由视网膜的伤害所造成。在特别的实施方式中，视 网膜的伤害由于流向眼睛的血流中的障碍(例如，动脉粥样硬化、血管炎)所造成。在特别 的实施方式中，视网膜的伤害是由于黄斑瓦解(disruption of macula)(例如，渗出性或非 渗出性黄斑变性(maculardegeneration))所造成。例举性视网膜的疾病包括，渗出性年龄相关的黄斑退化、非渗出性年龄相关的 黄斑变性、视网膜电子假体和RPE移植年龄相关的黄斑变性、急性多病灶板状色素上皮 病、急性视网膜坏死、卵黄状黄斑变性(Best Disease)、视网膜分支动脉闭塞(branch retinal artery occlusion)、视网月莫分支静脉Pil塞(branch retinal vein occlusion)、 癌症关联禾口相关的自身免疫视网膜病(CancerAssociated and related Autoimmune Retinopathies)、视网膜中央动脉阻塞、视网膜中央静脉阻塞、中心性浆液性脉络膜视 网膜病变(central serouschorioretinopathy)、伊尔其jf病(Eales disease)、黄斑上膜 (epimacular membrane)、晶格退化(Lattice degeneration)、巨动脉瘤(macroaneurysm)、 糖尿病性斑水肿、艾尔温-盖斯斑水肿(Irvine-Gass Macular Edema)、黄斑裂孔(macular hole)、视网膜下新血管膜(subretinal Neovascular Membranes)、弥散性单侧亚急性 视神经视网膜炎(diffuse unilateral subacute neuroretinitis)、非假晶状体囊样 黄斑水肿(nonpseudophakic cystoid macular edema)、假定的眼组织胞浆菌病综合征 (presumed ocular histoplasmosis syndrome)、渗出性视网膜脱离、手术后视网膜剥离、 增生性视网膜剥离、孔源性视网膜剥离、牵引性(tractional)视网膜剥离、色素性视网 膜炎、CMV视网膜炎、成视网膜细胞瘤(retinoblastoma)、早产儿视网膜病、散弹状视网 膜病(birdshot retinopathy)、背景性糖尿病性视网膜病、增生性糖尿病性视网膜病、血 红蛋白病性视网膜病、普尔沙视网膜病(Purtscher Retinopathy)、瓦尔萨尔瓦视网膜病 (Valsalva Retinopathy)、青年性视网膜劈裂症(juvenile retinoschisis)、老年性视 网膜劈裂症(senileretinoschisis)、泰尔松综合征(terson syndrome)及白点综合征(white dotsyndromes)。其他例举性疾病包括眼部细菌感染(例如，结膜炎、角膜炎、结核病、梅毒、淋病)、 病毒感染(例如眼部单纯疱疹病毒(ocular herpes simplex Virus)、水痘带状疱疹病毒 (varicella zoster virus)、巨细胞病毒视网膜炎(cytomegalovirus retinitis)、人类免 疫缺陷病毒(HIV))以及次生于HIV或其他HIV-关联及其他免疫缺陷-关联性眼部疾病的 进行性外部视网膜坏死。此外，眼部疾病包括真菌感染(例如念珠菌性脉络膜炎(Candida choroiditis)、组织胞浆菌病)、原生动物感染(例如弓形体病)及其他例如眼弓蛔虫病与 肉样瘤病(sarcoidosis) ο本发明的一方面为用于抑制、减低或治疗个体进行以化学治疗药物(例如，神经 毒性药物、升高眼内压力的药物例如类固醇(steroid))治疗时的视力损伤的方法，其通过 将治疗剂量的本文所揭示的瑟土因调节剂给药予有此类治疗需要的个体。本发明的另一方面为用于抑制、减低或治疗个体在进行手术包括眼部或其他于俯 卧姿势(prone position)执行的手术，例如脊髓手术时的视力损伤的方法，其通过将治疗 剂量的本文所揭示的瑟土因调节剂给药予有此类治疗需要的个体。眼部手术包括白内障、 虹膜切开术和晶状体置换(lensr印lacement)。本发明的另一方面为治疗(包括抑制与预防性治疗)年龄相关的眼部疾病，包括 白内障、干眼症、年龄_相关的黄斑变性(AMD)、视网膜损害等的方法，其通过将治疗剂量的 本文所揭示的瑟土因调节剂给药予有此类治疗需要的个体。本发明的另一方面为预防或治疗因压力、化学伤害或照射所造成的对眼睛的损 害，其通过将治疗剂量的本文所揭示的瑟土因调节剂给药予有此类治疗需要的个体。对眼 睛的照射或电磁性损害可包括由CRT或暴露于阳光或UV所造成的那些损害。在一个实施方式中，组合药物疗程(combination drug regimen)可包括用于治疗 或预防眼部病症，或与此等病况关联的次生病况的药物或化合物。因此，组合药物疗程可包 括一种或多种瑟土因活化剂与一种或多种用于治疗或预防眼部病症的治疗剂。在一个实施方式中，可将瑟土因调节剂与用以减低眼内压力的疗法结合进行给 药。在另一个实施方式中，可将瑟土因调节剂与用于治疗和/或预防青光眼的疗法结合进 行给药。在另一实施方式中，可将瑟土因调节剂与用于治疗和/或预防视神经炎的疗法结 合进行给药。在一个实施方式中，可将瑟土因调节剂与用于治疗和/或预防CMV视网膜病 的疗法结合进行给药。在另一个实施方式中，可将瑟土因调节剂与用于治疗和/或预防多 发性硬化的疗法结合进行给药。线粒体-关联的疾病与病症在某些实施方式中，本发明提供用于治疗会因增加线粒体活性而获益的疾病或病 症的方法。该方法包含将治疗上有效量的瑟土因活化性化合物给药予有其需要的个体。 增加线粒体活性意指，维持线粒体的总体数量(例如线粒体的质量)的同时增加线粒体 的活性、增加线粒体的数量并因此增加线粒体的活性(例如，通过刺激线粒体的生物发生 (biogenesis))，或其组合。在某些实施方式中，会因增加线粒体活性而获益的疾病或病症， 包括与线粒体功能障碍关联的疾病或病症。在某些实施方式中，用于治疗会因增加线粒体活性而获益的疾病或病症的方法， 可包括鉴定患有线粒体功能障碍的个体。用于诊断线粒体功能障碍的方法，可包括分子遗
35传学、病理学和/或生物化学分析。与线粒体功能障碍关联的疾病或病症包括这样的疾病 和病症，其中线粒体的呼吸链活性不足导致哺乳动物中此类疾病或病症的病理生理学的发 展。会因增加线粒体活性而获益的疾病或病症一般包括(例如)，由自由基介导的氧化损伤 导致的组织变性的疾病、细胞不适当地进行凋亡的疾病，及细胞无法进行凋亡的疾病。在某些实施方式中，本发明提供用于治疗会因增加线粒体活性而获益的疾病或病 症的方法，其涉及将一种或多种瑟土因活化性化合物与另一种治疗剂(例如可用于治疗线 粒体功能障碍的药剂，或可用于减少与涉及线粒体功能障碍的疾病或病症关联的症状的药 剂)组合，给药予有需要的个体。在一个例举性的实施方式中，本发明提供用于治疗会因增加线粒体活性而获益的 疾病或病症的方法，通过将治疗上有效量的瑟土因活化性化合物给药予个体。例举性疾病 或病症包括(例如)肌肉神经病症(例如佛里德赖希共济失调、肌肉萎缩症、多发性硬化 等)、神经细胞不稳定性病症(例如癫痫发作、偏头痛(migrane)等)、发育迟缓、神经变性 病症(例如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化等)、缺血、肾小管性酸中毒、年龄 相关的神经变性与认知衰退、化学疗法疲劳、年龄相关或化学疗法诱发的绝经或月经周期 或排卵不规则、线粒体性肌病、线粒体损害(例如钙累积、兴奋性中毒、接触一氧化氮、缺氧 等)及线粒体去调节。肌肉萎缩症指一类涉及神经肌肉组织构造与功能恶化的疾病，其往往导致骨骼 肌萎缩及心肌功能障碍(myocardial dysfunction)，例如杜兴氏肌肉萎缩症(Ducherme muscular dystrophy)。在某些实施方式中，瑟土因活化性化合物可用于减低肌肉执行功能 能力的衰退速率，及用于增强患有肌肉萎缩症患者肌肉的功能状态。在某些实施方式中，瑟土因调节性化合物可用于治疗线粒体性肌病。线粒体性肌 病范围从外眼部肌肉的轻微缓慢进行性衰弱，到严重致命的婴儿期肌病与多系统脑肌病 (encephalomyopathy)。有些综合征已经确定，它们之间有些彼此重迭。影响肌肉的已确立 的综合征包括进行性外眼肌麻痹、卡_塞综合征(Kearns-Sayre syndrome)(具有眼肌麻 痹、色素性视网膜病、心脏传导缺陷、小脑共济失调与感觉神经性耳聋)、MELAS综合征(线 粒体性脑肌病、乳酸性酸中毒与类中风事件(stroke-like印isodes))、MERFF综合征(肌 阵挛型癫痫(myoclonic印il印sy)、碎片状红纤维(ragged red fibers))、肢带分配衰弱 (limb-girdle distribution weakness)及婴儿期肌病(良性、重度与致死)。在某些实施方式中，瑟土因活化性化合物可用于治疗患有对线粒体的毒性损害， 例如由于钙累积、兴奋性中毒、一氧化氮接触、药物诱导的毒性损害或缺氧造成的毒性损 害。在某些实施方式中，瑟土因活化性化合物可用于治疗与线粒体去调节 (mitochondrial deregulation)关联白勺疾病或病症。肌肉效能(Muscle Performance)在其他实施方式中，本发明提供用于增强肌肉效能的方法，其通过给药治疗上有 效量的瑟土因活化性化合物。例如，瑟土因活化性化合物可用于改善身体耐久力(例如，执 行身体工作例如运动、身体劳役、运动活动等)、抑制或延迟身体疲劳、增加血液氧水平、增 进健康个体的能量、加强工作能力与持久性、减少肌肉疲劳、减低压力、增强心脏与心血管 功能、改善性能力、增加肌肉ATP水平和/或减少血液中的乳酸。在某些实施方式中，该方法涉及给药一定量的增加线粒体活性、增进线粒体的生物生成和/或增加线粒体质量的瑟 土因活化性化合物。运动效能意指，运动员的肌肉在参与运动活动时所能执行的能力。所增强的运动 效能、强度、速度及持久力，是通过肌肉收缩强度的增加、肌肉收缩幅度的增加、介于刺激与 收缩间的肌肉反应时间的缩短而进行测量。运动员指以任何程度参与运动，以及寻求能在 其机能上达到增进强度、速度与耐久力水平的个人，例如健美家(body builder)、自行车运 动员、长程赛跑者、短程赛跑者等。所增强的运动效能由能克服肌肉疲劳的能力、可保持较 长时间活力的能力及具有更有效练习的能力显示。运动员肌肉效能的范围(arena)，是指可期望产生允许在长期的更高耐性程度上 进行比赛或训练的状况。预期本发明的方法也有效于治疗肌肉相关的病理病况，包括急性肌肉减少症 (acute sarcopenia)，例如肌肉萎缩和/或与烧伤、卧床、四肢固定(Iimbimmobilization) 或主要胸部(major thoracic)、腹部和/或整形外科手术关联的恶质病(cachexia)。在某些实施方式中，本发明提供包含瑟土因调节剂的新型饮食(dietary)组合 物，其制备方法及使用该组合物以改善运动效能(performance)的方法。于是，本发明向涉 及广泛定义的运动，包括需要持久力的运动与需要重复性肌肉运用的劳力的人们提供具有 改善身体持久力和/或抑制身体疲劳的作用的治疗组合物、食品与饮料。此类饮食组合物 可额外包含电解质、咖啡因、维生素、碳水化合物等。其他用途增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可用于治疗或预防病 毒感染(例如流行性感冒病毒、疱疹病毒或乳头状瘤病毒感染)或作为抗真菌剂。在某些 实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物，可以作为组合药 物疗法的一部份与另一种用于治疗病毒性疾病的治疗剂一起给药。在另一个实施方式中， 增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物，可作为组合药物疗法的一部份 与另一种抗真菌剂一起给药。可如本文所述进行治疗的个体包括真核生物，例如哺乳动物例如人类、羊类、牛 类、马类、猪类、犬类、猫类、非人灵长类、小鼠及大鼠。可受处理的细胞包括真核细胞，例如 得自前述个体的细胞，或植物细胞、酵母细胞及原核细胞例如细菌细胞。例如，可将调节性 化合物给药予农场动物，以增强其能更长期承受农场状况的能力。增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物也可用于，增加植物寿 命、压力抗性及对于细胞凋亡的抗性。在一个实施方式中，将化合物施予植物(例如以周期 性为基础)，或施予真菌。在另一个实施方式中，植物经遗传修饰以产生化合物。在另一个 实施方式中，将植物与果实在采收与运送前先以化合物处理，以增加在运送期间对于损伤 的抗性。也可将植物种子与本文所述的化合物接触，以(例如)使其防腐(preserve)。在其他实施方式中，增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物可 用于调节酵母细胞的寿命。其中希望延长酵母细胞寿命的情况包括任何其中使用有酵母的 工艺过程，例如啤酒、酸奶与烘焙物品(例如面包)的制造。使用具有延长寿命的酵母，可 以减少酵母的使用量，或使酵母具有活性的时间更长。也可将用于重组制造蛋白质的酵母 或其他哺乳动物细胞进行如本文所述的处理。
增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物也可用于增加昆虫寿 命、压力抗性及对于细胞凋亡的抗性。在此实施方式中，化合物将被施用至有用的昆虫，例 如蜜蜂及其他涉及植物授粉的昆虫。在一个具体的实施方式中，化合物将被施用至涉及繁 殖蜂蜜的蜜蜂。一般而言，本文所述的方法可应用至任何生物体，例如具有商业重要性的真 核生物。例如，可将本文所述的方法应用至鱼类(水产养殖)及鸟类(例如鸡与家禽)。也可使用较高剂量的增加瑟土因蛋白的水平和/或活性的瑟土因调节性化合物 作为杀虫剂，这是通过干扰发育期间沉默基因的调节以及细胞凋亡的调节。在该实施方式 中，可通过本领域已知的方法将该化合物施用至植物，并确保该化合物对昆虫幼虫(且非 对于植物)为生物可利用的。至少就生殖与寿命间的联系的观点而言，可施用增加瑟土因蛋白的水平和/或活 性的瑟土因调节性化合物，来影响诸如昆虫、动物及微生物等生物体的生殖作用。4.测定已经记载了各种类型的用来确定瑟土因活性的测定方法。例如，瑟土因活性可使 用基于荧光的分析，例如市面上可购自Biomol的分析方法，例如SIRTl荧光测定药物发现 试剂盒(Fluorimetric Drug Discovery Kit) (AK-555)、SIRT2 荧光测定药物发现试剂盒 (AK-556)或 SIRT3 荧光测定药物发现试剂盒(AK-557) (Biomol International, Plymouth Meeting, PA)。其他适合的瑟土因分析包括烟酰胺释出分析(Kaeberlein等人，J.Biol. Chem. 280(17) 17038 (2005))、FRET 分析(Marcotte 等人，Anal. Biochem. 332 90(2004)) 及C14 NAD硼树脂结合分析(McDonagh等人，Methods 36:346(2005))。其他适合的瑟土 因分析包括放射免疫分析(RIA)、闪烁近似分析(scintillationproximity assay)、基于 HPLC的分析及报告者基因分析(例如，用于转录因子的标靶物(transcription factor target))。一种用于测定瑟土因活性的例举性分析为荧光极化分析。荧光极化分析在本文中 进行描述，并且也在PCT公开案号WO 2006/094239中有所描述。在其他实施方式中，瑟土 因活性可使用基于质谱测定法的分析测定得到。基于质谱测定法的分析的实例在本文中进 行描述，且并且也在PCT公开案号WO 2007/064902中有所描述。也可使用基于细胞的分 析来测定瑟土因活性。用于测定瑟土因活性的细胞为底的分析的实例，在PCT公开案号WO 2007/064902 及 WO 2008/060400 中有所描述。其他在本文中所构思的方法包括，用于鉴定可调节瑟土因的化合物或药剂的筛检 方法。药剂可为核酸，例如适体(aptamer)。分析可以基于细胞或不含细胞的形式进行。例 如，分析可包含，在瑟土因可被已知调节瑟土因的试剂所调节的条件下，用测试剂培育(或 接触)瑟土因，并在该测试剂存在下监控或测定瑟土因相对于无该测试剂存在下的调节程 度。瑟土因的调节程度可通过测定其可将底物脱乙酰基化的能力而测得。例举性底物为 可购自BIOMOL (Plymouth Meeting, PA)的乙酰化肽类。优选底物包括p53的肽类，例如那 些包含乙酰化K382的肽类。尤其优选的底物为Fluor deLys-SIRTl (BIOMOL)，即乙酰化肽 Arg-His-Lys-Lys (SEQ ID NO :2)。其他底物为得自人类组蛋白H3与H4的肽类或乙酰化氨 基酸。底物可为荧光性的(fluorogenic)。瑟土因可为SIRT1、Sir2、SIRT3或其部份。例 如，重组型SIRTl可购自BI0M0L。反应可进行约30分钟，并(例如)以烟酰胺终止。可使 用HDAC荧光活性分析/药物发现试剂盒(AK-500，BIOMOL ResearchLaboratories)测定乙酰化程度。类似的分析经描述于Bitterman等人(2002) J. Biol. Chem. 277 :45099。可将分 析中的瑟土因调节程度，与在一种或多种本文所述化合物(分开或同时)存在下(其可作 为阳性或阴性对照组)的瑟土因调节程度进行比较。用于分析的瑟土因可为全长瑟土因蛋 白或其部份。因为在本文中已显示活化性化合物似乎会与SIRTl的N-端作用，故用于分析 的蛋白质包括瑟土因的N-端部份，例如SIRTl的大致为氨基酸1-176或1-255 ；Sir2的大 致为氨基酸1-174或1-252部分。在一个实施方式中，筛检方法包含(i)在无测试剂存在下且适合瑟土因将底物脱 乙酰化的条件下，使瑟土因与测试剂及乙酰化底物接触；及(ii)测定底物的乙酰化程度， 其中在该测试剂存在下底物的乙酰化程度相对于无该测试剂存在下较低则表示该测试剂 刺激由瑟土因进行的脱乙酰化作用，而在该测试剂存在下底物的乙酰化程度，相对于无该 测试剂存在下较高则表示该测试剂抑制由瑟土因进行的脱乙酰化作用。用于鉴定可于体内调节(例如刺激)瑟土因的方法可包含⑴在第I类与第II 类HDAC的抑制剂存在下，在无测试剂存在下且适合瑟土因将底物脱乙酰化的条件下，使细 胞与测试剂及能够进入细胞的底物接触；及(ii)测定底物的乙酰化程度，其中在该测试剂 存在下底物的乙酰化程度，相对于无该测试剂存在下较低则表示该测试剂刺激由瑟土因 进行的脱乙酰化作用，而在该测试剂存在下底物的乙酰化程度，相对于无该测试剂存在下 较高则表示该测试剂抑制由瑟土因进行的脱乙酰化作用。优选底物为乙酰化肽，也优选 为荧光性，如本文中进一步描述的。该方法可进一步包含将细胞溶解，以测定底物的乙酰 化程度。可将底物以范围介于约1 μ M至约10mM，优选地约10 μ M至ImM,甚至更优选从约 ΙΟΟμΜ至ImM，例如约200μΜ的浓度加至细胞。优选底物为乙酰化赖氨酸，例如ε -乙酰 基赖氨酸(Fluor deLys，FdL)或Fluor de Lys-SIRTl0第I类与第II类HDAC的优选抑制 剂为曲古柳菌素A(trichostatin A) (TSA)，其可以范围介于约0. 01 μ M至100 μ M，优选从 约0. 1至10 μ Μ,例如约1 μ M的浓度使用。细胞与测试化合物及底物的培育可进行约10分 钟至5小时，优选约1-3小时。因为TSA抑制所有第I类与第II类HDAC，且某些底物(例 如Fluor de Lys)对于SIRT2为较差的底物，对于SIRT3-7甚至更差，故此类分析可用于鉴 定体内SIRTl调节剂。5.药物组合物本文所述的瑟土因调节性化合物可以通过常规方法，使用一种或多种生理学上可 接受的载体或赋形剂进行调配。例如，瑟土因调节性化合物及其生理学上可接受的盐与溶 剂合物可经调配，而通过(例如)注射(例如SubQ、IM、IP)、吸入或吹入(通过口或鼻部) 或口服、口腔、舌下、经皮、鼻部、非经肠道或直肠给药来进行给药。在一个实施方式中，瑟土 因调节性化合物可局部地，位于标靶细胞存在的部位，即在特定组织、器官或体液(例如血 液、脑脊髓液等)中进行给药。瑟土因调节性化合物可经调配用于各种给药形式，包括全身及局部或区域性给 药。技术与制剂一般可见于Remington，s Pharmaceutical Sciences, Meade出版公司， Easton, PA。对于非经肠道给药，以注射为优选，包括肌肉内、静脉内、腹膜内及皮下。对于 注射，可将化合物调配成液态溶液，优选生理学上可接受的缓冲液，例如汉克氏溶液或林格 氏溶液中。此外可将化合物调配成固体型式，并于使用前立即再溶解或悬浮。也可包括冷 冻干燥形式。
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对于口服给药，药物组合物可采用例如通过常规方法，与药学上可接受的赋形剂 例如粘合剂(binding agent)(例如，预凝胶化的玉米淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮或羟丙基甲 基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或 硅石)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或淀粉羟基乙酸钠)；或湿润剂(例如月桂基硫酸钠)制 备得的片剂、锭剂或胶囊的形式。片剂可通过本领域已熟知的方法包覆。用于口服给药的 液体制剂可采用(例如)溶液、糖浆或悬浮液的形式，或它们可表现为在使用前以水或其他 适宜媒液建构的干燥产物。此类液体制剂可通过常规方法，与药学上可接受的添加剂例如 悬浮剂(例如，山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂类)；乳化剂(例如卵磷脂或金 合欢胶)；非水性媒液(例如爱丁油(ationd oil)、油性酯类、乙醇或分级植物油)；及防腐 剂(例如甲基或丙基-对-羟基苯甲酸酯或山梨酸)制备得。如果适当，制剂也可含有缓 冲盐、香料、着色剂与甜味剂。用于口服给药的制剂可适宜地调配，以给予活性化合物受控 的释出(controlled release)。对于通过吸入(例如肺部递送)的给药，可方便地将瑟土因调节性化合物以从经 加压包装或喷雾器伴随使用适宜的推进剂例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、 二氧化碳或其他适合气体的气溶胶喷雾形式来递送。在经加压气溶胶的情况中，剂量单位 可通过提供用于递送已计量的量的阀来决定。可调配用于吸入器或吹入器的(例如)明胶 胶囊或药筒(cartridge)，含有化合物与适宜粉末基底例如乳糖或淀粉的粉末混合物。瑟土因调节性化合物可经调配用于通过注射，例如通过大剂量注射或持续灌流的 非经肠道给药。用于注射的制剂可以单位剂形式呈现，例如，存在安瓿或多剂量容器(有添 加防腐剂)中。组合物可采用诸如存在油性或水性媒介的悬浮液、溶液或乳液的形式，且可 含有调配剂例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成份在使用前可以为通过适宜媒 介，例如灭菌无热原水建构的粉末形式。瑟土因调节性化合物也可调配在直肠组合物中，例如栓剂或保留灌肠剂，例如含 有常规的栓剂基底如可可脂或其他甘油酯类。除了先前所述的制剂外，瑟土因调节性化合物也可经调配呈储存制剂(cbpot prparation)。此类长效型制剂可通过植入(例如以皮下或肌肉内)，或经由肌肉内注射进 行给药。因此，例如，可将瑟土因调节性化合物与适宜的聚合物或疏水性材料(例如存在于 可接受油类中的乳液)或离子交换树脂调配，或呈微溶性衍生物，例如呈微溶性盐。受控释 出形式也包括贴片(patch)。在某些实施方式中，本文所述的化合物可经调配用于递送至中枢神经系统(CNS) (见综述,Begley，Pharmacology & Therapeutics 104 :29_45 (2004))。用于药物递送至 CNS 的常规途径包括神经外科策略(例如脑内注射或脑室内灌流)；试剂的分子操作(例如制 造包含具有对于内皮细胞表面分子的亲合性的转运肽与其本身能够穿越BBB的试剂组合 的嵌合型融合蛋白质)目的在于开发其中一种BBB的内源性运送途径；设计用以增加试剂 的脂溶度的药学策略(例如，将水溶性试剂结合(conjugation)至脂质或胆固醇载体)；及 通过高渗透力瓦解短暂破坏BBB完整性(由将甘露糖醇溶液灌流入颈动脉，或使用生物活 性剂例如血管紧张肽所导致)。脂质体为另一种可容易注射的药物递送系统。于是，在本发明方法中也可将活性 化合物以脂质体递送系统的形式进行给药。脂质体为本领域人员已熟知的。脂质体可由各种磷脂质例如胆固醇、磷酯酰胆碱类的硬脂酰胺组成。可用于本发明方法的脂质体包含所 有类型脂质体，包括(但不限定于)小单层囊胞、大单层囊胞及多层囊胞。另一种制造瑟土因调节剂例如白藜芦醇或其衍生物的制剂(尤其是溶液)的方法 是通过使用环糊精而制造的。环糊精意指α-、β-或γ-环糊精。环糊精详细描述于Pitha 等人，U. S专利4，727，064中，其以引证方式纳入本文。环糊精为葡萄糖的环状寡聚物；这 些化合物与其分子能配合至环糊精分子的亲脂-搜寻空腔(lipophile-seeking cavity) 中的任何药物形成包含络合物(inclusion complex)。快速崩解或溶解剂型(dissolving dosage form)可用于医药活性剂的快速吸收 (尤其是口腔与舌下吸收)。快速熔解(fast melt)剂型对具有吞咽常见的固体剂型例如胶 囊与片剂困难的患者(例如老年人及幼儿患者)有益。此外，快速熔解剂型克服了与(例 如)咀嚼剂型关联的缺点，其中活性剂保持存在患者口中的时间，在决定味觉掩盖量及患 者可能感受到活性剂的喉咙粗粒感方面具有重要性。药物组合物(包括化妆品组合物)可包含约0.00001至100%，例如0.001至10% 或0. 1至5%重量百分比的一种或多种本文所述的瑟土因调节性化合物。在一个实施方式中，将本文所述的瑟土因调节性化合物并入含有一般适用于局部 药物给药的局部载体，且包含本领域已知的任何此类物质的局部制剂中。可选择局部载体 以使组合物呈所希望的形式，例如呈软膏、洗剂、乳剂、微乳剂、凝胶、油类、溶液等，且其可 由天然存在或合成来源的材料组成。优选地，所选择的载体不会有害地影响活性剂或局部 制剂的其他组成。适宜用于本文的局部载体实例包括水、醇类及其他无毒性有机溶剂、甘 油、矿物油、硅油、石油凝胶、羊毛脂、脂肪酸、植物油、对羟基苯甲酸酯类(parabens)、蜡类寸。制剂可为无色无味的软膏、洗剂、乳剂、微乳剂及凝胶。瑟土因调节性化合物可并入其一般为半固体制剂的软膏中，其通常以石油或其他 石油衍生物为基底。所使用(以及本领域技术人员所了解)的特别软膏基底(base)，是能 够提供最适药物递送，且优选可提供其他所希望特征以及例如柔软性或类似特征的那些。 如果与其他载体或媒介共用，则软膏基底应为惰性、稳定、无刺激性且非致敏性的。瑟土因调节性化合物可并入洗剂中，其一般为欲施用于皮肤表面而无摩擦 (friction)的制剂，且通常为其中固体颗粒(包括活性剂)存在于水或醇类为基底的液态 或半液态制剂。洗剂通常为固体的悬浮液，且包含水包油形态的液体油性乳液。瑟土因调节性化合物可并入乳剂中，其一般为粘稠性液体或半固态乳液，为水包 油或油包水型。乳剂基底为可水洗，且含有油相、乳化剂与水相。油相一般由石油与脂肪醇， 例如鲸蜡醇或硬脂醇所组成；水相通常(虽然并非必要地)在体积上较油相过量，且一般含 有湿润剂。存在乳剂制剂(如于前述Reminton’ s, supra中所解释的)中的乳化剂，一般 为非离子性、阴离子性、阳离子性或两性表面活性剂。瑟土因调节性化合物可并入微乳剂中，其一般为两种不相混的液体(例如油与 水)经由表面活性剂分子的界面膜稳定化的热动力学上稳定、各向同性上澄清的分散体 (Encyclopedia of Pharmaceutical Technology (New York :Marcel Dekker，1992)，卷9)。瑟土因调节性化合物可并入凝胶制剂中，其一般为由小无机粒子组成的悬浮液 (二相系统)，或基本上均勻分布于整个载体液体(单相凝胶)的大有机分子所组成的半固体系统。虽然凝胶一般使用水性载体液体，也可使用醇类与油类作为载体液体。在制剂中也可包括其他活性剂，例如其他消炎剂、镇痛剂、抗微生物剂、抗真菌剂、 抗生素、维生素、抗氧化剂及一般用于防晒制剂的阳光阻断剂，包括(但不限定于)邻氨基 苯甲酸酯、二苯甲酮(尤其是二苯甲酮_3)、樟脑衍生物、肉桂酸酯(例如甲氧基肉桂酸辛 酯)、二苯甲酰基甲烷(例如丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷)、对-氨基苯甲酸(PABA)及其衍 生物，及水杨酸酯(例如水杨酸辛酯)。在某些代表性制剂(topical formulation)中，活性剂以该制剂的大约0. 25重 量％至75重量％，优选地为该制剂的大约0. 25重量％至30重量％，更优选地为该制剂的 大约0.5重量％至15重量％，且最优选地为该制剂的大约1.0重量％至10重量％的范围 存在。眼部病况可通过(例如)全身性、局部、眼内注射瑟土因调节性化合物，或通过安 插可释出瑟土因调节性化合物的持续释出装置而治疗或预防。可将增加瑟土因蛋白的水平 和/或活性的瑟土因调节性化合物在药学上可接受的眼媒介中进行递送，以使化合物能保 持与眼表面接触一段足以让化合物穿透角膜与眼睛的内部区域，例如前室、后室、玻璃体、 房水、玻璃体液、角膜、虹膜/睫状、晶状体、脉络膜/视网膜及巩膜的时间。药学上可接受 的眼媒介可例如为软膏、植物油或包封材料。或者，可将本发明化合物直接注射入玻璃体与 房水中。在另一选择中，化合物可全身性给药(例如通过静脉内灌流或注射)用于眼部的 治疗。本文所述的瑟土因调节性化合物可储存于无氧环境中。例如，可将白藜芦醇或其 同系物制备于供口服给药的不透气胶囊例如购自Pfizer，Inc.的Capsugel中。可将(例如)体外经瑟土因调节性化合物处理的细胞，根据用于将移植物给药予 个体的方法进行给药，其可伴随(例如)给药免疫抑制药物例如环孢菌素A(CyCl0Sp0rine Α)。关于医药调配的一般原理，读者可参考细胞疗法Stem Cell Transplantation, Gene Therapy与Cellular Immunotherapy (干细胞移植、基因疗法与细胞免疫疗法)，G. Morstyn 和 W. Sheridan 编，剑桥大学出版，1996 ；及 Hematopoietic Stem Cell Therapy (造血性干 细胞疗法),E. D. Ball, J. Lister 和 P. Law, Churchill Livingstone, 2000。瑟土因调节性化合物的毒性与治疗功效，可通过由细胞培养物或实验动物进行的 标准医药程序测定。LD5tl为对于50%种群为致死的剂量。ED5tl为对于50%种群为治疗上有 效的剂量。毒性与治疗功效间的剂量比值(LD50/ED50)为治疗指数。优选呈现高治疗指数 的瑟土因调节性化合物为优选。虽然可使用呈现有毒副作用的瑟土因调节性化合物，但应 小心设计将此类化合物靶向至受影响组织位置的递送系统，以使得可以将对于未受感染细 胞的伤害减至最低，并由此减少副作用。来自细胞培养物测定及动物研究的数据，可用于调配在人类中使用的剂量范围。 此类化合物的剂量可落于其包括具有少或无毒性的ED5tl值的循环浓度范围内。剂量可在此 范围内根据所使用的剂型及所利用的给药途径而有所变化。对于任何化合物，可最初根据 细胞培养物测定评估治疗上有效的剂量。可在动物模式调配剂量，以达到其包括如在细胞 培养物所测定的IC5tl值(即，测试化合物达到对症状的一半_最大抑制作用的浓度)的循 环血浆浓度范围。此类信息可用于更准确地测定可用于人类的剂量。可(例如)通过高效 液相色谱法测量血浆中的水平。
6.试剂盒本发明也提供试剂盒，例如用于治疗目的的试剂盒，或用于调节细胞寿命或调节 细胞凋亡的试剂盒。试剂盒可包含一种或多种瑟土因调节性化合物(例如，以预先测量的 剂量)。试剂盒可选择性地包含用于将细胞与化合物接触的装置及使用说明书。装置包括 注射器、支架及其他用以将瑟土因调节性化合物导入个体(例如个体的血管)中，或将其涂 覆于受体皮肤的装置。在另一个实施方式中，本发明提供一种物质组合物，其包含本发明的瑟土因调节 性化合物与另一种治疗剂(与用于组合疗法及联用组合物(comination composition)的 那些相同的治疗剂)，存在于分别的剂型中，但彼此互相配合。术语“彼此互相配合”用于本 文意指，将分别的剂型包装在一起，或不然彼此相互连接，从而使得可以容易地明白这些分 别的剂型欲被销售，且欲以相同疗程的一部分给药。优选将药剂与瑟土因调节剂一起包装 于发泡包装或其他多室包装中，或作为可由使用者自行分开(例如，通过在两容器间的刻 划线处撕开)的连结的、分开密封的容器(例如锡箔小袋等)中。在又一个实施方式中，本发明提供一种包含存在于分别的容器中的a)本发明瑟 土因调节性化合物；及b)另一种治疗剂，例如那些描述于说明书中的试剂盒。除非另有说明，本发明方法的实施将利用本领域普通技术人员所知的细胞 生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组DNA及免疫学的常规 技术。这些技术完全在文献中有详尽的解释。参见，例如Molecular Cloning A Laboratorymanual (分子克隆实验室手册 A)，第 2 版，Sambrook、Fritsch 和 Maniatis 编 著(Cold Spring Harbor Laboratory Press 1989) ；DNA Cloning(DNA 克隆)，卷 I 与 II (D. N. Glover 编著，1985) ；Oligonucleotide Synthesis (寡苷核酸合成)(Μ. J. Gait 编 著，1984) ；Mullis 等人 U. S.专利 No :4，683，195 ;Nucleic Acid Hybridization (核酸杂
) (B. D. Hames & S. J. Higgins Hlr 1984) ；Transcription And Translation ( 译)(B. D. Hames & S. J. Higgins 编著，1984) ；Culture of Animal Cells (动物细胞培养) (R. I. Freshney，Alan R. Liss，Inc.，1987) ；Immobilized Cells And Enzymes (固定化细胞 与酵素)(IRLPress，1986) ；B. Perbal, Practical Guide To Molecular Cloning(分子克 隆的实施指南)(1984)；专题论文，Methods In Enzymology (酶学方法)(Academic Press, Inc.，N. Y.) ；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (哺乳细胞用基因转移载体) (J.H.Millerh*M.P.Calos)编著，1987，Cold Spring Harbor Laboratory Press)；酶学 方法(Methods In Enzymology)，卷 154 禾口 155 (Wu 等人编著)，Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (细胞与分子生物学的免疫化学方法)(Mayer和Walker 编著，Academic London,伦敦，1987) ；Handbook of Experimental Immunology (实验免 疫学手册)，卷 I-IV (D. Μ. Weir 和 C. C. Blackwell 编著，1986) ；Manipulating the Mouse Embryo (操作小鼠胚胎)(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y.，1986)。
实施例纳入下列实施例仅为说明本发明某些方面及具体实施方式
，而无意于以任何方式 限制本发明的目的，通过参照这些实施例更容易了解对本发明进行的一般描述。
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实施例1N- (2-氯吡啶-3-基)-2-硝基苯甲酰胺的制备 在0°C条件下，搅拌3-氨基-2-氯吡啶(3. 85g,29. 95mmol)和2_硝基苯甲酰氯 (5. 56g，29. 95mmol)在吡啶(50mL)中的混合物1小时，然后室温搅拌过夜。加入水，过滤收 集形成的沉淀，并干燥，得到N-(2-氯吡啶-3-基)-2_硝基苯甲酰胺，为白色固体(8. 52g， 粗产率(crudeyield) > 100% ) 2_(噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)苯胺的制备 在120 V的条件下加热N- (2-氯吡啶_3_基)_2_硝基苯甲酰胺(12. 98g， 46. 75mmol)、Ρ285(31· 17g, 140. 24mmol)和吡啶(80mL)在对-二甲苯(31 OmL)中的混合物 18小时。停止搅拌30分钟，并将混合物冷却至100°C。将上层澄清溶液转移，并真空浓缩， 接着加入乙醇(50mL)。在75°C加热悬浮液30分钟以溶解产物，热时过滤，冷却至室温，并静 置18小时。过滤收集固体，并用冷乙醇洗涤，真空干燥，得到N-(2-氯吡啶-3-基)-2-硝 基苯甲酰胺和2-(2_硝基苯基)噻唑并[5，4-b]吡啶的粗混合物，为黄色固体(10.60g)。在回流下加热在甲醇(MeOH) /H2O (80/20mL)中的上述粗混合物(10. 60g)、铁 (11. 50g，206. Olmmol)和NH4Cl (17. 63g，329. 61mmol)持续2小时。将反应混合物冷却至室 温，并用乙酸乙酯萃取。有机层真空浓缩，并经色谱法在硅胶上纯化，得到2-(噻唑并[5， 4-b]吡啶-2-基)苯胺，为黄色固体(3g，两步后的产率为28% )。(MS, M++H = 228)。6-羟基-2-苯基嘧啶-4-羧酸的制备
将草酰乙酸二乙酯钠盐(diethyl oxaloacetate sodium salt)4. 84g(23. Ommol) 加入16mL水和4mL乙醇的溶液中。搅拌悬浮液5分钟，然后加入3. 6mL(22. 5mmol)的 6.25M NaOH(Iiga)的溶液。在环境温度搅拌混合物15分钟，得到褐色溶液。向其中加入 3. Olg (19. 2mmol)的苯甲脒盐酸盐在15mL H2O中的溶液，得到pH = 11的溶液。接着，加入 ImL的6. 25M NaOH，完成时pH = 11，然后在80°C搅拌反应混合物2小时。加热期间加入额 外的NaOH以保持pH为11 12。(总计额外加入约IOmmol的NaOH)。将反应混合物冷却至5°C，然后加入12M HCl直到pH= 1。收集白色沉淀，用水洗涤，然后在滤器上干燥，得到 3. 09g(74% )的产物，为白色固体。6-氯-2-苯基嘧啶-4-碳酰氯的制备 向1. OOg的6-羟基-2-苯基嘧啶-4-羧酸中加入IOmL的磷酰氯。在回流下加热 反应混合物1小时，然后真空浓缩成油状物，除去尽可能多的磷酰氯。将油状物悬浮在30mL 的戊烷中，然后混合物以水(3X5mL)和盐水(lX5mL)萃取。有机层经MgSO4干燥，过滤， 并真空浓缩，得到1.03g(88% )的酰基氯，为白色固体。6-氯-2-苯基-N- (2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)嘧啶_4_羧酰胺的制 备 向368mg(l. 62mmol)的2_(噻唑并[5，4_b]吡啶-2-基)苯胺在IOmL氯仿中的 溶液中加入500yL的N，N-二异丙基乙胺(即Hunig碱)。向其中加入1. 6 2mmol的 6-氯-2-苯基嘧啶-4-碳酰氯在5mL氯仿中的溶液，然后在环境温度搅拌反应混合物。产 物在数分钟内开始结晶。30分钟后，用50mL的甲醇稀释反应混合物，然后过滤沉淀，用额外 的甲醇洗涤，并在滤器上干燥，得到561mg(78% )的酰胺，为黄色固体(MS，M++H = 444)。一般方法A 向 50mg(0. llmmol)的 6_ 氯 _2_ 苯基-N_(2_(噻唑并[5，4_b]吡啶 _2_ 基)苯 基)嘧啶-4-羧酰胺和ImL的四氢呋喃的悬浮液中加入约Immol的胺。在回流温度下搅拌 悬浮液30分钟，期间发生溶解。移除加热，用5mL水稀释反应混合物。过滤沉淀物，并用额 外的水然后用乙腈洗涤，在滤器上干燥，得到固体。如果不纯的话，重结晶产物。
2-苯基-6-哌嗪-1-基-嘧啶-4-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡啶-2-基-苯 基)_酰胺盐酸盐的制备 标题化合物根据一般方法A制备。中间体4-[2-苯基-6-(2-噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基氨基甲酰基)-嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁基酯用在二氯甲烷(DCM) 中的20%三氟乙酸(TFA)处理1小时。蒸发溶剂，剩余物用乙腈/水(1 4)稀释。加入 HCl水溶液(IN) (2. 5当量(equiv))，冻干所得溶液得到微粘的固体。固体吸收在乙腈/水 (1 4)中。加入IN HCl水溶液(1当量)，并且再次冻干所得溶液，得到总产率92%的标 题化合物，为自由流动黄色固体(MS，M++H = 494)。 6-(4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)-2-苯基-N_(2_(噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基)苯基)嘧啶-4-羧酰胺的制备通过一般方法A 制备。(MS，M++H = 552)。6-(2-( 二甲基氨基)乙基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)
苯基)嘧啶-4-羧酰胺的制备 通过一般方法A制备。从乙醇重结晶，得到40mg(71% )的黄色固体。(MS，M++H = 496)。
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6-(2-甲氧基乙基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)嘧 啶-4-羧酰胺的制备 通过一般方法A制备。从乙醇重结晶，得到39mg(72%)的白色固体。(MS，M++H = 483)。2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)_6_ ((1，1_ 二氧)硫吗啉代)
嘧啶-4-羧酰胺的制备 通过一般方法A制备。用热乙醇研磨，得到44mg(72% )的白色固体。(MS，M++H = 543)。2-(2-苯基-6-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基氨基甲酰基)嘧啶-4-基
氨基)乙酸甲酯的制备 向 200mg(0. 451mmol)的 6-氯-2-苯基-N_(2_(噻唑并[5，4_b]吡啶 _2_ 基)苯 基)嘧啶-4-羧酰胺和142mg(l. 13mmol)的甘氨酸甲基酯盐酸盐的混合物中加入4mL的二 甲基亚砜(DMSO)和400 μ L (2. 30mmol)的Hunig碱。在120°C搅拌混合物20分钟，然后除去反应混合物的加热，并用35mL的CH3OH稀释。过滤沉淀物，用额外的CH3OH洗涤，并在滤 器上干燥，得到 224mg(78% )的米白色粉末(off-white powder)。(MS，M++H = 497)。6-环戊基氨基-2-苯基-嘧啶-4-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基-苯
基)_酰胺的制备 标题化合物根据一般方法A制备，产率77%。(MS，M++H = 493)。2-苯基-6-哌啶-1-基-嘧啶-4-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡啶-2-基-苯
基)_酰胺的制备 标题化合物根据一般方法A制备，产率68%。(MS，M++H = 493)。6-((3札55)-3，5-二甲基-哌嗪-1-基)-2-苯基-嘧啶-4-羧酸(2_噻唑并[5， 4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰胺的制备 标题化合物根据一般方法A制备，产率86%。(MS，M++H = 522)。6_[1，4] 二氮杂环庚烷-1-基-2-苯基-嘧啶-4-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基)-酰胺盐酸盐的制备 标题化合物根据一般方法A制备，接着用DCM中20 % TFA处理。蒸发溶剂，剩余物 吸收在乙腈/水(1 5)中，加入IN HCl水溶液(6当量)，冻干所得凝胶状悬浮液，得到定 量产率的标题化合物(MS，M++H = 508)。3-(2-苯基-6-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基氨基甲酰基)嘧啶-4-基 氨基_)丙酸乙酯的制备 根据用于制备2-(2_苯基_6-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基氨基甲酰 基)嘧啶-4-基氨基)乙酸甲酯的方法制备，用P丙氨酸乙基酯盐酸盐代替甘氨酸甲基酯盐 酸盐。从乙醇重结晶，得到53mg(74% )的黄色晶体。(MS，M++H = 525)。3-(2-苯基-6-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基氨基甲酰基)嘧啶-4-基
氨基)丙酸的制备 向 24mg(0. 046mmol)的 3_ (2_ 苯基 _6_ (2_ (噻唑并[5，4_b]批啶 _2_ 基)苯基氨 基甲酰基)嘧啶-4-基氨基)丙酸乙酯在ImL DMSO中的溶液中加入0. ImL的2M NaOHi7m 液)。在环境温度搅拌黄色溶液25分钟，然后加入IOmL的水，接着加入ImL的IM HCl0悬 浮液用乙酸乙酯(3X5mL)萃取，然后在乙酸乙酯层中的产物悬浮液用水(lX5mL)反萃取。 加热有机层以溶解产物，用盐水(lX5mL)萃取，经MgSO4干燥，过滤，并浓缩成16mg(70% ) 的白色固体。(MS，M++H = 497)。6-[(2-甲氧基-乙基)_甲基-氨基]-2-苯基-嘧啶-4-羧酸(2-噻唑并[5， 4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰胺的制备
标题化合物根据一般方法A制备，产率99%。(MS，M++H = 497)。2-苯基-6-(2-哌嗪-1-基-乙基氨基)_嘧啶_4_羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基)-酰胺盐酸盐的制备 标题化合物根据一般方法A制备，接着用在DCM中的20% TFA处理。蒸发溶剂，剩 余物吸收在乙腈/水(1 2.5)中，加入IN HCl水溶液(20当量)，冻干溶液，得到定量产 率的标题化合物(MS，M++H = 537)。2-苯基-6-(哌啶-4-基氨基)_嘧啶-4-羧酸(2_噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基-苯
基)_酰胺盐酸盐的制备 标题化合物根据一般方法A制备，接着用在DCM中的20% TFA处理。蒸发溶剂，剩 余物吸收在乙腈/水(1 2.5)中，加入IN HCl水溶液(20当量)，冻干所得溶液，得到定 量产率的标题化合物(MS，M++H = 508)。6-(2-乙酰基氨基-乙基氨基)-2-苯基-嘧啶-4-羧酸(2_噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基)-酰胺的制备 标题化合物根据一般方法A制备，产率52%。(MS，M++H = 510)。6-(2-异丙基氨基-乙基氨基)-2-苯基-嘧啶-4-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基)-酰胺盐酸盐的制备 标题化合物根据一般方法A制备，总产率39%。用DCM(2mL)和在甲醇中的4M HCl (ImL)处理游离碱，得到沉淀物。过滤沉淀物，用DCM洗涤，并真空干燥，得到HCl盐 (135mg) (MS, M++H = 510)。6-乙氧基-2-苯基-N- (2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)嘧啶_4_羧酰胺
的制备 向 50mg(0. llmmol)的 6_ 氯 _2_ 苯基-N_(2_(噻唑并[5，4_b]吡啶 _2_ 基)苯 基)嘧啶-4-羧酰胺中加入ImL的DMS0。向其中加入乙醇中的0. 2mL(0. 5mmol)的2. 54M 乙醇钾。在120°C加热反应混合物10分钟，然后冷却至环境温度，并用IOmL甲醇稀释。过 滤沉淀物，用额外的甲醇洗涤，并在滤器上干燥，得到29mg(57%)的白色固体。(MS，M++H = 454)。6-(异丁基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)嘧啶_4_羧 酰胺的制备 通过一般方法A制备，产率75%。(MS，M++H = 481)。6-(二甲基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)嘧啶_4_羧
酰胺的制备 通过一般方法A 制备。132mg(60%产率)。(MS，M++H = 453)。6-(2-羟基乙基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)嘧
啶-4-羧酰胺的制备 通过一般方法A制备。从乙醇重结晶，得到44mg(83% )的白色固体。(MS，M++H = 469)。6-(3-羟基丙基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)嘧
啶-4-羧酰胺的制备 通过一般方法A制备。从乙醇重结晶，得到29mg(53%)的白色固体。(MS，M++H =483)。6-(2-( 二乙基氨基)乙基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)
苯基)嘧啶-4-羧酰胺的制备 通过一般方法A制备。从乙醇重结晶，得到40mg(68% )的白色固体。(MS，M++H = 524)。6- ( 丁基氨基)-2-苯基-N- (2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)嘧啶_4_羧
酰胺的制备 通过一般方法A制备。从乙醇重结晶，得到36mg(66%)的白色固体。(MS，M++H = 481)。6-(2-(甲基硫基)乙基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯
基)嘧啶-4-羧酰胺的制备 通过一般方法A 制备。97mg(86% )，白色固体。(MS，M++H = 499)。6-(2-(甲基磺酰基)乙基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基) 苯基)嘧啶-4-羧酰胺的制备 向50mg(0. IOmmol)的6_(2_(甲基硫基)乙基氨基)_2_苯基-N-(2_ (噻唑并[5， 4-b]吡啶-2-基)苯基)嘧啶-4-羧酰胺在ImL三氟乙酸中的溶液中加入50mL的30% (9. 8M)H202。在环境温度搅拌反应混合物1小时，然后用IOmL的水稀释。过滤沉淀物，用水 洗涤，并在滤器上干燥，得到43mg(81% )的淡黄色固体。(MS，M++H = 531)。6-[2-(2-甲基-噻唑-4-基)_乙基氨基]_2_苯基-嘧啶_4_羧酸(2-噻唑并 [5，4-b]吡啶-2-基-苯基)_酰胺的制备 标题化合物根据一般方法A制备，产率66% (MS, M++H = 550)。6-苯基氨基-2-苯基-嘧啶-4-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基-苯基)-酰
胺的制备 标题化合物根据一般方法A制备，产率70% (MS, M++H = 515)。2-苯基-6_[(卩比啶-2-基甲基)_氨基]-嘧啶-4-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基)-酰胺盐酸盐的制备
54 标题化合物根据一般方法A制备，总产率70%。用DCM (2mL)和在甲醇中的 4M HCl(ImL)处理游离碱，得到沉淀物。将其过滤，并用DCM洗涤，真空干燥，得到HCl盐 (202mg) (MS, M++H = 516)。2-苯基-6_[(卩比啶-3-基甲基)_氨基]-嘧啶-4-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基)-酰胺盐酸盐的制备 标题化合物根据一般方法A制备，总产率56%。用DCM (2mL)和在甲醇中的 4M HCl(ImL)处理游离碱，得到沉淀物。将其过滤，并用DCM洗涤，真空干燥，得到HCl盐 (170mg) (MS, M++H = 516)。2-苯基-6_[(吡啶-4-基甲基)-氨基]-嘧啶-4-羧酸(2_噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基)-酰胺盐酸盐的制备 标题化合物根据一般方法A制备，总产率67%。用DCM (2mL)和在甲醇中的 4M HCl(ImL)处理游离碱，得到沉淀物。将其过滤，并用DCM洗涤，真空干燥，得到HCl盐 (186mg) (MS, M++H = 516)。2-苯基-6_(2-苯基氨基-乙基氨基)_嘧啶-4-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基)-酰胺盐酸盐的制备 标题化合物根据一般方法A制备，总产率37%。用DCM (2mL)和在甲醇中的 4M HCl(ImL)处理游离碱，得到沉淀物。将其过滤，并用DCM洗涤，真空干燥，得到HCl盐 (117mg) (MS, M++H = 544)。6- (2-吗啉代乙基氨基)-2-苯基-N- (2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)嘧 啶-4-羧酰胺盐酸盐的制备 通过一般方法A制备。用2mL CH2Cl2和ImL在甲醇中的4M HCl处理游离碱，得 到沉淀物。将其过滤，用CH2Cl2洗涤，真空干燥，得到255mg(86% )的HCl盐。(MS，M++H = 538)。2-苯基-6-(2-(卩比咯烷-1-基)乙基氨基)-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)
苯基)嘧啶-4-羧酰胺盐酸盐的制备 通过一般方法A制备。用2mL CH2Cl2和ImL在甲醇中的4M HCl处理游离碱，得 到沉淀物。将其过滤，用CH2Cl2洗涤，真空干燥，得到232mg(85% )的HCl盐。(MS，M++H = 522)。6-(环己基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)嘧啶_4_羧
酰胺的制备 通过一般方法A 制备。产率 220mg(81% ). (MS, M++H = 507)。6-(甲基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)嘧啶_4_羧
酰胺的制备 通过一般方法A 制备。产率 180mg(84% )。(MS，M++H = 439)。6-(4-异丙基哌嗪-1-基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺盐酸盐的制备 通过一般方法A制备。用2mL CH2Cl2和ImL在甲醇中的4M HCl处理游离碱，得 到沉淀物。将其过滤，用CH2Cl2洗涤，真空干燥，得到227mg(80% )的HCl盐。(MS，M.+H = 536)。6- (2- (4-羟基哌啶-I-基)乙基氨基)_2_苯基-N- (2-(噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基)苯基)嘧啶-4-羧酰胺盐酸盐的制备 通过一般方法A制备。用2mL CH2Cl2和ImL在甲醇中的4M HCl处理游离碱，得 到沉淀物。将其过滤，用CH2Cl2洗涤，真空干燥，得到283mg(62% )的HCl盐。(MS，M++H = 552)。2-苯基-6-(2-(哌啶-1-基)乙基氨基)_N_ (2_ (噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)
苯基)嘧啶-4-羧酰胺的制备 通过一般方法A制备。用2mL CH2Cl2和ImL在甲醇中的4M HCl处理游离碱，得 到沉淀物。将其过滤，用CH2Cl2洗涤，真空干燥，得到277mg(89% )的HCl盐。(MS，M.+H = 536)。6_(双(2-甲氧基乙基)氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯 基)嘧啶-4-羧酰胺的制备通过一般方法A 制备。产率 180mg(62% )。(MS，M++H = 541)。6-(2_羟基-1-羟基甲基-乙基氨基)-2_苯基-嘧啶-4-羧酸(2_噻唑并[5， 4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰胺的制备
标题化合物根据一般方法A制备，产率64%。(MS，M++H = 499)。6-((2R，6S)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)-2-苯基-嘧啶-4-羧酸(2_噻唑并[5， 4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰胺的制备 标题化合物根据一般方法A制备，定量产率。(MS，M++H = 523)。6-(lR，4R)_2，5-二氮杂-二环[2.2. 1]庚 _2_ 基 _2_ 苯基-嘧啶 _4_ 羧酸(2_ 噻 唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)_酰胺盐酸盐的制备 标题化合物根据一般方法A制备，总产率90%，接着用在DCM中的20% TFA处理。 蒸发溶剂，剩余物吸收在乙腈/水(1 2.5)中，加入IN HCl水溶液(30当量)，然后冻干 所得溶液，得到标题化合物，为黄色固体(MS，M++H = 506)。2-苯基-6-(哌啶-3-基氨基)_嘧啶-4-羧酸(2_噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基-苯
基)_酰胺的制备 标题化合物根据一般方法A制备，总产率83 %。接着用在DCM中的20 % TFA处理。 蒸发溶剂，剩余物吸收在乙腈/水(1 2.5)中，并用IN NaOH水溶液碱化至pH = 8。析出 产物，并过滤，用水和乙腈洗涤，并风干，得到标题化合物，为白色粉末(MS，M++H = 508)。6- (2-(乙基硫基)乙基氨基)-2-苯基-N- (2_ (噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯 基)嘧啶-4-羧酰胺的制备 通过一般方法A制备。用热甲醇研磨，得到69mg(60% )的淡黄色固体。(MS，M++H =513)。6-(2-(乙基磺酰基)乙基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基) 苯基)嘧啶-4-羧酰胺的制备 向50mg(0.097mmol)的6_(2_(乙基硫基)乙基氨基)_2_苯基-N-(2-(噻唑并[5， 4-b]吡啶-2-基)苯基)嘧啶-4-羧酰胺在ImL三氟乙酸中的溶液中加入50 μ L(0. 40mmol) 的 30% (9. 8M)H202。(MS, M++H = 545)。 (S) -2- (2-苯基-6- (2-(噻唑并[5,4-b]吡啶_2_基)苯基氨基甲酰基)嘧 啶-4-基氨基)丙酸的制备 向 200mg(0. 451mmol)的 6-氯 _2_ 苯基-N_(2_(噻唑并[5，4_b]吡啶-2-基) 苯基)嘧啶-4-羧酰胺、160mg(l. 15mm0l)0f L-丙氨酸甲基酯盐酸盐和400 μ L (2. 3mmol) Hunig碱的混合物中加入4mL DMS0。在90°C加热反应混合物3小时，然后用20mL的水和 5mL的IM HCl稀释。过滤沉淀物，用额外的水稀释，然后在仍潮湿的时候吸收在15mL的甲 醇和5mL的DMSO中。向该混合物中加入ImL的25% w/v Na0H(7_a)，在环境温度搅拌该溶 液30分钟。真空除去甲醇，剩余的溶液用水(25mL)和IM HCl (15mL)稀释。悬浮液用乙酸 乙酯(2X15mL)萃取，然后合并的有机层用水(IXlOmL)和盐水(IXlOmL)反萃取，经MgSO4 干燥，过滤，并浓缩成固体。用热乙腈研磨，得到63mg(28%)的淡黄色固体。(MS，M++H = 497)。6- (3-氨基丙氧基)-2-苯基-N- (2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)嘧 啶-4-羧酰胺盐酸盐的制备 向 75mg(l. Ommol)的 4_氨基-1-丁醇在 ImL DMSO 中的溶液中加入 40mg (1. Ommol) 的60%NaH(在矿物油中)。搅拌悬浮液，简单加热使NaH分散，然后冷却回至环境温度。接 着，加入IOOmg (0. 226mmol)的6-氯-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]批啶_2_基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺。在环境温度下搅拌反应混合物30分钟，澄清初始悬浮液，在数分钟内得 到橙色溶液。用IOmL的水和4mL的戊烷稀释反应混合物。搅拌混合物，除去戊烷以从产物 中提取矿物油，然后过滤沉淀物，用水洗涤，再次悬浮于水中。向此悬浮液中加入ImL的IM HC1，然后过滤沉淀物，并在滤器上干燥，得到40mg(34%)的产物，为亮黄色固体。(MS，M++H =483)。6-(2-(3-甲基-IH-吡唑-1-基)乙基氨基)_2_苯基-N-(2_ (噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基)苯基)嘧啶-4-羧酰胺的制备 通过一般方法A制备，使用6-氯-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯 基)嘧啶-4-羧酰胺和2-(3-甲基-IH-吡唑-1-基)乙胺。产率97%, (MS，M++H = 533)。6-氯-2-苯基-N- (2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基)嘧啶_4_羧酰胺的制 备 将6-氯-2-苯基嘧啶-4-碳酰氯(14g，55. 3mmol)在CH2Cl2 (IOOmL)中的溶液加入 2-(噻唑并[5,4-c]吡啶-2-基)苯胺(7. 5g,32mmol)在 CH2Cl2(400mL)和三乙胺(50mL, 359mmol)中的溶液中。在环境温度搅拌反应混合物。产物在数分钟内开始结晶。搅拌16 小时，浓缩反应混合物以除去溶剂。剩余物用Me0H(500mL)稀释。过滤收集固体，并用额外 的MeOH洗涤，真空干燥，得到6-氯-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5,4-c]吡啶-2-基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺(11. 2g，77%产率)。(MS, M++H = 444)。一般方法B 6- (4- (2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)-2-苯基-N- (2-(噻唑并[5，4_c]吡
啶-2-基)苯基)嘧啶-4-羧酰胺盐酸盐的制备 将2-(甲氧基乙基)哌嗪(1. 6g，11. 3mmol)加入6_氯_2_苯基_N_(2_(噻唑并[5， 4-c]吡啶-2-基)苯基)嘧啶-4-羧酰胺(500mg，1. 13mmol)在THF(IOmL)中的悬浮液中。在 回流下加热反应混合物2小时，加热时变得均勻。在冷却至室温后，反应混合物用H2O (20mL) 稀释，所得固体通过过滤收集，用H2O然后用CH3CN漂洗，真空干燥，得到6- (4- (2-甲氧基乙 基)哌嗪-1-基)-2-苯基-N- (2-(噻唑并[5，4-c]吡啶-2-基)苯基)嘧啶_4_羧酰胺 (592mg，95%产率)。将固体溶解在 CH2Cl2 (15mL)中。加入 HCl/MeOH(l. 25M，3. 2mmol)，搅 拌混合物30分钟。固体通过过滤收集，用CH2Cl2,然后用Et2O漂洗，真空干燥，得到HCl盐。 (MS, M++H = 552)。6-吗啉代-2-苯基-N- (2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基)嘧啶_4_羧酰胺 的制备使用一般方法B，采用6-氯-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺和吗啉。产率85%, (MS, M++H = 495)。2-苯基-6-(哌嗪-1-基)-N-(2-(噻唑并[5,4-c]吡啶_2_基)苯基)嘧啶_4_羧 酰胺盐酸盐的制备 使用一般方法B，采用6-氯-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺和哌嗪羧酸叔丁基酯，接着用在DCM中的20% TFA处理。蒸发溶剂，剩余物 吸收在乙腈/水(1 2.5)中，加入IN HCl水溶液(20当量)，冻干所得溶液，得到定量产 率的标题化合物。产率85%，(MS, M++H = 494)。6-(4-异丙基哌嗪-1-基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5,4-c]吡啶_2_基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺盐酸盐的制备 使用一般方法B，采用6-氯-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺和1-异丙基哌嗪。产率72%, (MS, M++H = 536)。6-(2-甲氧基乙基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基)嘧 啶-4-羧酰胺 使用一般方法B，采用6-氯-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺和2-甲氧基乙胺。产率79%，(MS, M++H = 483)。6-(2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基) 苯基)嘧啶-4-羧酰胺的制备 使用一般方法B，采用6-氯-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺和N-(2-甲氧基乙基)甲胺。产率97%，(MS, M++H = 497)。6- (2-吗啉代乙基氨基)-2-苯基-N- (2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基)嘧 啶-4-羧酰胺盐酸盐的制备
使用一般方法B，采用6-氯-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺和2-吗啉代乙胺。76%产率，(MS, M++H = 538)。6-(吡啶-3-基甲基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基)
嘧啶-4-羧酰胺盐酸盐的制备 使用一般方法B，采用6-氯-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺和3-(氨基甲基)吡啶。65%产率，(MS, M++H = 516)。6-(吡啶-4-基甲基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺盐酸盐的制备 使用一般方法B，采用6-氯-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺和4-(氨基甲基)吡啶。产率40%, (MS, M++H = 516)。6-(2-吡咯烷-1-基)乙基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基)嘧啶-4-羧酰胺盐酸盐的制备
使用一般方法B，采用6-氯-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺和2-(吡咯烷-1-基)_乙胺。34%产率，(MS, M++H = 522)。6-(吡啶-2-基甲基氨基)-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基)
嘧啶-4-羧酰胺盐酸盐的制备 使用一般方法B，采用6-氯-2-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4_c]吡啶_2_基)苯基) 嘧啶-4-羧酰胺和2-(氨基甲基)吡啶。产率76%, (MS, M++H = 516)。 5-甲酰基-6-苯基吡啶甲酸甲酯的制备 在微波试管中，将6-氯-5-甲酰基吡啶甲酸甲酯(1.0g，5.0mmOl)、苯基硼酸 (670mg, 1. 1 当量)、Pd(dpPf) =CH2Cl2(180mg,0. 05 当量)禾口 KF(430mg, 1. 5 当量)溶解在 DMF(15mL，氮气冲洗)中。在微波(140°C X 10分钟)中加热反应混合物，暴露在空气中2 小时，过滤并浓缩。剩余物通过硅胶色谱法(0至100% EtOA在戊烷中的梯度)纯化。产物 级分浓缩至干燥，通过硅胶色谱法二次纯化，并浓缩至干燥。剩余物在醚戊烷中研磨，过滤 得到732mg(61%产率)的5-甲酰基-6-苯基吡啶甲酸甲酯，为白色固体。从浓缩母液得到 第二份产物(195mg, 16% ) ο (MS, M++H = 242)。6-氯-5-甲酰基吡啶甲酸甲酯根据在Gangadasu，B. ；Narender，P.；
66Kumar, S.Bharath；Ravinder, M. ；Rao, B.Ananda ；Ramesh, Ch. ；Raju, B. China；Rao, V. Jayathirtha"FaciIe and selective synthesis of chloronicotinaldehydes by the Vilsmeier reaction, "Tetrahedron 2006，62，8398 中描述的方法制备。
5-(吗啉代甲基)-6-苯基吡啶甲酸甲酯的制备
在无水CH2Cl2(4mL)中搅拌5_甲酰基_6_苯基吡啶甲酸甲酯(24Img，1. Ommol) 和吗啉(131yL，1.5当量)2小时，然后浓缩至干燥。剩余物溶解在THF中，并用 Na(OAc) 3BH(254mg)搅拌3小时。然后加入甲醇，再搅拌反应混合物8小时。加入额外份的 Na (OAc) 3BH (254mg)，搅拌反应混合物4小时，然后用甲醇和水淬灭。混合物经浓缩，悬浮在 CH2Cl2/NaHC03水溶液(饱和)中，有机层浓缩至干燥，粗产物通过硅胶色谱法(O至100% EtOAc在戊烷中的梯度)纯化。各级分浓缩至干燥，用戊烷研磨(chase)，得到5-(吗啉代 甲基)-6-苯基吡啶甲酸甲酯，为粘性固体。(155mg，产率50% )。(MS，M++H = 313)。5-(吗啉代甲基)-6-苯基-N- (2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)吡啶酰胺 的制备在1 1的THF:水中搅拌5_(吗啉代甲基)-6_苯基吡啶甲酸甲酯(155mg， 0. 5mmol)、Li0H(58mg,5当量)持续18小时。反应混合物浓缩至干燥，溶解在水中，用4N HCl (ImL)酸化，并冻干。剩余物溶解在DMF(4mL)中。一半的DMF溶液(0. 25mmol)用二异 丙基乙胺(DIEA) (0. 260mL, 1. 5当量)和2_(7_氮杂-IH-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四 甲基脲六氟磷酸酯(HATU) (143mg，6当量)在室温搅拌10分钟。加入2_(噻唑并[5，4_b] 吡啶-2-基)苯胺(57mg，1当量)，并在40°C搅拌反应混合物60小时。反应混合物用水淬 灭。过滤收集固体，用热甲醇研磨。HCl盐通过加入在甲醇中的HCl制备，浓缩至干燥，得到 5-(吗啉代甲基)-6-苯基-N-(2-(噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基)苯基)吡啶酰胺，为HCl 盐(12mg，9%产率)(MS, M++H = 508)。4- (1-叔丁氧基羰基_氮杂环丁烷-3-基氧基)-6-苯基-吡啶-2-羧酸的制备 向搅拌的4-羟基-6-苯基吡啶-2-羧酸(243mg，1. Ommo 1)在四氢呋喃(THF) (5mL) 中的溶液中加入l-Boc-3-羟基氮杂环丁烷(217mg，1. 25mmol)，接着加入三苯基膦(328mg， 1. 25mmol)，并滴加偶氮二羧酸二异丙酯(DIAD) (0. 25mL, 1. 25mmol)。在55°C加热所得溶 液12小时。蒸发溶剂，剩余物用INNaHSO4稀释，并用氯仿萃取。用稀NaHCO3溶液洗涤有机 相，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。剩余物通过硅胶色谱法用在戊烷中的0-50%梯度的乙酸 乙酯纯化，得到292mg的产物，被等摩尔量的联氨-1，2-二羧酸二异丙基酯(diisopropyl hydrazine-1, 2-dicarboxylate) ^亏I。该中间体用在THF(4mL)和甲醇(2mL)中的Li0H(172mg, 7. 2mmol)处理1小时。用 IN HCl水溶液酸化混合物至pH = 3，并用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠 干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为油状物，仍然被联氨-1，2- 二羧酸二异丙基酯污染。4_(氮杂环丁烷-3-基氧基)-6_苯基-吡啶-2-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基)-酰胺的制备 室温下搅拌4-(l-叔丁氧基羰基-氮杂环丁烷-3-基氧基)-6_苯基-吡 啶-2-羧酸(178mg，0. 48mmol)、2-噻唑并[5，4_b]吡啶 _2_ 基-苯基胺(114mg，0. 5mmol)、 HATU(219mg,0. 58mmol)、DIEA(0. 167mL，0. 96mmol)在 DMF(56mL)中的混合物过夜。反应 混合物以水(15mL)稀释。固体通过过滤收集，用水洗涤，风干。粗产物在乙腈/乙酸乙酯 (3 1) (5mL)和水(ImL)中研磨，过滤并风干，得到162mg(58% )的Boc保护的标题化合 物。该中间体用在二氯甲烷(5mL)中的20% TFA处理1小时。蒸发溶剂，剩余物吸收 在2mL的乙腈中。加入水(IOmL)，混合物用IN NaOH中和直到产物析出。其通过过滤收集， 用水洗涤。将该固体悬浮在乙腈(3mL)和水(3mL)中，并于40°C研磨15分钟。冷却至室温 后，其通过过滤收集，并风干，得到103mg(78% )的标题化合物，为游离碱。将游离碱悬浮在 乙腈和水(1 4) (IOmL)中，加入IN HCl水溶液(0. 5mL)，加入更多乙腈直到均勻。蒸发 过量的乙腈，冻干所得浑浊溶液，得到116mg(74%)的标题化合物，为HCl盐。(MSiM^H = 480)。4-羟基-6-苯基-吡啶-2-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基-苯基)-酰胺的制备
4-羟基-6-苯基吡啶-2-羧酸(2. 77g，12. 83mmol)与 2-噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基胺(2. 62g, 11. 66mmol)、HATU (5. 75g, 15. 16mmol)和 DIEA (6mL，35mmol) 在DMF(130mL)中混合。在45°C加热所得悬浮液过夜。将反应混合物冷却至室温，加入水 (IOOmL)。过滤收集所得固体，用水洗涤，风干。粗产物悬浮在200mL的1 1乙腈/乙酸 乙酯中，并在40°C搅拌1小时。冷却至室温后，过滤收集固体，并风干。得到3. 5g的标题化 合物，为黄色固体，纯度85% (55%产率，为纯度而调节)。小份(96mg)用热乙酸乙酯研磨 而进一步纯化，过滤得到76mg的4-羟基-6-苯基-吡啶-2-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基)-酰胺(MS, M++H = 425)。4-(2-溴-乙氧基)-6-苯基-吡啶-2-羧酸(2_噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基-苯 基)_酰胺的制备 在80°C条件下，将4-羟基-6-苯基-吡啶-2-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基)_酰胺(1.0g，2.0mmOl)溶解在DMSO(60mL)中。将溶液冷却至室温，并 滴加至70°C的碳酸钾(691mg，5. Ommol)和二溴乙烷(3. 45mL，40. Ommol)的搅拌混合物中。 滴加完成后，在80°C搅拌反应混合物2小时。冷却至室温后，混合物用水稀释，并用二氯 甲烷(3X50mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水(2X30mL)洗涤，并经硫酸钠干燥，过滤 并浓缩。剩余物通过硅胶色谱法用20-50%乙酸乙酯在戊烷中的梯度洗脱而纯化。得到 495mg(46% )的标题化合物，为棕色固体。一般方法C: 在密封的试管中，4-(2-溴-乙氧基)-6-苯基-吡啶-2-羧酸(2_噻唑并[5，4_b] 吡啶-2-基-苯基)_酰胺(250mg，0. 47mmol)和合适的胺(4-10当量)混合在THF(IOmL) 中，并加热至100°C直到反应完成，通常为12-24小时。冷却至室温后，反应混合物以IOmL 的水稀释。产物析出，并过滤，用乙腈洗涤。如有需要，粗产物通过用乙腈研磨或者通过制 备性高效液相色谱(HPLC)进一步纯化。4- [2- (1，1- 二氧-1-硫代吗啉_4_基)-乙氧基]_6_苯基-吡啶_2_羧酸(2_噻 唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)_酰胺盐酸盐的制备
标题化合物根据一般方法C制备，使硫代吗啉二氧化物(8当量)与4- (2-溴-乙 氧基)-6-苯基-吡啶-2-羧酸(2-噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰胺反应，产率 为93%。将产物悬浮在乙腈/水(1 4)中，并加入IN HCl水溶液(3当量)。超声处理 所得浆液，然后冻干得到标题化合物，为HCl盐(MS，M++H = 586)。4-{2-[4-(2-甲氧基-乙基)_哌嗪基]-乙氧基} _6_苯基-吡啶_2_羧酸 (2-噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)_酰胺盐酸盐的制备 标题化合物根据一般方法C制备，使1-(2_甲氧基乙基)哌嗪(8当量)与 4-(2-溴-乙氧基)-6_苯基-吡啶-2-羧酸(2-噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰 胺反应，产率为83%。将产物悬浮在乙腈/水(1 4)中，并加入IN HCl水溶液(3当量)。 超声处理所得浆液，然后冻干得到标题化合物，为HCl盐(MS，M++H = 595)。4- [2- (2- 二甲基氨基-乙基氨基)_乙氧基]-6-苯基-吡啶_2_羧酸(2-噻唑并 [5，4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰胺盐酸盐的制备 标题化合物根据一般方法C制备，使N，N_ 二亚乙基二胺(8当量)与4_(2_溴-乙 氧基)-6-苯基-吡啶-2-羧酸(2-噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰胺反应，并 通过制备性HPLC纯化。浓缩来自HPLC的各级分，然后经IN HCl水溶液处理，并冻干得到 46mg(38% )的标题化合物，为 HCl 盐(MS, M++H = 539)。4-[2-((2R，6S) _2，6_ 二甲基-吗啉_4_基)-乙氧基]_6_苯基-吡啶_2_羧酸 (2-噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)_酰胺的制备 标题化合物根据一般方法C制备，使顺-2，6-二甲基吗啉(10当量)与 4-(2-溴-乙氧基)-6_苯基-吡啶-2-羧酸(2-噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰 胺反应。粗产物用乙腈(3mL)研磨而纯化。得到标题化合物，产率71%，为游离碱(MS，M++H =566)。4- {2- [ (2-甲氧基-乙基)-甲基-氨基]-乙氧基} -6-苯基-吡啶_2_羧酸(2_噻 唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)_酰胺的制备 标题化合物根据一般方法C制备，使N-(2-甲氧基乙基)甲胺(4当量)与 4-(2-溴-乙氧基)-6_苯基-吡啶-2-羧酸(2-噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰 胺反应。粗产物用乙腈和乙酸乙酯反复研磨而纯化。得到标题化合物，产率2%，为游离碱 (MS, M++H = 540)。4-(2-溴-乙氧基)-6_苯基-吡啶-2-羧酸乙基酯的制备 在80°C条件下，经2小时向搅拌的碳酸钾(829mg，6. Ommo 1)在二溴乙烷(3. 5mL， 41mmol)中的悬浮液中加入4-羟基-6-苯基-吡啶-2-羧酸乙基酯(973mg,4. Ommol)在 乙腈(30mL)中的溶液。将混合物冷却至室温，并搅拌2小时，真空除去溶剂。剩余物用水 稀释，用乙酸乙酯(3X30mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并浓缩。 剩余物经硅胶色谱法纯化，用在戊烷中的10-50%乙酸乙酯梯度洗脱，得到1. 01g(72% )的 标题化合物，为白色固体。4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-6_苯基-吡啶_2_羧酸乙基酯的制备 在60°C条件下，搅拌4-(2-溴-乙氧基)_6_苯基-吡啶_2_羧酸乙基酯(350mg， 1. Ommol)和吗啉(0. 435mL，5. Ommol)在乙腈(5mL)中的溶液2小时。蒸发溶剂，剩余物 用水稀释，用乙酸乙酯(3X20mL)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，并浓缩，得到 362mg(100% )的标题化合物。4- (2-吗啉-4-基-乙氧基)-6-苯基-吡啶_2_羧酸的制备 4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-6-苯基-吡啶-2-羧酸乙基酯(356mg，1. Ommol)用 在THF(4mL)和甲醇(2mL)的混合物中的氢氧化锂(120mg，5. Ommol)处理1小时。蒸发溶 剂，剩余物用水稀释，并用IN HCl水溶液酸化至pH = 3。所得水溶液冻干，得到671mg的标 题化合物，为含LiCl的混合物。4- (2-吗啉-4-基-乙氧基)-6-苯基-吡啶_2_羧酸(2_噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基)-酰胺盐酸盐的制备 4-(2_吗啉-4-基-乙氧基)-6_苯基-吡啶-2-羧酸(含LiCl的混合物) (540mg)、2_ 噻唑并[5,4-b]吡啶 _2_基-苯基胺(182mg，0. 8mmol)、HATU (456mg，1. 2mmol)、 DIEA (0. 28mL, 1. 6mmol)的混合物在DMF (IOmL)中在40°C，搅拌过夜，然后在室温搅拌48小 时。用水(IOmL)稀释反应混合物。形成的固体通过过滤收集，并用水洗涤，风干。粗产物 悬浮在乙腈/水(1 4) (120mL)中，并加入IN HCl水溶液(3当量)。超声处理所得悬浮 液，然后冻干得到344mg(74% )的标题化合物，为HCl盐。(MS, M++H = 538)。
4- [2- (2-乙氧基羰基-6-苯基-吡啶_4_基氧基)_乙基]_哌嗪羧酸叔丁基
酯的制备
在60°C搅拌4-(2-溴-乙氧基)-6-苯基-卩比啶-2-羧酸乙基酯(350mg，1. Ommol)、 N-Boc 哌嗪(279mg，1. 5mmol)和 DIEA(0. 35mL，2. Ommol)在乙腈(5mL)中的溶液过夜。蒸发 溶剂，剩余物用水稀释，并用乙酸乙酯(3X20mL)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥， 浓缩得到502mg(100% )的标题化合物。4- [2- (2-羧基-6-苯基-吡啶_4_基氧基)_乙基]_哌嗪羧酸叔丁基酯的制 备 4- [2- (2-乙氧基羰基-6-苯基-吡啶_4_基氧基)_乙基]-哌嗪羧酸叔丁基 酯(455mg，1. Ommol)用在THF(4mL)和甲醇(2mL)混合物中的氢氧化锂(120mg，5. Ommol) 处理1小时。蒸发溶剂，剩余物用水稀释，并用IN HCl水溶液酸化至pH = 3。静置时，产物 析出，通过过滤收集，并风干，得到170mg(40% )的标题化合物。6-苯基-4-(2-哌嗪-1-基-乙氧基)_吡啶-2-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡啶-2-基-苯基)-酰胺盐酸盐的制备
在40°C，4-[2-(2-羧基-6-苯基-吡啶-4-基氧基)-乙基]-哌嗪-1-羧酸 叔丁基酯(170mg，0. 4mmol)、2-噻唑并[5，4_b]吡啶 _2_ 基-苯基胺(78mg，0. 32mmol)、 HATU(182mg,0. 48mmol) ,DIEA(0. 14mL，0. 8mmol)的混合物在 DMF(4mL)中搅拌 36 小时。反 应混合物用水(IOmL)稀释。析出的固体经过滤，用水洗涤，并风干得到133mg(65% )的产 物。粗产物用在二氯甲烷(4mL)中的20% TFA处理1小时。蒸发溶剂，剩余物用2mL乙腈 和3mL水稀释。加入IN HCl水溶液(10当量)，超声处理所得悬浮液，并冻干得到138mg的 标题化合物，为HCl盐。(MS，M++H = 537)。6- (3-羟基-丙-1-炔基)-2-苯基-嘧啶-4-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡 啶-2-基-苯基)-酰胺的制备 在微波试管中，将氮气冒泡通过6-氯-2-苯基-嘧啶-4-羧酸(2-噻唑并[5，4_b] 吡啶-2-基-苯基)-酰胺(177mg，0. 4mmol)、炔丙醇(59 μ L，1. Ommo 1) ,Cl2Pd (PPh3) 2 (18mg， 0. 025mmol)、CuI (7. 5mg，0. 04mmol)和三乙胺(0. 35mL，2. 5mmol)在 THF (4mL)中的混合物 5分钟。罩上试管，在10(TC在微波炉中加热混合物30分钟。反应混合物用水和盐水稀释， 用氯仿(3X20mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并浓缩。剩余物通 过硅胶色谱法纯化，用在戊烷中的0-80%的乙酸乙酯梯度洗脱，得到102mg(55% )的略微 不纯的产物。在50°C条件下，该产物在甲醇(3mL)、乙腈(3mL)和乙酸乙酯(2mL)的混合物 中研磨10分钟，然后通过过滤收集，风干得到53mg的纯标题化合物(MS，M++H = 464)。2-氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-4-羧酸甲基酯的制备 在0 °C条件下，向2，6- 二氯-嘧啶-4-羧酸甲基酯(1. 035g, 5. Ommo 1)在 DCM(12mL)中的溶液中加入三乙胺(0. 7mL，5. Ommol)，接着加入吗啉(463mg，5. Ommol)在DCM(SmL)中的溶液。在0°C搅拌所得溶液30分钟。反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯 (3XSOmL)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到1.215g(94% )的标 题化合物，为白色固体。6-吗啉-4-基-2-苯基-嘧啶-4-羧酸的制备 向微波试管中装入2-氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-4-羧酸甲基酯(515mg，2. Ommol)、 苯基硼酸(390mg,3. 2mmol)和 Pd (PPh3) 4 (185mg，0. 16mmol)。加入乙腈(39mL)，将氮气鼓泡 通过溶液5分钟。加入三乙胺(558 μ L，4. Ommol)，并于160°C在微波炉中加热所得混合物 2小时。反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯(3X30mL)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠 干燥，过滤并浓缩至干燥。剩余物经硅胶色谱用在戊烷中的0-50%的乙酸乙酯梯度洗脱纯 化。得到240mg(40%)的6-吗啉-4-基-2-苯基-嘧啶-4-羧酸甲基酯，为白色固体。该中间体(227mg,1. 32mmol)用在 THF (5mL)和 MeOH(4mL)中的 Li0H(158mg, 6. 59mmol)处理1小时。加入水，混合物用IN HCl水溶液酸化至pH = 2，并用乙酸乙酯 (2X30mL)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，并浓缩，得到220mg(58%)的标题化合 物，为白色固体。6-吗啉-4-基-2-苯基-嘧啶-4-羧酸(2-噻唑并[5，4_b]吡啶-2-基-苯 基)_酰胺的制备标题化合物根据制备4- (2-吗啉-4-基-乙氧基)-6-苯基-吡啶_2_羧酸(2_噻 唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰胺的方法制备，使6-吗啉-4-基-2-苯基-嘧啶-4-羧 酸与2-噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基胺反应，产率24%。其通过在热乙腈/甲醇 (1 1)中研磨而纯化(MS，M++H = 495)。6-甲基-2-苯基嘧啶-4-羧酸甲酯的制备 室温，向2-氯-6-甲基嘧啶-4-羧酸甲酯(1.87g，10mmOl)、苯基硼酸(1.34g， llmmol)、Pd2(dba)3(0. 14g，0. 15mmol)和三叔丁基膦(4mL，18mmol，10%重量在己烷中)在
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THF(50mL)中的混合物中加入KF(1. 9g，3. 3mmol)，在回流温度下加热反应混合物8小时。 TLC控制(石油醚乙酸乙酯=5 1)。在冷却到室温后，通过才利特垫(pad of celite) 过滤混合物，真空浓缩滤液。通过中压(medium pressure)液相色谱法在硅胶(用石油醚 乙酸乙酯=20 1至10 1洗脱)上纯化粗产物，得到6-甲基-2-苯基嘧啶-4-羧酸甲 酯为白色固体(1.0g，44% )。6_(溴甲基)-2_苯基嘧啶-4-羧酸甲酯的制备 将6-甲基-2-苯基嘧啶-4-羧酸甲酯(0. 5g,2. 2mmol)禾 Π Br2 (0. 35g，2. 2mmol) 在IOml的乙酸中的混合物加热至80°C持续1小时。混合物减压浓缩。粗产物通过中压液 相色谱法在硅胶(用石油醚乙酸乙酯=50 1至40 1洗脱)上纯化，得到6-(溴甲 基)-2_苯基嘧啶-4-羧酸甲酯，为棕色固体(39mg，6% )。2-苯基-6_(吡咯烷-1-基甲基)嘧啶-4-羧酸甲酯的制备 将6-(溴甲基)-2_苯基嘧啶-4-羧酸甲酯(1.2g，3.9mm0l)溶解在DCM(30mL) 中，加入DIEA (1. 3mL，7. 8mmol)和吡咯烷(1. 3mL，7. 8mmol)。所得混合物在室温搅拌过夜。 减压浓缩混合物。剩余物通过硅胶柱色谱法(用石油醚乙酸乙酯=10 1至5 1洗 脱)纯化，得到2-苯基-6-(吡咯烷-1-基甲基)嘧啶-4-羧酸甲酯，为白色固体。(0.8g， 69% )。2-苯基_6-(吡咯烷-1-基甲基)嘧啶-4-羧酸的制备将2-苯基-6-(吡咯烷-1-基甲基)嘧啶-4-羧酸甲酯(1. 12g，3. 8mmol)、LiOH. H2O(0. 47g，11. 3mmol) THF(IOmL)、CH3OH(IOmL)和 H2O(5mL)加入烧瓶中。所得混合物在室 温下搅拌4小时。用H20(20mL)稀释反应混合物，通过IN HCl酸化至pH = 5。白色沉淀通 过过滤收集，得到2-苯基-6-(吡咯烷-1-基甲基)嘧啶-4-羧酸，为白色固体。(0.92g， 86% )。2-苯基-6-卩比咯烷-1-基甲基-嘧啶-4-羧酸(2_噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基-苯 基)_酰胺盐酸盐的制备 标题化合物通过制备4- (2-吗啉-4-基-乙氧基)-6-苯基-吡啶_2_羧酸(2_噻 唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰胺的方法制备，使2-苯基-6-吡咯烷-1-基甲基-嘧 啶-4-羧酸与2-噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基胺反应。其通过热乙腈研磨而纯化。将 游离碱悬浮在乙腈/水(1 1)中，用IN HCl水溶液(1.5当量)处理，并冻干，得到标题 化合物，产率 65% (MS, M++H = 493)。化合物6_(吗啉代甲基)-2-苯基嘧啶-4-羧酸甲酯的制备 将6-(溴甲基)-2_苯基嘧啶-4-羧酸甲酯(0. 83g,2. 7mmol)溶解于DCM(13mL) 中，加入DIEA(0. 9mL，5. 4mmol)和吗啉(0. 28mL，3. 2mmol)。室温搅拌得到的混合物过夜。 浓缩混合物，剩余物通过硅胶柱色谱法(用石油醚乙酸乙酯=10 1至5 1洗脱)而 纯化，得到6-(吗啉代甲基)-2-苯基嘧啶-4-羧酸甲酯为白色固体(0. 78g,92% )。化合物6_(吗啉代甲基)-2-苯基嘧啶-4-羧酸的制备 将6-(吗啉代甲基)-2-苯基嘧啶-4-羧酸甲酉旨(1. 6g, 5. 3mmol)、LiOH. H2O (0. 67g, 15. 9mmol) ,THF(IOmL) ,CH3OH(IOmL) *H20(5mL)加入烧瓶中。在室温搅拌所得混合物4小 时。反应混合物通过吐0(20!^)稀释，并通过IN HCl酸化至pH = 5。收集白色沉淀物，得 到6-(吗啉代甲基)-2-苯基嘧啶-4-羧酸，为白色固体。(0. 7g,46% )。6-吗啉-4-基甲基-2-苯基-嘧啶-4-羧酸(2_噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基-苯 基)_酰胺盐酸盐的制备 标题化合物根据制备4- (2-吗啉-4-基-乙氧基)-6-苯基-吡啶_2_羧酸(2_噻 唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)_酰胺的方法制备，使6-吗啉-4-基甲基-2-苯基-嘧 啶-4-羧酸与2-噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基胺反应。其通过制备性HPLC纯化。来 自HPLC的各级分，用IN HCl水溶液处理，并冻干，得到标题化合物，产率14% (MS, M++H = 509)。2-氯-6-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪基]-嘧啶_4_羧酸甲基酯的制备 在0°C条件下，向2，6-二氯-嘧啶-4-羧酸甲基酯(580mg，2. 8mmol)在DCM(6mL) 中的溶液中加入三乙胺(0. 39mL，2.8mmol)，接着加入1-(2-甲氧基乙基)哌嗪(406mg， 2.8mmol)在DCM(6mL)中的溶液。在0°C搅拌所得溶液30分钟。反应混合物用水稀释，并 用DCM(3X80mL)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到870mg(99% ) 的标题化合物，为浅黄色固体。6-[4-(2-甲氧基-乙基)_哌嗪-1-基]-2-苯基-嘧啶_4_羧酸的制备 向微波试管中装入2-氯-6-[4_(2-甲氧基-乙基)_哌嗪基]-嘧啶_4_羧 酸甲基酯(630mg，2. Ommol)、苯基硼酸(390mg，3. 2mmol)和 Pd(PPh3)4(185mg，0. 16mmol)。 加入乙腈(38mL)，将氮气鼓泡通过溶液5分钟。加入三乙胺(558 μ L，4. Ommol)，在微波炉 中于160°C加热所得混合物2小时。反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯(3X40mL)萃取。 合并的有机萃取物用盐水洗涤两次，用水洗涤一次，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。剩余物通 过硅胶色谱法用在DCM中的0-4%的MeOH梯度洗脱而部分纯化。得到640mg(90% )的 6- [4- (2-甲氧基-乙基)_哌嗪-1-基]-2-苯基-嘧啶-4-羧酸甲基酯，为橙色油状物，被 2-氯-6-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-嘧啶-4-羧酸甲基酯污染。粗产物用在 THF(IOmL)和MeOH(IOmL)中的Li0H(215mg，8. 9mmol，5当量)处理1小时。加入水，混合物 用IN HCl水溶液中和，并冻干，得到988mg的标题化合物，为LiCl污染的2-氯_6-[4-(2_甲 氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-嘧啶-4-羧酸和2-甲氧基-6-[4-(2-甲氧基-乙基)_哌 嗪-1-基]-嘧啶-4-羧酸的加和物(adduct)。2-氯-6-[4_(2-甲氧基-乙基)_哌嗪基]-嘧啶_4_羧酸(2-噻唑并[5， 4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰胺盐酸盐的制备 标题化合物根据制备4- (2-吗啉-4-基-乙氧基)-6-苯基-吡啶_2_羧酸(2_噻 唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰胺的方法制备，使上述粗产物与2-噻唑并[5，4-b] 吡啶-2-基-苯基胺反应。通过制备性HPLC分离反应的副产物。蒸发HPLC的各级分，用 IN HCl水溶液处理，并冻干得到标题化合物，产率8% (MS, r+H = 510)。2-甲氧基-6-[4_(2-甲氧基-乙基)_哌嗪基]-嘧啶_4_羧酸(2-噻唑并 [5,4-b]吡啶-2-基-苯基)_酰胺盐酸盐的制备标题化合物根据制备4- (2-吗啉-4-基-乙氧基)-6-苯基-吡啶_2_羧酸(2_噻 唑并[5，4-b]吡啶-2-基-苯基)-酰胺的方法制备，通过使上述粗产物与2-噻唑并[5， 4-b]吡啶-2-基-苯基胺反应。通过制备性HPLC分离反应的副产物。蒸发HPLC的各级 分，用IN HCl水溶液处理，并冻干得到标题化合物，产率6% (MS, r+H = 506)。6-羟基嘧啶-4-羧酸的制备 向2. 52g (12. Ommol)的草酰乙酸二乙基酯钠盐在8mL水中的悬浮液中加入1. 9mL 的6.25M NaOH(7_a)，经1分钟滴加。在环境温度搅拌混合物40分钟，得到橙色溶液。接 着，加入在2mL水中的2. lg(26mmol)甲脒盐酸盐。用冰浴冷却反应混合物，并借助pH计 将PH值保持在11 11. 5之间，反应进行40分钟加入6. 25M NaOH，然后通过加入12M HCl 调节PH，得到白色沉淀。将其过滤，用0. IM HCl(2X5mL)洗涤，然后在滤器上干燥，得到 618mg(37% )的浅褐色固体。6-氯嘧啶-4-碳酰氯的制备 向500mg(3. 57mmol)的6_羟基嘧啶_4_羧酸中加入ImL的P0C13。在回流下加 热反应混合物30分钟，期间形成黑色物质。真空除去POCl3,然后从烧瓶侧刮出剩余物，并 与20mL的戊烷一起搅拌。戊烷浆液用水(2X5mL)、盐水(lX5mL)萃取，随水层排出所有 的黑色不溶物质，经MgSO4干燥，过滤并浓缩成油状物。用干冰丙酮浴冷却，引起结晶，得到 250mg(40%)的酰基氯，为浅黄色结晶固体。6-氯-N-(2-(噻唑并[5,4-b]吡啶_2_基)苯基)嘧啶_4_羧酰胺的制备 向62mg(0. 271mmol)的2_(噻唑并[5,4-b]吡啶_2_基)苯胺在2mL氯仿中的溶 液加入100yL(0.574mmol)的Hunig碱。在环境温度下，向其中加入48mg(0. 27mmol)的 6-氯嘧啶-4-碳酰氯在ImL氯仿中的溶液。沉淀物很快就形成搅拌混合物10分钟，然后加 入15mL的甲醇。过滤沉淀物，用额外的甲醇洗涤，然后在滤器上干燥，得到62mg(62% )的 浅黄色固体。6-(2-( 二甲基氨基)乙基氨基)-N-(2-(噻唑并[5,4-b]吡啶_2_基)苯基)嘧 啶-4-羧酰胺的制备 向悬浮在1. 5mL THF中的50mg 6-氯-N_(2_(噻唑并[5，4_b]吡啶-2-基)苯 基)嘧啶-4-羧酰胺中加入50yL(0.46mmol)的N，N-二甲基乙胺。在回流下加热混合物 30分钟，然后用IOmL的水稀释。过滤沉淀物，用水洗涤，并在滤器上干燥，得到30mg(55%) 的白色固体。(MS，M++H = 420)。6-羟基-2-甲基嘧啶-4-羧酸的制备 根据制备6-羟基-2-苯基嘧啶-4-羧酸的方法制备，用乙脒盐酸盐代替苯甲脒盐 酸盐。得到930mg(60%)的浅褐色固体。
6-氯-2-甲基嘧啶-4-碳酰氯的制备 向920mg(5. 97mmol)的6-羟基-2-甲基嘧啶_4_羧酸中加入13mL的P0C13。在 回流下加热混合物1小时，然后真空浓缩成棕色油状物。将其悬浮于25mL的戊烷中，并 用水(2X10mL)萃取。合并的水层用戊烷(lX25mL)反萃取，然后合并的戊烷层再次用水 (2 X IOmL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并浓缩，得到494mg (43% )的无色油状物。6-氯-2-甲基-N- (2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)苯基)嘧啶_4_羧酰胺的制
备 根据制备6-氯-N- (2-(噻唑并[5，4-b]吡啶_2_基)苯基)嘧啶_4_羧酰胺的 方法制备，用6-氯-2-甲基嘧啶-4-碳酰氯代替6-氯-2-甲基嘧啶-4-碳酰氯。得到 602mg(61% )的黄色固体。6-(2-( 二甲基氨基)乙基氨基)-2-甲基-N-(2-(噻唑并[5，4_b]吡啶_2_基)
苯基)嘧啶-4-羧酰胺的制备 根据制备6-(2-( 二甲基氨基)乙基氨基)-N-(2-(噻唑并[5,4-b]吡啶_2_基) 苯基)嘧啶-4-羧酰胺的方法制备，用6-(2-( 二甲基氨基)乙基氨基)-2-甲基-N-(2-(噻 唑并[5，4-b]吡啶-2-基)苯基)嘧啶-4-羧酰胺代替6-(2-( 二甲基氨基)乙基氨 基)-N-(2-(噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基)苯基)嘧啶-4-羧酰胺。产物从乙酸乙酯中重 结晶，得到32mg(56% )的白色固体。(MS, M++H = 434)。实施例2生物活性使用基于质谱的测定法来鉴定SIRTl活性的调节剂。该基于质谱的测
81定法利用如下的具有20个氨基酸残基的肽=Ac-EE-K (生物素)-GQSTSSHSK (Ac) NleSTEG-K (5TMR) -EE-NH2 (SEQ ID NO 1)，其中K (Ac)为乙酰化赖氨酸残基，Nle为正亮氨 酸。该肽在C端以荧光团(Fluorophore) 5TMR(激发540nm/发射580nm)标记。该肽底物 的序列是以具有数处修饰的P53为基础的。此外，将天然地存在于该序列中的甲硫氨酸残 基置换为正亮氨酸，因为甲硫氨酸在合成及纯化期间，可能容易进行氧化。质谱测定法如下进行将0. 5 μ M肽底物和120 μ M β NAD+与IOnMSIRTl在25°C 在反应缓冲液中(50mM Tris-乙酸盐 pH 8,137mM NaCl, 2. 7mM KCl, ImM MgCl2, 5mM DTT, 0.05%BSA)温育25分钟。可以将测试化合物加入上述的反应混合物中。将SirTl基因克 隆到含有T7启动子的载体中，并将其转化进入BL21(DE3)中。经与SIRTl温育25分钟后， 加入IOyL的10%甲酸以停止反应。密封反应混合物并冷冻用于后续的质谱分析。确定底 物肽的质量能够精确地确定与脱乙酰化的肽(产物)相比的乙酰化程度(即起始物料)。抑制瑟土因活性的对照实验如下进行在反应开始时加入1 μ L的500mM烟酰胺作 为阴性对照(即，可以测定的最大瑟土因抑制)。活化瑟土因活性的对照实验如下进行使 用IOnM的瑟土因蛋白(用IyL的DMSO代替化合物)来在测定法的线性范围内确定底物 在给定时间点的脱乙酰化量。该时间点与用于测试化合物的时间点相同，并且在线性范围 内，端点表示速率改变。对于上述测试，SIRTl蛋白按照如下方法进行表达并纯化。将SirTl基因克隆到 含T7启动子的载体中，并将其转化到BL21(DE3)中。用ImM IPTG于18°C下过夜诱导蛋白 质的表达，且表达的蛋白质为N-端His-tag融合蛋白质，并于30000 X g下收获。用溶菌酶 将细胞裂解在裂解缓冲液(50mMTris-HCl,2mM Tris [2-羧乙基]膦(TCEP)，10 μ M ZnCl2, 200mM NaCl)中，并进一步以超音波震荡处理10分钟以完全裂解。将蛋白质通过Ni-NTA柱 (Amersham)纯化，并几种含有纯蛋白质的各级分，浓缩并经过大小级分柱(S印hadex S200 26/60球状)。收集含有可溶性蛋白质的峰，并过离子交换柱(MonoQ)进行纯化。通过梯度洗 脱(200mM-500mM NaCl)得到纯蛋白质。将此蛋白质浓缩，并用透析缓冲液(20mM Tris-HCl, 2mM TCEP)过夜透析。将蛋白质等分并冷冻在-80°C直到进一步使用。使用如上所述的测定法鉴定出活化的SIRTl的瑟土因调节性化合物，并示于下面 表 1 中。活化的化合物的 EC15 值以 A，(EC15 < 250nM)、A(EC15 彡 250nM 且彡 1μΜ)、Β(Ε。15 > 1且彡10 μ M)或C(EC15 > 10 μ Μ)表示。活化最大百分比倍数(percent maximum fold activation)由A(活化倍数彡300% )，B(活化倍数彡150%且< 300% )或C(活化倍数 < 150% )表示。表 1 同等物本发明提供了瑟土因活化性化合物及其使用方法等。虽然已经论述本发明具体的
实施方式，但是前述说明书仅为例举说明而并非用于限制本发明。本发明的许多变体对于本领域普通技术人员在参阅本说明书时将成为显而易见的。本发明的完整范围应由权利要 求书及其同等物的完整范围和说明书及此类变体来决定。以引用方式并入本文中所提及的出版物与专利，包括下文所列的这些项目，以其完整性引用方式 并入本文，正如各出版物或专利已经明确且单独地以完整性引用方式并入本申请中。在相 抵触的情况下，本申请的内容(包括本文中的任何定义)起决定作用。也以其完整性的引用方式并入任何参照相关于进入公开资料库的登录编号的聚 核苷酸及多肽序列，例如那些由基因组研究学会(GenomicResearchJIGR) (www. tigr. org) 禾口罾(Natioriiil Center, forBiotechnology Information, NCBI) (www. ncbi. nlm. nih. gov)所保有的那些。也以引用方式并入下列专利公开PCT公布WO 2005/002672 ；2005/002555 % 2004/016726。
11权利要求
结构式(I)表示的化合物或其盐其中X1、X2和X3中的两个独立地选自 CH 和 N ；X1、X2和X3中的另一个为 CH ；R1为增溶基；R2选自苯基、氟苯基以及含有N杂原子和任选的选自N、O或S的第二杂原子的5员至6员杂环，其中所述杂环任选经甲基取代；R为 H或 CH3；Y和Z中的一个为 CH ，Y和Z中的另一个为 N ；R3选自氢、卤素、低级烷基、低级烷氧基、低级烷基硫基和低级烷基磺酰基；R*为 CH3或卤素；以及n为0至4的整数。FPA00001178290000011.tif
2.权利要求1的化合物，其中所述结构由结构式(II)表示
3.权利要求2的化合物，其中X1为-N-。
4.权利要求3的化合物，其中X1和X2为-N-。
5.权利要求2-4中任一项的化合物，其中Z为-Ν-，Y为-CH-。
6.权利要求2-4中任一项的化合物，其中Y为-Ν-，Z为-CH-。
7.权利要求2-4中任一项的化合物，其中R2选自苯基、低级烷基苯基、氟苯基、甲基噻 唑基、嘧啶基、吡啶基和吡唑基。
8.权利要求7的化合物，其中R2为苯基。
9.权利要求2-4中任一项的化合物，其中R1为-NR4R5；R4为低级烷基、单环基氨基或单环基低级烷基；以及 R5为低级烷基或H。
10.权利要求9的化合物，其中R4为低级烷基氨基烷基或低级二烷基氨基低级烷基。
11.权利要求2-4中任一项的化合物，其中R1为含氮单环基。
12.权利要求11的化合物，其中所述含氮单环基的连接点为环上的氮。
13.权利要求11的化合物，其中R1为4、5、6或7员单环。
14.权利要求13的化合物，其中R1由下式表示 并且所述单环为5、6或7员杂环；W 为-N (R6) -、-S (O2) -、-C (R6R6) _、-N (CO2R6) -、-0-或-S-； R'在每次出现时独立地选自H和低级烷基； m为0至2 ；以及 各R6独立地选自H和低级烷基。
15.权利要求2-4中任一项的化合物，其中R1由下式表示 G 为-NR4R5、-SR6, -OR6、-SO2R6> -NCO2R6 或单环基；R4为低级烷基、单环基氨基或单环基低级烷基，R5为低级烷基或H ；P为0至3 ；以及各R6独立地为H或低级烷基。
16.权利要求2-4中任一项的化合物，其中R1为-(CH2)kG； G 为-NR4R5、-SR6, -OR6、-SO2R6> -NCO2R6 或单环基；R4为低级烷基、单环基氨基或单环基低级烷基，R5为低级烷基或H ；以及 k为1至3 ；各R6独立地为H或低级烷基。
17.权利要求2的化合物，其中 R2选自苯基、3-氟苯基和吡啶基； R'为H;以及X1和X2为-N-，以及X3为-CH-。
18.权利要求17的化合物，其中R1为-NR4R5；以及 R4为低级烷基、单环基氨基或单环基低级烷基；以及 R5为低级烷基或H。
19.权利要求17的化合物，其中R1为含氮单环基，其中连接点是环上的氮。
20.权利要求19的化合物，其中R1由下式表示 并且所述单环为5、6或7员杂环；W 为-N (R6) -、-S (O2) -、-C (R6R6) -、-N (CO2R6) -、-0-或-S-； R'在每次出现时独立地选自H和低级烷基； m为0至2 ；以及 各R6独立地选自H和低级烷基。
21.权利要求17的化合物，其中R1由下式表示 G 为-NR4R5、-SR6, -OR6、-SO2R6, -NCO2R6 或单环基；R4为低级烷基、单环基氨基或单环基低级烷基，R5为低级烷基或H ；P为0至3 ；以及各R6独立地为H或低级烷基。
22.权利要求17的化合物，其中R1为-(CH2)kG；G 为-NR4R5、-SR6, -OR6、-SO2R6, -NCO2R6 或单环基；R4为低级烷基、单环基氨基或单环基低级烷基，以及R5为低级烷基或H ；以及 k为1至3 ；各R6独立地为H或低级烷基。
23.无热源组合物，其含有权利要求1-22中任一项的化合物或其药学上可接受的盐以 及载体。
24.药物组合物，其含有权利要求1-22中任一项的化合物和药学上可接受的载体。
25.权利要求24的药物组合物，其还含有额外的活性剂。
26.用于治疗或预防胰岛素抗性、代谢综合征、糖尿病或其并发症或者用于增加个体中 胰岛素敏感性的方法，所述方法包括向有需要的个体给药权利要求24的药物组合物。
27.结构式(I)表示的化合物或其盐 其中X1、X2和X3中的两个独立地选自-CH-和-N-； X1J2和X3中的另一个为-CH-； R1为增溶基；R2选自苯基、低级烷基苯基、氟苯基和含有杂N原子和任选的选自N、0或S的第二杂原 子的5员至6员杂环，所述杂环任选经甲基取代； R 为-H 或-CH3 ；Y和Z中的一个为-CH-，Y和Z中的另一个为-N-； R3选自氢、卤素、低级烷基、低级烷氧基、低级烷基硫基和低级烷基磺酰基； R*为-CH3或卤素；以及 η为0至4的整数。
全文摘要
本发明提供了结构式(I)表示的新的瑟土因调节性化合物及其使用方法。该瑟土因调节性化合物可用于增加细胞寿命，以及用于治疗和/或预防种类广泛的疾病和病症，这些疾病和病症包括，例如老化或压力相关的疾病或病症、糖尿病、肥胖、神经变性性疾病、心血管疾病、血凝固障碍、炎症、癌症和/或潮红以及因线粒体活性增加而受益的疾病或病症。本发明还提供了含有瑟土因调节性化合物以及另一治疗剂的组合物。
文档编号C07D513/04GK101910184SQ200880123934
公开日2010年12月8日 申请日期2008年11月7日 优先权日2007年11月8日
发明者丽贝卡·L·卡索邦, 乔万纳·格尔蒂里, 克里斯托弗·奥尔曼, 奇·B·武, 布鲁斯·斯克泽潘基维茨, 杰里米·S·迪施, 罗伯特·B·珀尼 申请人:西特里斯药业公司