针对SARS-CoV的交叉中和人单克隆抗体及其使用方法

专利名称：针对SARS-CoV的交叉中和人单克隆抗体及其使用方法
针对SARS-CoV的交叉中和人单克隆抗体及其使用方法背景本申请要求2008年1月17日提交的美国临时申请No.61/021,798的优先权，其 公开内容连同其中所引用的所有文件均以其全文援引加入本文。本发明一般性地涉及针对SARS-CoV的人单克隆抗体及其使用方法。在2002-2003年，一种新的冠状病毒引起了严重急性呼吸综合征(SARS-CoV) 的爆发，其感染了超过8000人，并且伴有 10%的致死率(4，21)。此外，在2003年 和2004年报道了几例SARS-CoV感染的实验室获得性病例，包括群体传播，这突出了对 治疗剂的需要(27，33)。老龄(> 60岁)明显与由于快速进行性呼吸损坏(急性呼吸窘 迫综合征[ARDS])所致的增加的SARS相关性死亡相关(4，28，42)。SARS-CoV是一种动物传染(zoonotic)病毒，其最可能起源于中华菊头蝠 (Chinese horseshoe bat)，在活动物市场的狸猫(palm civet)和貉(Raccoon dog)中扩增，并 随后传播到人群中(17)。该2003-2004年的流行基于分子流行病学研究而被分为动物传 染期、早期、中期和晚期(6)。来自流行病所有不同阶段中人和动物分离物的SARS-CoV 基因组比较分析显示了病毒附着蛋白棘突(spike，S)糖蛋白的高速进化，在流行病的进 程中有23个氨基酸发生变化(39)。若干研究显示SARS-CoV棘突糖蛋白与受体血管紧张肽1转变酶2 (ACE-2)结 合，介导病毒进入(24，54)。已鉴定出ACE2中共18个氨基酸与SARS-CoV的受体结 合结构域(RBD)中的14个残基接触(23)。已显示这些氨基酸中的两个，479和487，在 RBD与人ACE2的结合中很关键并且与流行病期间进入人的跨物种传播有关。不令人惊 奇的是，棘突(S)糖蛋白还被鉴定为是保护性免疫的主要成分并且其是高免疫原性的， 含有至少三个被中和抗体靶向的结构域(11，14，22)。中和表位的确切数目是未知的， 在SARS-CoV流行病期间分离的不同S糖蛋白之间这些区域的序列变异对中和的影响也 是未知的。已经开发了针对三种晚期SARS-CoV病毒株(包括Urbani、Tor-2和 HKU-39849)的人和鼠单克隆抗体(mAb)并且描述了它们的体外中和活性(48-50)。最 近对从SARS患者分离大量单克隆抗体的方法的开发提供了在天然SARS-CoV感染后鉴 别同源和异源中和反应所需的试剂(49)。尽管使用假型化的慢病毒和重组SARS-CoV RBD蛋白的研究已显示了一些交叉中和或交叉反应活性(13，26，45，58，60)，但未 测试这些mAb针对来自流行病的中、早或动物传染期或疾病的致死模型中的实际异源 SARS-CoV病毒株的中和活性。这是潜在的问题，因为在过去两年人病例的缺乏表明将 来的流行病可能由动物传染性传播产生。因此，提供强交叉中和活性的抗体是中断动物 传播和遏制将来的流行病所必需的(3，38)。在小鼠、白鼬和仓鼠中使用选定的mAb进行的被动免疫研究已经证明一些中和 抗体可以成功地预防或限制感染(37，45，47，49)。尽管预防性治疗可以导致对啮齿动 物中SARS-CoV感染的完全保护，但是感染后治疗通常不强却显著降低肺中的病毒效价 (37)。迄今为止，所有先前的研究都在年轻动物中进行，这容许在不存在显著临床症状和疾病的条件下进行病毒复制(39，44)。因此，基于目前的技术，抗体将预防临床疾病 或针对同源或异源致死攻击提供可测量水平的保护并不仅仅是假设，尤其是在更易受攻 击的衰老群体中。对衰老群体中的被动保护也进行了不充分的研究，然而年老群体对严重和致命 的SARS-CoV感染是最易受攻击的(4，28，42)。在年老BALB/c小鼠模型中，来自小 鼠的超免疫SARS-CoV抗血清的被动传递预防了同源晚期Urbani病毒株的感染(53)。然 而，在年老群体中使用人mAb预防或治疗致死性异源SARS-CoV感染还未详细研究。此 外，最近报道的疫苗在年老群体中的失败使得被动免疫成为有吸引力的选择(8)。根据以上内容，如果再度出现高传染性并且通常为致死的严重急性呼吸综合征 (SARS)冠状病毒(SARS-CoV)感染，则迫切需要有效的预防和治疗。目前，SARS预 防主要依赖于改善的认识、监督和地方性、区域性以及国际性公共卫生护理措施的制定 (参见 Stadler 等人，Nat Rev Microbioll 209-18 (2003))。已开始在 SARS 疫苗研究领 域进行大量努力，并且最近报道已证明对来自预先感染SARS-CoV的小鼠、或者来自 用编码SARS S蛋白的DNA质粒或表达S蛋白的痘苗病毒接种的小鼠的免疫血清的传 递可以预防肺和上呼吸道中的病毒复制(参见Bisht等人，Proc.Natl Acad SciUSA 101 6641-46(2004) ； Subbarao 等人，J Virol 78: 3572-77(2004) ； Yang 等人，Nature 428 561-64(2004))。此外，在人的SARS-CoV感染中已观察到来自鼻咽抽吸物、血清、 尿和粪便的病毒效价降低与中和抗体的产生共同发生(参见Li等人，N Engl Med 349 508-09(2003) ； Peiris 等人，Lancet361 1767-72(2003))。已报道了用恢复期血浆进行 的 SARS 治疗(参见 Burnouf 等人，Hong Kong Med.J.9 309-10 (2003) ； Wong 等人， Hong KongMed.J.9 199-201 (2003))。这些研究支持了体液免疫在针对SARS-CoV的保护中的重要性并表明应开发特 异有效的人单克隆抗体(mAb)用来在人群中出现流行或甚至大范围地再度出现时提供针 对SARS的预防和早期治疗。理想地，从世界卫生观点来看，交叉中和多种病毒株的有 效人单克隆抗体将赋予最佳保护。发明概述本发明部分基于发现交叉中和不同SARS-CoV病毒株的抗体以及本发明抗体结 合的新表位。因此，在一个实施方案中，本发明包括交叉中和至少三种SARS-CoV病毒 株的单克隆抗体。在另一实施方案中，本发明包括结合本发明抗体的表位。本发明的示例性表位 包括但不限于包含来自SARS-CoV棘突蛋白的氨基酸的表位。在又一实施方案中，本发明包括免疫原性组合物，所述免疫原性组合物包含来 自SARS CoV棘突蛋白的氨基酸以及任选包含药学上可接受的载体。在又一实施方案中，本发明包括预防由冠状病毒引起的疾病或病患的方法。所 述方法包括向具有患所述疾病或病患风险的人施用治疗有效量的一种或多种本发明的单 克隆抗体。本发明的其他特征和优点将从下列的详细说明和权利要求中得知。附图简述

图1通过系统进化分析和交叉竞争研究对由人mAb识别的SARS-COVS糖蛋白上的中和表位作图。(A)动物传染性和人流行病分离物的SARS-CoV S糖蛋白中氨基酸改 变的系统进化分析。SARS-CoV S糖蛋白的图示显示了受体结合结构域(RBD)、推定的 融合肽(FP)和七残基重复序列2 (HR2)中变体氨基酸的位置。(B)结合至SARS-CoV S 糖蛋白的mAb的交叉竞争。所示的是通过属于组I至组VI的一组23种mAb对下列3种 生物素化mAb与重组SARS-CoV S糖蛋白的结合的抑制S109.8(黑色柱)、S227.14(灰 色柱)和S230.15 (白色柱)。值代表未标记的竞争性mAb在饱和浓度(5 μ g/ml)下对 0.1 μ g/ml的生物素化的mAb抑制的百分比(％ )。误差线代表三次重复的标准偏差。
图2.SARS-COVRBD结构上的中和逃避变体突变的位置和影响。将(A)S109.8 逃避变体突变T332I和K333N以及(B) S230.15逃避变体突变L443R作图至SARS-CoV RBD的结构上。(C)此外，在SARS-CoV RBD中突出显示了与交叉中和mAb相关的所 有重要氨基酸残基的位置。指出了与S109.8、S227.14和S230.15相关的氨基酸残基。
图3.用25 μ g交叉中和mAb对12个月大BALB/c小鼠中致死SARS-CoV感 染的预防性治疗。在被动传递25yg的mAb S109.8(+)、S227.14(o)、S230.15(x)和 D2.2 ( □，不相关特异性的对照mAb)后每天测量用icUrbani (A)、icGZ02 (B)和icHC/ SZ/61/03(C)感染的小鼠体重。在感染后第2天(D)和第5天(E)从感染小鼠收获肺组 织并进行感染性病毒测定。误差线代表标准偏差(η = 3)。图4.用250 μ g交叉中和mAb对12个月大BALB/c小鼠中致死SARS-CoV感
染的预防性治疗。在单独给予或以1 1 1混合物(Δ)被动传递均为250 μ g/小鼠 的 mAb S109.8(+)、S227.14( ο )、S230.15(x)和 D2.2( □)后每天测量用 icUrbani (A)、 icGZ02 (B)和icHC/SZ/61/03 (C)感染的小鼠体重。在感染后第2天(D)和第5天(E) 从感染小鼠收获肺组织并进行感染性病毒测定。误差线代表标准偏差(η = 3)。图5.用25 μ g交叉中和mAb对10周龄BALB/c小鼠中致死SARS-CoV感染的预 防性治疗。在被动传递 25 μ g 的mAb S 109.8 (+)、S227.14(o)、S230.15 (χ)和 D2.2 ( □) 后每天测量用MA 15(A)感染的小鼠体重。在感染后第2天(B)和第4天(C)收获用 MA 15或icHC/SZ/61/03感染的小鼠的肺组织，并进行感染性病毒测定。误差线代表标 准偏差(η = 3)。 “*”表示3只动物中只有一只具有可检测的病毒效价。图6.用SARS-CoV感染的12个月大BALB/c小鼠的感染后治疗。在感染后 第-1天(+)、第O天(。)、第1天(X)、第2天(□)和第3天(Δ)被动传递250yg的 mAb S230.15后每天测量用GZ02 (A)感染的小鼠体重。在感染后第2天和第4天收获被 GZ02感染的小鼠的肺效价(B)并进行感染性病毒测定。误差线代表标准偏差(η = 5)。
“*”表示5只动物中只有一只具有可检测的病毒效价。图7.在SARS-CoV感染前接受250 μ g人mAb并在接种后5天处死的12个月大 BALB/c小鼠的肺中终端前(PB)细支气管的光学照片。病毒诱导的细支气管周炎症(实 线箭头)在用对照 mAb D2.2 治疗以及用 icUrbani (A)、icGZ02 (C)和 icHC/SZ/61/03 (E) 感染的小鼠中是明显的。在用对照mAb治疗的小鼠的肺泡气室中存在大量的透明膜(虚 线箭头)。在用25(^§的111/^3230.15治疗并且随后用化1；论&11丨(8)、icGZ02 (D)和icHC/ SZ/61/03(F)感染的小鼠中观察不到炎症或透明膜形成。AL，肺泡；AD，肺泡管； BV,血管。用苏木精和曙红对组织染色。IOOX放大率。图8.在用SARS-CoV感染后接受250 μ g人mAb并在接种后5天处死的12个月
5大BALB/c小鼠的肺中终端前(PB)和终端(TB)细支气管的光学照片。在用icGZ02感 染的第0天用250yg的mAbS230.15治疗的小鼠中观察不到炎症或透明膜形成(A)。在 感染后第1天(B)、第2天(C)或第3天(D)用250yg的mAbS230.15治疗的小鼠中病 毒诱导的细支气管周炎症(实线箭头)的增加很明显。AL，肺泡；AD，肺泡管；BV， 血管。用苏木精和曙红对组织染色。100X放大率。发明详述本发明基于交叉中和不同SARS病毒株的抗体的发现。因此，在一个方面，本 发明包括交叉中和至少三种SARS-CoV病毒株的单克隆抗体。已经通过使用具有早期人和动物传染性病毒株的S糖蛋白的重组SARS-CoV在 BALB/c小鼠中开发了几种致死性SARS-CoV攻击模型，所述小鼠重演了年龄相关性临 床征状、体重减少超过20%以及严重的肺病变(39)。还通过在BALB/c小鼠中Urbani 分离物的连续传代而开发了用于年轻小鼠的第二个致病模型，产生MA15，MA15在肺中 复制至高效价，引起临床疾病、体重减少超过20%以及严重的肺泡炎(35)。使用一组 具有人和动物传染性S糖蛋白的同基因SARS-CcAMfAmAb细分为6种不同的中和谱 (profile)。鉴定出了四种中和mAb，其中和所测试的所有动物传染性和人SARS-CoV病 毒株，并且证明这些mAb中的三种与S糖蛋白中的独特表位接合(engage)，从而提供了 保护年轻和衰老小鼠免受致死性同源和异源攻击的广谱治疗剂的开发。这些mAb的任一 种或这些mAb多于一种的混合物将在人中提供对致死性SARS-CoV感染的强力保护。在 一个方面，本发明涉及这些新的mAb、包含所述抗体的治疗组合物、以及它们的生产方 法和治疗SARS的用途。下面提供术语定义和新抗体、包含它们的组合物以及可使用本文提供抗体实行 的方法的进一步说明。除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语与本发明所属领域的普通 技术人员通常理解的含义相同。虽然相似于或者等同于本文描述的那些方法和材料也可 以在本发明的实践或测试中使用，但是下面描述了合适的方法和材料。所有的出版物、 专利申请、专利、和本文所提到的其他参考文献均以其全文援引加入。在矛盾的情况 下，将以本说明书(包括定义)为准。此外，所述材料、方法和实例仅是说明性的而不 意图是限制性的。^^本发明提供在中和SARS-CoV方面具有特别高效能的单克隆抗体或重组单克隆 抗体(二者均称为mAb)。本发明还提供交叉中和多种例如至少三种SARS-CoV病毒株 的抗体。本发明还提供这些重组抗体或单克隆抗体的片段，尤其是保留抗体的抗原结合 活性的片段，例如保留特异于SARS-CoV蛋白的至少一个互补性决定区(CDR)的片段。如本文所用的术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(Ig)分子的免疫 活性部分，即含有特异性结合抗原(与抗原发生免疫反应)的抗原结合位点的分子。一 般而言，从人获得的抗体分子涉及IgG、IgM, IgA、IgE和IgD类的任一类，它们根据分 子中存在的重链(“H”，参见下文)性质而彼此不同。某些类还具有亚类，如IgGp IgG2及其他。此外，在人中，轻链(“L” )可以是κ链或λ链。术语“片段”和“抗体片段”在本文中可互换使用，是指保留抗体的抗原结合
6活性的本发明抗体的任何片段。示例性抗体片段包括但不限于Fab、Fab'、F(ab' )2 和Fv片段。术语“抗原结合位点”或“结合部分”是指参与抗原结合的免疫球蛋白分子的 部分。抗原结合位点是由重(“H”)链和轻(“L”)链的N末端可变(“V”)区的 氨基酸残基形成的。在重链和轻链的V区中的三段高度趋异的序列段称为“高变区”， 该高变区被插入已知为“框架区”或“FR”的更保守的侧翼序列段之间。因此，术语
“FR”是指天然存在于免疫球蛋白中的高变区之间和邻近高变区的氨基酸序列。在抗体 分子中，轻链的三个高变区和重链的三个高变区在三维空间中彼此相对安置以形成抗原 结合表面。该抗原结合表面与结合的抗原的三维表面互补，并且重链和轻链各自的三个 高变区被称为“互补性决定区”或“CDR”。“特异性结合”或“与......免疫反应”意指抗体与期望抗原的一个或多个抗原决
定簇反应并且不与其他多肽反应。抗体包括但不限于多克隆的、单克隆的、嵌合的、 dAb (结构域抗体)、单链、Fab、Fab,和F(ab, )2片段、scFv和Fab表达文库。单链Fv( "scFv")多肽分子是共价连接的Vi^Ve异源二聚体，其可以由包括 通过肽编码接头连接的Vh编码基因和\编码基因的基因融合体表达。(参见Huston等 人(1988) Proc NatAcad Sci USA 85 (16) 5879-5883)。 已经描述了许多辨别化学结构的 方法，该化学结构用于将抗体V区的天然聚集的但是化学分离的轻链和重链多肽链转化 为scFv分子，所述scFv分子将折叠成基本上类似于抗原结合位点结构的三维结构。参见 例如美国专利第5,091,513号；第5,132,405号；和第4,946,778号。已经并且可以产生非 常大的首次用于实验的(naiVe)人scFv文库以提供针对广泛系列靶分子的重排抗体基因 的大量来源。可以从患传染病的个体构建较小的文库以便分离疾病特异性抗体。(参见 Barbas 等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89 9339-43(1992) ； Zebedee 等人，Proc.Natl.Acad. Sci.USA 89 3175-79(1992))。如本文所用术语“表位”包括能够特异性结合免疫球蛋白、SCFv或T-细胞受体 的任何决定簇。表位决定簇(epitopic determinant)通常由分子的化学活性表面组如氨基酸 或糖侧链所组成并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。例如，抗体可 以针对多肽的N末端或C末端肽产生。如本文所用，术语“免疫结合”和“免疫结合性质”是指在免疫球蛋白分子 与该免疫球蛋白所特异于的抗原之间发生的非共价相互作用类型。免疫结合相互作用的 强度或亲和力可以按照相互作用的解离常数(Kd)表达，其中较小的Kd代表较大的亲和 力。所选多肽的免疫结合性质可以使用本领域内熟知的方法定量。一种此类方法需要测 量抗原结合位点/抗原复合物形成和解离的速率，其中那些速率取决于复合物配偶体的 浓度、相互作用亲和力，以及几何参数，它们同等程度地影响两个方向的速率。因此，
“缔合速率常数”(Kon)和“解离速率常数”(Koff) 二者都可以通过计算缔合和解离的浓 度和实际速率来确定。(参见Nature 361 186-87 (1993))。KoffZKon的比率使得能够取 消与亲和力不相关的所有参数，并且等于解离常数Kd。( 一般参见Davies等人(1990) Annual Rev Biochem 59 439-473)。如通过如放射性配体结合测定或本领域技术人员 已知的类似测定所测量的，据说本文所提供的抗体在平衡结合常数(Kd)为ΙμΜ，优选 IOOnM,更优选IOnM和最优选IOOpM至约IpM时特异性结合SARS-CoV表位。
如本文所用的术语“单克隆抗体”或“mAb”或“单克隆抗体组合物”是指 仅含有一种分子类别的抗体分子的抗体分子群，所述抗体分子由独特的轻链基因产物和 独特的重链基因产物组成。具体地，单克隆抗体的互补性决定区(CDR)在该群的所有分 子中是相同的。MAb含有能够与抗原的特定表位发生免疫反应的抗原结合位点，所述特 定表位特征在于其独特的结合亲和力。本发明的抗体可以是单克隆的，例如人单克隆抗 体，或重组抗体。本发明还提供了本发明抗体的片段，尤其是保留抗体的抗原结合活性 的片段。“中和抗体”是可以中和病原体在宿主中开始和/或维持感染的能力的抗体。 本发明提供了中和单克隆人抗体，其中所述抗体识别来自人SARS-CoV的抗原。本发明的抗体能够交叉中和SARS-CoV的不同病毒株。在一个实施方案中，本 发明的抗体能够交叉中和至少三种SARS-CoV病毒株。在另一实施方案中，抗体能够交 叉中和至少四种SARS-CoV病毒株。在又一实施方案中，抗体能够中和至少4种或5种 SARS-CoV病毒株。本发明的抗体能够中和人和动物传染性SARS-CoV病毒株。几种不同的SARS-CoV病毒株是本领域技术人员已知的。示例性SARS-CoV病 毒株包括但不限于 Urbani、CUHK-W、GZ02、HC/SZ/61/03 和 A031G。在一个实施方案中，本发明的单克隆抗体结合存在于SARS-CoV棘突蛋白上的 表位。如本文所用术语“棘突蛋白”、“SARS-CoV棘突蛋白”和“SARS-CoVS糖 蛋白”可互换使用。这些术语以及SARS-CoV棘突蛋白的特定氨基酸位置是指流行性病 毒株病毒Urbani的蛋白和氨基酸序列(GenBank登录号为AAP 13441)。本发明的抗体所结合的示例性表位包括但不限于包含SARS-CoV棘突蛋白下列 位置的氨基酸的那些位置332、333、390、436、443或487。在一个实施方案中，本发 明的抗体结合包含在SARS-CoV棘突蛋白下列位置的至少2个氨基酸的表位例如位置 332、333、390、436、443或487。本发明的抗体可以例如结合SARS-CoV棘突蛋白的位 置332和333的氨基酸或位置443和487的氨基酸。在另一实施方案中，本发明的抗体结 合包含在SARS-CoV棘突蛋白下列位置的至少3个氨基酸的表位例如位置332、333、 390、436、443或487。本发明的抗体可以例如结合位置436、443和487的氨基酸。本领域技术人员了解，靶抗原中的氨基酸改变可以降低中和抗体的效力。例 如，中和抗体的选择性压力可以导致病毒的逃避突变体(escape mutant)的分离。在一个 实施方案中，对SARS-CoV的中和抗体是针对棘突(S)蛋白的。在另一实施方案中，S 蛋白中的氨基酸改变使中和抗体的效力降低了约10倍。在一个实施方案中，SARS CoV棘突蛋白中的突变降低了本发明mAb的中和能 力。影响本发明的抗体对SARS-CoV中和的SARS-CoV棘突蛋白中的示例性氨基酸改变 包括但不限于在氨基酸位置332、333、390、436、443或487的那些。这些氨基酸位置 的突变可以降低本发明mAb的中和能力。在一个实施方案中，导致中和能力降低的突变 选自由以下组成的组L443R、T332I、K333N、K390Q、K390E、Y436H 和 T487S。一般地，本发明的抗体具有高亲和力，例如10_6M或更低(即10_7M、 5X IO^8M> 1(Γ8Μ、5X IO-9M> 1(Γ9Μ、5X IO-10M> 1(Γ10Μ、5X IiT11M 或 IiT11M 或更低) 的对SARS-CoV棘突蛋白的亲和力。在此说明书中，“中和SARS-CoV的高效能”意指本发明的抗体分子在标准测
8定中以明显低于本领域中已知抗体的浓度中和SARS-CoV。在一个实施方案中，本文所提供的抗体分子可以5.6 μ g/ml或更低(即以5、 4.5、4、3.5、3、2.5、2、1.5、1、0.5 μ g/ml或更低)浓度中和。在另一实施方案中， 本发明的抗体分子可以3μ g/ml或更低(即以2.5、2、1.5、1、0.8、0.6、0.4、0.2 μ g/ ml或更低)浓度中和。在又一实施方案中，抗体可以1 μ g/ml或更低(即以0.8、0.6、 0.4、0.3、0.25、0.2、0.15、0.1 μ g/ml或更低)浓度中和。在又一实施方案中，抗体可 以 0.4 μ g/ml 或更低(即以 0.3、0.25、0.2、0.16、0.12、0.08、0.05、0.04、0.03、0.02、 0.01 μ g/ml或更低)浓度中和。在又一实施方案中，抗体可以0.16 μ g/ml或更低(即 0.15, 0.125, 0.1, 0.075, 0.05, 0.025, 0.02, 0.016, 0.015, 0.0125, 0.01, 0.0075, 0.005、0.004 μ g/ml或更低)浓度中和。在又一实施方案中，抗体可以0.016 μ g/ml或 更低(IO-9M或更低、10_1QM或更低、IiT11M或更低、ICT12M或更低、ICT13M或更低) 浓度中和。这意味着体外中和50%的SARS-CoV临床分离物仅需要与中和相同效价的 SARS-CoV所需的浓度相比极低的抗体浓度。效能可以使用本领域中所述的标准中和测 定来测量。在某些实施方案中，本文所提供的是称为S227.14、S230.15或S109.8的mAb。 抗体S227.14由具有SEQ ID NO 94所示氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO 96所示 氨基酸序列的轻链组成。抗体S230.15由具有SEQ IDNO 90所示氨基酸序列的重链和 具有SEQ ID NO 92所示氨基酸序列的轻链组成。抗体S 109.8由具有SEQ ID NO 98 所示氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO 101所示氨基酸序列的轻链组成。抗体重链的CDR分别称为CDRHl、CDRH2和CDRH3。类似地，抗体轻链的 CDR分别称为CDRL1、CDRL2禾PCDRL3。CDR氨基酸的位置根据IMGT编号系统定义 为CDR1-IMGT 位置 27 至 38 ； CDR2-IMGT 位置 56 至 65 以及 CDR3-IMGT 位置 105 至 117。这些抗体的CDR序列由表1中的序列识别号来识别。表 权利要求
1.一种单克隆抗体，其交叉中和至少三种SARS-CoV病毒株。
2.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体交叉中和至少五种SARS-CoV病毒株。
3.权利要求1或权利要求2的单克隆抗体，其中所述SARS-CoV病毒株选自由 Urbani> CUHK-W、GZ02、HC/SZ/61/03 和 A031G 组成的组。
4.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体结合包含在SARS-CoV棘突蛋白 下列位置的氨基酸的表位332、333、390、436、443或487。
5.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体结合包含在SARS-CoV棘突蛋白 下列位置的至少2个氨基酸的表位332、333、390、436、443或487。
6.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体结合包含在SARS-CoV棘突蛋白 的位置332和333的氨基酸的表位。
7.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体结合包含在SARS-CoV棘突蛋白 下列位置的至少3个氨基酸的表位332、333、390、436、443或487。
8.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体结合包含在SARS-CoV棘突蛋白 的位置436、443和487的氨基酸的表位。
9.权利要求1的单克隆抗体，其中所述抗体对SARS-CoV棘突蛋白具有的亲和力为 ICT8M或更低。
10.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体具有小于1μ g/ml的50%中和浓度。
11.一种中和SARS-CoV的单克隆抗体，其中所述抗体具有含三个CDR的轻链，每 一个包含选自由SEQIDNO 52-60的氨基酸序列组成的组中的氨基酸序列。
12.—种中和SARS-CoV的单克隆抗体，其中所述抗体具有含三个CDR的重链，每 一个包含选自由SEQIDNO 22-30的氨基酸序列组成的组中的氨基酸序列。
13.—种中和SARS-CoV的单克隆抗体，其中所述抗体具有包含下列对中任一的氨基 酸序列SEQ ID NO 90 禾P SEQ ID NO 92 ； SEQ ID NO 94 禾P SEQ IDNO 96 ；或 SEQ ID NO 98 和 SEQ IDNO 101。
14.一种结合权利要求1-13任一项所述的抗体所结合的表位的单克隆抗体，或者一种 与权利要求1-13任一项所述的抗体竞争的抗体。
15.权利要求1-13任一项的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体的中和能力被 SARS-CoV棘突蛋白下列位置的突变降低332、333、390、436、443或487。
16.权利要求1-13任一项的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体为S109.8、S227.14或 S230.15。
17.一种预防由冠状病毒引起的疾病或病患的方法，所述方法包括给具有患所述疾病或病患的风险、或患有所述疾病或病患的人施用治疗有效量的权 利要求1-13任一项所述的单克隆抗体。
全文摘要
本发明一般性地涉及针对SARS-CoV的人单克隆抗体、该抗体所结合的表位及其使用方法。
文档编号C07K16/18GK102015767SQ200980109549
公开日2011年4月13日 申请日期2009年1月16日 优先权日2008年1月17日
发明者A·兰扎韦基亚 申请人:胡马斯有限公司