专利名称：恩诺沙星半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于食品安全技术领域。具体涉及恩诺沙星半抗原、人工抗原和抗体的制 备方法及应用。
背景技术：
恩诺沙星(Enrof loxacin，EF)，其分子式为C19H22FN3O3，分子量为359. 40，微黄色或
淡橙黄色结晶性粉末，无臭，味微苦；遇光色渐变为橙红色，其结构式为式(1)所示
权利要求
一种恩诺沙星人工半抗原，其特征在于是以恩诺沙星与氨基丁酸或氨基己酸在NHS、DDC和DMF存在条件下反应制备得到，所述半抗原含4个或6个碳原子手臂，具有式(II)所示分子结构其中，n为 CH2基团数目，n＝4或6。FSA00000234685800011.tif
2.根据权利要求1所述恩诺沙星人工半抗原，其特征在于η= 4。
3.—种权利要求1或2所述恩诺沙星人工半抗原的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)按投料摩尔比为1 1 1将恩诺沙星、N-羟基琥珀酰亚胺和脂溶性碳二亚胺置 于反应容器中，并将上述混合物用少量的DMF溶解，室温下避光搅拌过夜；(2)将经步骤(1)得到的反应物离心取上清得A液；取与恩诺沙星等摩尔量的氨基丁酸或氨基己酸溶于少量蒸馏水中，得B液；(3)将B液缓慢加到A液中，室温搅拌过夜，离心取上清液，调上清液为碱性，将析出的 沉淀过滤，收集上清液；(4)将步骤(3)制得的上清液调至酸性，收集沉淀，得到恩诺沙星半抗原。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤(3)所述调上清液为碱性是将上 清液PH值调节为8. 0 8. 5 ；步骤(4)所述调上清液为酸性是将上清液ρΗ值调节为5. 0 6. 0 ；
5.一种恩诺沙星人工抗原，其特征在于是将权利要求1或2所述恩诺沙星半抗原与蛋 白质偶联制备得到；具有式(III)所示分子结构
6.一种权利要求4所述恩诺沙星人工抗原的制备方法，其特征在于是采用活泼脂法将 所述恩诺沙星半抗原与蛋白质偶联。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)将等摩尔所述的恩诺沙星半抗原、DDC、NHS溶解于DMF中，室温避光反应过夜；(2)将步骤(1)所得反应物离心取上清液，将上清液加入到含有载体蛋白的硼酸缓冲 液中，混合物反应过夜；(3)待步骤(2)反应完成后，将反应后混合液装入透析袋，透析得到所述人工抗原。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于步骤(2)所述载体蛋白为BSA或0VA， 载体蛋白的浓度在20 30mg/mL ；所述反应温度为4°C。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于步骤(3)所述透析采用0.9%的生理 盐水透析3天，每天更换透析液3 5次。
10.一种权利要求5所述抗原的应用，其特征在于应用于制备恩诺沙星抗体或环丙沙 星免疫检测方面。
全文摘要
本发明提供了一种恩诺沙星半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。本发明以恩诺沙星为原料，与氨基丁酸或氨基己酸反应生成含4个或6个碳原子手臂的半抗原；通过活泼脂法将半抗原与蛋白质偶联制备得到人工抗原；将人工抗原免疫小鼠，采用细胞融合技术制得对恩诺沙星高特异性的单克隆抗体。采用本发明单克隆抗体建立免疫检测可用于恩诺沙星现场快速检测，对实现畜禽水产品中恩诺沙星残留的快速检测具有重要现实意义。
文档编号C07D215/56GK101962359SQ20101025695
公开日2011年2月2日 申请日期2010年8月17日 优先权日2010年8月17日
发明者孙远明, 张挺, 杨金易, 沈玉栋, 王弘, 雷红涛 申请人:华南农业大学