专利名称：细交链孢菌酮酸的半抗原和抗原及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及细交链孢菌酮酸的半抗原和抗原及其制备方法与应用。
细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid, TeA,化学名3_乙酰基_4羟基_5_仲丁基吡咯啉-2-酮)，是链格孢菌产生的次级代谢物中毒性最高的毒素之一。该毒素自20世纪 60年代分离鉴定后发现该毒素具有抗肿瘤性、微弱的抗病毒活性以及广谱、快速、高效的除草性等生物活性。该毒素目前已经能够人工合成，其合成途径如下所示
权利要求
1. 一种可作为细交链孢菌酮酸半抗原的化合物，其特征在于具有如式I所示的结构
2.权利要求1所述的可作为细交链孢菌酮酸半抗原的化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤将细交链孢菌酮酸溶于三氯甲烷中，20-30°C下滴加过量的水合胼过夜反应得到TeAH ； 将TeAH用三氯甲烷溶解，然后加入2-5倍TeAH摩尔量的乙醛酸，20_30°C下反应3 12h， 然后过滤，沉淀用三氯甲烷洗涤、干燥即得TeAHGA。
3.根据权利要求2所述的可作为细交链孢菌酮酸半抗原的化合物的制备方法，其特征在于所述水合胼的纯度为98%。
4.一种细交链孢菌酮酸的抗原，其特征在于是由以下方法制备得到将TeAH和载体蛋白以摩尔比80 1混合后溶解于PBS溶液中，向上述混合溶液逐滴滴入戊二醛溶液，20-30°C下搅拌反应3 12h，然后在4°C下用生理盐水透析3d，得到细交链孢菌酮酸的抗原。
5.一种细交链孢菌酮酸的抗原，其特征在于是由以下步骤制备得到(1)将TeAHGA溶于N，N-二甲基甲酰胺中，搅拌下加入二环已基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，4°C下搅拌过夜；离心，取上清液，为A液；其中TeAHGA、二环已基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺三者的摩尔比为1 1.5 4 1.5 4;(2)取载体蛋白溶解于PBS中，搅拌溶解，为B液；(3)4°C搅拌下将A液滴入B液中，反应8 12h，然后用生理盐水透析3d，得到细交链孢菌酮酸的抗原；其中A液中的TeAHGA与B液中的载体蛋白摩尔比为80 1。
6.根据权利要求4或5所述的细交链孢菌酮酸的抗原，其特征在于所述PBS溶液的pH值为8.0;所述的载体蛋白为牛血清白蛋白、人血清蛋白、血蓝蛋白或卵清蛋白中的一种。
7.根据权利要求4或5所述的细交链孢菌酮酸的抗原，其特征在于所述的载体蛋白为牛血清白蛋白。
8.一种细交链孢菌酮酸抗体，其特征在于是由权利要求1所述的可作为细交链孢菌酮酸半抗原的化合物或权利要求4-5任一项所述的细交链孢菌酮酸的抗原制备得到的。
9.根据权利要求8所述的细交链孢菌酮酸抗体，其特征在于所述的细交链孢菌酮酸抗体为多克隆抗体、单克隆抗体或基因工程抗体。
10.一种用于检测细交链孢菌酮酸的制剂，其特征在于所述的制剂为权利要求1所述的可作为细交链孢菌酮酸半抗原的化合物、权利要求4-5任一项所述的细交链孢菌酮酸的抗原或权利要求8所述的细交链孢菌酮酸抗体中的一种。
全文摘要
本发明公开了细交链孢菌酮酸的半抗原和抗原及其制备方法与应用。可作为细交链孢菌酮酸半抗原的化合物，具有如式I所示的结构。细交链孢菌酮酸的抗原是将TeAH和载体蛋白混合后溶解于PBS溶液中，滴入戊二醛溶液，搅拌反应，然后用生理盐水透析得到；或者是将TeAHGA溶于N，N-二甲基甲酰胺中，加入二环已基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌过夜；离心，取上清液为A液；取载体蛋白溶解于PBS中，搅拌溶解为B液；将A液滴入B液中反应，然后用生理盐水透析得到。用本发明的抗原免疫动物得到的抗血清的效价可达13.2×104，对TeAH的线性范围为0.130ng/mL～8.789ng/mL(IC20-IC80)，半抑制浓度为1.095ng/mL，产生的抗体特异性高、灵敏度高、准确度高。式I。
文档编号C07K14/765GK102516148SQ201110375159
公开日2012年6月27日 申请日期2011年11月23日 优先权日2011年11月23日
发明者刘细霞, 孙远明, 徐振林, 杨星星, 杨金易, 沈玉栋, 王弘 申请人:华南农业大学