专利名称：一种分离纯化紫杉醇的方法
技术领域：
本发明涉及分离纯化紫杉醇的技术领域，具体涉及一种从紫杉醇粗产品分离纯化紫杉醇的方法。
背景技术：
紫杉醇是红豆杉属植物中的一种复杂的次生代谢产物，是世界公认的广谱、强活性的抗癌药物。目前，紫杉醇主要从红豆杉植物原料中提取而得到。现有从红豆杉植物原料中提取紫杉醇的常用方法是先经原料粉碎、浸泡提取、浓缩、萃取等步骤制得紫杉醇粗品，再将紫杉醇粗品用柱层析法进行分离纯化制得高纯度紫杉醇。例如授权公告号为 CN1244566C、发明名称为“一种从种植红豆杉叶枝中制备紫杉醇的方法”的中国专利中，公开了从红豆杉叶枝中制备紫杉醇的方法，包括红豆杉叶枝粉碎后经乙醇浸泡提取、浓缩、萃取等步骤制得紫杉醇粗品，紫杉醇粗品经常压正相硅胶柱层析、反相高压液相色谱分离制得高纯度紫杉醇；以及授权公告号为CN101560197B、发明名称为“从人工栽培的红豆杉枝叶中提取紫杉醇的方法”的中国专利中，公开了从红豆杉枝叶中提取紫杉醇的方法，包括红豆杉叶枝粉碎后经甲醇浸泡提取、依次用石油醚和乙酸丙酯萃取等步骤制得紫杉醇粗品， 紫杉醇粗品经常压正相硅胶柱层析、反相高压液相色谱分离制得高纯度紫杉醇。在用红豆杉原料中制备紫杉醇的过程中，紫杉醇粗品的分离纯化是一个重要的步骤，现有分离纯化紫杉醇的方法的不足之处是在分离纯化过程中需用多组流动相进行反复多次层析分离，对目标物进行多次分段收集，控制过程复杂，溶剂使用量大，紫杉醇的收率较低、生产成本较高。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种工艺简单、收率高、生产成本低的分离纯化紫杉醇的方法。本发明所采用的技术方案是一种分离纯化紫杉醇的方法，包括以下步骤
①将含量为1 5%的紫杉醇粗品用氯仿或丙酮进行溶解，紫杉醇粗品与氯仿或丙酮的重量比为1 3 6，溶解完全后加入固定相硅胶或氧化铝或大孔吸附树脂，搅拌均勻后干燥制得物料干样；
②将两根层析柱用管道串联，两根层析柱之间设置用于控制分流的三通阀；在第一根层析柱的下部装入固定相氧化铝，将步骤①制得的物料干样装入第一根层析柱上部；在第二根层析柱中装入固定相硅胶或大孔吸附树脂；
③用丙酮、石油醚、氯仿混合溶剂或乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷混合溶剂作为三元流动相，先用低极性的所述三元流动相对物料干样进行洗脱，洗脱液流经第一根层析柱后从三通阀分流出，将物料干样中的低极性杂质洗出；待低极性杂质洗出完后改用中等极性的所述三元流动相对物料干样进行洗脱，洗脱液流经第一根层析柱和第二根层析柱后流出， 分段收集洗脱液，得到含有紫杉醇的洗脱液；
3④将含有紫杉醇的洗脱液进行浓缩、结晶、干燥后制得紫杉醇半成品；
⑤用紫杉醇半成品代替1 5%的紫杉醇粗品按照步骤①、②、③、④的方法进行二次柱层析分离，制得高纯度的紫杉醇产品。所述步骤①中紫杉醇粗品与氯仿或丙酮的重量份比为1 4。所述步骤①中1 5%的紫杉醇粗品为从红豆杉枝叶中提取得到。本发明的有益效果是1、本发明通过对分离纯化紫杉醇过程中的层析柱进行结构改进，将两根层析柱用管道串联且两根层析柱之间设置用于控制分流的三通阀的，在两根层析柱中装入不同的固定相，从而实现在一个层析系统中使用两种固定相，增加了固定相和目标产物之间的选择性，提高分离效率；2、本发明通过采用三元流动相进行洗脱，增加了流动相和目标产物的之间的选择性，提高了目标产物和杂质之间的分离度；3、本发明通过将三元流动相和二元固定相在一个层析系统中进行巧妙组合，在分离纯化紫杉醇的过程中，首先使用低极性的三元流动相进行洗脱，洗脱液流经第一根层析柱后从三通阀分流出， 将物料干样中的低极性杂质洗出，而不会把中等极性的紫杉醇洗脱出来；然后用中等极性的三元流动相进行洗脱时，洗脱液流经第一根层析柱和第二根层析柱后再流出，提高了分离柱的理论塔板数，中等极性的紫杉醇得到充分的吸附和解析，使分离纯化紫杉醇的收率提高；4、本发明在分离纯化紫杉醇的过程中只需进行两次层析分离，简化了生产工艺，降低了生产成本。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。实施例1
一种分离纯化紫杉醇的方法，按以下步骤实施
①将从红豆杉枝叶中提取得到的含量为1%的紫杉醇粗品用氯仿进行溶解，紫杉醇粗品与氯仿的重量比为1 3，溶解完全后加入固定相硅胶，搅拌均勻后干燥制得物料干样；
②将两根层析柱用管道串联，两根层析柱之间设置用于控制分流的三通阀；在第一根层析柱的下部装入固定相氧化铝，将步骤①制得的物料干样装入第一根层析柱上部；在第二根层析柱中装入固定相硅胶；
③用丙酮、石油醚、氯仿混合溶剂作为三元流动相，先用低极性的丙酮、石油醚、氯仿混合溶剂对物料干样进行洗脱，洗脱液流经第一根层析柱后从三通阀分流出，将物料干样中的低极性杂质洗出；待低极性杂质洗出完后改用中等极性的丙酮、石油醚、氯仿混合溶剂对物料干样进行洗脱，洗脱液流经第一根层析柱和第二根层析柱后流出，分段收集洗脱液，得到含有紫杉醇的洗脱液；
④将含有紫杉醇的洗脱液进行浓缩、结晶、干燥后制得紫杉醇半成品；
⑤用紫杉醇半成品代替1%的紫杉醇粗品按照步骤①、②、③、④的方法进行二次柱层析分离，制得高纯度的紫杉醇产品。实施例2
一种分离纯化紫杉醇的方法，按以下步骤实施
①将从红豆杉枝叶中提取得到的含量为5%的紫杉醇粗品用氯仿进行溶解，紫杉醇粗品与氯仿的重量比为1 6，溶解完全后加入固定相氧化铝，搅拌均勻后干燥制得物料干样；
②将两根层析柱用管道串联，两根层析柱之间设置用于控制分流的三通阀；在第一根层析柱的下部装入固定相氧化铝，将步骤①制得的物料干样装入第一根层析柱上部；在第二根层析柱中装入固定相大孔吸附树脂；
③用乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷混合溶剂作为三元流动相，先用低极性的乙酸乙酯、 正己烷、二氯甲烷混合溶剂对物料干样进行洗脱，洗脱液流经第一根层析柱后从三通阀分流出，将物料干样中的低极性杂质洗出；待低极性杂质洗出完后改用中等极性的乙酸乙酯、 正己烷、二氯甲烷混合溶剂对物料干样进行洗脱，洗脱液流经第一根层析柱和第二根层析柱后流出，分段收集洗脱液，得到含有紫杉醇的洗脱液；
④将含有紫杉醇的洗脱液进行浓缩、结晶、干燥后制得紫杉醇半成品；
⑤用紫杉醇半成品代替5%的紫杉醇粗品按照步骤①、②、③、④的方法进行二次柱层析分离，制得高纯度的紫杉醇产品。 实施例3
一种分离纯化紫杉醇的方法，按以下步骤实施
①将从红豆杉枝叶中提取得到的含量为3%的紫杉醇粗品用丙酮进行溶解，紫杉醇粗品与丙酮的重量比为1 4，溶解完全后加入固定相大孔吸附树脂，搅拌均勻后干燥制得物料干样；
②将两根层析柱用管道串联，两根层析柱之间设置用于控制分流的三通阀；在第一根层析柱的下部装入固定相氧化铝，将步骤①制得的物料干样装入第一根层析柱上部；在第二根层析柱中装入固定相大孔吸附树脂；
③用丙酮、石油醚、氯仿混合溶剂作为三元流动相，先用低极性的丙酮、石油醚、氯仿混合溶剂对物料干样进行洗脱，洗脱液流经第一根层析柱后从三通阀分流出，将物料干样中的低极性杂质洗出；待低极性杂质洗出完后改用中等极性的丙酮、石油醚、氯仿混合溶剂对物料干样进行洗脱，洗脱液流经第一根层析柱和第二根层析柱后流出，分段收集洗脱液，得到含有紫杉醇的洗脱液；
④将含有紫杉醇的洗脱液进行浓缩、结晶、干燥后制得紫杉醇半成品；
⑤用紫杉醇半成品代替3%的紫杉醇粗品按照步骤①、②、③、④的方法进行二次柱层析分离，制得高纯度的紫杉醇产品。
权利要求
1.一种分离纯化紫杉醇的方法，其特征在于，包括以下步骤①将含量为1 5%的紫杉醇粗品用氯仿或丙酮进行溶解，紫杉醇粗品与氯仿或丙酮的重量比为1 3 6，溶解完全后加入固定相硅胶或氧化铝或大孔吸附树脂，搅拌均勻后干燥制得物料干样；②将两根层析柱用管道串联，两根层析柱之间设置用于控制分流的三通阀；在第一根层析柱的下部装入固定相氧化铝，将步骤①制得的物料干样装入第一根层析柱上部；在第二根层析柱中装入固定相硅胶或大孔吸附树脂；③用丙酮、石油醚、氯仿混合溶剂或乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷混合溶剂作为三元流动相，先用低极性的所述三元流动相对物料干样进行洗脱，洗脱液流经第一根层析柱后从三通阀分流出，将物料干样中的低极性杂质洗出；待低极性杂质洗出完后改用中等极性的所述三元流动相对物料干样进行洗脱，洗脱液流经第一根层析柱和第二根层析柱后流出， 分段收集洗脱液，得到含有紫杉醇的洗脱液；④将含有紫杉醇的洗脱液进行浓缩、结晶、干燥后制得紫杉醇半成品；⑤用紫杉醇半成品代替1 5%的紫杉醇粗品按照步骤①、②、③、④的方法进行二次柱层析分离，制得高纯度的紫杉醇产品。
2.根据权利要求1所述的一种分离纯化紫杉醇的方法，其特征在于所述步骤①中紫杉醇粗品与氯仿或丙酮的重量份比为1 4。
3.根据权利要求1所述的一种分离纯化紫杉醇的方法，其特征在于所述步骤①中 1% 5%的紫杉醇粗品为从红豆杉枝叶中提取得到。
全文摘要
本发明一种分离纯化紫杉醇的方法，将紫杉醇粗品用氯仿或丙酮溶解后加入硅胶或氧化铝或大孔吸附树脂制得物料干样，在两根串联的层析柱中第一根层析柱的下部装入固定相氧化铝、第一根层析柱上部装入物料干样、第二根层析柱中装入固定相硅胶或大孔吸附树脂，用三元流动相进行洗脱得到含有紫杉醇的洗脱液，洗脱液经浓缩、结晶、干燥后制得紫杉醇半成品，紫杉醇半成品经二次柱层析分离后制得高纯度的紫杉醇产品。本发明通过对分离纯化紫杉醇的层析柱进行结构改进，实现在一个层析系统中使用两种固定相，同时采用三元流动相进行洗脱，增加了固定相和目标产物之间的选择性，简化了生产工艺，提高了分离效率，降低了生产成本。
文档编号C07D305/14GK102417492SQ20111040089
公开日2012年4月18日 申请日期2011年12月7日 优先权日2011年12月7日
发明者李智高, 李长明 申请人:福建紫杉园生物有限公司