专利名称：多肽活性物质冻干粉的制备方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，具体涉及骨肽的制备。
背景技术：
多肽活性物质是治疗骨科疾病的药物骨肽的有效成分，多肽活性物质取之于健康动物的四肢骨，其含有10多种与骨代谢有关的生长因子骨生长因子、骨原性生长因子、软骨原性生长因子、骨形态发生蛋白、转化生长因子成纤维细胞生长因子白介素-6、Y-干扰素以及有机钙、磷、无机盐、微量元素、氨基酸等。可诱导机体分泌骨源性细胞因子，在体内起到促进骨折愈合、镇痛、减轻结缔组织炎症、促使退行变的骨恢复正常等作用。药物骨肽在临床使用中经常有不良反应，其缘由除了用药不当之外最主要是多肽活性物质生产エ艺的简单粗放，导致骨肽组分复杂，注射后和人体产生过敏反应所致。
活性骨肽是国际医药、食品、保健品界最热门的研究课题，在医药、食品领域有着广泛的应用前景。我国是世界上养猪最多的国家，骨资源极为丰富，但对于骨蛋白的营养源利用却很落后，目前开发猪骨的潜カ很大，前景也很广阔，猪骨的综合利用可以变废为宝，对降低企业综合成本，提高经济效益具有重要意义和价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种纯度高、提取效率高、成本低的多肽活性物质冻干粉的制备方法。本发明通过以下技术方案实现
一种多肽活性物质冻干粉的制备方法，包括以下步骤
①取新鮮的健康动物四肢骨，剔除残肉及结缔组织，用纯化水清洗干净；
②将步骤①得到的四肢骨破碎，按骨与盐水重量比I: 1-5，加入酸化NaCL溶液，NaCL溶液浓度为O. 1-0.8%，提取温度为120-125°C，压カ为O. 1-0. 12MPa，提取2_4h，过滤，按滤渣与盐水重量比I : 1-5，加入60°C左右的酸化NaCL溶液搅拌后，按上述温度和压カ条件提取4-10h，过滤，合并两次滤液，合并两次提取液，待提取液冷却至5°C左右，静置12-48h，除去上层脂肪；
③将步骤②得到的去脂肪后的提取液以及两次滤液缓慢加入I.5-3倍体积、预冷至0°C左右的丙酮中，静置24-36h，过滤，滤液于20-35°C减压浓缩并除去丙酮；
④将步骤③得到的浓缩液，添加O.1-3%的H2O2，用酸溶液调pH至2-3，于5_10°C静置12h左右,过滤去除沉淀,或在5-l(TC,4000r/min离心IOmin除去沉淀,滤液用碱溶液调pH至8-10，再于5-10°C静置12h左右过滤去除沉淀，或在5-10°C，离心除去沉淀，滤液用酸溶液调pH至6. 8-7. 2后，按滤液重量加预先湿润的O. 1-0. 3%针剂用活性碳，煮沸30min左右，在60°C左右抽滤；
⑤将步骤④得到的滤液进行高纯度过滤，滤液冷冻干燥，包括三个阶段-34- -(TC预 冻2-4h、-20°C左右低温升华16-24h和30°C左右高温干燥6_10h，得多肽活性物质冻干粉。
本发明进一步改进方案是，步骤①中所述的动物四肢骨为猪四肢骨以及胎牛四肢骨。本发明进一步改进方案是，步骤②中所述的酸化NaCL溶液是指在NaCL溶液中加入HCL进行酸化，NaCL溶液浓度为O. 1-0. 8%，酸化后的溶液pH值为4. 5 -6. 5。本发明进一步改进方案是，步骤④中所述的浓缩液添加总体积O. 1-3%的H2O2,所述双氧水的溶液浓度为25-30%。本发明进一步改进方案是，步骤④中所述静置、过滤去除沉淀是于5-10°C至少静置IOh或在5-10°C，4000r/min离心除去沉淀。本发明进一步改进方案是，步骤④中所述酸溶液为为盐酸溶液、所述的碱溶液为氢氧化钠溶液。 本发明进一步改进方案是,步骤⑤中所述的高纯度过滤是指采用O. 45μηι以下过滤，再用O. 22 μ m以下微孔滤膜抽滤,或采用5-10KD超滤。
具体实施例方式实施例I
①取新鮮的健康猪四肢骨，剔除残肉及结缔组织，称重709.7g用纯化水清洗干净；
②将步骤①得到的四肢骨破碎，按骨与盐水重量比I:2，加入酸化NaCL溶液(HCL进行酸化，酸化后的溶液PH值为5)，NaCL溶液浓度为0.8%，提取温度为120°C，压カ为O. IMPa,提取2h，过滤，按滤渣2倍体积加入60°C左右的酸化NaCL溶液搅拌后(HCL进行酸化，酸化后的溶液PH值为5)，NaCL溶液浓度为O. 8%，按上述温度和压カ条件提取4h，过滤，合并两次提取液，待提取液冷却至5°C以下，静置12h，除去上层脂肪；
③将步骤②得到的去脂肪后的提取液以及两次滤液缓慢加入I.5倍体积、预冷至0°C的丙酮中，静置24h，过滤，滤液于20°C左右减压浓缩并除去丙酮；
④将步骤③得到的浓缩液，添加总体积3%的H2O2，所述双氧水的溶液浓度为30%，用氯化氢溶液调pH至3,于5 °C静置12h左右,过滤去除沉淀,滤液用氢氧化钠溶液调pH至8-10,再于5°C静置12h左右过滤去除沉淀,滤液用氯化氢溶液调pH至6. 8后,加预先湿润的O. 1%针剂用活性碳，煮沸30min左右，降温至60°C抽滤，除去活性碳；
⑤将步骤④得到的滤液，用O.45 μ m过滤，再用O. 22 μ m微孔滤膜抽滤，滤液冷冻干燥，包括三个阶段置于冷冻干燥机-34°C预冻4h、-20°C低温升华16h和30°C高温干燥6h，得多肽活性物质冻干粉6. 96克。表一
权利要求
1.一种多肽活性物质冻干粉的制备方法，其特征在于包括以下步骤 ①取新鲜的健康动物四肢骨，剔除残肉及结缔组织，用纯化水清洗干净； ②将步骤①得到的四肢骨破碎，按骨与盐水重量比I: 1-5，加入酸化NaCL溶液，提取温度为120-125°C，压力为0. 1-0. 12MPa，提取结束后过滤，按滤渣与盐水重量比I :1_5，加入酸化NaCL溶液搅拌后，按上述温度和压力条件提取，过滤，合并两次提取液，待提取液冷却至5°C左右，静置、过滤除去上层脂肪； ③将步骤②得到的去脂肪后的提取液以及两次滤液缓慢加入I.5-3倍体积、预冷至(TC左右的丙酮中，静置、过滤，滤液于20-35°C减压浓缩并除去丙酮； ④将步骤③得到的浓缩液，添加浓缩液体积的0.1-3%的H2O2，用酸溶液调pH至2-3，于5-10°C进行液固分离,滤液用碱溶液调pH至8-10,再于5-10°C进行液固分离,滤液用酸溶液调PH至6. 8-7. 2后，按滤液重量加0. 1-0. 3%针剂用活性碳，煮沸后抽滤； ⑤将步骤④得到的滤液进行高纯度过滤，滤液冷冻干燥，包括三个阶段-34°C预冻2-4h、_20°C左右低温升华16-24h和30°C左右高温干燥6_10h，得多肽活性物质冻干粉。
2.根据权利要求I所述的多肽活性物质冻干粉的制备方法，其特征在于步骤①中所述的动物四肢骨为猪四肢骨以及胎牛四肢骨。
3.根据权利要求I所述的多肽活性物质冻干粉的制备方法，其特征在于步骤②中所述的酸化NaCL溶液是指在NaCL溶液中加入HCL进行酸化，NaCL溶液浓度为0. 1-0. 8%，酸化后的溶液PH值为4. 5 -6.5。
4.根据权利要求I所述多肽活性物质冻干粉的制备方法，其特征在于步骤④中所述双氧水的溶液浓度为25-30%。
5.根据权利要求I所述多肽活性物质冻干粉的制备方法，其特征在于步骤④中所述液固分离，是于5-10°C至少静置10h，采用过滤进行液固分离，或在5-10°C，4000r/min离心除去沉淀。
6.根据权利要求I所述多肽活性物质冻干粉的制备方法，其特征在于步骤④中所述酸溶液为盐酸溶液、所述的碱溶液为氢氧化钠溶液。
7.根据权利要求I所述多肽活性物质冻干粉的制备方法，其特征在于步骤⑤中所述的高纯度过滤是指采用0. 45 ii m以下过滤,再用0. 22 ii m以下微孔滤膜抽滤,或采用5-10KD超滤。
全文摘要
本发明公开了一种多肽活性物质冻干粉的制备方法，包括以下步骤①动物四肢骨加酸化盐水高温高压提取，过滤，骨渣加酸化盐水第2次提取，合并滤液，②冷却去除脂肪，丙酮沉淀，过滤。③蒸馏去除丙酮，HCL调pH，煮沸，静置，过滤，NaOH调pH，静置过滤，滤液调pH至中性，过滤，④加入0.1-0.3%活性碳煮沸，抽滤，超滤，冷冻干燥制成多肽活性物质冻干粉。
文档编号C07K1/14GK102675413SQ201210166319
公开日2012年9月19日 申请日期2012年5月27日 优先权日2012年5月27日
发明者荆志宇 申请人:淮安麦德森制药有限公司