专利名称：大豆中异黄酮的提取与纯化方法
技术领域：
本发明属于植物提取技术领域，尤其涉及一种从大豆中提取与纯化异黄酮的方法。
背景技术：
大豆异黄酮是大豆生长中的次级代谢产物，存在于大豆胚芽及子叶中包括大豆异黄酮甙和大豆异黄酮甙元。经过多年的研究，发现大豆异黄酮有多种重要的生理功能和营养作用，并逐渐成为研 究的一个主要方向，特别是对诸多病症的预防和抑制作用。流行病学调查研究表明，一些疾病如乳腺癌、前列腺炎、结肠炎、心脏病和骨质疏松症等在西方国家的发病率远远高于东方国家。科学家对这种现象进行了分析后认为东、西方的饮食差异是造成这种疾病发病率的主要原因。亚洲人大量食用豆制品，其人均消费量是西方国家的20-40倍，并发现亚洲人食物中含有大量异黄酮类物质。亚洲人血或尿中的异黄酮类物质及其代谢产物的水平均是西方人的20倍以上。在做了大批对照实验之后，他们提出饮食中的异黄酮类物质具有防癌和治疗乳腺癌、前列腺炎、结肠癌、心血管病和骨质疏松症等疾病的功效。证实异黄酮类物质是造成这种差异的原因。有关大豆异黄酮提取工艺的研究，如美国专利US5679806公开的分离与纯化大豆异黄酮的方法，该方法以大豆糖蜜或脱脂大豆粉为原料，经过三步反应分别得到较纯的大豆异黄酮甙和大豆异黄酮甙元，没有得到纯度较高的总大豆异黄酮。且该工艺存在以下不足
I.用甲醇进行浸提，浸提后大豆废渣不能再做饲料或他用。2.柱层析时用甲醇作淋洗剂，残留甲醇对人体有害。3.用聚甲基丙烯酸甲酯进行柱层析，价格较高，不易于工业化生产。公开号为CN 1174839A的中国专利公开了从大豆废糖蜜中回收异黄酮的方法。该方法主要目的是得到大豆异黄酮甙元，但该工艺采用离心分离进行浓缩，用昂贵的酶水解，工业化不易实现。公开号为CN 1211573的中国专利公开了一种提取大豆异黄酮的方法，该方法以大豆粉为原料，用正己烷脱去脂肪，再经两步水解得到大豆异黄酮甙和大豆异黄酮甙元，主要目的为得到不同的甙和甙元，但是该方法得到的大豆异黄酮纯度有待进一步提闻。
发明内容
本发明主要涉及从大豆中提取并纯化异黄酮的方法，主要目的是得到和天然大豆成分一致的大豆异黄酮产品，能够符合国家中药生产的要求，进而开发出中药产品。本发明的方法包括以下步骤
(1)原料准备取干燥大豆粉碎成粒径为40-80目；
(2)醇提按每2000 4000mL50 80%乙醇加入IOkg原料的比例回流提取2 4h，过80^500目孔径筛，取滤液，上述的提取重复2飞次；
(3)合并滤液，浓缩至乙醇浓度<2. 5%浓缩液；(4)萃取将浓缩液在浓缩体积2飞倍的乙酸乙酯中萃取2 4h，过8(Γ500目孔径筛，上述萃取重复2飞次；
(5)将所得萃取液浓缩至乙酸乙酯浓度<2. 5% ；
(6)硅胶柱层析按硅胶柱体体积8 12倍量取乙酸乙酯萃取液经硅胶柱层析；所述硅胶粒径100-300目；
(7)洗脱用丙酮含量为1(Γ50%的石油醚-丙酮混合液洗脱；
(8)收集洗脱液，经过ODS高效液相制备柱，将所得到的流动相脱除石油醚和丙酮即得到大豆中的异黄酮类化合物。(9)干燥、计算大豆异黄酮的提取率。其中上述步骤(6)中的硅胶粒径优选为100-200目。其中上述步骤(8)中，所述的制备柱直径和长度分别为直径为1.5cm长度为70cm
其中上述步骤(8)中的ODS是十八烷基硅烷键合硅胶柱，一般直接写0DS。本发明的有益效果为本发明的提取方法简单，设备要求低，经醇提后进行萃取并经硅胶柱层析，可以使大豆异黄酮的提取率超过50%，为从大豆中提取异黄酮化合物提供了一种新途径，对于充分利用植物资源和开发高天然药物具有重要意义。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明的技术方案进行详细的说明。实施例I
取干燥的粉碎的大豆颗粒为原料，按每3000mL60%的乙醇加入IOkg原料回流提取
2.Oh,过80目的孔径筛，取过滤液，截留物再按10kg/2500mL60%的乙醇比例重复回流提取2次，合并滤液，减压浓缩并脱醇至乙醇浓度2%得浓缩液，将浓缩液在浓缩体积2倍的乙酸乙酯中萃取2h，过140目筛，截留物重复进行2次萃取，将所得萃取液浓缩至乙酸乙酯浓度2%,按娃胶柱体体积8倍量取乙酸乙酯萃取液经100目娃胶柱层析,用丙酮含量为15%的石油醚-丙酮混合液洗脱，收集洗脱液，经过反相ODS高效液相制备柱，固定相为硅胶，颗粒度为325目，将所得到的流动相脱除石油醚和丙酮即得到大豆中的异黄酮类化合物。干燥、计算大豆异黄酮的提取率为55%，其提取质量为13. 75g。实施例2
取干燥的粉碎的大豆颗粒为原料，按每3000mL65%的乙醇加入IOkg原料回流提取
2.5h，过80目的孔径筛，取过滤液，截留物再按10kg/2500mL65%的乙醇比例重复回流提取2次，合并滤液，减压浓缩并脱醇至乙醇浓度2%得浓缩液，将浓缩液在浓缩体积2倍的乙酸乙酯中萃取2. 5h，过500目筛，截留物重复进行2次萃取，将所得萃取液浓缩至乙酸乙酯浓度2%，按硅胶柱体体积10倍量取乙酸乙酯萃取液经120目硅胶柱层析，用丙酮含量为30%的石油醚-丙酮混合液洗脱，收集洗脱液，经过反相ODS高效液相制备柱，固定相为硅胶，颗粒度为500目，将所得到的流动相脱除石油醚和丙酮即得到大豆中的异黄酮类化合物。干燥、计算大豆异黄酮的提取率为63%，其提取质量为15. 75g。实施例3
取干燥的粉碎的大豆颗粒为原料，按每3000mL70%的乙醇加入IOkg原料回流提取2.5h，过80目的孔径筛，取过滤液，截留物再按10kg/2500mL70%的乙醇比例重复回流提取3次，合并滤液，减压浓缩并脱醇至乙醇浓度2%得浓缩液，将浓缩液在浓缩体积2. 5倍的乙酸乙酯中萃取3h，过140目筛，截留物重复进行2次萃取，将所得萃取液浓缩至乙酸乙酯浓度2%，按硅胶柱体体积10倍量取乙酸乙酯萃取液经120目硅胶柱层析，用丙酮含量为50%的石油醚-丙酮混合液洗脱，收集洗脱液，经过反相ODS高效液相制备柱，固定相为硅胶，颗粒度为800目，将所得到的流动相脱除石油醚和丙酮即得到大豆中的异黄酮类化合物。干燥、计算大豆异黄酮的提取率为75%，其提取质量为15. 75g。实施例4
取干燥的粉碎的大豆颗粒为原料，按每3000mL75%的乙醇加入IOkg原料回流提取
3.Oh,过100目的孔径筛，取过滤液，截留物再按10kg/2500mL75%的乙醇比例重复回流提 取3次，合并滤液，减压浓缩并脱醇至乙醇浓度2%得浓缩液，将浓缩液在浓缩体积2. 5倍的乙酸乙酯中萃取3. 5h，过140目筛，截留物重复进行2次萃取，将所得萃取液浓缩至乙酸乙酯浓度2%，按硅胶柱体体积10倍量取乙酸乙酯萃取液经120目硅胶柱层析，用丙酮含量为50%的石油醚-丙酮混合液洗脱，收集洗脱液，经过反相ODS高效液相制备柱，固定相为硅胶，颗粒度为800目，将所得到的流动相脱除石油醚和丙酮即得到大豆中的异黄酮类化合物。干燥、计算大豆异黄酮的提取率为90%，其提取质量为22. 50g。实施例5
取干燥的粉碎的大豆颗粒为原料，按每3000mL80%的乙醇加入IOkg原料回流提取
3.0h，过200目的孔径筛，取过滤液，截留物再按10kg/2500mL80%的乙醇比例重复回流提取3次，合并滤液，减压浓缩并脱醇至乙醇浓度2%得浓缩液，将浓缩液在浓缩体积2. 5倍的乙酸乙酯中萃取4h，过200目筛，截留物重复进行2次萃取，将所得萃取液浓缩至乙酸乙酯浓度2%，按硅胶柱体体积8倍量取乙酸乙酯萃取液经120目硅胶柱层析，用丙酮含量为25%的石油醚-丙酮混合液洗脱，收集洗脱液，经过反相ODS高效液相制备柱，固定相为硅胶，颗粒度为200目，将所得到的流动相脱除石油醚和丙酮即得到大豆中的异黄酮类化合物。干燥、计算大豆异黄酮的提取率为89%，其提取质量为22. 25g。
权利要求
1.大豆中异黄酮的提取与纯化方法，其特征在于包括以下步骤 (1)原料准备取干燥大豆粉碎成粒径为40-80目； (2)醇提按每200(T4000mL50^80%乙醇加入IOkg原料的比例回流提取2 4h，过80^500目孔径筛，取滤液，上述的提取重复2飞次； (3合并滤液，浓缩至乙醇浓度< 2. 5%浓缩液； (4)萃取将浓缩液在浓缩体积2飞倍的乙酸乙酯中萃取2 4h，过8(Γ500目孔径筛，上述萃取重复2飞次； (5)将所得萃取液浓缩至乙酸乙酯浓度<2. 5% ； (6)硅胶柱层析按硅胶柱体体积8 12倍量取乙酸乙酯萃取液经硅胶柱层析；所述硅胶粒径100-300目； (7)洗脱用丙酮含量为1(Γ50%的石油醚-丙酮混合液洗脱； (8)收集洗脱液，经过ODS高效液相制备柱，将所得到的流动相脱除石油醚和丙酮即得到大豆中的异黄酮类化合物； (9)干燥、计算大豆异黄酮的提取率。
2.如权利要求I所述的大豆中异黄酮的提取与纯化方法，其特征在于所述的步骤(6)中的硅胶粒径优选为100-200目。
3.如权利要求I所述的大豆中异黄酮的提取与纯化方法，其特征在于所述的步骤(8)中的ODS是十八烷基硅烷键合硅胶柱。
全文摘要
本发明属于植物提取技术领域，尤其涉及一种从大豆中提取与纯化异黄酮的方法。本发明主要涉及从大豆中提取并纯化异黄酮的方法，主要目的是得到和天然大豆成分一致的大豆异黄酮产品，能够符合国家中药生产的要求，进而开发出中药产品。本发明的提取方法简单，设备要求低，经醇提后进行萃取并经硅胶柱层析，可以使大豆异黄酮的提取率超过50%，为从大豆中提取异黄酮化合物提供了一种新途径，对于充分利用植物资源和开发高天然药物具有重要意义。
文档编号C07D311/40GK102977066SQ201210522278
公开日2013年3月20日 申请日期2012年12月7日 优先权日2012年12月7日
发明者张成如 申请人:山东大学