低温乙醇提取人血白蛋白的方法
【专利摘要】本发明公开了一种低温乙醇提取人血白蛋白的方法，以人血浆为原料依次分离出F?Ⅰ、FⅡ+Ⅲ、FⅣ、得FⅤ沉淀，溶解FⅤ沉淀，调节溶液的蛋白质含量至20～60g/L，pH值至4.50～4.70，乙醇浓度至体积百分比9.0～13.0%，经3～5级过滤，将溶液超滤透析并浓缩至所需浓度后，加入辛酸钠，使溶液中的辛酸钠含量为0.140～0.180mmol/g蛋白质，加入氯化钠，使溶液的渗透压为210～400mOsmol/kg，再调节溶液pH值至6.40～7.40，并稀释至规定分装浓度。本发明提高了FⅤ沉淀的提取率，大幅度提高了人血白蛋白的收率。
【专利说明】低温乙醇提取人血白蛋白的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及以人血浆为原料制备人血白蛋白的方法，更具体的说涉及一种低温乙醇提取人血白蛋白的方法。
【背景技术】
[0002]低温乙醇法是人血浆白蛋白的制备方法之一，该方法是1940年由美国哈佛大学医学院的EdwinJ.Cohn教授发明的，因此又称为“孔氏法”。孔氏法最初用来分离牛血清白蛋白，随后应用于人血浆分离。低温乙醇法是以混合血浆为原料，逐级降低酸度(从PH7.0降到pH4.0)。提高乙醇浓度(从O升到40%)，同时降低温度(从2°C降到_2°C)，各种蛋白在不同的条件下以组分(粗制品)的形式分步从溶液中析出，并通过离心或者过滤分离出来。低温乙醇法存在的问题是白蛋白收率低、稳定性差，故该方法需要改良以提高白蛋白的收率。
[0003]专利号为95118471.7的发明专利公开了 “改良低温乙醇人血白蛋白生产工艺”，该发明用去冷沉淀血浆为原料，首先分离出组分I + II +III，再分离组分IV，组分IV上清经深滤再分离组分V，组分V沉淀经12%乙醇纯化获得精制白蛋白。该方法的组分分离周期略长、提取组分沉淀不够细化，并且白蛋白生广的收率还有待提闻。
【发明内容】
[0004]本发明的 目的是提供一种低温乙醇提取人血白蛋白的方法，在用人血浆为原料制备人血白蛋白时，以提高人血白蛋白的收率。
[0005]本发明所述低温乙醇提取人血白蛋白的方法，包括以下步骤:
[0006]步骤一、从人血浆中分离F I，得F I上清液；
[0007]步骤二、从F I上清液中分离F II + III，得F II + III上清液；
[0008]步骤三、从F II + III上清液中分离F IV，得F IV上清液；
[0009]步骤四、从F IV上清液中分离F V，得F V沉淀；
[0010]步骤五、在F V沉淀中加入注射用水，使F V沉淀完全溶解，调节溶液的蛋白质含量至20~60g/L，pH值至4.50~4.70，乙醇浓度至体积百分比9.0~13.0%，经3~5级过滤，将溶液超滤透析并浓缩至所需浓度后，加入辛酸钠，使溶液中的辛酸钠含量为0.140~0.180mmol/g蛋白质,加入氯化钠,使溶液的渗透压为210~400m0smol/kg,再调节溶液pH值至6.40~7.40,并稀释至规定分装浓度。
[0011]步骤六、将步骤五所得溶液进行巴氏灭活、经除菌滤芯灌装至容器后，在52~62°C温度下加温1.5~2.5小时。
[0012]所述步骤一是将融合后的人血浆的温度控制在0.0~4.(TC之间，调节蛋白质浓度至40~65g/L、调节溶液电导率为12.5~13.7ms/cm、调节pH值至6.80~7.30，乙醇浓度至体积百分比7.0~10.0%，控制温度至-1.0~-3.(TC，待沉淀产生完全后，用压滤机进行加压过滤，加压过滤时选用孔径不超过0.9 μ m的深层滤板，控制压滤机温度至-10C以下，过滤分离出F I沉淀，得F I上清液。
[0013]所述步骤二是，调节F I上清液pH值至5.70~6.30、乙醇浓度至体积百分比18.0~22.0%，控制温度至-4.0~-6.(TC，待沉淀产生完全后，按照每16Kg蛋白质添加0.5~1.5Kg的比例分别添加等量的珍珠岩和硅藻土，用压滤机进行加压过滤，加压过滤时，选用孔径不超过0.7 μ m的深层滤板，控制压滤机温度至-3°C以下，过滤分离出F II +III沉淀，得 F II +III上清。
[0014]所述步骤三是，调节F II + III上清液电导率为6.0~8.0ms/cm,调节pH值至
5.70~6.30，调节乙醇浓度至体积百分比38.0~42.0%，在滴加乙醇时采用每小时0.2~
0.5°C梯度降温方式使溶液最终温度在-4.0~-6.(TC之间，待沉淀产生完全后，按照每
2.5Kg蛋白质添加0.5~1.5Kg的比例分别添加等量的珍珠岩和硅藻土，用压滤机进行加压过滤，加压过滤时，选用孔径不超过0.7 μ m的深层滤板，控制压滤机温度至_3°C以下，过滤分离出F IV沉淀，得F IV上清液。
[0015]所述步骤四是，调节F IV上清液pH值至4.70~4.90,乙醇浓度至体积百分比38.0~42.0%，控制温度至-7.0~-15.(TC，待沉淀产生完全后，用压滤机进行加压过滤，加压过滤时选用孔径不超过0.9 μ m的深层滤板，控制压滤机温度至-5°c以下，过滤分离出F V沉淀，得F V沉淀。
[0016]所述调节FIV上清液pH是采用喷雾式滴加醋酸溶液的方式，用于喷射醋酸溶液的喷头距离F IV上清 液面的高度为I~3米。
[0017]所述巴氏灭活是将溶液在58~62°C温度下灭活10小时以上。
[0018]本发明所述低温乙醇提取人血白蛋白的方法，从人血浆中依次分离F 1、F II +II1、F IV、F V，相对于现有技术，其提取组分沉淀精益细化，缩短了组分的分离周期，利于人血浆的综合利用。通过控制压滤机的温度避免了制品压滤过程升温而导致蛋白变性，提高了收率。在酸性PH调节剂滴加方式上进行了改进，使制品与调节剂混合反应更加温和，通过改变制品电导率的重大调整，大大提闻了 F V沉淀的提取率，大幅度提闻了人血白蛋白的收率，人血白蛋白的收率可达到29.0g/Ι以上(表一人血白蛋白提取率对比)。
[0019]表一:人血白蛋白提取率对比
[0020]
【权利要求】
1.一种低温乙醇提取人血白蛋白的方法，其特征在于:包括以下步骤: 步骤一、从人血浆中分离F I，得F I上清液； 步骤二、从F I上清液中分离F II + III，得F II + III上清液； 步骤三、从F II +III上清液中分离F IV，得F IV上清液； 步骤四、从F IV上清液中分离F V，得F V沉淀； 步骤五、在F V沉淀中加入注射用水，使F V沉淀完全溶解，调节溶液的蛋白质含量至20~60g/L，pH值至4.50~4.70，乙醇浓度至体积百分比9.0~13.0%，经3~5级过滤，将溶液超滤透析并浓缩至所需浓度后，加入辛酸钠，使溶液中的辛酸钠含量为0.140~0.180mmol/g蛋白质,加入氯化钠,使溶液的渗透压为210~400m0smol/kg,再调节溶液pH值至6.40~7.40,并稀释至规定分装浓度。 步骤六、将步骤五所得溶液进行巴氏灭活、经除菌滤芯灌装至容器后，在52~62°C温度下加温1.5~2.5小时。
2.根据权利要求1所述低温乙醇提取人血白蛋白的方法，其特征在于:所述步骤一是将融合后的人血浆的温度控制在0.0~4.(TC之间，调节蛋白质浓度至40~65g/L、调节溶液电导率为12.5~13.7ms/cm、调节pH值至6.80~7.30，乙醇浓度至体积百分比7.0~10.0%，控制温度至-1.0~-3.(TC，待沉淀产生完全后，用压滤机进行加压过滤，加压过滤时选用孔径不超过0.9μ m的深层滤板，控制压滤机温度至-1°C以下，过滤分离出F I沉淀，得F I上清液。
3.根据权利要求1所述低温乙醇提取人血白蛋白的方法，其特征在于:所述步骤二是，调节F I上清液pH值至5.70~6.30、乙醇浓度至体积百分比18.0~22.0%，控制温度至-4.0~-6.(TC，待沉淀产生完全后，按照每16Kg蛋白质添加0.5-1.5Kg的比例分别添加等量的珍珠岩和硅藻土，用压滤机进行加压过滤，加压过滤时，选用孔径不超过0.7 μ m的深层滤板，控制压滤机温度至_3°C以下，过滤分离出F II +III沉淀，得F II +III上清。
4.根据权利要求1所述低温乙醇提取人血白蛋白的方法，其特征在于:所述步骤三是，调节F II +III上清液电导率为6.0~8.0ms/cm，调节pH值至5.70~6.30，调节乙醇浓度至体积百分比38.0~42.0%，在滴加乙醇时采用每小时0.2~0.5°C梯度降温方式使溶液最终温度在-4.0~-6.(TC之间，待沉淀产生完全后，按照每2.5Kg蛋白质添加0.5~1.5Kg的比例分别添加等量的珍珠岩和硅藻土，用压滤机进行加压过滤，加压过滤时，选用孔径不超过0.7 μ m的深层滤板，控制压滤机温度至-3V以下，过滤分离出F IV沉淀，得F IV上清液。
5.根据权利要求1所述低温乙醇提取人血白蛋白的方法，其特征在于:所述步骤四是，调节F IV上清液pH值至4.70~4.90，乙醇浓度至体积百分比38.0~42.0%，控制温度至-7.0~-15.(TC，待沉淀产生完全后，用压滤机进行加压过滤，加压过滤时选用孔径不超过0.9 μ m的深层滤板，控制压滤机温度至_5°C以下`，过滤分离出F V沉淀，得F V沉淀。
6.根据权利要求5所述低温乙醇提取人血白蛋白的方法，其特征在于:所述调节FIV上清液pH是采用喷雾式滴加醋酸溶液的方式,用于喷射醋酸溶液的喷头距离F IV上清液液面的高度为I~3米。
7.根据权利要求1所述低温乙醇提取人血白蛋白的方法，其特征在于:所述巴氏灭活是将溶液在58~62°C温度下灭活10小时以上。
【文档编号】C07K1/14GK103709245SQ201310710743
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年12月20日 优先权日:2013年12月20日
【发明者】安康, 张宝献, 张其昌, 王猛, 滕世超, 郭心怡 申请人:华兰生物工程重庆有限公司