含炔烃的类黄酮、含叠氮化物的类黄酮和含三唑的类黄酮作为调节剂用于癌症的多药耐药的制作方法
【专利摘要】三唑桥联类黄酮二聚体化合物文库经由一系列含有叠氮化物(Az?1-15)和炔烃(Ac?1-17)的类黄酮的环加成反应有效构建。针对这些三唑桥联类黄酮二聚体和其前驱体含炔烃的类黄酮和含叠氮化物的类黄酮在过度表达P-gp的细胞株(LCC6MDR)、过度表达MRP1的细胞株(2008/MRP1)和过度表达BCRP的细胞株(HEK293/R2和MCF7-MX100)中调节多药耐药(MDR)的能力对其进行筛选。其通常展示出极有前景的对抗P-gp介导的、MRP1介导的和BCRP介导的药物耐药的MDR逆转活性。此外，其对各种转运蛋白展示出不同水平的选择性。总的来说，其可针对P-gp、MRP1和BCRP转运蛋白分成单选择性、双选择性和多选择性调节剂。逆转LCC6MDR细胞的太平洋紫杉醇耐药(141-340nM)、2008/MRP1细胞的DOX(78-590nM)和长春新碱(82-550nM)耐药以及HEK293/R2和MCF7-MX100细胞的拓扑替康耐药(0.9-135nM)的EC50值在纳摩尔范围内。重要的是，许多化合物在过度表达BCRP的细胞株中展示出处于或低于10nM的EC50，表明与P-gp和MRP1转运蛋白相比，这些二价三唑更具选择性地抑制BCRP转运蛋白。大部分二聚体是值得注意的安全MDR化学敏化剂，如由其高治疗指数值所指示。
【专利说明】含炔烃的类黄酮、含叠氮化物的类黄酮和含三唑的类黄酮作为调节剂用于癌症的多药耐药
【技术领域】
[0001]本发明涉及新颖的含炔烃的类黄酮、含叠氮化物的类黄酮和含三唑的类黄酮化合物、其制备方法和这些化合物减少由ABC转运蛋白过度表达引起的多药耐药的用途。
[0002]本发明涉及一种产生可用于逆转癌症药物耐药的一系列新的化合物的新方法。
[0003]本发明涉及含炔烃的类黄酮、含叠氮化物的类黄酮和含三唑的类黄酮的结构新颖性，所述类黄酮对P_gp、MPRl和BCRP展示出高度强效活性，由此逆转癌症药物耐药。
【背景技术】
[0004]癌细胞的广泛多药耐药(MDR)已成为成功癌症化学疗法的一个主要障碍。MDR的一个重要机制是因ATP结合盒(ABC)转运蛋白的过度表达所致的抗癌剂的增强的细胞外排。1在迄今为止鉴别的48种ABC转运蛋白中，P-糖蛋白(P-gp，ABCB1)、多药耐药蛋白(MRPI,ABCCI)和乳癌耐药蛋白(BCRP，ABCG2)是与MDR相关的三种主要外排转运蛋白。2ABC转运蛋白的结构和功能已由科学家深入研究。已知所有ABC蛋白均由跨膜域(TMD)和核苷酸结合域(NBD)组成。3已鉴别出P-gp具有胞质N端和C端、各由6个螺旋组成的两个TMD以及在单一 1280个残基的多肽中的两个NBD。3_6
[0005]1531个残基的MRPl的结构与P_gp的结构类似，但蛋白具有具备5个跨膜(TM)螺旋的额外N端TMD，称为TMDtl，其功能仍然不清楚。3’5’7’8BCRP是655个残基的半转运蛋白，其具有N端NBD和6个螺旋的TMD。BCRP的功能蛋白被假设为作为均二聚体运作。3’5’9“°
[0006]然而，这三种转运蛋白与其底物的结合模式和结合位点并不清楚。不存在可用于充当这三种ABC转运蛋白的抑制剂的共用“药效团(pharmacophore)”。3ABC多药外排泵的结构上不同的抑制剂或调节剂已通过同源性模型化、组合化学、QSAR分析以及利用蛋白结构信息进行鉴别。n_14已有三代P-gp抑制剂。第一代P-gp抑制剂包括钙通道阻断剂维拉帕米(verapamil)1547、抗痕疾药物奎尼丁(quinidine) 18、|丐调蛋白拮抗剂19’2°、免疫抑制剂环孢灵AGyclosporine A) 21_24和一些类固醇25_27。第二代Ρ-gp化学敏化剂包括右维拉帕米(dexverapamil)28、PSC833 (伐司扑达(valspodar))%29、右尼古地平(dexniguldipine)30和 VX-710(比立考达(biricodar))31’32。
[0007]通过结构-活性关系和组合化学方法开发的第三代MDR调节剂包括唑苏达(zosuquidar)LY335979、塔利奎达(tariquidar)XR9576、拉尼喹达(Ianiquidar)R101933、依克立达(elacridar)GF120918和经取代的二芳基咪唑0NT-090。其中，仅极少数被选择用于临床试验，且其中无一者尚未被批准用于临床应用。
[0008]已鉴别出更少的MRPl抑制剂。大多数MRPl底物以及抑制剂是进入细胞不良的阴离子化合物，因此难以设计与P-gp相比针对MRPl的良好抑制剂。白三烯C4 (LTC4)类似物(MK571)3’35、格列本脲(glibenclamide)36、丙磺舒(probenecid)37和一些非特异性的有机阴离子转运蛋白的抑制剂如NSAID (例如Π引哚美辛(indomethacin)) 38,39已被描述为MRPl调节齐Li。泮托拉唑(Pantoprazole)、烟曲霉毒素 C(fumitremorgin C)和其衍生物 Kol32、Kol34和Ko1433’4°是特异性ABCG2抑制剂。此外，一些第三代P_gp抑制剂如依克立达41和塔利奎达42还调节ABCG2活性。
[0009]类黄酮是通常见于人类饮食的水果、蔬菜和植物衍生产品中的多酚化合物。43由于人类每日消耗大量类黄酮，故普遍接受类黄酮并无毒性。此外，已报导了发现一些类黄酮逆转癌症MDR。一些类黄酮如染料木黄酮(genistein)、白杨素(chrysin)、鹰嘴豆素(b1chanin)、懈皮素(quercetin)、堪非醇(kaempferol)和柚皮素(naringenin)对 P-gp介导的转运具有抑制活性。44_49
[0010]其它类黄酮如糖苷配基(aglycone)和糖苷已展示出不同程度地抑制MRPl介导的转运。5°_52许多类黄酮还已展示出与BCRP转运蛋白相互作用。其在过度表达BCRP的癌细胞中显著抑制拓扑替康和米托蒽醌的BCRP介导的转运。53_56因此，类黄酮是用于开发新颖MDR调节剂的有前景的候选物。
【发明内容】
[0011]发明目标
[0012]本发明的一个目标是发展具有改进的活性和/或选择性的新颖类黄酮衍生物，从而解决或改善与现有技术相关的至少一个或一个以上问题。作为最低限度，本发明的一个目标是为公众提供有用的选择。
[0013]发明概述
[0014]在第一方面中本发明提供式I化合物:
[0015]类黄酮-连接基团_(类黄酮)n
[0016]I
[0017]其中
[0018]所述类黄酮选自由以下组成的群组:查耳酮、黄酮、黄酮醇、黄烷酮、花青素和异黄酮；
[0019]η 为 I 或 2;且
[0020]所述连接基团为具有至少一个三唑桥联单元的基团。
[0021]所述连接基团可具有I到10个三唑桥联单元，且更优选地具有I到5个三唑桥联单元或I到3个三唑桥联单元。
[0022]至少一个三唑桥联单元可进一步包含至少一个聚乙二醇单元。
[0023]在第二方面中，本发明提供式II化合物，其包含含有乙炔基团的类黄酮:
[0024]类黄酮-连接基团-CCH
[0025]II
[0026]其中
[0027]所述类黄酮选自由以下组成的群组:查耳酮、黄酮、黄酮醇、黄烷酮、花青素和异黄酮；且
[0028]所述连接基团为具有至少一个碳原子的基团。
[0029]连接基团优选地选自由以下组成的群组:亚烷基、具有多个乙二醇单元的基团、具有多个丙二醇单元的基团、具有多个氨基烷基单元的基团以及其组合。
[0030]在第三方面中，本发明提供式III化合物，其包含含有叠氮化物基团的类黄酮:
[0031]类黄酮-连接基团-N3
[0032]III
[0033]其中
[0034]所述类黄酮选自由以下组成的群组:查耳酮、黄酮、黄酮醇、黄烷酮、花青素和异黄酮；且
[0035]所述连接基团为具有至少一个碳原子的基团。
[0036]连接基团优选地选自由以下组成的群组:亚烷基、具有多个乙二醇单元的基团、具有多个丙二醇单元的基团、具有多个氨基烷基单元的基团以及其组合。
[0037]在第四方面中，本发明提供一种合成如第一方面中定义的式I化合物的方法，其包含使如第二方面中定义的式II化合物与如由第三方面定义的式III化合物通过催化1，3-偶极环加成反应。
[0038]催化1，3-偶极环加成可为区域选择性的，且催化1，3-偶极环加成可为Cu(I)催化的或Ru催化的。
[0039]在第五方面中，本发明提供减少基于P-糖蛋白的多药耐药的方法，其包括以下步骤:投与有效量的如第一方面中定义的式I化合物或如第二方面中定义的式II化合物或如第三方面中定义的式III化合物。
[0040]在第六方面中，本发明提供减少基于基于MRPl的多药耐药的方法，其包括以下步骤:投与有效量的如第一方面中定义的式I化合物或如第二方面中定义的式II化合物或如第三方面中定义的式III化合物。
[0041]在第七方面中，本发明提供减少基于基于BCRP的多药耐药的方法，其包括以下步骤:投与有效量的如第一方面中定义的式I化合物或如第二方面中定义的式II化合物或如第三方面中定义的式III化合物。
[0042]在第八方面中，本发明提供减少由ABC转运蛋白过度表达引起的药物耐药的方法，其包括以下步骤:投与有效量的如第一方面中定义的式I化合物或如第二方面中定义的式II化合物或如第三方面中定义的式III化合物。
[0043]在第九方面中，本发明提供治疗由ABC转运蛋白过度表达引起的药物耐药癌症的方法，其包括以下步骤:投与有效量的如第一方面中定义的式I化合物或如第三方面中定义的式II化合物或如第三方面中定义的式III化合物。
[0044]在第十方面中，本发明提供有效量的如第一方面中定义的式I化合物或如第二方面中定义的式II化合物或如第三方面中定义的式III化合物的用途，其用于制造供减少基于P-糖蛋白的多药耐药用的药物。
[0045]在另一方面中，本发明提供有效量的如第一方面中定义的式I化合物或如第二方面中定义的式II化合物或如第三方面中定义的式III化合物的用途，其用于制造供减少基于MRP-1的多药耐药用的药物。
[0046]在另一方面中，本发明提供有效量的如第一方面中定义的式I化合物或如第二方面中定义的式II化合物或如第三方面中定义的式III化合物的用途，其用于制造供减少基于BCRP的多药耐药用的药物。
[0047] 在又另一方面中，本发明提供有效量的如第一方面中定义的式I化合物或如第二方面中定义的式II化合物或如第三方面中定义的式III化合物的用途，其用于制造供减少由ABC转运蛋白过度表达引起的药物耐药用的药物。
[0048]在又另一方面中，本发明提供有效量的如第一方面中定义的式I化合物或如第二方面中定义的式II化合物或如第三方面中定义的式III化合物的用途，其用于制造供治疗由ABC转运蛋白过度表达引起的药物耐药癌症用的药物。
[0049]在再另一方面中，本发明提供用于减少基于P-糖蛋白的多药耐药或减少基于MRP-1的多药耐药或减少基于BCRP的多药耐药的药物，所述药物包括如第一方面中定义的式I化合物或如第二方面中定义的式II化合物或如第三方面中定义的式III化合物。
[0050]在再另一方面中，本发明提供用于减少由ABC转运蛋白过度表达引起的药物耐药的药物，所述药物包括如第一方面中定义的式I化合物或如第二方面中定义的式II化合物或如第三方面中定义的式III化合物。
[0051]在又再另一方面中，本发明提供用于治疗由ABC转运蛋白过度表达引起的药物耐药癌症的药物，所述药物包括第一方面中定义的式I化合物或如第二方面中定义的式II化合物或如第三方面中定义的式III化合物。
[0052]在又再另一方面中，本发明提供产生预定数目的如第一方面中定义的式I化合物的文库的方法，其包含:
[0053]a)提供如第二方面中定义的式II的含有乙炔基团的类黄酮；
[0054]b)使如第二方面中定义的式II的含有乙炔基团的类黄酮与如第三方面中定义的式III的含有叠氮基的类黄酮选择性反应；以及
[0055]c)将步骤(a)和(b)重复预定次数，从而获得预定数目的如第一方面中定义的式I化合物。
[0056]在再又一个替代方面中，本发明提供通过如以上又再另一方面中定义的方法制得的如第一方面中定义的式I化合物的文库的用途，其用于筛选所述文库内每一化合物对由ABC转运蛋白过度表达引起的多药耐药的调节效能。
[0057]本发明的一个优选特征是提供一类新的P_gp、MRPl和BCRP的调节剂，其基于含炔烃的类黄酮、含叠氮化物的类黄酮和含三唑的类黄酮且具有完全新的化学结构。
[0058]本发明的另一优选特征是提供三唑桥联类黄酮杂二聚体的组合文库，其允许快速筛查P-gp、MRPl和BCRP调节活性。
[0059]这些新合成的化合物在体外逆转癌症药物耐药方面是高度强效的且可在未来用于逆转癌症患者的癌症药物耐药。
[0060]这些新合成的化合物对引起癌症药物耐药的三种主要转运蛋白具有不同水平的选择性。所述广泛范围的选择性将增加可应用这些新化合物的应用的通用性。
[0061]举例来说，双选择性化合物(对P-gp和BCRP)可适用于在血脑屏障中靶向这些药物转运蛋白，由此增加脑中的癌症药物浓度。这对于治疗否则将因脑中缺乏癌症药物吸收而极为困难的脑肿瘤来说是极其重要的。
[0062]本发明出于以下原因而相较于现有技术是更有利的:
[0063](I)对于逆转P-gp介导的太平洋紫杉醇(paclitaxel)耐药(EC5tl = 141_340nM)和阿霉素(doxorubicin)耐药(EC50 = 114_530nM)、MRPl 介导的长春新喊(vincristine)耐药(EC5tl = 82-550nM)和BCRP介导的拓扑替康和米托蒽醌耐药(EC5tl = 0.9_135nM)来说高度遞
[0064](2)发展具有不同类黄酮部分的类黄酮二聚体的较大组合文库用于体外筛选P-gp、MRPl和BCRP调节活性的高度査效并便宜的方法。
[0065](3)大部分三唑类黄酮二聚体使用非常安全，对正常成纤维细胞具有极低的体外细胞毒性(IC50)10yM) ο这相比Kol43(文献中最强效的BCRP调节剂，IC50 = 29 μ Μ)毫不逊色。一些三唑类黄酮二聚体的治疗指数比文献中的最佳BCRP调节剂Κο143高43倍。
[0066](4) 一些三唑类黄酮二聚体具有极其强效的BCRP调节活性，其比文献中的最强效BCRP调节剂Κο143更强效12倍。
[0067](5)对P_gp、MRPl和BCRP的广泛范围的选择性，因此提供这些新的类黄酮二聚体在不同情形中的通用应用，包括逆转癌症药物耐药或增加癌症或癫痫药物在脑中的生物可用性，只是仅举几例。
[0068]因此，本发明的一个优选特征是设计新颖的含炔烃的类黄酮、含叠氮化物的类黄酮和含三唑的类黄酮、合成以及在体外抑制癌细胞中的P-gp、MRP I和BCRP中的活性的表征。
【具体实施方式】
[0069]材料和方法
[0070]通用.
[0071]所有NMR光谱均记录在fcuker MHz DPX400光谱仪(对于1H在400MHz下且对于 13C 在 10MHz 下)或 Varian Unity Inova 500NB NMR 光谱仪(对于 1H 在 500MHz 下且对于13C在125MHz下)上。 所有NMR测量均在室温下进行，且化学位移的单位被报导为相对于⑶Cl3共振的百万分之一(ppm)(分别为1H中?.26ppm，在13C模式中三重峰的中线的77.0ppm)。低分辨率和高分辨率质谱通过电喷雾离子化(ESI)模式在Micromass Q-T0F-2上或通过电离子化(EI)模式在Finnigan MAT95ST上获得。熔点使用电热IA9100数字熔点装置测量并未经校正。除非另行说明，否则所有试剂和溶剂均为试剂级的且不经进一步纯化即使用。用于薄层色谱(TLC)的板是E.Merck硅胶60F254 (0.25mm厚)且其在短(254nm)和长(365nm)UV光下观测。色谱纯化使用MN硅胶60 (230-400目)进行。经取代4’-羟基黄酮或7-羟基黄酮la-h如先前报导般制备。58所测试的化合物的纯度通过HPLC测定，其通过使用以 Agilent Prep-Sil Scalar 柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m)的分析柱安装的 Agilent1100系列在32011111的—检测下(参考在450nm下)在己烷(50% )/乙酸乙酯(25% )/甲醇(25% )的等度洗脱情况下以1.0mL/min的流速进行。根据HPLC所有所测试的化合物展示出纯度>95%。
[0072]合成Acl到Acl6的通用程序(流程I)
[0073](i)向圆底烧瓶中馈入相应4’-羟基黄酮或7-羟基黄酮la-e (I当量)、5_氯戊-1-炔或6-氯己-1-炔(1.2当量)、K2C03(1.5当量)和DMF (3ml/当量(mmol))。将反应混合物在回流温度下搅拌2小时。当TLC指示起始物质完全消耗时，将反应混合物倾入含有水的分液漏斗中。混合物用DCM连续萃取。如果混合物不可分成两层，那么加入少量IM HCl0合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到棕色粗反应混合物。通过硅胶急骤柱色谱用丙酮/DCM作为洗脱剂进行纯化，得到所需产物。
[0074](ii)将过量KOH(3M于96% EtOH中的溶液，3-4当量)加入4_ (己_5_炔-1-基氧基)苯甲醛(2a) (1.0当量)和经取代2’-羟基苯乙酮3a_e (1.0当量)的混合物中。将混合物在室温下搅拌16小时。当TLC指示起始物质完全消耗时，反应混合物在冰浴温度下用IM HCl酸化到pH 5。通过抽吸过滤来收集所形成的黄色沉淀。黄色固体用正己烷洗涤且从MeOH中进行结晶，得到所需查耳酮。如果在加入IM HCl之后未形成沉淀，那么混合物用DCM连续萃取。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在减压下蒸发，得到粗混合物，所述粗混合物使用15% EtOAc/己烷作为洗脱剂进行急骤柱色谱，得到所需查耳酮。
[0075]2-(4-(戊-4-炔-1-基氧基)苯基)-4H_色烯_4_酮(Acl):这种化合物(0.53g，82 % )根据上述通用程序⑴从2-(4-羟基苯基)-4H-色烯-4-酮(Ia)和 5-氯戊-1-炔获得。1HnmrGoomHz,氯仿-d) δρρπι 1.98-2.06 (m, 3H)，2.40-2.44 (m, 2H)，4.13 (t, J = 6.40Hz, 2H), 6.71 (s, 1H)，7.00 (d, J =
8.80Hz, 2H), 7.38 (dd, J = 7.60, 7.20Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.40Hz, 1H)，7.65 (ddd, J =
7.60, 7.20, 1.60Hz, 1Η), 7.85 (d, J = 8.80Hz, 2Η), 8.21 (dd, J = 7.60, 1.60Hz, 1Η) ；13CNMR(100MHz,氯仿-d)Sppm 15.07, 27.92, 66.32, 69.12, 83.11, 106.07, 114.87, 117.91，123.86，123.92，125.02，125.57，127.94，133.51，156.10，161.68，163.33，178.32 ；LRMS (ESI) m/z 305 [M+H] + ;HRMS (ESI) C2tlH17O3 [M+H]+计算值 305.1178，实验值 305.1180 ；
[0076]7-(戊-4-炔-1-基氧基)-2-苯基-4H-色烯_4_酮(Ac2):这种化合物(0.33g，79% )根据上述通用程序⑴从7-羟基-2-苯基-4H-色烯-4-酮(Ie)和5-氯戊-1-炔获得。1HNMR (400MHz,氯仿 _d) δ ppm 1.99-2.07 (m, 3H)，2.40-2.44 (m, 2H)，4.16 (t, J =
6.40Hz, 2H)，6.71 (s, 1H)，6.93-6.95 (m, 2H)，7.47-7.49 (m, 3H)，7.84-7.86 (m, 2H)，8.09 (dd,J = 7.20，2.80Hz, 1H) ；13C NMR(10MHz,氯仿 _d) δ ppml5.06，27.78，66.74，69.27，82.97，100.87，107.38，114.67，117.74，126.06，126.93，128.94，131.36，131.73，157.87，162.90，163.39，177.77 ；LRMS (ESI)m/z305 [M+H]+ ;HRMS (ESI) C2tlH17O3 [M+H] + 计算值 305.1178，实验值 305.1181 ；
[0077]7-氟-2- (4-(戊-4-炔_1_基氧基)苯基)_4H_色烯_4_酮(Ac3):这种化合物(0.31g，89%)根据上述通用程序(i)从7-氟-2-(4-羟基苯基)-4H-色烯-4-酮(Ib)和5-氯戊-1-炔获得。1H NMR(400MHz,氯仿 _d) δ ppm 1.98-2.06 (m, 3H), 2.40-2.44 (m, 2Η)，4.14 (t, J = 6.00Hz, 2Η)，6.68 (s, 1Η)，6.99 (d, J = 8.80Hz, 2Η)，7.08-7.13 (m, 1Η)，7.20(dd, J = 9.20，2.40Hz, 1Η)，7.81 (t, J = 8.80Hz, 2Η)，8.20 (dd, J = 6.40，6.40Hz, 1Η) ；13CNMR(100MHz,氯仿-d) δ ppm 15.06，27.91，66.35，69.12，83.08，104.50，104.75，106.04，I
13.58，113.79，114.93，120.70，123.52，127.89，156.98，157.11，161.80，163.61，164.26，I66.79，177.27 ；LRMS (ESI) m/z 323 [M+H] + ;HRMS (ESI) C20H16FO3 [M+H] + 计算值 323.1083，实验值 323.1086 ；
[0078]5-(苯甲氧基)-7-(甲氧基甲氧基)-2- (4-(戊_4_炔_1_基氧基)苯基)_4H_色烯-4-酮(Ac4):这种化合物(0.11g，71%)根据上述通用程序⑴从5-(苯甲氧基)-2-(4-羟基苯基)-7-(甲氧基甲氧基)-4H-色烯-4-酮(Ic)和5-氯戊-1-炔获得。1H NMR (400MHz,氯仿 _d) δ ppm 1.97-2.03 (m, 3H)，2.38-2.42 (m, 2H)，3.47 (s, 3H)，4.09 (t,J = 6.00Hz, 2H)，5.20 (s, 2H), 5.21 (s, 2H)，6.47 (d, J=L 60Hz, 1H)，6.54 (s, 1H)，6.73 (d, J=1.60Hz, 1H) , 6.95 (d, J = 8.80Hz, 2H) , 7.26-7.40 (m, 3H) , 7.6 2 (d, J =
7.20Hz, 2H), 7.77 (d, J = 8.40Hz, 2H) ；13C NMR (10MHz,氯仿 _d) δ ppm 15.07，27.94，56.39，66.28，69.11，70.66，83.16，94.29，95.97，98.69，107.48，110.18，114.75，123.71，126.6
O,127.55，128.50，136.44，159.38，159.55，160.68，161.19，161.32，177.32 ；LRMS (ESI) m/z471 [M+H] + ;HRMS (ESI) C29H27O6 [M+H] + 计算值 471.1808，实验值 471.1815 ；
[0079]2- (4-(己-5-炔-1-基氧基)苯基)-6-甲基_4H_色烯_4_酮(Ac5):这种化合物(0.22g，73% )根据上述通用程序⑴从2-(4-羟基苯基)-6-甲基-4H-色烯-4-酮(Id)和 6-氯戊-1-炔获得。1H NMR(500MHz,氯仿-d) δ ppm 1.67-1.76(m, 2H)，1.86-1.96 (m, 2H)，1.97 (br.s.，I H)，2.23-2.31 (m, 2H)，2.41 (s, 3H)，4.02 (t, J=6.10Hz, 2H)，6.67 (s, I Η)，6.95 (d, J = 8.30Hz, 2H)，7.37-7.46 (m, 2H)，7.80 (d, J =
8.79Hz, 2H), 7.95 (s, 1H) ; 13CNMR (126MHz,氯仿 _d) δ ppm 18.06，20.81，24.87，28.05，67.49，68.72，83.81，105.82，114.77，117.60，123.45，123.87，124.88，127.80，134.61，134.86，154.32，161.67，163.15，178.31 ；LRMS (ESI) m/z 333 [M+H] + ;HRMS (ESI) C22H21O3 [M+H] + 计算值 333.1491，实验值 333.1495 ；
[0080](E)-3-(4-(己-5-炔-1-基氧基)苯基)-1-(2_羟基苯基)丙_2_烯_1_酮(Ac6):这种化合物(0.36g，75%)根据上述通用程序(ii)从4-(己-5-炔-1-基氧基)苯甲醛(2a)和 2’-羟基苯乙酮(3a)获得。1H NMR(400MHz,氯仿 _d) δ ppm 1.82-1.85 (m, 2H)，1.93-2.01 (m, 3H)，2.31-2.35 (m, 2H)，4.09 (t, J = 6.00Hz, 2H)，6.94-7.05 (m, 3H)，7.48-
7.62 (m, 2H)，7.64-7.95 (m, 2H), 12.97 (s, 1H) ；13C NMR (10MHz,氯仿 _d) δ ppm 18.16，24.97，28.15，67.71，68.84，83.96，114.74，114.99，117.52，118.59，118.75，120.14，127.26，12
9.54，130.57，131.99，136.13，145.40，161.50，163.56，193.67 ；LRMS (ESI) m/z 321 [M+H]+ ；HRMS (ESI) C21H21O3 [M+H] + 计算值 321.1491，实验值 321.1492 ；
[0081](E)-1-(5-乙基-2-羟基苯基)-3-(4-(己_5_炔_1_基氧基)苯基)丙-2-烯-1-酮(Ac7):这种化合物(0.23g，61 %)根据上述通用程序(ii)从4-(己-5-炔-1-基氧基)苯甲醛(2a)和2’-羟基-5’-乙基苯乙酮(3b)获得。1HNMR (400MHz,氯仿 _d) δ ppm 1.26 (t, J = 6.00Hz, 3H)，1.74-1.78 (m, 2H)，1.93-2.01 (m, 3Η)，2.63-2.69 (m, 2H)，4.09 (t, J = 6.00Hz, 2H)，6.94-6.98 (m, 3H)，7.35 (dd, J = 2.00，7.20Hz, 1H), 7.53-7.71 (m, 3H), 7.91 (d, J = 7.20Hz, 1H), 12.84 (s, 1H) ；13C NMR (100MHz,氯仿-d) δ ppm 15.94，18.17，24.99，28.17，67.52，68.84，83.99，114.96，117.61，118.41，11
9.82，127.32，128.17，130.57，134.37，136.09，145.18，161.45，161.69，193.59 ；LRMS (ESI)m/z 349 [M+H] + ;HRMS (ESI) C23H25O3 [M+H] + 计算值 349.1804，实验值 349.1806 ；
[0082](E)-3-(4-(己-5-炔-1-基氧基)苯基)-1_(2_羟基-5-甲基苯基)丙-2-烯-1-酮(AcS):这种化合物(0.25g，70 %)根据上述通用程序(ii)从4_(己-5-炔-1-基氧基)苯甲醛(2a)和2’ -羟基-5’ -甲基苯乙酮(3c)获得。1H 匪 R (400MHz,氯仿-d)Sppm 1.75-1.79 (m, 2H), 1.94-2.01 (m, 3H), 2.29 (t, J =
6.00Hz, 2H)，2.43 (s, 3H)，4.08 (t, J = 6.00Hz, 2H)，6.95 (d, J = 8.70Hz, 2H)，7.46 (d, J =15.40Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.70Hz, 2H), 7.89-8.01 (m, 3H), 13.45 (s, 1Η) ；13C NMR (100MHz,氯仿-d) δ ppm 18.15，20.36，24.96，28.12，67.59，68.80，83.92，115.08，118.08，124.29，126.85，128.00，130.93，131.02，136.09，137.23，146.98，154.72，161.95，192.34 ；LRMS (ESI) m/z 335 [M+H] + ;HRMS (ESI) C22H23O3 [M+H] + 计算值 335.1647，实验值 335.1649 ；
[0083](E)-3-(4-(己-5-炔-1-基氧基)苯基)-1_(2_羟基-4-甲基苯基)丙-2-烯-1-酮(Ac9):这种化合物(0.31g，65 %)根据上述通用程序(ii)从4_(己-5-炔-1-基氧基)苯甲醛(2a)和2’-羟基-4’-甲基苯乙酮(3d)获得。1HNMR (400MHz,氯仿 _d) δ ppm 1.74-1.78 (m, 2H)，1.93-2.01 (m, 3H)，2.30-2.34 (m, 2H)，2.39 (s, 3Η), 4.08 (t, J = 6.00Hz, 2Η), 6.78 (d, J = 7.20Hz, 1Η), 6.85 (s, 1Η), 6.97 (d, J=8.Ο0Hz, 2Η), 7.55 (d, J = 7.20Hz, 1Η), 7.64 (d, J = 8.00Hz, 2Η), 7.82 (d, J =7.20Hz, 1Η), 7.92 (d, J = 7.20Hz, 2Η), 13.02 (s, 1Η) ; 13CNMR (10MHz，氯仿 _d) δ ppm 18.15，21.97，24.98，28.16，67.52，68.75，83.94，114.97，117.74，117.94，118.65，120.05，127.40，129.41，130.46，144.86，147.77，161.38，163.75，193.11 ；LRMS (ESI) m/z 335 [M+H]+ ；HRMS (ESI) C22H23O3 [M+H] + 计算值 335.1647，实验值 335.1650 ；
[0084](E)-1-(4-氟-2-羟基苯基)-3- (4_ (己_5_炔_1_基氧基)苯基)丙_2_烯_1_酮(AclO):这种化合物(0.33g，69% )根据上述通用程序(ii)从4-(己-5-炔-1-基氧基)苯甲醛(2a)和2’-羟基-5’-氟苯乙酮(3e)获得。1H NMR(400MHz,氯仿_d) δ ppm
1.74-1.78 (m, 2H)，1.93-2.01 (m, 3H)，2.30-2.33 (m, 2H)，4.07 (t, J = 6.00Hz, 2Η)，6.64-6.73 (m, 4Η)，6.94 (d, J = 8.00Hz, 2Η)，7.47 (d, J = 15.40Hz, 1Η)，7.63 (d, J = 8.Ο0Hz, 2Η)，7.89-7.96 (m, 2Η)，13.37 (s, 1Η) ；13C NMR (10MHz,氯仿 _d) δ ppm 18.15，24.94，28.14，67.55，68.81，83.95，104.98，105.21，106.86，107.08，114.74，115.01，117.20，127.11，130.61，131.74，131.86，145.66，161.60，166.02，166.06，166.20，192.49 ；LRMS (ESI) m/z 339 [M+H]+ ；HRMS (ESI) C21H2tlFO3 [M+H] + 计算值 339.1396，实验值 339.1398 ；
[0085]2-(4-(戊-4-炔-1-基氧基)苯基)喹唑啉-4(3H)_酮(Acll):在150°C下向充分搅拌的4-(戊-4-炔-1-基氧基)苯甲醛(2b)和2-氨基苯酰胺(4)于DMSO中的溶液中加入催化量的碘。将反应混合物进一步加热3小时。当TLC指示起始物质完全消耗时，将反应混合物倾入含有水冰浴温度的烧杯中。通过抽吸过滤来收集所形成的白色沉淀。白色固体用正己烷洗涤且从MeOH中进行结晶，获得所需化合物Acll (0.33g，65% )。1H 匪R (400MHz, DMS0-d6) δ ppm 1.87-1.93 (m, 2H), 2.31-2.35 (m, 2Η), 2.81 (s, 1Η), 4.10 (t, J = 6.Ο0Hz, 2Η)，7.06 (d, J = 8.80Hz, 2Η)，7.46 (dd, J = 7.60，7.60Hz, 1Η)，7.68 (d, J=7.60Ηζ, I H)，7.78 (dd, J = 7.60，7.60Ηζ, I H)，8.10-8.17 (m, 3Η), 12.38 (s, 1Η)；13CMffi(100MHz，DMS0-d6) δ ppm 14.87，28.03，66.67，72.09，83.98，114.82，121.08，125.26，126.23，126.50，127.63，129.89，134.91，152.30，161.51，162.77 ；LRMS(ESI)m/ζ:305 [M+H] + ;HRMS (ESI) C19H17N2O2 [M+H] + 计算值 305.1290，实验值 305.1296 ；
[0086]7-(己-5-炔-1-基氧基)-2-苯基-4H-色烯-4-酮(Acl2):这种化合物(0.13g，69% )根据上述通用程序⑴从7-羟基-2-苯基-4H-色烯-4-酮(Ie)和6-氯戊-1-炔获得。1HNMR (500MHz,氯仿 _d) δ ppm 1.71-1.81 (m, 3H), 1.95-2.04 (m, 3Η), 2.31 (td, J =7.08，2.44Hz, 2Η)，4.12 (t, J = 6.34Hz, 3Η)，6.77 (s, 1Η)，6.95-7.01 (m, 2Η)，7.49-7.55 (m,3Η), 7.89-7.94 (m, 2Η), 8.13 (d, J = 8.79Hz, 1Η) ；13C NMR(101MHz,氯仿-d) Sppm 18.01，24.79，27.87，67.91，68.81，83.71，100.78，107.34，114.58，117.63，125.99，126.83，128.86，131.25，131.72，157.81，162.78，163.44，177.63 ；LRMS (ESI) m/z 319 [M+H]+ ；HRMS (ESI)C21H19O3 [M+H] + 计算值 319.1334，实验值 319.1328。
[0087] 2-苯基-7-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基)_4H_色烯_4_酮(Acl3):向圆底烧瓶中馈入相应7-羟基黄酮Ie (0.021mol，5g)、2_溴乙醇(0.022mol, 1.6ml)、K2CO3(0.021mol,2.9g)和无水DMF(20ml)。将反应混合物在回流温度下搅拌3小时。将反应混合物倾入含有冰水的烧杯中，接着进行过滤并洗涤(50ml己烷)。此物质(3.2g,54% )不经进一步纯化即使用。接着将所获得的化合物(7.lmmol，2g)溶解于无水THF(1ml)中。在室温下向此溶液中，将过量氢化钠(8.5mmol，0.2g)和炔丙基溴(80%于二甲苯中)(7.1mmol,0.79ml)溶液在0°C下相继加入持续I小时。接着在室温下搅拌反应混合物3小时。当TLC指示起始物质完全消耗时，将反应混合物倾入含有水的分液漏斗中。混合物用DCM连续萃取。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到棕色粗反应混合物。通过硅胶急骤柱色谱用丙酮/DCM(1:10)作为洗脱剂进行纯化，得到标题化合物(1.7g，75%)。1HNMR (500MHz,氯仿 _d) δ ppm2.49 (t, J = 2.44Hz, 1H)，3.97-3.99 (m, 2H)，4.24-4.33 (m, 4H)，
6.78 (s, 1H)，7.00 (d, J = 2.44Hz, 1H)，7.03 (dd, J = 8.79，2.44Hz, 1H)，7.49-7.57 (m, 3H)，
7.88-7.94 (m, 2H), 8.15 (d, J = 8.79Hz, 1H) ；13C NMR(101MHz,氯仿 _d) δ ppm 58.47, 67.68，74.92，79.13，101.01，107.30，114.56，117.83，125.95，126.84，128.81，131.24，131.62，I57.65，162.79，163.06，177.50 ；LRMS (ESI) m/z 321 [M+H] + ;HRMS (ESI) C2tlH17O4 [M+H] + 计算值321.1127，实验值 321.1121。
[0088]2-(2-( 二(丙-2-炔-1-基)氨基)乙氧基)乙醇(Acl4):在室温下向2-(2-氨基乙氧基)乙醇(0.048mol，4.74ml)于丙酮(25ml)中的溶液中加入过量炔丙基溴(0.1mol, 11.6ml)溶液。接着将反应混合物在室温下搅拌12小时，蒸发得到棕色粗反应混合物。在蒸发之后获得油性物质。通过硅胶急骤柱色谱用丙酮/DCM(1:3)作为洗脱剂进行纯化，得到标题化合物(0.012mol,2.2g,25% ) ? 1H NMR(500MHz,氯仿_d) δ ppm
2.23 (br.s.，2H)，2.78 (t, J = 5.12Hz, 2H)，3.49 (s, 4H)，3.54-3.59 (m, 2H)，3.62 (t, J =5.37Hz, 2H), 3.66-3.73 (m, 2H) ；13C NMR (125MHz,氯仿 _d) δ ppm 42.45，52.12，61.68，68.69，72.30，73.36，78.36 ;LRMS (ESI) CltlH16NO2 计算值 182，实验值 m/z 182 [M+H]+。
[0089]N-苯甲基-N，N- 二(丙-2-炔_1_基)胺(Acl5):这种化合物是商业上可获得的。
[0090]7-(2-(苯甲基(丙-2-炔-1-基)氨基)乙氧基)-2_苯基-4H-色烯-4-酮(Ac 16):在室温下向充分搅拌的7-羟基黄酮Ie (2.9mmol,0.7g)、2_(苯甲基(丙-2-炔-1-基)氨基)乙醇(2.9mmol,0.56g)和PPh3(0.77g，I当量)于THF(1ml)中的溶液中逐滴加入DIAD (0.58ml, I当量)。接着将反应混合物搅拌12小时。将反应混合物蒸发，得到棕色粗反应混合物。通过硅胶急骤柱色谱用丙酮/DCM(1:50)作为洗脱剂进行纯化，得到标题化合物(0.42g, 35% ) ο 1H NMR(500MHz,氯仿 _d) δ ppm 2.30 (t, J = 2.20Hz, 1H)，3.07 (t, J =
5.61Hz, 2H)，3.48 (d, J = 2.44Hz, 2H)，3.79 (s, 2H) ,4.21(t, J = 5.61Hz, 2H)，6.77 (s, 1H)，6.95-7.01 (m, 2H)，7.27-7.29 (m, 1H)，7.31-7.35 (m, 2H)，7.37-7.40 (m, 2H)，7.50-7.55 (m, 3H),7.88-7.93 (m, 2H), 8.13 (d, J = 8.78Hz, 1H) ; 13CNMR (101MHz,氯仿 _d) δ ppm 42.61, 51.72，58.53，67.22，70.04，101.11，107.54，114.72，117.93，126.16，127.07，127.46，128.42，12
8.98，129.12，131.39，131.89，157.93，163.03，163.26，177.82 ；LRMS (ESI) m/z 410 [M+H]+ ；HRMS (ESI) C27H24NO3 [M+H] + 计算值 410.1756，实验值 410.1750。
[0091]三(丙-2-炔-1-基)胺(Acl7):这种化合物是商业上可获得的。
[0092]合成Azl到Az 15的通用程序(流程2).
[0093]⑴向圆底烧瓶中馈入4’-羟基黄酮(la、d、f、g、h)或7-羟基黄酮(Ie) (I当量)、2_溴乙醇或2-(2-氯乙氧基)乙醇或2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇(1.2当量)、K2CO3 (1.5当量)和DMF(3mL/当量)。在回流温度下搅拌反应混合物。当TLC指示起始物质完全消耗时，将反应混合物倾入含有水的分液漏斗中。混合物用DCM连续萃取。如果混合物不可分成两层，那么加入少量IM HCl0合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到棕色粗反应混合物。通过硅胶急骤柱色谱用丙酮/DCM作为洗脱剂进行纯化，得到所需产物。
[0094](ii)接着，将从以上⑴获得的羟基化黄酮在(TC下溶解于DCM(lml/当量)和三乙胺(ImL/当量)的溶液中。接着，逐滴加入甲磺酰氯(1.2当量)并在室温下搅拌I小时。当TLC指示起始物质完全消耗时，所形成的白色沉淀通过穿过短硅胶垫来去除，得到甲磺酸化产物，所述甲磺酸化产物对于接下来的步骤足够纯。向甲磺酸盐于ACN(2ml/当量)中的溶液中加入过量叠氮化钠(3当量)。将溶液在80°C下保持回流15小时。所得溶液用水处理并接着用DCM萃取。合并的有机层经MgSO4干燥并在减压下浓缩，得到浅黄色粘性液体。通过硅胶急骤柱色谱用丙酮/DCM作为洗脱剂进行纯化，得到所需产物。
[0095]2-(4-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)苯基)_4H_色烯_4_酮(Azl):这种化合物(0.62g，45 % )根据上述通用程序⑴和(ii)从2-(4-羟基苯基)_4H_色稀-4-丽(Ia)和2_(2_氣乙氧基)乙醇获得。1H NMR(400MHz,氣仿-d) δ ppm 3.32 (t, J = 4.80Hz, 2H) , 3.65 (t, J = 4.80Hz, 2Η) , 3.77 (t, J=4.80Hz, 2Η) , 4.06 (t, J = 4.8 O H ζ，2 H)，6.5 6 ( s，I H)，6.8 6 ( d，J =
8.80Hz, 2Η), 7.26 (dd, J = 7.60, 7.20Hz, 1Η), 7.37 (d, J = 8.40Hz, 1Η), 7.53 (ddd, J =
7.60，7.20，1.60Hz, 1Η)，7.68 (d, J = 8.80Hz, 2Η)，8.05 (dd, J = 7.60, 1.60Ηζ, I H)；13CNMR(10MHz，氯仿 _ d) δ ppm 50.54，67.46，69.38，70.17，105.83，114.85，117.87，123.69，123.83，124.92，125.32，127.76，133.46，155.91，161.40，163.05，178.03 ；LRMS (ESI) m/z352 [M+H] + ;HRMS (ESI) C19H18N3O4 [M+H] + 计算值 352.1297，实验值 352.1295 ；
[0096]2-(4-(2-(2-(2-置氣基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4H-色稀-4-丽(Az2):这种化合物(0.36g，41%)根据上述通用程序⑴和(ii)从2-(4-羟基苯基)-4H-色稀-4-丽(Ia)和2-(2-(2-氣乙氧基)乙氧基)乙醇获得。1H NMR (500MHz,氣仿-d) δ ppm
3.40 (t, J = 5.12Hz, 2H)，3.68-3.73 (m, 4H)，3.74-3.78 (m, 2H)，3.91-3.93 (m, 2H)，4.20-4.25 (m, 2H)，6.75 (s, 1H)，7.05 (d, J = 10Hz, 2H)，7.41 (t, J = 7.57Hz, 1H)，7.55 (d, J = 8.30Hζ, 1H), 7.66-7.71 (m, 1H), 7.88 (d, J = 10Hz, 2H), 8.23 (d, J = 7.81Hz, 1H) ；13C NMR (126MHz,氯仿-d) δ ppm 50.56，67.54，69.51，69.98，70.62，70.79，106.01，114.93，117.83，123
?78，123.97，124.92，125.46，127.81，133.42，156.01，161.51，163.19，163.20，178.15 ；LRMS (ESI) m/z 396 [M+H]+, 418[M+Na]+ ;HRMS (ESI) C21H22N3O5 [M+H] + 计算值 396.1559，实验值396.1544 ;C21H21N305Na[M+Na]+ 计算值 418.1379，实验值 418.1378。
[0097]2-(4-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)_6_甲基_4H_色烯_4_酮(Az3):这种化合物(0.21g，36%)根据上述通用程序(i)和(ii)从2-(4-羟基苯基)-6-甲基_4H-色稀-4-丽(Id)和2-(2-(2-氣乙氧基)乙氧基)乙醇获得。1H NMR (500MHz,氣仿-d) δ ppm 2.33 (s, 3H)，3.30 (t, J = 4.88Hz, 2H)，3.58-3.64 (m, 4H)，3.64-3.69 (m, 2H)，3.80 (t, J = 4.64Hz, 2H)，4.09 (t, J = 4.64Hz, 2H)，6.57 (s, 1H)，6.90 (d, J = 10.0Hz, 2H)，
7.26-7.38 (m, 2H),7.71(d, J = 10.0Hz, 2H), 7.85 (s, 1H) ；13C NMR (126MHz,氯仿 _d) δ ppm20.58，50.38，67.35，69.32，69.77，70.41，70.59，76.73，76.99，77.25，105.57，114.69，117.40，123.19，123.82，124.57，127.52，134.39，134.61，154.04，161.25，162.77，177.93。LRMS (ESI) m/z 410 [M+H]+, 432[M+Na]+ ;HRMS (ESI) C22H24N3O5 [M+H] + 计算值 410.1716，实验值410.1709 ;C22H23N305Na[M+Na]+ 计算值 432.1535，实验值 432.1544。
[0098]2- (4- (2- (2- (2-置氣基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)_6~氣-4H-色烯-4-酮(Az4):这种化合物(0.23g，31 % )根据上述通用程序⑴和(ii)从6-氟-2-(4-羟基苯基)-4H-色烯-4-酮(If)和2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇获得。1H NMR (500MHz,氯仿 _d) δ ppm 3.39 (t, J = 4.88Hz, 2H), 3.67-3.72 (m, 4H)，3.74-3.78 (m, 2H)，3.90-3.93 (m, 2H)，4.20-4.24 (m, 2H)，6.73 (s, I Η)，7.05 (d, J =
10.0Hz, 2Η)，7.40 (ddd, J = 9.03，7.57，2.93Ηζ, I H)，7.53-7.58 (m, I H)，7.84-7.89 (m, 3H) ；13C NMR (126ΜΗζ,氯仿 _d) δ ppm 50.35, 67.37, 69.25, 69.72, 69.73, 70.37, 70.55,104.91, 110.07 (d, J = 23.25Hz, C5), 114.72, 119.74 (d, J = 8.25Hz, C8), 121.22 (d, J=25.63Hz, C7), 123.28, 124.72 (d, J = 7.25Hz, C10), 127.56, 151.90 (d, J =
1.25Hz, C9), 159.64 (d, J = 244.88Hz, C6), 161.46, 163.15, 176.85 (d, J = 2.50Hz, C4)；LRMS (ESI)m/z 414[M+H]+, 436[M+Na]+ ；HRMS (ESI) C21H21N3O5F[M+H]+ 计算值 414.1465，实验值 414.1472 ;C21H2tlN3O FNa [M+Na]+ 计算值 436.1285，实验值 436.1299。
[0099]2-(4-(2-(2-(2-置氣基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-3-(苯甲氧基)-4H-色烯-4-酮(Az5):这种化合物(0.17g，32%)根据上述通用程序⑴和(ii)从3_(苯甲氧基)-2-(4-羟基苯基)-4H-色烯-4-酮(Ig)和2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇获得。1H NMR (500MHz,氯仿 _d) δ ppm 3.29 (t, J = 4.88Hz, 2H)，3.56-3.64 (m, 4H)，3.64-3
?69 (m, 2H)，3.77-3.83 (m, 2H)，4.06-4.12 (m, 2H)，5.05 (s, 2H)，6.89 (d, J = 10.0Hz, 2H)，7
?17-7.24 (m, 3H)，7.28 (t, J = 7.50Hz, 1H)，7.32-7.34 (m, 2H)，7.38 (d, J = 8.30Hz, 1H)，7.50-7.55 (m, 1H), 7.95 (d, J = 10.0Hz, 2H), 8.18 (d, J = 10.0Hz, 1H) ；13C NMR (126MHz,氯仿-d) δ ppm 50.22，67.12，69.19，69.62，70.24，70.42，73.39，113.94，117.49，122.92，123.70，124.10，125.12，127.65，127.80，128.33，130.01，132.79，136.43，138.83，154.63，155.63，160.27，174.31 ；LRMS (ESI) m/z 502 [M+H]+，524[M+Na]+ ;HRMS (ESI) C28H28N3O6 [M+H]+ 计算值 502.1978，实验值 502.1989 ;C28H27N306Na[M+Na]+ 计算值 524.1798，实验值 524.1797。
[0100]2-(4-(2-(2-(2-置氣基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-6,8- 二氣-4H-色烯-4-酮(Az6):这种化合物(0.25g，34%)根据上述通用程序⑴和(ii)从6，8-二氯-2-(4-羟基苯基)-4H-色烯-4-酮(Ih)和2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙醇获得。1H NMR (500MHz,氯仿 _d) δ ppm 3.39 (t, J = 5.0Hz, 2Η)，3.67-3.73 (m, 4Η)，3.74-3.78 (m, 2Η)，3.92 (t, J = 5.0Hz, 2Η)，4.23 (t, J = 5.0Hz, 2Η)，6.77 (S，I H)，7.06 (d, J=9.0Hz, 2Η), 7.72 (dd, J = 2.44, 0.98Hz, 1Η), 7.93 (d, J = 9.0Hz, 2Η), 8.09 (d, J =
2.44，1Η) ；13C NMR(101MHz,氯仿 _d) δ ppm 50.73，67.78，69.65，70.14，70.79，70.97，105
?80，115.31，123.33，123.91，124.34，125.78，128.23，130.72，133.56，150.45，162.17，16
3.51，176.35 ；LRMS (ESI)m/z464[M+H]+, 486[M+Na]+ ；HRMS (ESI) C21H20N3O5Cl2 [M+H]+ 计算值464.0780，实验值 464.0783 ;C21H19N3O5NaCl2 [M+Na]+ 计算值 486.0599，实验值 486.0598。
[0101]2-(4-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)苯基)-6-氟-4H-色烯-4-酮(Az7):这种化合物(0.18g,37% )根据上述通用程序⑴和(ii)从6-氟-2-(4-羟基苯基)-4!1-色烯-4-酮(If)和 2-(2-氯乙氧基)乙醇获得。1H NMR(500MHz,氯仿 _d) δ ppm 3.42 (t, J=4.88Hz, 2H)，3.73-3.79 (m, 2H)，3.88-3.93 (m, 2H)，4.19-4.24 (m, 2H)，6.71 (s, 1H)，7.03(d, J = 9.0，2H)，7.35-7.42 (m, 1H)，7.54 (dd, J = 9.03，4.15Hz, 1H)，7.81-7.88 (m, 3H)；13C 丽R(126MHz,氯仿-d) δ ppm 50.47, 67.43, 69.31, 70.09, 105.10, 110.22 (d, J = 23.7 5Hz, C5) , 114.85, 119.84 (d, J = 8.25Hz，C8)，12 I.37 (d, J =25.13Hz, C7), 123.53, 124.83 (d, J = 7.83Hz, C1), 127.72, 152.04, 159.27 (d, J = 244.88Hz, C6), 161.48，163.29，177.07，177.09 ;LRMS (ESI) m/z 370[M+H]+ ；HRMS (ESI)C19H17N3O4F [M+H]+ 计算值 370.1203，实验值 370.1218。
[0102]3-(((2-(4-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)苯基)_4_氧代_4H_色烯_3_基)氧基)甲基)苯甲酸甲酯(Az8):圆底烧瓶以3-(苯甲氧基)-2-(4-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)苯基)-4H-色烯-4-酮(5a) (5mmol,2.2g)、催化量的Pd(OH)2和THF/MeOH(Iil-1Oml)馈入。反应混合物在H2气氛下在气囊压力和室温下剧烈搅拌14小时。当TLC指示起始物质完全消耗时，通过抽吸过滤来去除木炭。浅黄色滤液通过穿过短硅胶垫来纯化，得到脱苄基产物3-羟基-2-(4-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)苯基)-4H-色烯-4-酮(6a) (76%，1.3g)。向圆底烧瓶中馈入脱苄基产物6a 3_(溴甲基)苯甲酸甲酯(4mmol, 0.92g) > K2CO3 (4mmol, 0.55g)和丙酮(10ml)。将反应混合物在回流温度下搅拌12小时。当TLC指示起始物质完全消耗时，将溶剂旋转蒸发到干燥。用丙酮/DCM作为洗脱剂通过硅胶急骤柱色谱进行纯化，得到3-(((2-(4-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)苯基)-4_氧代-4H-色烯-3-基)氧基)甲基)苯甲酸甲酯(7a)(86%，1.6g)。标题化合物Az8(0.29g,57% )根据上述通用程序(ii)从 7a(lmmol)获得。1H NMR(500MHz,氯仿 _d)δ ppm3.44 (t, J = 4.88Hz, 2H)，3.76-3.79 (m, 2H)，3.89 (s, 3H)，3.90-3.94 (m, 2H)，4.20-4
?25 (m, 2H)，5.15 (s, 2H)，6.99 (d, J = 8.79Hz, 2H)，7.35 (t, J = 7.81Hz, 1H)，7.41 (t, J =
7.57Hz, 1H)，7.52 (d, J = 8.30Hz, 1H)，7.59 (d, J = 7.32Hz, 1H)，7.65-7.71 (m, 1H), 7.93 (d, J = 7.81Hz, 1H), 7.96-8.01 (m, 3H), 8.29 (dd, J = 7.81, 1.46Hz, 1H) ; 13CNMR (101MHz,氯仿-d) δ ppm 50.73，52.03，67.52，69.64，70.31，73.36，114.41，117.93，123.46，124.19，I24.65，125.77，128.29，129.27，129.81，130.13，130.54，133.24，133.30，137.18，139.07，I55.22，156.51，160.62，166.82，174.87 ；LRMS (ESI) m/z 516 [M+H]+, 538[M+Na]+ ；HRMS (ESI)C28H26N3O7 [M+H]+ 计算值 516.1771，实验值 516.1783 ；C28H24N3O7Na [M+Na]+ 计算值 538.1590，实验值538.1583。
[0103]3-(((2-(4-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4-氧代-4H-色烯-3-基)氧基)甲基)苯甲酸甲酯(Az9):标题化合物Az9(0.62g，37% )根据上述用于合成Az8的程序从3-(苯甲氧基)-2- (4- (2- (2- (2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯基)-4H-色烯-4-酮(5b) (3mmol, 1.5g)获得。1H NMR(500MHz,氯仿 _d) δ ppm
3.40 (t, J = 4.39Hz, 2H)，3.67-3.74 (m, 5H)，3.74-3.79 (m, 2H)，3.89 (s, 3H)，3.92 (t, J =
4.15Hz, 2H)，4.22 (t, J = 4.15Hz, 2H)，5.15 (s, 2H)，6.98 (d, J = 8.79Hz, 2H)，7.35 (t, J =
7.81Hz, 1H)，7.42 (t, J = 7.57Hz, 1H)，7.52 (d, J = 8.79Hz, 1H)，7.59 (d, J = 6.34Hz, 1H)，
7.65-7.70 (m, 1H)，7.93 (d, J = 7.50Hz, 1H)，7.96-8.01 (m, 3H)，8.29 (d, J = 8.30Hz, 1H)；13C NMR(101MHz,氯仿 _d) δ ppm 50.71, 52.04, 67.55, 69.71, 70.12, 70.78, 70.94, 73.35，114.41，117.92，123.36，124.20，124.64，125.78，128.29，129.28，129.80，130.14，130.52，133.23，133.30，137.19，139.07，155.23，156.53，160.73166.82，174.87 ；LRMS (ESI)m/Z 560[M+H]+，582[M+Na]+ ；HRMS(ESI)C30H30N3O8[M+H]+ 计算值 560.2033，实验值 560.2028 ；C3CiH29N3O8Na [M+Na]+ 计算值 582.1852，实验值 582.1831。
[0104]2-(4-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)苯基)-3-(苯甲氧基)-4H_色烯-4-酮(AzlO):这种化合物(0.23g，31 % )根据上述通用程序⑴和(ii)从3-(苯甲氧基)-2-(4-羟基苯基)-4H-色烯-4-酮(Ig)和2-(2-氯乙氧基)乙醇获得。1H NMR(500MHz,氯仿-d) δ ppm3.43-3.45 (m, 2H)，3.77-3.79 (m, 2H)，3.91-3.93 (m, 2H)，4.22-4.24 (m, 2H)，
5.12 (s, 2H)，6.99 (d, J = 8.79Hz, 2H)，7.26-7.28 (m, 3H)，7.34-7.44 (m, 3H)，7.52 (d, J =8.30Hz, 1H)，7.67 (t, J = 7.81Hz, 1H)，8.04 (d, J = 8.79Hz, 2H)，8.29 (d, J = 7.81Hz, 1H)；13CNMR (126MHz,氯仿 _d) δ ppm 50.49，67.34，69.39，70.09，73.70，114.18，117.72，123.34，123.97，124.36，125.45，127.88，128.03，128.60，130.31，133.03，136.62，139.10，154.93，155.97，160.39，174.68 ；LRMS (ESI) m/z 458 [M+H]+，480[M+Na]+ ；HRMS (ESI)C26H24N3O5 [M+H] + 计算值 458.1716，实验值 458.1738 ；C26H23N3O5Na [M+Na]+ 计算值 480.1535，实验值480.1527。
[0105]7-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-2-苯基-4H-色烯-4-酮(Azll):这种化合物(0.12g，32%)根据上述通用程序⑴和(ii)从7-羟基-2-苯基-4H-色烯-4-酮(Ie)和 2-(2-氯乙氧基)乙醇获得。1H NMR(500MHz,氯仿-d) δ ppm 3.43 (t, J =
5.0Hz, 2H)，3.78 (t, J = 5.0Hz, 2H)，3.93 (t, J = 5.0Hz, 2H)，4.27 (t, J = 5.0Hz, 2H)，6.79(s, 1H)，6.99-7.04 (m, 2H)，7.49-7.56 (m, 3H)，7.88-7.93 (m, 2H)，8.14 (d, J = 8.30Hz, 1H)；13C NMR(101MHz,氯仿 _d) δ ppm 50.32，67.68，69.00，69.98，100.79，106.92，114.37，117.52，125.69，126.49，128.60，131.06，131.27，157.39，162.50，162.87，177.25 ；LRMS (ESI)m/z352 [M+H] + ;HRMS (ESI) C19H18N3O4 [M+H] + 计算值 352.1297，实验值 352.1288。
[0106]7-(2-(2-(2-置氣基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-苯基-4H-色稀-4-丽(Azl2):这种化合物(0.14g,38% )根据上述通用程序⑴和(ii)从7-羟基-2-苯基-4H-色稀-4-丽(Ie)和2-(2-(2-氣乙氧基)乙氧基)乙醇获得。1H NMR (500MHz,氣仿-d) δ ppm3.39 (t, J = 4.88Hz, 2H)，3.67-3.72 (m, 4H)，3.75-3.78 (m, 2H)，3.93-3.95 (m, 2H)，4.26 (t,J = 5.0Hz, 2H)，6.77 (s, 1H)，6.98-7.04 (m, 2H)，7.49-7.56 (m, 3H)，7.88-7.93 (m, 2H)，8.13 (d, J = 8.78Hz, 1H) ；13C NMR(101MHz,氯仿 _d) δ ppm 50.53，67.95，69.33，69.96，70.59，70.79，101.00，107.28，114.64，117.73，125.97，126.80，128.83，131.25，131.61，157.70，162.86，163.22，177.63 ；LRMS (ESI) m/z 396 [M+H] + ；HRMS (ESI) C21H22N3O5 [M+H]+ 计算值396.1559，实验值 396.1544。
[0107]7-(2-叠氮基乙氧基)-2-苯基-4H-色烯-4-酮(Azl3):这种化合物(0.llg，29% )根据上述通用程序⑴和(ii)从7-羟基-2-苯基-4H-色烯-4-酮(Ie)和2-溴乙醇获得。1H NMR(500MHz,氯仿-d) δ ppm 3.68 (t, J = 4.88Hz, 2H), 4.26 (t, J = 4.64Hz, 2H)，6.74-6.80 (m, 1H)，6.96-7.05 (m, 2H)，7.47-7.56 (m, 3H)，7.85-7.93 (m, 2H)，8.11-8.19 (m, 1H) ；13C NMR(101MHz,氯仿-d) Sppm 49.91, 67.48, 101.38, 107.52, 114.37, 118.30，126.15，127.31，129.0，131.47，131.74，157.80，162.64，163.15，177.70 ；LRMS (ESI) m/z308 [M+H] + ;HRMS (ESI) C17H14N3O3 [M+H] + 计算值 308.1035，实验值 308.1037。
[0108]2-(4-(2-((2-叠氮基乙基)(苯甲基)氨基)乙氧基)苯基)-4H_色烯-4-酮(Az 14):在室温下向充分搅拌的4’-羟基黄酮la(3mmol, 0.71g)、N_苯甲基-N, N-二(2_轻基乙基)胺(3mmol,0.6g)和PPh3(3mmol,0.79g)于THF(20ml)中的溶液中逐滴加入DIAD(3mmol,0.59ml)。接着，将反应混合物在室温下搅拌12小时。当TLC指示起始物质完全消耗时，蒸发反应混合物，得到棕色粗反应混合物。用丙酮/DCM(1:10)作为洗脱剂通过硅胶急骤柱色谱进行纯化，得到中间物化合物2-(4-(2-(苯甲基(2-羟基乙基)氨基)乙氧基)苯基)-4H-色烯-4-酮(0.13g,10.4% )0标题化合物Az 14 (64.9mg，47% )根据上述通用程序(ii)从所述中间物化合物获得。1H NMR(500MHz,氯仿_d) δ ppm 2.91(br.s.，2H)，3.03 (br.s.，2H)，3.32 (br.s.，2H)，3.80 (br.s.，2H)，4.15 (br.s.，2H)，6.77 (s, IH)，6.92-6.96 (m, 2H)，7.27-7.37 (m, 5H)，7.49-7.56 (m, 3H)，7.89-7.93 (m, 2H)，8.13 (d, J =8.30Hz, 1H) ；LRMS(ESI)m/z 441 [M+H]+ ；HRMS(ESI)C26H25N4O3[M+H]+ 计算值 441.1927，实验{t 441.1909。
[0109]7-(2-((2-叠氮基乙基)(苯甲基)氨基)乙氧基)-2-苯基-4H-色烯-4-酮(Azl5):标题化合物Azl5(96mg，42% )根据上述用于合成Acl4的程序从7-羟基黄酮Ie 获得。1H NMR(500MHz,氯仿 _d) δ ppm 2.90 (br.s.，2H)，3.00 (br.s.，2H)，3.32 (br.s.，2H)，3.79 (s, 2H)，4.11 (br.s.，2H)，6.75 (s, 1H)，6.98 (m, J = 8.79Hz, 2H)，7.26-
7.44 (m, 6H)，7.54-7.58 (m, 1H)，7.66-7.71 (m, 1H)，7.84-7.91 (m, 2H)，8.23 (dd, J =
7.81，1.46Hz, 1H) ；LRMS (ESI)m/z 441 [M+H]+ ;HRMS (ESI) C26H25N4O3 [M+H] + 计算值 441.1927，实验值441.1908。合成反式-三唑桥联类黄酮二聚体(流程3和表1)
[0110]合成由Cu(I)催化的反式-三唑桥联类黄酮二聚体的通用程序.
[0111]将根据文献66制备的Cu(PPri3)3Br催化剂(MW = 929) (0.05mmol)加入含有叠氮化物(Az 0.1mmol)和炔烃(Ac,0.1mmol)的 THF 溶液(2mL)中。对于 Acl4_ 或 Acl5,加入0.2mmol叠氮化物。对于Acl7,加入0.3mmol叠氮化物。将反应混合物在回流条件下搅拌过夜。溶剂通过蒸发来去除，且所得粗混合物展示出产物仅为反式区域异构物，除了Acl3Az4(反式:顺式=97:3)和Acl3Az7(反式:顺式=85:15)。粗残余物使用10-50%丙酮/CH2Cl2的梯度通过硅胶急骤色谱纯化，得到所需化合物。
[0112]
【权利要求】
1.一种式I化合物， 类黄酮-连接基团-(类黄酮)n
I 其中 所述类黄酮选自由以下组成的群组:查耳酮、黄酮、黄酮醇、黄烷酮、花青素和异黄酮； η为I或2 ;且 所述连接基团为具有至少一个三唑桥联单元的基团。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述连接基团具有I到10个三唑桥联单元。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中所述连接基团具有I到5个三唑桥联单元。
4.根据权利要求3所述的化合物，其中所述连接基团具有I到3个三唑桥联单元。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中所述至少一个三唑桥联单元进一步包含至少一个聚乙二醇单元。
6.一种式II化合物,其包含含有乙炔基团的类黄酮: 类黄酮-连接基团- CCH
II 其中 所述类黄酮选自由以下组成的群组:查耳酮、黄酮、黄酮醇、黄烷酮、花青素和异黄酮；且 所述连接基团为具有至少一个碳原子的基团。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中所述连接基团选自由以下组成的群组:亚烷基、具有多个乙二醇单元的基团、具有多个丙二醇单元的基团、具有多个氨基烷基单元的基团以及其组合。
8.—种式III化合物，其包含含有叠氮化物基团的类黄酮: 类黄酮-连接基团-N3
III
其中 所述类黄酮选自由以下组成的群组:查耳酮、黄酮、黄酮醇、黄烷酮、花青素和异黄酮；且 所述连接基团为具有至少一个碳原子的基团。
9.根据权利要求8所述的化合物，其中所述连接基团选自由以下组成的群组:亚烷基、具有多个乙二醇单元的基团、具有多个丙二醇单元的基团、具有多个氨基烷基单元的基团以及其组合。
10.一种合成如权利要求1中所定义的式I化合物的方法，其包含使如权利要求6中所定义的式II化合物与如由权利要求8所定义的式III化合物通过催化1，3-偶极环加成进行反应。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述催化1，3-偶极环加成为区域选择性的。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述催化1，3_偶极环加成为Cu(I)催化的或Ru催化的。
13.—种减少基于P-糖蛋白的多药耐药的方法，其包括投与有效量的如权利要求1中所定义的式I化合物或如权利要求6中所定义的式II化合物或如权利要求8中所定义的式III化合物的步骤。
14.一种减少基于MRPl的多药耐药的方法，其包括投与有效量的如权利要求1中所定义的式I化合物或如权利要求6中所定义的式II化合物或如权利要求8中所定义的式III化合物的步骤。
15.一种减少基于BCRP的多药耐药的方法，其包括投与有效量的如权利要求1中所定义的式I化合物或如权利要求6中所定义的式II化合物或如权利要求8中所定义的式III化合物的步骤。
16.一种减少由ABC转运蛋白过度表达引起的药物耐药的方法，其包括投与有效量的如权利要求1中所定义的式I化合物或如权利要求6中所定义的式II化合物或如权利要求8中所定义的式III化合物的步骤。
17.一种治疗由ABC转运蛋白过度表达引起的药物耐药癌症的方法，其包括投与有效量的如权利要求1中所定义的式I化合物或如权利要求6中所定义的式II化合物或如权利要求8中所定义的式III化合物的步骤。
18.一种有效量的如权利要求1中所定义的式I化合物或如权利要求6中所定义的式II化合物或如权利要求8中所定义的式III化合物的用途，其用于制造供减少基于P-糖蛋白的多药耐药用的药物。
19.一种有效量的如权利要求1中所定义的式I化合物或如权利要求6中所定义的式II化合物或如权利要求8中所定义的式III化合物的用途，其用于制造供减少基于MRP-1的多药耐药用的药物。
20.一种有效量的如权利要求1中所定义的式I化合物或如权利要求6中所定义的式II化合物或如权利要求8中所定义的式III化合物的用途，其用于制造供减少基于BCRP的多药耐药用的药物。
21.一种有效量的如权利要求1中所定义的式I化合物或如权利要求6中所定义的式II化合物或如权利要求8中所定义的式III化合物的用途，其用于制造供减少由ABC转运蛋白过度表达引起的药物耐药用的药物。
22.—种有效量的如权利要求1中所定义的式I化合物或如权利要求6中所定义的式II化合物或如权利要求8中所定义的式III化合物的用途，其用于制造供治疗由ABC转运蛋白过度表达引起的药物耐药癌症用的药物。
23.一种用于减少基于P-糖蛋白的多药耐药或减少基于MRP-1的多药耐药或减少基于BCRP的多药耐药的药物，所述药物包括如权利要求1中所定义的式I化合物或如权利要求6中所定义的式II化合物或如权利要求8中所定义的式III化合物。
24.一种用于减少由ABC转运蛋白过度表达引起的药物耐药的药物，所述药物包括如权利要求1中所定义的式I化合物或如权利要求6中所定义的式II化合物或如权利要求8中所定义的式III化合物。
25.一种用于治疗由ABC转运蛋白过度表达引起的药物耐药癌症的药物，所述药物包括权利要求1中所定义的式I化合物或如权利要求6中所定义的式II化合物或如权利要求8中所定义的式III化合物。
26.—种产生预定数目的如权利要求1中所定义的式I化合物的文库的方法，其包含:a)提供如权利要求6中所定义的式II的含有乙炔基团的类黄酮； b)使如权利要求6中所定义的所述式II的含有乙炔基团的类黄酮与如权利要求8中所定义的所述式III的含有叠氮基的类黄酮选择性反应；以及 c)将步骤(a)和(b)重复预定次数，从而获得预定数目的如权利要求1中所定义的式I化合物。
27.一种通过根据权利要求26所述的方法制得的如权利要求1中所定义的式I化合物的文库的用途，其用于筛选所述文库内的每一化合物对由ABC转运蛋白过度表达引起的多药耐药的调节效能。
【文档编号】C07D311/30GK104169267SQ201380012019
【公开日】2014年11月26日 申请日期:2013年3月1日 优先权日:2012年3月1日
【发明者】周铭祥, 陈德恒, 陈建辉, 黄丽琼, 罗文骏 申请人:香港理工大学, 麦吉尔大学