一种水稻矮缩病毒抗体的制备方法与流程

文档序号:12573270阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种水稻矮缩病毒抗体的制备方法,其特征在于包括以下步骤:

1)阳性菌株按1:100接种于两管含氨苄青霉素和氯霉素的LB液体培养基中,摇菌3-4h,诱导培养4-5h,另一试管中不添加IPTG作为对照;取菌液并收集菌体,经凝胶电泳分离后置于考马斯亮蓝染色液;

2)诱导100ml菌液,收集菌体,目的蛋白经凝胶电泳,电泳后的凝胶经KCL预冷处理得到乳白色蛋白条带,将目的蛋白条带用刀片切割回收,加入弗氏佐剂研磨至乳化状,保存备用;

3)提取SRBSDV侵染的水稻病株和健康水稻植株总蛋白,经凝胶电泳分离后转印到PVDF膜上,室温摇床上封闭1h后,用PBST洗三遍;将PVDF膜置于1:1000稀释的P6抗血清中孵育;再用PBST洗三遍后,放入1:30000稀释的抗体中孵育1h;将PVDF膜用PBST洗三遍后放入显色液中避光显色;

4)取无毒白背飞虱飞虱若虫在SRBSDV侵染的水稻病株上饲毒2d,随后转到健康水稻上饲养;以荧光抗体和染料孵育1h。

2.根据权利要求1所述一种水稻矮缩病毒抗体的制备方法,其特征在于所述步骤1)阳性菌株按1:100接种于两管含氨苄青霉素和氯霉素的LB液体培养基中,置于37℃条件下230rpm摇菌3-4h,置于28℃条件下230rpm诱导培养4-5h,另一试管中不添加IPTG作为对照;取1mL菌液并收集菌体,经12%SDS-PAGE凝胶电泳分离后置于考马斯亮蓝染色液。

3.根据权利要求1所述一种水稻矮缩病毒抗体的制备方法,其特征在于所述步骤2)诱导100ml菌液,收集菌体,目的蛋白经12%SDS-PAGE凝胶电泳,电泳后的凝胶经0.1mol/L的KCL预冷处理3-4min得到乳白色蛋白条带,将目的蛋白条带用刀片切割回收,加入弗氏佐剂研磨至乳化状,-20℃保存备用。

4.根据权利要求1所述一种水稻矮缩病毒抗体的制备方法,其特征在于所述步骤3)提取SRBSDV侵染的水稻病株和健康水稻植株总蛋白,经12%SDS-PAGE凝胶电泳分离后转印到PVDF膜上,3%BSA室温摇床上封闭1h后,用PBST洗三遍;将PVDF膜置于1:1000稀释的P6抗血清中37℃孵育1h;再用PBST洗三遍后,放入1:30000稀释的anti-rabbitIgG-AP抗体中37℃孵育1h;将PVDF膜用PBST洗三遍后放入BCIP/NBT显色液中避光显色;

4)取200头1-2龄的无毒白背飞虱飞虱若虫在SRBSDV侵染的水稻病株上饲毒2d,随后转到健康水稻上饲养;以荧光抗体P6-FITC、P9-1-rhodamine和Actin染料phalloidin–Alexa孵育1h。

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