黑柄炭角菌菌丝体的制备方法、黑柄炭角菌菌丝体萃取物、其制备方法及其抗氧化组合物与流程

本发明涉及一种菌丝体的制备方法、菌丝体萃取物及菌丝体萃取物的制备方法，特别涉及一种黑柄炭角菌菌丝体的制备方法、黑柄炭角菌菌丝体萃取物及黑柄炭角菌菌丝体萃取物的制备方法。

背景技术：

生物体在代谢过程中会产生许多自由基及活性氧物质(Reaction Oxygen Species,ROS)，其中包含过氧化氢(Hydrogen peroxide,H₂O₂)、超氧阴离子(Superoxide anion radical,·O₂^-)、羟基自由基(Hydroxyl radical,·OH^-)及其所衍生的氧化活性分子，例如脂质过氧化自由基(Lipid peroxide,ROO·)及单重态氧(singlet oxygen,O-O:)的产生，这些具有未成对电子的自由基其化学性质相当活泼，很容易与体内许多分子如DNA、蛋白质及生物膜上的多元不饱和脂肪酸反应，造成细胞组织的伤害，引发冠状动脉粥状硬化、心血管疾病、癌症及肿瘤等疾病，并加速生物体的老化甚至死亡。

生物在演化的过程中，为了利用氧气作为能量的来源，又要避免活性氧物质对细胞产生伤害，生物体内便发展出抗氧化的防御机制，来避免或修补自由基造成的损害，其中可大致分为酵素性及非酵素性的抗氧化机制。但老化、饮食、生活习惯、疾病及环境污染等外在因素会造成氧化与抗氧化平衡系统失衡，促使生物体内氧化压力增加。因此由饮食中增加抗氧化物质的摄取，以补强抗氧化防御能力，可减缓生物体内的氧化伤害。

黑柄炭角菌(Xylaria nigripe)隶属于炭角菌目(Xylariales)、炭角菌科(Xylariaceae)及炭角菌属(Xylaria)，是一种中国传统的药用真菌，通常生长在 废弃白蚁巢穴，其菌丝体形成的菌核即是中国传统的中药材料“乌灵参”，又称作乌灵菌、雷震子等。根据四川《中药志》记载，乌灵参有“补心肾、治失眠”疗效的描述，具有补气固肾、健脾除湿及镇定安神等多种生理活性。

由于野生资源逐渐匮乏，黑柄炭角菌有采集不易与品质不稳定的问题。因此，目前发展以人工液态培养黑柄炭角菌菌丝体的技术，是解决天然黑柄炭角菌产量不足和品质不稳定等问题的一种方法。而液态培养的过程中，黑柄炭角菌除了合成自身生长所需的有机物质外，还会分泌代谢产物，其中也可能包含具抗氧化功能的化合物，因此以液态培养黑柄炭角菌具有发展天然抗氧化物质的潜力。但不同的培养方式，菌体生长型态不同，其基因表达也不尽相同，所产出的代谢产物也必然有所差异，在功效上也不同，或可能产生新的功效与用途。因此，需要一种有效提升黑柄炭角菌中抗氧化的代谢产物含量的培养和萃取方法，用于发展抗氧化物质。

技术实现要素：

本发明的目的之一在于，提供一种黑柄炭角菌菌丝体的制备方法、黑柄炭角菌菌丝体萃取物、其制备方法及其抗氧化组合物，以克服天然黑柄炭角菌产量不足和品质不稳定等问题。

本发明的一个方面在于提供一种黑柄炭角菌菌丝体的制备方法，其包含以下步骤：提供基质，基质实质是由0.5～5％重量比的糙米粉、0.1～1％重量比的麦芽萃出物以及99.4～94％重量比的水所组成。接着进行发酵工艺过程，在基质中接种黑柄炭角菌，并在发酵温度下培养一发酵时间，以获得发酵物质。最后进行分离工艺过程，将发酵物质分离为固体部分和液体部分，其中固体部分包含黑柄炭角菌菌丝体。

依据前述的黑柄炭角菌菌丝体的制备方法，前述的基质由2％重量比的糙米粉、0.5％重量比的麦芽萃出物以及97.5％重量比的水所组成。

依据前述的黑柄炭角菌菌丝体的制备方法，其中发酵温度可为22℃至 30℃之间，优选为25℃。

依据前述的黑柄炭角菌菌丝体的制备方法，其中发酵时间可为5天至15天，优选为10天。

借此，本发明的黑柄炭角菌菌丝体的制备方法，以人工发酵培养黑柄炭角菌菌丝体，其制备方法可后续进行大规模工业化的生产，因可控制起始产物和发酵条件等生产工艺过程，使所生产的黑柄炭角菌菌丝体品质稳定，且培养时间较短，因此可解决天然黑柄炭角菌产量不足和品质不稳定的问题。

本发明的另一个方面在于提供一种黑柄炭角菌菌丝体萃取物的制备方法，其包含下列步骤：提供黑柄炭角菌菌丝体，黑柄炭角菌菌丝体是利用前述的黑柄炭角菌菌丝体的制备方法所制得。干燥黑柄炭角菌菌丝体，以获得菌丝体粉末。进行萃取工艺过程，萃取工艺过程利用溶剂与菌丝体粉末以重量比10：1至30：1的比例混合成混合物后，将混合物搅拌萃取时间。最后，去除混合物的固体成分，以获得上清液，其中上清液包含黑柄炭角菌菌丝体萃取物。

依据前述的黑柄炭角菌菌丝体萃取物的制备方法，其中溶剂可为80℃至100℃的热水，萃取时间可为0.5小时至2小时，优选为1小时。

依据前述的黑柄炭角菌菌丝体萃取物的制备方法，其中溶剂可为70％重量比的乙醇，萃取时间可为22小时至26小时，优选为24小时。

依据前述的黑柄炭角菌菌丝体萃取物的制备方法，其中混合物的固体成分可利用离心方式、过滤方式或上述方式的组合而去除。

借此，本发明的黑柄炭角菌菌丝体萃取物的制备方法，可萃取黑柄炭角菌菌丝体中具有功能性的成分，并去除黑柄炭角菌菌丝体中的固体部分，以利后续使用。

本发明的另一个方面在于提供一种黑柄炭角菌菌丝体萃取物，其利用前述黑柄炭角菌菌丝体萃取物的制备方法所制得，且黑柄炭角菌菌丝体萃取物 具有抗氧化活性。

依据前述的黑柄炭角菌菌丝体萃取物，黑柄炭角菌菌丝体萃取物可用以清除DPPH自由基或用以抑制脂质氧化。

依据前述的黑柄炭角菌菌丝体萃取物，黑柄炭角菌菌丝体萃取物具有还原力活性。

本发明的另一个方面在于提供一种抗氧化的组合物，该组合物包含有效剂量的黑柄炭角菌菌丝体萃取物，其中黑柄炭角菌菌丝体萃取物是利用前述黑柄炭角菌菌丝体萃取物的制备方法所制得。

依据前述的抗氧化的组合物，组合物选自以下群组中的一种形式：医药组合物、化妆品组合物、饲料组合物、饮料组合物、营养补充组合物、食用组合物以及保健食用组合物。

借此，本发明的黑柄炭角菌菌丝体萃取物因具有清除DPPH自由基能力、抑制脂质氧化及还原力等抗氧化活性，故本发明的黑柄炭角菌菌丝体可用于抗氧化目的的医药组合物、化妆品组合物、饲料组合物、饮料组合物、营养补充组合物、食用组合物以及保健食用组合物上，具有运用于生医保健市场的潜能。

上述发明内容旨在提供本技术方案内容的简化摘要，以使阅读者对本技术方案内容具备基本的理解。此发明内容并非本技术方案内容的完整概述，且其用意并非在指出本发明实施例的重要/关键元件或界定本发明的范围。

附图说明

为让本发明的上述和其他目的、特征、优点与实施例能更明显易懂，附图说明如下:

图1为本发明一实施方式的黑柄炭角菌菌丝体的制备方法的步骤流程图；以及

图2为本发明另一实施方式的黑柄炭角菌菌丝体萃取物的制备方法的步骤流程图。

具体实施方式

<黑柄炭角菌菌丝体的制备方法>

请参照图1，其为依照本发明一实施方式的黑柄炭角菌菌丝体的制备方法100的步骤流程图。图1中，黑柄炭角菌菌丝体的制备方法100包含步骤110、步骤120与步骤130。

步骤110是提供基质，基质实质是由0.5～5％重量比的糙米粉、0.1～1％重量比的麦芽萃出物以及99.4～94％重量比的水所组成。优选地，基质由2％重量比的糙米粉、0.5％重量比的麦芽萃出物以及97.5％重量比的水所组成。以提供碳源、氮源及水分让后续黑柄炭角菌能进行液态培养。

步骤120是进行发酵工艺过程，在基质中接种黑柄炭角菌，并在发酵温度下培养一发酵时间，以获得发酵物质。发酵工艺过程通过调节温度、通气量等条件，使黑柄炭角菌菌丝体生长。更进一步的说，黑柄炭角菌菌丝体的发酵工艺过程的发酵温度为22℃至30℃之间，优选为25℃。发酵时间为5天至15天，优选为10天。

步骤130是分离工艺过程，将发酵物质分离为固体部分和液体部分，其中固体部分包含黑柄炭角菌菌丝体。在发酵工艺过程完成后，因发酵物质中已充满黑柄炭角菌菌丝体，因此将发酵物质中的液体部分和固体部分分离后，即可在固体部分中获得黑柄炭角菌菌丝体。而分离方式可为过滤方式、离心方式或上述方式的组合。

<黑柄炭角菌菌丝体萃取物的制备方法>

请参照图2，其为依照本发明另一实施方式的黑柄炭角菌菌丝体萃取物的制备方法200的步骤流程图。图2中，黑柄炭角菌菌丝体萃取物的制备方法200包含步骤210、步骤220、步骤230与步骤240。

步骤210是提供黑柄炭角菌菌丝体，黑柄炭角菌菌丝体是利用前述的黑柄炭角菌菌丝体的制备方法所制得。

步骤220是干燥黑柄炭角菌菌丝体，以获得菌丝体粉末。而干燥方式可利用低温真空干燥法或冷冻真空干燥法，以确保黑柄炭角菌菌丝体中的成分不会因干燥过程受热而变性。

步骤230是进行萃取工艺过程，利用溶剂与菌丝体粉末以重量比10：1至30：1的比例混合成混合物后，将混合物搅拌一萃取时间。在萃取工艺过程中，溶剂可为80℃至100℃的热水，优选为90℃的热水，萃取时间可为0.5小时至2小时，优选为1小时。或溶剂可为70％重量比的乙醇，萃取时间可为22小时至26小时，优选为24小时。

步骤240是去除混合物的固体成分，以获得上清液，其中上清液包含黑柄炭角菌菌丝体萃取物。经过萃取工艺过程后，黑柄炭角菌菌丝体萃取物已溶解至溶剂中，其中包含具有功能性的成分，因此去除混合物中固体部分后，所获得的上清液中包含黑柄炭角菌菌丝体萃取物。而混合物的固体部分可利用离心方式、过滤方式或上述方式的组合而去除。

现在以下列具体试验例进一步示范说明本发明，用以使得本发明所属技术领域通常知识的人员，可在不需过度解读的情形下完整利用并实践本发明，而不应将这些试验例视为对本发明范围的限制，但用于说明如何实施本发明的材料及方法。

<试验例>

一、制备黑柄炭角菌菌丝体

在本试验例中，使用菌株为黑柄炭角菌Xylaria nigripes BCRC34219，购自食品工业发展研究所生物资源保存与研究中心(台湾，新竹)，黑柄炭角菌Xylaria nigripes BCRC34219为分离自台湾本土的菌株。首先将黑柄炭角菌培养及保存在含麦芽萃出物的洋菜培养基(malt-extract agar plate)。将培养在含麦芽萃出物洋菜培养基的黑柄炭角菌切下大小为5mm×5mm的菌丝块，接种至 装有含麦芽萃出物的培养液(malt-extract broth)的摇瓶，在25℃下以60rpm进行震荡培养7天，作为后续液态培养的种菌。其中含麦芽萃出物的培养液的组成分为20g/L麦芽萃出物以及10g/L葡萄糖。

进行黑柄炭角菌菌丝体制备时，使用的基质的组成分为20g/L糙米粉与5g/L麦芽萃出物。使用的发酵槽为5公升的搅拌式发酵槽(stirred-tank fermentor)，工作体积为3公升。而黑柄炭角菌菌丝体制备的发酵工艺过程的步骤如下：先将黑柄炭角菌种菌接种至基质中，接种量为300mL。再以搅拌转速为100rpm、通气量为1vvm及发酵温度为25℃等发酵条件培养10天后，可获得发酵物质，而发酵物质中已长满黑柄炭角菌菌丝体。将发酵物质进行过滤以分离固体部分和液体部分，固体部分中包含黑柄炭角菌菌丝体，故留下发酵物质固体部分即可获得黑柄炭角菌菌丝体。

二、制备黑柄炭角菌菌丝体萃取物

进行黑柄炭角菌菌丝体萃取物制备时，先使用水清洗由前述黑柄炭角菌菌丝体的制备方法所制得的黑柄炭角菌菌丝体数次，再利用冷冻干燥机干燥黑柄炭角菌菌丝体，制成菌丝体粉末，菌丝体粉末样品保存在密闭容器内。

再将菌丝体粉末与90℃热水以重量比1：10至1：30的比例混合成混合物后，将混合物搅拌1小时以萃取其中具有功能性的成分。或是将菌丝体粉末与70％重量比的乙醇以重量比1：10至1：30的比例混合成混合物后，将混合物搅拌24小时以萃取其中具有功能性的成分。萃取后的样品经过滤与离心步骤，取上清液进行浓缩，再使用冷冻干燥机进行干燥，即得黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物和黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物。

三、黑柄炭角菌菌丝体萃取物的多酚化合物及黄酮类物质含量测定

多酚类化合物(polyphenols)是一类具有机能性的植物化学物质，可作为氢提供者，而达到清除自由基的效应，因此这类物质可以延缓食品或生物体中碳水化合物、脂质等物质的氧化，所以被视为重要的天然抗氧化剂。其中，黄酮类化合物(flavonoid，又称类黄酮)是酚类化合物中种类较多的一类。一些 真菌菌丝体也具有多酚类化合物与黄酮类物质，因此在本试验例中，将测定黑柄炭角菌菌丝体萃取物所具有多酚类化合物与黄酮类物质的含量。

福林-西奥卡特(Folin-Ciocalteu)化学反应呈色法是最普遍测定总多酚化合物含量的方法，使用没食子酸(gallic acid，GA)当作标准品，定量上总多酚化合物含量以没食子酸当量表示。Folin-Ciocalteu试剂中的钨钼酸可以将多酚化合物定量，自身被还原(Mo⁶⁺变为Mo⁵⁺)生成蓝色化合物，颜色的深浅与总多酚含量呈正相关。

实验上先以去离子水配制浓度2mg/mL没食子酸标准溶液，将其依次稀释至浓度分别为200、160、120、80、40、20μg/mL，作为标准曲线用。另将7.42g Na₂CO₃溶于100mL去离子水，以配得700mM Na₂CO₃溶液。进行分析时，分别取100μL的黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物和黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物样品，加入200μL的10％Folin-Ciocalteu试剂混合均匀后，再加入800μL的700mM Na₂CO₃混合均匀，室温下避光静置2小时后，使用分光光度计，在波长765nm下测定其吸光值，最后数据依标准曲线换算成没食子酸当量mg GA/g。

黄酮类物质的含量分析方法也采用化学反应呈色法，使用芦丁(Rutin)当作标准品，定量上黄酮类物质的含量以芦丁当量表示。实验上先以95％甲醇溶液配制浓度500μg/mL的芦丁标准溶液，将其依次稀释至浓度分别为50、40、30、20、10、5、2.5μg/mL，作为标准曲线用。另外配制2％AlCl₃溶液，其配制方法为取98％AlCl₃溶液1.021g溶于50mL的95％甲醇溶液。进行分析时，分别取0.5mL的黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物和黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物样品，加入0.5mL的2％AlCl₃溶液混合均匀，避光静置15分钟后，在波长430nm下测定其吸光值，最后数据依标准曲线换算成标准单位mg Rutin/g。

实验结果发现，在总多酚化合物含量的部分，以黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物含量较高，为19.3mg GA/g，而黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物为14.1mg GA/g。在黄酮类化合物含量的部分，以黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物中含量较高，为4.64mg Rutin/g，而黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物中为1.97mg GA/g。结果显示，不论是黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物或黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃 取物，皆含有多酚类化合物和黄酮类物质，皆具有作为抗氧化剂的潜力。

四、黑柄炭角菌菌丝体萃取物抗氧化能力

本试验进一步分析黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物和黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物的抗氧化活性，使用DPPH自由基的清除能力、抑制脂质氧化和还原力的活性三种方法进行分析。

1.黑柄炭角菌菌丝体萃取物DPPH自由基清除能力测定

DPPH(α,α-diphenyl-β-picrylhydrazyl)为一种十分安定的自由基，在抗氧化物质的抗氧化活性的研究上，常使用DPPH来评估抗氧化物质的供氢能力。DPPH/乙醇溶液为蓝紫色，在波长517nm下有较强的吸光值，当DPPH被抗氧化剂还原或与另一个自由基结合时，在波长517nm的吸光值会降低，故吸光值越低代表样品对DPPH自由基的清除能力越好，提供氢质子能力越强，亦即DPPH自由基清除活性较高，则抗氧化物质的抗氧化活性较强。实验上分别取100μL不同浓度的黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物、黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物和Trolox样品，加入400μL浓度为100mM的Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)，再加入500μL浓度为250μM的DPPH/乙醇溶液，震荡20秒后在暗室静置20分钟，测定样品在波长517nm下吸光值，并将同一样品在不同浓度下对自由基清除率作图，DPPH自由基清除能力的计算公式如下：

求得受测物清除50％DPPH自由基时所需的浓度即为DPPH EC₅₀。其中Trolox为水溶性维生素E，已知其具有抗氧化活性，故在本试验例中以Trolox作为正控制组。

请参照下表一，为黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物和黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物的DPPH自由基清除能力(DPPH EC₅₀)。

表一

实验结果显示，正控制组Trolox的EC₅₀为0.35±0.10mg/mL，而黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物的DPPH自由基清除能力的EC₅₀为11.32±0.33mg/mL，黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物的DPPH自由基清除能力的EC₅₀为20.43±0.65mg/mL。显示不论是黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物或黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物皆具有DPPH自由基清除能力，但黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物的DPPH自由基清除能力优选。

2.黑柄炭角菌菌丝体萃取物抑制脂质氧化能力测定

本试验例是以测定脂质过氧化作用中的终产物丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的产量，作为测量脂质过氧化作用的指标。实验上利用氯仿、甲醇与卵磷脂作用所形成微脂粒(liposome)来模拟体内细胞膜的系统，并在此系统中，以维生素C将Fe³⁺还原成Fe²⁺，Fe²⁺再将微粒脂的脂质氧化。脂质过氧化反应的产物MDA会与硫代巴比妥酸(Thiobarituric acid,TBA)在酸性与高温反应下生成粉红色复合物TBARS(thiobarbituric acid reactive substances)，TBARS在波长535nm下具有强烈吸光值。故通过吸光值推算TBARS生成量以定量MDA浓度，吸光值越高，表示MDA产物越多。在此状态下脂质容易被氧化，因此若样品可降低此系统的吸光值，则表示其具有抑制脂质过氧化的作用。

实验上取1公克的卵磷脂加入6ml氯仿及4ml甲醇混匀，将上述卵磷脂混合液置入圆底烧瓶以氮气吹干，加入PBS(Phosphate buffered saline，磷酸盐缓冲生理盐水)洗出微脂粒，即为微脂粒溶液，置于4℃备用。依序加入300μL的微脂粒溶液、165μL的PBS、15μL浓度为25mM的FeCl₃溶液与15μL浓度为25mM的维生素C(ascorbic acid)溶液以及15μL的黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物 或黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物样品。将上述反应液在37℃干浴1小时后，取200μL反应液，加入60μL浓度为0.2％的丁基化羟基甲苯(Butylated Hydroxytoluene,BHT)溶液及400μL浓度为0.4％的TBA溶液，在100℃加热20分钟后，立即中止反应。以等体积的正丁醇(n-butanol)萃取，再以3000rpm离心5分钟，取上清液在波长535nm下读取吸光值，若样品能使OD₅₃₅吸光值降低，表示样品具有抑制脂质过氧化的能力。并将同一样品在不同浓度下对脂质过氧化抑制率作图，抑制脂质氧化能力的计算公式如下：

求得受测物抑制50％脂质氧化时所需的浓度即为Liposome IC₅₀。

请参照下表二，为黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物和黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物的抑制脂质氧化活性。

表二

实验结果显示，黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物的抑制脂质氧化测定的IC50为10.8±0.4mg/mL，黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物的抑制脂质氧化测定的IC50为43.5±0.9mg/mL。显示不论是黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物或黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物皆具有抑制脂质氧化活性，但黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物的抑制脂质氧化活性优选。

3.黑柄炭角菌菌丝体萃取物的还原力测定

对于还原力的分析，是以普鲁士蓝[Fe₄(Fe(CN)₆)₃]的生成量作为指标。抗氧化剂会将赤血盐[K₃Fe(CN)₆]还原成黄血盐[K₄Fe(CN)₆]，黄血盐再与Fe³⁺作用，形成普鲁士蓝，可以在波长700nm测定吸光值，以检测普鲁士蓝的生成 量，作为抗氧化剂的还原力，吸光值越高，表示抗氧化剂的还原力越强。实验上分别取0.25mL黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物和黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物样品，加入等体积浓度为0.2M的磷酸钠缓冲液及浓度为1％的铁氰化钾溶液混合均匀，在50℃水浴加热20分钟后，冰浴冷却，再加入0.25mL浓度为10％的三氯乙酸溶液混合，以离心力4500xg离心10分钟。取0.5mL上清液，加入0.5mL去离子水及0.1mL浓度为0.1％的氯化铁溶液反应，静置10分钟后，在波长700nm下测定吸光值。吸光值越高，表示样品还原力越强。最后数据以OD₇₀₀为0.5时所需的样品浓度作为样品的还原力能力依据，所需浓度越低表示样品的还原力越强。而在本试验例中以维生素C作为正控制组。

请参照下表三，为黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物和黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物的还原力能力。

表三

实验结果显示，在还原力测定时，正控制组维生素C在OD₇₀₀达0.5时，其浓度为0.03±0.01mg/mL，黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物在OD₇₀₀达0.5时，其浓度为2.02±0.01mg/mL，而黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物在OD₇₀₀达0.5时其浓度为10.45±1.17mg/mL。显示不论是黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物或黑柄炭角菌菌丝体热水萃取物皆具有还原力活性，但黑柄炭角菌菌丝体乙醇萃取物的还原力活性优选。

由上所述，经本发明所揭露黑柄炭角菌菌丝体的制备方法，以人工发酵培养黑柄炭角菌菌丝体，使黑柄炭角菌菌丝体的生产可后续进行大规模工业化的生产，而生产工艺过程因为可控制，使所制备出的黑柄炭角菌菌丝体品质稳定，另因培养时间较短，可解决天然黑柄炭角菌产量不足和品质不稳定 的问题。而本发明所揭露黑柄炭角菌菌丝体萃取物的制备方法所制得的黑柄炭角菌菌丝体萃取物，含有大量的总多酚化合物和黄酮类化合物，并在抗氧化活性分析结果显示，其具有清除DPPH自由基能力及抑制脂质氧化等抗氧化活性。故本发明的黑柄炭角菌菌丝体萃取物可用于抗氧化目的的医药组合物、化妆品组合物、饲料组合物、饮料组合物、营养补充组合物、食用组合物以及保健食用组合物上，具有运用于生医保健市场的潜能。

虽然本发明已经以实施方式公开如上，然其并非用以限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作各种变动与润饰，因此本发明的保护范围当视权利要求所界定者为准。