一种快速纯化Stoffel片段Taq酶的方法与流程

文档序号:12248821阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种快速纯化Stoffel片段Taq酶的方法,其特征在于包括以下步骤:

1)工程菌的活化和表达:取Stoffel片段Taq DNA聚合酶工程菌接种在LB培养基中,于37℃培养过夜;

2)按照比例,取菌液接种于LB培养基中,于37℃继续培养至OD600为0.4,加入IPTG至终浓度为0.5mM,继续培养12-16小时;

3)于4000g离心5min,收集菌体,用4×Taq storage buffer重悬菌体,菌体被置于沸水浴中,煮沸裂解;

4)裂解后在4℃下16000g离心10min除去细胞残体和变性后的蛋白,上清液采用水相/有机磷酸系统处理后备用。

2.根据权利要求1所述的一种快速纯化Stoffel片段Taq酶的方法,其特征在于:所述的LB培养基中含有100μg/ml的Kan。

3.根据权利要求1所述的一种快速纯化Stoffel片段Taq酶的方法,其特征在于:所述的菌液与LB培养基按照体积比1:100接种。

4.根据权利要求1所述的一种快速纯化Stoffel片段Taq酶的方法,其特征在于:所述的Taq storage buffer具体为:20mM Tris-H Cl pH 8.0,10mM DTT,0.1mM EDTA,100mM KCl,0.5%Non idet P40,0.5%Tween 20。

5.根据权利要求1所述的一种快速纯化Stoffel片段Taq酶的方法,其特征在于:所述的沸水浴加热条件为:每4min一个循环,共两个循环,加热8min。

6.根据权利要求1所述的一种快速纯化Stoffel片段Taq酶的方法,其特征在于:步骤(4)所述的上清液处理方法具体为:加入10%无菌平衡磷酸二氢钾混匀,加等体积的无水乙醇混匀,2000g离心2min,在含有Taq酶的上层有机相中加入等体积无菌甘油,贮于-20℃。

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