本发明属于食品检测和动物分子生物学技术领域，涉及一种鉴定牛肉的方法，适用于鉴定未知样品是否是牛肉或是否含有牛肉成份。
背景技术：
随着我国居民生活水平的提高，仅国内生产的肉类远不能满足市场需求，需要从国外进口一部分肉类。这些因素为国内外不法商贩乘虚而入创造了条件。为保障消费者合法权益，确立有效的肉源性成份鉴定方法十分必要。
PCR (polymerase chain reaction)，即DNA聚合酶链式反应，是20世纪80年代发明的集高度特异性、灵敏性、高效性为一体的分子生物学技术，广泛应用于涉及生物的诸多领域，包括物种鉴定、法学鉴定、药品/食品/饲料等诸多样品中源自生物的成份及其含量的分析。PCR分为传统PCR和实时荧光定量PCR (qPCR)。
在实际工作中传统PCR和实时定量PCR均在使用，前者通常耗时长，后者虽检测时间短，却存在试剂、耗材及检测设备昂贵的问题。
技术实现要素：
为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种鉴定牛肉的方法。
本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：一种鉴定牛肉的方法，包括以下步骤：
步骤1：设计特异性识别牛线粒体基因片段的1对引物；
步骤2：将牛肉总DNA的浓度调至20 ng/μL作为样品PCR检测的模板；
步骤3：使用步骤1的引物和步骤2的模板，借助TaqDNA聚合酶PCR扩增牛线粒体基因特定片段；
步骤4：通过1.2%琼脂糖凝胶电泳检测步骤3的PCR扩增产物；
步骤5：根据步骤4的电泳检测结果，判断样品是否是或者是否含有牛肉或牛的其他组织成份。
所述牛线粒体基因片段的1对引物，上游引物碱基序列：5′-tcttatcaatattcttgaccctt-3′，下游引物碱基序列：5′-agggagacctaaaattacagg -3′，浓度均为2 pmol/μL。
所述Taq DNA聚合酶PCR扩增羊线粒体基因特定片段的PCR反应体系为10μL，其中10×Buffer：1μL；10 mmol/L dNTPS：0.4μL；上、下游引物各0.5μL；模板DNA：0.5μL；5 U/μLTaq：0.1μL；灭菌纯水7μL。
所述Taq DNA聚合酶PCR扩增牛线粒体基因特定片段的PCR程序为：94℃变性/25 s，59℃退火/25 s，72℃延伸反应/25 s，30次循环。
所述根据步骤4的电泳检测结果，判断样品是否是或含有牛肉或牛的其他组织成份，若出现178 bp PCR产物，表明检测样品是或含有牛肉或牛的其他组织成份；反之不是或不含有牛肉或牛的其他组织成份。
本发明的有益效果：使用自行设计的识别牛线粒体基因片段的一组引物，结合TaKaRa公司的rTaq DNA聚合酶，解决了实时定量PCR成本高的问题。该发明可直接用于鉴定牛肉成份的试剂盒生产。
附图说明
图1为本发明实施例中以牛肉、猪肉、猪肝和羊肉为模板，使用特异性识别牛线粒体基因片段的引物，实施Taq PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测图谱。
具体实施例
现结合实施例，进一步说明使用本发明的引物结合Taq DNA聚合酶鉴定牛肉的良好效果。本发明使用杭州朗基MG96+型PCR仪，但并不限制使用其他公司的仪器。
制备完全相同的4组，分别以牛肉\猪肉、猪肝和羊肉总DNA为模板，其他条件相同，共计4管10μL PCR反应体系：其中10×Buffer：1μL；10 mmol/L dNTPS：0.4μL；上、下游引物各0.5μL；模板DNA：0.5μL；5 U/μL Taq：0.1μL；灭菌纯水7μL。PCR程序如下：94℃变性/25 s，59℃退火/25 s，72℃延伸反应/25 s，30次循环。PCR完成后，使用1.2%琼脂糖凝胶电泳进行实验结果检测。
结果表明，仅在以牛肉总DNA为模板的PCR样品中检测到一条位于100-250 bp中间位置的PCR产物，与预期结果178 bp相吻合，而以猪肉、猪肝和羊肉总DNA为模板进行PCR扩增的样品中，没有检测到任何条带，表明本发明设计的引物优良特异性。