本发明属于食品检测和动物分子生物学技术领域，涉及一种羊源性成份鉴定的引物及其使用条件，适用于鉴定未知样品是否是或是否含有羊源性成份以及物种羊的鉴定。
背景技术：
“挂羊头，卖狗肉”，我国这句俗话将不法商贩兜售假冒伪劣产品的行径体现的淋漓尽致。实际上，这是全世界范围内普遍存在的问题。随着我国居民生活水平的提高，对肉类的需求量越来越多，不免需要从国外进口肉类以满足市场需求。这些因素均为国内外不法经营者乘虚而入创造了条件。为保障消费者合法权益，确立一种行之有效的羊源性成份鉴定方法迫在眉睫。
PCR (polymerase chain reaction)，即DNA聚合酶链式反应，是20世纪80年代发明的集高度特异性、灵敏性、高效性为一体的分子生物学技术，广泛应用于涉及生物的诸多领域，包括物种鉴定、法学鉴定、药品/食品/饲料/食品饲料添加剂/化妆品等诸多样品中源自生物的成份及其含量的分析。PCR分为传统PCR和实时定量PCR。传统PCR又分为使用TaqDNA聚合酶和pfu DNA聚合酶的两种PCR。
在实际工作中传统PCR和实时定量PCR均在使用，前者通常耗时长，后者虽检测时间短，却存在试剂、耗材及检测设备昂贵的问题，因此继续优化PCR肉源性鉴定方法势在必行。
技术实现要素：
本发明涉及一种羊源性成份鉴定的引物及其使用条件，该方法提供识别羊线粒体基因片段的一组引物，同时提供使用该引物和Taq DNA 聚合酶特异性扩增羊线粒体DNA 片段的反应体系和反应条件。
本发明通过以下技术方案实现：1) 根据DNA数据库中羊线粒体基因的碱基序列，设计1组引物；2) 通过酚-氯仿抽提法纯化的样品总DNA作为PCR检测的模板；3) 使用1) 的引物和2) 的模板，通过Taq DNA聚合酶PCR扩增羊线粒体基因特定片段；4) 琼脂糖凝胶电泳检测3) 的PCR扩增产物；5) 根据4) 的电泳检测结果，判断样品是否是或者是否含有羊源性成份。
所述一组引物，其特征在于如下碱基序列：上游引物P1：5′-tctctcctaggcatttgctta-3′，下游引物P2：5′-cccgtcctacatgcatgaat-3′，浓度为2 pmol/μL。
所述样品总DNA，其特征在于浓度调至20 ng/μL。
所述Taq DNA聚合酶PCR扩增羊线粒体基因特定片段，其特征在于PCR反应体系为10μL (10×Buffer：1μL；10 mmol/L dNTPS：0.4μL；上、下游引物P1和P2各0.5μL；模板DNA：0.5μL；5 U/μL Taq：0.1μL；灭菌纯水7μL）。
所述Taq DNA聚合酶PCR扩增羊线粒体基因特定片段，其特征还在于PCR程序为：94℃变性/25 s，61.8℃退火/25 s，72℃延伸反应/25 s，30次循环。
所述琼脂糖凝胶电泳检测，其特征在于琼脂糖凝胶浓度为 1.2%。
所述根据电泳检测结果，判断样品是否是或者是否含有羊源性成份，其特征在于若出现199 bp PCR产物，则判断检测样品是或含有羊源性成份；反之不是或不含有羊源性成份。
采用上述技术方案，使低成本、方便、快速地鉴定羊源性成份成为可能，该发明亦可直接用于鉴定羊源性成份的试剂盒生产。
附图说明
图1示出利用本发明将羊肉区别于猪肉、猪肝和牛肉的实验结果。
具体实施方式
现结合本发明的实施例，进一步说明本发明的优良效果。本发明使用TaKaRa rTaqPCR试剂盒和杭州LongGene PCR仪 (MG96G)，但并不限制使用其他公司的试剂盒和仪器设备。
制备完全相同的12组（每组4个样品，分别以羊肉、猪肉、猪肝和牛肉总DNA为模板，其他条件相同) 共计48管PCR反应体系：10×Buffer：1μL；10 mmol/L dNTPS：0.4μL；浓度为2 pmol/μL的上、下游引物P1和P2各0.5μL；模板DNA：0.5μL；5 U/μL rTaq：0.1μL；灭菌纯水7μL。除了以下特别说明的退火温度外，PCR程序如下：94℃变性/25 s，T℃退火/25 s，72℃延伸反应/25 s，30次循环。12组样品的退火温度T设置如下：51.8℃、52℃、52.8℃、53.8℃、55℃、56.2℃、57.4℃、58.6℃、59.8℃、60.8℃、61.5℃和61.8℃。PCR完成后，使用1.2%琼脂糖凝胶电泳进行实验结果检测。结果表明，在所检测的退火温度范围内，仅在以羊肉总DNA为模板的PCR样品中检测到一条介于标准DNA 100～250 bp之间的PCR产物，与预期结果出现199 bp的PCR产物相吻合，而以猪肉、猪肝和牛肉总DNA为模板进行PCR扩增的样品中，没有检测到任何条带，表明本发明设计的引物优良特异性。图1示退火温度为61.8℃时琼脂糖凝胶电泳检测的实验结果。本发明使低成本、方便、快速地鉴定羊源性成份成为可能，可直接用于生产鉴定羊源性成份的试剂盒。