一种羊源性成份鉴定的引物及其使用条件的制作方法

文档序号:12412634阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种羊源性成份鉴定的引物及其使用条件,其特征在于包括以下步骤:

1) 根据DNA数据库中羊线粒体基因的碱基序列,设计1组引物;

2) 通过酚-氯仿抽提法纯化样品总DNA作为样品检测的模板;

3) 使用步骤1) 的引物和步骤2) 的模板,通过Taq DNA聚合酶PCR扩增羊线粒体基因特定片段;

4) 通过琼脂糖凝胶电泳检测步骤3) 的PCR扩增产物;

5) 根据步骤4) 的电泳检测结果,判断样品是否是或者是否含有羊源性成份。

2.如权利要求1所述一组引物,其特征在于上游引物P1碱基序列:5′-tctctcctaggcatttgctta-3′,下游引物P2碱基序列:5′-cccgtcctacatgcatgaat-3′,浓度为2 pmol/μL。

3.如权利要求1所述样品总DNA,其特征在于浓度调至20 ng/μL。

4.如权利要求1所述Taq DNA聚合酶PCR扩增羊线粒体基因特定片段,其特征在于PCR反应体系为10μL (10×Buffer:1μL;10 mmol/L dNTPS:0.4μL;上、下游引物P1和P2各0.5μL;模板DNA:0.5μL;5 U/μL Taq:0.1μL;灭菌纯水7μL)。

5.如权利要求1所述Taq DNA聚合酶PCR扩增羊线粒体基因特定片段,其特征还在于PCR程序为:94℃变性/25 s,61.8℃退火/25 s,72℃延伸反应/25 s,30次循环。

6.如权利要求1所述琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,其特征在于琼脂糖凝胶浓度为1.2%。

7.如权利要求1所述根据电泳检测结果,判断样品是否是或者是否含有羊源性成份,其特征在于若出现199 bp PCR产物,则判断检测样品是或含有羊源性成份;反之不是或不含有羊源性成份。

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