1.一种利用黄绿蜜环菌菌丝体提取酚酸的方法,其特征是,按照以下步骤实施:
步骤1、菌种活化:将配置好的活化培养基进行高温高压灭菌,做好斜面并冷却,将黄绿蜜环菌的菌株接种至斜面,在25℃培养箱中,至斜面长好;
步骤2、发酵培养:在锥形瓶中注入100mL发酵培养基,高温高压灭菌后冷却,挖取步骤1活化后的菌块,接种到装有100mL发酵培养基的锥形瓶中,接种后发酵培养基的培养条件为15~28℃,将该锥形瓶放置在旋转式摇床上,保持转速180rmp,发酵天数为15~25天;
步骤3、收集菌体:将发酵培养后的液体培养基离心收集菌体,用无菌水清洗菌体3遍后得到菌体,-45℃冷冻干燥后研磨成粉末,得到黄绿蜜环菌的菌丝冻干粉;
步骤4、提取酚酸:将菌丝冻干粉与80%体积分数的甲醇按料液比1:18-22混合,-20℃~-25℃静置2-2.5小时,超声处理10-15分钟后在4000转/分钟离心10-12分钟,过滤后滤渣重复上述操作;合并滤液减压浓缩后,水相用乙醚和乙酸乙酯的混合物萃取两次,合并两次有机相后加入无水硫酸钠干燥;过滤除去硫酸钠,旋转蒸发至干,即成。
2.根据权利要求1所述的利用黄绿蜜环菌菌丝体提取酚酸的方法,其特征是:所述的步骤1中,按照质量百分数计,活化培养基各组分含量为:葡萄糖2~5%,酵母粉0.1~0.2%,磷酸氢二钾0.05~0.15%,磷酸二氢钾0.025~0.075%,硫酸镁0.02~0.08%,叶酸(VB11)5~20ppm,琼脂1.5~2.5%,其余为水,合计100%。
3.根据权利要求2所述的利用黄绿蜜环菌菌丝体提取酚酸的方法,其特征是:所述的步骤1中,以质量百分数计,活化培养基的组分含量为:葡萄糖3.126%,酵母粉0.106%,磷酸氢二钾0.1%,磷酸二氢钾0.05%,硫酸镁0.045%,叶酸为10ppm,琼脂2%,其余为水,合计100%。
4.根据权利要求1所述的利用黄绿蜜环菌菌丝体提取酚酸的方法,其特征是:所述的步骤2中,按照质量百分数计,发酵培养基各组分含量为:葡萄糖2~5%,酵母粉0.1~0.2%,磷酸氢二钾0.05~0.15%,磷酸二氢钾0.025~0.075%,硫酸镁0.02~0.08%,叶酸为5~20ppm,其余为水,合计100%。
5.根据权利要求4所述的利用黄绿蜜环菌菌丝体提取酚酸的方法,其特征是:所述的步骤2中,以质量百分数计,发酵培养基组分含量为:葡萄糖3.126%,酵母粉0.106%,磷酸氢二钾0.1%,磷酸二氢钾0.05%,硫酸镁0.045%,叶酸为10ppm,其余为水,合计100%。
6.根据权利要求1所述的利用黄绿蜜环菌菌丝体提取酚酸的方法,其特征是:所述的步骤2中,接种后发酵培养基的培养条件为25℃,发酵天数为20天。
7.根据权利要求1所述的利用黄绿蜜环菌菌丝体提取酚酸的方法,其特征是:所述的步骤3中,所述离心转速为3000~10000转/分钟,离心时间5~10分钟,离心后使用无菌生理盐水清洗,清洗后同样条件下再次离心,重复三次。