用于鉴定三种药用蛇的引物组合及其应用的制作方法

文档序号:11145833阅读:来源:国知局

技术特征:

1.引物组合,由引物对I、引物对II和引物对III组成;

所述引物对I由引物F1和引物F2组成;

所述引物F1为如下(a1)或(a2):

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子;

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子;

所述引物F2为如下(a3)或(a4):

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子;

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子;

所述引物对II由引物F3和引物F4组成;

所述引物F3为如下(a5)或(a6):

(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子;

(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子;

所述引物F4为如下(a7)或(a8):

(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子;

(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子;

所述引物对III由引物F5和引物F6组成;

所述引物F5为如下(a9)或(a10):

(a9)序列表的序列5所示的单链DNA分子;

(a10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子;

所述引物F6为如下(a11)或(a12):

(a11)序列表的序列6所示的单链DNA分子;

(a12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子。

2.权利要求1所述引物组合的应用,为如下(b1)至(b6)中的任意一种:

(b1)鉴别蕲蛇、乌梢蛇和金钱白花蛇;

(b2)制备用于鉴别蕲蛇、乌梢蛇和金钱白花蛇的试剂盒;

(b3)鉴定待测蛇是否为蕲蛇、乌梢蛇或金钱白花蛇;

(b4)制备用于鉴定待测蛇是否为蕲蛇、乌梢蛇或金钱白花蛇的试剂盒;

(b5)鉴定待测样品中是否含有蕲蛇和/或乌梢蛇和/或金钱白花蛇;

(b6)制备用于鉴定待测样品中是否含有蕲蛇和/或乌梢蛇和/或金钱白花蛇的试剂盒。

3.含有权利要求1所述引物组合的试剂盒;所述试剂盒的用途为如下(c1)或(c2)或(c3):

(c1)鉴别蕲蛇、乌梢蛇和金钱白花蛇;

(c2)鉴定待测蛇是否为蕲蛇、乌梢蛇或金钱白花蛇;

(c3)鉴定待测样品中是否含有蕲蛇和/或乌梢蛇和/或金钱白花蛇。

4.权利要求3所述试剂盒的制备方法,包括将各条引物单独包装的步骤。

5.鉴别蕲蛇、乌梢蛇和金钱白花蛇的方法,为如下方法I或方法II;

所述方法I包括如下步骤:提取待测蛇基因组DNA;以所述基因组DNA为模板,采用权利要求1所述的引物组合进行PCR扩增,如果扩增产物中含有339-359bp的DNA片段、待测蛇为蕲蛇,如果扩增产物中含有114-134bp的DNA片段、待测蛇为乌梢蛇,如果扩增产物中含有555-575bp的DNA片段、待测蛇为金钱白花蛇;

所述方法II包括如下步骤:检测待测蛇的基因组DNA中是否含有权利要求1所述的引物组合中的引物对I的靶序列、引物对II的靶序列或引物对III的靶序列;如果所述基因组DNA中含有引物对I的靶序列、待测蛇为蕲蛇,如果所述基因组DNA中含有引物对II的靶序列、待测蛇为乌梢蛇,如果所述基因组DNA中含有引物对III的靶序列、待测蛇为金钱白花蛇。

6.鉴定待测蛇是否为蕲蛇、乌梢蛇或金钱白花蛇的方法,为如下方法III或方法IV或方法V;

所述方法III包括如下步骤:提取待测蛇的基因组DNA;以所述基因组DNA为模板,采用权利要求1所述的引物组合进行PCR扩增,如果采用扩增产物中含有339-359bp的DNA片段、待测蛇为蕲蛇,如果扩增产物中含有114-134bp的DNA片段、待测蛇为乌梢蛇,如果扩增产中含有555-575bp的DNA片段、待测蛇为金钱白花蛇,如果扩增产物中不含有339-359bp的DNA片段、114-134bp的DNA片段或555-575bp的DNA片段、待测蛇为非蕲蛇且非乌梢蛇且非金钱白花蛇;

所述方法IV包括如下步骤:提取待测蛇的基因组DNA;以所述基因组DNA为模板,采用权利要求1所述的引物组合进行PCR扩增;如果扩增产物加入SYBR Green I荧光染料后可以检测到绿色荧光、待测蛇为蕲蛇或乌梢蛇或金钱白花蛇,如果扩增产物加入SYBR Green I荧光染料后不可以检测到绿色荧光、待测蛇为非蕲蛇且非乌梢蛇且非金钱白花蛇;

所述方法V包括如下步骤:检测待测蛇的基因组DNA中是否含有权利要求1所述的引物组合中的引物对I的靶序列、引物对II的靶序列或引物对III的靶序列;如果所述基因组DNA中含有引物对I的靶序列、待测蛇为蕲蛇,如果所述基因组DNA中含有引物对II的靶序列、待测蛇为乌梢蛇,如果所述基因组DNA中含有引物对III的靶序列、待测蛇为金钱白花蛇,如果所述基因组DNA中不含有引物对I、引物对II或引物对III的靶序列、待测蛇为非蕲蛇且非乌梢蛇且非金钱白花蛇。

7.鉴定待测样品中是否含有蕲蛇和/或乌梢蛇和/或金钱白花蛇的方法,为如下方法VI或方法VII或方法VIII;

所述方法VI包括如下步骤:提取待测样品的基因组DNA;以所述基因组DNA为模板,采用权利要求1所述的引物组合进行PCR扩增,如果扩增产物中含有339-359bp的DNA片段、待测样品中含有蕲蛇,如果扩增产物中含有114-134bp的DNA片段、待测样品中含有乌梢蛇,如果扩增产物中含有555-575bp的DNA片段、待测样品中含有金钱白花蛇,如果扩增产物中不含有339-359bp的DNA片段、114-134bp的DNA片段或555-575bp的DNA片段、待测样品中不含有蕲蛇且不含有乌梢蛇且不含有金钱白花蛇;

所述方法VII包括如下步骤:提取待测样品的基因组DNA;以所述基因组DNA为模板,采用权利要求1所述的引物组合进行PCR扩增;如果扩增产物加入SYBR Green I荧光染料后可以检测到绿色荧光、待测样品中含有蕲蛇或乌梢蛇或金钱白花蛇,如果扩增产物加入SYBR Green I荧光染料后不可以检测到绿色荧光、待测样品中不含有蕲蛇且不含有乌梢蛇且不含有金钱白花蛇;

所述方法VIII包括如下步骤:检测待测样品的基因组DNA中是否含有权利要求1所述的引物组合中的引物对I的靶序列、引物对II的靶序列或引物对III的靶序列;如果所述基因组DNA中含有引物对I的靶序列、待测样品中含有蕲蛇,如果所述基因组DNA中含有引物对II的靶序列、待测样品中含有乌梢蛇,如果所述基因组DNA中含有引物对III的靶序列、待测样品中含有金钱白花蛇,如果所述基因组DNA中不含有引物对I、引物对II或引物对III的靶序列、待测样品中不含有蕲蛇且不含有乌梢蛇且不含有金钱白花蛇。

8.引物对I或引物对II;

所述引物对I由引物F1和引物F2组成;

所述引物F1为如下(a1)或(a2):

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子;

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子;

所述引物F2为如下(a3)或(a4):

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子;

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子;

所述引物对II由引物F3和引物F4组成;

所述引物F3为如下(a5)或(a6):

(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子;

(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子;

所述引物F4为如下(a7)或(a8):

(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子;

(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子。

9.权利要求8所述引物对I在制备试剂盒甲中的应用,或,所述引物对II在制备试剂盒乙中的应用;

所述试剂盒甲的用途为如下(d1)或(d2):

(d1)鉴定待测蛇是否为蕲蛇;

(d2)鉴定待测样品中是否含有蕲蛇;

所述试剂盒乙的用途为如下(d3)或(d4):

(d3)鉴定待测蛇是否为乌梢蛇;

(d4)鉴定待测样品中是否含有乌梢蛇。

10.含有权利要求8所述引物对I的试剂盒甲,或,含有权利要求8所述引物对II的试剂盒乙;

所述试剂盒甲的用途为如下(d1)或(d2):

(d1)鉴定待测蛇是否为蕲蛇;

(d2)鉴定待测样品中是否含有蕲蛇;

所述试剂盒乙的用途为如下(d3)或(d4):

(d3)鉴定待测蛇是否为乌梢蛇;

(d4)鉴定待测样品中是否含有乌梢蛇。

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