1.一种用于检测克柔假丝酵母菌的LAMP引物组合物,其特征在于,所述LAMP引物组合物包括:
正向外引物F3:5’-TAGTACTACACTGCGTGAG-3’;
反向外引物B3:5’-GAAACGACGCTCAAACAG-3’;
正向内引物FIP:5’-GCTCTTCATCGATGCGAGAAGTCGACAAGAGAAATCTACG-3’;
反向内引物BIP:5’-GCAGCGAAATGCGATACCTATGTGCGTTCAAGAACTC-3’。
2.一种用于检测克柔假丝酵母菌的试剂盒,其特征在于,包括如权利要求1所述的引物组合物。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,正向外引物F3浓度为50μM,反向外引物B3浓度为50μM,正向内引物FIP浓度为50μM,反向内引物BIP为50μM。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括Bst DNA聚合酶,dNTP,10×Isothermal Amplification反应缓冲液,MgSO4,H2O,显色剂。
5.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述显色剂为荧光染料SYBGreen或荧光指示剂Syto9。
6.一种检测克柔假丝酵母菌的方法,其特征在于,使用如权利要求1所述的引物组合物。
7.根据权利要求6所述检测克柔假丝酵母菌的方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一:将待检测样品煮沸后离心,吸取上清,得到样品DNA;
步骤二:在PCR管中依次加入引物组合物,样品DNA,dNTP,10×Isothermal Amplification反应缓冲液,MgSO4水溶液,Bst DNA聚合酶和H2O,得到反应液;
步骤三:将带有反应液的PCR管放入水浴锅反应;
步骤四:根据PCR管反应液浑浊程度判断扩增结果。
8.根据权利要求6所述检测克柔假丝酵母菌的方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一:将待检测样品煮沸后离心,吸取上清,得到样品DNA;
步骤二:在PCR管中依次加入引物组合物,克柔假丝酵母菌DNA,dNTP,10×Isothermal Amplification反应缓冲液,MgSO4水溶液,Bst DNA聚合酶和H2O,得到反应液;
步骤三:将带有反应液的PCR管放入水浴锅反应;
步骤四:向PCR管反应液内加入荧光染料SYBGreen或荧光指示剂Syto9,根据荧光强度判断扩增结果。
9.根据权利要求7或8所述的检测克柔假丝酵母菌的方法,其特征在于,反应液中包括1μL克柔假丝酵母菌DNA,4μL 12mM dNTP,2.5μL 10×Isothermal Amplification反应缓冲液,1μL 150mM MgSO4水溶液,1μL Bst DNA聚合酶和14.5μL H2O。
10.根据权利要求7或8所述的检测克柔假丝酵母菌的方法,其特征在于,带有反应液的PCR管放入60~65℃的水浴锅中,反应时间为45-60min。