本发明涉及抑制蛋白精氨酸甲基转移酶5(prmt5)的活性的新型5'-取代的核苷化合物，包含所述化合物的药物组合物，和使用所述化合物以治疗生理病症、更具体地用于治疗癌症的方法。蛋白精氨酸甲基转移酶(prmt)是可将一个或两个甲基添加至组蛋白和非组蛋白蛋白上的精氨酸残基的胍氮原子的酶家族。由prmt导致的大量表观遗传允许调节广泛多种细胞功能，包括例如rna代谢、转录调节、信号转导、胚胎发育和dna损伤修复。不同prmt的过表达已频繁与许多人类癌症相关。最近，越来越多的证据表明prmt5(prmt家族的一种重要成员)是潜在癌蛋白且涉及肿瘤形成。prmt5在许多肿瘤中过表达，具有重要的癌基因和癌症存活基因作为底物，且调控替代性剪接和rna成熟，其为对蛋白表达重要的新型机制。另外，显示套细胞淋巴瘤对prmt5抑制极其敏感。prmt5的潜在抑制剂已在文献中已知。参见例如wo2011/079236、wvo2014/100764、wo2014/100716、wo2014/100695、wo2014/100730、wo2014/100734和wo2014/100719。另外，某些5'-取代的核苷在文献中已知。参见例如wo2001/27114和wo2013/009735。需要新癌症治疗。具体而言，需要针对胶质母细胞瘤、胃癌、胰脏癌、膀胱癌、肺癌、白血病和淋巴瘤的新癌症治疗。仍需要提供可用于治疗癌症的替代prmt5抑制剂。优选地，此类化合物具有实现为肿瘤细胞生长的最大抑制、同时对患者而言具有可接受耐受性所需的最佳给药的特性。优选地，此类化合物也将是经口可生物利用的。本发明提供某些新型5'-取代的核苷化合物，其为prmt5的抑制剂且可作为单一药剂或与其他抗癌剂组合而具有临床效用，以用于治疗不同类型的癌症，且具体地为胶质母细胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、胃癌、胰脏癌、胆管癌、膀胱癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、白血病(包括急性骨髓白血病)和淋巴瘤。本发明提供下式化合物：其中：r1a为氢、c1-c2烷基、三氟甲基、氰基、氯或氟；r1b为氢、氯或氟；r2为氢或c1-c3烷基；且r3为氢、甲基或氨基；或其药学上可接受的盐。本发明提供下式化合物：其中：r1a为氢、c1-c2烷基、c3-c6环烷氧基、三氟甲基、氰基、氯或氟；r1b为氢、氯或氟；r2为氢或c1-c3烷基；且r3为氢、甲基或氨基；或其药学上可接受的盐。本发明进一步提供下式化合物：其中：r1a为氢、c1-c2烷基、三氟甲基、氰基、氯或氟；r1b为氢、氯或氟；r2为氢或c1-c3烷基；且r3为氢、甲基或氨基；或其药学上可接受的盐。本发明进一步提供下式化合物：其中：r1a为氢、c1-c2烷基、c3-c6环烷氧基、三氟甲基、氰基、氯或氟；r1b为氢、氯或氟；r2为氢或c1-c3烷基；且r3为氢、甲基或氨基；或其药学上可接受的盐。本发明进一步提供下式化合物：或其药学上可接受的盐。本发明还提供下式化合物：其为结晶且通过x射线粉末衍射图案(cu辐射，λ=1.54060å)表征，所述x射线粉末衍射图案包含25.1°的峰，以及一个或多个选自17.1°、13.6°、20.5°、24.0°和14.5°(2θ+/-0.2°)的峰。本发明进一步提供下式化合物：或其药学上可接受的盐。本发明进一步提供下式化合物：或其药学上可接受的盐。本发明进一步提供下式化合物：或其药学上可接受的盐。本发明进一步提供下式化合物：或其药学上可接受的盐。本发明还提供药物组合物，其包含本发明化合物或其药学上可接受的盐，与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。本发明提供治疗需要此类治疗的患者中的癌症的方法，所述癌症具体地为胶质母细胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、胃癌、胰腺癌、胆管癌、膀胱癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、白血病(包括急性骨髓白血病)和淋巴瘤，所述方法包括向患者施用有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐。本发明还提供用于治疗中的本发明化合物或其药学上可接受的盐。另外，本发明提供用于治疗癌症的本发明化合物或其药学上可接受的盐，所述癌症具体地为胶质母细胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、胃癌、胰腺癌、胆管癌、膀胱癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、白血病(包括急性骨髓白血病)和淋巴瘤。此外，本发明提供本发明化合物或其药学上可接受的盐用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，所述癌症具体地为胶质母细胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、胃癌、胰腺癌、胆管癌、膀胱癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、白血病(包括急性骨髓白血病)和淋巴瘤。具体而言，所述化合物为或其药学上可接受的盐。具体而言，所述化合物为或其药学上可接受的盐。具体而言，所述化合物为或其药学上可接受的盐。具体而言，所述化合物为或其药学上可接受的盐。如本文中所使用，“治疗(treat/treating/treatment)”是指抑制、减缓、停止或逆转现有症状或病症的进程或严重程度。如本文中所使用，术语“患者”是指温血动物，诸如哺乳动物，尤其受特定疾病、病症或病状折磨的人类。以下段落描述本发明的优选种类：a)r1a为氢、氯或环丙氧基；b)r1b为氢或氯；c)r2为氢或甲基；d)r3为氨基；e)r1a为氯，r1b为氢，且r2为氢；f)r1a为氯，r1b为氢，且r2为甲基；g)r1a为氢，r1b为氢，且r2为氢；h)r1a为环丙氧基，r1b为氯，且r2为氢；i)r1a为氯，r1b为氢，且r3为氨基；j)r1a为氢，r1b为氢，且r3为氨基；k)r1a为环丙氧基，r1b为氯，且r3为氨基；l)r2为氢且r3为氨基；m)r2为甲基且r3为氨基；n)r1a为氯，r1b为氢，r2为氢，且r3为氨基；o)r1a为氢，r1b为氢，r2为氢，且r3为氨基；p)r1a为氯，r1b为氢，r2为甲基，且r3为氨基；且q)r1a为环丙氧基，r1b为氯，r2为氢，且r3为氨基。技术人员应理解本发明化合物能够形成盐。本发明化合物含有碱性杂原子，具体而言胺，且因此与许多无机酸和有机酸中的任一种反应，以形成药学上可接受的酸加成盐。此类药学上可接受的酸加成盐和制备其的常见方法是本领域中众所周知的。参见例如p.stahl,等人,handbookofpharmaceuticalsalts:properties,selectionanduse,(vcha/wiley-vch,2008);s.m.berge,等人,“pharmaceuticalsalts,“journalofpharmaceuticalsciences,vol66,no.1,january1977。本发明化合物或其盐可通过多种本领域中已知的程序来制备，其中一些在以下方案、制备和实施例中说明。针对各所述途径的特定合成步骤可以不同方式组合或与来自方案的步骤结合，以制备本发明的化合物或盐。在以下方案中，各步骤的产物可通过本领域中众所周知的常规方法回收，所述方法包括萃取、蒸发、沉淀、色谱、过滤、研磨和结晶。本发明的一些中间体或化合物可具有一个或多个手性或立体中心。本发明涵盖所有个别立体异构体、对映异构体和非对映异构体，以及所述化合物的对映异构体和非对映异构体的混合物，包括外消旋体。优选的是，含有至少一个手性中心的本发明化合物作为单一对映异构体或非对映异构体存在。单一对映异构体或非对映异构体可以手性试剂开始(如以下方案i中所说明)制备或通过立体选择性或立体特异性合成技术(如以下方案ii中所说明)制备。或者，单一对映异构体或非对映异构体可通过标准手性色谱或结晶技术从混合物分离。另外，以下方案中所描述的某些中间体可含有一个或多个氧或氮保护基。可变保护基在每次出现时可根据特定反应条件和待进行的特定转化而相同或不同。保护和脱保护条件是本领域技术人员众所周知的，且描述于文献(参见例如“greene’sprotectivegroupsinorganicsynthesis”,第四版,peterg.m.wutsandtheodoraw.greene,johnwileyandsons,inc.2007)中。某些缩写如下定义：“a375”是指人类黑色素瘤肿瘤衍生的细胞系；“acn”是指乙腈；“atcc”是指美国典型培养物保藏中心(americantypeculturecollection)；“bid”是指每日两次给药；“cat.#”是指目录号；“cdi”是指1,1'-羰基二咪唑；“cdkn1a”是指细胞周期蛋白依赖型激酶抑制剂1、p21、p21cip1或p21waf1；“cpd”是指来自化合物处理的样品的值；“[cp*ircl2]2”是指二氯(五甲基环-戊二烯基)铱(iii)二聚体；“cpm”是指每分钟计数；“ct”是指循环阈值；“dcc”是指n,n'-二环己基碳化二亚胺；“dcm”是指二氯甲烷；“diad”是指偶氮二甲酸二异丙酯；“dic”是指n,n'-二异丙基碳化二亚胺；“dipea”是指n,n-二异丙基乙胺；“dlbcl”是指弥漫性大b细胞淋巴瘤；“dmem”是指dulbecco氏改良的eagle氏(组织培养)培养基(dulbecco'smodifiedeagle's(tissueculture)medium)；“dmso”是指二甲亚砜；“dna”是指脱氧核糖核酸；“dna酶”是指脱氧核糖核酸酶；“cdna”是指互补dna；“dntp”是指三磷酸脱氧核苷酸；“dtt”是指二硫苏糖醇；“edci”是指1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐；“edta”是指乙二胺四乙酸；“egta”是指乙二醇-双(2-氨基乙醚)-n,n,n',n'-四乙酸；“etoac”是指乙酸乙酯；“etoh”是指乙醇(ethanol)或乙醇(ethylalcohol)；“fbs”是指胎牛血清；“gapdh”是指甘油醛-3-磷酸酯脱氢酶；“gc”是指气相色谱；“3h-sam”是指s-[甲基-3h]-腺苷-l-甲硫氨酸；“hat”是指次黄嘌呤-氨基喋呤-胸苷；“hatu”是指六氟磷酸[二甲基氨基(三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)亚甲基]-二甲基铵；“hbtu”是指六氟磷酸o-(苯并三唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基脲鎓；“hobt”是指羟基苯并三唑；“hec”是指羟乙基纤维素；“hepes”是指4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸；“hr”是指小时；“hoat”是指1-羟基-7-氮杂苯并三唑；“ic50”是指产生对药剂而言可能的50%最大抑制反应的药剂浓度；“ivti”是指体内目标抑制；“klh”是指匙孔血蓝蛋白；“三仲丁基硼氢化锂溶液”是指三(仲丁基)硼氢化锂；“mdm4”是指小鼠双微体4(mousedoubleminute4)；“meoh”是指甲醇；“mep50”是指甲基转移酶复合体蛋白50(methylosomeprotein50)；“min”是指分钟；“mtbe”是指甲基叔丁基醚；“od”是指光密度；“o.d.”是指外径；“page”是指聚丙烯酰胺凝胶电泳；“pbs”是指磷酸盐缓冲盐水；“pcr”是指聚合酶链式反应；“peg”是指聚乙二醇；“pnpp”是指磷酸4-硝基苯酯；“po”是指经口或口服施用；“ppm”是指百万分之一；“prmt5”是指蛋白精氨酸甲基转移酶5；“pybop”是指(六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基鏻)；“psig”是指磅-力每平方英寸尺寸；“ptfe”是指聚四氟乙烯；“pybrop”是指六氟磷酸溴-三吡咯烷基鏻；“qd”是指一日一次或每日一次施用；“qpcr”是指定量聚合酶链式反应；“rna”是指核糖核酸；“rpmi”是指罗斯威尔帕克纪念研究所(roswellparkmemorialinstitute)；“(r,r)-ts-denebtm”是指n-[(1r,2r)-1,2-二苯基-2-(2-(4-甲基苯甲氧基)乙基氨基)-乙基]-4-甲苯磺酰胺(氯)钌(ii)；“(r,r)-ts-depen”是指(1r,2r)-(-)-n-(4-甲苯磺酰基)-1,2-二苯基乙二胺；“rt”是指逆转录酶；“sah”是指s-腺苷-高半胱氨酸；“sam”是指s-腺苷-甲硫氨酸；“(s)-cbs催化剂”是指(s)-corey-bakshi-shibata催化剂或(s)-1-丁基-3,3-二苯基六氢吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧氮硼杂环戊烯；“sf9”是指克隆衍生的草地贪夜蛾(spodopterafrugiperda)昆虫细胞；“smd1”是指小核核糖核蛋白d1；“spa”是指闪烁近接分析；“ss”是指不锈钢；“swfi”是指用于注射的无菌水；“tea”是指三乙胺；“tris”和“trizma®”是指2-氨基-2-(羟基甲基)-1,3-丙二醇或三(羟基甲基)氨基甲烷；“tbs”是指tris缓冲盐水；“tempo”是指2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基；“thf”是指四氢呋喃；“tame”是指n-α-对甲苯磺酰基-l-精氨酸酯盐酸盐；“tpck”是指甲苯磺酰基苯基丙氨酰基氯甲烷；“wt.”是指重量；“ysi”是指硅酸钇，且“*”是指乘法的数学操作。在以下方案中，除非另外指示，否则所有取代基都为如先前所定义。试剂和起始物质为本领域普通技术人员容易获得的。其他可通过有机和杂环化学的标准技术或通过所遵循的制备和实施例中所描述的程序(包括本文中的任何新型程序)来制备。方案1。方案1描绘式i化合物的形成。“pg”为针对羟基而产生的保护基。此类保护基在本领域中是众所周知且理解的。在方案1步骤1子步骤1中在吡咯并氮处，tris保护的1-乙酰化呋喃核糖与4-氯-7h-吡咯并(2,3-d)嘧啶偶联，得到步骤1的受保护产物。与乙烷亚氨酸、n-(三甲基甲硅烷基)-、三甲基甲硅烷基酯组合的三氟甲磺酸三甲基甲硅烷酯可用作活化剂，以使用溶剂诸如acn将4-氯-7h-吡咯并(2,3-d)嘧啶偶联至受保护呋喃核糖。在一锅2步骤程序中，在碱性条件下使用无机碱(诸如meoh中的甲醇钠)使羟基脱保护，且随后在溶剂诸如丙酮中使用2,2-二甲氧基丙烷，使用对甲苯磺酸单水合物作为活化剂，将核糖主链的2,3-羟基取代选择性地保护为缩酮，得到方案1步骤1子步骤2的产物，随后为步骤2子步骤1的产物。使用碘苯二乙酸酯和催化剂诸如tempo在溶剂诸如acn中，在0℃至室温的温度下将5'醇氧化成羧酸，持续约1小时，得到方案1步骤2子步骤2的缩酮羧酸产物。方案1步骤3的weinreb酰胺产物可如下制备：在适合溶剂诸如etoac中使用n,o-二甲基盐酸羟胺，使用肽偶联剂诸如2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷-2,4,6-三氧化物。替代酰胺诸如吗啉酰胺可在溶剂诸如dcm中用方案1步骤2的羧酸产物和适当亲核胺诸如吗啉，使用偶联试剂诸如cdi来制备。本领域技术人员将认识到，存在由羧酸与胺反应而形成酰胺的多种方法和试剂。例如，在偶联试剂存在的情况下在存在或不存在有机碱(诸如dipea或三乙胺)的情况下，适当胺与方案1步骤2的羧酸产物的反应可提供方案1步骤3或方案1步骤4的化合物。偶联试剂包括碳化二亚胺，诸如dcc、dic和edci；或羰基二咪唑，诸如cdi。酰胺偶联添加剂诸如hobt和hoat也可用于增强反应。另外，可使用非亲核阴离子的脲鎓或鏻盐诸如hbtu、hatu、pybop和pybrop，来替代更传统的偶联试剂。可用grignard试剂处理方案1步骤3的weinreb酰胺产物或方案1步骤4的吗啉酰胺产物，以分别形成方案1步骤5和方案1步骤6的产物。本领域技术人员将认识到适当的grignard试剂可与酰胺反应，或grignard试剂可由商业grignard试剂(诸如与适当溴或碘取代的苯化合物的氯化异丙基镁-氯化锂络合物)原位产生，得到方案1步骤5和方案1步骤6的产物。或可替代地，grignard试剂可用适当溴或氯取代的苯化合物与镁切屑和碘原位产生，得到方案1步骤5的产物。方案1步骤5和方案1步骤6的酮产物可在第二grignard反应中反应，得到方案1步骤7的羟基产物，其中r2不为氢且r2如先前所定义。在溶剂诸如thf中在约0℃温度下，将方案1步骤5或方案1步骤6的产物用适当烷基grignard试剂处理，并用1nhcl或氯化铵水溶液淬灭后，得到方案1步骤7的产物。在方案1步骤8子步骤1针对r3=nh2的式i的产物的置换中，吡咯并嘧啶的4-氯置换成胺，可用nh3(诸如meoh中的7nnh3)完成。该反应可在密封容器中进行并在微波中在约100℃下加热。或者，在密封容器中在加热下在约80-110℃下，氢氧化铵水溶液(约28-30%wt%，于水中)可用于置换氯化物，持续约8-24小时。在方案1步骤8子步骤1针对r3=ch3的偶联中，吡咯并嘧啶的4-氯可在以下条件下转化成甲基：在pd偶联条件下，使用钯源(诸如四(三苯基膦)钯(0))与al(ch3)3，在溶剂(诸如thf或1,4-二氧杂环己烷)中在惰性气氛下在约70-80℃温度下。在方案1步骤8子步骤1针对r3=h的氢化中，在氢化条件下吡咯并嘧啶的4-氯可被移除。此类化合物的氢化在本领域中是众所周知且理解的。在方案1步骤8子步骤2中，在酸性条件诸如水或hcl中的tfa，诸如二氧杂环己烷和meoh中的4n或2-丙醇和水中的4.99m下，受保护缩酮可被脱保护，得到式i化合物。此类化合物的脱保护在本领域中是众所周知且理解的。方案2。或者在方案2中，针对r2=h，方案1步骤5或步骤6的酮产物可使用非手性或手性还原剂以非对映受控方式还原，得到一种非对映异构体富集的羟基产物。例如，在溶剂诸如thf中在约-78℃的温度下用三仲丁基硼氢化锂溶液(l-selectride®)的酮还原产生方案2步骤1的作为非对映异构性的富集或主要产物的羟基产物。或者在方案2步骤2中，手性还原催化剂可选择性地产生作为富集或主要非对映异构体的羟基产物，其中羟基立体构型与用三仲丁基硼氢化锂溶液条件产生的羟基产物的羟基立体构型相反。可用的此类手性催化剂的实例包括在溶剂诸如thf中在约-15℃的温度下使用硼烷-thf复合物的(s)-cbs-催化剂；或可替代地，在约室温下使用氧代栓系的钌(ii)络合物催化剂诸如(r,r)-ts-denebtm与甲酸/三乙胺的络合物；或可替代地，在溶剂混合物诸如两相水/dcm系统中在约室温下用铱(iii)络合物。本领域技术人员将认识到适当的铱(iii)络合物可从商业[cp*ircl2]2和(r,r)-ts-depen原位产生，得到方案2步骤2的产物。通常发现使用以上手性还原催化剂(s)-cbs或(r,r)-denebtm或铱(iii)络合物的来自方案2步骤2的产物的主要或富集非对映异构体为本发明中所描述的实施例中所形成的羟基中心的非对映构型。产生本发明化合物的替代合成方法使用mitsunobu反应(方案2步骤3)，其涉及亲核试剂诸如4-硝基苯甲酸与醇反应以形成酯。mitsunobu反应在本领域中是众所周知的，且涉及使用酸诸如4-硝基苯甲酸、三苯基膦和偶氮二羧酸酯(诸如偶氮二甲酸二乙酯(dead)或偶氮二甲酸二异丙酯(diad))在极性非质子性溶剂诸如thf中在约0℃到室温的温度下，将醇转化成酯。在用亲核试剂的mitsunobu醇活化和置换期间，醇立构中心经历立体化学的反转。通过使用mitsunobu反应的此方法，在方案2步骤1中由三仲丁基硼氢化锂溶液还原产生的富集非对映异构体可转化成同一主要非对映异构体富集的具有醇立体构型的产物，如在方案2步骤2中用(s)-cbs或(r,r)-ts-denebtm或铱(iii)络合物催化剂所产生。在方案2步骤5子步骤1中，针对r3=nh2的式i的产物，酯可随后皂化成醇，且吡咯并嘧啶的4-氯在一锅反应中以与方案1步骤8所讨论的相同的方式用胺置换。在方案2步骤5子步骤2中，如方案1步骤8子步骤2中所讨论，受保护缩酮可在酸性条件下脱保护，得到式i化合物。在方案2步骤4中，针对r3=nh2、ch3或h的方案2步骤2的产物可如方案1步骤8子步骤1中所讨论实现，或可替代地，氢氧化铵水溶液(约28-30%wt%，于水中)和二氧杂环己烷可用于在以下条件下置换氯化物：使用连续流化学法在加热下在约200℃和10ml/min的流动速率(30分钟保留时间)下，或可替代地，在约200℃和流动速率0.251ml/min(30分钟保留时间)下。在方案2步骤4子步骤2中，受保护缩酮可如方案1步骤8子步骤2中所讨论脱保护，或可替代地，受保护缩酮可在以下条件下脱保护：用hcl水溶液(约6n，于水中)在etoh/meoh/etoac混合物中使用连续流化学法，在加热下在约55℃和1.5ml/min的流动速率(20分钟保留时间)下，或用hcl水溶液(约4n，于水中)在etoh中在约82℃和流动速率0.288ml/min(10分钟保留时间)下，得到式i化合物。本领域技术人员将认识到所例示化合物的1hnmr光谱通常可用于确定所产生的单一非对映异构体的身份以及其非对映异构富集或纯度的程度。在任选步骤中，式i化合物的药学上可接受的盐可通过在合适的溶剂中在标准条件下使适当的式i游离碱与适当药学上可接受的酸反应来形成。此类盐的形成在本领域中是众所周知且理解的。本发明化合物如以下实施例中所说明来制备。以下制备和实施例进一步说明本发明且代表本发明化合物的典型合成。试剂和起始物质易于利用或可由本领域普通技术人员易于合成。应理解，制备和实施例以说明而非限制的方式阐述，且本领域普通技术人员可进行多种修改。本发明化合物的非对映异构构型可通过标准技术诸如x射线分析、1hnmr和与手性hplc保留时间的相关性来确定。lc-es/ms在agilent®hp1100液相色谱系统上进行。电喷雾质谱测量(以正和/或负模式获得)在接至hp1100hplc的质量选择性检测器四极质谱仪上进行。lc-ms条件(低ph)：柱：phenomenex®gemini®nxc182.1×50mm3.0μm；梯度：3分钟内5-100%b，随后100%b持续0.75分钟；柱温度：50℃+/-10℃；流动速率：1.2ml/min；溶剂a：具有0.1%hcooh的去离子水；溶剂b：具有0.1%甲酸的acn；波长：214nm。替代lc-ms条件(高ph)：柱：xterra®msc18柱2.1×50mm，3.5μm；梯度：5%溶剂a持续0.25分钟，3分钟内梯度从5%至100%溶剂b，且100%溶剂b持续0.5分钟，或3分钟内10%至100%溶剂b且100%溶剂b持续0.75分钟；柱温度：50℃+/-10℃；流动速率：1.2ml/min；溶剂a：10mmnh4hco3ph~9-10；溶剂b：acn；波长：214nm。nmr光谱在brukeraviiihd400mhznmr光谱仪上进行，作为以ppm(化学位移δ)报告的cdcl3或(cd3)2so溶液获得，其使用残余溶剂[cdcl3，7.26ppm；(cd3)2so，2.05ppm]作为参考标准。当报告峰多重性时，可使用以下缩写：s(单重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)、br-s或bs(宽单重峰)、dd(两个二重峰)、dt(两个三重峰)和td(三个二重峰)。当报告时偶联常数(j)以赫兹(hz)报告。制备1苯甲酸[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二苯甲酰氧基-5-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)四氢呋喃-2-基]甲酯在室温下悬浮4-氯-7h-吡咯并-(2,3-d)嘧啶(55.3g，0.36mol)/acn(1.8l)且搅拌。逐滴添加乙烷亚氨酸(ethanimidicacid)、n-(三甲基甲硅烷基)-、三甲基甲硅烷基酯(110.8ml，0.45mol)并在室温下在n2下搅拌混合物20分钟。逐滴添加三氟甲磺酸三甲基甲硅烷酯(1.0l，0.54mol)，随后逐份添加苯甲酸[(2r,3r,4r,5s)-5-乙酰氧基-3,4-二苯甲酰氧基-四氢呋喃-2-基]甲酯(272.4g，0.54mol)。在85℃(内部)下加热混合物4小时。将混合物冷却至40℃(内部)并将额外苯甲酸[(2r,3r,4r,5s)-5-乙酰氧基-3,4-二苯甲酰氧基-四氢呋喃-2-基]甲酯(45.40g，90.0mmol)逐份添加至混合物中。在85℃(内部)下加热反应混合物2小时。在n2下在室温下再搅拌混合物18小时。将水(500ml)和etoac(500ml)添加至反应物中。分离所得有机层。用etoac(3×250ml)萃取水层。合并有机萃取物并用nahco3饱和水溶液(500ml)和氯化钠饱和水溶液(500ml)洗涤。经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下移除溶剂。经由硅胶色谱用10-30%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化，得到作为无色油的标题化合物(98.0g，41%产率)。。制备2[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]甲醇将苯甲酸[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二苯甲酰氧基-5-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)四氢呋喃-2-基]甲酯(80.5g，134.61mmol)悬浮于meoh(805ml)中，并在室温下用0.5m甲醇钠于meoh(53.8ml，26.92mmol)中的溶液处理3小时。冷却至0℃并用dowex®50wx2树脂(最高达ph<5)处理混合物。在真空中过滤且浓缩，得到残余物。从mtbe(100ml)研磨。倾析混合物且干燥所得残余物，得到白色固体。将固体悬浮于丙酮(1100ml)中，并将2,2-二甲氧基丙烷(41.5ml，336.5mmol)和对甲苯磺酸单水合物(25.6g，134.6mmol)添加至混合物中。在室温下搅拌反应混合物3小时。在减压下移除最高达~1/3的溶剂，且添加dcm(250ml)和水(100ml)。分离有机层并用dcm(2×100ml)萃取水层。合并有机萃取物，并用nahco3饱和水溶液(150ml；ph~9)和氯化钠饱和水溶液(100ml)洗涤。有机层经硫酸钠干燥。过滤并在减压下移除溶剂，得到粗混合物。经由硅胶色谱用30%etoac/dcm洗脱来纯化，得到作为无色油的标题化合物(26.5g，60%产率)。。制备3(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-甲酸将[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]甲醇(60.0g，184.2mmol)溶解于acn(250ml)中。添加水(180ml)并将混合物冷却至0℃。在0℃下逐份添加碘苯二乙酸酯(160g，496.8mmol)，随后逐份添加tempo(14g，89.6mmol)。在室温下搅拌混合物1小时。在减压下移除溶剂并将粗残余物溶解于etoac(300ml)中。在0℃下添加水(100ml)且分离所得有机层。用etoac(3×100ml)萃取水层。合并有机萃取物并用10%硫代硫酸盐水溶液(2×100ml)和水(2×100ml)洗涤。经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下移除溶剂，得到浅黄色固体。用己烷(400ml)混合粗物质并在室温下搅拌混合物1小时。过滤所得固体，用己烷(100ml)洗涤，且干燥，得到作为黄色固体的标题化合物(66.7g，89%纯度，100%粗)。。制备4(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-n-甲氧基-n,2,2-三甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-甲酰胺将[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]甲醇(45.0g，138.1mmol)溶解于acn(175ml)中。添加水(133ml)并将混合物冷却至0℃。在0℃下逐份添加碘苯二乙酸酯(122.3g，379.7mmol)，随后逐份添加tempo(10.5g，67.0mmol)。在室温下搅拌混合物1小时。在0℃下添加水(100ml)和etoac(250ml)，且分离所得有机层。用etoac(3×100ml)萃取水层。合并有机萃取物并用水(100ml)、20%w/v亚硫酸氢钠水溶液(100ml)和水(100ml)洗涤。经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下移除溶剂，得到棕色固体(53.0g)。在室温下将此固体溶解于etoac(400ml)中，且逐份添加n,o-二甲基盐酸羟胺(18.8g，193.0mmol)。在室温下搅拌混合物5分钟，逐滴添加1.67m的2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷-2,4,6-三氧化物于etoac(176.3ml，294mmol)中的溶液。在室温下在n2下搅拌反应混合物3天。将反应混合物冷却至0℃且添加水(150ml)和etoac(150ml)。分离所得有机层并用etoac(3×150ml)萃取水层。合并有机萃取物并用水(200ml)洗涤。经硫酸钠干燥有机层，过滤，且浓缩，得到粗混合物。通过过滤经由二氧化硅塞用0-30%etoac/dcm的梯度洗脱来纯化，得到作为白色玻璃状固体的标题化合物(31.0g，经两个步骤，60%)。。制备5[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-吗啉代-甲酮将(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-甲酸(63.7g，166mmol)悬浮于dcm(320ml)中并在0℃下搅拌。逐份添加1,1'-羰基二咪唑(37.7g，232mmol)，并在室温下搅拌混合物45分钟。将吗啉(21.7g，249mmol)逐滴添加至混合物中，并在室温下搅拌3天。用dcm和水(150ml)稀释反应混合物。分离所得有机层并用dcm(3×100ml)萃取水层。合并有机萃取物并用水(100ml)和氯化钠饱和水溶液(100ml)洗涤。经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下移除溶剂。经由硅胶色谱用20-60%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化，得到作为棕色泡沫的标题化合物(34g，50%产率)。。制备6[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-苯基-甲酮在0℃下经2分钟将3.0m溴化苯基镁于乙醚(1.79ml，5.38mmol)中的溶液逐滴添加至[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-吗啉代-甲酮(1.00g，2.45mmol)于thf(15ml)中的溶液中。在0℃下搅拌30分钟，且添加1nhcl水溶液(7.3ml)。3分钟后，用dcm萃取水层。分离各层并在减压下蒸发有机层。经由硅胶色谱，经25分钟用35-75%的mtbe/dcm的10%混合物/己烷的梯度洗脱来纯化，得到标题化合物(893mg，91%产率)。。制备7[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲酮将(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-n-甲氧基-n,2,2-三甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-甲酰胺(30.0g，78.4mmol)溶解于thf(300ml)中且冷却至-10℃。逐滴添加1.0m溴化4-氯苯基镁于乙醚(157ml，157mmol)中的溶液，并在室温下搅拌混合物1小时。冷却至0℃且通过添加饱和氯化铵水溶液(50ml)和etoac(200ml)来淬灭反应混合物。分离所得有机层并用etoac(3×100ml)萃取水层。合并有机萃取物，用水(250ml)洗涤，且经硫酸钠干燥。过滤并在减压下移除有机滤液，得到粗混合物。经由硅胶色谱用0-15%etoac/dcm的梯度洗脱来纯化，得到作为白色固体的标题化合物(30.1g，84%产率)。。替代制备7将(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-n-甲氧基-n,2,2-三甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-甲酰胺(257.0g，617.7mmol)溶解于thf(2570ml)中且冷却至-15℃。逐滴添加1.0m溴化4-氯苯基镁于2-甲基四氢呋喃(1050ml，1050mmol)中的溶液，并在-15℃下搅拌混合物1小时。通过添加饱和氯化铵水溶液(1000ml)和水(500ml)淬灭反应混合物。分离所得有机层并用etoac(2×500ml)萃取水层。合并有机萃取物且经硫酸钠干燥。过滤并在减压下蒸发滤液，得到白色固体。通过从etoh(5300ml)再结晶纯化，得到作为白色固体的标题化合物(238.3g，87%产率)。。制备8[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-(三氟甲基)苯基]甲酮在室温下将1-溴-4-(三氟甲基)苯(4.0g，18mmol)逐滴添加至2.0m氯化异丙基镁于thf(8ml，16mmol)中的溶液中，于额外thf(10ml)中。在室温下搅拌混合物24小时。在室温下向此混合物逐滴添加(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-n-甲氧基-n,2,2-三甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-甲酰胺(3.4g，8.9mmol)于thf(14ml)中的溶液，并在室温下搅拌2小时。冷却至0℃并用10%柠檬酸溶液(100ml)淬灭反应物。添加mtbe(200ml)且搅拌混合物20分钟。分离两相并用mtbe萃取水层。合并有机萃取物，用饱和氯化铵水溶液、水和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下移除溶剂，得到残余物。通过硅胶色谱用0-50%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化残余物，得到作为黄色泡沫的标题化合物(3.60g，87%产率)。。制备9[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3-氯苯基)甲酮将1-氯-3-碘苯(0.42g，1.7mmol)溶解于thf(5ml)中，且冷却至0℃。经10分钟逐滴添加1.3m氯化异丙基镁-氯化锂络合物于thf中的溶液(1.23ml，1.6mmol)，并在0℃下搅拌1小时。在0℃下添加[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-吗啉代-甲酮(0.5g，1.2mmol)于thf(5ml)中的溶液。在0℃下搅拌1小时后，通过添加1nhcl水溶液(2ml)来淬灭混合物。用etoac稀释所得混合物，并用水和氯化钠饱和水溶液洗涤有机层。经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱，经20分钟用0-25%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化，得到标题化合物(0.35g，66%产率)。。制备10[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯-2-氟-苯基)甲酮将4-氯-2-氟-1-碘-苯(1.9g，7.5mmol)溶解于thf(50ml)中，且冷却至0℃。添加1.3m氯化异丙基镁-氯化锂络合物于thf(6.3ml，8.2mmol)中的溶液，并在0℃下搅拌1小时。在0℃下添加[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-吗啉代-甲酮(2.8g，6.8mmol)于thf(10ml)中的溶液。在0℃下搅拌5小时后，通过添加1nhcl水溶液(9.09ml，9.09mmol)淬灭混合物。用etoac稀释所得混合物，并用水和氯化钠饱和水溶液洗涤有机层。经硫酸钠干燥有机萃取物，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用0-50%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化，得到标题化合物(1.57g，51%产率)。。制备11[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3-乙基苯基)甲酮在0℃下经10分钟将0.5m溴化3-乙基苯基镁于thf(5.8ml，2.9mmol)中的溶液逐滴添加至[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-吗啉代-甲酮(1.0g，2.5mmol)于thf(10ml)中的溶液中。在0℃下搅拌30分钟且通过添加1nhcl水溶液(3.9ml，3.9mmol)来淬灭。用水稀释，并用etoac萃取水层。经硫酸钠干燥有机萃取物，过滤，并在减压下蒸发滤液。经由硅胶色谱，经30分钟用0-100%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化残余物，得到标题化合物(0.98g，94%产率)。。制备124-[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-羰基]苯甲腈在0℃下将4-溴苯甲腈(1.36g，7.40mmol)溶解于thf(10ml)中。添加1.3m氯化异丙基镁-氯化锂络合物于thf(6.6ml，8.53mmol)中的溶液，并在0℃下搅拌2小时。在0℃下通过套管将此混合物加至(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-n-甲氧基-n,2,2-三甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-甲酰胺(2.18g，5.68mmol)于thf(14ml)中的溶液中。温热至室温且搅拌2小时。在0℃下通过添加1nhcl水溶液(9.09ml)来淬灭。用etoac和水稀释反应混合物。分离各层并用etoac萃取水层。合并有机萃取物并用碳酸氢盐饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用15-30%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化残余物，得到标题化合物(1.49g，62%产率)。。制备13[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3,4-二氟苯基)甲酮在-15℃下将4-溴-1,2-二氟-苯(2.21g，1.29ml，11.4mmol)添加至2.0m氯化异丙基镁于thf(6.05ml，12.1mmol)中的溶液中，且搅拌15分钟。温热反应混合物并在0℃下搅拌1小时。在0℃下将此混合物添加至(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-n-甲氧基-n,2,2-三甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-甲酰胺(1.25g，3.27mmol)于thf(16.3ml)中的溶液中。15分钟后，通过添加1nhcl水溶液(5ml)来淬灭。用etoac(30ml)稀释反应混合物并在室温下剧烈搅拌两相混合物15分钟。分离各层并用etoac(2×40ml)萃取水层。合并有机萃取物并用碳酸氢盐饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤并在减压下蒸发滤液。经由硅胶色谱用4%etoac/dcm洗脱来纯化残余物，得到标题化合物(1.12g，74%产率)。。制备14[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3,4-二氯苯基)甲酮在-15℃下将1-溴-3,4-二氯苯(1.04g，4.57mmol)添加至2.0m氯化异丙基镁-氯化锂络合物于thf(1.2ml，2.4ml)中的溶液中。15分钟后，将混合物温热至0℃且搅拌1小时。在0℃下将此混合物添加至(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-n-甲氧基-n,2,2-三甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-甲酰胺(0.50g，1.31mmol)于thf(6.5ml)中的溶液中，且搅拌10分钟。用1nhcl水溶液(5ml)淬灭，且添加etoac(30ml)。在室温下剧烈搅拌15分钟。分离各层并用etoac(2×40ml)萃取水层。合并有机萃取物并用碳酸氢盐饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤，并在减压下移除溶剂。经由硅胶色谱用10-20%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化，得到标题化合物(1.49g，62%产率)。。制备15[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(对甲苯基)甲酮在-15℃下将1.0m溴化对甲苯基镁于thf(2.4ml，2.4mmol)中的溶液逐滴添加至[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-吗啉代-甲酮(500mg，1.22mmol)于thf(6.1ml)中的搅拌溶液中。1小时后，用饱和氯化铵水溶液(15ml)淬灭并用etoac(3×40ml)萃取。合并有机萃取物并用碳酸氢盐饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用10-20%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化残余物，得到标题化合物(405.3mg，80%产率)。。制备16[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氟苯基)甲酮在0℃下向[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-吗啉代-甲酮(2.0g，4.90mmol)于thf(20ml)中的溶液中添加1.0m溴化4-氟苯基镁于thf(9.8ml，9.8mmol)中的溶液。在0℃下搅拌15分钟，随后在室温下搅拌1.5小时。将混合物冷却至0℃且添加饱和氯化铵(12ml)。添加etoac(25ml)并在室温下剧烈搅拌15分钟。分离各层并用etoac(2×25ml)萃取水层。合并有机萃取物并用碳酸氢盐饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下蒸发滤液。经由硅胶色谱用2-10%etoac/dcm的梯度洗脱来纯化，得到标题化合物(1.76g，83%产率)。。制备17[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(2-氟苯基)甲酮在0℃下将1-溴-2-氟苯(2.39g，7.88mmol)溶解于thf(15ml)中。添加1.3m氯化异丙基镁-氯化锂络合物于thf(9.1ml，11.8mmol)中的溶液，并在0℃下搅拌1.5小时。在0℃下通过套管将此混合物加至[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-吗啉代-甲酮(2.93g，7.17mmol)于thf(30ml)中的溶液中，且搅拌45分钟。使混合物温热至室温，且搅拌2小时。将反应物冷却至0℃且通过添加1nhcl水溶液(11.5ml)淬灭。用etoac和水稀释反应混合物。分离各层并用etoac萃取水层。合并有机萃取物并用nahco3饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用10-70%mtbe/己烷的梯度洗脱来纯化粗物质，得到标题化合物(2.14g，71%产率)。。制备18[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[2-(三氟甲基)苯基]甲酮在0℃下将2-溴苯并三氟化物(2.97g，13.1mmol)溶解于thf(15ml)中。添加1.3m氯化异丙基镁-氯化锂络合物于thf(8.6ml，11.2mmol)中的溶液，并在0℃下搅拌1.5小时。将混合物温热至室温且搅拌30分钟。将混合物再冷却至0℃，并在0℃下通过套管将此混合物加至[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-吗啉代-甲酮(3.05g，7.46mmol)于thf(20ml)中的溶液中，且搅拌2.5小时。使混合物温热至室温且搅拌1小时。将混合物冷却至0℃且添加1nhcl水溶液(14.9ml)。用etoac和水稀释混合物。分离各层并用etoac萃取水层。合并有机萃取物并用饱和nahco3和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用25-50%mtbe/己烷的梯度洗脱来纯化，得到标题化合物(1.48g，42%产率)。。制备19[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-氯-3-(环丙氧基)苯基]甲酮在室温下搅拌镁切屑(4.97g，204mmol)和碘(920mg，3.63mmol)于thf(150ml)中的混合物10分钟。逐滴缓慢添加4-溴-1-氯-2-(环丙氧基)苯(46.0g，186mmol)于thf(400ml)中的溶液，且使混合物回流30分钟。冷却至40℃，且经10分钟将此混合物逐滴缓慢添加至(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-n-甲氧基-n,2,2-三甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-甲酰胺(35.0g，91.6mmol)于thf(400ml)中的溶液中。在室温下搅拌所得混合物30分钟。冷却至0℃且通过添加饱和氯化铵水溶液(200ml)和mtbe(200ml)来淬灭反应混合物。分离所得有机层并用mtbe(2×200ml)萃取水层。合并有机萃取物，用水(150ml)、氯化钠饱和水溶液(100ml)洗涤，且经硫酸钠干燥。过滤并在减压下浓缩滤液，得到粗混合物。通过从mtbe(80ml)和庚烷(400ml)研磨来纯化，得到标题化合物(48.8g，89.9%产率)。制备20(1r)-1-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(4-氯苯基)乙醇将[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲酮(15.9g，36.6mmol)溶解于thf(175ml)中，且冷却至0℃。逐滴添加3.4m溴化甲基镁于2-甲基四氢呋喃(21.53ml，73.3mmol)中的溶液，并在0℃下搅拌混合物2小时。用饱和氯化铵水溶液(50ml)淬灭反应混合物，且随后添加etoac(250ml)。分离所得有机层并用etoac(3×100ml)萃取水层。合并有机萃取物，用水(100ml)洗涤，且经硫酸钠干燥。过滤并在减压下浓缩滤液，得到白色玻璃状固体。经由硅胶色谱用10-15%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化，得到标题化合物(11.5g，70%产率)。。制备211-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(3,4-二氯苯基)乙醇的非对映异构体将[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3,4-二氯苯基)甲酮(0.50g，1.07mmol)溶解于thf(5.3ml)中，且冷却至0℃。缓慢添加3.0m溴化甲基镁于乙醚(0.53ml，1.60mmol)中的溶液，并在0℃下搅拌1小时。通过添加饱和氯化铵(20ml)来淬灭。用etoac(40ml)稀释且分离各层。用额外etoac(3×40ml)萃取水层。合并有机萃取物，并用碳酸氢盐饱和水溶液随后用氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用25-30%mtbe/己烷的梯度洗脱来纯化，得到标题化合物(342mg，66%产率)。。制备221-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(2-氟苯基)乙醇的非对映异构体将[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(2-氟苯基)甲酮(0.685g，1.64mmol)溶解于thf(20ml)中，并将混合物冷却至0℃。添加3m溴化甲基镁于乙醚(1.09ml，3.27mmol)中的溶液，并在0℃下搅拌2小时。通过添加1nhcl水溶液(3.44ml)来淬灭反应物。用etoac和水稀释反应混合物。分离各层并用etoac萃取水层。合并有机萃取物并用nahco3饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用10-75%mtbe/己烷的梯度洗脱来纯化物质，得到作为非对映异构体的标题化合物(0.482g，68%产率)。。制备231-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-[2-(三氟甲基)苯基]乙醇的非对映异构体将[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[2-(三氟甲基)苯基]甲酮(0.434g，0.928mmol)溶解于thf(12ml)中，并将混合物冷却至0℃。添加3.0m溴化甲基镁于乙醚(0.62ml，1.86mmol)中的溶液，并在0℃下搅拌30分钟。通过添加1nhcl水溶液(1.95ml)来淬灭反应物。用etoac和水稀释反应混合物。分离各层并用etoac萃取水层。合并有机萃取物并用nahco3饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用10-50%mtbe/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到作为非对映异构体的标题化合物(0.202g，45%产率)。。制备241-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙醇将[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-(三氟甲基)苯基]甲酮(0.425g，0.908mmol)溶解于thf(10ml)中，并将混合物冷却至0℃。添加3.0m溴化甲基镁于乙醚(0.45ml，1.35mmol)中的溶液，并在0℃下搅拌1小时。通过添加1nhcl水溶液(1.45ml)淬灭反应物。用etoac和水稀释混合物。分离各层并用etoac萃取水层。合并有机萃取物并用nahco3饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用10-25%mtbe/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到作为非对映异构体的混合物的标题化合物(0.348g，79%产率)。。制备25(s)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲醇在-78℃下，向[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲酮(6.5g，15mmol)于thf(200ml)中的溶液中缓慢添加1.0m三仲丁基硼氢化锂溶液于thf(19ml，19mmol)中的溶液。在-78℃下在n2下将混合物搅拌4小时，且随后用饱和氯化铵水溶液(50ml)淬灭。添加etoac(200ml)且分离有机相。用etoac(3×70ml)萃取水相。合并有机萃取物，用水(100ml)洗涤，且经硫酸钠干燥有机层。过滤并在减压下浓缩滤液，得到残余物。通过硅胶色谱用10-30%etoac/己烷的梯度洗脱，来纯化所得残余物，得到标题化合物(4.55g，70%产率)。。制备26(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲醇将[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲酮(4.77g，11.0mmol)和(r,r)-ts-denebtm(357mg，0.549mmol)悬浮于5：2甲酸-三乙胺复合物(45ml)中。在室温下搅拌混合物18小时。用水(300ml)和dcm(75ml)稀释混合物。分离各层并用dcm(3×75ml)萃取水层。合并有机萃取物并在减压下浓缩。经由硅胶色谱，用30-60%的丙酮/己烷的20%混合物/己烷的梯度洗脱，来纯化所得残余物，得到标题化合物(3.50g，73%产率)。。替代制备26在50℃下将[cp*ircl2]2(8.41g，10.45mmol)和(r,r)-ts-depen(7.899，20.91mmol)于1.33/1水/dcm(3972ml)中的混合物搅拌45分钟。冷却至室温且添加甲酸铵(509.7g，7840mmol)。在室温下搅拌两相混合物5分钟，且添加[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲酮(227.0g，522.7mmol)。在室温下搅拌混合物1小时。分离所得有机层并用dcm(1000ml)萃取水层。合并有机萃取物并在减压下浓缩，得到橙色固体。通过从etoh(3400ml)再结晶来纯化所得残余物，得到标题化合物(199.5g，86%产率)。。制备27(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-氯-3-(环丙氧基)苯基]甲醇在40℃下将[cp*ircl2]2(1.58g，1.95mmol)和(r,r)-ts-depen(1.43g；3.90mmol)于1/1水/dcm(860ml)中的混合物搅拌45分钟。冷却至室温且添加甲酸铵(100g，1462mmol)。在室温下搅拌两相混合物5分钟，且逐滴添加[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-氯-3-(环丙氧基)苯基]甲酮(48.8g，97.4mmol)于dcm(100ml)中的溶液，持续10分钟。在室温下搅拌混合物1小时。分离所得有机层并用dcm(2×200ml)萃取水层。合并有机萃取物并用水(200ml)洗涤。经硫酸钠干燥有机萃取物，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用5-10%etoac/dcm的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(35.3g，70%产率)。制备284-硝基苯甲酸[(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲基]酯在0℃下在n2下搅拌(s)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲醇(10.3g，23.7mmol)、4-硝基苯甲酸(5.94g，35.5mmol)和三苯基膦(9.32g，35.5mmol)于thf(120ml)中的混合物。将diad(7.19g，35.5mmol)逐滴添加至混合物中，并在室温下搅拌6小时。在室温下添加额外4-硝基苯甲酸(1.98，11.8mmol)、三苯基膦(3.11g，11.8mmol)和diad(2.40g，11.8mmol)，并在室温下在n2下搅拌混合物18小时。将混合物冷却至0℃并用水(100ml)淬灭。添加etoac(100ml)且分离所得有机层。用etoac(3×75ml)萃取水层。合并有机萃取物，用水(100ml)洗涤，且经硫酸钠干燥。过滤并在减压下浓缩滤液，得到粗混合物。经由硅胶色谱用10-15%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化，得到标题化合物(10.1g，73%产率)。。制备29[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-(三氟甲基)苯基]甲醇的非对映异构体在-78℃下向[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-(三氟甲基)苯基]甲酮(35.0g，74.8mmol)于thf(525ml)中的溶液中缓慢添加1.0m三仲丁基硼氢化锂溶液于thf(93.5ml，93.5mmol)中的溶液。在n2气氛下，在-78℃下将混合物搅拌30分钟，且随后温热至0℃。用饱和氯化铵水溶液淬灭。添加etoac且分离有机相。用etoac萃取水层两次。合并有机萃取物并用水和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩滤液，得到残余物。通过硅胶色谱用0-50%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化，得到标题化合物(22.0g，55%产率)。。制备304-硝基苯甲酸[[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-(三氟甲基)苯基]甲基]酯的非对映异构体将[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-(三氟甲基)苯基]甲醇(21.0g，44.7mmol)的非对映异构体、4-硝基苯甲酸(14.9g，89.4mmol)和三苯基膦(23.45g，89.4mmol)溶解于thf(315ml)中，并在0℃下在n2下搅拌。将diad(18.1g，89.4mmol)逐滴添加至混合物中，并在室温下搅拌3小时。在室温下添加额外4-硝基苯甲酸(7.50g，44.7mmol)、三苯基膦(11.8g，44.7mmol)和diad(9.1g，44.7mmol)，并在室温下在n2下搅拌混合物2小时。将混合物冷却至0℃，用水(100ml)淬灭，并用etoac(200ml)稀释。分离所得有机层并用etoac(3×75ml)萃取水层。合并有机萃取物并用水(100ml)和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液，得到残余物。经由硅胶色谱用0-50%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化残余物，得到标题化合物(18.5g，60%产率)。。制备31[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3-氯苯基)甲醇的非对映异构体在-78℃下向[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3-氯苯基)甲酮(0.35g，0.81mmol)于thf(10.7ml)中的溶液中缓慢添加1.0m三仲丁基硼氢化锂溶液于thf(1.05ml，1.05mmol)中的溶液。在-78℃下在n2下搅拌混合物10分钟，且随后添加1nhcl水溶液(1.3ml)。添加etoac(50ml)，并用水(10ml)、随后用氯化钠饱和水溶液(10ml)洗涤有机层。经硫酸钠干燥有机萃取物，过滤，并在减压下浓缩滤液，得到残余物。经由硅胶色谱用10-30%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化残余物，得到标题化合物(0.22g，61%产率)。。制备324-硝基苯甲酸[[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3-氯苯基)甲基]酯的非对映异构体在0℃下在n2下将[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3-氯苯基)甲醇的非对映异构体(0.100g，0.229mmol)、4-硝基苯甲酸(0.76g，0.46mmol)和三苯基膦(0.12g，0.46mmol)搅拌于thf(1ml)中。将diad(0.95g，0.46mmol)逐滴添加至混合物中，并在室温下搅拌1.5小时。添加额外4-硝基苯甲酸(1.98g，11.8mmol)、三苯基膦(0.015g，0.057mmol)和diad(0.012g，0.057mmol)，并在室温下在n2下搅拌混合物18小时。将混合物冷却至0℃。添加水(10ml)、etoac(10ml)，且分离所得有机层。用etoac(2×10ml)萃取水层。合并有机萃取物，用水(100ml)洗涤，且经硫酸钠干燥有机层。过滤并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用10-15%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.11g，82%产率)。。制备334-[[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-羟基-甲基]苯甲腈的非对映异构体将4-[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-羰基]苯甲腈(1.33g，3.14mmol)，和1.0m(s)-1-丁基-3,3-二苯基六氢吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧氮硼杂环戊烯于甲苯中的溶液(0.31ml，0.31mmol)溶解于thf(50ml)中，并将混合物冷却至-15℃。添加1.0m硼烷-thf复合物于thf(2.07ml，2.07mmol)中的溶液。使反应物温热至室温且搅拌反应物17小时。将反应混合物冷却至0℃且通过添加meoh(5ml)淬灭。用饱和氯化铵水溶液(40ml)和etoac(80ml)稀释。分离各层并用额外etoac萃取水层。合并有机萃取物，经硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用25-40%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.75g，58%产率)。。制备34[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3,4-二氯苯基)甲醇的非对映异构体将[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3,4-二氯苯基)甲酮(490.0mg，1.045mmol)，和1.0m(s)-1-丁基-3,3-二苯基六氢吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧氮硼杂环戊烯(0.10ml，0.10mmol)于甲苯中的溶液溶解于thf(20.9ml)中，并将混合物冷却至-15℃。添加1.0m硼烷-thf复合物于thf(0.69ml，0.69mmol)中的溶液。使反应物温热至室温且搅拌反应物17小时。通过添加meoh(1ml)淬灭。用饱和氯化铵水溶液(40ml)和etoac(40ml)稀释。分离各层并用额外etoac(2×40ml)萃取水层。合并有机萃取物并用碳酸氢盐饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机萃取物，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用5-25%mtbe/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(246.8mg，50%产率)。。制备35(r)-(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-苯基-甲醇将[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-苯基-甲酮(0.866g，2.17mmol)和(r,r)-ts-denebtm(70.4mg，10.8mmol)悬浮于5：2甲酸-三乙胺复合物(15ml)中，并在室温下搅拌4小时。用水(60ml)稀释反应混合物。用dcm萃取水层。在减压下蒸发有机萃取物。经由硅胶色谱，经20分钟用15-30%丙酮/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.420g，48%产率)。。制备36[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯-2-氟-苯基)甲醇的非对映异构体将[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯-2-氟-苯基)甲酮(0.50g，1.0mmol)和(r,r)-ts-denebtm(30mg，0.05mmol)悬浮于5：2甲酸-三乙胺复合物(10ml)中，并在室温下搅拌1小时。用水(50ml)稀释反应混合物，并用dcm萃取水层。经硫酸钠干燥有机萃取物，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用0-40%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.45g，95%产率)。。制备37[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3-乙基苯基)甲醇的非对映异构体将[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3-乙基苯基)甲酮(0.975g，2.28mmol)和(r,r)-ts-denebtm(74mg，0.11mmol)悬浮于5：2甲酸-三乙胺复合物(22ml)中，并在室温下搅拌4小时。用水(250ml)稀释反应混合物。用dcm萃取水层。经硫酸钠干燥有机萃取物，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱，经30分钟用0-20%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.37g，38%产率)。。制备38[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3,4-二氟苯基)甲醇的非对映异构体在室温下将(r,r)-ts-denebtm(93mg，0.143mmol)添加至[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3,4-二氟苯基)甲酮(1.12g，2.57mmol)和5：2甲酸-三乙胺复合物(10ml)的混合物中。用n2冲洗反应容器并在室温下搅拌混合物1.5小时。用水(75ml)和dcm(25ml)稀释所得混合物且混合5分钟。分离各层并用dcm萃取水层。合并有机萃取物且经硫酸镁干燥。过滤并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用5-10%etoac/dcm的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到作为非对映异构体的标题化合物(0.8g，69%产率)。es/msm/z438[m+h]+。制备39[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(对甲苯基)甲醇的非对映异构体在室温下将5：2甲酸-三乙胺复合物(4.0ml)添加至(r,r)-ts-denebtm(31.8mg，0.048mmol)和[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(对甲苯基)甲酮(405.0mg，0.978mmol)于1,4-二氧杂环己烷(4.0ml)中的混合物中。在室温下搅拌4小时。用水(15ml)稀释并用etoac(3×40ml)萃取。合并有机萃取物并用碳酸氢盐饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用10-30%mtbe/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(144mg，38%产率)。。制备40[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氟苯基)甲醇的非对映异构体将(r,r)-ts-denebtm(242mg，0.372mmol)添加至[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氟苯基)甲酮(1.41g，3.24mmol)、5：2甲酸-三乙胺复合物(25ml)和1,4-二氧杂环己烷(12ml)的混合物中，并在室温下搅拌反应混合物2小时。将混合物用水(80ml)和dcm(40ml)稀释且混合5分钟。分离各层并用额外dcm(2×40ml)萃取水层。合并有机萃取物且经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用4-10%etoac/dcm的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(1.01g，73%产率)。es/msm/z420[m+h]+。制备41(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-苯基-甲醇在密封的反应容器中，搅拌(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-苯基-甲醇(0.399g，0.993mmol)和7nnh3于meoh(15ml，105mmol)中的混合物。在100℃下微波混合物8小时。将容器冷却至室温并在n2流下蒸发溶剂。经由硅胶色谱，用50-100%的10%meoh/mtbe混合物/己烷的梯度洗脱25分钟来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.295g，78%产率)。es/msm/z383.2[m+h]+。制备42(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲醇将(r)-4-硝基苯甲酸[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲基]酯(10.1g，17.3mmol)、氢氧化铵(28%，于水中，50ml)和1,4-二氧杂环己烷(50ml)添加至密封容器中，并在110℃下加热18小时。将反应物冷却至0℃且添加水(50ml)和etoac(100ml)。分离所得有机层并用etoac(3×50ml)萃取水层。合并有机萃取物且经硫酸钠干燥。过滤并在减压下浓缩滤液，得到残余物。通过过滤经由二氧化硅塞用己烷：etoac(1：1)的等度混合物洗脱，来纯化残余物，得到作为棕色玻璃状固体的标题化合物(6.78g，75%产率)，其不经进一步纯化即使用。替代制备42将300ml无缝不锈钢管状反应器(o.d.=1/8")放置于gc烘箱内部。经40分钟用3：10比率的氢氧化铵(28%，于水中)/二氧杂环己烷以10ml/min冲洗。将n2的背压(800psig)施加至反应系统的出口，并将gc烘箱的温度设定在200℃。使用高压1lteledyneiscotm注射泵，以10ml/min(30分钟保留时间)将(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲醇(200.0g，458.41mmol)于3：10比率的氢氧化铵(28%，于水中)/二氧杂环己烷(1300ml)中的溶液泵送通过反应器。耗尽此进料溶液后，用以10ml/min泵送的3：10氢氧化铵(28%，于水中)：二氧杂环己烷(600ml)冲洗反应器。在真空下将收集溶液的溶剂移除至1/3体积，添加水(300ml)并用etoac(3×150ml)萃取。合并有机萃取物，用氯化钠饱和水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下蒸发滤液。通过从己烷(200ml)研磨纯化所得残余物，得到标题化合物(189.0g，95%纯度)。。制备43(1r)-1-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(4-氯苯基)乙醇在密封容器中，将(1r)-1-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(4-氯苯基)乙醇(11.4g，25.3mmol)溶解于氢氧化铵(28%，于水中，60ml)和1,4-二氧杂环己烷(60ml)中，并在110℃下加热18小时。冷却至室温并在减压下移除溶剂。添加水(50ml)和etoac(100ml)。分离所得有机层并用etoac(3×100ml)萃取水层。合并有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下蒸发滤液，得到作为棕色玻璃状固体的标题化合物(10.7g，96%产率)。。制备44[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-(三氟甲基)苯基]甲醇的非对映异构体在密封管中，将4-硝基苯甲酸[[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-(三氟甲基)苯基]甲基]酯的非对映异构体(21g，33.9mmol)溶解于氢氧化铵(28wt%，于水中，100ml)和1,4-二氧杂环己烷(100ml)中，并在110℃下加热混合物18小时。将管冷却至室温，通过过滤收集沉淀固体，并用水洗涤滤饼。将滤饼溶解于etoac(300ml)中。用水洗涤所得有机层且经硫酸钠干燥。过滤并在减压下浓缩滤液，得到残余物。通过过滤经由硅胶塞用己烷：etoac(1：1)的等度混合物洗脱，来纯化残余物，得到作为无色油的作为非对映异构体的标题化合物(13.5g，80%产率)。es/msm/z451.2/452.2[m+h]+。制备45[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3-氯苯基)甲醇的非对映异构体在密封的反应容器中，搅拌4-硝基苯甲酸[[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3-氯苯基)甲基]酯的非对映异构体(0.105g，0.18mmol)、1,4-二氧杂环己烷(4ml)和氢氧化铵(30wt%，于水中，6ml)。将反应物加热至85℃。在85℃下24小时后冷却至室温，添加额外氢氧化铵(30wt%，于水中，6ml)，并在95℃下再搅拌24小时。冷却至室温且添加水(50ml)。用etoac萃取。合并有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用50-100%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.053g，71%产率)。。制备46[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯-2-氟-苯基)甲醇的非对映异构体在密封的反应容器中，搅拌[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯-2-氟-苯基)甲醇的非对映异构体(0.12mg，0.26mmol)、1,4-二氧杂环己烷(2ml)和氢氧化铵(30wt%，于水中，4ml)的混合物。将混合物加热至80℃。12小时后，将管冷却至室温，且添加额外氢氧化铵(30wt%，于水中，4ml)。在80℃下再继续加热密封容器3小时。将反应物冷却至室温，用水稀释，并用dcm(3×25ml)萃取。合并有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下蒸发滤液。经由硅胶色谱，经30分钟用0-50%etoac/dcm的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.070g，61%产率)。。制备47[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3-乙基苯基)甲醇的非对映异构体在密封的反应容器中，搅拌[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3-乙基苯基)甲醇的非对映异构体(0.370g，0.861mmol)、1,4-二氧杂环己烷(4ml)和氢氧化铵(30wt%，于水中，6ml)的混合物。将混合物加热至80℃，持续12小时。将容器冷却至室温，用水稀释混合物，并用etoac(3×25ml)萃取。合并有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下蒸发滤液。经由硅胶色谱，经30分钟用0-100%etoac/dcm的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.240g，68%产率)。es/msm/z411.2[m+h]+。制备484-[[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-羟基-甲基]苯甲腈的非对映异构体在密封的反应容器中，将4-[[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-羟基-甲基]苯甲腈的非对映异构体(0.765g，1.79mmol)溶解于1,4-二氧杂环己烷(4ml)和氢氧化铵(28wt%，于水中，4ml)中。将反应物加热至85℃且搅拌18小时。将反应物冷却至室温并在减压下浓缩。经由硅胶色谱用60-75%的10%7n于meoh中的nh3/mtbe的9：1混合物/己烷的梯度洗脱，来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.64g，88%产率)。es/msm/z408[m+h]+。制备49[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3,4-二氟苯基)甲醇的非对映异构体在反应容器中，将[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3,4-二氟苯基)甲醇的非对映异构体(795.9mg，1.76mmol)溶解于1,4-二氧杂环己烷(4ml)中，且添加氢氧化铵(28wt%，于水中，6ml)。密封容器，并在搅拌下将混合物加热至85℃，持续18小时。将容器冷却至室温并在减压下浓缩。将所得固体溶解于2%meoh于dcm中的溶液中，且经由玻璃羊毛塞过滤溶液。浓缩滤液，得到标题化合物(694.5mg，79%产率)。es/msm/z419[m+h]+。制备50[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3,4-二氯苯基)甲醇的非对映异构体在密封的反应容器中，将[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3,4-二氯苯基)甲醇的非对映异构体(245.0mg，0.520mmol)溶解于氢氧化铵(28wt%，于水中，2.0ml)和1,4-二氧杂环己烷(2.0ml)中。将容器加热至85℃且搅拌18小时。将混合物冷却至室温并在减压下浓缩。经由硅胶色谱用10-50%的10%meoh/mtbe的混合物/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(184.6mg，78%产率)。。制备51[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(对甲苯基)甲醇的非对映异构体在密封的反应容器中，将[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(对甲苯基)甲醇的非对映异构体(144mg，0.346mmol)溶解于氢氧化铵(28wt%，于水中，4.0ml)和1,4-二氧杂环己烷(4.0ml)中。将反应物加热至85℃且搅拌18小时。将反应物冷却至室温并在减压下浓缩。经由硅胶色谱用25-75%的10%meoh/mtbe的混合物/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(119.4mg，87%产率)。es/msm/z397[m+h]+。制备52[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氟苯基)甲醇的非对映异构体向两个密封容器中各自装入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氟苯基)甲醇的非对映异构体(505mg，1.20mmol)、氢氧化铵(28wt%，于水中，15ml)和1,4-二氧杂环己烷(15ml)。将混合物加热至85℃且搅拌18小时。将混合物冷却至室温且添加氢氧化铵(28wt%，于水中，8ml)。将两种混合物均加热至75℃且搅拌60小时。合并两个容器的内含物，并在减压下浓缩至干燥。将所得残余物溶解于2%meoh于dcm中的溶液中，且经由玻璃羊毛塞过滤。浓缩滤液，从而获得残余物。经由硅胶色谱用5%meoh/dcm的梯度洗脱来纯化残余物，得到标题化合物(909.6mg，93%产率)。es/msm/z401[m+h]+。制备531-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(3,4-二氯苯基)乙醇的非对映异构体将1-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(3,4-二氯苯基)乙醇的非对映异构体(150.0mg，0.309mmol)、氢氧化铵(28wt%，于水中，3.0ml)和1,4-二氧杂环己烷(3.1ml)溶解于密封的反应容器中。将反应物加热至85℃且搅拌18小时。将反应物冷却至室温并在减压下浓缩。经由硅胶色谱用10-50%的10%meoh/mtbe的混合物/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(110.9mg，77%产率)。。制备541-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(2-氟苯基)乙醇的非对映异构体在密封的反应容器中，将1-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(2-氟苯基)乙醇的非对映异构体(0.48g，1.1mmol)溶解于1,4-二氧杂环己烷(6ml)和氢氧化铵(28wt%，于水中，4ml)中。将容器加热至85℃且搅拌22小时。将混合物冷却至室温并在减压下浓缩。经由硅胶色谱用25-75%的10%7n于meoh中的nh3/mtbe的9：1混合物/己烷的梯度洗脱，来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.35g，75%产率)。es/msm/z415.0[m+h]+。制备551-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-[2-(三氟甲基)苯基]乙醇的非对映异构体在密封的反应容器中，将1-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-[2-(三氟甲基)苯基]乙醇的非对映异构体(0.18g，0.37mmol)溶解于1,4-二氧杂环己烷(3ml)和氢氧化铵(28wt%，于水中，1ml)中。将容器加热至85℃且搅拌22小时。将混合物冷却至室温并在减压下浓缩。经由硅胶色谱用50-75%的10%7n于meoh中的nh3/mtbe的9：1混合物/己烷的梯度洗脱，来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.14g，84%产率)。es/msm/z465.0[m+h]+。制备561-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙醇的非对映异构体在密封的反应容器中，将1-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙醇(0.33g，0.68mmol)溶解于1,4-二氧杂环己烷(2ml)和氢氧化铵(28wt%于水中，3ml)中。将容器加热至85℃且搅拌内含物22小时。将反应物冷却至室温并在减压下浓缩。经由硅胶色谱用25-75%的10%7n于meoh中的nh3/mtbe的9：1混合物/己烷的梯度洗脱，来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.152g，48%产率)。es/msm/z465.0[m+h]+。制备57(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-氯-3-(环丙氧基)苯基]甲醇将59ml无缝不锈钢管状反应器(o.d.=1/8")放置于gc烘箱内部。经40分钟用1：6比率的氢氧化铵(28%，于水中)/二氧杂环己烷以2.0ml/min冲洗。将n2的背压(1400-1500psig)施加至反应系统的出口，并将gc烘箱的温度设定在200℃。使用高压1lteledyneiscotm注射泵，以0.25ml/min(30分钟的保留时间)将(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-氯-3-(环丙氧基)苯基]甲醇的非对映异构体(35.3g，70.2mmol)于1/6氢氧化铵(28%，于水中)/二氧杂环己烷(350ml)的混合物中的溶液泵送通过反应器。耗尽此进料溶液后，用以2.0ml/min泵送的1：6氢氧化铵(28%，于水中)：二氧杂环己烷(89ml)冲洗反应器。添加水(1400ml)和etoac(500ml)。分离所得有机层并用etoac(200ml)萃取水层。合并有机萃取物且经硫酸镁干燥。过滤并在减压下浓缩滤液，从而获得标题化合物(34g，88.6%纯度)。制备58(1r)-1-[(3ar,4r,6s,6ar)-2,2-二甲基-4-(4-甲基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(4-氯苯基)乙醇在n2气氛下向高压反应容器中，将2.0mal(ch3)3于甲苯(120μl，0.24mmol)中的溶液添加至(1r)-1-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(4-氯苯基)乙醇(0.30mg，0.666mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(0.154g，0.016mmol)和无水thf(8ml)的搅拌混合物中。密封反应容器并将混合物加热至70℃。70℃下6小时后，将容器冷却至室温且小心地添加1nhcl水溶液(15ml)。将混合物用水(15ml)稀释并用etoac(3×20ml)萃取。合并有机萃取物，用氯化钠饱和水溶液洗涤，经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用1：1etoac：己烷的等度混合物洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.270g，89%产率)。。制备59[(3ar,4r,6r,6ar)-2,2-二甲基-4-(4-甲基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯-2-氟-苯基)甲醇的非对映异构体在n2气氛下向高压反应容器中，将2.0mal(ch3)3于甲苯(120μl，2.4mmol)中的溶液添加至[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯-2-氟-苯基)甲醇的非对映异构体(0.271mg，0.597mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(0.138mg，0.119mmol)和无水thf(2.2ml)的搅拌混合物中。密封反应容器并将混合物加热至80℃。80℃下6小时后，将容器冷却至室温且小心地添加1nhcl水溶液(10ml)。用水(15ml)稀释并用etoac(3×20ml)萃取。合并有机萃取物，用氯化钠饱和水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下蒸发滤液，得到标题化合物(0.266g，83%产率)。。制备601-[(3ar,4r,6s,6ar)-2,2-二甲基-4-(4-甲基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(3,4-二氯苯基)乙醇的非对映异构体在室温下将2.0mal(ch3)3于甲苯(0.57g，1.41mmol)中的溶液添加至1-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(3,4-二氯苯基)乙醇的非对映异构体(171.4mg，0.354mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(0.082g，0.071mmol)于1,4-二氧杂环己烷(4.4ml)中的混合物中。在80℃下加热混合物8小时。将混合物冷却至室温并用饱和氯化铵(20ml)淬灭。添加etoac(40ml)并用etoac(4×30ml)萃取水层。合并有机萃取物并用碳酸氢盐饱和水溶液和氯化钠饱和水溶液洗涤。经硫酸镁干燥有机萃取物，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用25-40%的10%7n于meoh中的nh3/mtbe的9：1混合物/己烷的梯度洗脱，来纯化所得残余物，得到标题化合物(125.9mg，77%产率)。。制备61(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-2,2-二甲基-4-(4-甲基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲醇在n2气氛下向高压反应容器中，将2.0mal(ch3)3于甲苯(120μl，0.24mmol)中的溶液添加至(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲醇(0.50g，1.15mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(0.266g，0.230mmol)和无水thf(13.8ml)的搅拌混合物中。密封反应容器且加热至70℃。70℃下6小时后，冷却至室温且小心地用1nhcl水溶液(15ml)淬灭。用水(15ml)稀释并用etoac(3×20ml)萃取。合并有机萃取物，用氯化钠饱和水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用1：1etoac：己烷的等度混合物洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.50g，95%产率)。。实施例1(2r,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[(r)-(4-氯苯基)-羟基-甲基]四氢呋喃-3,4-二醇在0℃下将(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲醇(6.78g，13.0mmol)溶解于tfa(90ml)中。添加水(9ml)并在室温下搅拌混合物1小时。在减压下移除溶剂并将残余物吸收于meoh(25ml)中。将混合物冷却至0℃且逐滴添加氢氧化铵水溶液(28wt%)直至ph~10。在减压下移除溶剂，得到粗混合物。通过硅胶色谱用0-2%meoh/etoac的梯度洗脱来纯化，得到残余物。将残余物溶解于etoac(50ml)中并在减压下移除溶剂。将所得淡玻璃状固体添加至水(约50ml)中，并在室温下搅拌混合物过夜。过滤所得白色固体并用水(50ml)洗涤。干燥固体，得到标题化合物(3.24g，66%产率)。替代制备a实施例1，结晶形式i在0℃下将(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲醇(15.38g，0.037mol)浆化于2-丙醇(50ml)中。添加4.99m的2-丙醇hcl(200ml，1000mmol)和水(4ml)的溶液，并在室温下搅拌18小时。添加额外4.99m的2-丙醇hcl(25ml)的溶液，并在室温下搅拌混合物24小时。在40℃下加热混合物2小时。在减压下浓缩并将etoh(50ml)和水(50ml)添加至所得残余物中。冷却至0℃且逐滴添加nh4oh水溶液(28%产率)，以将ph调整至~10并在室温下搅拌混合物2小时。在减压下浓缩，产生浅黄色固体。将水(50ml)逐滴添加至黄色固体中，随后添加nh4oh(28%，2ml)以将ph调整至9，并在室温下搅拌混合物3小时。通过过滤收集所得沉淀，用水(50ml)冲洗滤饼，并在真空下干燥2天，得到标题化合物(13.37g，96%产率)。替代制备b，实施例1流动化学将200mlptfe反应器(o.d.=1/8")放置于gc烘箱内部。用etoac(300ml)冲洗。将gc烘箱的温度设定在55℃下。使用1lteledyneiscotm注射泵，以8.5ml/min泵送(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲醇(186.0g，01.57mmol)于5：2：2etoh：meoh：etoac(1674ml)中的溶液，且于t-混合器中将其与6nhcl水溶液的流组合。用蠕动泵以1.5ml/min泵送混合物通过反应器(给出20分钟的总保留时间)。耗尽此进料溶液后，用5：1的etoac：6nhcl水溶液混合物(400ml)以10ml/min冲洗反应器。在减压下浓缩收集溶液，并在冰/水浴中将所得水溶液冷却至10℃。逐滴添加nh4oh(28%，2ml)以调整至ph~10，且搅拌冷却在10℃下的混合物35小时。收集所得固体，用水(100ml)冲洗，并在真空下在35℃下干燥2天，得到无水标题化合物(134.5g；89%产率)。在配备有cuka源(λ=1.54060å)和vantec检测器在35kv和50ma下操作的brukerd4endeavorx-射线粉末衍射仪上获得结晶固体的x-射线粉末衍射图案。在4和40°(以2θ计)之间，用0.0087°的步长(以2θ计)和0.5秒/步的扫描速率，和0.6mm散度，5.28mm固定的反散射和9.5mm检测器狭缝扫描该样品。将干燥粉末填装在石英样品架上，且使用载玻片获得光滑的表面。在结晶学领域中众所周知的是，对于任何给定晶形，衍射峰的相对强度可能随因素诸如结晶形态学和习性引起的优选取向而不同。当存在优选取向的效应时，峰强度改变，但多晶形物的特征峰位置不变。参见，例如美国药典35–国家处方集30第<941>章characterizationofcrystallineandpartiallycrystallinesolidsbyx-raypowderdiffraction(xrpd)official2012年12月1日-2013年5月1日。此外，在结晶学领域中也众所周知的是，对于任何给定晶形，角峰位置可能稍微改变。例如，由于分析样品时的温度或湿度的变化、样品移位或内部标准品的存在或不存在，峰位置可以移动。在本情况下，±0.2(以2θ计)的峰位置变化将考虑这些潜在变化而不妨碍明确鉴定指定的晶形。可以基于特征峰(通常为较显著的峰)的任何独特的组合(以°2θ为单位)确认晶形。基于在8.84和26.76度(2-θ)的nist675标准峰调整在环境温度和相对湿度下收集的晶形衍射图案。结晶形式1通过使用cuka照射的x-射线衍射图案将制备的替代制备a、实施例1、形式i的样品表征为具有如下表1中所述的衍射峰(2-θ值)。具体地，该图案含有在25.1°的峰以及一个或多个选自17.1°、13.6°、20.5°、24.0°和14.5°的峰，具有0.2度的衍射角容差。表1.结晶实施例1、形式1的x-射线粉末衍射峰实施例2(2r,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5[(r)-羟基(苯基)甲基]四氢呋喃-3,4-二醇在室温下搅拌(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-苯基-甲醇(0.293g，0.766mmol)、4nhcl于1,4-二氧杂环己烷(9.6ml)和水(3滴)中的溶液。在室温下45分钟后，在减压下浓缩溶液。经由硅胶色谱，经25分钟用50-100%丙酮/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.195g，74%产率)。实施例3(2r,3r,4s,5s)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[(1r)-1-(4-氯苯基)-1-羟基-乙基]四氢呋喃-3,4-二醇将(1r)-1-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(4-氯苯基)乙醇(10.3g，23.9mmol)溶解于2-丙醇(100ml)中，并在0℃下搅拌。逐滴添加4.99mhcl于2-丙醇(200ml，1000mmol)和水(2ml)中的溶液，并在室温下搅拌混合物6小时。在减压下移除溶剂，得到残余物。将残余物溶解于etoh(50ml)中，将混合物冷却至0℃，且逐滴添加氢氧化铵水溶液(28wt%产率)直至ph~10。在减压下浓缩，得到白色玻璃状固体。将固体添加至水(约40ml)中，并在室温下搅拌混合物4小时。过滤且收集所得白色固体，用水(50ml)洗涤且风干，得到标题化合物(9.0g，96%产率)。实施例4(2r,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[(r)-[4-氯-3-(环丙氧基)苯基]-羟基-甲基]四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体将15ml特氟龙包被的ss反应器(o.d.=1/8")放置于vapourtece系列设备中。将背压调节器(4-5巴)施用至反应系统的出口，且设定温度并将温度设定在82℃。以1.1ml/min泵送(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-氯-3-(环丙氧基)苯基]甲醇的非对映异构体(32.1g，60.1mmol)于etoh(317ml)中的溶液，且于t-混合器中将此溶液与4nhcl水溶液的流组合，并在82℃下以0.288ml/min泵送此混合物通过反应器(给出10分钟的总保留时间)。耗尽此进料溶液后，用混合物etoh/4nhcl水溶液(400ml)以0.29ml/min冲洗反应器。用活性碳、darcokb®(100网目；湿粉末，13g)处理粗反应混合物，且经由硅藻土的短垫过滤。用活性碳darcokb®(100网目；湿粉末，26g)重复处理，且经由硅藻土过滤。在真空下减少收集溶液的有机溶剂直至¼体积，逐滴添加水(150ml)和nh4oh水溶液(28%，40ml)，以将ph调整直至~10，并用etoac(2×300ml)萃取。合并有机萃取物，用氯化钠饱和水溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液，得到残余物(17g)。另外，用meoh(1000ml)冲洗两个硅藻土衬垫，并在减压下移除有机滤液洗液，得到额外残余物(7.89g)。将两种残余物合并于1：10meoh：etoac(300ml)中，并在减压下蒸发溶剂，得到标题化合物(17.45g；67%产率)。实施例5(2r,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[羟基-[4-(三氟甲基)苯基]甲基]四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体将[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-[4-(三氟甲基)苯基]甲醇的非对映异构体(13.5g，27.0mmol)溶解于2-丙醇(50ml)中，并在0℃下搅拌。将4.99mhcl于2-丙醇(200ml,0.998mol)和水(2ml)中的溶液逐滴添加至混合物中，并在室温下搅拌3小时。在减压下移除溶剂，得到残余物。将残余物溶解于etoh(50ml)中，并将混合物冷却至0℃。逐滴添加氢氧化铵水溶液(28wt%)至ph~10，且搅拌混合物10分钟。在减压下移除溶剂，得到白色玻璃状固体。通过硅胶色谱用80-100%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化，得到泡沫。将泡沫悬浮于水(300ml)中，并在室温下搅拌混合物1小时。过滤所得白色固体，用水(50ml)洗涤滤饼，且干燥，得到作为非对映异构体的标题化合物(7.85g，71%产率)。实施例6(2r,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[(3-氯苯基)-羟基-甲基]四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体将[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3-氯苯基)甲醇的非对映异构体(0.052g，0.124mmol)、4nhcl混合于1,4-二氧杂环己烷(5ml)和meoh(5ml)中。在室温下搅拌混合物。在室温下1小时后，在n2流下浓缩溶液以移除溶剂。溶解于水(5ml)中并用etoac(2ml)萃取。添加1nnaoh水溶液直至溶液为碱性，并用dcm(4×3ml)萃取。合并有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱用50-100%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化，得到作为非对映异构体的标题化合物(0.023g，49%产率)。实施例7(2r,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[(4-氯-2-氟-苯基)-羟基-甲基]四氢呋喃-3,4-二醇盐酸盐的非对映异构体在室温下搅拌[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯-2-氟-苯基)甲醇的非对映异构体(0.067g，0.154mmol)、4nhcl于1,4-二氧杂环己烷(5.0ml)和meoh(5.0ml)中的溶液。在室温下1小时后，在n2流下浓缩溶液以移除溶剂。用acn研磨所得残余物，得到作为非对映异构体的标题化合物(0.046g，69%产率)。实施例8(2r,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[(2-氟苯基)-羟基-甲基]四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体在标准容器中，在减压下抽空(2r,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[(4-氯-2-氟-苯基)-羟基-甲基]四氢呋喃-3,4-二醇盐酸盐的非对映异构体(0.036g，0.083mmol)、10%pd/c(0.010mg，0.009mmol)和etoh(2.0ml)的混合物。用氢气使容器装填至10psi。在10psi下搅拌24小时后，添加三乙胺(0.25mg，0.25mmol)和额外10%pd/c(0.010mg，0.009mmol)。抽空容器，并用氢气装填至10psi。在室温下再搅拌24小时。经由硅藻土过滤所得混合物，并在减压下浓缩。经由反相高压色谱(phenomenex®gemini®-nx)，经20分钟，在5-45%acn于5%meoh/10mm碳酸氢铵的混合物(ph~10)中的梯度洗脱，来纯化所得残余物，得到作为非对映异构体的标题化合物(0.010g，33%产率)。实施例9((2r,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[(3-乙基苯基)-羟基-甲基]四氢呋喃-3,4-二醇盐酸盐的非对映异构体在室温下搅拌[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3-乙基苯基)甲醇的非对映异构体(0.240g，0.585mmol)、4nhcl于1,4-二氧杂环己烷(5.0ml)和meoh(5.0ml)中的溶液。在室温下1小时后，在n2流下浓缩溶液以移除溶剂。用acn研磨所得残余物，得到作为非对映异构体的标题化合物(0.160g，67%产率)。实施例104-[[(2r,3s,4r,5r)-5-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羟基-四氢呋喃-2-基]-羟基-甲基]苯甲腈的非对映异构体混合tfa(3.5ml)和水(0.5ml)且冷却至0℃。将此添加至4-[[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-羟基-甲基]苯甲腈的非对映异构体(0.50g，1.24mmol)中，并在0℃下搅拌。1小时后，在减压下浓缩并将所得固体溶解于meoh中。经由silicycle®碳酸硅柱(70ml，5g)使用meoh洗脱。收集适当级分，得到作为非对映异构体的标题化合物(0.47g，100%产率)。实施例11(2r,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[(3,4-二氟苯基)-羟基-甲基]四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体在0℃下混合[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3,4-二氟苯基)甲醇的非对映异构体(694mg，1.66mmol)、1,4-二氧杂环己烷(6ml)、水(2ml)、4m于1,4-二氧杂环己烷中的hcl(3ml，12mmol)。搅拌混合物18小时，然后添加另外的4m于1,4-二氧杂环己烷中的hcl(4ml，16mmol)。在室温下再搅拌混合物18小时。添加hcl(31wt%，于水中，0.5ml)。在室温下搅拌混合物4小时。在0℃下冷却混合物，且缓慢添加饱和nahco3溶液直至实现ph~7。用2-4%meoh/dcm萃取。经硫酸镁干燥有机萃取物，过滤，并在减压下浓缩滤液，得到粗残余物。经由硅胶色谱用77%dcm、15%etoac和7%meoh的等度混合物洗脱，来纯化残余物，得到作为非对映异构体的标题化合物(408mg，64%产率)。实施例12(2r,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[(3,4-二氯苯基)-羟基-甲基]四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体在室温下混合[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(3,4-二氯苯基)甲醇的非对映异构体(180.0mg，0.398mmol)、水(0.20ml)和tfa(2.0ml)。45分钟后，在减压下浓缩混合物并将所得残余物溶解于meoh中。经由silicycle®碳酸硅柱(70ml，5g)使用meoh洗脱混合物。收集适当级分并在真空中浓缩，得到粗残余物。经由硅胶色谱用10%nh3/meoh于chcl3中的混合物的梯度洗脱，来纯化残余物，得到作为非对映异构体的标题化合物(98.3mg，60%产率)。实施例13(2r,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[羟基(对甲苯基)甲基]四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体在室温下混合[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(对甲苯基)甲醇的非对映异构体(115mg，0.290mmol)、水(0.15ml)和tfa(1.5ml)。90分钟后，在减压下浓缩并将所得固体溶解于meoh中。经由silicycle®碳酸硅柱(70ml，5g)使用meoh洗脱。收集适当级分并在减压下蒸发至干燥，得到残余物。经由硅胶色谱用5-15%的10%7nnh3/meoh的混合物/dcm的梯度洗脱，来纯化残余物，得到作为非对映异构体的标题化合物(50.2mg，49%产率)。实施例14(2r,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[(4-氟苯基)-羟基-甲基]四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体混合[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氟苯基)甲醇的非对映异构体(158mg，0.394mmol)、1,4-二氧杂环己烷(3ml)、水(0.75ml)和4mhcl于1,4-二氧杂环己烷(3ml，12mmol)中的溶液，并在0℃下搅拌混合物5分钟，随后在室温下搅拌1小时。在减压下浓缩，随后添加etoac(30ml)且再次浓缩。重复添加etoac且再浓缩两次的此程序。经由硅胶色谱用7%meoh于dcm中的等度混合物洗脱来纯化所得残余物，得到作为非对映异构体的标题化合物(103.5mg，73%产率)。实施例15(2r,3r,4s,5s)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[1-(4-氯苯基)-1-羟基-丙基]四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体将[(3ar,4r,6s,6as)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲酮的非对映异构体(426.9mg，0.983mmol)溶解于thf(5ml)中，并将混合物冷却至0℃。经1分钟添加1.0m溴化乙基镁于thf(1.97ml，1.97mmol)中的溶液。搅拌15分钟且温热至室温。1小时后，通过添加1nhcl水溶液(2.48ml)淬灭。用dcm(10ml)稀释反应混合物。分离各层并用dcm(5ml)萃取水层。合并有机萃取物并在减压下蒸发。将残余物溶解于7mnh3/meoh(10ml，70mmol)中并在微波反应器中在100℃下加热6小时。在n2流下在50℃下蒸发所得混合物。将所得残余物溶解于4n于1,4-二氧杂环己烷(1.29ml，49.2mmol)中的hcl中，且添加水(35μl，1.97mmol)。在室温下搅拌混合物1.5小时，且随后在减压下浓缩混合物。经由反相高压液相色谱(phenomenex®gemini®-nx)，用13-48%acn于5%meoh/10mm碳酸氢铵的混合物(ph~10)中的梯度洗脱，来纯化所得残余物，得到作为非对映异构体的标题化合物(97.8mg，25%产率)。实施例16(2r,3r,4s,5s)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[1-(3,4-二氯苯基)-1-羟基-乙基]四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体在室温下组合1-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(3,4-二氯苯基)乙醇的非对映异构体(101.2mg，0.217mmol)、水(0.1ml)和tfa(1.0ml)。搅拌1小时后，在减压下浓缩并将所得固体溶解于meoh中。经由silicycle®碳酸硅柱(70ml，5g)使用meoh洗脱。收集适当级分，得到残余物。经由硅胶色谱用5-30%的10%7nnh3于meoh/meoh/氯仿(按体积计1：1：2)中的混合物/chcl3的梯度洗脱，来纯化所得残余物，得到作为非对映异构体的标题化合物(81.7mg，88%产率)。实施例17(2r,3r,4s,5s)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[1-(2-氟苯基)-1-羟基-乙基]四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体混合tfa(4ml)和水(1ml)且冷却至0℃。将此添加至1-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(2-氟苯基)乙醇的非对映异构体(0.341g，0.823mmol)中，并在0℃下搅拌。30分钟后，在减压下浓缩并将所得固体溶解于meoh中。经由silicycle®碳酸硅柱(70ml，5g)使用meoh洗脱。收集适当级分，且经由硅胶色谱用0-100%的10%7nnh3/meoh的混合物/dcm的梯度洗脱来进一步纯化，得到作为非对映异构体的标题化合物(0.271g，88%产率)。实施例18(2r,3r,4s,5s)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[1-羟基-1-[2-(三氟甲基)苯基]乙基]四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体混合tfa(3ml)和水(1ml)且冷却至0℃。将此混合物添加至1-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-[2-(三氟甲基)苯基]乙醇的非对映异构体(0.137g，0.295mmol)中，并在0℃下搅拌。20分钟后，在减压下浓缩反应混合物并将所得固体溶解于meoh中。经由silicycle®碳酸硅柱(70ml，5g)使用meoh洗脱溶液。收集适当级分，且经由硅胶色谱用0-100%的10%7nnh3/meoh的混合物/dcm的梯度洗脱来进一步纯化，得到作为非对映异构体的标题化合物(0.109g，87%产率)。实施例19(2r,3r,4s,5s)-2-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-[1-羟基-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基]四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体混合tfa(2ml)和水(0.5ml)且冷却至0℃。将此添加至1-[(3ar,4r,6s,6ar)-4-(4-氨基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙醇的非对映异构体(0.136g，0.292mmol)中，并在0℃下搅拌。45分钟后，在减压下浓缩并将所得固体溶解于meoh中。经由silicycle®碳酸硅柱(70ml，5g)使用meoh洗脱。收集适当级分，且经由硅胶色谱用10-25%的10%7nnh3/meoh的混合物/dcm的梯度洗脱来进一步纯化，得到作为非对映异构体的标题化合物(0.095g，76%产率)。实施例20(2s,3s,4r,5r)-2-[(1r)-(1-(4-氯苯基)-1-羟基-乙基]-5-(4-甲基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)四氢呋喃-3,4-二醇在室温下搅拌(1r)-1-[(3ar,4r,6s,6ar)-2,2-二甲基-4-(4-甲基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(4-氯苯基)乙醇(0.265g，0.616mmol)、4nhcl水溶液于1,4-二氧杂环己烷(10ml)和meoh(10ml)中的混合物。在室温下1小时后，在n2流下浓缩溶液以移除溶剂。添加水(30ml)，用nahco3饱和水溶液中和至ph~7，并用dcm(3×20ml)萃取。合并有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱经35分钟用0-50%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到标题化合物(0.180g，75%产率)。实施例21(2r,3s,4r,5r)-2-[(4-氯-2-氟-苯基)-羟基-甲基]-5-(4-甲基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体在室温下搅拌[(3ar,4r,6r,6ar)-2,2-二甲基-4-(4-甲基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯-2-氟-苯基)甲醇的非对映异构体(0.220g，0.507mmol)、4nhcl于1,4-二氧杂环己烷(10.0ml)和meoh(10.0ml)中的溶液。在室温下1小时后，在n2流下浓缩溶液以移除溶剂。在dcm(25ml)与水(25ml)之间分配残余物。用nahco3饱和水溶液中和至ph~7，并用dcm(4×20ml)萃取。合并有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。经由硅胶色谱经5分钟用0-100%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到作为非对映异构体的标题化合物(0.192g，96%产率)。实施例22((2r,3s,4r,5r)-2-[(2-氟苯基)-羟基-甲基]-5-(4-甲基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体在标准容器中，在减压下抽空(2r,3s,4r,5r)-2-[(4-氯-2-氟-苯基)-羟基-甲基]-5-(4-甲基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体(0.090g，0.228mmol)、10%pd/c(0.025g)、三乙胺(0.069g，0.68mmol)和etoh(4.0ml)的混合物。用氢气将容器装填至10psi，并在室温下搅拌所得混合物15小时。经由硅藻土过滤所得混合物，并在减压下浓缩。经由硅胶色谱经5分钟用0-100%etoac/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到作为非对映异构体的标题化合物(0.082g，85%产率)。实施例23(2s,3s,4r,5r)-2-[1-(3,4-二氯苯基)-1-羟基-乙基]-5-(4-甲基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)四氢呋喃-3,4-二醇的非对映异构体在室温下混合1-[(3ar,4r,6s,6ar)-2,2-二甲基-4-(4-甲基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-1-(3,4-二氯苯基)乙醇的非对映异构体(122.0mg，0.26mmol)、水(0.15ml)和tfa(1.5ml)。1小时后，在减压下浓缩并将所得固体溶解于meoh中。经由silicycle®碳酸硅柱(70ml，5g)使用meoh洗脱。收集适当级分并在减压下浓缩至干燥，得到残余物。经由硅胶色谱用10-50%的10%meoh/mtbe的混合物/己烷的梯度洗脱来纯化所得残余物，得到作为非对映异构体的标题化合物(62.8mg，56%产率)。实施例24和实施例25(2r,3s,4r,5r)-2-[(r)-羟基(苯基)甲基]-5-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基-四氢呋喃-3,4-二醇(2r,3s,4r,5r)-2-[(r)-(4-氯苯基)-羟基-甲基]-5-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基-四氢呋喃-3,4-二醇将(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲醇(200.0mg，0.264mmol)溶解于etoac(30ml)中。在室温下用thalesnanotmh-cube流动系统(2000kpa/1ml/min/70mmpd/al2o3滤筒)氢化溶液。在减压下蒸发所得溶液，将所得残余物溶解于etoac(20ml)中，并用新pd/al2o3滤筒重复氢化。在减压下蒸发所得溶液。将残余物溶解于4n于1,4-二氧杂环己烷(5.73ml，22.9mmol)中的hcl中，且添加水(3滴)。在室温下搅拌溶液45分钟并在减压下蒸发。经由反相高压色谱(phenomenex®gemini®-nx)用5-38%acn于5%meoh/10mm碳酸氢铵的混合物(ph~10)中的梯度洗脱，来纯化所得残余物，得到实施例23和实施例24。实施例24(2r,3s,4r,5r)-2-[(r)-羟基(苯基)甲基]-5-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基-四氢呋喃-3,4-二醇(15.0mg，9.11%产率)。实施例25(2r,3s,4r,5r)-2-[(r)-(4-氯苯基)-羟基-甲基]-5-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基-四氢呋喃-3,4-二醇(51.9mg，28.8%产率)。实施例26(2r,3s,4r,5r)-2-[(r)-(4-氯苯基)-羟基-甲基]-5-(4-甲基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)四氢呋喃-3,4-二醇在室温下搅拌(r)-[(3ar,4r,6r,6ar)-2,2-二甲基-4-(4-甲基吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-6-基]-(4-氯苯基)甲醇(0.500g，1.08mmol)、4nhcl于1,4-二氧杂环己烷(50ml)和meoh(50ml)中的溶液。在室温下1小时后，在n2流下浓缩溶液以移除溶剂。向残余物中添加dcm(20ml)和水(20ml)。用dcm萃取，且丢弃。用碳酸氢盐饱和水溶液调整水相的ph至ph~10，并用dcm(4×20ml)萃取。合并有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。将所得残余物溶解于etoac中，将溶液经由硅胶垫过滤，并用etoac洗脱。在减压下移除滤液，得到标题化合物(0.393g，97%产率)。以下分析结果显示本文中例示的化合物可用作prmt5抑制剂且可适用于治疗癌症的证据。prmt5/mep50spa分析此分析的目的为测量测试化合物通过抑制prmt5/mep50复合物的催化活性来体外抑制prmt5的酶活性的能力，其通过放射性标记的甲基-3h转移至衍生自人类组蛋白h4的n端序列的底物肽来指示。使用杆状病毒/sf9系统表达prmt5/mep50酶复合物，并使用抗flag亲和色谱来纯化，(基本上如以下的制备中所描述，stephenantonysamy,zahidbonday,robertm.campbell,brandondoyle,zhannadruzina,tarungheyi,bomiehan,louisn.jungheim,yueweiqian,charlesrauch,marijanerussell,j.michaelsauder,stephenr.wasserman,kennethweichert,franciss.willard,aipingzhang,和spenceremtage;crystalstructureofthehumanprmt5:mep50complex,proceedingsofthenationalacademyofsciences,2012，第109卷，第17960-17965页)。将纯化的酶稀释成分析缓冲液(50mmtrizma®预设ph8.5，1mmdtt，0.005%tween®800.01%hsa)中的6.67nm工作储备液。将酶(15微升/孔)添加至384孔分析平板(corning®目录号3706)中。将来自10mmdmso储备溶液的测试化合物以分析缓冲液中的连续稀释添加至平板中，以实现50.0μm至25nm范围内的最终测试浓度。在分析缓冲液中产生反应混合物，其含有通过fastmoc化学方法用abi431肽制备的1μm组蛋白h4生物素标记肽底物，h-sgrgkggkglgkggakrhrkvlrdk-生物素(seqidno：1)，和4μm3h-sam(15ci/mmol、0.366mci/ml、37μm，perkin-elmer®目录号net155000mc)。向各平板孔中添加5μl肽/3h-sam反应混合物，得到以下最终分析条件：5nm酶、1μm3h-sam、250nm肽，和具有0.5%dmso的50μm最大测试化合物浓度，最终体积为20μl。在室温下孵育分析物2小时。用胍hcl(5m，20μl，sigma目录号g3272)的添加来终止反应。在1mg/ml下将链霉抗生物素蛋白ysispa闪烁珠粒(perkin-elmer®，编号rpnq0012)悬浮于ph8.5的含有5m胍hcl的tris缓冲液中。向各孔中添加20μl此珠粒悬浮液，搅拌所得混合物，并在室温下孵育1小时，之后使用微板液体闪烁计数器测量其放射性作为形成甲基化肽产物的指示。从放射性测量值作为计数/分钟(cpm)生成原始数据。使用不受抑制的对照(dmso)和最大抑制的对照(250μm脱氢西奈芬净(dehydrosinefungin)，(基本上如berry,d.r.&abbott,b.j.incorporationofcarbon-14-labeledcompoundsintosinefungin(a9145),anucleosideantifungalantibiotic.j.antibiot.1978(31)185–191和其所引用的文献中所描述来分离))。在各测试化合物浓度下如下计算相对于对照的抑制百分比：%抑制=[中值cpm(不受抑制的对照)-中值cpm(测试化合物)]/[中值cpm(不受抑制的对照)-中值cpm(最大抑制的对照)]*100使用activitybasexe或genedata软件作为%抑制(y轴)相比于log测试化合物浓度(x轴)绘制数据。使用4参数对数曲线拟合算法计算ic50值。此分析结果显示所有例示化合物都抑制prmt5/mep50催化活性，其中ic50小于500nm。另外，实施例1-3基本上如上所述测试，且如表1中所示对prmt5/mep50呈现以下活性。表1平均值±sem；sem=平均值的标准误差。方案增殖7-天此分析的目的为测量测试化合物抑制癌细胞增殖的能力。在第1天，在96孔分析平板(bdfalcon35-3219)中以250个细胞/孔(100微升/孔)培养a375细胞(atcc，dmem高葡萄糖/10%hifbs)。在37℃孵育箱(5%co2)中将平板孵育18-24小时。在第2天，在培养基中从化合物储备溶液(10mm，于100%dmso中)制备且连续稀释测试化合物(1：210点连续稀释)。将10μl连续稀释的测试化合物添加至细胞平板(0.2%dmso最终浓度)中。将10μl参考化合物(实施例1)添加至细胞平板(最终20μm，0.2%dmso)的行1中。在37℃/5%co2下将细胞平板孵育7天。在第9天，融化celltiter-glo®(promega编号g7571)缓冲液并在使用之前平衡至室温。同样，在使用之前将冻干的celltiter-glo®底物平衡至室温。将celltiter-glo®缓冲液转移至琥珀色底物瓶中，以使冻干的酶/底物混合物重构以形成celltiter-glo®试剂。将细胞平板平衡至室温5-10分钟。通过在纸巾堆叠物上轻击且印迹来轻轻地移除细胞平板中的培养基。将celltiter-glo®试剂(25μl)添加至各孔中。在室温下将平板孵育10-20分钟，随后读数。使用perkin-elmer®envision®多标记读板器测量发光。通过4参数曲线拟合使用活性基底分析此发光数据，得到细胞增殖ic50值。此分析结果显示，实施例1-3根据其抑制prmt5活性的能力对肿瘤细胞具有抗增殖影响。所得增殖ic50值显示于表2中：表2实施例#增殖ic50(nm)110.8(+3.4,n=3)231.5(+7,n=3)344.0(n=1)平均值±sem；sem=平均值的标准误差。a375肿瘤细胞中的mdm4外显子5/6qpcr分析此分析的目的为如通过带有外显子5和6的mdm4mrna与仅带有外显子5的mdm4mrna的比率所测量，通过测量测试化合物调节a375黑色素瘤细胞中mdm4的prmt5依赖型替代性剪接的能力，来展现测试化合物抑制癌细胞中的prmt5功能的能力。在具有生长培养基(dmem；具有10%fbs的hyclonetm编号sh30022；gibco®10082-147或等效物)的t150烧瓶中，将a375肿瘤细胞(atcc)(黑色素瘤癌细胞系)培养至70%-90%汇合度。将细胞用标准胰蛋白酶/edta处理来处理3分钟，且抽吸并用pbs洗涤以从培养烧瓶释放粘附细胞。在96孔平板(costar3596)中将细胞以5000个/孔接种于生长培养基(90μl)中。在37℃和5%co2下将平板孵育过夜，并用测试化合物在连续稀释(20、6.67、2.22、0.74、0.247、0.082、0.027、0.009、0.003、0.010μm，0.2%产率的最终dmso添加)下处理细胞72小时。相对于最大(2.0μm实施例2)和最小(0.2%dmso)对照测量活性。在孵育后第5天，从平板移除培养基并用冷pbs(150微升/孔)洗涤细胞两次。通过以1/100将dna酶1稀释成裂解溶液，从taqman®基因表达细胞至ct试剂盒(invitrogentm目录号am1729)来制备裂解工作试剂。将裂解工作试剂(50微升/孔)添加至细胞平板中，混合孔，并在室温下孵育5分钟。将试剂盒终止溶液(5μl)添加至各孔中，混合各孔，并在室温下孵育2分钟。按以下体积比率制备逆转录酶母体混合物；62.5：31.25：6.25的rt缓冲液：无核酸酶的水：rt酶。将rt混合物(48微升/孔)添加至96孔nunctm平板(thermoscientifictm编号260860)的各孔中。将rt混合物(20μl)和各细胞裂解样品(5μl)添加于384pcr平板(光学透明的反应平板，目录号4309849，appliedbiosystems®)象限1中，并将rt混合物与细胞裂解物的第二添加物添加至象限3中。对于rt反应，密封平板，且随后将其放置于设定在37℃下的热循环仪中维持60分钟；95℃维持5分钟；在4℃下终止。对于qpcr，分别按10：6：1的rt混合物：h2o：外显子探针的体积比率制备mdm4外显子5引物(lifetechnologieshs00967240-m1)和外显子6引物(lifetechnologieshs00967242-m1)。将外显子5(17μl)添加至384pcr平板的奇数行中，并将外显子6(17μl)添加至偶数行中。通过象限冲压将cdna(3μl，来自rt平板)添加至含有17μl外显子引物溶液的qpcr平板的各孔中。以此方式，对来自单rt反应的cdna、对个别细胞裂解物的两个外显子进行qpcr。将平板密封，旋转，且放置于实时pcr仪器(lifetechnologiesviia7实时pcr)上。在以下分阶段循环中运作taqman®反应：阶段1(50℃，2分钟)，阶段2(95℃，10分钟)，阶段3(95℃，15秒)，阶段4(60℃，60秒)，其中阶段3和4重复40个循环。从实时pcr读取器检索ct数据并使用excel模板进行以下计算，其中“cpd”为来自化合物处理的样品的值，且“dmso”为最小对照样品：(外显子6ctcpd-外显子6ctdmso)-(外显子5ctcpd-外显子5ctdmso)=△ct2(-∆ct)=倍数变化。使用genedata软件绘制作为相比于log测试化合物浓度(x轴)的倍数变化(y轴)的数据，并使用4参数对数拟合计算ec50值。此分析表明如所通过所产生的带有外显子6的mrna相比于带有外显子5和6的mrna的比率指示，所有在此分析中测试的例示化合物都抑制mdm4的剪接的prmt5介导的调控。例如，针对实施例1、2和3调节mdm4的剪接的能力的所得ec50值显示于表3中。表3实施例#mdm4外显子5/6ec50(nm)116.79(+1.63,n=10)236.72(+3.24,n=16)342.38(+9.08,n=2)41038(+45,n=2)平均值±sem；sem=平均值的标准误差。在aml细胞系中与bcl2抑制剂abt-199组合(4天和7天细胞增殖分析)此分析的目的为表明当prmt5抑制剂与bcl2抑制剂abt-199(abbotlaboratories)组合时对aml细胞系增殖的协同抑制作用。在第1天，在96孔分析平板(bdfalcon®35-3219)中，分别以4000和10000个细胞/孔(100微升/孔)培养板gdm-1[atcc®，维持在整个gdm-1分析培养基中：rpmi-1640培养基/20%热失活的fbs(gibco®)]和eol-1细胞[atcc®，维持在整个eol-1分析培养基中：rpmi-1640培养基/10%热失活的fbs(gibco®)]。在37℃孵育箱(5%co2)中将平板孵育18-24小时。在第2天，用分析培养基(对于gdm-1和eol-1，如以上所指示或分别为rpmi-1640/20%热失活的fbs和rpmi-1640/10%fbs)制备2.0%dmso，并将100μl添加至制备平板中的行3-12中。制备10μm的于2%dmso中的测试化合物abt-199，和25μm的于2%dmso中的prmt5抑制剂实施例1，且分别分配于孔a2和b2中，随后分别连续稀释(1：3，10点)至孔a11和b11中。对于组合处理，在孔c2-c11(0.1μm)至h2-h11中，在分析培养基(对于gdm-1和eol-1，如以上所指示或分别为rpmi-1640/20%热失活的fbs和rpmi-1640/10%fbs)中，以1：2连续稀释测试化合物实施例，随后从c2-h2(1.0μm)至c11-h11按1：3连续稀释测试化合物abt-199。在孔a1至h1中制备20μm于2%dmso中的星形孢菌素(在sigma可用)作为参考化合物。将11μl连续稀释的化合物添加至细胞平板中的含100μl细胞的孔中。细胞平板中的最终起始浓度如下：对于单一化合物，prmt5抑制剂实施例1为2.5μm且abt-199为1μm；对于两种化合物的组合，prmt5抑制剂实施例1的起始浓度为0.01μm且abt-199为0.1μm；最终dmso浓度为0.2%。在37℃/5%co2下将细胞平板孵育四或七天。在第6天或第9天(对于测试分别为四天或七天处理)，融化celltiter-glo®(promega编号g7571)缓冲液并在使用之前平衡至室温。同样，在使用之前将冻干的celltiter-glo®底物平衡至室温。将celltiter-glo®缓冲液转移至琥珀色底物瓶中，以使冻干的酶/底物混合物重构以形成celltiter-glo®试剂。将细胞平板平衡至室温5-10分钟。将celltiter-glo®试剂(100μl)添加至各孔。在室温下将平板孵育10-15分钟，随后读取。使用perkin-elmer®envision®多标记读板器测量发光。用中等通量背(mediumthroughputdorsal)分析数据，得到细胞增殖ic50值和基于chou-talalay分析[choutc,talalayp.analysisofcombineddrugeffects：anewlookataveryoldproblem.trendspharmacolsci1983；4：450-4.]的抑制组合指数。此分析结果表明bcl2抑制剂abt-199和prmt5抑制剂实施例1的组合对癌细胞增殖具有协同抑制作用。所得增殖绝对ic50值和组合指数值显示于表4中：表4平均值±平均值的标准误差。小鼠a375异种移植肿瘤mdm4外显子5/6rna剪接分析此分析的目的为测量测试化合物抑制小鼠肿瘤异种移植模型中a375肿瘤细胞中的处理的mdm4mrna的外显子6的prmt5介导的保留的能力。此分析呈现测试化合物对动物模型中肿瘤中的特定prmt5介导的剪接事件的影响。在孵育箱(5%co2)中在37℃下，在培养基(dmem高葡萄糖/10%hifbs)中使a375细胞生长18-24小时。使细胞与matrigel®(1：1)混合并将细胞(5×106/动物)皮下植入小鼠(雌性裸小鼠，harlan)腹胁后部。植入的肿瘤细胞生长为实体肿瘤。用卡尺一周两次测量肿瘤体积和体重。肿瘤体积达至大约200-250mm3后(植入后约20天)，将动物随机化，并将其分成化合物处理组。通过口服管饲施用测试化合物(配制于具有1%hec/0.25%tween®80/0.05%消泡剂的swfi中)。测试化合物剂量在3至100mg/kg范围内。最后剂量(4天的给药)后4小时处死小鼠。收获肿瘤组织且如下文所描述均质化。将肿瘤样品放置于碗中且添加1ml液体n2。在碗中挤压肿瘤。将肿瘤的小片段(各约20mg)转移至2个裂解基质d管(mpbio目录号6913-250)中。将一个管用于rna加工且另一个用于蛋白裂解物制备。对于rna加工，使用bio101fastprepfp120匀化器(设在6)在rneasy®微试剂盒(qiagen-74104)萃取缓冲液(各0.5ml)中使肿瘤组织均质化30秒。用quartzy®rneasy®微试剂盒-50(qiagen-74104，rneasy®微型手册，第四版，2012年6月)纯化总rna。检查rna浓度以确保od260/280nm≥1.9。对于cdna合成，使用a&bappliedbiosystems®，高容量cdna逆转录试剂盒(目录号4368813)。在20μl含有10×rt缓冲液-2.0μl；25×dntp混合物(100mm)-0.8μl；10×rt随机引物-2.0μl；multiscribetm逆转录酶-1.0μl；无核酸酶的h2o-4.2μl的各rt反应体积中，使用1μg总rna(10μl)。针对与高容量cdna逆转录试剂盒一起使用，使这些条件(来自appliedbiosystems®的热循环仪)最优化：步骤1-温度25℃/时间10分钟；步骤2-温度37℃/时间120分钟；步骤3-温度85℃/时间5分钟；步骤4温度4℃，直至进一步使用。接下来，在20μl含有10μl2×pcr混合物、1μl探针、3μl制备的cdna(20ng)和水(6μl)的总体积中，运作taqman®qpcr反应的热循环仪程序。[来自thermoscientifictm的绝对蓝色qpcrrox混合物(2×)，目录号：ab-4139；来自appliedbiosystems®的mdm4(外显子5和外显子6)探针，分别地目录号：hs00967240-m1和目录号：hs00967242-m1；来自appliedbiosystems®的gapdh探针，目录号：hs02758991-g1；来自appliedbiosystems®的cdkn1a(p21)探针，目录号：hs02758991-g1]。在viia7taqman®热循环机(appliedbiosystems®)上运作样品。小鼠a375肿瘤异种移植mdm4和smd1-me2swestern印迹法分析对于western印迹法，在500μl包括完全小蛋白酶抑制剂混合液(roche，目录号：11836170001)的试剂盒xy裂解缓冲液中如以上所进行使肿瘤组织均质化[此混合液含有10mg/ml抑蛋白酶醛肽半硫酸盐(sigma目录号l2884)；10mg/ml胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制剂(sigma目录号t9777)；10μg/mltpck(sigma目录号t4376)；10μg/ml抑肽酶(sigma目录号a1153)；60mmβ甘油磷酸二钠盐水合物(sigma目录号g9891)；1%tritontmx-100(sigma目录号t9284)；25mmtrisph~7.5(invitrogentm目录号15567-027)；2.5mm焦磷酸二钠(fluka目录号71501)；300mmnacl2(mallinckrodt目录号7581)；2mmtame(sigma目录号t4626)；15mmpnpp(pnpp二钠盐六水合物，sigma目录号p4744)；5mm苯甲脒盐酸盐水合物(sigma目录号b6506)；10mm氟化钠(sigma目录号s-7920)；1mm无水偏钒酸钠(sigma目录号59088)；5g1mmdtt(sigma目录号d9779)；15mmedtaph~8.0(invitrogentm目录号15575020)；5mmegtaph~8.0(sigma目录号e3889)；1mm微囊藻素lr(fisher/axxora目录号a350012m001)；0.25mmpefabloc(sigma目录号76307)]。在8,000rpm下向下旋转蛋白裂解物10分钟，并将上清液转移至1.5ml管中以超声处理(振幅25%产率)15秒。再次在15,000rpm下向下旋转裂解物10分钟。从上清液获得60μg各蛋白裂解物，与sds-page样品加样缓冲液[15μl蛋白裂解物；5μl4×样品缓冲液(bio-rad目录号161-0791)；2.25μl10×样品还原剂(invitrogentm目录号np0004)；在100℃下将样品煮沸10分钟]混合，并在sds-page中使用4-20%tris-甘氨酸凝胶-1.5mm×15孔(invitrogentm)运作。一旦染料前沿达至凝胶底部，终止电泳并将蛋白从凝胶转移至硝酸纤维素膜以用以下一抗并用兔抗gapdh抗体(目录：ab9485abcam)进行western印迹法：抗mdm4克隆8c6，来自millipore的小鼠单克隆，目录号04-1555；抗smd1-me2s[小鼠单克隆，2.14mg/ml]。抗smd1-me2s单克隆抗体在elililly处在nzb/w小鼠(thejacksonlaboratory)中产生。将五只6周大的雌性小鼠用完全弗氏(freund's)佐剂中的75μg缀合至klh的两种肽(参见下文)的混合物皮下免疫接种。星号指示对称二甲基-arg。klh与cys氨基酸(c)缀合。引发后，小鼠每3周用不完全弗氏佐剂中的50μg缀合至klh的两种肽的混合物皮下注射。第三次增强免疫后10天，使用眶后程序收集血液以测量血清中的抗体滴度。分离来自阳性小鼠的脾细胞并使用peg以比率(1：4)与骨髓瘤细胞系p3x63ag8.653(atcc®crl-1580)融合，如由harlow(antibodies:alaboratorymanual.coldspringharbor,ny,2004)所描述。将融合细胞在96孔平板中接种，并在含有hat和上清液的选择培养基中1周后通过elisa测试与smd1-me2s肽的结合。通过elisa用未甲基化肽和smd3-对称二甲基-arg肽测试特异性。通过连续稀释来亚克隆elisa阳性杂交瘤细胞，且通过亲和色谱用以上肽抗原来纯化抗体。一旦转移完成，用封闭缓冲液(具有0.05%tween®-20，biorad目录号161-0781的odyssey封闭缓冲液，li-corbiosciences目录号927-40000)封闭膜，且随后在4℃下用封闭缓冲液中1：500稀释的抗mdm4克隆8c6(来自millipore的小鼠单克隆，目录号04-1555)、1：300稀释的抗-smd1-me2s(自制小鼠单克隆，2.14mg/ml)，并用1：1000稀释的兔抗gapdh抗体(目录：ab9485abcam)处理膜过夜。用tbstween®洗涤膜3次(0.05%产率)，每次10-15分钟[10×tbs(sigma目录号170-6435)]。接下来在室温下用以下二抗以封闭缓冲液中的以下稀释液孵育膜1.5小时：irdye680lt，山羊抗兔，licor®目录号926-68021，批号c10314-03，1：6000稀释，和irdye800cw，山羊抗小鼠igg(h+l)，licor®目录号926-32210，批号c10131-01，1：6000稀释。用tbstween®洗涤膜3×(各10分钟)。用licor®odyssey®成像系统使膜显影以用于扫描，来测量检测的western印迹条带强度。使用以下方程计算相对于作为最小抑制组的媒介物处理组样品的测试化合物处理的组的抑制百分比：%抑制=[中值条带强度(不受抑制的对照)-中值条带强度(测试化合物)]/[中值条带强度(不受抑制的对照)-中值条带强度(最大抑制对照)]*100其中最大抑制对照样品被选择为来自a375肿瘤，其离体取自在口服施用实施例110mg/kgbid4天后的带有肿瘤的小鼠。从剂量反应研究将ed50计算为在此时间点实现50%效应所必需的剂量。对于所述分析(小鼠a375异种移植肿瘤mdm4外显子5/6rna剪接分析和小鼠a375肿瘤异种移植mdm4和smd1-me2swestern印迹分析)，实施例1、2和3的化合物在po给予(qd或bid)剂量≤30mg/k后达到50%效应。这些结果表明实施例1、2和3的例示化合物体内抑制prmt5活性，如通过其对prmt5底物和相关所得分子细胞生物学端点的影响所指示。异种移植肿瘤模型此分析的目的为在小鼠癌症模型中测量响应于测试化合物施用的肿瘤体积的减少。在具有10%hifbs(gibco®目录号10082-147)的dmem/高葡萄糖(hyclonetm目录号sh30022)中使a375(黑色素瘤)细胞生长。在具有l-谷氨酰胺和20%热失活的fbs的rpmi1640中使will-2(dlbcl)细胞生长。在补充有l-谷氨酰胺、25mmhepes(gibco®22400-089)、1mm丙酮酸钠和7.5%fbs的rpmi1640培养基中使namalwa(伯基特氏(burkitt's)淋巴瘤)细胞(atcc)生长。在具有l-谷氨酰胺、25mmhepes[gibco22400-089]、1mm丙酮酸钠和10%fbs的rpmi1640中使molt4细胞生长。收获细胞且皮下注射于裸小鼠的腹胁后部上(a375：5×106个细胞/动物，与matrigel®1：1混合；will-2；1×107个细胞/动物；namalwa：2×106个细胞/动物；molt4：5×106个细胞/动物，与matrigel®1：1混合)。当确立肿瘤(植入后7-21天，大约200mm3)时，使动物随机化，并将其分组成对照和测试组。将测试化合物配制于1%hec/0.25%tween®-80/0.05%消泡剂中。通过口服管饲施用测试化合物和媒介物。通过处理过程期间一周两次地进行的肿瘤体积测量(卡尺)确定肿瘤反应，且报告为相比于媒介物对照组的肿瘤体积的抑制百分比。实施例1表明所有三个异种移植肿瘤模型中的剂量依赖型抗肿瘤活性。例如，在黑色素瘤模型(a375)中，当在第4天给药和第3天停药时间表以10mg/kgqd给药持续26天时，实现64%抑制；当以同一时间表以15mg/kg给药时，实现71%抑制。在dlbcl肿瘤模型(will-2)中，当以2mg/kg(bid持续14天)给药时，实现50%退化；当以5mg/kg(qd持续14天)给药时，实现74%抑制。在淋巴瘤肿瘤模型(namalwa)中，当以2mg/kg(bid持续14天)给药时，实现74%抑制；当以5mg/kg(qd持续14天)给药时，实现61%抑制。此数据表明实施例1抑制以上3个肿瘤模型中的肿瘤异种移植生长。在急性淋巴母细胞白血病模型(molt4)中，实施例4当以60mg/kg(bid持续30天)给药时，实现-75%抑制。此数据表明实施例4抑制以上肿瘤模型中的肿瘤异种移植生长。优选将本发明化合物配制为通过多种途径施用的药物组合物。最优选地，此类组合物用于口服或静脉内施用。此类药物组合物和制备其的方法在本领域中是众所周知的。参见例如remington:thescienceandpracticeofpharmacy(d.troy等人编，第21版，lippincottwilliams&wilkins,2005)。如本文中所使用，术语“有效量”是指在向患者施用单一或多次剂量后，在诊断或治疗下在患者中提供所需效应的本发明化合物或其药学上可接受的盐的量或剂量。有效量可由主治诊断医师(如本领域技术人员)通过使用已知技术且通过观察在类似情况下所获得的结果容易地确定。在确定用于患者的有效量中，主治诊断医师考虑多个因素，其包括、但不限于：哺乳动物的物种；其大小、年龄和总体健康；所涉及的特定疾病或病症；涉及程度或涉及或疾病或病症的严重程度；个别患者的反应；所施用的特定化合物；施用模式；所施用的制剂的生物利用度特征；所选择的剂量方案；伴随药疗的使用；和其他相关情况。本发明化合物在宽剂量范围内通常是有效的。例如，剂量/天正常落在每天约0.05-1000mg范围内。优选地，此类剂量落在每天0.1-500mg范围内。更优选地，此类剂量落在每天0.5-100mg范围内。在一些情况下，低于前述范围的下限的剂量可能绰绰有余，而在其他情况下，可采用仍更大的剂量而不导致任何有害副作用，且因此以上剂量范围并不意欲以任何方式限制本发明的范围。将理解，实际上施用的化合物的量将由医师鉴于相关情况(包括待治疗的病状、选择施用途径、所施用的一种或多种实际化合物、年龄、重量和个体患者的反应和患者症状严重程度)来决定。当前第1页12